一種用于治療ii型糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明根據(jù)中藥組方理論指導(dǎo)，提供了小檗堿與甘草提取物、小檗堿與甘草酸的藥物組合。與單獨(dú)給藥相比，本發(fā)明的藥物組合物在改善糖尿病小鼠血糖、糖化血清蛋白、胰島素水平方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)，并具有很好的協(xié)同作用；在改善脂代謝，降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平等方面也具有很好效果，并表現(xiàn)出協(xié)同作用；此外，明顯降低血清總肌酐(Cre)水平，有效改善腎臟功能。因此，可以用于預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥，對(duì)醫(yī)藥的發(fā)展具有積極的現(xiàn)實(shí)意義。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種用于治療M型糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及小檗堿與甘草提取物(或甘草酸)的藥物組合物 在防治糖尿病及其并發(fā)癥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一組由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的臨 床綜合癥，分為I型（胰島素依賴性糖尿病，IDDM)和II型(胰島素非依賴性糖尿病，NIDDM)， 臨床以高血糖為主要標(biāo)志。其中II型糖尿病占糖尿病患者的90%以上，主要與兩種生理缺 陷有關(guān)，分別是胰島素分泌缺陷和胰島素抵抗。胰島素抵抗是指胰島素的外周組織及其靶 器官或靶組織(主要是肝臟、脂肪組織、骨豁肌)對(duì)胰島素的敏感性及反應(yīng)性降低，導(dǎo)致正常 量的胰島素產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)低于正常水平。機(jī)體為了保持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和血糖正常，代 償性地增加胰島素分泌，臨床可表現(xiàn)為高胰島素血癥（G r u n d y S等， Arterioscl .Throm. Vas. 2004,24,el3_el8)。對(duì)于糖尿病II型糖尿病藥效評(píng)價(jià)以及作用機(jī) 制研究，選擇具有類(lèi)似人類(lèi)II型糖尿病(高胰島素血及胰島素抵抗特性)的自發(fā)性糖尿病動(dòng) 物，是一種理想的動(dòng)物模型(Goto Y等，Tohoku J.Exp.Med. 1976，119，85-90)。自發(fā)性糖尿 病高血清胰島素型動(dòng)物有ob/ob、db/db、KK小鼠等。其中db/db小鼠 （diabetes mouse)由 C57BL/KsJ近親交配株常染色體隱性遺傳衍化而來(lái)，由發(fā)病系瘦素受體突變所致的II型糖 尿病模型。其血清胰高糖素的水平高于正常對(duì)照小鼠2倍以上。是最適用于研究II型糖尿病 藥效及機(jī)制的動(dòng)物模型（Lee G等，Nature 1996,379,632-635)。
[0003] 對(duì)糖尿病患者進(jìn)行臨床觀察、治療的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病引起的并發(fā)癥有合并 高血壓、合并心血管、急性心肌梗死、合并肝病、合并皮膚病變、腎功能衰竭、全身衰竭以及 合并感染等(唐芳等，社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2008，6，63-64;李秀莉等，當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，16，63-64)。 其中，糖尿病引起的并發(fā)癥較高的是高脂血、高血壓、腎?。▌⑾榈?，中國(guó)醫(yī)藥指南，2012， 10,440-442;陽(yáng)平，臨床合理用藥，2010,153-155)。II型糖尿病患者血脂代謝紊亂以甘油三 酯(TG)增高、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)降低、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)輕、中度增高 為特點(diǎn)（潘競(jìng)鏘等，中國(guó)新藥雜志2000，9,167-170)。所以，防治II型糖尿病胰島素抵抗所致 的代謝異常，改善胰島素抵抗或增加胰島素敏感性的研究具有重要意義。此外，糖尿病引起 的肝臟組織學(xué)和功能變化的病變，是糖尿病的一種慢性并發(fā)癥，隱源性肝硬化患者中糖尿 病的比率顯著高于酒精性和肝炎后肝硬化，而且糖尿病是隱源性肝硬化發(fā)生癌變的危險(xiǎn)因 素(冼蘇，廣西醫(yī)學(xué)，2004,26,918-920;欒海艷等，中成藥，2013,35,1307-1309)?？梢哉f(shuō)，糖 尿病并發(fā)癥的危險(xiǎn)遠(yuǎn)大于糖尿病本身。并發(fā)時(shí)候損害的是人體的核心器官，隨時(shí)會(huì)有生命 危險(xiǎn)。
[0004] 臨床研究表明，葛根芩連湯具有良好的降血糖的藥理活性（Zhang C等， Phytomedicine 2013,20,221-229;李穎萌等，藥學(xué)學(xué)報(bào)2013,48,1415-1421 ;Xu, J等，ISME J 2015，9,552-562)。葛根芩連湯復(fù)方中重要的活性成分小檗堿也具有促進(jìn)胰島β細(xì)胞修 復(fù)、增加肝細(xì)胞的葡萄糖消耗量、改善胰島素抵抗和抑制二糖酶和α-糖苷酶的活性(陳洪源 等，食品與藥品2008,3,69-71)。并且其對(duì)糖尿病的治療作用已經(jīng)得到普遍公認(rèn)，在臨床中 用于降血糖、降低血脂、抗炎、抗氧化及改善胰島素的作用而得到廣泛的應(yīng)用。文獻(xiàn)研究表 明，復(fù)方中的佐使藥甘草可抑制自發(fā)性糖尿病小鼠和高脂飲食誘導(dǎo)肥胖的小鼠血糖升高和 腹部脂肪積累（Nakagawa K等，Biol .Pharm.Bull .2004,27,1775-1778)，同時(shí)可降低血清胰 島素（INS)和瘦素(Leptin)的含量，改善胰島素抵抗，對(duì)脂肪肝也有明顯的改善作用(Aoki F等，Biosci .Biotechnol · Biochem. 2007，71，206-214)。此外，甘草還可以顯著降低高膽固 醇患者的總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇(Fuhrman B等,Nutr it ion ,2002，18， 268-273)。甘草酸是甘草中最重要的有效成分之一，具有保肝、抗?jié)?、抗炎、抗過(guò)敏、抗氧 化等藥理作用（韓瑤聃等，中國(guó)新藥雜志2012,21,2499-2505)。多項(xiàng)研究表明，甘草酸與其 他藥物聯(lián)用，如芍藥苷（王君等，中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志2014,20,83-86)、雷公藤多甙（張靜 等，中草藥2014,45,2711-2715)、附子(王亭等，中草藥2009,40,1332-1334)均可起到增效 或減毒的作用。
[0005] 公開(kāi)號(hào)為CN101747405A的中國(guó)專(zhuān)利介紹了一種可用于醫(yī)藥的新的有機(jī)鹽小檗堿 甘草酸對(duì)映體鹽及其它們的生成方法和用途，將甘草酸與小檗堿按摩爾比1:2(甘草酸與小 檗堿質(zhì)量比約為1:1)被制備成口服液或注射劑，對(duì)抵抗糖尿病、高血脂癥、腫瘤、慢性炎癥 等疾病有治療作用。該專(zhuān)利制備對(duì)映體鹽使用陰離子交換樹(shù)脂吸附，價(jià)格昂貴，不利于大規(guī) 模生產(chǎn)。同時(shí)生產(chǎn)時(shí)間長(zhǎng)，成本增加。
[0006] 公開(kāi)號(hào)為J53062-817的專(zhuān)利介紹了一種具有抗炎、殺菌、治療胃潰瘍疾病的小檗 堿與甘草酸構(gòu)成的鹽以及它們的生成方法和醫(yī)藥用途。其中，小檗堿與甘草酸按1:2或1:3 摩爾比混合(甘草酸與小檗堿質(zhì)量比約為1 :〇 .8或1:1.2)制備該鹽類(lèi)化合物。該專(zhuān)利的工藝 制備過(guò)程中需要在氧化銀(Ag2O)中反應(yīng)1個(gè)小時(shí)，該制備過(guò)程中引入銀離子，毒性大，成本 高，粗品純度低，降低產(chǎn)率，不利于工業(yè)生產(chǎn)。
[0007] 公開(kāi)號(hào)為CN101411717A的中國(guó)專(zhuān)利介紹了一種含有8種單體成分的藥物組合物， 除小檗堿及甘草酸外，還含有黃豆苷等六種成分，該組合物制備的片劑、口服液、顆粒劑、膠 囊劑等可以治療腸炎和痢疾。該專(zhuān)利中8中單體化合物按三種重量分?jǐn)?shù)比混合，分別為葛根 素(20,70,20份）、黃豆苷（11，20，1份）、黃芩苷(9,20，1份）、小檗堿(5,30，1份）、巴馬汀(6， 1〇，1份）、藥根堿(4，10，1份）、甘草酸(8，15，1份）、甘草苷(9，15，1份）。該專(zhuān)利雖含有小檗堿 及甘草酸，但所提供為8種單體的混合物，不易制備。
[0008] 綜上所述，一篇專(zhuān)利(J53062-817)將小檗堿與甘草酸合用胃潰瘍疾病、腸炎等，與 本
【發(fā)明內(nèi)容】
無(wú)關(guān)。一篇專(zhuān)利(CN101747405A)將甘草酸與小檗堿制成雙母核鹽，用于治療糖 尿病。以上專(zhuān)利均基于甘草酸與小檗堿成鹽的原理，保護(hù)二者結(jié)合而成的鹽。因甘草酸含兩 個(gè)葡萄糖醛酸基團(tuán)和一個(gè)羧基，小檗堿含一個(gè)氮正離子，因而規(guī)定其配比為摩爾比1:2或1: 3(甘草酸與小檗堿質(zhì)量比約為1:0.8或1:1.2)。此外，以上兩專(zhuān)利均采用萃取、吸附、或化學(xué) 反應(yīng)制備二者的鹽，增加成本，易引入毒性雜質(zhì)。
[0009] 本發(fā)明基于一種截然不同的思路，即小檗堿與甘草酸二種單體成分聯(lián)合用藥，用 于治療糖尿病。此處所述為一種藥物組合物，而非令二者反應(yīng)生成鹽類(lèi)。該思路基于已有的 糖尿病治療藥物，中藥復(fù)方葛根芩連湯，其中含有小檗堿與甘草酸的含量比約為1:1.1或1: 1.6?；诒景l(fā)明，甘草酸、小檗堿兩化合物混合即可做藥用，無(wú)需其他制備工藝，且體現(xiàn)協(xié) 同增效。同時(shí)，本發(fā)明提供的藥物混合物，在治療糖尿病的同時(shí)，對(duì)并發(fā)癥有很好的治療效 果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有單一化合物的小檗堿在臨床療效及治療范圍的不足， 提供一種糖尿病及其并發(fā)癥治療療效優(yōu)于單一化合物的小檗堿與甘草提取物(或甘草酸） 的藥物組合物。
[0011] 本發(fā)明提供一種將小檗堿與甘草提取物(或甘草酸)重新配伍，組成新的組合物。 甘草酸與小檗堿的結(jié)構(gòu)式如圖1所示。該組合物與藥物單一應(yīng)用相比，能顯著地降低糖尿病 動(dòng)物模型的血糖、血脂水平，并且具有良好的保肝活性。表明：經(jīng)組合后可以產(chǎn)生協(xié)同增效 作用，本發(fā)明所制備的組合物可用于制備防治糖尿病的藥物。
[0012] 本發(fā)明提供具有抗糖尿病及其并發(fā)癥活性的藥物組合物，該組合物中小檗堿與甘 草提取物的重量比例為1: 10至1:50，優(yōu)選為1:27.5或1:44;小檗堿與甘草酸的重量比例為 1:1 至 1:2,優(yōu)選為 1:1.1 或 1:1.6。
[0013] 本發(fā)明提供這樣的藥物組合，其中所述甘草提取物是指豆科植物烏拉爾甘草、脹 果甘草、光果甘草原藥材的水提液，制備過(guò)程如下：向容器中加入甘草中藥原料重量8倍的 水，浸泡0.5-3小時(shí)，煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾得濾液（1);向容器中加入甘草中藥原料重量8倍的 水，煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾得濾液(2);向容器中加入甘草中藥原料重量8倍的水，煎煮0.5-1.5 小時(shí)，過(guò)濾得濾液(3)。合并所有濾液，減壓濃縮，得到甘草提取物。
[0014] 本發(fā)明的一種治療糖尿病的藥物組合物對(duì)糖尿病小鼠具有顯著降血糖、調(diào)節(jié)血脂 作用，同時(shí)可以改善糖尿病小鼠的肝、腎臟功能的作用。與模型組比較，本發(fā)明藥物組合物 能顯著降低自發(fā)性糖尿病db/db小鼠血糖值(P〈0.05)，以及糖化血糖白蛋白值(P〈0.05)，使 胰島素水平顯著提高(P〈〇.05)。給藥組小鼠總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量顯著降 低(P〈0.05)，高密度脂蛋白含量顯著提高(P〈0.05)。此外，肝臟的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn) 氨酶(AST)水平顯著降低(P〈0.05)，腎臟的總肌酐(Cre)水平也顯著降低(P〈0.05)。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1為小檗堿(A)和甘草酸(B)的結(jié)構(gòu)式。
[0016] 圖2為甘草提取物的指紋圖譜。
[0017] 圖3為各治療組小鼠的給藥4周后空腹血糖、糖化白蛋白和胰島素濃度。
[0018] 圖4為各治療組小鼠的給藥4周后總膽固醇(A)、甘油三酯(B)、高密度脂蛋白（C)、 低密度脂蛋白（D)的含量。
[0019] 圖5為各治療組小鼠的給藥4周后谷丙轉(zhuǎn)氨酶(A)、谷草轉(zhuǎn)氨酶⑶和總肌酐(C)的 含量。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0021] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0022]實(shí)施例1、甘草提取物的制備。
[0023] 一、實(shí)驗(yàn)材料和方法。
[0024] 甘草藥材原料藥購(gòu)自北京天衡大藥房；去離子水：經(jīng)Mi I Ii-Q系統(tǒng)純化 (Millipore,MA,USA)〇
[0025] 1.制備方法：
[0026] 向容器中加入甘草中藥原料重量8倍的水，浸泡0.5-3小時(shí)，煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾得 濾液（1);向容器中加入甘草中藥原料重量8倍的水，煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾得濾液(2);向容器 中加入甘草中藥原料重量8倍的水，煎煮0.5-1.5小時(shí)，過(guò)濾得濾液(3)。合并所有濾液，減壓 濃縮，得到甘草提取物。
[0027] 2.指紋圖譜檢測(cè)條件：
[0028] 檢測(cè)系統(tǒng):Agilentl260液相系統(tǒng)。色譜柱:XTerra MS Ci8C〇lumn(5ym，ID 4.6X 250mm) (Waters，MA，USA) ·洗脫條件如下：Omin，5%A; 20min，15%A; 24min，19%A; 28min， 27%A;30min，50%A;35min，60%A;37min，80%A ;40min，100%A;45min，100%A.流速 I · OmL/min;柱溫40 °C ·檢測(cè)波長(zhǎng)270nm ·
[0029] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0030] 將甘草提取物（lg/mL)用去離子水稀釋20倍后，5yL進(jìn)樣，用Agilentl260液相系統(tǒng) 檢測(cè)，結(jié)果如圖2所示。圖中可以看出甘草酸是甘草水提液的主要成分之一。
[0031] 實(shí)施例2、藥物組合物對(duì)db/db自發(fā)性糖尿病小鼠血糖和胰島素的影響。
[0032] 一、實(shí)驗(yàn)材料和方法。
[0033] 1.實(shí)驗(yàn)藥物及試劑
[0034]甘草酸和小檗堿對(duì)照品購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司；陽(yáng)性藥二甲雙胍購(gòu)自 北京酷來(lái)搏科技有限公司，經(jīng)HPLC/UV分析化合物純度達(dá)到98%。甘草藥材原料藥購(gòu)自北京 天衡大藥房。小鼠 Insulin ELISA試劑盒(上海依科賽生物制品有限公司）。
[0035] 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0036] 本研究使用db/db雄性小鼠（許可證號(hào)：SCXK(蘇）2011-0003)，8周齡，購(gòu)買(mǎi)于常州 卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，飼養(yǎng)在M3型小鼠籠(長(zhǎng)X寬X高= 318X202X135mm)，飲水供應(yīng) 充足，飼料和自來(lái)水自由攝取。室溫保持在25°C，相對(duì)濕度為60±5%，12h黑暗-光照循環(huán)。 [0037] 3.給藥溶液配制、動(dòng)物分組及給藥劑量
[0038] 稱取陽(yáng)性藥二甲雙胍適量，加入0.3 % CMC-Na分別配成17.5mg/mL溶液。分別稱取 小檗堿適量，加入0.3 % CMC-Na分別配成8.75mg/mL溶液。稱取甘草酸適量，加入0.3 % CMC-Na分別配成14mg/mL的溶液。稱取小檗堿和甘草酸適量，配成混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其中小檗堿 和甘草酸濃度分別為8.75和14mg/mL。甘草提取物濃度為lg/mL。
[0039] 將db/db雄性小鼠（8周齡），隨機(jī)分為7組，分別為模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥組、小檗堿 組、甘草酸組、小檗堿和甘草酸1: 1.1合用組、小檗堿和甘草酸1:1.6合用組、小檗堿和甘草 提取物合用組，各組6只。
[0040] 以上各組動(dòng)物分別灌胃給藥，模型對(duì)照組小鼠給予10mL/kg/d蒸餾水。陽(yáng)性藥劑 量，為了使血糖水平與給藥組保持同等數(shù)量級(jí)，選擇l〇〇mg/kg (Yuan H等， Int · Immunopharmacol · 2013，12,682-688)。小檗堿組給藥劑量為50mg/kg/d;甘草酸組劑量 為80mg/kg/d;小檗堿和甘草酸1:1 · 1合用組二者劑量均為50mg/kg/d;小檗堿和甘草酸1: 1.6合用組二者劑量分別為50，80mg/kg/d;小檗堿和甘草提取物合用組二者劑量分別為 5〇11^/1^/(1，2.2 8/1^/(1。每日給藥1次，連續(xù)給藥4周。最后一次給藥禁食1211后摘除小鼠眼球 取血，靜置30min后以6000rpm(4°C )離心20min，吸取上清，測(cè)空腹血糖和糖化血糖白蛋白濃 度。
[0041]胰島素測(cè)定方法：（1)將試劑盒在室溫平衡20min，然后從鋁箱袋中取出所需板條， 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，50μ!7孔;樣品孔:在每個(gè)樣本孔 中加入IOyL樣本，再加入樣本稀釋液40yL;空白孔不加。
[0042] (2)除空白孔外，在樣本和標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入I OOyL辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記物的 檢測(cè)抗體，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，放置于恒溫箱(37°C)孵育60min。
[0043] (3)洗板:棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置Imin，甩去洗滌液，吸水 紙上拍干，如此重復(fù)洗版5次。
[0044] (4)每孔加入顯色底物A和B各50yL(包括空白孔），37°C避光孵育15min。
[0045] (5)加入終止液(包括空白孔)50yL/孔，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD。
[0046] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0047] 給藥4周后各實(shí)驗(yàn)組小鼠空腹血糖的情況如表1所示，小檗堿組、小檗堿和甘草酸 1: 1.1合用組給藥后血糖與模型對(duì)照組比較，空腹血糖值顯著性降低(P〈〇 .05)。甘草酸本身 并無(wú)降血糖的藥理活性，而小檗堿和甘草酸1:1.6合用組、小檗堿與甘草提取物合用組、及 陽(yáng)性藥組較模型對(duì)照組有更明顯的降血糖作用(P〈〇.01)，空腹血糖降低約50% (如圖3-A所 示）。同時(shí)這4個(gè)治療組的降血糖效果與陽(yáng)性藥二甲雙胍組比較，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 此外，小檗堿和甘草酸1:1.6合用組、小檗堿和甘草提取物合用組與單獨(dú)給藥小檗堿組，有 明顯差異，說(shuō)明小檗堿和甘草提取物(或甘草酸)配伍，能提高小檗堿的降血糖作用。
[0048] 糖化白蛋白反應(yīng)給藥4周內(nèi)的血糖平均水平，小檗堿組、小檗堿和甘草酸1:1.1合 用組、小檗堿和甘草酸1:1.6合用組、小檗堿與甘草提取物合用組、與模型組小鼠的糖化白 蛋白比較，有顯著性差異(P〈〇.05)。變化趨勢(shì)與空腹血糖一致。各治療組小鼠的糖化白蛋白 下降了 30%左右，血糖得到有效的控制（如表1、圖3-B所示），進(jìn)一步說(shuō)明小檗堿和甘草(或 甘草酸)合用藥物組合，能提高小檗堿單獨(dú)給藥的降血糖的功能。
[0049] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與模型組比較，不同給藥治療組、二甲雙胍治療4周后，各組胰島素水 平有不同程度的提高(P〈〇.05)，小檗堿和甘草酸1:1.6合用組與二甲雙胍組小鼠的胰島素 水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)。甘草酸給藥組小鼠的胰島素水平?jīng)]有提高，而小檗堿和甘草 酸1: 1.1合用組、小檗堿和甘草酸1:1.6合用組及陽(yáng)性藥組較模型對(duì)照組有更明顯的降血糖 作用(P〈0.01)，提高約20-30% (如表1、圖3-C所示）。說(shuō)明小檗堿和甘草酸合用藥物組合，能 提高小檗堿單獨(dú)給藥的增強(qiáng)胰島素分泌功能，可用于治療糖尿病。
[0050] 表1、各治療組小鼠的給藥4周后空腹血糖、糖化白蛋白和胰島素濃度。
[0052] 注:與模型對(duì)照組比較，*〈0.05，#〈0.01.與小檗堿組比較，#〈0.05.
[0053]實(shí)施例3、藥物組合物對(duì)db/db自發(fā)性糖尿病小鼠血脂的影響。
[0054] 一、實(shí)驗(yàn)材料和方法。
[0055] 甘草酸和小檗堿對(duì)照品購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司；陽(yáng)性藥二甲雙胍購(gòu)自 北京酷來(lái)搏科技有限公司，經(jīng)HPLC/UV分析化合物純度達(dá)到98%。甘草藥材原料藥購(gòu)自北京 天衡大藥房。
[0056] 本研究使用db/db雄性小鼠與實(shí)施例2-致。血清生化指標(biāo)檢測(cè)：測(cè)定小鼠血清中 總膽固醇(CHOL)、高密度脂蛋白（HDL)、低密度脂蛋白（LDL)、甘油三酯(TG)的含量。
[0057] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0058] 通過(guò)比較小檗堿組、小檗堿和甘草酸1: 1.1合用組、小檗堿和甘草酸1:1.6合用組、 小檗堿和甘草提取物合用組的總膽固醇(CHOL)、高密度脂蛋白（HDL)、低密度脂蛋白（LDL)、 甘油三酯(TG)含量，結(jié)果顯示，甘草酸本身沒(méi)有明顯的降血脂作用，但各配伍治療組與模型 對(duì)照組比較，降血脂作用明顯(P〈〇.01);陽(yáng)性對(duì)照組降血脂作用與治療組相比，差異不具有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>〇.〇5)(如表2、圖4所示）。此外，與單獨(dú)給予小檗堿組比較，小檗堿和甘草配 伍、小檗堿和甘草酸配伍均對(duì)db/db小鼠血脂有明顯的改善作用。說(shuō)明小檗堿和甘草(或甘 草酸)合用藥物組合，能提高小檗堿單獨(dú)給藥的降血脂，調(diào)節(jié)脂代謝，保護(hù)肝臟的功能?？捎?于治療糖尿病脂代謝紊亂、糖尿病合并肝病等并發(fā)癥。
[0059] 表2、各治療組小鼠的給藥4周后總膽固醇(A)、甘油三酯(B)、高密度脂蛋白（C)、低 密度脂蛋白（D)的含量。
[0062] 注:與模型對(duì)照組比較，*〈0 · 05，#〈0 · 01 ·與小檗堿組比較，#〈0 · 05 ·
[0063]實(shí)施例4、藥物組合物對(duì)db/db自發(fā)性糖尿病小鼠肝腎功能的影響。
[0064] 一、實(shí)驗(yàn)材料和方法。
[0065] 甘草酸和小檗堿對(duì)照品購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司；陽(yáng)性藥二甲雙胍購(gòu)自 北京酷來(lái)搏科技有限公司，經(jīng)HPLC/UV分析化合物純度達(dá)到98%。甘草藥材原料藥購(gòu)自北京 天衡大藥房。
[0066] 本研究使用db/db雄性小鼠與實(shí)施例2-致。血清生化指標(biāo)檢測(cè)：測(cè)定小鼠血清中 總肌酐(Cre)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量。
[0067]二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0068] db/db小鼠給藥4周后，模型對(duì)照組的肝臟ALT和AST水平有升高的趨勢(shì)。陽(yáng)性藥降 低ALT、AST水平與文獻(xiàn)報(bào)道一致(Yuan H等，Int · Immunopharmacol · 2013，12，682-688)。與 模型組比較，小檗堿組、小檗堿和甘草酸1: 1.1合用組、小檗堿和甘草酸1:1.6合用組、小檗 堿和甘草提取物合用組小鼠的ALT和AST水平卻降低(P〈0.01)(如表3、圖3所示）。結(jié)果表明， 小檗堿和甘草、小檗堿與甘草酸配伍均對(duì)肝臟功能有明顯改善作用。各配伍治療組之間比 較，也無(wú)明顯差異(P>〇.05)。
[0069] 與模型組比較，小檗堿和甘草酸1: 1.1合用組、小檗堿和甘草酸1:1.6合用組、小檗 堿和甘草提取物合用組小鼠的總肌酐水平有所降低(P〈〇.05)，但各組之間比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué) 差異(P>0.05)(如表3、圖5所示）。說(shuō)明小檗堿和甘草(或甘草酸)合用藥物組合，能降低小檗 堿單獨(dú)給藥的腎臟總肌酐水平，改善腎臟功能?？捎糜谥委熖悄虿『喜⒛I功能衰竭等并發(fā) 癥。
[0070] 表3、各治療組小鼠的給藥4周后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(A)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(B)和總肌酐(C)的 含量。
[0073] 注：與模型對(duì)照組比較，*〈0 · 05，#〈0 · 01。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有抗糖尿病活性的藥物組合物，由：a)豆科植物烏拉爾甘草、脹果甘草、光果甘草 原藥材的水提液和b)從含有小檗堿的植物中提取的小檗堿，或者合成的小檗堿及其可藥用 鹽組成。2. 具有抗糖尿病活性的藥物組合物，由：a)從含有甘草酸的植物中提取的甘草酸或者 合成的甘草酸;和b)從含有小檗堿的植物中提取的小檗堿，或者合成的小檗堿及其可藥用 鹽混合后組成。3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的藥物組合物，在制備預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物 中的用途。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中糖尿病的并發(fā)癥選自糖尿病脂代謝紊亂、糖尿病合 并肝病、腎功能衰竭。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，該組合物 中小檗堿與甘草提取物的重量比例為1:10至1:50，優(yōu)選為1:27.5或1:44。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，該組合物 中小檗堿與甘草酸的重量比例為1:1至1:2,優(yōu)選為1:1.1或1:1.6。
【文檔編號(hào)】A61P1/16GK106074676SQ201610416432
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月14日 公開(kāi)號(hào)201610416432.X, CN 106074676 A, CN 106074676A, CN 201610416432, CN-A-106074676, CN106074676 A, CN106074676A, CN201610416432, CN201610416432.X
【發(fā)明人】葉敏, 王 琦, 喬雪, 匡易
【申請(qǐng)人】北京大學(xué)