生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供包含氧化糖胺聚糖和聚胺的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物。本發(fā)明的組合物在生物降解性、涂敷性、凝膠化時(shí)間，止血功能、粘結(jié)力及水分吸收力等方面呈現(xiàn)改善的效果，從而可用于生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、傷口覆蓋、防止露出及止血等可使用醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑的多種醫(yī)療用途。
【專利說明】
生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及包含具有甲?；难趸前肪厶呛途郯返纳锝到庑葬t(yī)療用粘結(jié)劑 或密封劑組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物粘結(jié)劑(bioadhesive)及密封劑為在進(jìn)行手術(shù)時(shí)用于縫合組織或涂敷在組織 上，或者用作防出血?jiǎng)ㄖ寡?、體液和血液阻斷劑等，因生物粘結(jié)劑及密封劑與皮膚相接 觸，因此要求具有生物相容性，并且應(yīng)在生物體內(nèi)不產(chǎn)生毒性和危害性，而且還應(yīng)具有生物 降解性，且不得妨礙生物體治愈。
[0003] 目前，已投入實(shí)際使用的醫(yī)療用粘結(jié)材料為氰基丙烯酸酯類、纖維蛋白膠類、動(dòng)物 膠類、聚氨酯類等，美國(guó)Closure Medical公司推出稱作多抹棒(Dermabond)的氰基丙稀酸 辛酯的醫(yī)療用組織粘結(jié)劑，并在1997年8月獲得歐洲經(jīng)濟(jì)共同體的銷售許可，且在1998年獲 得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)的許可。但是，在氰基丙烯酸酯類粘結(jié)劑中，因固化物缺 乏柔韌性且堅(jiān)硬，因此存在妨礙創(chuàng)傷治愈的情況，并且，很難在生物體內(nèi)降解，因此，存在因 粘結(jié)劑被包化而容易變成異物等問題。并且，由于纖維蛋白膠的粘結(jié)力相當(dāng)?shù)?，因此存在?生成的纖維蛋白塊從組織脫落的情況，且由于上述纖維蛋白膠為血液制劑，因此存在病毒 感染等隱患。
[0004] 除上述醫(yī)療用粘結(jié)劑之外，在韓國(guó)公開專利第10-2009-0083484號(hào)中公開了包含 冷凍干燥之后進(jìn)行機(jī)械粉碎而制備的葡聚糖醛粉末和ε -聚-L-賴氨酸粉末的醫(yī)療用雙組分 型粘結(jié)劑(商品名稱:LYDEX)。上述雙組分型粘結(jié)劑的特征在于上述雙組分型粘結(jié)劑為粉末 狀的醫(yī)療用粘結(jié)劑，但是，存在用于降解凝膠的時(shí)間較長(zhǎng)，且在水分吸收力方面無法獲得期 待效果的問題。因此，對(duì)具有改善降解時(shí)間、粘結(jié)力及水分吸收力等特征的新醫(yī)療用粘結(jié)劑 的需求變高。
[0005] 在整個(gè)說明書中，參照并引用了多個(gè)論文及專利文獻(xiàn)。整個(gè)被引用的論文及專利 文獻(xiàn)的公開內(nèi)容作為參照插入于本說明書中，從而使本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的水平及本發(fā)明 的內(nèi)容更加明確地得到說明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 技術(shù)問題
[0007] 為了開發(fā)即使在存在體液及血液的體內(nèi)部位中也可充分執(zhí)行粘結(jié)、覆蓋及止血， 尤其，與其他生物降解性高分子相比，可吸收大量水分，可在體內(nèi)自行降解的生物降解性醫(yī) 療用粘結(jié)及密封劑，本發(fā)明人員進(jìn)行了研究及努力。最終確認(rèn)到，通過一同使用導(dǎo)入甲酰基 來氧化的氧化糖胺聚糖和聚胺，從而可有效執(zhí)行生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、傷 口覆蓋及止血等作用，由此完成了本發(fā)明。
[0008] 因此，本發(fā)明的目的在于，提供醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑(或醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑 組合物）。
[0009] 本發(fā)明的另一目的在于，提供生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、傷口覆蓋或 止血方法。
[0010] 通過下述的針對(duì)發(fā)明的詳細(xì)說明、發(fā)明要求保護(hù)范圍及附圖，使得本發(fā)明的其他 目的及優(yōu)點(diǎn)變得更加明確。
[0011] 解決問題的方案
[0012] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施方式，本發(fā)明提供如下的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑 (或醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物），上述生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑包含:第一成 分a，包含導(dǎo)入甲?；鶃硌趸难趸前肪厶牵灰约暗诙煞謆，包含具有兩個(gè)以上氨基的聚 胺，上述第二成分在水溶液狀態(tài)下的pH為8.5至11.0。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的再一實(shí)施方式，本發(fā)明提供如下的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封 劑(或醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物），上述生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑包含:第一 成分a，包含導(dǎo)入甲?；鶃硌趸难趸前肪厶?；以及第二成分b，包含具有兩個(gè)以上氨基的 聚胺，上述第二成分在水溶液狀態(tài)下的pH為8.5至11.0。
[0014]在混合上述第一成分及第二成分的情況下，甲?；?氨基的摩爾比為0.1至500。 [0015]根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，本發(fā)明提供包括將上述生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或 密封劑組合物(或醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物)適用于需要粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、 傷口覆蓋或止血的生物組織的步驟，上述步驟包含在生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘 連、傷口覆蓋或止血的方法中。
[0016] 為了開發(fā)即使在存在體液及血液的體內(nèi)部位中也可充分執(zhí)行粘結(jié)、覆蓋及止血， 尤其，與其他生物降解性高分子相比，可吸收大量水分，可在體內(nèi)自行降解的生物降解性醫(yī) 療用粘結(jié)及密封劑，本發(fā)明人員進(jìn)行了研究及努力。最終確認(rèn)到，通過一同使用導(dǎo)入甲酰基 來氧化的氧化糖胺聚糖和聚胺，從而可有效執(zhí)行生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、傷 口覆蓋及止血等作用。
[0017] 在本說明書中，互換使用醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑和它們的組合物。
[0018] 如下述實(shí)施例所確認(rèn)，與以往的醫(yī)療用雙組分型粘結(jié)劑(LYDEX)相比，本發(fā)明的組 合物在凝膠化形成時(shí)間、粘結(jié)力及水分吸收力方面呈現(xiàn)出得到改善的效果（參照表5至表 7)，且在止血效果方面也比以往的止血?jiǎng)?Arista TMAH)呈現(xiàn)出更加優(yōu)秀的效果(參照?qǐng)D12)。 上述結(jié)果表示，作為第一成分和第二成分的組合的本發(fā)明的組合物對(duì)生物組織的粘結(jié)、填 充、涂敷、防止粘連、傷口覆蓋及止血等醫(yī)療用途方面呈現(xiàn)優(yōu)秀的物性，從而可將本發(fā)明的 組合物用作上述醫(yī)藥用途。
[0019] 本發(fā)明的組合物包含作為第一成分的氧化糖胺聚糖。上述術(shù)語"氧化糖胺聚糖"表 示通過導(dǎo)入甲?；?-CH0)來使糖胺聚糖被氧化。上述糖胺聚糖為呈包含己醣胺的雙糖重復(fù) 結(jié)構(gòu)的多糖，在這一點(diǎn)上與作為單糖的〇-糖苷組合的葡聚糖不同。
[0020] 可通過高碘酸氧化法實(shí)施上述甲?；膶?dǎo)入。例如，利用高碘酸或高碘酸鹽來使 糖胺聚糖氧化，從而可獲得每無水葡萄糖單元(糖基）中導(dǎo)入有適當(dāng)數(shù)量(例如，〇.〇1至0.95 個(gè))的甲?；难趸前肪厶恰?br>[剩根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，根據(jù)氧化度(%) =氧化爾數(shù)X湯計(jì)算的上 述氧化糖胺聚糖的氧化度為10至99.5%。當(dāng)與第二成分組合使用時(shí)，具有上述氧化度的氧 化糖胺聚糖可通過迅速吸收體內(nèi)的血液和體液，從而可在短時(shí)間內(nèi)實(shí)施凝膠化。
[0022]根據(jù)一特定例，上述氧化糖胺聚糖的氧化度為10至60%，在再一特定例中，上述氧 化糖胺聚糖的氧化度為10至55%，在另一特定例中，上述氧化糖胺聚糖的氧化度為10至 50%，在又一特定例中，上述氧化糖胺聚糖的氧化度為10至45 %，在又一特定例中，上述氧 化糖胺聚糖的氧化度為10至40 %。作為一例，上述第一成分包含一種以上的氧化糖胺聚糖， 在上述氧化糖胺聚糖為氧化透明質(zhì)酸的情況下，上述氧化透明質(zhì)酸的氧化度為10~20%。 [0023]可通過NaOH滴定法實(shí)施上述糖胺聚糖的氧化度測(cè)定。例如，將17.5g的鹽酸羥胺和 6ml的0.05 %甲基橙與994ml的蒸餾水進(jìn)行混合來制備0.25mol/l的鹽酸羥胺溶液，并通過 滴定方法將上述鹽酸羥胺溶液的pH滴定為4之后，使0 . lg的氧化糖胺聚糖溶解于25ml的上 述溶液，并利用〇. lmol/1氫氧化鈉來重新將上述溶液的pH值滴定為4之后，代入
%來計(jì)算氧化度（％)。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，在上述氧化糖胺聚糖中，每無水葡萄糖單元（糖基）具有 0.01至0.95個(gè)甲?；?br>[0025] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述氧化糖胺聚糖選自由氧化透明質(zhì)酸、氧化硫酸軟骨素、 氧化軟骨素、氧化硫酸皮膚素、氧化硫酸乙酰肝素、氧化肝素及氧化硫酸角質(zhì)素組成的組。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明，通過使用特定分子量的糖胺聚糖，從而可適當(dāng)調(diào)整粘結(jié)劑/密封劑組 合物的凝膠化性能、凝膠化狀態(tài)維持時(shí)間、凝膠的彈性等。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，用于獲得上述氧化糖胺聚糖的糖胺聚糖的分子量為1000至 500萬。作為一例，用于獲得上述氧化糖胺聚糖的糖胺聚糖的分子量可以為1萬至400萬、5萬 至350萬、10萬至350萬、10萬至300萬、10萬至250萬、10萬至200萬或10萬至160萬。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述第一成分包含具有10萬至200萬分子量的透明質(zhì)酸。根 據(jù)一特定例，上述氧化透明質(zhì)酸的分子量為1 〇萬至160萬。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述第一成分包含兩種以上的氧化糖胺聚糖。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述氧化糖胺聚糖的重量百分比為1:0.5~5。根據(jù)一特定 例，上述氧化糖胺聚糖的重量百分比為1:0.5~4,根據(jù)再一特定例，上述氧化糖胺聚糖的重 量百分比為1:0.5~3.5,根據(jù)另一特定例，上述氧化糖胺聚糖的重量百分比為1:0.5~3,根 據(jù)又一特定例，上述氧化糖胺聚糖的重量百分比為1: 〇. 5~2.5，根據(jù)又一特定例，上述氧化 糖胺聚糖的重量百分比為1:0.5~2,根據(jù)又一特定例，上述氧化糖胺聚糖的重量百分比為 1:0.5~1·5〇
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述兩種以上的氧化糖胺聚糖為氧化透明質(zhì)酸及氧化硫酸 軟骨素。上述氧化透明質(zhì)酸和上述氧化硫酸軟骨素的重量百分比可以為1: 〇. 5~5、1:0.5~ 4、1:0.5~3.5、1:0.5~3、1:0.5~2.5、1:0.5~2、1:0.5~1.5或1:0.8~1.2。
[0032]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述氧化透明質(zhì)酸的氧化度為10~40%。根據(jù)一特定例，上 述氧化透明質(zhì)酸的氧化度為12~40 %，根據(jù)再一特定例，上述氧化透明質(zhì)酸的氧化度為12 ~38%，根據(jù)另一特定例，上述氧化透明質(zhì)酸的氧化度為13~37%。
[0033]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述氧化硫酸軟骨素的氧化度為10~55%。根據(jù)一特定例， 上述氧化硫酸軟骨素的氧化度為10~50%，在再一特定例中，上述氧化硫酸軟骨素的氧化 度為10~45%，在另一特定例中，上述氧化硫酸軟骨素的氧化度為10~40%，在又一特定例 中，上述氧化硫酸軟骨素的氧化度為10~35%。
[0034]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述第一成分呈粉末狀、液狀或固體狀(例如，顆粒形態(tài)）。 作為一例，粉末狀的第一成分可通過對(duì)含有氧化糖胺聚糖的溶液進(jìn)行干燥（例如，噴霧干 燥、冷凍干燥等)之后對(duì)其進(jìn)行粉碎(例如，機(jī)械粉碎)來獲得。
[0035] 作為活性成分，本發(fā)明的組合物除了第一成分之外，還包含第二成分，上述第二成 分包含具有兩個(gè)以上氨基的聚胺。上述第二成分在水溶液狀態(tài)下的pH為8.5~11.0。如以下 實(shí)施例所確認(rèn)，在上述第二成分的水溶液狀態(tài)下的pH為8.5~11.0情況下，可在數(shù)秒內(nèi)實(shí)現(xiàn) 凝膠化(參照?qǐng)D7)。
[0036] 根據(jù)一特定例，上述第二成分在水溶液狀態(tài)下的pH為9.0~11.0。
[0037]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述聚胺還可包含二氨基和/或三氨基。
[0038]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，包含上述聚胺的第二成分呈粉末狀、液狀或固體狀(例如， 顆粒）。作為一例，粉末狀的第二成分可通過對(duì)包含聚胺溶液進(jìn)行干燥之后對(duì)其進(jìn)行粉碎來 獲得。此時(shí)，上述含有聚胺溶液還可包含pH調(diào)節(jié)劑，使得第二成分在水溶液狀態(tài)下的pH范圍 為8.5~11.0。作為一例，上述pH調(diào)節(jié)劑可以為乙酸、檸檬酸、琥珀酸、戊二酸、蘋果酸、富馬 酸及馬來酸等單價(jià)或多價(jià)羧酸化合物或其無水物等。
[0039] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述聚胺選自由聚賴氨酸、殼聚糖、白蛋白、腐胺 (putrescine)、尸胺（cadaverine)、亞精胺（spermidine)、精胺（spermine)、精蛋白及聚乙 稀亞胺(口〇1}^1：1171611；[111；[116)組成的組。
[0040] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述聚胺具有100以上的分子量。作為一例，上述聚胺的分 子量可以為1000至20萬。
[0041 ]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述聚胺為聚-L-賴氨酸。上述聚-L-賴氨酸可以為使用微 生物(例如，鏈霉菌)或酶來生成的聚ε -聚-L-賴氨酸。
[0042 ]根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，除了聚胺之外，上述第二成分還可包含pH調(diào)節(jié)劑。
[0043] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，本發(fā)明的組合物還可包含藥物。作為一例，第二成分可包含 上述藥物。上述藥物可具有一個(gè)以上的胺基，作為一例，上述藥物可以為蒽環(huán)類藥物、吉西 他濱、萬古霉素、多粘菌素、甲氨蝶呤、蛋白質(zhì)藥物及肽藥物等。在此情況下，當(dāng)?shù)谝怀煞趾?第二成分被凝膠化時(shí)，上述藥物的胺基也與第一成分的甲?；煌鸬阶饔?，從而三種成 分可一同形成凝膠，隨著所形成的凝膠崩潰，逐漸放出藥物，從而可呈現(xiàn)藥理活性。
[0044] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，本發(fā)明的組合物能夠以多種形態(tài)劑型化，例如，可包含呈粉 末狀、液狀或固體狀(例如，顆粒形態(tài))的第一成分和呈粉末狀、液狀或固體狀的第二成分的 組合。
[0045] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，本發(fā)明的組合物包含0.5~10:1重量百分比的第一成分和 第二成分。
[0046] 根據(jù)一特定例，上述第一成分與第二成分的重量百分比為0.5~8:1，在再一特定 例中，上述第一成分與第二成分的重量百分比為0.5~6:1，在另一特定例中，上述第一成分 與第二成分的重量百分比為0.5~4:1，在又一特定例中，上述第一成分與第二成分的重量 百分比為0.5~3:1，在又一特定例中，上述第一成分與第二成分的重量百分比為0.5~2:1， 在又一特定例中，上述第一成分與第二成分的重量百分比為〇. 5~1.5:1，在又一特定例中， 上述第一成分與第二成分的重量百分比為0.8~1.5:1，在又一特定例中，上述第一成分與 第二成分的重量百分比為0.8~1.2:1。
[0047] 根據(jù)本發(fā)明，可通過調(diào)整上述第一成分的甲酰基與第二成分的氨基的比例來調(diào)整 凝膠形成時(shí)間、生成凝膠的降解時(shí)間等。
[0048] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，在混合上述第一成分及第二成分的情況下，甲?；?氨基的 摩爾比為0.1~500。
[0049] 根據(jù)一特定例，在混合上述第一成分及第二成分的情況下，甲?；?氨基的摩爾比 為1~400,在再一特定例中，甲?；?氨基的摩爾比為1~350,在另一特定例中，甲?；?氨 基的摩爾比為1~300,在又一特定例中，甲?；?氨基的摩爾比為10~300。
[0050] 為了獲得醫(yī)療效果(醫(yī)療用途），上述第一成分和第二成分可同時(shí)或依次被涂敷于 粘附體(生物體內(nèi)部及外部的皮膚面）。此時(shí)，根據(jù)情況，為了實(shí)施上述第一及第二成分的凝 膠化，可噴射生理鹽水或蒸餾水。
[0051] 根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)例，上述醫(yī)療用途選自由生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘 連、傷口覆蓋及止血用途構(gòu)成的組。
[0052]本發(fā)明的組合物以將第一成分和第二成分盛在相同容器的狀態(tài)提供，或者以將上 述第一成分和第二成分盛在不同容器的狀態(tài)來提供。
[0053]發(fā)明的效果
[0054]概括本發(fā)明的特征及優(yōu)點(diǎn)如下：
[0055] (i)本發(fā)明提供包含氧化糖胺聚糖和聚胺的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組 合物。
[0056] ( ? )本發(fā)明的組合物在生物降解性、涂敷性、凝膠化時(shí)間、止血功能、粘結(jié)力及水 分吸收力等方面呈現(xiàn)出改善的效果。
[0057] (m)本發(fā)明的組合物可用作能夠用于生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、傷 口覆蓋、防止露出及止血等可使用醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑的多種醫(yī)療用途。
【附圖說明】
[0058]圖1示出利用傅立葉紅外(FT-IR)分光計(jì)來分析氧化透明質(zhì)酸的結(jié)果。
[0059] 圖2為示出利用具有氨基的第二成分的混合物的凝膠化狀態(tài)和凝膠化時(shí)間的照 片。
[0060] 圖3為示出按照互不相同的重量百分比混合的第一成分和第二成分混合物的凝膠 化評(píng)價(jià)結(jié)果的照片。
[0061] 圖4為對(duì)本發(fā)明的粘結(jié)劑及密封劑組合物的凝膠化時(shí)間與以往的粘結(jié)劑組合物 (醫(yī)療用雙組分型粘結(jié)劑）的凝膠化時(shí)間相比較來示出的照片。
[0062] 圖5為對(duì)本發(fā)明的粘結(jié)劑及密封劑組合物的粘結(jié)力與以往的粘結(jié)劑組合物（醫(yī)療 用雙組分型粘結(jié)劑)的粘結(jié)力相比較來示出的圖表。
[0063] 圖6為示出在切除胃粘膜后，在出血部位涂敷本發(fā)明的粘結(jié)劑及密封劑組合物或 以往的粘結(jié)劑組合物(醫(yī)療用雙組分型粘結(jié)劑)之后的結(jié)果(年膜附著能力和止血能力）的 照片。
[0064] 圖7為示出氧化糖胺聚糖和聚胺混合物的凝膠化狀態(tài)和凝膠化時(shí)間以及是否基于 pH實(shí)現(xiàn)凝膠化的照片。
[0065] 圖8至圖11示出以肝葉切除術(shù)模型、腎臟切除術(shù)模型、胃粘膜切除術(shù)模型及血管應(yīng) 用模型為對(duì)象來實(shí)施的本發(fā)明的粘結(jié)劑及密封劑組合物和以往的止血?jiǎng)?Arista TMAH)之間 的比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0066] 圖12為定量示出圖8至圖11的結(jié)果的圖表。
【具體實(shí)施方式】
[0067] 以下，通過實(shí)施例，更加詳細(xì)說明本發(fā)明。以下實(shí)施例僅用于更加詳細(xì)說明本發(fā) 明，根據(jù)本發(fā)明主旨，本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員知曉本發(fā)明的范圍并不局限于 以下實(shí)施例。
[0068] 實(shí)施例
[0069]實(shí)施例1.制備醫(yī)療用粘結(jié)劑①
[0070] (1)制備氧化透明質(zhì)酸(CH0-HA:第一成分）
[0071] 將分子量為71^)&、1501^)&、4001^)&或30001^) &的透明質(zhì)酸(撤）18或38溶解在溶解有 高碘酸鈉(NaI〇4)的150ml的水中。此時(shí)，如下表1至表4所示，通過改變高碘酸鈉的濃度和反 應(yīng)條件來使氧化度(取代度(DS)，％ )發(fā)生改變。在15~70°C的溫度下，對(duì)反應(yīng)燒瓶進(jìn)行3~ 48小時(shí)的反應(yīng)，并利用分子量篩截為1~lOOkDa的滲析膜，以蒸餾水對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行了 24小時(shí) 的滲析之后對(duì)所獲得的氧化透明質(zhì)酸進(jìn)行4日以上的冷凍干燥，之后將其粉碎來使被粉碎 的氧化透明質(zhì)酸通過500μπι大小的網(wǎng)眼，從而獲得直徑約為500μπι以下的氧化透明質(zhì)酸。
[0072] 氣化誘明質(zhì)酸
[0073]
[0074] 利用傅立葉紅外分光計(jì)(Cary 640，Agilent Technologies，USA)分析氧化透明質(zhì) 酸，最終在4000~400cm-1 (resolution 4cm-〇中確認(rèn)出取代基（圖1) 〇
[0075] 為了確認(rèn)透明質(zhì)酸的氧化度，將17.5g的鹽酸羥胺和6ml的0.05%甲基橙與994ml 的蒸餾水進(jìn)行混合來制備出〇. 25M鹽酸羥胺溶液，并將其pH滴定為4。將0. lg的氧化透明質(zhì) 酸溶解在25ml的上述溶液，并利用O.lmM氫氧化鋁，重新將其pH滴定為4。利用以下算式計(jì)算 氧化度（％ )，計(jì)算結(jié)果如表1至表4。
[0076] 數(shù)學(xué)式1
[0077]
[0078] 表 1
[0079]
[0082]表 3
[0083]
[0084] 表 4
[0085]
[0086] (2)具有兩個(gè)以上的氨基的第二成分
[0087] 在含有氨基的多種聚胺中，代表性地將殼聚糖、精蛋白、聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、精 胺、亞精胺及白蛋白等用作第二成分，利用pH調(diào)節(jié)劑（酸、酸鹽、堿、堿鹽等)來將5重量百分 比以上的聚胺水溶液的pH調(diào)整成8.5、9.0、9.5及10之后，與上述氧化透明質(zhì)酸/氧化硫酸軟 骨素的情況相同地使用了經(jīng)過冷凍干燥之后所獲得的粉末。
[0088] 對(duì)上述分類的含氨基的聚胺的凝膠化度和凝膠化時(shí)間進(jìn)行了評(píng)價(jià)。最終，白蛋白、 堿性聚賴氨酸(BPL)、聚乙烯亞胺呈現(xiàn)出優(yōu)秀的凝膠化速度和凝膠的穩(wěn)定性(圖2)。其中，利 用堿性聚賴氨酸進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。
[0089] 實(shí)施例2.物性評(píng)價(jià)
[0090] (1)凝膠化評(píng)價(jià)
[0091] 以互不相同的重量百分比（1:1、2:1、4:1、8:1)對(duì)在實(shí)施例1中獲得的第一成分及 第二成分進(jìn)行混合，并向混合后的成分進(jìn)行澆水來確認(rèn)凝膠化程度。
[0092] 其結(jié)果如下，即，在以8:1的比例混合第一成分和第二成分的情況下，在經(jīng)過10分 鐘之后，一部分變成了液體。與以1:1的比例混合第一成分和第二成分的情況相比，在分別 以2:1和4:1的比例混合第一成分及第二成分的情況下，凝膠的彈性較為下降（圖3)。并且， 雖然利用3000kDa分子量的透明質(zhì)酸的混合制劑被凝膠化，但其彈性下降。在分子量150kDa 和1400kDa的透明質(zhì)酸的情況下，透明質(zhì)酸與取代度無關(guān)地被凝膠化，但是，當(dāng)取代度為 10% (10~19% )時(shí)的混合制劑呈現(xiàn)出短的凝膠化時(shí)間，且具有優(yōu)秀的彈性。
[0093] 基于以上結(jié)果，以1:1的重量百分比混合第一成分（向分子量150kDa或1400kDa的 透明質(zhì)酸導(dǎo)入醛基的，取代度為10%的氧化透明質(zhì)酸)和第二成分來實(shí)施以下實(shí)驗(yàn)。
[0094] (2)對(duì)凝膠化時(shí)間的評(píng)價(jià)
[0095]按30mg的單位對(duì)在2ml管中經(jīng)過混合的成分進(jìn)行細(xì)分，并將其收集于管蓋。在1秒 之內(nèi)向上述管蓋噴射120μ1的水之后，測(cè)定了凝膠化的時(shí)間。在LYDEX的情況下，與透明質(zhì)酸 混合制劑相比，盡管使用了更少量(80μ1)的水，但獲得固化的凝膠所需時(shí)間為10秒以上。相 反，在氧化透明質(zhì)酸的混合制劑的情況下，呈現(xiàn)出2~3秒以內(nèi)的極短的凝膠化時(shí)間（圖4及 表5)。
[0096]表 5
[0097]
[0098] (3)粘結(jié)力評(píng)價(jià)
[0099] 向100mg的混合成分噴射800μ1的水之后，利用物性測(cè)試儀(Texture Analyzer)來 測(cè)定了粘結(jié)力。其結(jié)果如下，即，與氧化透明質(zhì)酸混合制劑相比，盡管LYDEX使用了更少量 (500μ1)的水，但平均粘結(jié)力呈現(xiàn)出約為53.6gf。相反，在氧化透明質(zhì)酸的混合制劑的情況 下，測(cè)定出的平均粘結(jié)力分別約為65.9及67.5gf (圖5及表6)。
[0100] 表6
[0101]
[0102] (4)吸水力評(píng)價(jià)
[0103] 對(duì)LYDEX以及與第二成分經(jīng)過混合的各個(gè)CHO-HA 150kDa(DS 10%)、CH0-HA 1400kDa(DS 10% )的吸水力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。將30mg的各個(gè)樣本放置在皮氏培養(yǎng)皿(60)來測(cè)定 了其重量?？紤]產(chǎn)品的吸水力，添加了樣本重量的30倍(30g)的預(yù)先加熱至37°C的蒸餾水。 將樣本放置在37°C的恒溫器中30分鐘之后，將皮氏培養(yǎng)皿倒置30分鐘并測(cè)定了樣本的重 量。利用以下的算式計(jì)算了吸水力。
[0104] 數(shù)學(xué)式2
[0105]
[0106] 其結(jié)果確認(rèn)到，與現(xiàn)有LYDEX劑型相比，氧化透明質(zhì)酸的混合制劑（CH0-HA 1400kDa)的吸水力約為L(zhǎng)YDEX劑型的五倍左右(表7)。
[0107] 表7
[0108]
[0109]實(shí)施例3.生物體內(nèi)評(píng)價(jià)
[0110] (D實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0111] 將體重為2至3kg的三只雄性兔(New Zealand White:東方生物(Orient Bio)，城 南，韓國(guó)）用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)韓國(guó)仁荷大學(xué)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究委員會(huì)（Experimental Animal Research Committee)的方針，執(zhí)行了所有動(dòng)物飼養(yǎng)及試驗(yàn)過程。
[0112] (2)引發(fā)胃出血的動(dòng)物模型
[0113]以如下方式制作了兔子的粘膜切除術(shù)(mucosectomy)-誘導(dǎo)胃出血模型。在手術(shù)前 24小時(shí)，對(duì)兔子采取絕食措施，并向兔子的肌內(nèi)注射氯胺酮（4.2mg/kg)及甲苯噻嗪 (11.7mg/kg)的混合物來對(duì)兔子進(jìn)行了麻醉。通過切開兔子的上腹部來使胃露出，并沿著胃 大彎（greater curvature)切開約為5~7cm左右。向胃的粘膜下層（submucosal layer)注 射200μ1的等張生理鹽水，并利用手術(shù)剪刀切除溶脹的胃粘膜。切除部位的直徑約為7~ 1 0mm 〇
[0114] (3)粘膜附著能力及止血能力評(píng)價(jià)
[0115]在正在出血的被切除的兔子胃粘膜涂敷約0.5g的混合制劑（1:1重量百分比的第 一成分和第二成分的混合物）。其結(jié)果如下，即，如圖6所示，在涂敷混合制劑的同時(shí)，混合制 劑和血液就進(jìn)行反應(yīng)，從而使混合制劑凝膠化，與非處置組相比，縮短了出血時(shí)間。并且，確 認(rèn)到本發(fā)明的組合物的粘膜附著能力（圖6)。
[0116]實(shí)施例4.醫(yī)療用粘結(jié)劑的制備②
[0117] (1)氧化透明質(zhì)酸和氧化硫酸軟骨素(第一成分)的制備
[0118] 將3g的分子量為 1400kDa的氧化透明質(zhì)酸（SHANDONG BL00MAGE FREDA BI0PHARM CO.，Ltd)溶解在150ml的蒸餾水中。接著，如表1所示，添加高碘酸鈉(分子量為213.89)，并 在40°C的溫度下，將反應(yīng)燒杯攪拌24小時(shí)并使其進(jìn)行反應(yīng)。而且，用蒸餾水對(duì)反應(yīng)后的溶液 進(jìn)行48小時(shí)的滲析(使用分子量篩截為12000~14000的滲析膜)之后進(jìn)行冷凍干燥。
[0119] 將3g的分子量為5000~50000之間的硫酸軟骨素 （YANTAI D0NGCHENG BI0CHEMICAL C0.，Ltd)溶解在15ml的蒸餾水中。接著，如表2所示，添加高碘酸鈉(分子量為 213.89)，并在常溫下，攪拌18小時(shí)并使其進(jìn)行反應(yīng)。而且，用蒸餾水對(duì)經(jīng)過反應(yīng)后的溶液進(jìn) 行48小時(shí)的滲析(使用分子量篩截為12000~14000的滲析膜)之后進(jìn)行冷凍干燥。
[0120] 在以下的實(shí)驗(yàn)中，將氧化透明質(zhì)酸和氧化硫酸軟骨素作為第一成分來使用。
[0121]利用NaOH的滴定法確認(rèn)到透明質(zhì)酸和硫酸軟骨素的取代度(氧化度）。具體地，將 17.5g的鹽酸羥胺和6ml的0.05%甲基橙與9941111的蒸餾水相混合來制備0.25111〇1/1的鹽酸 羥胺溶液，并將其pH滴定為4。將O.lg的氧化透明質(zhì)酸或硫酸軟骨素溶解在25ml的上述溶液 中，并利用O.lmol/1氫氧化鈉來重新將上述溶液的pH滴定為4。利用以下算式來計(jì)算取代度 (%)，其結(jié)果如下述表8及表9。
[0122] 數(shù)學(xué)式3
[0123] W - 」 今、'
[0125]
[0128] (2)制備具有兩個(gè)以上的氨基的第二成分
[0129] 在含有氨基的多種聚胺中，代表性地將殼聚糖、精蛋白、聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、精 胺、亞精胺及白蛋白等選作第二成分，為了確認(rèn)第二成分是否基于pH來實(shí)現(xiàn)凝膠化，在水溶 液狀態(tài)下，將pH調(diào)整為多種范圍（5·5~6·4、6·5~7·4、7·5~8·4、8·5~9·4、9·5~10·4、 10.5~11)之后，與上述氧化透明質(zhì)酸/氧化硫酸軟骨素的情況相同地使用了經(jīng)過冷凍干燥 之后所獲得的粉末?；旌仙鲜龅谝怀煞值难趸该髻|(zhì)酸/氧化硫酸軟骨素。其結(jié)果如下，即， 與聚胺的種類無關(guān)，確認(rèn)到僅在pH為8.5~11的情況下實(shí)現(xiàn)凝膠化。作為一例，在聚-L-賴氨 酸的pH為8.5的情況下形成了凝膠，但是在pH為5.6的情況下，未形成凝膠。在本實(shí)驗(yàn)中，根 據(jù)凝膠的透明度來確定凝膠的形成與否(透明：凝膠化，不透明：未被凝膠化)（圖7)。
[0130]實(shí)施例5.確認(rèn)最佳比例
[0131] (1)確立按分子量、比例的最佳條件
[0132] 根據(jù)氧化度，將獲得的粉末狀的氧化硫酸軟骨素和分子量為150~3000kDa的氧化 透明質(zhì)酸（1:1)按照比例與聚胺(PA，選定pH為8.5~9.5的聚賴氨酸來使用）相混合來確認(rèn) 物性。根據(jù)氧化度，在按照比例混合的粉末50mg中投入已滅菌處理的蒸餾水200μ1來用肉眼 確認(rèn)了吸收已滅菌處理的蒸餾水的程度。分別將在10秒鐘內(nèi)開始吸收粉末已滅菌處理的蒸 餾水的情況評(píng)價(jià)為好(+++)，將在30秒鐘內(nèi)開始吸收的情況評(píng)價(jià)為普通(++)，將在60秒鐘以 上之內(nèi)開始吸收的情況評(píng)價(jià)為差(+ )來確認(rèn)了溶解度(solubility)。并且，當(dāng)投入已滅菌處 理的蒸餾水時(shí)，確認(rèn)是否實(shí)現(xiàn)凝膠化并確認(rèn)凝膠化時(shí)間。確認(rèn)上述制備的凝膠是否實(shí)現(xiàn)液 化并測(cè)定液化時(shí)間。并在下述表中整理了上述確認(rèn)的結(jié)果(表10及表11)。
[0133] 如表11所不，在幾乎所有的第一成分和第二成分的組合中，導(dǎo)出讓人滿意的水分 吸收力和凝膠化時(shí)間，其中，呈現(xiàn)出最佳性能（水分吸收力為+++，凝膠化時(shí)間為30秒鐘以 內(nèi)）的為將10~50 %氧化硫酸軟骨素和10~40 %氧化透明質(zhì)酸（分子量為150、1400或 3000kDa)與聚胺按照1:1的比例進(jìn)行混合的混合制劑(樣本號(hào):3、4、12、14、17、26、29)，基于 上述結(jié)果，在下述實(shí)施例中，使用#14(命名為UI-SAH)來進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。
[0134] 表1〇
[0135]

[0138] 實(shí)施例6.制作老鼠出血模型及止血作用評(píng)價(jià)
[0139] (1)肝葉切除術(shù)模型
[0140] 向體重200~300g的雄性SD老鼠的腹腔注射氯胺酮和賽拉嗪混合物來對(duì)老鼠進(jìn)行 麻醉之后，將中央上腹部向橫向或縱向切開約為3~4cm左右。利用濕紗布，從切開的腹部的 縫隙露出肝葉，利用血管用夾子對(duì)肝門靜脈及肝動(dòng)脈進(jìn)行結(jié)扎。利用手術(shù)剪刀切開從肝葉 的邊緣相距約lcm的位置，在上述位置涂敷了50~100mg的UI~SAH。作為對(duì)比組，在上述位 置涂敷了阿里斯泰可降解止血粉(Arista? AH(Medaf〇r Inc.，USA)。在進(jìn)行涂敷之后，將結(jié) 扎的夾子去除后確認(rèn)是否發(fā)生出血現(xiàn)象，并利用已被滅菌的紗布測(cè)定出血量。
[0141] (2)腎臟切除術(shù)模型
[0142] 向體重200~300g的雄性SD老鼠的腹腔注射氯胺酮和賽拉嗪混合物來對(duì)老鼠進(jìn)行 麻醉之后，將右側(cè)腹部向縱向切開約3~4cm左右。利用濕紗布，使腎臟從切開的腹部的縫隙 露出，利用血管用夾子對(duì)腎靜脈(renal vein)、腎動(dòng)脈(renal arteries)進(jìn)行結(jié)扎。利用手 術(shù)剪刀切開從腎臟的邊緣相隔約lcm左右的位置，并在上述位置涂敷了50~100mg的UI~ SAH。作為對(duì)比組，在上述位置涂敷了Arista? AH(Medafor Inc.，USA)。在進(jìn)行涂敷之后，去 除結(jié)扎的夾子之后確認(rèn)是否發(fā)生出血現(xiàn)象，并利用已滅菌處理的紗布測(cè)定出血量。
[0143] (3)胃粘膜切除術(shù)模型
[0144] 使體重為200~300g的雄性SD老鼠絕食24小時(shí)之后，向上述老鼠的腹腔注射氯胺 酮和賽拉嗪混合物來對(duì)老鼠進(jìn)行麻醉，之后，將中央上腹部向縱向或橫向切開約為3~4cm 左右。利用濕紗布，使胃從切開的腹部的縫隙露出，并將血管少的胃彎曲部分向水平切開約 3cm左右來使胃內(nèi)壁露出。向胃內(nèi)壁注入注射用生理鹽水100μΙ之后，利用手術(shù)剪刀將胃粘 膜切除，切除的部分呈直徑為約5mm的圓，并向上述部分涂敷50~100mg的UI~SAH。作為對(duì) 比組，在上述位置涂敷了Arista? AH(Medafor Inc.，USA)。確認(rèn)在涂敷部位是否發(fā)生出血 現(xiàn)象，并利用已滅菌處理的紗布測(cè)定出血量。
[0145] (4)血管（Portal vein)出血模型
[0146] 向體重為200~300g的雄性SD老鼠的腹腔注射氯胺酮和賽拉嗪混合物來對(duì)老鼠進(jìn) 行麻醉之后，將中央上腹部向橫向或縱向切開約5~6cm左右。從切開腹部的縫隙使其他臟 器向左側(cè)移動(dòng)之后，露出門靜脈(Portal vein)。利用血管用夾子在對(duì)門靜脈的上部和下部 兩處進(jìn)行結(jié)扎。利用18標(biāo)準(zhǔn)尺寸針，在門靜脈穿出一個(gè)孔之后，在上述孔涂敷50~100g的UI ~SAH。作為對(duì)比組，在上述位置涂敷了Arista? AH(Medafor Inc.，USA)。在進(jìn)行涂敷之后， 將結(jié)扎的夾子去除，之后確認(rèn)是否發(fā)生出血現(xiàn)象，并利用已滅菌處理的紗布測(cè)定出血量。
[0147] (5)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0148] 將實(shí)驗(yàn)結(jié)果在圖8至圖12中示出。如圖12所示，本發(fā)明的組合物的止血效果比對(duì)比 組（Arista? AH)更優(yōu)秀。
[0149] 以上，詳細(xì)說明了本發(fā)明的特定部分，對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 而言，上述具體記述僅屬于優(yōu)選實(shí)例，本發(fā)明的范圍并不局限于上述實(shí)例。因此，本發(fā)明的 實(shí)際范圍由所附的發(fā)明要求保護(hù)范圍及其等同技術(shù)方案所定義。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，包含： 第一成分(a)，包含導(dǎo)入甲?；鶃硌趸难趸前肪厶?；以及 第二成分(b)，包含具有兩個(gè)以上氨基的聚胺，上述第二成分在水溶液狀態(tài)下的pH為 8.5 至 11.0。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，上述 氧化糖胺聚糖選自由氧化透明質(zhì)酸、氧化硫酸軟骨素、氧化軟骨素、氧化硫酸皮膚素、氧化 硫酸乙酰肝素、氧化肝素及氧化硫酸角質(zhì)素組成的組。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，根據(jù)計(jì)算的上述氧化糖胺聚糖的氧化度（％)為10至 99.5%〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，上述 第一成分包括兩種以上的氧化糖胺聚糖。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，上述 兩種以上的氧化糖胺聚糖為氧化透明質(zhì)酸及氧化硫酸軟骨素。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，上述 氧化透明質(zhì)酸的氧化度為10~40%，上述氧化硫酸軟骨素的氧化度為10~55%。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，上述 聚胺選自由聚賴氨酸、殼聚糖、白蛋白、腐胺、尸胺、亞精胺、精胺、精蛋白及聚乙烯亞胺組成 的組。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，上述 醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物具有選自由生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、傷口覆 蓋及止血用途構(gòu)成的組中的醫(yī)療用途。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物，其特征在于，上述 生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物還包含具有胺基的藥物。10. -種生物組織的粘結(jié)、填充、涂敷、防止粘連、傷口覆蓋或止血的方法，其特征在于， 包括將權(quán)利要求1所述的生物降解性醫(yī)療用粘結(jié)劑或密封劑組合物適用于需要粘結(jié)、填充、 涂敷、防止粘連、傷口覆蓋或止血的生物組織的步驟。
【文檔編號(hào)】A61L15/44GK106061518SQ201480067775
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2014年12月12日
【發(fā)明人】李恩惠, 孟珍熙, 金根洙, 李敦行, 樸永煥
【申請(qǐng)人】猶他-仁荷Dds及新醫(yī)療技術(shù)開發(fā)共同研究所