本發(fā)明涉及生物技術(shù)及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地，本發(fā)明涉及一種從天然植物果核中提取的多種抗菌成分的噴劑及其用途。
背景技術(shù)：
：腳氣是足癬的俗名，足癬是指發(fā)生在趾掌面的霉菌性皮膚病，也是一種極常見(jiàn)的真菌感染性皮膚病。成人中70％-80％的人有腳氣，只是輕重不同而已。足癬常在夏季加重，冬季減輕，也有人終年不愈。足癬發(fā)生時(shí)，真菌生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生一些氣味，特別是被細(xì)菌感染后，分解蛋白，會(huì)產(chǎn)生一股令人作嘔的臭氣，中醫(yī)稱為“臭田螺”味。引起足癬的真菌叫皮膚癬菌,是一種喜歡生活在皮膚角質(zhì)層中的真菌。它們有一些生活在土壤里，稱為親土性真菌；有一些生活在動(dòng)物皮毛上，稱為親動(dòng)物性真菌；另一些自然生活在人的皮毛中稱為親人性真菌。這三類真菌都可以感染人類，因?yàn)楦腥就緩教?，我們的皮膚真菌感染才常常會(huì)復(fù)發(fā)。真菌具有難以殺滅的特點(diǎn)，在-6℃左右的環(huán)境里能長(zhǎng)久地存活；在120℃的高溫中，10分鐘內(nèi)不會(huì)死亡；在脫離活體的毛發(fā)、指(趾)甲、皮屑等上面，也可以保持毒性一年以上。針對(duì)于不同類型的腳氣、腳癬、手癬、股癬、體癬病及霉菌性生殖疾病的藥物主要采用的是化學(xué)抗生素類藥物的治療，主要有烯丙胺類、硫代氨甲酸酯類、唑類等，分別能夠造成角鯊烯積聚及抑制麥角固醇合成。但化學(xué)抗生素類藥物容易產(chǎn)生因抗生素濫用導(dǎo)致的耐藥性、依賴性等問(wèn)題，因此亟待找到其他的藥物來(lái)治療或者預(yù)防真菌類疾病。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種植物提取物及其制備方法和用途，以至少解決相關(guān)技術(shù)中使用化學(xué)抗生素藥物治療真菌類疾病所導(dǎo)致的問(wèn)題。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種植物提取物的制備方法，該制備方法包括如下步驟：取植物果核加入干餾釜，加熱至160℃時(shí)，恒溫1小時(shí)，然后溫度升至240℃維持2小時(shí)，其中，植物果核包括以下至少之一：石榴皮、烏梅核、杏仁殼、山楂殼、葡萄籽、楊梅殼、椰子殼；收集各時(shí)段的干餾液，混合，靜置3天，沉降分離，用虹吸法分離出透明層液體；在透明層液體中加入活性炭，收集過(guò)濾液置蒸餾釜中，115℃蒸餾2小時(shí)，收取蒸餾液；將蒸餾液用滅菌水稀釋至pH值2.48，過(guò)濾并收集過(guò)濾液，即得產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種植物提取物，所述植物提取物由上述的制備方法制備而來(lái)。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種上述的植物提取物在制備治療真菌類癬病的噴劑中的應(yīng)用，將所述植物提取物與水按照1:4的體積比例混合，得到治療真菌類癬病的噴劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種上述的植物提取物在制備治療或預(yù)防皮膚及陰部瘙癢和褥瘡的噴劑中的應(yīng)用，將所述植物提取物與水按照1:(5-10)的體積比例混合，得到治療或預(yù)防皮膚及陰部瘙癢、褥瘡的噴劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種上述的植物提取物在制備治療細(xì)菌性和真菌性痢疾病的制劑中的應(yīng)用，將所述植物提取物與水按照1:(2-6)的體積比例混合，得到治療細(xì)菌性和真菌性痢疾病的制劑。本發(fā)明的含植物提取物成分的噴劑或者制劑，配方中包含從植物果核中提取的多種抗菌成分的復(fù)合體，其成份含有酚類20-45％，有機(jī)酸5-45％，酮類5-20％，呋喃類5-15％，其他微量的有脂類、醇類和醛類等。制備該復(fù)合體的原料來(lái)源廣泛，可以使用石榴皮、烏梅核、杏仁殼、葡萄籽、楊梅核、椰子殼、山楂殼等多種植物果核。本發(fā)明的植物提取物是植物抗生素混合液，是從天然植物果核中提取的多種抗菌成分的復(fù)合體原液成分組成。該植物抗生素易被皮膚吸收，抗真菌和細(xì)菌能力強(qiáng)。該植物抗生素屬酸性物質(zhì)，pH值可以濃縮或稀釋至2.0-4.0，有效殺滅皮膚表面真菌。本發(fā)明的植物提取物通過(guò)不同倍數(shù)的稀釋后，可應(yīng)用于制備不同類型的腳氣、腳癬、手癬、股癬、體癬病及霉菌性生殖疾病的藥物，也用于制備陰部及皮膚的各種瘙癢及褥瘡的藥物，還可用于制備細(xì)菌性和真菌性痢疾病的藥物。該植物提取物具有高效殺真菌、復(fù)發(fā)率更低、具有抗炎活性，抗真菌范圍廣、無(wú)激素，無(wú)過(guò)敏物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)人體安全，使用方便。本發(fā)明的植物提取物的制備方法工藝簡(jiǎn)單、易于量產(chǎn)；并且相對(duì)于相關(guān)技術(shù)中采用乙醇浸泡植物果核并低溫蒸餾真空濃縮的制備方式而言，本發(fā)明的植物提取物的制備方法無(wú)需使用乙醇，原料更少，生產(chǎn)過(guò)程更為安全，成本也更為低廉。具體實(shí)施方式本發(fā)明實(shí)施例針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種使用方便、安全的含植物提取物成分的植物噴劑。在一個(gè)實(shí)施例中，該植物提取物的制備方法采用常規(guī)的混勻方法，采用常規(guī)的溶解法溶解溶液。取石榴皮50份、烏梅核80份、杏仁殼30份加入干餾釜，加熱至160℃時(shí)，恒溫1小時(shí)，然后溫度升至240℃維持2小時(shí)；收集各時(shí)段的干餾液，混合，靜置3天，沉降分離，用虹吸法分離出透明層液體；在透明層液體中加入活性炭，收集過(guò)濾液置蒸餾釜中，115℃蒸餾2小時(shí)，收取蒸餾液；將蒸餾液用滅菌水稀釋至pH值2.48，過(guò)濾并收集過(guò)濾液，即得產(chǎn)品。上述制備方法得到的植物提取物可用于制備以下疾病的預(yù)防及治療的藥物：1、真菌引起的腳氣、腳癬、手癬、股癬、體癬病及霉菌性生殖疾病。制備方法為植物提取物原液與水按1：4的體積比例混合，pH值2-5；2、皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病的預(yù)防及治療。在殺菌的同時(shí)，還能有效的預(yù)防和調(diào)節(jié)皮膚表面的微生態(tài)環(huán)境，預(yù)防皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病，增強(qiáng)自然防御功能。使用更方便、更安全，對(duì)人體有益無(wú)害。制備方法為植物提取物原液與水按1：(5-10)的體積比例混合，pH值2-4；3、用于細(xì)菌性和真菌性痢疾病的干預(yù)藥物。制備方法為植物提取物原液與水按1：(2-6)的比例混合。本發(fā)明實(shí)施例根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》，針對(duì)植物提取物樣品進(jìn)行pH值、感觀檢測(cè)及其穩(wěn)定性(生物法)檢測(cè)，其證明結(jié)果如下：1、植物提取物樣品中微生物污染鑒定1.1試驗(yàn)材料(1)受試樣品：植物提取物。(2)儀器設(shè)備：電熱恒溫培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱。1.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版“GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)”。(2)檢驗(yàn)環(huán)境：溫度23℃；相對(duì)濕度45％。1.3試驗(yàn)結(jié)果表1：植物提取物樣品原液的微生物污染檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)值實(shí)測(cè)值細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/ml)≤2000大腸菌群不得檢出未檢出綠膿桿菌不得檢出未檢出溶血性鏈球菌不得檢出未檢出金黃色葡萄球菌不得檢出未檢出真菌菌落總數(shù)(cfu/ml)≤10001.4結(jié)論所試植物提取物樣品的細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/m1)、大腸菌群、綠膿桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、真菌菌落總數(shù)(cfu/m1)均符合《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)的規(guī)定。2、所試植物提取物樣品的抑菌性能鑒定2.1試驗(yàn)材料(1)試驗(yàn)菌株：白色念珠菌(ATCC10231)培養(yǎng)至第6代，由山東省疾病預(yù)防控制中心提供。(2)受試樣品：所試植物提取物樣品。(3)培養(yǎng)基：沙氏瓊脂培養(yǎng)基，壓力蒸汽滅菌后備用。2.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù):《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)。(2)試驗(yàn)方法：將受試菌24小時(shí)斜面培養(yǎng)物洗下，磷酸鹽緩沖液(PSB)洗下，制作菌片備用。取被檢樣液4管(每管5毫升，試驗(yàn)組)和PBS液4管(每管5毫升，對(duì)照組)。取上述各菌的懸液，分別在上述試驗(yàn)管和對(duì)照管中各滴加100微升，均勻混合，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘，每管吸取樣液0.5毫升加入含4.5毫升PBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng)稀釋，然后取適當(dāng)稀釋度，分別吸取1毫升，置于四個(gè)平皿，用涼至40℃-45℃的沙氏瓊脂培養(yǎng)基15毫升作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35℃±2℃培養(yǎng)72小時(shí)，作活菌菌落計(jì)數(shù)。并計(jì)算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％；其中，X：抑菌率％；Nc：對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；Ns：被試樣品平均菌落數(shù)。(3)實(shí)驗(yàn)條件：19℃-21℃。2.3結(jié)果所試植物提取物樣品對(duì)白色念珠菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為98.49％、98.43％、98.48％、99.17％。具體結(jié)果見(jiàn)表2。表2：植物提取物樣品的穩(wěn)定性檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果2.4結(jié)論所試植物提取物樣品對(duì)白色念珠菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為98.49％、98.43％、98.48％、99.17％。下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，這些實(shí)施例僅用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1在本發(fā)明的實(shí)施例1中采用的含植物提取物成分的婦用制劑噴劑含有多種抗菌成分，無(wú)激素、無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)刺激、無(wú)毒副作用。該婦用制劑噴劑可用于以下疾病的預(yù)防及治療：不同類型的腳氣、腳癬、手癬、股癬、體癬病及霉菌性生殖疾病。該婦用制劑噴劑的制備方法為將植物提取物原液與水按1：4的體積比例混合，稀釋至pH值2-5；本實(shí)施例根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》，針對(duì)婦用制劑噴劑樣品的pH值及感觀檢測(cè)、多次完整皮膚刺激試驗(yàn)以及急性眼刺激試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，其證明結(jié)果如下：1、婦用制劑噴劑樣品的pH值及感觀檢測(cè)1.1試驗(yàn)材料(1)受試樣品：婦用制劑噴劑。(2)儀器設(shè)備：UB-7型酸度計(jì)。(3)校正用緩沖液：鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液(pH值4.00，25℃)，磷酸鹽緩沖液(pH值6.86，25℃)，來(lái)自上海雷磁·創(chuàng)益儀器儀表有限公司。1.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù):《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版“2.2.1.4消毒劑pH值測(cè)定”。(2)檢驗(yàn)環(huán)境：溫度23℃；相對(duì)濕度45％。(3)操作步驟：取送檢樣品目測(cè)感官指標(biāo)，測(cè)定樣品原液pH值。1.3試驗(yàn)結(jié)果表3：婦用制劑噴劑樣品原液的pH值測(cè)定結(jié)果1.4結(jié)論(1)所試婦用制劑噴劑樣品為淡黃色液體。(2)所試婦用制劑噴劑，其原液的pH值為3.71。2、所試婦用制劑噴劑樣品的多次完整皮膚刺激試驗(yàn)2.1材料和動(dòng)物(1)受試樣品：婦用制劑噴劑。(2)動(dòng)物：普通級(jí)新西蘭兔3只，由濟(jì)南西嶺角養(yǎng)殖繁育中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(魯)20150001。(3)環(huán)境條件：屏障環(huán)境動(dòng)物室，使用許可證號(hào)：SYXK(魯)20140010，溫度20℃-25℃、相對(duì)濕度50-70％。兔飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)20140008。2.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)。(2)樣品配制：使用植物提取物原液進(jìn)行試驗(yàn)。(3)試驗(yàn)步驟：試驗(yàn)前日，將實(shí)驗(yàn)兔背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去毛范圍左、右各約3厘米×3厘米。采用自身對(duì)照法進(jìn)行試驗(yàn)，取0.5毫升受試樣品，涂在右側(cè)所暴露的皮膚上，左側(cè)暴露皮膚作為對(duì)照。每只實(shí)驗(yàn)兔涂抹4小時(shí)后，用溫水清洗涂抹部位的皮膚，除去殘留物；連續(xù)涂抹14天。分別在每次涂抹后24h觀察記錄涂抹部位的皮膚反應(yīng)，按2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行皮膚反應(yīng)積分和刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。2.3試驗(yàn)結(jié)果去除受試物后，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部位未出現(xiàn)紅斑、水腫等異常變化，該樣品每天每只動(dòng)物積分均值均為0。表4：婦用制劑噴劑樣品的多次皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果2.4試驗(yàn)結(jié)論:根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分和剌激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，植物噴劑樣品原液用實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)行多次完整皮膚刺激試驗(yàn)對(duì)皮膚屬無(wú)刺激性。3、所試婦用制劑噴劑的急性眼刺激試驗(yàn)3.1材料和動(dòng)物(1)受試樣品：婦用制劑噴劑。(2)受試動(dòng)物：普通級(jí)新西蘭兔3只，由濟(jì)南西嶺角養(yǎng)殖繁育中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(魯)20150001。(3)環(huán)境條件：屏障環(huán)境動(dòng)物室，使用許可證號(hào)：SYXK(魯)20140010，溫度2-25℃、相對(duì)濕度50-70％。兔飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)20140008。3.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版“2.3.4急性眼剌激試驗(yàn)”。(2)樣品配制：使用樣品原液作為受試物進(jìn)行試驗(yàn)。(3)試驗(yàn)步驟：吸取受試物0.1毫升，滴入實(shí)驗(yàn)兔一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)眼以生理鹽水作為正常對(duì)照。滴受試物后，將眼被動(dòng)閉合4秒，30秒后用生理鹽水沖洗，于滴眼后1小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)肉眼觀察實(shí)驗(yàn)兔眼結(jié)膜、虹膜合角膜的損傷和恢復(fù)情況，并對(duì)刺激反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分，并分別計(jì)算每只動(dòng)物在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的角膜損害、虹膜損害、結(jié)膜充血和結(jié)膜水腫四方面的平均評(píng)分，并按眼刺激分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定受試物對(duì)眼睛的刺激強(qiáng)度。3.3試驗(yàn)結(jié)果3只實(shí)驗(yàn)兔在角膜損害、虹膜損害、結(jié)膜充血和結(jié)膜水腫四方面的平均評(píng)分分別為：角膜損害0分；虹膜損害0分；結(jié)膜充血1.67分；結(jié)膜水腫1.33分，并且在7天之內(nèi)全部動(dòng)物的眼刺激反應(yīng)完全恢復(fù)。表5：婦用制劑噴劑樣品對(duì)實(shí)驗(yàn)兔眼刺激反應(yīng)評(píng)分注：平均評(píng)分系指24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)評(píng)分之和除以觀察時(shí)間段數(shù)33.4結(jié)論根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分和刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，植物噴劑樣品原液用實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)行急性眼刺激試驗(yàn)屬無(wú)刺激性。實(shí)施例2在本發(fā)明的實(shí)施例2中采用的植物提取物以多種抗菌成分的復(fù)合物為主要成分，無(wú)激素、無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)刺激、無(wú)毒副作用。該植物提取物可用于制備皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病的預(yù)防及治療的藥物。制備得到的藥物在殺菌的同時(shí)，還能有效的預(yù)防和調(diào)節(jié)皮膚表面的微生態(tài)環(huán)境，預(yù)防皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病，增強(qiáng)自然防御功能；使用更方便、更安全，對(duì)人體有益無(wú)害。制備作為用于皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病的藥物的方法：將植物提取物原液與水按1：(5-10)的體積比例混合，pH值2-4。在本實(shí)施例中根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》，針對(duì)用于皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病的植物噴劑的樣品的pH值及感觀檢測(cè)、其抑菌性能、陰道粘膜刺激試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，其證明結(jié)果如下：1、植物噴劑樣品的抑菌性能檢測(cè)。1.1試驗(yàn)材料(1)試驗(yàn)菌株：白色念珠菌(ATCC10231)培養(yǎng)至第6代，由山東省疾病預(yù)防控制中心提供。(2)受試樣品：用于皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病的植物噴劑。(3)收試載體：布片。(4)培養(yǎng)基：沙氏瓊脂培養(yǎng)基，壓力蒸汽滅菌后備用。1.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)。(2)操作步驟：(1)試驗(yàn)條件：19℃-21℃。(2)將受試菌24小時(shí)斜面培養(yǎng)物洗下，胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TrypticaseSoyBroth，簡(jiǎn)稱為T(mén)SB)配置懸菌液，制作菌片備用。分別取樣品5g，加菌片1片，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用至2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘，取出，加入5毫升，稀釋液試管中，充分混勻，適當(dāng)稀釋作為試驗(yàn)組。取菌片1片直接加入5毫升稀釋液試管中，充分混勻，適當(dāng)稀釋作為對(duì)照組。分別吸取1毫升，置于兩個(gè)平皿，用涼至40℃-45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15毫升作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35℃±2℃培養(yǎng)72小時(shí)，作活菌菌落計(jì)數(shù)。并計(jì)算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％其中，X：抑菌率％；Nc：對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；Ns：被試樣品平均菌落數(shù)。1.3試驗(yàn)結(jié)果所試植物噴劑樣品對(duì)白色念珠菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為90.32％、92.48％、97.74％、97.51％。具體結(jié)果見(jiàn)表6。表6：植物噴劑的抑菌性能測(cè)試結(jié)果1.4結(jié)論所試植物噴劑對(duì)白色念珠菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為88.49％、94.70％、97.48％、99.17％。2、植物噴劑的樣品抑菌性能鑒定2.1試驗(yàn)材料(1)試驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌(ATCC6538)培養(yǎng)至第6代，大腸桿菌(8099)培養(yǎng)至第6代，由山東省疾病預(yù)防控制中心提供。(2)受試樣品：用于皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病的植物噴劑。(3)培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，壓力蒸汽滅菌后備用。2.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)。(2)操作步驟：將受試菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成適宜濃度的菌懸液備用。取被檢樣液4管(每管5m1，試驗(yàn)組)和PBS液4管(每管5ml，對(duì)照組)。取上述各菌的懸液，分別在上述試驗(yàn)管和對(duì)照管中各滴加100微升，均勻混合，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘，每管吸取樣液0.5好似加入含4.5毫升PBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng)稀釋，然后取適當(dāng)稀釋度，分別吸取1毫升，置于兩個(gè)平皿，用涼至40℃-45℃4的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15毫升作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35℃±2℃培養(yǎng)48小時(shí)，作活菌菌落計(jì)數(shù)。并計(jì)算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％其中，X：抑菌率％；Nc：對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；Ns：被試樣品平均菌落數(shù)。(3)試驗(yàn)條件：19℃-21℃。2.3試驗(yàn)結(jié)果所試植物噴劑對(duì)金黃色葡萄球菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％；對(duì)大腸桿菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％。具體結(jié)果見(jiàn)表7和表8。表7：植物噴劑樣品對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌性能測(cè)試試驗(yàn)表8：植物噴劑樣品對(duì)大腸桿菌的抑菌性能測(cè)試試驗(yàn)結(jié)果2.4結(jié)論所試植物噴劑對(duì)金黃色葡萄球菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％；對(duì)大腸桿菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％。3、所試植物噴劑的陰道粘膜刺激試驗(yàn)3.1材料和動(dòng)物(1)受試樣品：用于皮膚及陰部的各種瘙癢、褥瘡等疾病的植物噴劑。(2)動(dòng)物：普通級(jí)新西蘭兔6只，由濟(jì)南西嶺角養(yǎng)殖繁育中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(魯)20150001。(3)環(huán)境條件：屏障環(huán)境動(dòng)物室，使用許可證號(hào)：SYXK(魯)20140010，溫度20℃-25℃、相對(duì)濕度50-70％。兔飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)20140008。3.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版“2.3.5項(xiàng)陰道粘膜刺激試驗(yàn)”。(2)樣品配制：使用樣品原液進(jìn)行試驗(yàn)。(3)試驗(yàn)步驟：將6只實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組3只。實(shí)驗(yàn)前檢查各動(dòng)物陰道口有無(wú)分泌物、充血和其他損傷情況，將鈍頭軟管(導(dǎo)管)與5mL的注射器相連。實(shí)驗(yàn)兔仰面固定，暴露會(huì)陰和陰道口，將導(dǎo)管用受試液濕潤(rùn)后輕柔地插入陰道4-5厘米，并用注射器緩慢注入2毫升受試液，輕柔地抽出導(dǎo)管。對(duì)照組用生理鹽水做同樣處理。24小時(shí)后采用氣栓法處死動(dòng)物，取出完整的陰道，并縱向切開(kāi)，肉眼觀察是否有出血、水腫等肉眼病變，選取陰道的兩端和中間三個(gè)部位進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋和切片，蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-Eosinstaining，簡(jiǎn)稱為HE)染色后，進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。根據(jù)病理檢查結(jié)果，對(duì)陰道粘膜的刺激反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分，計(jì)算陰道粘膜的刺激反應(yīng)的平均積分，求得刺激指數(shù)，進(jìn)行刺激強(qiáng)度分級(jí)。3.3試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物陰道均未見(jiàn)充血、水腫等明顯肉眼病理變化，組織病理學(xué)檢查見(jiàn)表9。試驗(yàn)組陰道粘膜刺激反應(yīng)平均積分為1.89，對(duì)照組平均積分為1.0，陰道粘膜刺激指數(shù)為0.89。表9：植物噴劑的陰道粘膜刺激反應(yīng)評(píng)分3.4試驗(yàn)結(jié)論根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》陰道粘膜剌激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，植物噴劑樣品原液對(duì)陰道粘膜屬無(wú)刺激性。實(shí)施例3在本發(fā)明的實(shí)施例3中采用的植物提取物以多種抗菌成分的復(fù)合物為主要成分，無(wú)激素、無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)刺激、無(wú)毒副作用。該植物提取物可用于制備細(xì)菌性和真菌性痢疾的藥物。制備用于細(xì)菌性和真菌性痢疾的藥物的方法：將植物提取物原液與水按1：(2-6)的體積比例混合。制備得到的植物制劑在殺菌的同時(shí)，還能有效的改善體內(nèi)環(huán)境及微生態(tài)環(huán)境，增強(qiáng)自然防御功能。使用更方便、更安全，對(duì)人體有益無(wú)害。在本實(shí)施例中，根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》，針對(duì)其樣品的pH值、感觀檢測(cè)以及樣品微生物污染鑒定、其抑菌性能進(jìn)行檢測(cè)，其證明結(jié)果如下：1、植物制劑樣品的pH值及感觀檢測(cè)1.1試驗(yàn)材料(1)受試樣品：用于細(xì)菌性和真菌性痢疾的植物制劑。(2)儀器設(shè)備：UB-7型酸度計(jì)。(3)校正用緩沖液：鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液(pH值4.00，25℃)，磷酸鹽緩沖液(pH值6.86，25℃)，來(lái)自上海雷磁·創(chuàng)益儀器儀表有限公司。1.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依：《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版“2.2.1.4消毒劑pH值測(cè)定”。(2)檢驗(yàn)環(huán)境：溫度23℃；相對(duì)濕度45％。(3)操作步驟：取送檢樣品目測(cè)感官指標(biāo)，測(cè)定樣品原液pH值。1.3試驗(yàn)結(jié)果表10：植物制劑樣品原液的pH值測(cè)定結(jié)果1.4結(jié)論(1)所試植物制劑樣品為淡黃色液體。(2)所試植物制劑樣品原液的pH值為2.46。2、植物制劑樣品微生物污染鑒定2.1試驗(yàn)材料(1)試驗(yàn)樣品：植物制劑。(2)電熱恒溫培養(yǎng)箱。(3)霉菌培養(yǎng)箱。2.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版“GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)”。2.3試驗(yàn)結(jié)果表11：植物制劑樣品微生物污染檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)值實(shí)測(cè)值細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/ml)不得檢出未檢出大腸菌群不得檢出未檢出綠膿桿菌不得檢出未檢出溶血性鏈球菌不得檢出未檢出金黃色葡萄球菌不得檢出未檢出真菌菌落總數(shù)(cfu/ml)≤10002.4結(jié)論所試植物制劑的細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/m1)、大腸菌群、綠膿桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、真菌菌落總數(shù)(cfu/m1)均符合《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)的規(guī)定。3、植物制劑樣品抑菌性能鑒定3.1試驗(yàn)材料(1)試驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌(ATCC6538)培養(yǎng)至第6代，大腸桿菌(8099)培養(yǎng)至第6代，由山東省疾病預(yù)防控制中心提供。(2)受試樣品：植物制劑。(3)培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，壓力蒸汽滅菌后備用。3.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)。(2)操作步驟：將受試菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成適宜濃度的菌懸液備用。取被檢樣液4管(每管5m1，試驗(yàn)組)和PBS液4管(每管5ml，對(duì)照組)。取上述各菌的懸液，分別在上述試驗(yàn)管和對(duì)照管中各滴加100微升，均勻混合，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘，每管吸取樣液0.5好似加入含4.5毫升PBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng)稀釋，然后取適當(dāng)稀釋度，分別吸取1毫升，置于兩個(gè)平皿，用涼至40℃-45℃4的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15毫升作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35℃±2℃培養(yǎng)48小時(shí)，作活菌菌落計(jì)數(shù)。并計(jì)算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％其中，X：抑菌率％；Nc：對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；Ns：被試樣品平均菌落數(shù)。(3)試驗(yàn)條件：19℃-21℃。3.3試驗(yàn)結(jié)果所試植物制劑對(duì)金黃色葡萄球菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％；對(duì)大腸桿菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％。具體結(jié)果見(jiàn)表12和表13。表12：植物制劑樣品對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌性能測(cè)試結(jié)果表13：植物制劑樣品對(duì)大腸桿菌的抑菌性能測(cè)試結(jié)果3.4結(jié)論所試植物制劑對(duì)金黃色葡萄球菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％；對(duì)大腸桿菌作用2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘的平均抑菌率分別為100％、100％、100％、100％。4、所試植物制劑的急性眼刺激試驗(yàn)4.1材料和動(dòng)物(1)受試樣品：植物制劑，淡黃色液體。(2)受試動(dòng)物：普通級(jí)新西蘭兔3只，由濟(jì)南西嶺角養(yǎng)殖繁育中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(魯)20150001。(3)環(huán)境條件：屏障環(huán)境動(dòng)物室，使用許可證號(hào)：SYXK(魯)20140010，溫度2-25℃、相對(duì)濕度50-70％。兔飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)20140008。4.2試驗(yàn)方法(1)檢測(cè)依據(jù)：《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版“2.3.4急性眼剌激試驗(yàn)”。(2)樣品配制：使用樣品原液作為受試物進(jìn)行試驗(yàn)。(3)試驗(yàn)步驟：吸取受試物0.1毫升，滴入實(shí)驗(yàn)兔一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)眼以生理鹽水作為正常對(duì)照。滴受試物后，將眼被動(dòng)閉合4秒，30秒后用生理鹽水沖洗，于滴眼后1小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)肉眼觀察實(shí)驗(yàn)兔眼結(jié)膜、虹膜合角膜的損傷和恢復(fù)情況，并對(duì)刺激反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分，并分別計(jì)算每只動(dòng)物在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的角膜損害、虹膜損害、結(jié)膜充血和結(jié)膜水腫四方面的平均評(píng)分，并按眼剌激分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定受試物對(duì)眼睛的刺激強(qiáng)度。4.3試驗(yàn)結(jié)果3只實(shí)驗(yàn)兔在角膜損害、虹膜損害、結(jié)膜充血和結(jié)膜水腫四方面的平均評(píng)分分別為：角膜損害0分；虹膜損害0分；結(jié)膜充血1.67分；結(jié)膜水腫1.33分，并且在7天之內(nèi)全部動(dòng)物的眼刺激反應(yīng)完全恢復(fù)。表14：植物制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)兔眼刺激反應(yīng)評(píng)分注：平均評(píng)分系指24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)評(píng)分之和除以觀察時(shí)間段數(shù)3。4.4結(jié)論根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分和刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，植物制劑原液用實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)行急性眼刺激試驗(yàn)屬無(wú)刺激性。綜上所述，本發(fā)明的植物提取物配方中包含從植物果核中提取的多種抗真菌成分的復(fù)合體，該植物提取物是酸性物質(zhì)，pH值2.0-4.0，具有高效殺真菌、復(fù)發(fā)率更低、具有抗炎活性，抗真菌范圍廣、無(wú)激素，無(wú)過(guò)敏物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)人體安全，使用方便。該植物提取物可用于制備真菌引起的腳氣、腳癬、手癬、股癬、體癬病及霉菌性生殖疾病的藥物；也用于制備陰部及皮膚的各種瘙癢及褥瘡的藥物；還可用于制備細(xì)菌性和真菌性痢疾病的藥物。本發(fā)明植物提取物制備方法成本低廉、使用安全方便，其推廣和開(kāi)發(fā)利用前景廣闊。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3