專利名稱：眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝。
以往眼角膜病的治療常采用纖維連接蛋白，對機(jī)械損傷的治愈期較長;燒傷創(chuàng)面治療常采用油紗或霜?jiǎng)┩夥髣?chuàng)傷表面，難以滲填披覆全創(chuàng)面，引致感染、滲出較多或疼痛。
本發(fā)明的目的在于提供一種在體外不易變性、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝。
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作詳細(xì)描述。
本發(fā)明的組成成分為Ⅰ型膠原蛋白的原膠原分子，濃度為3mg/ml，分子結(jié)構(gòu)為[α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ)，肽鏈結(jié)構(gòu)為(G-X-Y)n的多聚體。
本發(fā)明的制備工藝以下步驟均在15℃以下的無菌室進(jìn)行。
一、分離肌腱機(jī)械拉斷大白鼠頸椎致死，鼠尾分離后浸泡于75%酒精及0.1%新潔爾滅，洗凈，無菌術(shù)式分離鼠尾肌腱，稱重。
二、水洗肌腱用蒸餾水洗2次，后浸于蒸餾水，置4℃冰箱4小時(shí)待用。
三、酸溶用消毒濾紙吸干肌腱上的水份，溶于100倍重量體積的0.5M醋酸中，于4℃冰箱，酸溶48小時(shí)，并不斷振蕩。
四、鹽析將酸溶液進(jìn)行離心，10000rpm×30min×4℃～8℃，取上清液加入等倍體積的10%NaCl，4℃中鹽析過夜，沉淀物棄之。
五、再酸溶鹽析液離心，4000rpm×10min×4℃～8℃，取沉淀加入6倍體積的0.5M醋酸進(jìn)行酸溶，置4℃×4h后，成為膠原蛋白提取液。
六、透析將膠原蛋白提取液高速低溫沉淀，取上層膠液調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度為3mg/ml，置入透析袋，于4℃，對蒸餾水透析1天，連續(xù)3天，至pH＝5.5。
七、分裝透析物離心，10000rpm×10min×4℃～8℃，上清液分裝于安瓿，10℃，避光保存，即得制品。
實(shí)施例(一)分離肌腱取一只250g大白鼠，機(jī)械拉斷頸椎致死，鼠尾分離后浸泡于75%酒精500ml及0.1%新潔爾滅500ml中，洗凈，無菌術(shù)式分離鼠尾肌腱，稱重約0.85g。
(二)水洗肌腱用蒸餾水洗2次，后浸于蒸餾水，置4℃冰箱4小時(shí)待用。
(三)酸溶用消毒濾紙吸干肌腱上的水份，溶于0.5M醋酸中，于4℃冰箱，酸溶48小時(shí)，并不斷振蕩。
(四)鹽析將酸溶液進(jìn)行離心，10000rpm×30min×4℃～8℃，取50ml上清液加入10%NaCl50ml，4℃中鹽析過夜，沉淀物棄之。
(五)再酸溶鹽析液離心，4000rpm×10min×4℃～8℃，取沉淀加入6倍體積的0.5M醋酸進(jìn)行酸溶，置4℃×4h后，成為膠原蛋白提取液。
(六)透析將膠原蛋白提取液高速低溫沉淀，取上層膠液調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度為3mg/ml，置入透析袋，于4℃，對1000ml無菌蒸餾水透析1天，連續(xù)3天，至pH＝5.5。
(七)分裝透析物離心，10000rpm×10min×4℃～8℃，上清液分裝于安瓿，10℃，避光保存，得1.5ml/安瓿膠原溶液。
本發(fā)明不限于上述一個(gè)實(shí)施例。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為純生化制劑，該溶液原膠原分子易在創(chuàng)傷表面聚合，能明顯地促進(jìn)眼角膜創(chuàng)傷和燒傷的愈合，無任何副作用。
權(quán)利要求
1.一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液，其特征在于該溶液的組成成分為Ⅰ型膠原蛋白的原膠原分子，濃度為3mg/ml；其分子結(jié)構(gòu)為[a1(Ⅰ)]2a2(Ⅰ)，肽鏈結(jié)構(gòu)為(G-X-Y)n的多聚體。
2.一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液的制備工藝，其特征在于A.分離肌腱機(jī)械拉斷大白鼠頸椎致死，鼠尾分離后浸泡于75%酒精及0.1%新潔爾滅，洗凈，無菌術(shù)式分離鼠尾肌腱，稱重;B.水洗肌腱用蒸餾水洗2次，后浸于蒸餾水，置4℃冰箱4小時(shí)待用;C.酸溶用消毒濾紙吸干肌腱上的水份，溶于100倍重量體積的0.5M醋酸中，于4℃冰箱，酸溶48小時(shí)，并不斷振蕩;D.鹽析將酸溶液進(jìn)行離心，10000rpm×30min×4℃～8℃，取上清液加入等倍體積的10%NaCl，4℃中鹽析過夜，沉淀物棄之;E.再酸溶鹽析液離心，4000rpm×10min×4℃～8℃，取沉淀加入6倍體積的0.5M醋酸進(jìn)行酸溶，置4℃×4h后，成為膠原蛋白提取液;F.透析將膠原蛋白提取液高速低溫沉淀，取上層膠液調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度為3mg/ml，置入透析袋，于4℃，對蒸餾水透析1天，連續(xù)3天，至pH＝5.5;G.分裝透析物離心，10000rpm×10min×4℃～8℃，上清液分裝于安瓿，10℃，避光保存，即得制品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的眼角膜外用和燒傷用膠原溶液的制備工藝，其特征在于所述各步驟均在15℃以下的無菌室進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝，該溶液的組成成分為I型膠原蛋白的原膠原分子，濃度為3mg/ml，分子結(jié)構(gòu)為[α
文檔編號(hào)A61K9/08GK1080872SQ9310434
公開日1994年1月19日 申請日期1993年4月15日 優(yōu)先權(quán)日1993年4月15日
發(fā)明者馬福廣, 李芳 , 劉錫粦, 甄兆忠 申請人:廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院