包含PI3Kβ抑制劑和RAF抑制劑以克服癌細胞抵抗的抗腫瘤組合物的制作方法
【專利說明】包含P13K13抑制劑和RAF抑制劑從克服癌細胞抵抗的抗腫 瘤組合物 陽001] 本發(fā)明設(shè)及用于治療抵抗至少一種RAF抑制劑的患者的PI3K0抑制劑與RAF抑 制劑的組合、其藥物用途W(wǎng)及當(dāng)給藥至患者時監(jiān)測所述組合功效的方法。
[0002] 憐酸肌醇3-激酶（P13K)是設(shè)及諸如細胞周期、細胞運動和細胞調(diào)亡等諸多細胞 功能的信號傳導(dǎo)分子。PI3K是產(chǎn)生活化若干祀蛋白的第二信使分子的脂質(zhì)激酶，其包括絲 氨酸/蘇氨酸激酶，例如PDKl和AKT(也稱為P邸）。PI3K分為S個種類且種類I包含稱為 PI3Ka、PI3K0(PI3Ke)、PI3K5 和PI3K丫的四種不同PI3K。 陽00引 2-{2-[牌)-2-甲基-2, 3-二氨-IH-日引噪-1-基]-2-氧代乙基}-6-(嗎 嘟-4-基）喀晚-4(3H)-酬（下稱化合物（I))是PI3K0同工型的一種選擇性抑制劑。在 使用此化合物處理之后，具有活化PI3K/AKT通道的癌細胞（例如缺失PTEN的腫瘤細胞 (憐酸酶及張力蛋白同源基因，還被認為是在多種晚期癌癥基因1中突變的憐酸酶及張力 蛋白同源體））通常經(jīng)由抑制AktW及Akt下游效應(yīng)子的憐酸化、抑制腫瘤細胞增殖和腫 瘤細胞死亡誘導(dǎo)來產(chǎn)生應(yīng)答。若干研究顯示PI3K0同工型是設(shè)及PTEN-缺失腫瘤的致腫 瘤性的PI3K同工型（V.Cedal等人，J.Med.Chem. 2012, 55,4788-4805 和V.Cedal等人， Bioo;rganics&MedicinalQiemistryLetters，22,（2012)6381-6384 ;V.Ce;rtal等人，JMed Chem. 57(2014) :903-20)。
[0004] RAF激酶參與RAS-RAF-MEK-E服信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)，其還稱作絲裂原活化蛋白激酶 (MPK)級聯(lián)。RAF激酶家族的S個成員是A-RAF、B-RAF和C-RAF。使用RAF激酶抑制劑處 理的癌細胞通常經(jīng)由抑制MEK和E服的憐酸化、下調(diào)細胞周期蛋白D、誘導(dǎo)Gl停止來產(chǎn)生應(yīng) 答，且最終發(fā)生細胞調(diào)亡。因此，RAF已成為極受關(guān)注的用于研發(fā)癌癥療法的祀點。 W化]1-丙烷橫酷胺，N-巧-[[5-(4-氯苯基）-IH-化咯并巧，3-b]化晚-3-基]幾 基]-2, 4-二氣苯基](下稱化合物（II)是RAF激酶的抑制劑。此化合物（下稱化合物 (II)，還稱為PLX-4032或威羅菲尼（Vemurafenib))是可口服利用的小分子，其經(jīng)研發(fā)用于 治療具有活化BRAF突變的癌癥。更具體地，其針對具有BRAFV600E突變的黑素瘤細胞系 具有明顯抗腫瘤效應(yīng)，但針對具有野生型BRAF并非如此。具有BRAFV600E突變的黑素瘤 代表超過50%的黑素瘤。它們結(jié)構(gòu)性活化絲裂原活化蛋白激酶（MAPK)通路，促進細胞增殖 并預(yù)防調(diào)亡。
[0006] 在一項近期的威羅菲尼I期臨床試驗中，81%的具有BRAF突變黑素瘤的患者通過 實體瘤治療響應(yīng)評價標(biāo)準(zhǔn)巧esponse Evaluation Criteria in Solid Tumors) (RECIST) 確認經(jīng)歷了至少30%的腫瘤收縮，并且在兩名患者中具有完全響應(yīng)（FI址erty KT等人， N.化gl J Med363:809-819,2010)。
[0007] 然而，盡管存在此類有希望的響應(yīng)，但已出現(xiàn)了威羅菲尼抵抗。
[0008] 藥物抗性是癌癥化療失敗的主要原因?？剐钥蔀橄惹按嬖诘模ü逃锌剐裕┗蛴伤?物誘導(dǎo)的（獲得性抗性）。獲得性抗性出現(xiàn)在對于治療的瞬態(tài)響應(yīng)后，其通常復(fù)發(fā)。對于祀 向激酶抑制劑的獲得性抗性的基因機制通常是影響祀向激酶的突變或祀向信號通路內(nèi)可 補償或旁路祀向腫瘤蛋白抑制的其它基因的改變。
[0009] 已研究了癌細胞對于RAF抑制劑的固有抗性。據(jù)顯示，雖然PTEN表達狀態(tài)不能 預(yù)測對于威羅菲尼生長抑制效應(yīng)的敏感性，但PTEN缺失/BRAF突變黑素瘤細胞系相比于 表達PTEN的細胞系顯示出顯著更少的調(diào)亡化imH.T.Paraiso等人，CancerRes. 2011; 71:2750-2760)。BRAF突變和PTEN表達沉默的共同出現(xiàn)在人類黑素瘤中相對常見（約 20-30% )O
[0010] 然而，RAF抑制劑抵抗中設(shè)及若干機制。事實上，一些BRAF突變/PTEN缺失黑素 瘤細胞系對于RAF抑制劑敏感而一些其它細胞系對RAF抑制劑不敏感。
[0011] 造成對威羅菲尼固有抗性或獲得性抗性的機制仍在研究之中。
[0012] 現(xiàn)有數(shù)據(jù)顯示MAPK通路的再活化通過出現(xiàn)BRAF的截短過活形式，NRAS(成神經(jīng) 細胞瘤RAS病毒致癌基因同源物）或MEK中的繼發(fā)突變。例如，已確認了在相應(yīng)預(yù)治療腫 瘤中不存在的在下游激酶MEKl中密碼子1221處的活化突變。所述MEKl"2"突變顯示出 在體外增加激酶活性并賦予對于RAF抑制的強力抵抗（Ni化ilWagle等人，JClin化COl 29:3085-3096, 2011)。雖然MAPK再活化出現(xiàn)在許多復(fù)發(fā)病例中，但增加的PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 出現(xiàn)在其它病例中。
[0013] 此外，已描述了在抵抗RAF或MEK抑制劑的黑素瘤中，采用RAF或MEK抑制劑治療 后TORCl(TOR復(fù)合體1)活性仍然維持，盡管在一些情況下強烈抑制了MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。如 通過減少的pS6 (核糖體蛋白S6,當(dāng)憐酸化時還稱作pS6)所測量的響應(yīng)RAF或MEK抑制劑 的TORCl抑制可有效預(yù)測BRAF突變黑素瘤細胞中通過RAF抑制劑誘導(dǎo)的細胞死亡。
[0014] 在體內(nèi)小鼠模型中，MAPK抑制后的TORCl活性抑制對于調(diào)亡誘導(dǎo)和腫瘤響應(yīng)而 言是必需的。在治療之前和啟動RAF抑制療法之后獲得自具有BRAF突變黑素瘤的患者的 成對活檢中，pS6抑制預(yù)測了顯著改善的無進展生存期（PFS)。可通過連續(xù)細針穿刺活檢 實時監(jiān)測此pS6變化，量化pS6成為有價值的生物標(biāo)記W指導(dǎo)BRAF突變黑素瘤治療（Ryan B.Corcoran等人，Sci.Transl.Med. 5:196ra98, 2013)。
[0015] 因此，存在對于癌癥治療，特別是黑素瘤治療的需求，其克服對于RAF抑制劑的抵 抗。還存在提供癌癥例如黑素瘤的治療的需求，所述治療更有效地抑制腫瘤細胞增殖并增 強腫瘤細胞調(diào)亡。還存在最小化對于患者的毒性的需求。
[0016] 特別需要與其它祀向療法組合使用的RAF抑制劑療法，其會導(dǎo)致更高效率且不會 實質(zhì)上增加，或甚至維持或降低通常使用的RAF抑制劑的劑量。
[0017] 還存在提供生物標(biāo)記W監(jiān)測癌癥治療功效的需求。
[0018] 本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供針對具有抵抗至少一種RAF抑制劑的癌細胞的患者的 治療。
[0019] 本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供針對具有抵抗至少一種RAF抑制劑的癌細胞的患者的 治療，其克服了對所述至少一種RAF抑制劑的抵抗。
[0020] 本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供一種組合，其用于治療具有抵抗至少一種RAF抑制劑的 癌細胞的患者。
[0021] 本發(fā)明的一個進一步目標(biāo)是提供一種試劑盒W治療具有抵抗至少一種RAF抑制 劑的癌細胞的患者。
[0022] 本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供一種藥物W治療具有抵抗至少一種RAF抑制劑的癌細 胞的患者。
[0023] 本發(fā)明的另一目標(biāo)是提供一種治療具有抵抗至少一種RAF抑制劑的癌細胞的患 者的方法。
[0024] 本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供一種生物標(biāo)記W及監(jiān)測治療具有抵抗至少一種RAF抑 制劑的癌細胞的患者的功效的方法。
[00巧]因此，本發(fā)明設(shè)及PI3K0抑制劑與RAF抑制劑的組合，其用于治療具有抵抗至少 一種RAF抑制劑的癌細胞的患者。
[00%] 本發(fā)明還設(shè)及包含用于其如上所述用途的上述組合的試劑盒，用于同時、分開或 相繼給藥。
[0027] 本發(fā)明還設(shè)及包含本發(fā)明所述組合的藥物組合物，其用于治療具有抵抗至少一種 RAF抑制劑的癌細胞的患者。
[0028] 本發(fā)明還設(shè)及一種治療方法，其包括給藥上述組合至具有抵抗至少一種RAF抑制 劑的癌細胞的患者。
[0029] 本發(fā)明還設(shè)及生物標(biāo)記W及使用所述生物標(biāo)記W監(jiān)測當(dāng)給藥至具有抵抗至少一 種RAF抑制劑的癌細胞的患者時如上所述組合的功效的方法。
[0030] 令人驚奇地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)RAF抑制劑連同PI3K0抑制劑的組合克服了癌細胞對至 少一種RAF抑制劑的抵抗，特別是在RAF抑制劑抵抗性黑素瘤細胞中，例如對至少一種RAF 抑制劑不敏感的人黑素瘤A2058細胞系。
[0031] 甚至更驚奇地，如上定義的組合顯示出對抵抗至少一種RAF抑制劑的細胞系的協(xié) 同效應(yīng)。
[0032] 在一個實施方案中，協(xié)同效應(yīng)理解為組合的效應(yīng)大于其個體組分的預(yù)期加 和效應(yīng)。更特別地，可通過如R. Straetemans中所述的射線方法設(shè)計測定協(xié)同效應(yīng) 度iometrical Journal,47,2005,299-308)。
[0033] 在另一實施方案中，協(xié)同效應(yīng)還可理解為組合的效應(yīng)大于兩個個體組分中的一個 的最佳效應(yīng)。
[0034] 在另一實施方案中，可根據(jù)T.H. CORBETT等人，定義協(xié)同為：若組合在治療上優(yōu) 于W其最優(yōu)劑量使用的一種或另一種組分，則所述組合顯示治療協(xié)同化H. COR邸TT等人， Cancer Treatment Reports,66,1187(1982))。根據(jù)此定義，為證明組合的功效，可能需要 比較所考慮研究中的組合的最大耐受劑量與各單獨成分的最大耐受劑量。此功效的量化可 通過例如計算logi。細胞殺滅或任意其它已知方法。
[0035] 在一個實施方案中，關(guān)于W下效應(yīng)中的一項可獲得根據(jù)本發(fā)明的協(xié)同：
[0036] -抗增殖活性訊/或
[0037] -促調(diào)亡活性。
[0038] 在一個實施方案中，關(guān)于S6憐酸化抑制可獲得增強效應(yīng)。"增強效應(yīng)"或"增強抑 審IJ"是指組合的抑制效應(yīng)大于兩個個體組分中的一個的最佳抑制效應(yīng)。
[0039] 在一個實施方案中，關(guān)于W下效應(yīng)中的一項可獲得根據(jù)本發(fā)明的協(xié)同： 柳4〇]-腫瘤生長抑制（腫瘤停滯）；和/或
[0041]-部分腫瘤消退訊/或；
[00創(chuàng)-完全腫瘤消退。
[0043] 可在對于至少一種RAF抑制劑敏感或具有抗性的細胞系中獲得此一或多個效應(yīng)。
[0044] 本發(fā)明的一個優(yōu)勢是提供了用于具有顯示RAF抑制劑抵抗的腫瘤（其治療可能性 很少）的患者的新療法。
[0045] 本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于由于如上所述的組合協(xié)同效應(yīng)，可需要更少的各活性成分 劑量W克服RAF抑制劑抵抗和/或可減小藥物毒性。
[0046] 在根據(jù)本發(fā)明各目標(biāo)的一個實施方案中，PI3K0抑制劑是對PI3K0呈現(xiàn)抑制 效應(yīng)的化合物。更具體地，它們通常對PI3K0呈現(xiàn)抑制效應(yīng)而對其它PI3K同工型（即 P13Ka、PI3K5和PI3K丫）具有適中的或無抑制效應(yīng)。
[0047] 在一個實施方案中，它們選擇性針對PI3K0同工型。"選擇性PI3K0抑制劑"可 理解為PI3K0抑制劑優(yōu)先于其它同工型P13Ka、PI3K5和PI3K丫而影響特定PI3K0同工 型的能力。PI3K0選擇性抑制劑可具有辨別運些同工型的能力，并從而實質(zhì)上影響PI3K0 同工型。在一個實施方案中，所述選擇性PI3K0抑制劑不是pan-PI3K抑制劑。此PI3K0 同工型選擇性相比于pan-PI3K抑制劑可呈現(xiàn)出更好的安全特性（safetyprofiles)。
[0048] 更特別地，在生化和細胞測定中，選擇性PI3K0抑制劑可祀向PI3K0同工 型