本發(fā)明涉及用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的藥物、用于其的構(gòu)建體和方法。

背景技術(shù)：

1、遺傳性疾病是由基因中發(fā)生了某種異常，其基因表達(dá)降低或消失，或者基因表達(dá)量增加等基因未正常表達(dá)而引起的。另外，在這樣的遺傳性疾病中，無義突變型的遺傳性疾病是由于基因上的點(diǎn)突變而形成早期終止密碼子，阻礙蛋白質(zhì)的表達(dá)而引起的疾病。在mrna上，當(dāng)終止密碼子出現(xiàn)在從原始終止密碼子起的上游側(cè)(5’末端側(cè))時(shí)，翻譯得到的蛋白質(zhì)變短，不能得到功能性蛋白質(zhì)，表現(xiàn)出遺傳性疾病。

2、另外，由于移碼突變，也有在本來的位置以外出現(xiàn)終止密碼子的情況，在基因中發(fā)生3的倍數(shù)以外數(shù)量的堿基的缺失、插入等，翻譯時(shí)的閱讀框架(reading?frame)偏離，由此可能發(fā)生遺傳性疾病。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、解決問題的方法

2、因此，本發(fā)明提供以下內(nèi)容。

3、(項(xiàng)目1)

4、一種藥物，其特征在于，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

5、cas核酸酶和/或包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

6、包含與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸，

7、其中，該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

8、(項(xiàng)目2)

9、根據(jù)上述項(xiàng)目所述的藥物，其中，該藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，所述構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼所述cas核酸酶的序列、使導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

10、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

11、(項(xiàng)目3)

12、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

13、(項(xiàng)目4)

14、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

15、(項(xiàng)目5)

16、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

17、(項(xiàng)目6)

18、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

19、(項(xiàng)目6a)

20、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

21、(項(xiàng)目6b)

22、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

23、(項(xiàng)目6c)

24、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分(mit?specificity?score)值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

25、(項(xiàng)目a1)

26、一種構(gòu)建體，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該構(gòu)建體包含在載體中，該構(gòu)建體包含：對細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼cas核酸酶的序列、使導(dǎo)入該載體后的該細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

27、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

28、(項(xiàng)目a2)

29、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

30、(項(xiàng)目a3)

31、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

32、(項(xiàng)目a4)

33、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

34、(項(xiàng)目a5)

35、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

36、(項(xiàng)目a5a)

37、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

38、(項(xiàng)目a5b)

39、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

40、(項(xiàng)目a5c)

41、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

42、(項(xiàng)目b1)

43、一種構(gòu)建體，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該構(gòu)建體包含：對細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼cas核酸酶的序列、使在該細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

44、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

45、(項(xiàng)目b2)

46、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

47、(項(xiàng)目b3)

48、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

49、(項(xiàng)目b4)

50、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

51、(項(xiàng)目b4a)

52、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

53、(項(xiàng)目b4b)

54、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

55、(項(xiàng)目b4c)

56、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

57、(項(xiàng)目cc1)

58、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

59、cas核酸酶，

60、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna，和

61、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

62、(項(xiàng)目cc2)

63、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

64、所述cas核酸酶，和

65、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

66、(項(xiàng)目cc3)

67、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，所述組合組合地包含：

68、所述cas核酸酶，和

69、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

70、(項(xiàng)目cc4)

71、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

72、所述cas核酸酶，和

73、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

74、(項(xiàng)目cc5)

75、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

76、(項(xiàng)目cc5a)

77、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

78、(項(xiàng)目cc5b)

79、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

80、(項(xiàng)目cc5c)

81、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

82、(項(xiàng)目cd1)

83、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

84、包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸，

85、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna，和

86、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

87、(項(xiàng)目cd2)

88、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

89、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

90、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

91、(項(xiàng)目cd3)

92、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，該組合組合地包含：

93、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

94、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

95、(項(xiàng)目cd4)

96、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

97、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

98、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

99、(項(xiàng)目cd5)

100、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

101、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

102、(項(xiàng)目cd6)

103、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

104、(項(xiàng)目cd7)

105、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

106、(項(xiàng)目cd8)

107、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

108、(項(xiàng)目cd8a)

109、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

110、(項(xiàng)目cd8b)

111、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

112、(項(xiàng)目cd8c)

113、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

114、(項(xiàng)目ce1)

115、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

116、包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸，

117、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸，和

118、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

119、(項(xiàng)目ce2)

120、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

121、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

122、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

123、(項(xiàng)目ce3)

124、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，該組合組合地包含：

125、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

126、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

127、(項(xiàng)目ce4)

128、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

129、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

130、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

131、(項(xiàng)目ce5)

132、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

133、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

134、(項(xiàng)目ce6)

135、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

136、(項(xiàng)目ce7)

137、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

138、(項(xiàng)目ce8)

139、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

140、(項(xiàng)目ce8a)

141、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

142、(項(xiàng)目ce8b)

143、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

144、(項(xiàng)目ce8c)

145、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

146、(項(xiàng)目cf1)

147、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

148、cas核酸酶，

149、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸，和

150、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

151、(項(xiàng)目cf2)

152、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

153、所述cas核酸酶，和

154、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

155、(項(xiàng)目cf3)

156、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，該組合組合地包含：

157、所述cas核酸酶，和

158、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

159、(項(xiàng)目cf4)

160、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

161、所述cas核酸酶，和

162、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

163、(項(xiàng)目cf5)

164、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

165、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

166、(項(xiàng)目cf6)

167、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

168、(項(xiàng)目cf7)

169、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

170、(項(xiàng)目cf8)

171、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

172、(項(xiàng)目cf8a)

173、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

174、(項(xiàng)目cf8b)

175、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

176、(項(xiàng)目cf8c)

177、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

178、(項(xiàng)目c1)

179、一種方法，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該方法包括：

180、將載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，其中該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列；以及

181、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

182、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

183、(項(xiàng)目c2)

184、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

185、(項(xiàng)目c3)

186、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

187、(項(xiàng)目c4)

188、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

189、(項(xiàng)目c5)

190、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

191、(項(xiàng)目c5a)

192、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

193、(項(xiàng)目c5b)

194、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

195、(項(xiàng)目c5c)

196、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

197、(項(xiàng)目d1)

198、一種制造用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的產(chǎn)品的方法，該方法包括：

199、檢測成為該狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的原因的一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變的步驟，

200、基于該移碼突變，設(shè)計(jì)構(gòu)建體的步驟，其中，該構(gòu)建體包含：對細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

201、制造該構(gòu)建體并插入到載體中的步驟，以及

202、制造包含該載體的產(chǎn)品的步驟；

203、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

204、(項(xiàng)目d2)

205、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

206、(項(xiàng)目d3)

207、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

208、(項(xiàng)目d4)

209、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中滿足規(guī)定的得分。

210、(項(xiàng)目d4a)

211、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

212、(項(xiàng)目d4b)

213、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計(jì)工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

214、(項(xiàng)目d4c)

215、根據(jù)上述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計(jì)工具中的其相應(yīng)值以上。

216、(項(xiàng)目ea1)

217、一種用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療患者中一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的方法，該方法包括：

218、對來自該患者的核酸中的該靶核酸序列進(jìn)行測序的步驟，

219、基于該測序，選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟，

220、將載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，其中該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，以及

221、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

222、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

223、(項(xiàng)目ea2)

224、根據(jù)上述項(xiàng)目中所述的方法，其還包括上述項(xiàng)目的任意一個(gè)或多個(gè)特征。

225、(項(xiàng)目eb1)

226、一種載體的用途，其用于制造用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療患者中一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的藥物，其中，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，該改變、預(yù)防或治療通過包括下述步驟的方法來實(shí)現(xiàn)：

227、對來自該患者的核酸中的該靶核酸序列進(jìn)行測序的步驟，

228、基于該測序，選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟，

229、將該載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，以及

230、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

231、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

232、(項(xiàng)目eb2)

233、根據(jù)上述項(xiàng)目中所述的用途，其還包括上述項(xiàng)目的任意一個(gè)或多個(gè)特征。

234、(項(xiàng)目ec1)

235、一種用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個(gè)部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療患者中一個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的藥物，該藥物包含：

236、cas核酸酶，

237、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna，和

238、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用，

239、該改變、預(yù)防或治療通過包括下述步驟的方法來實(shí)現(xiàn)：

240、對來自該患者的核酸中的靶核酸序列進(jìn)行測序的步驟，

241、基于該測序，選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟，

242、將載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，其中，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動(dòng)子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動(dòng)子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的該grna的序列，以及

243、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

244、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

245、(項(xiàng)目ec2)

246、根據(jù)上述項(xiàng)目中所述的藥物，其還包括上述項(xiàng)目的任意一個(gè)或多個(gè)特征。

247、在本發(fā)明中，上述一個(gè)或多個(gè)特征除了寫明的組合之外，還旨在可以進(jìn)一步組合來提供。需要說明的是，根據(jù)需要，在閱讀并理解以下的詳細(xì)說明后，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠認(rèn)識(shí)到本發(fā)明的進(jìn)一步的實(shí)施方式及優(yōu)點(diǎn)。

248、需要說明的是，通過參照以下的發(fā)明的實(shí)施方式的項(xiàng)及附圖，上述以外的本發(fā)明的特征及顯著的作用、效果，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將變得明確。

249、發(fā)明的效果

250、根據(jù)本發(fā)明，通過以細(xì)胞內(nèi)基因組中的靶核酸序列為靶，將發(fā)生了移碼突變的基因復(fù)原為正常序列或與其近似的序列，從而可廣泛應(yīng)用于各種遺傳性疾病的治療或許多突變矯正。