專利名稱：一種高效載釓脂質(zhì)體制劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種診斷用順磁性釓造影劑的脂質(zhì)體制劑，它具有高效載釓、緩慢釋 放等特點，可作為造影增強劑，用于診斷成像形式如MRI、CT、閃爍照相法中，進而用于腫瘤 的早期診斷。
背景技術(shù)：
腫瘤嚴重威脅著人類的健康與生命，全世界每年因惡性腫瘤死亡約600萬人，確 診約1000萬人。腫瘤治療面臨的關鍵問題是如何早期發(fā)現(xiàn)，診斷和治療。目前影像學已有 多種腫瘤診斷技術(shù)，如磁共振成像，X-射線成像，超聲波成像和核醫(yī)學成像等。其中造影劑 被用來增強影像的強度，通過改變組織局部磁場強度或弛豫時間，或通過造影劑生理、生化 特性來增強成像因素的差異，達到造影目的。磁共振造影劑用的最廣泛的就是順磁性金屬釓離子的螯合物，這些親水性螯合 物，如Gd-DTPA，Gd-DOTA, Gd-D03A_HP和Gd-DTPA-BMA分布于胞外，且被腎臟消除。游離的 釓具有高毒性，在體內(nèi)分布于骨骼和肝臟，并可迅速導致肝臟壞死。所有的含釓造影劑都是 螯合物，螯合后能改變體內(nèi)的分布以提高圖像對比度，同時改善其毒副作用。脂質(zhì)體作為一種定向藥物載體，可以將藥物粉末或溶液包埋在類細胞結(jié)構(gòu)的微粒 中改變藥物的體內(nèi)分布，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒副作用，并且可做為藥物儲 庫，產(chǎn)生持久的治療作用。脂質(zhì)體注入體內(nèi)后，會被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取而從血流中快速清 除，而納米脂質(zhì)體由于其的小尺寸效應、表面效應可使其逃避網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取而延長 藥物在體內(nèi)的停留時間，進而達到病變部位。目前，國內(nèi)外已有許多將順磁性金屬離子及其螯合物包被于脂質(zhì)體中的報 道，已有技術(shù)主要可分兩類第一類是利用脂質(zhì)體將所需要的診斷劑包裹在中心水性 腔內(nèi)，因這些螯合物均是親水性的，極易從脂質(zhì)膜中滲漏，包封率較低(參見Inter J Pharm，2006，312 105-112. UyenM Le，Zhengrong Cui，et al.Long-circulating gadolinium-encapsulated liposomes for potentialapplication in tumor neutron capture therapy)，而一些采取適合脂質(zhì)體包裹水溶性藥物的方法如復乳法制備的多室 脂質(zhì)體(參見 Acad J Sec Mil Med Univ. 2007,28(1) :87-90. ZHANG Wei, GENG Fang, et al. Preparation and characterization of pulmonary targeting DepoFoam loaded MRcontrast media :gadopentetate dimeglumine)，雖然包封率提高，但其粒徑較大，在微 米級范圍；第二類是將所需要的螯合物與疏水性“錨”基結(jié)合，使螯合物限定在脂質(zhì)體膜上， 這類結(jié)合物已報道的有Hnatowich等人的DTPA- 二硬脂酰胺(參見J Nucl Med, 1981，22 810-814. Hnatowich D J, Friedman B, Clancy B, and Novak Μ. Labeling of Preformed Liposomes withGd_67and Tc-99m by Chelation)，Kabalka 等人的 DTPA-二硬脂酰酯(參 見Magn Reson Medl991，19 :406-415. Kabalka G W,Davis M A,et al. Gadolinium-labeled liposomes containingamphiphilic Gd-DTPA derivatives of varying chain length targeted MRI contrast enhancementagents for the liver)禾口 Volkmar 等人的DTPA-PLL-NGPE 多螯合聚合物(參見 Colloids andSurfaces B =Biointerfaces, 2000, 18,293-299. Weissig V, Babich J, Torchilin V. Long-circulatinggadolinium-loaded liposomes-potential use for magnetic resonance imaging of the blood pool),此類 方法制備的脂質(zhì)體穩(wěn)定性較好，釓螯合物或絡合物不易從脂質(zhì)膜滲漏出來，但制備步驟比 較復雜，一些成分也較昂貴，并且一些水不溶性物質(zhì)無法從肝臟中消除，而永久保留其中。盡管有許多順磁性釓造影劑的脂質(zhì)體劑的報道，但其性能仍然難以滿足臨床應用 要求。這主要是由于其低的包封率，難以去除脂質(zhì)體中游離的三價釓離子螯合物，及其存儲 時造影劑易泄露等原因引起的。—般來說，脂溶性藥物易于包裹進脂質(zhì)體中，另一方面，對于水溶性藥物，通過藥 物所帶電荷同帶電脂類間的靜電作用或靠脂質(zhì)體內(nèi)外梯度主動載藥，水溶性藥物也可高包 封率的包入脂質(zhì)體內(nèi)水相中。然而對于一種水溶性的不帶電荷藥物，高包封的包入脂質(zhì)體 并非易事。為了有效的將這種水溶性的藥物大量的包被于脂質(zhì)體內(nèi)水相中，Brandl M等人 (ChemPhys Lipids, 1997,87,65-72. Brandl Μ, Drechsler Μ, Bachmann D, and Bauer K H. Morphologyof semisolid aqueous phosphatidylcholine dispersions, a freeze fracture electron microscopy study.)提出了一種囊泡型磷脂凝膠(VPG)的概念，其是 當脂質(zhì)濃度遠遠高于250mg/g或325mmol/L時制備的一種出具有獨特囊泡形態(tài)的凝膠狀物 質(zhì)。VPG囊泡內(nèi)水性介質(zhì)的比率與囊泡外相比更高，即包封水性藥物的能力更強；在囊泡核 心及其周圍不存在濃度梯度，長期保存下仍能保證VPG內(nèi)部載藥量的恒定；在應用前加入 過量的水性介質(zhì)，并輕微攪拌，可使VPG轉(zhuǎn)變?yōu)樾≈|(zhì)體(SUV)分散體。本發(fā)明借鑒囊泡磷脂凝膠的制備原理，改進制備方法，通過薄膜分散-高壓均 質(zhì)-真空濃縮的新型方法，制備了高載釓的脂質(zhì)體制劑。其制備工藝簡單，脂質(zhì)體對釓螯合 物的載釓量較高，粒徑較小，性能穩(wěn)定，而且具有良好的緩釋效果，可有效診斷早期腫瘤。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是制備一種高效載釓、納米粒徑的脂質(zhì)體制劑，旨在將大量釓包入 脂質(zhì)體中，通過釓造影劑的納米脂質(zhì)體化，延緩其在體內(nèi)的循環(huán)時間，提高造影效果。本發(fā)明公開的是由磷脂凝膠制備的高效載釓脂質(zhì)體，研究了一種有效提高水溶性 藥物脂質(zhì)體劑型包封率的方法，尤其適用于包裹釓螯合物。本發(fā)明的目的通過以下措施來實現(xiàn)一種高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征是以下述重量配比原料及輔料組成以金屬釓 的重量計的順磁性釓造影劑30 80份，卵磷脂250 500份，脂質(zhì)體穩(wěn)定劑50 200份， 緩沖溶液200 600份，所述的順磁性釓造影劑為金屬釓的三價離子的螯合物，其用量是以 金屬釓的重量為計算基準的。按比例稱取相應重量的卵磷脂、脂質(zhì)體穩(wěn)定劑溶于定量有機 溶劑中，減壓蒸干溶劑，獲得脂類薄膜；加入緩沖溶液進行水合洗脫薄膜，水合溫度為30 500C，水合時間為2 4小時，獲得空白脂質(zhì)體懸浮液；將所得空白脂質(zhì)體懸浮液高壓均質(zhì)， 壓力為40 90MPa，循環(huán)次數(shù)為6 15次，控制粒徑在20 200nm ；然后再轉(zhuǎn)入旋蒸中進 行減壓真空濃縮，除去水分直至磷脂濃度達到250mg/ml以上，獲得磷脂凝膠；按比例將磷 脂凝膠和造影劑混合，45°C下保溫5小時，獲得高效載釓脂質(zhì)體制劑。進一步的，優(yōu)選的，所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征是以下述重量配比原料及輔料組成以金屬釓的重量計的順磁性釓造影劑40 60份，卵磷脂300 400份，脂質(zhì)體 穩(wěn)定劑100 200份，緩沖溶液200 600份。上述的順磁性釓造影劑為金屬釓的三價離子與螯合劑的螯合物，其用量是以 金屬釓的重量為計算基準的，下同；所述順磁性釓造影劑選自Gd-DTPA(釓噴酸葡胺)、 Gd-DTPA-BMA (釓雙胺)、Gd-D03A_HP(釓替醇)、Gd-DOTA (Dotarem)，優(yōu)選 Gd-DTPA, Gd-DTPA-BMA。所述順磁性釓造影劑可采用市售產(chǎn)品，如德國Bayer Schering Wiarma公司的 釓噴酸葡胺注射液或Amersham Health公司的釓雙胺產(chǎn)品，或者采用李鐵福等人(“MRI 順磁性造影劑Gd-DTPA的合成”，化學試劑，2004，沈(3)，ppl90_191) ^ Tatjana, N等 入("Paramagnetic liposomescontaining amphiphilic bisamide derivatives of Gd-DTPA with aromatic side chain groups aspossible contrast agents for magnetic resonance imaging”，Eur Biophys J (2006) 35 :136-144)文獻報道的方法進行制備；所述的卵磷脂選自蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂或氫化蛋黃卵磷 脂；所述脂質(zhì)體穩(wěn)定劑選自膽固醇、硬脂胺、磷脂酸或維生素E，優(yōu)選膽固醇或維生素 E ；所述緩沖溶液選自pH為6. 8或7. 4的磷酸鹽緩沖溶液、注射用生理鹽水。根據(jù)上述制備方法，通過改變磷脂凝膠中磷脂濃度可改變脂質(zhì)體對釓螯合物的包 封率和載釓量。(所述載釓量是指脂質(zhì)體的載釓濃度，由加入的總釓濃度乘包封率計算得 出。)本發(fā)明所用的有機溶劑是氯仿、氯仿與甲醇混合溶劑(體積比為1 1 3 1)、 乙醇其中的一種。所用的緩沖溶液選自PH為6. 8或pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液，注射用生理 鹽水。本發(fā)明所述的采用高壓均質(zhì)機優(yōu)化的壓力參數(shù)為60 80MPa，循環(huán)次數(shù)為8 12次。本發(fā)明所述高效載釓脂質(zhì)體制劑是凝膠狀制劑。本發(fā)明提供了一種高效載釓脂質(zhì)體制劑，該脂質(zhì)體由診斷用釓造影劑、卵磷脂、脂 質(zhì)體穩(wěn)定劑作為組分制備而成。本發(fā)明提供的脂質(zhì)體具有如下特點(1)載釓量高；(2)粒 徑小；C3)有良好的緩釋效果；(4)穩(wěn)定性好，儲存三月幾無藥物泄露。


圖1為載釓脂質(zhì)體制劑的透射電鏡照片。圖2為載釓脂質(zhì)體制劑粒徑分布圖。圖3為載釓脂質(zhì)體制劑的體外緩釋曲線(▲釓噴酸葡胺注射液；·載釓脂質(zhì) 體)。
具體實施例方式通過下面實施例說明本發(fā)明的具體實施方式
，但本發(fā)明的保護范圍，不局限于此。實施例1
稱取大豆卵磷脂10g、膽固醇2. 5g、維生素E 0. 2g原料溶于300ml氯仿中，45°C 恒溫減壓下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑形成脂質(zhì)薄膜；加入IOOOml磷酸鹽緩沖液(pH7. 4)進行水 合洗脫薄膜3. 5h，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體進行高壓均質(zhì)，50MI^下均質(zhì)15次，用 0. 22微米濾膜過濾除菌后，室溫下進行真空濃縮至20ml，即得磷脂凝膠。取Iml磷脂凝膠 與ImlO. 8mmol/ml的Gd-DTPA混合，45°C保溫5小時。分裝、封口。用動態(tài)光散射激光粒度分析儀測定其體積平均粒徑為107. Onm，其透射電鏡圖片 與粒徑分布圖見圖1和圖2，其在PBS(pH = 7.4)中的體外緩釋曲線見圖3，在此例中改變 卵磷脂濃度測得的包封率與載釓量結(jié)果見表1。表1磷脂濃度對脂質(zhì)體包封率和載釓量的影響
磷脂濃度(mg/ml)包封率(％ )載釓量(mg/ml)25030. 919. 430037. 723. 735045. 628. 640051. 732. 5實施例2稱取蛋黃磷脂Mg、膽固醇4g、維生素E 0. 6g原料溶于300ml氯仿與甲醇(體積 比1 1)中，35°C恒溫減壓下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑形成脂質(zhì)薄膜；加入1500ml生理鹽水進 行水合洗脫薄膜池，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體進行高壓均質(zhì)，SOMPa下均質(zhì)10次，用 0. 22微米濾膜過濾除菌后，室溫下進行真空濃縮至20ml，即得磷脂凝膠。取Iml磷脂凝膠 與 ImlO. 6mmol/ml 的 Gd-DTPA-BMA 混合，45°C保溫 5 小時。分裝、封口。實施例3稱取氫化大豆磷脂15g、膽固醇2g、維生素E 0.4g原料溶于300ml無水乙醇中， 40°C恒溫減壓下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑形成脂質(zhì)薄膜；加入IOOOml磷酸鹽緩沖液(pH6. 8)進 行水合洗脫薄膜3h，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體進行高壓均質(zhì)，90MPa下均質(zhì)6次，用 0. 22微米濾膜過濾除菌后，室溫下進行真空濃縮至20ml，即得磷脂凝膠。取Iml磷脂凝膠 與ImlO. 4mmol/ml的Gd-DTPA混合，45°C保溫5小時。分裝、封口。
權(quán)利要求
1.一種高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征是以下述重量配比原料及輔料組成以金屬釓的 重量計的順磁性釓造影劑30 80份，卵磷脂250 500份，脂質(zhì)體穩(wěn)定劑50 200份，緩 沖溶液200 600份；所述的順磁性釓造影劑為金屬釓的三價離子的螯合物，其用量是以 金屬釓的重量為計算基準的。按比例稱取相應重量的卵磷脂、脂質(zhì)體穩(wěn)定劑溶于定量有機 溶劑中，減壓蒸干溶劑，獲得脂類薄膜；加入緩沖溶液進行水合洗脫薄膜，水合溫度為30 500C，水合時間為2 4小時，獲得空白脂質(zhì)體懸浮液；將所得空白脂質(zhì)體懸浮液高壓均質(zhì)， 壓力為40 90MPa，循環(huán)次數(shù)為6 15次，控制粒徑在20 200nm ；然后再轉(zhuǎn)入旋蒸中進 行減壓真空濃縮，除去水分直至磷脂濃度達到250mg/ml以上，獲得磷脂凝膠；按比例將磷 脂凝膠和造影劑混合，45°C下保溫5小時，獲得高效載釓脂質(zhì)體制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征是以下述重量配比原料及輔料 組成以金屬釓的重量計的順磁性釓造影劑40 60份，卵磷脂300 400份，脂質(zhì)體穩(wěn)定 劑100 200份，緩沖溶液200 600份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1 2所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述順磁性釓 造影劑選自Gd-DTPA (釓噴酸葡胺)、Gd-DTPA-BMA (釓雙胺)、Gd-D03A_HP (釓替醇)、 Gd-DOTA (Dotarem)，優(yōu)選 Gd-DTPA, Gd-DTPA-BMA0
4.根據(jù)權(quán)利要求1 2所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述卵磷脂選自蛋 黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂其中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 2所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述脂質(zhì)體穩(wěn)定劑 選自膽固醇、硬脂胺、磷脂酸、維生素E，優(yōu)選膽固醇、維生素E。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 2所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述緩沖溶液選自 pH為6. 8或7. 4的磷酸鹽緩沖溶液、注射用生理鹽水。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述有機溶劑可以是氯 仿、氯仿與甲醇混合溶劑(體積比為1 1 3 1)、乙醇其中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征在于其采用高壓均質(zhì)機壓力 參數(shù)為60 80MPa，循環(huán)次數(shù)為8 12次。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8所述的高效載釓脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述高效載釓脂質(zhì) 體制劑是凝膠狀制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種可用于人體或動物體的診斷的組合物——高效載釓脂質(zhì)體制劑及其制備方法。所述脂質(zhì)體制劑是由如下重量百分比的組分制備的以金屬釓的重量計的順磁性釓造影劑30～80份；卵磷脂250～500份；脂質(zhì)體穩(wěn)定劑50～200份；緩沖溶液200～600份。本發(fā)明采用一種磷脂凝膠方法制備載釓脂質(zhì)體，此種方法制備的脂質(zhì)體載釓量高，有效延緩造影劑在體內(nèi)的停留時間，而且儲存穩(wěn)定性好。
文檔編號A61K49/18GK102078624SQ201010607578
公開日2011年6月1日 申請日期2010年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月23日
發(fā)明者徐云龍, 戎麗娜, 趙崇軍, 錢秀珍 申請人:華東理工大學