一種紅花石蒜總堿的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體設(shè)及一種紅花石蒜總堿的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物堿是自然界中廣泛存在的一大類堿性含氮化合物，是許多中草藥的有效成 分，是自然界中存在的一類重要物質(zhì)。石蒜別名老鴉蒜、蒜頭草、蜂卿花，來源為石蒜科植物 石蒜Lycorisradiata化.Her.化erb的鱗莖，其性溫、味辛甘、有毒，具有消腫，解毒，催吐的 功效。研究表明，石蒜總生物堿是其主要有效部位，從石蒜的不同部位分離得到了化學(xué)成分 含石蒜堿（lycorine)、加蘭他敏（galanthamine)、石蒜胺堿（lycora-mine)、石蒜倫堿 化ycorenine)、多花水仙堿（Tazettine)、偽石蒜堿（Pseudolycorine)、二氨石蒜堿 (dihy化olycorine)等，臨床主要用于療瘡腫毒、食物中毒、疲誕奎塞、黃痘、水腫腹水等的 治療。
[0003] 紅花石蒜(Xycorisradiata var .radiata)是石蒜的一個(gè)變種?，F(xiàn)階段，中藥生物 堿的提取工藝已較成熟，但運(yùn)些方法步驟繁瑣、有機(jī)溶劑用量大并且大設(shè)備無法實(shí)現(xiàn)，不能 在大生產(chǎn)中應(yīng)用。
[0004] 紅花石蒜總堿在治療慢性附睪炎藥物的制備中的應(yīng)用也未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的旨在提供一種操作簡單，設(shè)備要求不高的紅花石蒜總堿的制備方 法。
[0006] 本發(fā)明的另一目的是提供紅花石蒜總堿在制備慢性附睪炎藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的一種紅花石蒜總堿的制備方法，包括W下工藝步驟：
[000引步驟①:將紅花石蒜藥材粉碎成粗粉后用乙醇回流提取1-3次，合并兩次提取液后 用紗布過濾除去沉淀，將過濾后的上清液減壓濃縮得到流浸膏；
[0009] 步驟②:將步驟①中的流浸膏用去離子水混懸分散后用石油酸萃取脫脂3-5次，萃 取之后的水層再使用二氯甲燒萃取3-5次，將最后留下的水層用紗布過濾，棄掉濾液并保留 濾渣；
[0010] 步驟③:將步驟②中的濾渣用乙醇混懸分散，攬拌后用濾紙過濾并棄去濾液保留 濾渣，重復(fù)上述操作2-4次最終得到紅花石蒜總堿粗品；
[0011] 步驟④:將步驟③中的紅花石蒜總堿粗品用去離子水混懸，煮沸溶解后用濾膜過 濾并收集濾液，將所述濾液減壓濃縮至小體積后放置室溫下析出粉末，之后再用去離子水 淋洗，抽干，減壓干燥至恒重即為紅花石蒜總堿。
[0012] 所述步驟①和步驟③中的乙醇濃度為75%。
[0013] 所述步驟①中第一次回流提取時(shí)紅花石蒜藥材粗粉與乙醇的投料比為1:10~1: 14(w/v)，第二次回流提取時(shí)紅花石蒜藥材粗粉與乙醇的投料比為1:8~1:12(w/v)。
[0014] 所述步驟①中兩次回流提取時(shí)間分別為120~240分鐘。
[0015] 所述步驟③中濾渣用乙醇混懸分散時(shí)每lOg濾渣加75%乙醇10ml~30ml;
[0016] 所述步驟④中紅花石蒜總堿粗品用去離子水混懸時(shí)，每lOg紅花石蒜總堿粗品加 水3500~4500ml。
[0017] 所述步驟④中的濾膜孔徑為0.45WI1。
[0018] 所述步驟④中濾液減壓濃縮至小體積時(shí)，每lOg紅花石蒜總堿保留80~120ml溶 液。
[0019] 所述步驟④中減壓干燥具體為60°C溫度減壓干燥24小時(shí)。
[0020] 紅花石蒜總堿在治療慢性附睪炎的藥物制備中的應(yīng)用。
[0021 ]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0022] 1、本發(fā)明的一種紅花石蒜總堿的制備方法操作簡單，所需儀器設(shè)備要求不高，可 W用于大批量的提取紅花石蒜總堿。
[0023] 2、本發(fā)明的紅花石蒜總堿在制備慢性附睪炎藥物中的應(yīng)用，為中藥治療慢性附睪 炎提供了 一個(gè)新的有效途徑。
[0024] 3、本發(fā)明為紅花石蒜總堿進(jìn)一步的利用和開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[0025] 4、本發(fā)明為將來從紅花石蒜尋求治療附睪炎的藥物先導(dǎo)化合物提供了研究資料 和物質(zhì)基礎(chǔ)。
[00%] 5、本發(fā)明采用雄兔整體動(dòng)物模型做實(shí)驗(yàn)，證明了紅花石蒜生物總堿作為藥物成分 對附睪炎治療具有顯著效果。
【附圖說明】
[0027] 圖1為本發(fā)明的制備方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] W下結(jié)合附圖，對本發(fā)明的一種紅花石蒜總堿的制備方法及其應(yīng)用做進(jìn)一步的詳 細(xì)說明。
[0029] 如圖1所示，本發(fā)明的一種紅花石蒜總堿的制備方法，包括W下工藝步驟：
[0030] 步驟①:將紅花石蒜藥材1kg，粉碎成20目粗粉后用75%乙醇回流提取兩次，第一 次12倍量，第二次10倍量，每次180分鐘，合并兩次提取液后用紗布過濾除去沉淀，將過濾后 的上清液減壓濃縮得到流浸膏；
[0031] 步驟②:將步驟①中的流浸膏用200ml去離子水混懸分散后用石油酸萃取脫脂4次 (每次200ml)，萃取之后的水層再使用二氯甲燒萃取4次(每次200ml)，將最后留下的水層用 紗布過濾，棄掉濾液并保留濾渣；
[0032] 步驟③:將步驟②中的濾渣用75%乙醇混懸分散(每lOg濾渣加75%乙醇20ml)攬 拌后用濾紙過濾并棄去濾液保留濾渣，重復(fù)上述操作3次最終得到紅花石蒜總堿粗品；
[0033] 步驟④:將步驟③中的紅花石蒜總堿粗品用去離子水混懸（每lOg總堿粗品加水 4000ml )，煮沸溶解后用0.45皿濾膜過濾并收集濾液，將濾液減壓濃縮至小體積(每lOg總堿 保留100ml溶液)后放置室溫下析出黃色粉末，之后再用去離子水淋洗，抽干，60°C溫度減壓 干燥24小時(shí)至恒重即為紅花石蒜總堿。
[0034] 紅花石蒜總堿在治療慢性附睪炎的藥物制備中的應(yīng)用，具體實(shí)驗(yàn)方案如下：
[0035] -、方法
[0036] 新西蘭雄性白兔40只，隨機(jī)分為4組，每組10只。分別為對照組，空白組，生物堿組， 西藥組。對照組不予造模，另外3組用同樣方法實(shí)施造模。造模方法:40只實(shí)驗(yàn)兔術(shù)前禁食化 W上，稱重后，3%戊己比妥鋼Iml/kg，耳緣靜脈注射，麻醉成功后，仰邸位固定于兔鼠解剖 臺(tái)上，手術(shù)野常規(guī)剪毛，8%硫化鋼稱毛，艦伏消毒皮膚，充分暴露雄兔兩側(cè)陰囊，取陰囊正 中切口，逐層分離組織直至睪丸銷膜臟層后，即可提出睪丸，在睪丸下極可找到附睪尾部， 左手固定附睪尾部，右手持注射器，將注射器針頭朝與附睪管約45°方向，斜向刺入附睪，直 至針尖有落空感后，邊向外抽拉針尖，邊注入用注射器注入冰乙酸0.2ml，注射完畢后，按壓 注射部位片刻。在保證飲水條件下，普通塊狀飼料喂養(yǎng)。按照原分組情況分別放回籠中。麻 醉失效后按常規(guī)飼養(yǎng)，觀察雄兔陰囊部傷口 3天。于造模后第3天后分別從每組中隨機(jī)抽取2 只雄兔，將8只雄兔空氣栓塞處死，做好標(biāo)記后快速解剖其附睪尾部，觀察其附睪尾部組織 的色澤、與周圍組織粘連情況，取出附睪尾部組織稱重后光鏡下觀察，并做病理切片，鑒定 慢性附睪炎雄兔模型造模是否成功。本試驗(yàn)中6只白兔均附睪尾部組織明顯增大，顏色相對 較暗，與周圍組織有輕度粘連，附睪腔內(nèi)組織充血水腫明顯，腔內(nèi)分泌物增多，部分組織纖 維化明顯，附睪管腔狹窄甚至閉塞，出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)，病理切片中可見較多炎癥細(xì)胞， 說明造模已成功。對照組2只雄兔附睪尾部組織呈淡紅色，與周圍組織無粘連，且未見明顯 炎癥反應(yīng)，病理切片中未見明顯炎癥細(xì)胞。
[0037] 二、給藥方法
[0038] 將生物堿、頭抱曲松粉末各lOOmg分別溶解于100ml蒸饋水，于造模后第5天開始，4 組按W下方法劑量分別給予灌藥：
[0039] (1)對照組:蒸饋水30ml/kg，連續(xù)灌胃4周；
[0040] (2)空白組:蒸饋水30ml/kg，連續(xù)灌胃4周；
[0041 ] (3)生物堿組:每天備生物堿溶液30ml/kg，連續(xù)灌胃4周；
[0042] (4)西藥抗生素組:每天予頭抱曲松粉碎調(diào)和溶液30ml/kg，連續(xù)灌胃4周；
[0043] Ξ、標(biāo)本采集與制備方法
[0044] 末次給藥后24h，稱雄兔體重，然后將所有雄兔行空氣栓塞處死，常規(guī)切開陰囊，分 別取出每只大雄兔睪尾部組織，按原來分組稱重后標(biāo)記，并觀察記錄四組附睪尾部的體積、 顏色、重量后，附睪尾部組織放入10%中性福爾馬林液，送病理科固定4她，逐級(jí)酒精脫水， 二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋，常規(guī)切片4um，皿染色，用普通光鏡觀察雄兔附睪尾部組織間 質(zhì)充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤、組織纖維化及上皮組織增生等形態(tài)學(xué)方面的病理學(xué)改變，兩側(cè) 附睪頭部和體部組織取下后放入1ml生理鹽水中，用剪刀剪碎使精子充分逸出，取一小滴置 于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，在顯微鏡下計(jì)數(shù)。W每ml稀釋液中的精子數(shù)量計(jì)數(shù)。精子活