-267"的方法建立，以甲基芐基亞硝胺（MBNA)每 周3. 5mg/kg 2次頸背部皮下注射，連續(xù)注射20周建立食管癌大鼠模型。取食管癌成模大 鼠40只及同期飼養(yǎng)正常Wistar大鼠10只用于實(shí)驗(yàn)，體重200~300g，雌雄各半。
[0025] I. I. 2藥物與試劑：本發(fā)明藥物組合物微波凈浸液，凍存?zhèn)溆?。替加氟片（華北制 藥股份有限公司），RNA guard (上海華舜生物技術(shù)有限公司），Trizol (invitrogen公司）。 Revert Aid FirstStrand cDNA synthesis kit、Tag 酶、dNTP(Fermentas 公司），其他試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純。
[0026] L 2 方法：
[0027] 1. 2. 1分組與給藥：10只同期正常飼養(yǎng)Wistar大鼠為正常對(duì)照組，40只食管癌成 模大鼠，按性別、體重分層隨機(jī)分為模型組、中藥組、化療組及中藥聯(lián)合化療組。正常對(duì)照組 及模型組以生理鹽水5mV (kgod)，ig (即灌胃），中藥組及化療組分別以實(shí)施例1微波凈浸 液5ml、4mg/ml替加氟溶液5mV(kgod)，ig，中藥聯(lián)合化療組以實(shí)施例1微波凈浸液、4mg/ ml替加氟溶液等量混合后，以IOmV(kgod)，ig，連續(xù)30d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死大鼠。沿食管 縱行剖開，于解剖鏡下觀察食管黏膜病變情況，取中段食管約IOOmg保存于RNA guard中， 提取食管組織總RNA，余下食管固定于10%中性福爾馬林固定液中，常規(guī)制片，HE染色，光 鏡觀察病理組織學(xué)變化。
[0028] 1. 2. 2 C0X-2mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)！Trizol法提取食管組織總RNA，核酸蛋白分 析儀檢測(cè)A260/A280nm值（1. 8~2. 0)，并計(jì)算RNA濃度；使用1 %甲醛變性瓊脂糖凝 膠電泳檢測(cè) RNA 質(zhì)量。RNA 使用 Revert Aid First Strand cDNA synthesis kit 轉(zhuǎn) 錄為cDNA，再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。COX-2及內(nèi)參β -actin引物由生工生 物工程（上海）有限公司合成。C0X-2引物：上游5' -CTGTATCCCGCCCTGCTGGTG-3'， 下游 5' -ACTTGCGTTGATGGTGGCTGTCTT-3'，產(chǎn)物長(zhǎng)度 279bp。β-actin 引物：上游 5 ' -TGAGACCTTCAACACCCCAG-3 '，下游 5 ' -GCCATCTCT-TGCTCGAAGTC-3 '，產(chǎn)物長(zhǎng)度 311 bp。 PCR反應(yīng)參數(shù)為：94°C預(yù)變性2min，94°C變性lmin，60°C退火lmin，72°C延伸lmin，72°C終 末延伸lOmin，共30個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物在1. 5%瓊脂糖凝膠上電泳。用凝膠成像分析系統(tǒng)采 集圖像，使用Gel-ProAnalyzer 4. 0凝膠圖像分析軟件測(cè)量DNA條帶的積分光密度值（I0D 值），以C0X-2條帶的IOD值與β -actin條帶的IOD值相比較得到相對(duì)IOD值，作為C0X-2 的mRNA相對(duì)表達(dá)水平。
[0029] 1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS17. 0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料用表示，采用 單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用X 2檢驗(yàn)，P < 0. 05為差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0030] 2結(jié)果藥物對(duì)食管組織C0X-2mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響：見表1
[0031] 表1藥物對(duì)食管組織C0X-2mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響（η = 10, χ±5 )
[0032]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療食管癌的藥物組合物，其特征在于按照重量份計(jì)，制成該藥物組合物有效 組分的原料為：守宮170~190份、麥冬140~160份、威靈仙140~160份、天花粉140~ 160份、丹參100~130份、玉竹110~130份、女貞子110~130份、浙貝80~120份、郁 金80~120份、半夏80~120份、茵陳80~120份。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種治療食管癌的藥物組合物，其特征在于按照重量份計(jì)，制 成該藥物組合物有效組分的原料為：守宮180份、麥冬150份、威靈仙150份、天花粉150份、 丹參120份、玉竹120份、女貞子120份、浙貝100份、郁金100份、半夏100份、茵陳100份。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的一種治療食管癌的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合 物為顆粒劑、膠囊劑或片劑。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的一種治療食管癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于該 方法為：取所述藥物組合物原料藥混勻，粉碎成10~20目粗顆粒，加60 %乙醇6倍（體 積），用微波萃取方法連續(xù)60°C萃取三次，萃取液進(jìn)行離心分離，凈浸液濃縮至相對(duì)密度為 1. 20~1. 30的稠膏，真空干燥，干膏粉碎，加適宜輔料，制成相應(yīng)的劑型。
5. 如權(quán)利要求4所述的一種治療食管癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法 為：守宮180g、麥冬150g、威靈仙150g、天花粉150g、丹參120g、玉竹120g、女貞子120g、浙 貝l〇〇g、郁金l〇〇g、半夏l〇〇g、茵陳l〇〇g，取以上11味原料藥混勾，粉碎成10~20目粗顆 粒，加60%乙醇6倍（體積），用微波萃取方法連續(xù)60°C萃取三次，萃取液進(jìn)行離心分離，凈 浸液濃縮至相對(duì)密度為1. 20~1. 30的稠膏，真空干燥，干膏粉碎，加可壓性淀粉1000g、羧 甲基纖維素鈉500g、混勻過80目篩，加適量水制粒，60°C減壓干燥，整粒，分裝成100袋。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于治療食管癌的藥物組合物及其制法，由守宮、麥冬、威靈仙、天花粉、丹參、玉竹、女貞子、浙貝、郁金、半夏、茵陳制成，本發(fā)明目的在于提供一種有確切療效的治療食管癌的藥物，本發(fā)明的藥物組合物可以顯著降低COX-2mRNA轉(zhuǎn)錄水平，并且，若在臨床應(yīng)用中，將本發(fā)明藥物與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用，不僅能提高抗癌的作用，而且由于可能降低化療藥的用量從而降低副作用。
【IPC分類】A61K36-9066, A61K35-583, A61P35-00
【公開號(hào)】CN104707109
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510147533
【發(fā)明人】張茂聲
【申請(qǐng)人】張茂聲
【公開日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2015年3月23日