本發(fā)明涉及藥理活性物質(zhì)的體內(nèi)遞送技術領域，具體是一種制備用于體內(nèi)遞送藥理活性物質(zhì)的多肽納米粒的方法。

背景技術：

水不溶性藥理活性物質(zhì)難以通過靜脈注射給藥，為了實現(xiàn)靜脈注射給藥，有效的方法之一是將藥理活性物質(zhì)制成納米級的微粒。一方面，靜脈注射的微粒可以緩釋藥理活性物質(zhì)并延長藥理活性物質(zhì)的半衰期；另一方面，靶向材料可以將微?；乃幚砘钚晕镔|(zhì)靶向到病灶部位。

在現(xiàn)有的涉及利用多肽制備藥理活性物質(zhì)納米粒制劑的方法中，美國專利US6,749,868，US5,560,933的制備方法，是以人血清白蛋白為載體的結(jié)合型紫杉醇納米粒。這種制備方法是在有白蛋白的參與下，并在高壓均質(zhì)機的處理下，使白蛋白發(fā)生多肽鏈的展開與再折疊，將溶解有藥理活性物質(zhì)的微乳粒包裹在多肽鏈鎖形成的結(jié)構中，然后經(jīng)過冷凍干燥除去有機溶媒，從而獲得穩(wěn)定的藥理活性物質(zhì)納米粒。這一技術中所使用的白蛋白通常是來自人血液提取物，資源有限且價格昂貴。因此尋找其它價格低廉、性能可靠、資源豐富的多肽材料將有助于納米藥物的廣范應用。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種本利用價格低廉、資源豐富的多肽材料制備用于體內(nèi)遞送藥理活性物質(zhì)的多肽納米粒的方法，以解決某些藥理活性物質(zhì)由于其水溶性低而導致無法體內(nèi)遞送的難題。

一種制備用于體內(nèi)遞送藥理活性物質(zhì)的多肽納米粒的方法，包括如下步驟：

步驟(a)：將藥用明膠用注射用水溶解制成明膠溶液，調(diào)節(jié)明膠溶 液的pH值為4.5～7.0，升溫至70～100℃，保持溫度1～3小時，停止加熱，冷卻至25～40℃，通過濾膜過濾除去分子量過大和過小的組分，保留重均分子量為25,000～45,000道爾頓的部分，最后向明膠溶液中加注射用水使明膠多肽的質(zhì)量體積比濃度為0.5～1.0g/100ml(以含氮量計)，溶液調(diào)pH值至3.5～8.5制成明膠多肽溶液；

步驟(b)：將藥理活性物質(zhì)分散到有機溶劑中，加入到步驟(a)中所述的明膠多肽溶液中，混勻，轉(zhuǎn)入高壓均質(zhì)機，在1000～2000Bar高壓下乳化，形成O/W型微乳劑，高壓同時使多肽分子展開，當高壓解除后，展開的多肽分子發(fā)生再折疊或自組裝，交互纏繞形成網(wǎng)狀結(jié)構，把藥理活性物質(zhì)分散到其中形成多肽納米粒。

進一步的，所述步驟(b)中的藥理活性物質(zhì)選自紫杉醇、多西紫杉醇、格列本脲、布洛芬、伊立替康、5-氟尿嘧啶、卡莫司汀、阿霉素、苯芥膽甾醇、哌泊舒凡、他莫昔芬、洛莫司汀、藤黃酸、冬凌草甲素、鬼臼毒素、阿托伐他汀、斯伐他汀、非諾貝特、硝苯地平、吲哚美辛、吡羅昔康地西泮、利哌利酮、齊拉西酮、他克莫司、雷帕霉素、茚地那韋、利托那韋和洛匹那韋中的一種或其組合。

進一步的，所述步驟(b)中的有機溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、DMSO、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、福爾馬林、丙酮中的一種或其組合。

進一步的，所述的多肽納米粒的平均粒徑為25nm～500nm。

進一步的，所述的多肽納米粒的平均粒徑為50nm～300nm。

進一步的，所述的藥理活性物質(zhì)在納米粒中所占的重量比是1％～20％。

進一步的，所述步驟(a)的明膠多肽溶液是由健康動物骨所制成的藥用明膠，經(jīng)預先酸堿水解，必要時也可加交聯(lián)劑進行交聯(lián)反應后所制成的分子量適當?shù)拿髂z多肽水溶液，其中明膠多肽的重均分子量為25,000-45,000道爾頓，所述的交聯(lián)劑是甲醛、乙醛、戊二醛、琥珀酸酐、或它們的組合。

進一步的，還包括步驟(c)：將步驟(b)所制備的微乳液通過0.22微米孔徑的濾膜過濾。

進一步的，還包括步驟(d)：將步驟(c)所制備的微乳液經(jīng)過脫水步驟制備成藥物制劑，脫水方法包括減壓蒸餾或噴霧干燥或冷凍干燥，所得成藥物制劑的水分含量不超過5％。

本發(fā)明利用明膠多肽展開與再折疊的方法將藥理活性物質(zhì)微粒包入明膠多肽所構成的網(wǎng)格中，形成穩(wěn)定的納米粒制劑，相比現(xiàn)有技術使用人血液提取物提供白蛋白的方式來源更為豐富，而且格低更為廉，性能可靠。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明中的實施例，對本發(fā)明中的技術方案進行清楚、完整地描述。

實施例1.明膠多肽溶液的制備

500g藥用明膠用注射用水1.5L溶解，調(diào)節(jié)明膠溶液的pH值5.2，升溫至100℃，保持溫度2小時，停止加熱，冷卻至40℃，通過濾膜過濾除去分子量過大和過小的多肽組分，保留重均分子量為25,000～45,000道爾頓的部分，最后向溶液中加注射用水使明膠多肽的濃度為20％(g/100ml)，溶液pH值調(diào)至7.5。

實施例2.明膠多肽溶液的制備

500g藥用明膠用注射用水1.5L溶解，調(diào)節(jié)明膠溶液的pH值為4.5，升溫至120℃，保持溫度1.5小時，停止加熱，冷卻至40℃，pH值調(diào)節(jié)至8.1，加琥珀酸酐2.0g，攪拌1.5小時，通過適當?shù)臑V膜過濾除去分子量過大和過小的多肽組分，保留重均分子量為25,000～45,000道爾頓的部分，最后向溶液中加注射用水使明膠多肽的濃度為20％(g/100ml)，溶液pH值調(diào)至7.6。

實施例3.紫杉醇-明膠多肽納米粒的制備

取實施例1所制備的明膠多肽溶液55ml與65ml枸櫞酸緩沖液(pH6.5)混合作為水相，另取240mg紫杉醇溶于2.4ml氯仿作為油 相，油相和水相混合后轉(zhuǎn)入高壓均質(zhì)機內(nèi)(德國，APV-2000型)，在1200Bar壓力下循環(huán)多次得到納米乳劑，平均粒徑190.6nm(美國布魯克海文儀器公司，激光散射粒徑檢測儀檢測)。無菌條件下迅速冷凍至-30℃，抽真空48小時，升溫至35℃繼續(xù)抽真空24小時。

所得凍干后的塊狀樣品含紫杉醇8.91％(w/w)，水分含量＜4.1％，能夠很容易的用水或生理鹽水復溶為原溶液，且納米粒粒徑保持不變，主要分布在65～152nm。

實施例4.紫杉醇-明膠多肽納米粒的制備

取實施例2所制備的明膠多肽溶液55ml與65ml枸櫞酸緩沖液(pH6.5)混合作為水相，另取130mg紫杉醇溶于2.4ml氯仿作為油相，油相和水相混合后轉(zhuǎn)入高壓均質(zhì)機內(nèi)(德國，APV-2000型)，在1200Bar壓力下循環(huán)多次得到納米乳劑，平均粒徑207.6nm(美國布魯克海文儀器公司，激光散射粒徑檢測儀檢測)。無菌條件下迅速冷凍至-30℃，抽真空48小時，升溫至30℃繼續(xù)抽真空24小時。

所得凍干后的塊狀樣品含紫杉醇5.11％(w/w)，水分含量＜4.7％，能夠很容易的用水或生理鹽水復溶為原溶液，且納米粒粒徑保持不變，主要分布在50～190nm。

實施例5.紫杉醇–明膠多肽納米粒的制備

取實施例1所制備的明膠多肽溶液55ml與65ml枸櫞酸緩沖液(pH6.5)混合作為水相，另取250mg紫杉醇溶于3.5ml氯仿作為油相，油相和水相混合后轉(zhuǎn)入高壓均質(zhì)機內(nèi)(德國，APV-2000型)，在1300Bar壓力下循環(huán)多次得到納米乳劑，平均粒徑201.3nm(美國布魯克海文儀器公司，激光散射粒徑檢測儀檢測)。無菌條件下迅速冷凍至-30℃，抽真空48小時，升溫至30℃繼續(xù)抽真空24小時。

所得凍干后的塊狀樣品含紫杉醇9.81％(w/w)，水分含量＜4.5％，能夠很容易的用水或生理鹽水復溶為原溶液，且納米粒粒徑保持不變，主要分布在90～197nm。

實施例6.紫杉醇-明膠多肽納米粒的制備

取實施例2所制備的明膠多肽溶液55ml與65ml枸櫞酸緩沖液 (pH6.5)混合作為水相，另取250mg紫杉醇溶于2.4ml氯仿作為油相，油相和水相混合后轉(zhuǎn)入高壓均質(zhì)機內(nèi)(德國，APV-2000型)，在1300Bar壓力下循環(huán)多次得到納米乳劑，平均粒徑167.1nm(美國布魯克海文儀器公司，激光散射粒徑檢測儀檢測)。無菌條件下迅速冷凍至-30℃，抽真空48小時，升溫至35℃繼續(xù)抽真空24小時。

所得凍干后的塊狀樣品含紫杉醇10.01％(w/w)，水分含量＜4.0％，能夠很容易的用水或生理鹽水復溶為原溶液，且納米粒粒徑保持不變，主要分布在50～153nm。

實施例7.多西紫杉醇-明膠多肽納米粒的制備

取實施例2所制備的明膠多肽溶液55ml與65ml枸櫞酸緩沖液(pH6.5)混合作為水相，另取250mg多西紫杉醇溶于2.4ml氯仿作為油相，油相和水相混合后轉(zhuǎn)入高壓均質(zhì)機內(nèi)(德國，APV-2000型)，在1300Bar壓力下循環(huán)多次得到納米乳劑，平均粒徑174.2nm(美國布魯克海文儀器公司，激光散射粒徑檢測儀檢測)。無菌條件下迅速冷凍至-30℃，抽真空48小時，升溫至35℃繼續(xù)抽真空24小時。

所得凍干后的塊狀樣品含紫杉醇9.91％(w/w)，水分含量＜4.1％，能夠很容易的用水或生理鹽水復溶為原溶液，且納米粒粒徑保持不變，主要分布在53～163nm。

實施例8.吲哚美辛-明膠多肽納米粒的制備

取實施例2所制備的明膠多肽溶液55ml與65ml枸櫞酸緩沖液(pH6.5)混合作為水相，另取200mg多西紫杉醇溶于2.4ml氯仿作為油相，油相和水相混合后轉(zhuǎn)入高壓均質(zhì)機內(nèi)(德國，APV-2000型)，在1300Bar壓力下循環(huán)多次得到納米乳劑，平均粒徑181.2nm(美國布魯克海文儀器公司，激光散射粒徑檢測儀檢測)。無菌條件下迅速冷凍至-30℃，抽真空48小時，升溫至35℃繼續(xù)抽真空24小時。

所得凍干后的塊狀樣品含紫杉醇10.03％(w/w)，水分含量＜4.7％，能夠很容易的用水或生理鹽水復溶為原溶液，且納米粒粒徑保持不變，主要分布在63～180nm。

以上所述，僅為本發(fā)明的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并 不局限于此，任何屬于本技術領域的技術人員在本發(fā)明揭露的技術范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應該以權利要求的保護范圍為準。