一種腸溶人參糖蛋白微丸在制備鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了腸溶人參糖蛋白微丸的制備方法及其在制備鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜藥物中的新用途。該微丸可保護(hù)有效組分人參糖蛋白在胃中不被溶解后降解,但可在腸道環(huán)境下迅速釋放,并確保了人參糖蛋白在腸道中的有效吸收,提高口服時(shí)人參糖蛋白的藥理作用。
【專利說(shuō)明】
一種腸溶人參糖蛋白微丸在制備鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明是關(guān)于腸溶人參糖蛋白微丸的制備方法,以及以該微丸為活性組分在鎮(zhèn)痛 鎮(zhèn)靜方面的用途,本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] "疼痛"是臨床上一種最常見(jiàn)的病癥,中醫(yī)對(duì)疼痛的認(rèn)識(shí):《黃帝內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為疼痛發(fā) 生的原因是因?yàn)?不通",所謂"不通則痛"。引起疼痛的原因很多,有寒氣凝滯,瘀血閉阻、氣 機(jī)阻滯、熱壅脈絡(luò)、氣血失養(yǎng)、痰阻絡(luò)脈、食積腸胃等,但在諸多原因中是以寒凝氣滯為首要 原因,所以《內(nèi)經(jīng)》說(shuō)"痛者寒氣多也,有寒故痛也。"因此大凡具有止痛作用的中藥,大多屬 溫?zé)嵝再|(zhì)的藥物。
[0003] 目前,臨床上對(duì)各種急慢性疼痛多采取西藥治療,其中一類藥為阿片類鎮(zhèn)痛藥,這 類藥鎮(zhèn)痛效果確切,但長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生成癮性和依賴性,故臨床上應(yīng)用受到限制;另一類為 非阿片類鎮(zhèn)痛藥,即為非留體類鎮(zhèn)痛藥,而這類藥用于輕中度疼痛療效肯定,但易產(chǎn)生消化 不良反應(yīng)。近年來(lái),中醫(yī)中藥由于副作用小,使用方法方便、且經(jīng)濟(jì)、藥物資源豐富,因而,應(yīng) 用于疼痛治療及其相關(guān)研究得到了很大的發(fā)展。
[0004] 人參(Panax ginseng C.A.Meyer)為名貴藥材,性平、味甘,微溫,具有大補(bǔ)元?dú)狻?安神益智等功效,一直深受人們的重視。以往,對(duì)人參抗炎、鎮(zhèn)痛及鎮(zhèn)靜方面的研究已有報(bào) 道,但都是針對(duì)人參總皂苷或單體皂苷的研究。MatusdaH報(bào)道(Plant Med. 1990.56( 1),19-23),人參皂苷Ro在乙酸引起的小鼠血管通透性增加的模型上,口服200mg/kg,與相同濃度 的安替比林(陽(yáng)性對(duì)照)作用相近,可明顯抑制血管透過(guò)性的增加。張純武等報(bào)道(浙江中醫(yī) 雜志,2005年9月,402-403 ),人參皂苷對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎鎮(zhèn)痛和抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究,結(jié)果表 明,人參皂甙對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎實(shí)驗(yàn)小鼠有明顯的鎮(zhèn)痛和抗炎作用。趙保勝等報(bào)道(人參研 究,2010年第4期2-4),人參皂苷Rgl灌胃給藥一定時(shí)間后,分別用二甲苯致耳腫脹模型、醋 酸致腹腔毛細(xì)管通透性增加模型、角叉菜膠致足腫脹模型和肉芽腫模型,結(jié)果表明,人參皂 苷Rgl不同程度地抑制炎癥的發(fā)生,顯示出一定的抗炎作用。宗瑞義等報(bào)道(生理學(xué)報(bào),1964 年12月,27(4),324-328),人參水提物對(duì)小白鼠的自發(fā)活動(dòng)有非常顯著的鎮(zhèn)靜作用(P〈 0.001),對(duì)士的寧和戊四唑中樞興奮藥引起的驚撅有顯著性不等的拮抗作用。楊世杰等報(bào) 道(白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1990,16(3),240-242),應(yīng)用新的外周性鎮(zhèn)痛藥篩選方法觀察人 參皂甙的鎮(zhèn)痛作用,結(jié)果證明,人參二醇組、三醇組皂甙及單甙Rbl,均具有外周性鎮(zhèn)痛作 用。吳瑕等報(bào)道(中藥藥理與臨床,2007,23(1),43-45),竹節(jié)人參抗炎鎮(zhèn)痛作用研究,結(jié)果 表明,竹節(jié)人參能明顯減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù),延長(zhǎng)熱板試驗(yàn)小鼠痛反應(yīng)潛伏期,抑制 二甲苯所致小鼠耳腫脹程度及醋酸所致依文思蘭從毛細(xì)血管向腹腔的滲出,其抗炎鎮(zhèn)痛作 用的主要有效部位為總皂苷。
[0005] 近年來(lái)發(fā)現(xiàn),中藥中許多活性多肽成分具有鎮(zhèn)痛作用的報(bào)道,梁宋平專利(中國(guó), 00104254.8,2014年1月7日從虎紋捕鳥(niǎo)蜘蛛中獲得鎮(zhèn)痛肽,可作為單一有效活性組分用于 制備鎮(zhèn)痛藥。此鎮(zhèn)痛肽是通過(guò)與神經(jīng)突出前膜的N型高閾值鈣離子通道的結(jié)合,抑制突觸前 神經(jīng)遞質(zhì)的釋放而阻斷痛覺(jué)神經(jīng)信號(hào)的傳導(dǎo),而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。Kwon YB等人(Life Sci, 2003,71(2) :191-204)依據(jù)分子量差異將蜂毒提取物進(jìn)行分離后,表明只有分子量小于 10kD的組分具有抗疼痛活性,而其主要成分就是蜂毒素。李晶華等人(陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2012,35(4):74-76)將合成的蜂毒肽(26個(gè)氨基酸殘基),通過(guò)大鼠足三里微量注射(lmg/ kg),通過(guò)熱輻射致痛模型,證明其具有鎮(zhèn)痛作用。
[0006] 自2007年以來(lái),我們對(duì)人參水提物中大分子類化合物(多糖、糖蛋白、多肽)的化學(xué) 成分及生物活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。對(duì)分離得到的人參糖蛋白進(jìn)行了鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)靜作用的 活性篩選試驗(yàn),結(jié)果表明,人參糖蛋白經(jīng)腹腔、皮下注射(10、20、40mg/kg)兩種給藥途徑,在 小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(陽(yáng)性藥:阿司匹林),均具有顯著的鎮(zhèn)痛作用及量效關(guān)系,劑量 為40mg/kg的鎮(zhèn)痛效果p<0.001。在對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)(陽(yáng)性藥:?jiǎn)岱?結(jié)果顯示,不具有顯著 的鎮(zhèn)痛作用。抗炎實(shí)驗(yàn)研究表明,腹腔注射(40、80mg/kg)給藥,對(duì)二甲苯所致小鼠耳水腫 (陽(yáng)性藥:阿司匹林)作用的影響,結(jié)果未顯示出抗炎作用。此外,又進(jìn)行了自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)(陽(yáng) 性藥:嗎啡)及與戊巴比妥鎮(zhèn)靜藥的協(xié)同作用實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,嗎啡在給 藥120min后可顯著增加小鼠的自主活動(dòng),人參糖蛋白無(wú)明顯降低小鼠自主活動(dòng),但與戊巴 比妥鎮(zhèn)靜藥有極顯著的協(xié)同作用,可顯著延長(zhǎng)小鼠睡眠時(shí)間(P<〇. 01)。王穎等人報(bào)道 (Analgesic effects of glycoproteins from Panax ginseng root in mice.Journal of Ethnopharmacology,2013,148:946-950.)
[0007] 但在藥品研發(fā)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),人參糖蛋白在口服給藥時(shí),鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用不明顯,這是 由于該類成分口服時(shí)易被胃酸和胃蛋白酶降解破壞而失去活性,所以,為了確保人參糖蛋 白鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用,本發(fā)明采用了制備腸溶人參糖蛋白微丸,有效保護(hù)了人參糖蛋白的活性, 大大提高了口服的藥理作用,該技術(shù)可在制藥工業(yè)中得到應(yīng)用。在本發(fā)明之前,尚未見(jiàn)腸溶 人參糖蛋白微丸用于鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜方面的報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008] 本發(fā)明的目的之一是將人參糖蛋白本身具有的特性和微丸本身具有的優(yōu)勢(shì)結(jié)合 在一起,通過(guò)微丸的特點(diǎn)將人參糖蛋白組分制備成易于在腸道吸收的微丸,并通過(guò)腸溶包 衣材料包衣使其免于胃酸和蛋白酶的破壞。本發(fā)明中的腸溶微丸平均粒徑為170μπι,在人工 胃液和人工腸液中的溶解性能實(shí)驗(yàn)也表明此腸溶微丸在人工腸液中完全釋放,而在人工胃 液中的溶出率僅為13%,達(dá)到了預(yù)想的粒徑要求和包衣效果,可滿足藥理實(shí)驗(yàn)的要求。
[0009] 本發(fā)明的目的之二是人參糖蛋白腸溶微丸在鎮(zhèn)痛作用方面對(duì)醋酸所致小鼠扭體 反應(yīng)的影響和對(duì)福爾馬林所致小鼠疼痛的影響,在鎮(zhèn)靜作用方面對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響兩 方面的用途。本發(fā)明制備的腸溶微丸可顯著提高口服腸道吸收作用,本發(fā)明對(duì)于具有生物 活性的大分子糖蛋白(糖肽)類成分在制藥中可被引用的技術(shù),具有實(shí)質(zhì)性突破。
[0010] 本發(fā)明的內(nèi)容是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)施的:
[0011 ] -、人參糖蛋白腸溶微粒的制備方法:
[0012] (1)取人參5kg,加80 %乙醇回流提取2次,每次1小時(shí),濾過(guò),藥渣加水10倍量,加熱 提取2次,每次1.5小時(shí),濾過(guò),合并濾液,濃縮至10,000ml,利用截留分子量3k中空纖維柱超 濾,超濾液濃縮至500ml,通過(guò)截留分子量為lk的透析袋透析,透析內(nèi)液真空干燥,得人參糖 蛋白。
[0013] (2)分別將人參糖蛋白粉末和微晶纖維素過(guò)150目藥篩,加入潤(rùn)濕劑并充分混合攪 拌,制成軟材,經(jīng)內(nèi)徑為〇.2mm的篩板擠出機(jī)篩板擠成均勻的藥條,立即分次置于擠出滾圓 機(jī)內(nèi),調(diào)節(jié)滾圓時(shí)間和滾圓轉(zhuǎn)速,將制得的微粒過(guò)80目-120目的藥篩,于50°C干燥5h后,將 微粒進(jìn)行流化床包衣,得人參糖蛋白腸溶微丸。
[0014] 二、人參糖蛋白腸溶微丸理化性質(zhì)分析
[0015] 1、微丸直徑分布范圍
[0016] 取制得的腸溶微丸適量,加入0.01M的鹽酸溶液,震搖,充分混勻。以LS-13320MW激 光粒度分析儀(Beckman-Coulter)測(cè)定,得粒徑分布范圍。平均粒徑和跨距分別為:170μηι和 6.5um〇
[0017] 2.在人工胃液和人工腸液中的溶解性能
[0018] 取腸溶微丸20mg,置100ml量瓶中,加人工腸液至刻度,搖勻,即得樣品人工腸液溶 液(每一毫升中含腸溶微丸200ug)。觀察微丸溶解情況和立刻離心后測(cè)定上清溶液在280nm 處的吸收度(以人工腸液為空白),并每隔30分鐘測(cè)定一次。另取腸溶微丸20mg,置100ml量 瓶中,加人工胃液至刻度,搖勻,即得樣品溶液(每一毫升中含腸溶微丸200ug)。觀察微丸溶 解情況和離心后立刻測(cè)定上清溶液在280nm處的吸收度(以人工胃液為空白),并每隔30分 鐘測(cè)定一次。結(jié)果如表1
[0019] 表1腸溶微丸在不同溶液中的溶解時(shí)間
[0020]
[0021] 表1的結(jié)果表明,腸溶微丸在人工腸液中釋放度良好;腸溶微丸在人工胃液中未見(jiàn) 溶解,直至過(guò)夜,溶液仍為混懸液。吸收度測(cè)定結(jié)果表明,腸溶微丸在人工腸液中基本全部 釋放,表明該微丸在腸道中釋放良好;在人工胃液中除極少量未包裹完全的人參糖蛋白迅 速釋放外,絕大部分被包裹,在胃中釋放緩慢。
[0022] 三、人參糖蛋白腸溶微丸鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用實(shí)驗(yàn)
[0023]本發(fā)明的人參糖蛋白腸溶微丸在鎮(zhèn)痛作用方面進(jìn)行了對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng) 的影響和對(duì)福爾馬林所致小鼠疼痛的影響,在鎮(zhèn)靜作用方面進(jìn)行了對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影 響。
[0024] 1.鎮(zhèn)痛作用研究
[0025] (1)對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響
[0026] 取雄性小鼠 60只,隨機(jī)分為對(duì)照組,0 · lml/kg陽(yáng)性藥組。300、200、100mg/kg為人參 糖蛋白腸溶微丸口服給藥和600mg/kg人參糖蛋白口服給藥6個(gè)給藥組,于口服給藥45min 后,腹腔注射(ip)0.9%醋酸0.2ml/只,記錄其15min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0027] (2)對(duì)福爾馬林所致小鼠疼痛的影響
[0028] 取雄性小鼠 60只,隨機(jī)分為對(duì)照組,0 · lml/kg陽(yáng)性藥組,300、200、100mg/kg人參糖 蛋白腸溶微丸口服給藥和600mg/kg人參糖蛋白口服給藥6個(gè)給藥組,于口服給藥45min后, 于小鼠右后足腱膜下注入4%福爾馬林ΙΟμΙ/只,記錄其2min內(nèi)及10-20min小鼠舔后右足的 次數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0029]表1. 口服給予人參糖蛋白腸溶微丸和人參糖蛋白對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用 [0030]
[0031 ]表1結(jié)果表明,人參糖蛋白腸溶微丸既對(duì)醋酸引起的臟腑疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用, 還對(duì)致炎劑福爾馬林導(dǎo)致炎癥所致的疼痛也有顯著的鎮(zhèn)痛作用,其作用與安痛定相當(dāng)。而 人參糖蛋白鎮(zhèn)痛作用不明顯。
[0032]人參糖蛋白腸溶微丸既對(duì)醋酸引起的臟腑疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用,還對(duì)致炎劑福 爾馬林導(dǎo)致炎癥所致的疼痛也有顯著的鎮(zhèn)痛作用。說(shuō)明其為外周鎮(zhèn)痛作用。
[0033] 2.鎮(zhèn)靜作用研究
[0034] (1)對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響
[0035] 取小鼠30只,將小鼠隨機(jī)分為3組,每組10只,人參糖蛋白腸溶微丸口服給藥劑量 為300mg/kg和人參糖蛋白口服給藥劑量為600mg/kg,口服給藥3次,每次間隔12h,每次給藥 45min后置于自主活動(dòng)記錄儀中,使其適應(yīng)5min后開(kāi)始記錄隨后lmin內(nèi)的活動(dòng)次數(shù)。見(jiàn)表2。
[0036] 自主活動(dòng)抑制率(% )=(空白組活動(dòng)次數(shù)-藥物組活動(dòng)次數(shù))/空白組活動(dòng)次數(shù)X 100%〇
[0037] 表2. 口服給予人參糖蛋白腸溶微丸和人參糖蛋白對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響
[0038]
[0039] 從表2可見(jiàn),口服給藥人參糖蛋白腸溶微丸可顯著減少小鼠自主活動(dòng)次數(shù),證明人 參糖蛋白腸溶微丸具有對(duì)中樞有一定的抑制作用。而人參糖蛋白對(duì)小鼠自主活動(dòng)影響不顯 著(ρ>0·5)〇
[0040]本發(fā)明是通過(guò)如下的實(shí)施例得以實(shí)現(xiàn)的,但本發(fā)明不受實(shí)施例的任何限制。
[0041 ] 實(shí)施例1(膠囊劑)
[0042] (1)取人參5kg,加80 %乙醇回流提取2次,每次1小時(shí),濾過(guò),藥渣加水10倍量,加熱 提取2次,每次1.5小時(shí),濾過(guò),合并濾液,濃縮至10,000ml,超濾(中空纖維柱,截留分子量 3k),超濾液濃縮至500ml,透析(截留分子量為1K),透析內(nèi)液真空干燥,得人參糖蛋白。 [0043] (2)分別將人參糖蛋白粉末和微晶纖維素過(guò)150目藥篩,加入90%乙醇作為潤(rùn)濕劑 并充分混合攪拌,制成軟材,經(jīng)擠出機(jī)篩板(篩板內(nèi)徑0.2mm)擠成均勻的藥條,立即分次置 于擠出滾圓機(jī)內(nèi),根據(jù)軟硬度及濕粘性調(diào)節(jié)滾圓時(shí)間和滾圓轉(zhuǎn)速,將制得的微粒過(guò)80目-120目的藥篩,于50°C干燥5h后,然后將微粒進(jìn)行流化床包衣,以丙烯酸樹(shù)脂水分散體為腸 溶包衣材料,包衣制備腸溶微丸。
[0044] (3)取人參糖蛋白腸溶微丸100g,藥用淀粉適量,混合均勻,裝入1號(hào)膠囊,制成 1000粒,即得。每次3粒、每日2次。
[0045] 實(shí)施例2(片劑)
[0046]根據(jù)實(shí)施例1,取人參糖蛋白腸溶微丸100g,藥用淀粉適量,糊精適量,混合均勻, 制粒,干燥,整粒,干燥,加入潤(rùn)滑劑適量,壓片,制成1000片,即得。每次3片、每日2次。
[0047] 實(shí)施例3 (散劑)
[0048]根據(jù)實(shí)施例1,取人參糖蛋白腸溶微丸300g,蔗糖適量,混合均勻,包裝,制成1000 袋,每次1袋,一日2次。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 腸溶人參糖蛋白微丸在制備鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途,其特征在于所述的腸溶人參糖蛋白微丸制備方法為: (1) 取人參5kg,加80%乙醇回流提取2次,每次1小時(shí),濾過(guò),藥渣加水10倍量,加熱提取 2次,每次1.5小時(shí),濾過(guò),合并濾液,濃縮至10,000ml,利用截留分子量3k中空纖維柱超濾, 超濾液濃縮至500ml,通過(guò)截留分子量為lk的透析袋透析,透析內(nèi)液真空干燥,得人參糖蛋 白; (2) 分別將人參糖蛋白凍干粉和微晶纖維素過(guò)150目藥篩,加入潤(rùn)濕劑并充分混合攪 拌,制成軟材,經(jīng)內(nèi)徑為〇.2mm的篩板擠出機(jī)篩板擠成均勻的藥條,立即分次置于擠出滾圓 機(jī)內(nèi),調(diào)節(jié)滾圓時(shí)間和滾圓轉(zhuǎn)速,將制得的微粒過(guò)80目-120目的藥篩,于50°C干燥5h后,將 微粒進(jìn)行流化床包腸溶衣,得人參糖蛋白腸溶微丸。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的腸溶微丸,其特征在于含有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜有效治療劑量的人參糖 蛋白腸溶微丸以及一種或多種藥學(xué)上可接受的藥用賦形劑。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK105833246SQ201610344500
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年5月23日
【發(fā)明人】陳英紅, 王穎, 姜瑞芝, 羅浩銘
【申請(qǐng)人】吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院