專(zhuān)利名稱(chēng):從海洋的和水生的動(dòng)物組織中提取脂質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明背景本發(fā)明涉及從海洋的和水生的動(dòng)物如磷蝦、哲水蚤屬、魚(yú)類(lèi)和海洋哺乳動(dòng)物中提取脂質(zhì)。更具體地說(shuō),本發(fā)明涉及一種改進(jìn)的、通過(guò)用溶劑脫水提取脂質(zhì)級(jí)分和回收富含活性酶的固體殘留物的方法。
得自于海洋的和水生的動(dòng)物如磷蝦(krill)、哲水蚤屬(Calanus)、魚(yú)類(lèi)(Fish)和海洋哺乳動(dòng)物的脂質(zhì)級(jí)分有各種用途醫(yī)學(xué)用途海洋的和水生的動(dòng)物油和其中的成份含有多種有益健康的成份。例如,據(jù)報(bào)道各種海洋的和水生的動(dòng)物脂質(zhì)具有抗炎性。也有報(bào)道海洋的和水生的動(dòng)物油有助于減少心血管疾病的發(fā)生。還有報(bào)道一些海洋的和水生的動(dòng)物油可抑制某種狼瘡和腎病的發(fā)展。作為進(jìn)一步的例子,磷蝦可作為一種酶源用于潰瘍和傷口的清創(chuàng)術(shù)或用于促進(jìn)食物消化。海洋的和水生的動(dòng)物油還含有各種抗氧化劑,這些抗氧化劑可能含有潛在的有益健康的特性。
營(yíng)養(yǎng)劑就ω-3脂肪酸的有益效果而言,得自于磷蝦、哲水蚤屬和魚(yú)類(lèi)的油能用作人的膳食補(bǔ)充劑。這些脂肪酸對(duì)大腦和眼睛的正常發(fā)育是必需的。海洋的和水生的動(dòng)物油還富含脂溶性維生素A、D和E及類(lèi)胡蘿卜素。
化妝品許多海洋的和水生的動(dòng)物油用于保濕霜的生產(chǎn)。
漁類(lèi)養(yǎng)殖在磷蝦、哲水蚤屬和魚(yú)類(lèi)中發(fā)現(xiàn)的脂質(zhì)中,存在高濃度的20∶5(二十碳五烯酸)和22∶6(二十二碳六烯酸)的脂肪酸。這些脂肪酸為必需營(yíng)養(yǎng)素,并且作為魚(yú)飼料是有益的。而且,通過(guò)人食用以這種飼料為食的魚(yú),而將這些必需營(yíng)養(yǎng)素轉(zhuǎn)入人的膳食中。
動(dòng)物飼料富含ω-3脂肪酸的動(dòng)物飼料能提高肉的非飽和脂肪酸的含量和降低肉的膽固醇含量。此特性已被用于家禽業(yè)以提高蛋的質(zhì)量。
已知許多提取海洋的和水生的動(dòng)物的油的方法。例如,已知使用有機(jī)溶劑如己烷和乙醇來(lái)提取魚(yú)油。用溶劑如丙酮來(lái)測(cè)量魚(yú)的肌肉組織中的脂肪含量也是公知的。
美國(guó)專(zhuān)利USP4,331,695描述了用加壓的溶劑如丙烷、丁烷或己烷的方法,這些加壓溶劑在室溫下為氣體。優(yōu)選在15-80℃的溫度下對(duì)粉碎的蔬菜或細(xì)碎的動(dòng)物制品進(jìn)行提取。然后將提取得到的油在高壓下和溫度上升至50-200℃的溫度下沉淀。然而,對(duì)于海洋動(dòng)物如磷蝦來(lái)說(shuō),己烷是一種差的提取溶劑。而且,用于沉淀步驟的高溫使脂質(zhì)變質(zhì)。
加拿大專(zhuān)利申請(qǐng)2,115,571描述了從多種褐藻和紅藻中提取油的方法。該方法提供了用幾乎純凈的乙醇索氏提取40小時(shí)的實(shí)例。
美國(guó)專(zhuān)利USP5,006,281描述了一種從海洋的和水生的動(dòng)物如魚(yú)類(lèi)中提取油的方法。首先用一種抗氧化劑化合物處理海洋的和水生的動(dòng)物,將海洋的和水生的動(dòng)物細(xì)碎并通過(guò)離心分離將油相從水相和固相中分離出來(lái)。然后用抗氧化劑進(jìn)一步處理油相以去除不需要的氣味或味道。
加拿大專(zhuān)利1,098,900描述了一種從磷蝦中提取油的方法。該方法包括在含水介質(zhì)中乳化新鮮的或解凍的磷蝦。用離心分離回收油部分。
在1957年公開(kāi)的J.Biol.Chem.226:497-509中的論文“一種從動(dòng)物組織中分離和純化全部脂質(zhì)的簡(jiǎn)單方法”中,F(xiàn)olch建議了一種用氯仿和甲醇的提取方法。該方法由于其涉及的有毒溶劑而在商業(yè)上是不可行的。
然而,先有技術(shù)的方法通常是商業(yè)上不可行的或低量產(chǎn)出的。因此,本發(fā)明的目的是提供一種改進(jìn)的、海洋的和水生的動(dòng)物的油的提取方法,該方法使有價(jià)值的脂質(zhì)級(jí)分得到回收和使包含活性酶的富含有價(jià)值的蛋白質(zhì)的固體殘留物單獨(dú)回收。
從以下的具體描述中,可以看到本發(fā)明的其它目的和進(jìn)一步的應(yīng)用范圍。應(yīng)當(dāng)理解,對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述,即本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例只用于說(shuō)明,因?yàn)樵诒景l(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)的許多變化和改變對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明
圖1.干磷蝦中的脂肪酸的氣-液色譜(氯仿-甲醇)圖2.干磷蝦中的脂肪酸的氣-液色譜(丙酮)圖3.凍磷蝦中的脂肪酸的氣-液色譜(丙酮)圖4.凍磷蝦中的脂肪酸的氣-液色譜(乙醇)圖5.凍磷蝦中的脂肪酸的氣-液色譜(叔-丁醇)圖6.凍磷蝦中的脂肪酸的氣-液色譜(乙酸乙酯)圖7.哲水蚤屬種(Calanus sp.)和M.norvegica的中性脂質(zhì)的薄層色譜圖8.E.pacifica的中性脂質(zhì)的薄層色譜圖9.M.schmitti的中性脂質(zhì)的薄層色譜圖10.鋸尾鯊(G.galens)的中性脂質(zhì)的薄層色譜圖11.扁鯊(Angel shark)的中性脂質(zhì)的薄層色譜圖12.哲水蚤屬種(Calanus sp.)和M.norvegica的磷脂的薄層色譜圖13.E.pacifica的磷脂的薄層色譜圖14.M.schmitti的磷脂的薄層色譜圖15.鋸尾鯊的磷脂的薄層色譜圖16.扁鯊的磷脂的薄層色譜圖17.丙酮體積對(duì)脂質(zhì)提取的影響(E.pacifica)圖18.在丙酮中的保溫時(shí)間對(duì)脂質(zhì)提取的影響(E.pacifica)圖19.乙醇體積對(duì)脂質(zhì)提取的影響(E.pacifica)圖20.乙醇保溫時(shí)間對(duì)脂質(zhì)提取的影響(T.raschii)
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述在詳細(xì)描述本發(fā)明前,必須知道本發(fā)明不限于應(yīng)用到以下所詳細(xì)描述的方法。本發(fā)明能夠是其它的實(shí)施方案和通過(guò)許多途徑實(shí)施。也必須知道用于此處的措詞或術(shù)語(yǔ)是為了描述的目的并且不限制本發(fā)明。
本發(fā)明的方法包括將新鮮收集的海洋的和水生的材料懸浮于丙酮上。用酮如丙酮來(lái)提取脂質(zhì)。這使動(dòng)物組織快速脫水和使脂質(zhì)成分移入溶劑。干的殘留物是富含活性酶的有價(jià)值的產(chǎn)品。
在一優(yōu)選實(shí)施方案中,通過(guò)連續(xù)的丙酮和醇處理來(lái)進(jìn)行提取。優(yōu)選的醇為異丙醇、和叔-丁醇。醇可以用醋酸的酯如乙酸乙酯來(lái)代替。該方法產(chǎn)生兩個(gè)連續(xù)的脂質(zhì)部分和富含包含活性酶的蛋白質(zhì)的干的殘留物??傊|(zhì)的回收率比得上在本發(fā)明的背景技術(shù)中提到的Folch等(1957)的方法。已經(jīng)用磷蝦、哲水蚤屬、魚(yú)類(lèi)和鯊組織進(jìn)行了試驗(yàn)。
令人驚訝地發(fā)現(xiàn),本發(fā)明建議的連續(xù)提取處理在脂質(zhì)提取上與單溶劑體系提取相比,收率更好。采用始于酮如丙酮的雙連續(xù)溶劑提取尤為有益,因?yàn)楸苡行箘?dòng)物組織脫水。脫水的動(dòng)物組織大大促進(jìn)用第二溶劑醇或醋酸酯如乙酸乙酯的提取進(jìn)程。
對(duì)于浮游動(dòng)物如磷蝦和哲水蚤屬和對(duì)于魚(yú)片下腳料如魚(yú)內(nèi)臟,觀察到僅用丙酮提取足以使脂質(zhì)部分經(jīng)濟(jì)有效地回收和使富含包含活性酶的蛋白質(zhì)的干的固體產(chǎn)物單獨(dú)回收。
現(xiàn)在描述本發(fā)明的一般提取方法。將由新鮮捕集的并優(yōu)選經(jīng)細(xì)碎的海洋的和水生的動(dòng)物材料組成的起始材料用丙酮提取約2小時(shí)、優(yōu)選過(guò)夜。但是提取時(shí)間對(duì)脂質(zhì)的得率并不是決定性的。為了促進(jìn)提取,優(yōu)選使用直徑小于5mm的顆粒。優(yōu)選提取在惰性氣氛中及在溫度為約5℃或更低下進(jìn)行。
優(yōu)選地,提取的開(kāi)始攪拌10-40分鐘,優(yōu)選20分鐘。雖然提取時(shí)間不是決定性的,但發(fā)現(xiàn)用與海洋的和水生的動(dòng)物材料的體積比為6∶1的丙酮提取2小時(shí)是最佳的。
用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如過(guò)濾、離心分離或沉降將溶解的脂質(zhì)成分和固體材料分離。過(guò)濾是優(yōu)選使用的。
用耐有機(jī)溶劑的過(guò)濾器(金屬、玻璃或紙)過(guò)濾分離后,可任選地用純丙酮洗滌殘留物,優(yōu)選兩倍體積(材料的起如體積)的酮,以再次回收脂質(zhì)。合并的濾液減壓蒸發(fā)。可任選地,使用閃蒸或噴霧干燥。蒸發(fā)后得到的水殘留物在低溫下與油相(級(jí)Ⅰ)分離。
過(guò)濾器上收集的固體殘留物用優(yōu)選兩倍體積(材料的起始體積)的醇如乙醇、異丙醇、叔-丁醇或可供選擇地用乙酸乙酯來(lái)懸浮和提取。將濾液蒸發(fā)得到第二級(jí)分脂質(zhì)(定義為級(jí)分Ⅱ)。雖然提取時(shí)間不是決定性的,但發(fā)現(xiàn)在低于約5℃的溫度下提取約30分鐘是足夠的。
除叔-丁醇外的有機(jī)溶劑的溫度和樣品的溫度均不是關(guān)鍵因素,但優(yōu)選盡可能地冷。然而,對(duì)于室溫下為固體的叔-丁醇,在使用前將其加溫并在25℃下立刻進(jìn)行提取是重要的。
對(duì)比例為了比較提取方法的效率,將使用氯仿和甲醇的經(jīng)典技術(shù)(Folch等,1957)用于磷蝦。此方法是用于測(cè)量提取方法的效率的參照。用使用己烷作為提取溶劑的技術(shù)做另一比較。通過(guò)將脂質(zhì)級(jí)分懸浮于小體積的其原始有機(jī)溶劑中及通過(guò)蒸發(fā)后重量分析小等份測(cè)量來(lái)評(píng)估脂質(zhì)的回收率。
對(duì)于此處所提供的所有實(shí)例,包含丙酮提取后用第二溶劑(如乙酸乙酯)提取的本發(fā)明的方法提供的透明的脂質(zhì)與通過(guò)Folch等的經(jīng)典技術(shù)得到的任何油相比,具有更誘人的外觀和特性。
為分析脂質(zhì)組成,將每780μg提取物置于硅膠板上并用下列溶劑通過(guò)薄層色譜,TLC(Bowyer等,1962)進(jìn)行分餾。中性脂質(zhì)己烷、乙醚、醋酸(90∶10∶1,v/v)和磷脂氯仿、甲醇、水(80∶25∶2,v/v)。通過(guò)氣液色譜,GLC(Bowyer等,1962,見(jiàn)參考文獻(xiàn)),包括對(duì)原始技術(shù)的一些修改用65℃下2小時(shí)代替80℃下1小時(shí),用己烷洗滌3次代替用水洗滌2次和不洗滌,來(lái)分析E.pacifica的脂肪酸的組成。
為了去除痕量的有機(jī)溶劑,脂質(zhì)級(jí)分Ⅰ和Ⅱ在惰性氣氛下加溫到約125℃約15分鐘。
根據(jù)美國(guó)油脂化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOCS)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)分析脂肪。用下列標(biāo)準(zhǔn)來(lái)分析提取的脂質(zhì)皂化和Wijs碘指數(shù)和水份-揮發(fā)物含量。還通過(guò)Plummer1987(見(jiàn)參考文獻(xiàn))的方法確定膽固醇含量。通過(guò)RobeftAckman教授主管的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室(加拿大水產(chǎn)技術(shù)學(xué)院,DalTech,Dalhousie大學(xué),Halifax,Nova Scotia,加拿大)作同樣的分析和其它分析。這包括Wijs碘指數(shù)、過(guò)氧化物和甲氧基苯胺值、脂質(zhì)類(lèi)組成、脂肪酸組成、游離脂肪酸FAME、膽固醇、生育酚、全反式維生素A、維生素D3、蝦青素(asthaxanthin)和角黃素含量。
表1顯示與Folch等(1957)的經(jīng)典技術(shù)相比,通過(guò)丙酮再通過(guò)乙醇從干磷蝦中提取的脂質(zhì)的量更高。
表2顯示,從一種冷凍的產(chǎn)自太平洋的磷蝦,Euphausia pacifica中提取的脂質(zhì)的結(jié)果。假設(shè)含水量為8%,脂質(zhì)含量與表1所示干磷蝦是可比得上的。異丙醇、叔-丁醇和乙酸乙酯作為第二次提取溶劑的提取得率沒(méi)有乙醇重要,但其對(duì)脂質(zhì)回收并非必定低效的,因?yàn)榇碱?lèi)比異丙醇、叔-丁醇或乙酸乙酯帶來(lái)更多的雜質(zhì)。因此,它們也可在丙酮后用作二次溶劑。丙酮提取的結(jié)果間的差異主要?dú)w因于水-油的分離。這些分離受丙酮蒸發(fā)后在水-油溶液中丙酮的殘留量的影響。該丙酮的量隨實(shí)驗(yàn)的不同而改變,因?yàn)樾∫?guī)模使用的蒸發(fā)系統(tǒng)是較不可再生的(對(duì)于工業(yè)規(guī)模,蒸發(fā)步驟將得到優(yōu)化)。同樣試驗(yàn)了用單溶劑從磷蝦中提取全部脂質(zhì)。其顯示與單一丙酮(1.86%提取率,及用一有效丙酮蒸發(fā)系統(tǒng)得到甚至更高的提取率)相比,乙酸乙酯(1.37%提取率)如已烷(0.23%提取率)不是好的溶劑。
該方法的一個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)是從提取物(脂質(zhì)級(jí)分和富含蛋白質(zhì)的固體材料)中去除了細(xì)菌。實(shí)際上,將在4℃下、在不同比例的丙酮中經(jīng)112天溫育的E.Pacifica接種到含有BACTOTM牛肉膏0.3%、BACTOTM蛋白胨0.5%和BACTOTM瓊脂1.5%(Difco Laboratories,底特律、美國(guó))的NA培養(yǎng)基中,然后在室溫或4℃下培養(yǎng)18天。當(dāng)每克磷蝦與1體積的丙酮的比例時(shí),觀察到?jīng)]有明顯的細(xì)菌生長(zhǎng)。對(duì)于更高比例的丙酮(2倍體積和5倍體積),完全沒(méi)有細(xì)菌的生長(zhǎng),這意謂著丙酮能保存磷蝦樣品。丙酮作為有效的殺菌劑和殺病毒劑是公知的(Goodman等。1980)。
表3顯示M.Novegica中的脂質(zhì)的得率。脂質(zhì)的百分比(3.67%)與表2中所示的由E.pacifica得到的脂質(zhì)的得率(3.11%)是可比得上的。變化可歸因于該兩種動(dòng)物的食物和捕集時(shí)間(季節(jié))的不同。
表4顯示粉碎對(duì)M.Novegica脂質(zhì)提取的影響。這些提取是在最佳條件下進(jìn)行的并且顯示出該方法明顯優(yōu)越于經(jīng)典方法(4.46%對(duì)3.30%)。其還顯示當(dāng)物種較大時(shí),粉碎可以是一個(gè)重要因素(4.46%對(duì)3.53%)。
表5記錄由哲水蚤屬提取的脂質(zhì)。得到了相當(dāng)量的脂質(zhì)。哲水蚤屬種組成中的一些變化可解釋試驗(yàn)1和2間的變化(鮮品重量的8.22%和10.90%)。
表6-8記錄從魚(yú)組織中提取的脂質(zhì)的總量。在鯖、鱒魚(yú)和青魚(yú)上試驗(yàn)本發(fā)明的方法。在外周組織(主要是肌肉)和內(nèi)臟上試驗(yàn)本發(fā)明的方法。有益的是,本發(fā)明的方法使來(lái)自魚(yú)的部分中的有價(jià)值的脂質(zhì)得到回收,而通常這些魚(yú)的部分在片除魚(yú)片后是被浪費(fèi)掉的。魚(yú)加工成供人食用后的不用的那些魚(yú)組織能貯存在丙酮中,并且根據(jù)本發(fā)明的方法能從中提取脂質(zhì),即使Folch(1957)的方法比我們的方法回收更多的脂質(zhì)。事實(shí)上,由鯖得到的小量脂質(zhì)(來(lái)自內(nèi)臟0.52%和來(lái)自組織1.45%)在如本發(fā)明所述的用丙酮和醇一次提取后用Folch的方法提取。平行用本發(fā)明的方法和Folch的方法對(duì)鮭魚(yú)和青魚(yú)進(jìn)行的平行對(duì)比提取顯示后一種方法的優(yōu)越的回收率。然而,值得注意的是Folch的方法不能用于商業(yè)用途上的脂質(zhì)的回收(由于毒性)。
表9-11顯示從鯊肝組織中提取的脂質(zhì)的結(jié)果。對(duì)于一個(gè)物種中,技術(shù)間的結(jié)果沒(méi)有明顯的差異。表12表明在不同溶劑中提取后的磷蝦油(e.pacifica)的脂肪酸組成。
表13表明磷蝦油的級(jí)分Ⅰ(丙酮)和級(jí)分Ⅱ(醇或乙酸乙酯)的特性。首先,級(jí)分Ⅰ的皂化指數(shù)(130.6)表明此級(jí)分與級(jí)分Ⅱ(185.7)相比,含有更長(zhǎng)鏈脂肪酸。級(jí)分Ⅰ的Wijs碘指數(shù)表明此級(jí)分含有大量的多不飽和脂肪酸。與指數(shù)為81.1的橄欖油相比,說(shuō)明了級(jí)分Ⅰ在室溫下為液體的原因。眾所周知,不飽和脂肪酸的熔點(diǎn)低于其飽和的同系物。對(duì)碘指數(shù)為127.2的級(jí)分Ⅱ作了同樣的觀察。表12所示的脂肪酸組成證實(shí)了這些碘指數(shù)級(jí)分Ⅰ具有高百分比(30.24%)的多不飽和脂肪酸(五烯+六烯)和同樣的級(jí)分Ⅱ(22.98%)。最后,表13也顯示在溶劑蒸發(fā)后,級(jí)分Ⅰ由10.05%揮發(fā)物和濕氣組成。對(duì)于相同的試驗(yàn),級(jí)分Ⅱ的給出的值為6.8%。為了去除痕量溶劑,在氮?dú)庀聦⒂投虝杭訜?至約125℃,約15分鐘)是重要的。
根據(jù)本發(fā)明的方法得到的磷蝦油的結(jié)果列于表13、14、15、16、17和18中。值得提到的是在表18中,以兩種名為蝦青素(asthaxanthin)和角黃素的類(lèi)胡蘿卜素計(jì),類(lèi)胡蘿卜素的含量相當(dāng)高。事實(shí)上,雙份分析顯示蝦青素(asthaxanthin)為92-124μg/g的脂質(zhì)部分值和角黃素為262-734μg/g的脂質(zhì)部分值。因此,對(duì)于本發(fā)明的目的,可以說(shuō)磷蝦提取物中包含至少75并優(yōu)選至少90μg/g的脂質(zhì)部分的蝦青素。對(duì)于角黃素,至少250和優(yōu)選至少270μg/g的脂質(zhì)部分。低的過(guò)氧化值和低的甲氧基苯胺值是有利的并且其歸因于大量的天然抗氧化劑的存在(蝦青素和角黃素)。這些化合物顯示了磷蝦提取物的良好的藥用或美容的特性,從而大量的類(lèi)胡蘿卜素表示了優(yōu)秀的經(jīng)皮轉(zhuǎn)移特性。因此,磷蝦提取物對(duì)于經(jīng)皮釋放的藥物是良好的候選劑。
表19顯示根據(jù)本發(fā)明的水生動(dòng)物組織的脂質(zhì)提取方法的最佳模式。
表20顯示根據(jù)本發(fā)明的方法保留固體級(jí)分的酶的活性。事實(shí)上,已經(jīng)完成了對(duì)連續(xù)丙酮和乙酸乙酯提取后得到的固體磷蝦殘留物的證明。通過(guò)用鄰苯二醛作為試劑的分光光度測(cè)定的氨基團(tuán)的釋放來(lái)測(cè)量蛋白酶解的活性。用Braford方法測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。用水提取可溶性蛋白質(zhì)并加入至由超濾得到的10%抗乳血清蛋白濃縮液中。在50mM磷酸鉀緩沖液中、在37℃下培養(yǎng)結(jié)束時(shí),加入三氯醋酸并根據(jù)Church等的方法(1983,J Dairy Sci66:1219-1227)測(cè)量上清液中的NH3基的量。
圖1-6顯示E.pacifica脂質(zhì)的脂肪酸組成色譜。每一張圖上,高比例的20∶5和22∶6的脂肪酸(海洋和水生油的特征)是值得注意的并用兩個(gè)明顯的峰表示。數(shù)據(jù)如表12所示。
不同物種的中性脂質(zhì)的脂質(zhì)圖譜的變化歸因于食物來(lái)源的不同。在一個(gè)種中(如E.pacifica),通過(guò)不同的脂質(zhì)提取技術(shù)得到的脂質(zhì)圖譜間沒(méi)有明顯的變化。對(duì)于磷脂(圖12-圖16),觀察到相反的由于同物種不導(dǎo)致同樣的脂質(zhì)圖譜,因此用脂質(zhì)提取方法的不同來(lái)解釋變化。來(lái)自鯊種的脂質(zhì)(通過(guò)提到的方法提取的)和商業(yè)上的鱈魚(yú)肝油(可從Uniprix藥店得到,魁北克省,加拿大)與磷脂相反,主要由中性脂質(zhì)組成。
溶劑體積和溫育時(shí)間對(duì)丙酮從E.pacifica中提取脂質(zhì)的效率的影響分別如圖17和圖18所示。1∶6的比例(w/v)產(chǎn)生最佳得率,在2小時(shí)后接近完全提取。用乙醇進(jìn)行第二次提取步驟實(shí)驗(yàn)。由于不同體積的乙醇得到相同的得率,因此該溶劑的體積不顯得至關(guān)重要(圖19),但在乙醇中溫育時(shí)間必須至少30分鐘,如圖20的結(jié)果所示。
發(fā)明人之一的Adrien Beaudoin博士攝入了磷蝦的不同的脂質(zhì)級(jí)分,沒(méi)有觀察到副作用的跡象。
雖然以上用一個(gè)具體形式來(lái)描述本發(fā)明,但對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō),其可以用不同的方法進(jìn)行改變和精制是顯而易見(jiàn)的。因此希望有此理解本發(fā)明不只局限于任何范圍,除了下述權(quán)利要求書(shū)定義的外。
證實(shí)丙酮和乙酸乙酯提取后得到的磷蝦殘留物含有酶蛋白酶解活性。通過(guò)用鄰苯二醛作為試劑的分光光度測(cè)定的氨基團(tuán)的釋放來(lái)測(cè)量蛋白酶解的活性。用Bradford方法來(lái)測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。
酶源為丙酮和乙酸乙酯提取脂質(zhì)后得到的殘留物。用水提取可溶性蛋白質(zhì)并將可溶性蛋白質(zhì)加入至由超濾得到的10%抗乳血清蛋白濃縮液中。
在50mM磷酸鉀緩沖液中、在37℃下培養(yǎng)結(jié)束時(shí),加入三氯醋酸并根據(jù)Church等(1983)的方法測(cè)量上清液中的NH3基的數(shù)量。
參考文獻(xiàn)
Bowyer,D.E.,Leat,W.M.F.,Howard,A.N.和Gresham,G.A.1962.通過(guò)薄層色譜分離的血清脂質(zhì)的脂肪酸組成的確定;和與柱色譜法的比較。BBA.70:423-431。
Chandrasekar,B.,Troyer.,D.A.,Venkatraman,J.T.和Fernandes,G.1996.在自身免疫鼠狼瘡中,通過(guò)富含ω-3脂質(zhì)的磷蝦油轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子beta的組織特異性調(diào)節(jié)。Nutr Res.16(3):489-503.
Christensen,M.S.,Hoy,C-E和Redgrave,T.G.1994.具有不同的分子內(nèi)脂肪酸分布的、來(lái)自海洋油的n-3多不飽和脂肪酸的淋巴管吸收。BBA.1215:198-204.
Church,F.C.,Swaisgood,H.E.,Porter,D.H.和Catignani,G.L.1983.用鄰苯二醛分光光度分析測(cè)定奶和分離乳蛋白中的蛋白水解。JDairy Sci.66:1219-1227.
Difco laboratories.1984.用于微生物學(xué)的Difco人工脫水培養(yǎng)基和試劑。10thed。Detroit。
Folch,J.,Lees,M.和Sloane-Stanley,G.H.1957.從動(dòng)物組織中分離和純化全部脂質(zhì)的簡(jiǎn)單方法。J.biol.Chem.226:497-509.
Goodman Gilman,A.,Goodman,L.L.和Gilman,A.1980.治療學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)。6thed.Colller Macmillan Canada ltd,Toronto.
Harwood,H.J.和Geyer,R.P.1964.生物學(xué)數(shù)據(jù)冊(cè)。美國(guó)聯(lián)邦實(shí)驗(yàn)生物學(xué)聯(lián)合會(huì),華盛頓。
Hellgren,L.,Karlstam,B.,Mohr,V.和Vincent,J.1991.磷蝦酶。有效去除壞死性潰瘍的新概念。Int J Dermatol.30(2):102-103Plummer,D.T.1987.實(shí)用生物化學(xué)入門(mén)。3thed.McGraw-Hill BookCompany,倫敦。
Rawn,J.D.1990.Traitéde biochimie.DE Boeck-Wesmael,Buxelles.
Runge,J.A.和Joly,P.1994.Rapport sur 1’état des invertébrésen 1994:7:0浮游生物(Euphausiacés et Calanus)de 1’Estuaire etdu Golfe du Saint-Laurent.Sargent,J.R.1997.魚(yú)油和人類(lèi)飲食。Br J Nutr.78Suppl1:S5-S13.
表1.從干磷蝦中提取脂質(zhì)(E.paciffica)試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)平均值(%)±s.d.1- 丙酮a)8.00乙醇b)7.6015.602- ″ 19.706.9026.603- ″ 8.1511.20 19.354- ″ 6.8013.60 20.4020.49±3.955- chlor:MeOHc)15.506- ″ 14.9015.20±0.30一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%)。a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v)來(lái)提取,沒(méi)有溫育。b)用樣品-溶劑比例為1∶4(w/v)來(lái)提取,在4℃下溫育1夜,在用丙酮作首次提取后。c)Folch等,1957。表2.對(duì)冷凍磷蝦脂質(zhì)的提取(E.pacifica)試驗(yàn)編號(hào) 技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)平均值(%)±s.d.1-丙酮a)1.17乙醇b)1.232.402-″ 3.051.094.143-″ 1.531.262.793.11±0.914-丙酮a)2.45異丙醇b)0.703.155-″ 1.800.802.606-″ 1.600.802.402.72±0.397-丙酮a)2.15叔-丁醇c)0.472.628-″ 2.110.402.519-″ 2.370.452.822.65±0.1610- 丙酮a)2.28乙酸乙酯b)0.212.4911- ″ 1.090.161.2512- ″ 2.540.092.63
2.12±0.7613- 丙酮-乙醇d)聯(lián)合 3.2814- ″3.0215- ″3.253.18±0.1416- 乙酸乙酯e)1.3217- ″1.4918- ″1.311.37±0.1019- 己烷e)0.3120- ″0.1821- ″0.200.23±0.0722- chlor:MeOHf)2.3723- ″2.0724- ″2.622.35±0.28一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。c)用樣品-溶劑比例為1∶2w/v),在25℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取。d)用樣品-丙酮-乙醇比例為1∶5∶5(w/v/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。c)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。f)Folch等,1957。表3.冷凍磷蝦脂質(zhì)(M.norvegica)提取試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)平均值(%)±s.d.1- 丙酮a)1.82乙醇b)1.823.642- ″1.152.353.503- ″1.682.193.873.67±0.15一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育1夜來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶4(w/v),在4℃下溫育1小時(shí)來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。表4.粉碎對(duì)冷凍磷蝦脂質(zhì)(M.norvegica)提取的影響實(shí)驗(yàn)編號(hào)技術(shù)在1st提取前將磷蝦粉碎 得率(%)總計(jì)(%)1- 丙酮a)是 3.10乙醇b)1.07 4.172- ″ 否 2.141.39 3.533- ″ 是 3.321.14 4.464- chlor:MeOHc)是3.305- ″ 是3.26一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。f)Folch等,1957。表5.冷凍Calanus脂質(zhì)(Calanus sp.)的提取試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)平均值(%)±s.d.1- 丙酮a)6.18乙醇b)2.048.222- ″8.642.2610.909.56±1.34一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育1夜來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶4(w/v),在4℃下溫育1小時(shí)來(lái)提取,在用丙酮首次提取后。表6.鮮魚(yú)脂質(zhì)(鯖魚(yú))的提取試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)1-內(nèi)臟 丙酮a)6.11魚(yú)1 乙醇b)0.596.702-組織 ″3.78魚(yú)1 0.914.693-內(nèi)臟 ″10.46魚(yú)2 0.5711.034-組織 ″6.65魚(yú)2 1.418.065-內(nèi)臟 ″8.39魚(yú)3 0.669.056-組織 ″5.27魚(yú)3 0.976.247-內(nèi)臟 ″8.47魚(yú)4 0.699.168-組織 ″8.40魚(yú)4 1.029.429-內(nèi)臟 chlor:Me0Hc)0.52魚(yú)110-組織 ″魚(yú)1 1.45a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v)來(lái)提取,溫育時(shí)間●魚(yú)1內(nèi)臟4小時(shí),魚(yú)1組織23小時(shí)●魚(yú)2內(nèi)臟23小時(shí)45分鐘(23h45),魚(yú)2組織45小時(shí)30分鐘●魚(yú)3內(nèi)臟8天2小時(shí)20分鐘,魚(yú)3組織8天22小時(shí)30分鐘●魚(yú)4內(nèi)臟17天23小時(shí),魚(yú)4組織18天2小時(shí)25分鐘。b)用樣品-溶劑比例為1∶4(w/v),在4℃下溫育1小時(shí)來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。c)Folch等,1957,接著用丙酮提取,然后用乙醇提取。表7.冷凍魚(yú)(鮭魚(yú))的脂質(zhì)提取試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)1-內(nèi)臟 丙酮a)34.70乙醇b)2.1836.882-組織 ″5.531.176.703-內(nèi)臟 chlor:MeOHc)39.814-組織 ″14.93一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育1夜來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶4(w/v),在4℃下溫育1小時(shí)來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。f)Folch等,1957。表8.鮮魚(yú)(青魚(yú))的脂質(zhì)提取試驗(yàn)編號(hào) 技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)1組織和內(nèi)臟丙酮a)2.09乙醇b)0.682.772-細(xì)織和內(nèi)臟 chlor:MeOHc)5.95一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育1夜來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶4(w/v),在4℃下溫育1小時(shí)來(lái)提取,在用丙酮首次提取后。c)Folch等,1957。表9.鮮鯊肝脂質(zhì)的提取(M.schmitti)試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)1- 丙酮a)36.39乙醇b)4.4840.872- 乙酸乙酯c)36.683- chlor:MeOHd)41.86一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。c)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。d)Folch等,1957。表10.鮮鯊肝脂質(zhì)的提取(G.galeus)試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)1- 丙酮a)21.39乙醇b)5.2726.662- 乙酸乙酯c)25.893 chlor:MeOHd)29.99一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。c)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。d)Folch等,1957。表11.鮮鯊肝脂質(zhì)的提取(扁鯊)試驗(yàn)編號(hào)技術(shù) 得率(%)總計(jì)(%)1- 丙酮a)19.23乙醇b)8.9828.212- 乙酸乙酯c)39.223- chlor:MeOHd)39.23一式三份進(jìn)行測(cè)定(變化<5%=。a)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-溶劑比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。c)用樣品-溶劑比例為1∶9(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。d)Folch等,1957。表12.脂肪酸組成(E.pacifica)溶劑 飽和的不飽和的單 Di PolyH-Poly未鑒定的chlo-meth26.1822.541.913.2326.34 19.8丙酮 21.4 22.181.75 3.724.52 26.46丙酮 19.0922.112.033.4830.24 23.03乙醇 28.0722.922.143.0727.78 16.03叔-丁醇 32.6324.961.862.8617.86 19.83乙酸乙酯 22.6825.772.172.8822.98 23.51數(shù)據(jù)為占總脂肪酸的百分比(%)。表13.磷蝦油的特性(E.pacifica)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)b皂化指數(shù)級(jí)分Ⅰc)130.6-- --級(jí)分Ⅱd)185.7-- --橄欖油 192.0c)-- 189.7Wijs碘指數(shù)級(jí)分Ⅰc)185.2172.5--級(jí)分Ⅱd)127.2139.2--橄欖油 85.3e)-- 81.1膽固醇含量(%)級(jí)分Ⅰc)2.1 1.9 --級(jí)分Ⅱd)3.7 3.0 --橄欖油 0.2e)-- --揮發(fā)物和水份含量(%)級(jí)分Ⅰc)10.0 -- --級(jí)分Ⅱd)6.8 -- --過(guò)氧化值(meg過(guò)氧化物/kg油)級(jí)分Ⅰc)-- 0.0 --級(jí)分Ⅱd)-- 0.0 --對(duì)甲氧基苯胺值(g-1吸收)級(jí)分Ⅰc)-- 0.1 --級(jí)分Ⅱd)-- 5.5 --a)Robert Ackman教授實(shí)驗(yàn)室,加拿大水產(chǎn)技術(shù)學(xué)院,Halifax,NovaScotia.b)Harwood和Geyer1964.c)用樣品-溶劑比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。d)用樣品-乙酸乙酯比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。e)冷壓榨自Berto1liTM的特初榨橄欖油。表14.磷蝦油的脂質(zhì)分類(lèi)組成(AREA%)(E.pacifica)甘油三酯級(jí)分Ⅰa)19.0±0.7級(jí)分Ⅱb)66.5±2.3烴類(lèi)級(jí)分Ⅰa)痕量級(jí)分Ⅱb)1.3±0.1游離脂肪酸類(lèi)級(jí)分Ⅰa)23.7±1.1級(jí)分Ⅱb)20.3±0.3單酸甘油酯級(jí)分Ⅰa)1.4±0.3級(jí)分Ⅱb)0.5±0.1磷脂或其它極性材料級(jí)分Ⅰa)54.1±6.1級(jí)分Ⅱb)8.5±1.6數(shù)據(jù)來(lái)自Robert Ackman教授實(shí)驗(yàn)室,加拿大水產(chǎn)技術(shù)學(xué)院,Halifax,Nova Scotia.a)用樣品-丙酮比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-乙酸乙酯比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。表15.磷蝦油的脂肪酸組成(WT/WT%)(E.pacifica)脂肪酸類(lèi)級(jí)分Ⅰa)級(jí)分Ⅱb)12∶0 0,0 0,113∶0 0,2 0,1ISO14∶00,4 0,614∶0 4,2 7,6ISO15∶00,5 0,7ANT15∶00,2 0,215∶0 0,6 1,0ISO16∶00,2 0,3ANT16∶0 0,2 0,216∶0 14,1 21,67MH0,6 0,9ANT17∶0 0,1 0,317∶0 2,8 3,718∶0 1,0 1,620∶0 0,1 0,3飽和物25,2 39,214∶1 0,4 0,515∶1 0,1 0,216∶1n-7 6,6 7,816∶1n-5 0,6 0,217∶1 0,6 0,718∶1n-9 8,0 9,818∶1n-7 4,2 5,618∶1n-5 0,1 0,120∶1n-9 0,3 0,420∶1n-7 0,3 0,420∶1n-5 0,3 0,422∶1n-11+13 0,1 0,2單烯類(lèi)21,6 26,316∶2n-6 0,6 1,216∶2n-4 1,3 1,318∶2n-7 0,1 0,218∶2n-6 2,0 1,818∶2n-4 0,1 0,120∶2NMID 0,2 0,220∶2n-6 0,1 0,1雙烯類(lèi) 4,4 4,916∶3n-4 1,4 1,218∶3n-6 0,4 0,318∶3n-4 0,2 0,218∶3n-3 3,2 3,018∶3n-1 0,1 0,120∶3n-3 0,1 0,1三烯類(lèi) 5,4 4,916∶4n-3 0,9 0,716∶4n-1 1,0 0,818∶4n-3 9,2 7,418∶4n-1 0,1 0,020∶4n-6 0,7 0,520∶4n-3 0,7 0,3四烯類(lèi)12,6 9,720∶5n-3 17,4 8,621∶5n-3 0,7 0,522∶5n-6 0,2 0,122∶5n-3 0,5 0,3五烯類(lèi)18,8 9,522∶6n-3 13,2 6,6六烯類(lèi)計(jì)算的碘值214,8 145,1數(shù)據(jù)來(lái)自Robert Ackman教授實(shí)驗(yàn)室,加拿大水產(chǎn)技術(shù)學(xué)院,Halifax,Nova Scotia.a)用樣品-丙酮比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-乙酸乙酯比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。表16.磷蝦脂質(zhì)游離脂肪酸(WT/WT%)(E.pacifica)
18∶3n-1 0,1 0,120∶3n-6 0,1 0,120∶3n-3 0,1 0,2三烯類(lèi) 5,7 5,616∶4n-3 0,6 0,316∶4n-1 1,0 0,618∶4n-3 9,8 6,218∶4n-1 0,1 0,120∶4n-6 1,7 1,420∶4n-3 0,6 0,522∶4n-3 0,3 0,3四烯類(lèi) 14,1 9,418∶5n-3 0,2 0,120∶5n-326,417,421∶5n-3 0,9 0,622∶5n-6 0,0 0,122∶5n-3 0,7 0,5五烯類(lèi) 28,218,722∶6n-320,514,4六烯類(lèi) 20,514,4計(jì)算的碘值 291,6 220,3數(shù)據(jù)來(lái)自Robert Ackman教授實(shí)驗(yàn)室,加拿大水產(chǎn)技術(shù)學(xué)院,Halifax,Nova Scotia.a)用樣品-丙酮比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-乙酸乙酯比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。表17.磷蝦油中的生育酚、全-反式維生素A和維生素D3含量α-生育酚,由HPLC(IU)級(jí)分Ⅰa)0.91級(jí)分Ⅱb)0.83γ-生育酚,由HPLCμg/g級(jí)分Ⅰa)Tr級(jí)分Ⅱb)Trdelta-生育酚,由HPLCμg/g級(jí)分Ⅰa)N.D.級(jí)分Ⅱb)N.D.全反維生素A,由HPLC(IU)級(jí)分Ⅰa)395.57級(jí)分Ⅱb)440.47維生素D3,由HPLC(IU)級(jí)分Ⅰa)N.D.級(jí)分Ⅱb)N.D.數(shù)據(jù)來(lái)自Robert Ackman教授實(shí)驗(yàn)室,加拿大水產(chǎn)技術(shù)學(xué)院,Halifax,Nova Scotia數(shù)據(jù)以每克磷蝦油表示。a)用樣品-丙酮比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-乙酸乙酯比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。TR=痕量N.D.=未檢測(cè)換算維生素α-生育酚mg/g油×1.36=國(guó)際單位全反維生素D3μg/g÷0.3=國(guó)際單位表18.磷蝦油的蝦青素和角黃素的含量(E.pacifica)蝦青素(μg/g油)級(jí)分Ⅰa)93.1級(jí)分Ⅱb)121.7角黃素(μg/g油)級(jí)分Ⅰa)270.4級(jí)分Ⅱb)733.0數(shù)據(jù)來(lái)自Robert Ackman教授實(shí)驗(yàn)室,加拿大水產(chǎn)技術(shù)學(xué)院,Halifax,Nova Scotiaa)用樣品-丙酮比例為1∶6(w/v),在4℃下溫育2小時(shí)來(lái)提取。b)用樣品-乙酸乙酯比例為1∶2(w/v),在4℃下溫育30分鐘來(lái)提取,在用丙酮作首次提取后。表19.水生動(dòng)物組織的脂質(zhì)提取的最佳條件(建議的方法)步驟條件粉碎(如果顆粒>5mm) 4℃脂質(zhì)提取樣品-丙酮比例為1∶6(w/v),4℃下2小時(shí)(包括攪動(dòng)20分鐘)過(guò)濾在減壓下,耐有機(jī)溶劑的過(guò)濾器洗滌樣品-丙酮比例為1∶2(w/v),純的并且是冷的丙酮過(guò)濾在減壓下,耐有機(jī)溶劑的過(guò)濾器蒸發(fā)減壓下進(jìn)行油-水分離 4℃脂質(zhì)提取樣品乙酸乙酯比例為1∶2(w/v)a)純乙酸乙酯,30分鐘,4℃b)過(guò)濾在減壓下,耐有機(jī)溶劑的過(guò)濾器蒸發(fā)減壓下進(jìn)行a)能用異丙醇、叔-丁醇或乙酸乙酯代替乙醇。b)當(dāng)用叔-丁醇時(shí),溫度為25℃。表20.用抗乳血清為底物,37℃下,PH7.0,酶底物比例為1∶43,磷蝦脂質(zhì)的蛋白酶解的活性。時(shí)間 釋放的氨基酸酶解速率酶的比活性(mi n)(μmols) (μmols/min)(μmols/min/mg*)15 28.76 1.9170. 16430 43.74 0.9990.12517098.51 0.3220.050255177.26 0.3080.060*在水解介質(zhì)中的酶的總量
權(quán)利要求
1.一種從海洋的和水生的動(dòng)物材料中提取脂質(zhì)級(jí)分的方法,所述方法包括(a)將海洋的和水生的動(dòng)物材料置于優(yōu)選是丙酮的酮溶劑中,以從所述海洋的和水生的動(dòng)物材料中提取出可溶性脂質(zhì)級(jí)分;(b)將液體和固體成分分離;(c)通過(guò)蒸發(fā)液體成份中的溶劑,從液體成份中回收第一富含脂質(zhì)的級(jí)分;(d)將所述固體成分置于選自醇類(lèi)和醋酸的酯的有機(jī)溶劑中,其中醇類(lèi)優(yōu)選乙醇,異丙醇或叔丁醇,而醋酸的酯優(yōu)選乙酸乙酯,以從所述的海洋的和水生的動(dòng)物材料中提取剩余的可溶性脂質(zhì)級(jí)分;(e)將液體和固體成分分離;(f)通過(guò)蒸發(fā)液體成分中的溶劑,回收第二富含脂質(zhì)的級(jí)分。(g)回收固體成分。
2.如權(quán)利要求1中的方法,其中在步驟(a)中,溶劑和動(dòng)物材料被均化。
3.如權(quán)利要求1中的方法,其中在步驟(d)中,溶劑和固體成分被均化。
4.如權(quán)利要求1-3中的任一項(xiàng)的方法,其中步驟(b)和步驟(d)是在惰性氣氛下進(jìn)行的。
5.如權(quán)利要求1-4中的任一項(xiàng)的方法,其中步驟(b)和步驟(e)是通過(guò)選自過(guò)濾、離心和沉降的技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。
6.如權(quán)利要求1-5中的任一項(xiàng)的方法,其中步驟(c)和步驟(f)通過(guò)選自真空蒸發(fā)、閃蒸和噴霧干燥的技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。
7.如權(quán)利要求1-6中的任一項(xiàng)的方法,其中在步驟(b)后和步驟(c)前,該方法另外包含用溶劑洗滌固體成分和將得到的洗滌液加入到步驟(b)中的液體成分中的中間步驟。
8.如權(quán)利要求1-7中的任一項(xiàng)的方法,其中在步驟(e)后和步驟(f)前,該方法另外包含用在步驟(d)中選擇的有機(jī)溶劑洗滌固體成分的中間步驟。
9.如權(quán)利要求1-8中的任一項(xiàng)的方法,其中在步驟(a)前,將海洋的和水生的動(dòng)物材料細(xì)碎,優(yōu)選碎至平均顆粒大小為5mm或更小。
10.如權(quán)利要求1-9中的方法,其中步驟(a)和步驟(b)是在溶劑溫度約5℃或更低下進(jìn)行的。
11.如權(quán)利要求1-10的方法,其中所述的海洋的和水生的動(dòng)物為浮游動(dòng)物。
12.如權(quán)利要求11的方法,其中所述的浮游動(dòng)物為磷蝦。
13.如權(quán)利要求12的方法,其中所述的浮游動(dòng)物為哲水蚤屬。
14.如權(quán)利要求1-10的方法,其中所述的海洋的和水生的動(dòng)物為魚(yú)片的副產(chǎn)物。
15.一種從選自浮游動(dòng)物和優(yōu)選內(nèi)臟的魚(yú)片副產(chǎn)物的海洋的和水生的動(dòng)物材料中提取脂質(zhì)級(jí)分的方法,所述方法包括(a)將所述動(dòng)物材料置于優(yōu)選為丙酮的酮溶劑中以從所述的海洋的和水生的動(dòng)物材料中提取可溶性脂質(zhì)部分;(b)將液體和固體成分分離;(c)通過(guò)蒸發(fā)存在于液體成分中的溶劑來(lái)從液體成分中回收富含脂質(zhì)的級(jí)分;(d)回收固體成分。
16.如權(quán)利要求15的方法,其中動(dòng)物材料為磷蝦。
17.如權(quán)利要求15的方法,其中動(dòng)物材料為哲水蚤屬。
18.如權(quán)利要求15-17的方法,其中在步驟(a)中,溶劑和動(dòng)物材料被均化。
19.如權(quán)利要求15-18中的任一項(xiàng)的方法,其中步驟(b)和步驟(d)是在惰性氣氛下進(jìn)行的。
20.如權(quán)利要求15-19中的任一項(xiàng)方法,其中步驟(b)是通過(guò)選自過(guò)濾、離心和沉降的技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。
21.如權(quán)利要求15-20中的任一項(xiàng)的方法,其中步驟(c)是通過(guò)選自真空蒸發(fā)、閃蒸和噴霧干燥的技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。
22.如權(quán)利要求15-21的任一項(xiàng)的方法,其中在步驟(b)后和步驟(c)前,該方法另外包含用溶劑洗滌固體成分和將得到的洗滌液加入到步驟(b)的液體成分中的中間步驟。
23.如權(quán)利要求15-22中的任一項(xiàng)的方法,其中在步驟(a)前,將海洋的和水生的動(dòng)物材料細(xì)碎,優(yōu)選碎至平均顆粒大小為5mm或更小。
24.如權(quán)利要求15-23的方法,其中步驟(a)和步驟(b)是在溶劑溫度約5℃或更低下進(jìn)行。
25.磷蝦提取物,特征在于蝦青素中的類(lèi)胡蘿卜素的含量為至少約75并優(yōu)選至少約90μg/g的磷蝦提取物。
26.磷蝦提取物,特征在于角黃素中的類(lèi)胡蘿卜素的含量為至少約250μg/g和優(yōu)選至少約270μg/g的磷蝦提取物。
27.如權(quán)利要求1或15的脂質(zhì)提取方法,其中在最后步驟中回收的固體成分由含有活性酶的脫水的殘?jiān)M成。
全文摘要
提供一種用丙酮從海洋的和水生的動(dòng)物材料中提取脂質(zhì)級(jí)分的方法。得到的不溶的和顆粒部分優(yōu)選用醇或醋酸的酯進(jìn)行附加的溶劑提取,其中醇優(yōu)選乙醇、異丙醇或叔丁醇,而醋酸的酯,優(yōu)選乙酸乙酯,以從海洋的和水生的動(dòng)物材料中提取剩余可溶性脂質(zhì)部分。對(duì)殘留的不溶性顆粒成分也進(jìn)行回收,因?yàn)槠渲懈缓鞍踪|(zhì)并含有有效量的活性酶。本文也提供磷蝦提取物。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1324394SQ99812417
公開(kāi)日2001年11月28日 申請(qǐng)日期1999年10月21日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月21日
發(fā)明者A·比奧多因, G·馬丁 申請(qǐng)人:舍布魯克大學(xué)