一種組合物及其在抗病毒藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 單純瘤疹病毒1型Ofe巧essimplexvirus,服V-1)和單純瘤疹病毒2型Ofe巧es simplexvirus,服V-2)屬于瘤疹科病毒，服V-I和服V-2不僅引起口唇或生殖粘膜瘤疹，同 時(shí)也是引起腦炎、肝炎、全身嚴(yán)重感染甚至宮內(nèi)感染的重要病原。
[0003] 呼吸道合胞病毒巧espiratcxrySyn巧tialVirus,RSV)主要引起呼吸系統(tǒng)感染， 在嬰幼兒、老年W及免疫缺陷人群引起嚴(yán)重肺炎，是人類上呼吸道感染的重要病原之一。
[0004] 甲型流感病毒（InfluenzaAvirus,Flu-A)屬于正粘科病毒，在人類和其他生物 每年都有小范圍的流行，引起上呼吸系統(tǒng)感染。大流行時(shí)，可引起嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)感染，甚者 引起肺炎、腦炎甚至死亡。
[0005] 上述=種病毒的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問(wèn)題，從天然產(chǎn)物 中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物 最有重要價(jià)值。 |；0006] 本發(fā)明設(shè)及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表（AyumiOhsakietal. , 2011.SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfromSalviaprzewalskii. Tetr址e化onLetters52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾， 獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物HI和化合物IV，并用化合物HI和化合物IV制備了組合 物，并對(duì)該組合物抗病毒活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗病毒活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為15%和85%。
[0008]
[0009] 本發(fā)明公開(kāi)的組合物可W制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0010] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗病毒作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接 受的鹽具有同樣的藥效。
[0011] 組合物的體外實(shí)驗(yàn)表明，組合物具有很強(qiáng)的抗服V-1、服V-2、RSV和fluA的活性， 因此本發(fā)明的組合物有望被用于制備新型抗病毒藥物。
[0012] W下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加W限定。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1化合物SalviskinoneA的制備
[0014] 化合物SalviskinoneA(I)的制備方法參照Ayumi化saki等人發(fā)表的文獻(xiàn) (AyumiOhsakietal. , 2011.SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfrom Salviaprzewalskii.TetrahedronLetters52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0015]
[0016] 實(shí)施例2SalviskinoneA的0-漠乙基衍生物（II)的合成
[0017] 將化合物I(312mg，1.OOmmol)溶于15血苯，向溶液中加入四下基漠化錠燈BAB) (0. 08g)，1，2-二漠乙燒化760g，20.OOmmol)和6血的50 %氨氧化鋼溶液?；旌衔镌?5 攝氏度攬拌12h。1化之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲燒萃取兩次，合并有機(jī)相 溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗涂4次，再用無(wú)水硫酸鋼干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油酸/丙酬 =100:1.5,v/v)，收集棟色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棟色粉末（327mg， 78% )O
[0018] 咱NMR巧00MHz，DMS0-de) 5 6. 63(s, 1H)，6. 3^s, 1H)，5. 81(s, 1H)，4. 51(s，2H)，3. 84 (s,IH), 3. 79 (s, 2H), 2. 15 (s,IH), 2. 04 (s,IH) ,1-91 (s,IH),I. 65 (s,IH),I. 39 (s, 3H),I. 08(s，6H)，0. 99(s，6H).
[0019]"cNMR(125MHz,DMS0-d6) 5 188. 07 (S)，183. 70 (S)，154. 38 (S)，147. 57 (S)，140. 2 I(S)，136. 40 (S)，134. 71 (S)，131. 25 (S)，128. 40 (S)，118. 83 (S)，72. 12 (S)，45. 49 (S)，37. 5 4 (S)，33. 58 (S)，31. 78 (S)，26. 17 (S)，25. 12 (S)，24. 66 (S)，23. 51 (S)，23. 17 (S)，22. 65 (S).
[0020] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforCzzHzsBrCV419. 1222;found419. 1220.
[0021]
[0022]實(shí)施例3 Salviskinone A的0-(咪挫基）乙基衍生物（III)的合成 陽(yáng)02引將化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于30血乙臘當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鐘 (690mg，5. Ommol)，艦化鐘（252mg，1. 5mmol)和咪挫（870mg，IOmmol)，混合物加熱回流地。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入45mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水 和飽和食鹽水洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油酸/丙酬=100:0.2, v/v)，收集棟色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的淡棟色固體（144. Img, 71%)。
[0024]電NMR巧OOMHz, DMS0-d6) 5 7. 91(S,1H)，7. 16(S,1H)，6. 65化J = 103.細(xì)Z,2H)，6 .41(S,1H)，5. 76(S,1H)，4. 50(S,2H)，4. 39(S,2H)，3. 82(S,1H)，2. 05(S,1H)，1. 94(S,1H)，1 .87(S,1H)，1. 61(S,1H)，1. 30(S,3H)，0. 99(S, 6H)，0. 90(S, 6H). 陽(yáng)0巧]"C NMR (125MHz, DMS0-d6) 5 187. 81(S)，183. 33(S)，153. 90(S)，147. 28(S)，139.8I(S)，139. 19(S)，136. 14(S)，134. 34(S)，130. 77(S)，128. 43(S)，128.Ol(S),118. 85(S)，11 8. 53(S)，69. 03(S)，45. 02(S)，43. 70(S)，37. 46(S)，33. 09(S)，25. 87(S)，25. 06(S)，24. 29 ( s), 23. 03(S)，23. 05(S)，22. 41(S).
[0026] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C25H3抓03:407 . 2 3 3 5 ;found:407. 2331。
[0027]
[0028] 實(shí)施例4SalviskinoneA的0-(S挫基）乙基衍生物（IV)的合成
[0029] 將化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于20血乙臘當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鐘 (345mg，2.Smmol)，艦化鐘（84mg，0.Smmol)和 1, 2, 3-S氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加熱 回流4h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取3次，合并有機(jī)相。 依次用水和飽和食鹽水洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑 得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油酸/丙酬=100:0.5,v/v)， 收集黃色集中洗脫帶即得到化合物IV的黃色粉末（134. 3mg，66% )。
[0030]電NMR巧OOMHz,Chloroform-dl)5 8. 37 (S, 1H)，7. 95 (S, 1H)，6. 35 (S, 1H)，6. 14 (S, 1H)，5. 35 (S, 1H)，4. 13 (S, 1H)，4. 42(d,J=16. 4Hz, 3H)，3. 71 (S, 1H)，2. 13 (S, 1H)，2. 05 (S, IH)，I. 81(s, IH)，I. 63(s,IH)，I. 30(s,3H)，I. 08(s,6H)，0. 97(s,6H). 陽(yáng)的1]"CNMR(125MHz,DMS0-d6) 5 188. 09 (S), 183. 61 (S), 154. 18 (S), 147. 26 (S), 139. 7 2 (s), 136. 40 (s), 136. 32 (s), 134. 52 (s), 130. 95 (s), 127. 99 (s), 120. 16 (s), 118. 62 (s), 67 .14 (S)，46. 27 (S)，45. 18 (S)，37. 69 (S)，33. 32 (S)，26. 14 (S)，25.Ol(S)，24. 41 (S)，23. 23(s )，23. 06 (S)，22. 47 (S).
[0032] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdfor〔24&心3〇3:408. 2287 ;found:408. 2282。
[0033]
[0034] 實(shí)施例5組合物抗病毒活性
[0035] ( 一）實(shí)驗(yàn)例：組合物對(duì)瘤疹病毒的作用研究：
[0036] (1)細(xì)胞株與病毒株：
[0037] 人胚腎細(xì)胞（肥K293,為服V-1、服V-2病毒敏感細(xì)胞）購(gòu)自美國(guó)Clontech公司； 單純瘤疹病毒1型化SV-1)Sm44株、單純瘤癥病毒2型化SV-2) 333株引自中國(guó)CDC病毒病 研究所。 陽(yáng)〇3引 似細(xì)胞毒性測(cè)定：
[0039] 組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的15mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò) 200目網(wǎng)的85mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用滿輪攬拌儀混合即得到IOOmg組 合物，使用時(shí)用水溶解運(yùn)IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0040] 參照文獻(xiàn)（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對(duì)病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研 究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將各樣品W2倍比做系列稀釋 (2°一 5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的肥K293上，每孔100祉，每稀釋度縱向重 復(fù)3孔（A、B、C行），平行設(shè)微孔板D的1~6孔為細(xì)胞對(duì)照，7~12孔不接種細(xì)胞為空白 對(duì)照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續(xù)觀察7山中性紅染色，在540nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，將實(shí)驗(yàn)組 與細(xì)胞對(duì)照組OD值相比計(jì)算細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計(jì)算藥物半數(shù)細(xì)胞中毒濃度 (TDso)O 陽(yáng)OW (4)抑毒試驗(yàn)：
[0042] 參照文獻(xiàn)（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對(duì)病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研 究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將樣品按稀釋順序（2M)橫向 接種于96板孔中的單層細(xì)胞上，每孔IOOuL每稀釋度縱向重復(fù)4孔，微孔板的A、B、C行 加含100個(gè)TCI^。的病毒IOOuL作為試驗(yàn)組，D行補(bǔ)充等容量細(xì)胞維持液為不同濃度藥物 對(duì)照，平行設(shè)F行作為病毒對(duì)照，E行的1~12作為細(xì)胞對(duì)照。37°C、5%C〇2培養(yǎng)，每日觀