一種疫苗組合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種疫苗組合物，以及該組合物的制備方法和應(yīng)用，屬于獸用生物制 品領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬支原體肺炎（Mycoplasma pneumonia of swine，MPS)是由豬肺炎支原體 (Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)引起的一種慢性、接觸性傳染病，是一種重要的免疫抑 制性疾病，也是豬呼吸道疾病綜合征（Porcine respiratory disease complex, PRDC)的 重要病原之一。該病長(zhǎng)期危害養(yǎng)豬業(yè)，并廣泛分布于世界各國(guó)。該病主要危害育肥豬，尤其 是14~20周齡的豬生長(zhǎng)率降低，使其飼料轉(zhuǎn)化率降低，還可出現(xiàn)食欲減退、發(fā)熱、咳嗽、呼 吸困難等癥狀。
[0003] 副豬嗜血桿菌病是副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, Hps)引起的豬的多發(fā) 性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，該病又稱為豬革拉澤氏病（Glasser's Disease)。副豬嗜血桿菌主要 危害4到8周齡的斷奶仔豬，也可感染10日齡左右仔豬和4月齡的生長(zhǎng)育成豬。主要臨床 癥狀表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行和被毛粗亂；主要剖檢病變表現(xiàn)為纖維素性胸膜炎、 心包炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎等。此外副豬嗜血桿菌還可引起敗血癥，并且在急性感染 后可能留下后遺癥，即母豬流產(chǎn)、公豬慢性跛行。根據(jù)我國(guó)血清流行病學(xué)調(diào)查和分離菌株的 鑒定，以4、5型最為流行。近年來(lái)，由于我國(guó)目前飼養(yǎng)技術(shù)的調(diào)整進(jìn)行不當(dāng)，以及突發(fā)新的 呼吸道綜合征，使得該病日趨流行，危害日漸嚴(yán)重。
[0004] 單獨(dú)試驗(yàn)當(dāng)豬感染豬肺炎支原體后，僅出現(xiàn)咳嗽等癥狀的溫和型慢性肺炎，對(duì)生 產(chǎn)性能影響較輕微，容易被養(yǎng)殖者忽視；而當(dāng)與副豬嗜血桿菌等病菌混合感染時(shí)，可以引起 豬呼吸道綜合征和地方性肺炎，使呼吸道疾病加重。
[0005] 目前針對(duì)這兩種病原的混合感染的疫苗僅有豬肺炎支原體單苗和副豬嗜血桿菌 單苗。豬肺炎支原體單苗通常是在仔豬早期進(jìn)行免疫，7日齡首免，2~3周后二免。對(duì)于 副豬嗜血桿菌病防治，則使用副豬嗜血桿菌滅活疫苗分別在7日齡和21日齡免疫2次。盡 管如此，由于豬場(chǎng)仔豬普遍存在母源抗體的影響，造成單苗免疫效果不盡理想，常常造成免 疫失敗的情況出現(xiàn)。
[0006] 不僅如此，要預(yù)防Mhp和Hps混合感染，單苗至少需要免疫四針才能預(yù)防疾病，成 本較高，操作程序繁瑣，使感染的風(fēng)險(xiǎn)加大，引起豬群的應(yīng)激反應(yīng)加大，不同疫苗使用會(huì)造 成免疫干擾導(dǎo)致部分豬群免疫失敗等問(wèn)題。
[0007] 目前的技術(shù)無(wú)法實(shí)現(xiàn)一種疫苗免疫一針即可抵抗這兩種病原引起的混合感染，不 僅如此，聯(lián)合疫苗不僅方便、多效、低成本，與單一疫苗相比，還可以減少疫苗接種次數(shù)，避 免因漏種而不能得到全程免疫；另外，疫苗大多不耐熱，其生產(chǎn)、運(yùn)輸、存貯、銷售乃至全部 使用過(guò)程均需在較低溫度下進(jìn)行，即所謂的"冷鏈"，這種環(huán)環(huán)相扣的冷鏈運(yùn)作，費(fèi)用極高， 使疫苗成本居高不下，而使用聯(lián)合疫苗，則可以大大降低冷鏈運(yùn)作的費(fèi)用，因此具有顯著的 優(yōu)越性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明旨在提供一種疫苗，含有豬肺炎支原體、副豬嗜血 桿菌兩種抗原，免疫一針即可有效預(yù)防和控制由這兩種病原混合感染時(shí)造成的豬呼吸道綜 合征或地方性肺炎。
[0009] 本發(fā)明的主要目的是提供一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括：免疫量的 豬肺炎支原體抗原，免疫量的副豬嗜血桿菌抗原以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0010] 本發(fā)明中的疫苗組合物在對(duì)約3~10日齡的豬單劑有效量免疫時(shí)，不僅兩種抗原 之間無(wú)免疫干擾，而且可以抵抗母源抗體的干擾，有效的治療和預(yù)防兩種病原導(dǎo)致的癥狀。 [0011] 本發(fā)明所述的豬肺炎支原體抗原是指，包含至少一種在對(duì)豬給藥后能誘導(dǎo)、刺激 或增強(qiáng)抗豬肺炎支原體感染的免疫應(yīng)答的抗原的任何組合物。該組合物可以包含豬肺炎支 原體全細(xì)胞菌苗和一個(gè)或多個(gè)豬肺炎支原體衍生多肽或蛋白質(zhì)或者所述多肽或蛋白質(zhì)的 免疫原性片段，或編碼所述多肽、蛋白質(zhì)或免疫原性片段的一個(gè)或多個(gè)豬肺炎支原體基因， 所述基因或核酸能在體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。豬肺炎支原體疫苗中提供的豬肺炎支原體多肽、蛋白 質(zhì)及其免疫原性片段和基因或核酸可以用本領(lǐng)域公知技術(shù)來(lái)合成或重組制備。
[0012] 本發(fā)明所述的副豬嗜血桿菌抗原是指含有至少一種副豬嗜血桿菌抗原形式的任 何組合物，所述副豬嗜血桿菌抗原接種豬可誘導(dǎo)、刺激或增強(qiáng)抵抗副豬嗜血桿菌感染的免 疫應(yīng)答。副豬嗜血桿菌為包括本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的臨床分離的野毒株，包含目前已鑒定 的1~15個(gè)血清型。優(yōu)選地，所述副豬嗜血桿菌抗原是完整的副豬嗜血桿菌，優(yōu)選為滅活 形式，更優(yōu)選，所述副豬嗜血桿菌抗原是滅活的血清型為4型和5型的混合抗原；最優(yōu)選為 滅活的副豬嗜血桿菌血清4型JS株，和滅活的副豬嗜血桿菌血清5型ZJ株。
[0013] 優(yōu)選地，所述的豬肺炎支原體抗原包括滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的 豬肺炎支原體全支原體抗原，豬肺炎支原體亞單位抗原、合成肽抗原或基因工程抗原；以及 所述的副豬嗜血桿菌抗原包括滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的副豬嗜血桿菌全菌 抗原，副豬嗜血桿菌亞單位抗原、合成肽抗原或基因工程抗原。
[0014] 優(yōu)選地，所述豬肺炎支原體抗原是豬肺炎支原體全細(xì)胞菌苗，優(yōu)選滅活形式、改良 的活的形式或減毒形式的豬肺炎支原體細(xì)菌，含有至少豬肺炎支原體的免疫原性氨基酸序 列的嵌合病毒，任何其它含至少豬肺炎支原體的免疫原性氨基酸序列的多肽或成分。優(yōu)選 地豬肺炎支原體抗原是滅活形式的J株或HN0613株全細(xì)胞菌體。最優(yōu)選地，豬肺炎支原體 抗原是滅活形式的HN0613株全細(xì)胞菌體。
[0015] 所述的豬支原體肺炎抗原還可以包含以下疫苗組合物中的任一種抗原如勃林格 殷格翰公司的【HgelvaC? M. hyo ;哈藥集團(tuán)公司的瑞倍適Respisure和RespisureOne ;美 國(guó)先靈葆雅的Myco Silencer?;西班牙海博萊生物大藥廠的J株(喜可舒）；美國(guó)普泰克公 司的MycoGard;美國(guó)輝瑞公司的RespiFend MH;梅里亞動(dòng)物保健公司的豬克喘；南京天邦 生物科技有限公司的168株活疫苗。
[0016] 所述的副豬嗜血桿菌抗原可以包含以下組合物的抗原，如勃林格殷格翰公司的 Ingelvac HP-I ;海博萊公司（Hipra)的Hiprasuis-Glasser ;武漢科前動(dòng)物生物制品有限 責(zé)任公司的副豬嗜血桿菌滅活疫苗（4型MD0322株+5型SH0165株)。
[0017] 更優(yōu)選地，所述的豬肺炎支原體抗原為滅活的豬肺炎支原體HN0613株全支原體 抗原、所述的副豬嗜血桿菌抗原為滅活的副豬嗜血桿菌血清4型JS株和血清5型ZJ株全 菌抗原。
[0018] 所述豬肺炎支原體 HN0613 株（Mycoplasma hyopneumoniae Strain HN0613)， 已在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏日期：2012年6月13日，保藏號(hào)為CCTCC No. M2012230,保藏地址：中國(guó)武漢?武漢大學(xué)。
[0019] 所述的副豬嗜血桿菌血清 4 型 JS 株（Haemophilus Parasuis Serotype4Strain JS)保藏號(hào)為CCTCC No. M2011172 ;所述的副豬嗜血桿菌血清5型ZJ株（Haemophilus Parasuis Serotype5Strain ZJ)保藏號(hào)為CCTCC Ν〇·Μ2011173,均已在中國(guó)典型培養(yǎng)物保 藏中心保藏，保藏日期：2011年5月18日，保藏地址：中國(guó)武漢?武漢大學(xué)。
[0020] 優(yōu)選地，所述的豬肺炎支原體抗原含量為Sexio8CXU/頭份，所述的副豬嗜血桿 菌抗原含量為5X IO8~4X IO9CFU/頭份。
[0021] 更優(yōu)選地，所述的豬肺炎支原體抗原含量為7X IO8CXU/頭份，所述的副豬嗜血桿 菌抗原含量為2 X IO9CFU/頭份。
[0022] 優(yōu)選地，所述的藥學(xué)上可接受的載體包括佐劑、防腐劑、溶劑、分散介質(zhì)、穩(wěn)定劑、 等滲劑、稀釋劑；其中，所述的佐劑包括ISA206、氫氧化鋁膠、礦物油、卡波姆、GelOU蜂膠、 ISA760VG的一種或幾種的組合。
[0023] 其中，免疫佐劑為氫氧化錯(cuò)膠、礦物油、卡波姆（Carbomer)(商品名Carbopol)、 GelOl (法國(guó) SEPPIC)、蜂膠、ISA206 (法國(guó) SEPPIC)、ISA760VG (法國(guó) SEPPIC)，優(yōu)選的礦物 油、卡波姆（Carbomer)(商品名Carbopol)、GelOl (法國(guó)SEPPIC)，更優(yōu)選為GelOl (法國(guó) SEPPIOo
[0024] 優(yōu)選地，所述疫苗組合物包括：所述的豬肺炎支原體抗原為7 X IO8CXU/頭份滅活 的豬肺炎支原體HN0613株全支原體抗原，所述的副豬嗜血桿菌抗原為2X IO9CFU