夏天無總生物堿精制物、制備方法、藥物組合物及應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及夏天無總生物堿精制物、制備方法、藥物組合物及應用。
【背景技術(shù)】
[0002]夏天無是S粟科紫堇屬植物伏生紫堇Corydalis decumbens (Thunb.) Pers.的干燥塊莖或全草，是我國常用中草藥，具活血、通絡、行氣、止痛等功效。主治高血壓、腦血管引起的中風偏癱，并對風濕性關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛、小兒麻痹后遺癥等有較好的作用。其主要有效成分為異喹啉類總生物堿。文獻資料顯示從夏天無中已分離得到30多個異喹啉類生物堿，主要含原阿片堿(protopine)、延胡索乙素(tetrahydropalmatine)、畢扣扣靈(bicuculline)、巴馬汀(palmatine)、藥根堿等生物堿。
[0003]目前，夏天無總堿常用的提取和精制方法有水提醇沉、滲漉、醇提、酸堿法。隨著現(xiàn)代制劑技術(shù)的應用，大孔吸附樹脂、超聲、超濾膜分離、超臨界C02萃取等方法也逐漸應用于夏天無總堿的提取和精制。馬宏達等研究了超臨界C02萃取法提取夏天無中總生物堿的工藝條件。以萃取壓力、萃取溫度和萃取時間為考察因素，以夏天無總生物堿、原阿片堿、延胡索乙素含量的綜合評分及干膏率為評價指標，采用正交試驗優(yōu)選最佳工藝條件。結(jié)果:最佳工藝條件為萃取壓力30MPa，萃取溫度55°C，萃取時間2.5h。提取物中總生物堿含量約為67%，原阿片堿含量約為17%，延胡索乙素含量約為10%。(馬宏達，安曄，郭濤等。超臨界0)2萃取法提取夏天無總生物堿工藝研究[J].中國藥房，2010,21(47) =4456-4458)朱才慶等采用截留相對分子質(zhì)量為6X103?1.0X104的超濾膜制備的夏天無注射液澄清、色澤好，顯示出更強的藥效作用。朱才慶，余華，范其坤，等.超濾膜純化夏天無總堿的研究.中草藥，2005，36 (9): 1319-1325.
[0004]CN 101058576發(fā)明公開了一種夏天無總生物堿提取物及其制備方法，其制備方法是以夏天無為原料，利用超臨界C02流體萃取條件進行提取，收集萃取物，干燥得夏天無總堿提取物。應用本法提取的夏天無總生物堿平均含量采用UV法測定為90%，其中總生物堿主要包括原阿片堿、延胡索乙素、畢扣扣靈、鹽酸巴馬汀、紫堇爾明、夏無寧堿及其他生物堿，六個主堿的含量占提取物的75%?90%。
[0005]CN 101623332中本發(fā)明公開了一種夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，以夏天無超臨界C02總生物堿提取物為原材料，加酸水溶液使其溶解，得夏天無總生物堿的酸水溶液；濾過或離心后濾過，將澄清溶液冷凍干燥，即得夏天無總生物堿酸鹽凍干物。
[0006]上述兩個專利均提供了一種制備夏天無總生物堿的方法，但是都有不足之處。CN101058576僅提供了夏天無超臨界提取夏天無總生物的方法，制備所得提取物含有油脂類成分，難于干燥，阻礙了其后續(xù)的開發(fā)應用，且對萃取時間和C(V流速進行了限制，難以應用到工業(yè)化生產(chǎn)。
[0007]CN 101623332 B專利在CN 101058576 B基礎(chǔ)上以夏天無超臨界提取的夏天無總生物堿粗提物為原料通過酸溶液處理后冷凍干燥制備總生物堿酸鹽凍干物的方法，制備所得的凍干物總生物堿的含量在80%以上。該專利對夏天無總生物堿的富集、純化沒有做更進一步的研究，制得的夏天無提取物純度不夠高，限制了夏天無總生物堿的應用范圍。
[0008]夏天無總生物堿制劑臨床主要用于治療老年癡呆，腦梗死，中小學生假性近視等，有很大的市場前景，但是目前的夏天無總生物堿的提取分離技術(shù)多采用酸提過樹脂柱法，工藝繁雜，耗時長，得到的總生物堿的純度不高的缺點。因此，尋找工藝簡單、提取率高、提取到的夏天無總生物堿的純度好、適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的提取方法是目前急需解決的技術(shù)難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有夏天無總生物堿提取方法步驟繁瑣、提取率低、提取得到的提取物純度低，雜質(zhì)含量高，不適合藥用、不適合于工業(yè)化生產(chǎn)等缺陷，而提供了一種夏天無總生物堿精制物、制備方法、藥物組合物及應用。本發(fā)明建立了更科學高效的高純度的夏天無總生物堿提取方法，該方法高效、簡便易行，制備的夏天無總生物堿的HPLC純度大于98%，能更安全有效的發(fā)揮夏天無總生物堿的藥理藥效。
[0010]本發(fā)明提供了一種夏天無總生物堿精制物，其中，總生物堿精制物中各組分的重量百分比分別為:原阿片堿:15%?40% ;延胡索乙素:10%?40% ;畢扣扣靈:0?10%(不包括0);鹽酸巴馬汀:0.01%?2%;紫堇爾明:2%?10% ;夏無寧堿:15%?30% ;其他生物堿及提取物:1 %?5 %。
[0011]本發(fā)明中，所述的夏天無總生物堿精制物，采用HPLC法測定，總生物堿含量為60 %?100 %，其中，六個主堿總含量占夏天無總生物堿精制物的95 %以上。
[0012]本發(fā)明還提供了所述的夏天無總生物堿精制物的制備方法，其包括以下步驟:
[0013]步驟1:以夏天無(罌粟科植物伏生紫堇)的塊莖、粉碎、堿化，得到堿化后的夏天無；所述的堿化中，所述的堿與所述的夏天無的質(zhì)量比值為0.001?1，優(yōu)選0.001?0.1。
[0014]步驟2:將步驟1得到的堿化后的夏天無，在超臨界C02萃取和膜分離相耦合的萃取儀中進行萃取和分離，干燥，得到夏天無總生物堿精制物。
[0015]步驟1中，所述的粉碎，優(yōu)選粉碎至夏天無(罌粟科植物伏生紫堇)的粒徑為10目?60目(即1.74mm?0.273mm)。所述的堿化,優(yōu)選采用無機堿進行堿化,所述的無機堿優(yōu)選氨水溶液、氫氧化鈣、碳酸鈉和碳酸氫鈉中的一種或多種，進一步優(yōu)選氨水溶液，所述的氨水溶液的質(zhì)量濃度優(yōu)選1%?10%，所述的質(zhì)量濃度是指氨氣的質(zhì)量占氨水溶液總質(zhì)量的百分比。所述的氨水溶液可以采用氨水試劑與水混合得到，所述的氨水試劑與水的體積比優(yōu)選5%?10%，所述的體積比是指氨水試劑的體積與水體積的百分比。所述的氨水試劑可以為本領(lǐng)域中常規(guī)市售氨水試劑，所述的氨水試劑的濃度優(yōu)選2%?30%。所述的無機堿優(yōu)選以其水溶液的形式使用，所述的無機堿的水溶液的濃度優(yōu)選1%?10%，所述的濃度是指無機堿的質(zhì)量占無機堿的水溶液的總質(zhì)量的百分比。
[0016]步驟2中，所述的超臨界C02萃取和分離的時間優(yōu)選0.5?5h ;所述的超臨界C02萃取和分離時采用的夾帶劑優(yōu)選甲醇和/或乙醇，進一步優(yōu)選乙醇，所述的乙醇優(yōu)選質(zhì)量百分比為95%的乙醇水溶液，所述的質(zhì)量百分比是指乙醇的質(zhì)量占乙醇水溶液總質(zhì)量的百分比。所述的“超臨界C02萃取和膜分離相耦合的萃取儀”中的膜優(yōu)選超濾膜、納濾膜、反滲透膜或中空纖維膜，進一步優(yōu)選納濾膜；所述的納濾膜的孔徑優(yōu)選1納米?3納米。所述的超濾膜的孔徑優(yōu)選納米10納米?40納米。所述的反滲透膜的孔徑優(yōu)選1納米?5納米。所述的中空纖維膜的孔徑優(yōu)選1納米?40納米。
[0017]步驟2中，所述的超臨界C02萃取和膜分離相耦合的萃取儀根據(jù)《中藥提取分離新技術(shù)》一書(2010年4月，化學工業(yè)出版社出版，P353頁)中記載的原理圖進行組裝，所述的超臨界0)2萃取和膜分離相耦合的萃取儀包括以下部件:萃取裝置、分離裝置、高壓泵、膜裝置、冷卻器和氣體儲罐。
[0018]本發(fā)明中，所述的夏天無總生物堿精制物的制備方法優(yōu)選還包括步驟3，進一步優(yōu)選還包括步驟3和步驟4，再進一步優(yōu)選還包括步驟3、步驟4和步驟5。
[0019]步驟3:將步驟2得到的夏天無總生物堿精制物調(diào)節(jié)pH至2?5，采用超聲波萃取，然后采用超濾或微濾膜過濾，得到純化后的夏天無總生物堿精制物的溶液。
[0020]步驟4:將步驟3得到的夏天無總生物堿精制物的溶液調(diào)節(jié)pH為8?12，過濾，固相用水洗至中性，得到進一步純化后的夏天無總生物堿精制物；