一種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，屬于超氧化物歧化酶技術領域，步驟包括：粉碎并干燥明綠豆、提取明綠豆超氧化物歧化酶、熱水浴處理、離心過濾得到上清液Ⅰ和濾渣Ⅰ、硫酸銨分級沉淀、過G?200葡聚糖凝膠柱、無水石油醚提取濾渣Ⅰ、95%乙醇浸提混合物Ⅱ、乙醚溶解膏狀物Ⅰ、丙酮溶解膏狀物Ⅱ、粉碎泡沫狀固體、混合溶劑溶解粉末狀提取物Ⅰ、在混合溶液Ⅰ中加入膽固醇、注射超氧化物歧化酶磷酸緩沖液、減壓干燥和磷酸鹽緩沖溶液溶解等步驟；本發(fā)明利用明綠豆提取的濾渣制備明綠豆超氧化物歧化酶脂質體，方法簡單，制備的超氧化物歧化酶脂質體具有包封率高，性質穩(wěn)定，包埋成本低，制備原料普遍等特點，有利于明綠豆的綜合利用。
【專利說明】
-種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及一種綠豆提取物及其制備方法，特別是設及一種明綠豆超氧化物歧化 酶脂質體的制備方法。
【背景技術】
[0002] 綠豆（Ki狎a rac/iaie )，為豆科草本植物綠豆（Phaseolusradiatus)的成熟種 子?，F(xiàn)代藥理研究表明綠豆具有抗菌抑菌、抗腫瘤、抗氧化、提高免疫力、降血脂、及解毒等 作用。
[0003] 明光綠豆下簡稱"明綠豆"），主產(chǎn)于明光市明東、石巧、澗溪、管店等鄉(xiāng)鎮(zhèn)。W其 色澤晶奎碧綠，粒大皮薄、湯清易爛，清香可口等特點，質量為全國之冠，被譽為"明綠"，曾 經(jīng)被作為貢品。2008年"明光綠豆"被列為"國家地理標志保護產(chǎn)品"，并獲得注冊商標。
[0004] 經(jīng)檢測：明光綠豆的種子中脂肪含量為0.90%，灰分含量為3.70%，絕對水分含量為 11.80%，蛋白質含量為25.26%，碳水化合物含量為58.34%。
[0005] 超氧化物歧化酶(Superoxide dismu化se，S0D)，是廣泛存在于生物體內的一類金 屬蛋白酶，具有催化超氧離子自由基(〇2^)歧化反應的特異作用，被醫(yī)學界譽為"人體清道 夫"。超氧化物歧化酶能快速有效地清除體內的超氧自由基，在防止生物體免受超氧自由基 損傷，抗福射、抗腫瘤、提高人體免疫力、抗壓力和疲勞，預防局部缺血再灌注損傷，治療動 脈血管粥樣硬化，治療脂溢性皮膚炎癥及延緩機體衰老等方面起到重要作用，在食品、農業(yè) 及化妝品行業(yè)的應用也越來越廣泛。但是過去大多從血液中提取，不僅工藝復雜、制備成本 高、不易常溫保存，且存在艾滋病等血液病毒交叉感染的潛在危險，國際衛(wèi)生組織已停止動 物性超氧化物歧化酶的使用。植物超氧化物歧化酶則有較高的使用安全性，所W，從植物源 中獲取超氧化物歧化酶正成為熱點。
[0006] 經(jīng)檢索，尚未檢索到明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法。
[0007]

【發(fā)明內容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種綜合利用明綠豆的自身成分制備明綠豆超氧化物歧 化酶脂質體的方法。本發(fā)明提供了一種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，具體流 程步驟為： a) 粉碎并干燥明綠豆； b) 超聲輔助pH7憐酸鹽緩沖液提取明綠豆超氧化物歧化酶，得到混合物I C)將混合物I用42~45 °C的熱水水浴^化； d) 將水浴處理后的混合物I在溫度2~6 °C的條件下離屯、，離屯、后過濾得到上清液I和濾 渣I; e) 將硫酸錠加入到上清液I中，配制成硫酸錠含量為30~38%的溶液，靜置后離屯、，過濾 得到上清液Π 和濾渣Π ，取上清液Π ，繼續(xù)加硫酸錠，至上清液Π 的硫酸錠含量為60~70%， 完全溶解后二次離屯、，二次過濾得到上清液虹和沉淀物I; f) 將沉淀物I復溶至水中，用pH6.8±0.1的憐酸鹽緩沖液進行透析，透析完成后過G- 200葡聚糖凝膠柱，得到明綠豆超氧化物歧化酶憐酸鹽緩沖液； g) 將濾渣I用無水石油酸提取，提取完成后取固體部分，稱為混合物Π ; h) 將混合物Π 用95%乙醇溶液浸提，過濾去除不溶物并將濾液真空濃縮，得到膏狀物 I; i) 用乙酸溶解真空濃縮得到的膏狀物I，溶解后過濾，并將濾液置于20~30°C的環(huán)境中 減壓蒸發(fā)，得到膏狀物Π ; j) 再用丙酬溶解膏狀物Π ，溶解后過濾，并將濾液真空冷凍干燥，得到泡沫狀固體； k) 將泡沫狀固體粉碎，得到粉末狀提取物I; l) 將粉末狀提取物I完全溶解在甲醇、乙醇、正己燒的混合溶劑中，得到混合溶液I; m) 在混合溶液I中加入膽固醇，得到混合溶液Π ; η)所述明綠豆超氧化物歧化酶憐酸鹽緩沖液加入到混合溶液Π 中，料液比為1:4~1:5， 得到混合溶液虹； O) 減壓干燥去除混合溶液m中溶劑，得到超氧化物歧化酶脂質膜； P) 在超氧化物歧化酶脂質膜中加入pH7.2 ± 0.1的憐酸鹽緩沖溶液，使超氧化物歧化酶 脂質膜完全溶解，得到穩(wěn)定的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體。
[0009] 1.根據(jù)權利要求1所述的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，其特征在于： 在步驟j中，所述混合溶劑各成分的配比為：甲醇：乙醇:正己燒=70:50:1。
[0010] 2.根據(jù)權利要求1所述的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，其特征在于： 在步驟k中，所述膽固醇的添加量為0.3~2.5%(W/V)。
[0011] 3.根據(jù)權利要求1所述的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，其特征在于： 在步驟m中，所述減壓干燥的條件為在45~55°C，0.(Π ~0.2MP的條件下減壓干燥。
[0012] 有益效果
【申請人】在明綠豆超氧化物歧化酶的提取過程中，發(fā)現(xiàn)采用提取過程中的濾渣I作為原 料，進一步通過95%乙醇溶液，乙酸和丙酬提純后，再與提取的超氧化物歧化酶、膽固醇混合 后，經(jīng)過磁力攬拌，減壓干燥等手段，即可制備出穩(wěn)定性較高的超氧化物歧化酶脂質體。得 到的活性超氧化物歧化酶脂質體的活性包埋率為:88.73%，可見，本發(fā)明的超氧化物歧化酶 未影響到超氧化物歧化酶的活性。
[0013]本發(fā)明從明綠豆自身尋找出保護明綠豆超氧化物歧化酶的方法，不僅能夠保護從 明綠豆中提取出來的超氧化物歧化酶，而且綜合利用了明綠豆超氧化物歧化酶提取過程中 的廢料，包埋的物質為明綠豆自身的天然成分，在提取明綠豆超氧化物歧化酶的同時提取 明綠豆中的天然包埋成分，并連續(xù)對提取出來的超氧化物歧化酶進行包埋處理，制備出的 超氧化物歧化酶脂質體具有包封率高，性質穩(wěn)定，包埋成本低，制備原料普遍等特點。該制 備脂質體的方法簡單，完全融合在明綠豆超氧化物歧化酶的提取工藝中，僅僅采用了超氧 化物歧化酶提取后的廢棄物，對明綠豆超氧化物歧化酶進行包埋處理的方法。本發(fā)明提供 了一種全新的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法。
[0014]
【附圖說明】
[0015] 圖1:經(jīng)過實施例1的方法制備的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體電子顯微鏡圖像； 圖2:超聲輔助提取的明綠豆超氧化物歧化酶電子顯微鏡圖像。
[0016]
【具體實施方式】
[0017]下面結合具體實施例子進一步闡明本發(fā)明，應理解運些實施例僅用于說明本發(fā) 明，而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領域的技術人員對本發(fā)明各種等 價形式的修改均落于本申請所附權利要求所規(guī)定的范圍。
[001 引 實施例1 一種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，采用明綠豆、膽固醇為原料制備而成， 明綠豆由安徽燕之坊食品有限公司提供，膽固醇為食品級。
[0019] 具體操作方法包括如下步驟： 1.粉碎并干燥明綠豆:用粉碎設備將明綠豆粉碎，采用真空干燥設備在溫度為40°C，真 空度20-80k化的條件下減壓干燥，并過80目的篩，得到明綠豆粉末。
[0020] 2.提取明綠豆超氧化物歧化酶:將明綠豆粉末加入抑7憐酸鹽緩沖液，采用液固比 22:l(mL/g)、超聲功率120W，溫度為44°C的條件下超聲輔助提取明綠豆粉末90min，提取完 成后得到混合物I。
[0021] 3.熱水浴處理:將上述混合物I用44 °C的熱水水浴化。
[0022] 4.離屯、：將水浴處理后的混合物I在溫度4°C，離屯、轉數(shù)100(K)r/min的條件下離屯、 20 min,過濾得到上清液I和濾渣I。
[0023] 5.硫酸錠分級沉淀:將固體硫酸錠粉末加入上清液I中，用上清液I配制硫酸錠含 量為35%的溶液，磁力攬拌30 min,在4°C的環(huán)境中靜置4 h，Wl2000 r/min的轉數(shù)離屯、20 min;離屯、后得到上清液Π ，取上清液Π ，繼續(xù)加固體硫酸錠粉末，至上清液Π 的硫酸錠含量 為65%，然后在4°C的環(huán)境中，繼續(xù)W12000 r/min的轉數(shù)離屯、20 min,得到上清液虹和沉淀 物I。
[0024] 6.過G-200葡聚糖凝膠柱:將沉淀物I復溶至水中，于pH 6.7的憐酸鹽緩沖液中透 析，過G-200葡聚糖凝膠柱，得到明綠豆超氧化物歧化酶憐酸鹽緩沖液。
[0025] 7.無水石油酸提取濾渣：將濾渣I在40°C的條件下，用無水石油酸回流提取6~12 h，提取完成后過濾使其固液分離，得到的固體部分稱為混合物Π 。
[0026] 8.95%乙醇浸提混合物Π :將混合物Π 加入到95%乙醇溶液中，其中，料液比為1: 1.5(m/V)，在40°C條件下浸提地，浸提完成后，過濾去除不溶物并將濾液真空濃縮，得膏狀 物I。
[0027] 9.乙酸溶解膏狀物I:用乙酸溶解真空濃縮得到的膏狀物I，震蕩攬拌，當膏狀物不 減少后，過濾，并將濾液置于25 °C的環(huán)境中減壓蒸發(fā)，得到膏狀物Π ， 10.丙酬溶解膏狀物Π :同理，再用丙酬溶解膏狀物Π ，充分攬拌，當膏狀物Π 不減少 后，過濾，并將濾液真空冷凍干燥，得到泡沫狀固體。
[00%] 11.粉碎泡沫狀固體:將泡沫狀固體粉碎，粉末狀提取物I。
[0029] 12.混合溶劑溶解粉末狀提取物I:將粉末狀提取物I完全溶解在甲醇、乙醇、正己 燒的混合溶劑中，料液比為:20.82 mg/mL，得到混合溶液I，其中，所述混合溶劑各成分的配 比為：甲醇：乙醇：正己燒=70:50:1。
[0030] 13.在混合溶液I中加入膽固醇:在混合溶液I中加入0.45%(m/V)膽固醇，得到混合 溶液丑。
[0031 ] 14.注射超氧化物歧化酶憐酸緩沖液:用注射器或注射裝置將步驟6得到的明綠豆 超氧化物歧化酶憐酸鹽緩沖液注射到混合溶液Π 中，料液比為1:4.1，磁力攬拌30 min，得 到混合溶液虹。
[0032] 15.旋轉蒸發(fā):在55°C，0.1 MP的條件下旋轉蒸發(fā)去除混合溶液虹中溶劑，得到超氧 化物歧化酶脂質膜。
[0033] 16.憐酸鹽緩沖溶液溶解:在超氧化物歧化酶脂質膜中加入抑7.2的憐酸鹽緩沖 溶液，使超氧化物歧化酶脂質膜完全溶解，得到穩(wěn)定的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體。
[0034]
【申請人】采用包封率評價明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的效果，方法如下： 采用鄰苯Ξ酪法測定包封前超氧化物歧化酶酶活性，方法見GB/T5009.171-2003。
[0035] 制備脂質體后，取明綠豆超氧化物歧化酶脂質體1. OmL，加入正丙醇至3. OmL破乳， 使類脂雙分子層溶解從而釋放出超氧化物歧化酶，采用鄰苯Ξ酪法測定碎化后超氧化物歧 化酶活性，并計算明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的活性包封百分率。
[0036]
【申請人】將本實施例制備的超氧化物歧化酶脂質體放在電子顯微鏡中，得到的結構 圖如圖1所示，而直接提取出來的超氧化物歧化酶的結構圖如圖2所示。圖中明顯看出，超氧 化物歧化酶脂質體的表面光滑，緊密無空隙，由此可見脂質體在超氧化物歧化酶的表面形 成了一層保護膜，從而保護酶的活性相對穩(wěn)定。經(jīng)過檢測，本實施例得到的超氧化物歧化酶 脂質體的活性包封率為:88.73%?？梢娬麄€制備工藝制備的超氧化物歧化酶脂質體對超氧 化物歧化酶的活性保護作用顯著。
[0037]
【申請人】對超氧化物歧化酶和本實施例的超氧化物歧化酶脂質體溫度耐受性做了 對比實驗，結果顯示，超氧化物歧化酶脂質體在70 °C水浴恒溫60 min后，殘余活力為90%， 而與之對比的游離超氧化物歧化酶在同樣條件下的殘余活力為75% ;80°C水浴恒溫150 min處理條件下，本實施例超氧化物歧化酶脂質體的相對活力為90%，游離的超氧化物歧化 酶僅為2%，說明本發(fā)明制備的超氧化物歧化酶脂質體對超氧化物歧化酶具有很好的保護作 用。
[0038]
【申請人】模擬人體消化環(huán)境，在37°C的條件下分別用胃蛋白酶處理游離的超氧化物 歧化酶和超氧化物歧化酶脂質體，結果顯示，處理后游離的超氧化物歧化酶的活性是處理 前的5.2%，而處理后超氧化物歧化酶脂質體的活性是處理前的72.6%，由此可見，本發(fā)明制 備的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體對明綠豆超氧化物歧化酶有顯著的保護作用。
[0039] 實施例2 一種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，采用明綠豆、膽固醇為原料制備而成， 明綠豆由安徽燕之坊食品有限公司提供，膽固醇為食品級。
[0040] 具體操作方法包括如下步驟： 1.粉碎并干燥明綠豆:用粉碎設備將明綠豆粉碎，采用真空干燥設備在溫度為50°C，真 空度20-80k化的條件下減壓干燥，并過100目的篩，得到明綠豆粉末。
[0041] 2.提取明綠豆超氧化物歧化酶:將明綠豆粉末加入抑7憐酸鹽緩沖液，采用超聲輔 助法提取明綠豆粉末，提取完成后得到明綠豆粉末和憐酸鹽緩沖液的混合物，命名為:混合 物I。
[0042] 3.熱水浴處理:將混合物I用45°C的熱水水浴化。
[0043] 4.離屯、：將水浴處理后的混合物I在溫度6°C的條件下離屯、，離屯、后過濾得到上清 液I和濾渣I。
[0044] 5.硫酸錠分級沉淀:將固體硫酸錠粉末加入上清液I中，用上清液I配制硫酸錠含 量為38%的溶液，磁力攬拌，在6°C的環(huán)境中靜置，靜置后離屯、，得到上清液Π 和濾渣Π ，取上 清液Π ，繼續(xù)加固體硫酸錠粉末，至上清液Π 的硫酸錠含量為70%，完全溶解后二次離屯、，得 到上清液虹和沉淀物I。
[0045] 6.過G-200葡聚糖凝膠柱:將沉淀物I復溶至水中，于pH 6.8的憐酸鹽緩沖液中透 析，過G-200葡聚糖凝膠柱，得到明綠豆超氧化物歧化酶憐酸鹽緩沖液。
[0046] 7.無水石油酸提取濾渣:將濾渣I在45°C的條件下，用無水石油酸逆向回流提取3~ 8 h，提取完成后過濾使其固液分離，得到的固體部分稱為混合物Π 。
[0047] 8.95%乙醇浸提混合物Π :將混合物Π 加入到95 %乙醇溶液中，浸提化后，過濾去 除不溶物并將濾液真空濃縮，得膏狀物I。
[004引9.乙酸溶解膏狀物I:用乙酸溶解真空濃縮得到的膏狀物I，完全溶解后過濾，并將 濾液置于20~30°C的環(huán)境中減壓蒸發(fā)，得到膏狀物Π ， 10.丙酬溶解膏狀物Π :同理，再用丙酬溶解膏狀物Π ，完全溶解后過濾，并將濾液真空 冷凍干燥，得到泡沫狀固體。
[0049] 11.粉碎泡沫狀固體:將泡沫狀固體粉碎，粉末狀提取物I。
[0050] 12.混合溶劑溶解粉末狀提取物I:將粉末狀提取物I完全溶解在甲醇、乙醇、正己 燒的混合溶劑中，得到混合溶液I，其中，所述混合溶劑各成分的配比為：甲醇：乙醇:正己燒 =70:50:1。
[0051 ] 13.在混合溶液I中加入膽固醇：在混合溶液I中加入0.3~2.5%(W/V)膽固醇，得到 混合溶液Π 。
[0052] 14.注射超氧化物歧化酶憐酸緩沖液:將步驟6得到的明綠豆超氧化物歧化酶憐酸 鹽緩沖液加入到混合溶液Π 中，料液比為1:4.1，攬拌30 min，得到混合溶液虹。
[0053] 15.減壓干燥:在45°C，0.01MP的條件下減壓干燥去除混合溶液虹中溶劑，得到超 氧化物歧化酶脂質膜。
[0054] 16.憐酸鹽緩沖溶液溶解:在超氧化物歧化酶脂質膜中加入抑7.2的憐酸鹽緩沖 溶液，使超氧化物歧化酶脂質膜完全溶解，得到穩(wěn)定的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體。
[0化5] 實施例3 一種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，采用明綠豆、膽固醇為原料制備而成， 明綠豆由安徽燕之坊食品有限公司提供，膽固醇為食品級。
[0056] 具體操作方法包括如下步驟： 1.粉碎并干燥明綠豆:用粉碎設備將明綠豆粉碎，采用真空干燥設備干燥明綠豆，并過 100目的篩，得到明綠豆粉末。
[0057] 2.提取明綠豆超氧化物歧化酶:將明綠豆粉末加入抑7憐酸鹽緩沖液，采用超聲輔 助法提取明綠豆粉末，提取完成后得到明綠豆粉末和憐酸鹽緩沖液的混合物，命名為:混合 物I。
[0化引 3.熱水浴處理:將混合物I用42Γ的熱水水浴化。
[0059] 4.離屯、：將水浴處理后的混合物I在溫度2°C的條件下離屯、，離屯、后過濾得到上清 液I和濾渣I。
[0060] 5.硫酸錠分級沉淀:將固體硫酸錠粉末加入上清液I中，用上清液I配制硫酸錠含 量為30%的溶液，攬拌，在2°C的環(huán)境中靜置，靜置后離屯、，得到上清液Π 和濾渣Π ，取上清液 Π ，繼續(xù)加固體硫酸錠粉末，至上清液Π 的硫酸錠含量為60%，完全溶解后二次離屯、，得到上 清液虹和沉淀物I。
[0061] 6.過G-200葡聚糖凝膠柱:將沉淀物I復溶至水中，于pH 6.8±0.1的憐酸鹽緩沖液 中透析，過G-200葡聚糖凝膠柱，得到明綠豆超氧化物歧化酶憐酸鹽緩沖液。
[0062] 7.無水石油酸提取濾渣:將濾渣I在50°C的條件下，用無水石油酸提取10~18 h，提 取完成后過濾使其固液分離，得到的固體部分稱為混合物Π 。
[0063] 8.95%乙醇浸提混合物Π :將混合物Π 加入到95 %乙醇溶液中，浸提化后，過濾去 除不溶物并將濾液真空濃縮，得膏狀物I。
[0064] 9.乙酸溶解膏狀物I:用乙酸溶解真空濃縮得到的膏狀物I，完全溶解后過濾，并將 濾液置于20~30°C的環(huán)境中減壓蒸發(fā)，得到膏狀物Π ， 10.丙酬溶解膏狀物Π :同理，再用丙酬溶解膏狀物Π ，完全溶解后過濾，并將濾液真空 冷凍干燥，得到泡沫狀固體。
[0065] 11.粉碎泡沫狀固體:將泡沫狀固體粉碎，粉末狀提取物I。
[0066] 12.混合溶劑溶解粉末狀提取物I:將粉末狀提取物I完全溶解在甲醇、乙醇、正己 燒的混合溶劑中，得到混合溶液I，其中，所述混合溶劑各成分的配比為：甲醇：乙醇:正己燒 =70:50:1。
[0067] 13 .在混合溶液I中加入膽固醇：在混合溶液I中加入0.3~2.5%(W/V)膽固醇膽固 醇，得到混合溶液Π 。
[0068] 14.注射超氧化物歧化酶憐酸緩沖液:將步驟6得到的明綠豆超氧化物歧化酶憐酸 鹽緩沖液加入到混合溶液Π 中，料液比為1:5，攬拌30 min，得到混合溶液虹。
[0069] 15.減壓干燥:在50°C，0.2MP的條件下減壓干燥去除混合溶液虹中溶劑，得到超氧 化物歧化酶脂質膜。
[0070] 16.憐酸鹽緩沖溶液溶解:在超氧化物歧化酶脂質膜中加入抑7.2±0.1的憐酸鹽 緩沖溶液，使超氧化物歧化酶脂質膜完全溶解，得到穩(wěn)定的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體。
【主權項】
1. 一種明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，所述制備方法包括步驟:粉碎并干 燥明綠豆，超聲輔助PH7磷酸鹽緩沖液提取明綠豆超氧化物歧化酶，得到混合物I;其特征在 于，所述制備方法還包括如下步驟： 將混合物I用42~45 °C的熱水水浴1~3h; 將水浴處理后的混合物I在溫度2~6 °C的條件下離心，離心后過濾得到上清液I和濾渣 I; 將硫酸銨加入到上清液I中，配制成硫酸銨含量為30~38%的溶液，靜置后離心，過濾得 到上清液Π 和濾渣Π ，取上清液Π ，繼續(xù)加硫酸銨，至上清液Π 的硫酸銨含量為60~70%，完 全溶解后二次離心，二次過濾得到上清液m和沉淀物I; 將沉淀物I復溶至水中，用pH 6.8±0.1的磷酸鹽緩沖液進行透析，透析完成后過G-200 葡聚糖凝膠柱，得到明綠豆超氧化物歧化酶磷酸鹽緩沖液； 將濾渣I用無水石油醚提取，提取完成后取固體部分，稱為混合物Π ; 將混合物Π 用95%乙醇溶液浸提，過濾去除不溶物并將濾液真空濃縮，得到膏狀物I; 用乙醚溶解真空濃縮得到的膏狀物I，溶解后過濾，并將濾液置于20~30°C的環(huán)境中減 壓蒸發(fā)，得到膏狀物Π ; 再用丙酮溶解膏狀物Π ，溶解后過濾，將濾液真空冷凍干燥，得到泡沫狀固體； 將泡沫狀固體粉碎，得到粉末狀提取物I; 將粉末狀提取物I完全溶解在甲醇、乙醇、正己烷的混合溶劑中，得到混合溶液I; 在混合溶液I中加入膽固醇，得到混合溶液Π ; 所述明綠豆超氧化物歧化酶磷酸鹽緩沖液加入到混合溶液Π 中，料液比為1:4~1: 5,得 到混合溶液m; 減壓干燥去除混合溶液m中溶劑，得到超氧化物歧化酶脂質膜； 在超氧化物歧化酶脂質膜中加入pH 7.2 ± 0.1的磷酸鹽緩沖溶液，使超氧化物歧化酶 脂質膜完全溶解，得到穩(wěn)定的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體。2. 根據(jù)權利要求1所述的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，其特征在于:在步 驟j中，所述混合溶劑各成分的配比為：甲醇：乙醇:正己烷=70:50:1。3. 根據(jù)權利要求1所述的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，其特征在于:在步 驟k中，所述膽固醇的添加量為0.3~2.5%(W/V)。4. 根據(jù)權利要求1所述的明綠豆超氧化物歧化酶脂質體的制備方法，其特征在于:在步 驟m中，所述減壓干燥的條件為在45~55°C，0.01~0.2MP的條件下減壓干燥。
【文檔編號】A61P39/00GK105920591SQ201610275288
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年4月29日
【發(fā)明人】李梅青, 王星, 張瑜, 代蕾莉
【申請人】安徽農業(yè)大學