一種從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法，包括：以新鮮的人心果葉子為原料，以55～65％(v/v)乙醇為溶劑，采用勻漿一負壓空化技術(shù)進行聯(lián)合提取，得到乙醇水提取液；所述乙醇水提取液經(jīng)離心或抽濾分離，得到分離液；重復所述勻漿一負壓空化和離心或抽濾步驟至少2次，并合并所述分離液；合并的上述分離液進行真空濃縮后，用水溶解，并經(jīng)過超聲震蕩制得料液濃度為10～15mg/mL的混懸液；然后用大孔吸附樹脂對所述混懸液進行富集分離，并用70～80％(v/v)的乙醇水溶液作為洗脫劑進行洗脫，并收集洗脫液；將所述洗脫液蒸餾得到天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液；所述天然抗氧化物濃縮溶液經(jīng)真空冷凍干燥得到固體的天然抗氧化物質(zhì)提取物。得到的提取物主要為酚酸類化合物；且提取物具有較強的體外抗氧化能力和抑菌能力。
【專利說明】一種從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然抗氧化物質(zhì)的提取領(lǐng)域，具體涉及從人心果葉子提取天然抗氧化 物質(zhì)的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 人心果（Manikara zapodiIla)亦稱吳鳳柿、沙漠吉拉，為山欖科（Sapotaceae)鐵 線子屬（Manilkara Adans)的常綠果樹，原產(chǎn)墨西哥南部中美洲、西印度群島一帶，因人心 果外形長得像人的心臟，故因而得名。我國于1990年首先引種至福建，此后廣東、臺灣相繼 引種成功。目前人心果主要分布在臺灣、海南、福建、廣東、廣西等省份。果實可食，味甜可 口，富含多種營養(yǎng)成分，具有降血脂、抗炎和抗腫瘤等多種保健功效；樹干之乳汁為口香糖 原料；種仁含油率20% ;樹皮含植物堿，可治熱癥。
[0003] 長期以來，人們?yōu)榱吮ｕr和防止氧化，大多使用合成的抗菌劑和抗氧化劑。但是人 工合成的抗菌劑、抗氧化劑雖然具有高效的特點，但是其高毒性慢慢引起人們的關(guān)注，隨著 人們健康意識和環(huán)保意識的增強，開發(fā)新的天然抗菌劑、抗氧化劑就取代合成抗菌劑、抗氧 化劑成為食品抗菌劑、抗氧化劑研究的方向，而且天然抗菌劑、抗氧化劑具有實用、高效、低 毒的特點。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了彌補有關(guān)人心果葉子中活性物質(zhì)的提取及其抗氧化和抑菌活性研究的空白， 本發(fā)明提供了一種從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法，該方法可獲得并高效濃縮了 人心果葉子中的天然活性物質(zhì)，同時大大提高了提取物中抗氧化和抑菌物質(zhì)的含量。
[0005] 根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，提供了一種從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方 法，包括以下步驟：以新鮮的人心果葉子為原料，以55?65% (v/v)乙醇為溶劑，采用勻 漿-負壓空化技術(shù)進行聯(lián)合提取，得到乙醇水提取液；所述乙醇水提取液經(jīng)離心或抽濾分 離，得到分離液；重復勻漿-負壓空化聯(lián)合提取和離心或抽濾步驟至少2次，并合并所述 分離液；合并的所述分離液進行真空濃縮后，用水溶解，并經(jīng)過超聲震蕩制得料液濃度為 10?15mg/mL的混懸液；然后用大孔吸附樹脂對所述混懸液進行富集分離，并用70?80% (v/v)的乙醇水溶液作為洗脫劑進行洗脫，并收集洗脫液；將所述洗脫液蒸餾得到天然抗 氧化物質(zhì)濃縮溶液；所述天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液經(jīng)真空冷凍干燥得到固體的天然抗氧化 物質(zhì)提取物。
[0006] 所述勻漿-負壓空化技術(shù)是由勻漿誘導后直接進行負壓空化提取。勻漿誘導所用 的提取溶劑為55?65% (v/v)的色譜級乙醇，所用的提取溶劑體積（mL)與所述人心果葉 子的質(zhì)量（g)之比為25 : 1?30 : 1，勻漿提取時間為40?50s。負壓空化提取時間為 15 ?20min，負壓壓強為-0· 06 ?-0· 08MPa。
[0007] 所述大孔吸附樹脂選自 HP-20、D4020、AB-8、ADS-17、HPD722、DM130、HPD826 或 D3520。
[0008] 所述真空冷凍干燥的時間為12?18小時，冷凍干燥的溫度為-45±2°C，真空度為 15±3Pa。
[0009] 根據(jù)上述本發(fā)明的提取方法，提取過程以乙醇水為溶劑，采用勻漿-負壓空化技 術(shù)聯(lián)合提取，提取率較高，提取時間較短，操作簡單，所用試劑毒性低，用量少，且以人心果 的葉子作為生產(chǎn)原料，來源廣泛、可再生，提高了其生物利用度。因此，應(yīng)用本發(fā)明方法可實 現(xiàn)從人心果葉子中提取天然抗氧化物質(zhì)的廣泛生產(chǎn)。由此所獲得的產(chǎn)品中抗氧化和抑菌物 質(zhì)含量高，且活性較強。
[0010] 由上述方法提取的高濃度活性物質(zhì)可用于開發(fā)高含量的新型天然人心果抗氧化 劑和抑菌劑，以用于保健功能，并可作為食品等的天然添加劑，實現(xiàn)人心果高附加值綜合利 用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011] 圖1是370nm波長下檢測的根據(jù)本發(fā)明的方法提取的目標產(chǎn)物中多酚物質(zhì)的HPLC 色譜圖。
[0012] 圖2是勻漿-負壓空化聯(lián)合提取的裝置示意圖。

【具體實施方式】
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的實施方式，提供一種人心果葉子提取物及提取方法和應(yīng)用，具體如 下：以新鮮的人心果葉子為原料，以55?65% (v/v)，優(yōu)選60% (v/v)的乙醇為溶劑，采用 勻漿-負壓空化技術(shù)進行聯(lián)合提取，得到乙醇水提取液；所述乙醇水提取液經(jīng)離心或抽濾 分離，得到澄清的分離液；重復所述勻漿-負壓空化和離心或抽濾步驟至少2次，并合并所 述分離液；合并的所述分離液進行真空濃縮，用水溶解，并經(jīng)過超聲震蕩混懸；然后用大孔 吸附樹脂進行富集分離，并用70?80% (v/v)的乙醇水溶液作為洗脫劑進行洗脫，并收集 洗脫液；將所述洗脫液蒸餾得到天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液；所述天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液 經(jīng)真空冷凍干燥得到固體的天然抗氧化物質(zhì)提取物。
[0014] 上述提取步驟中所用的溶劑為55?65% (v/v)，優(yōu)選60% (v/v)乙醇，優(yōu)選為色 譜級乙醇。
[0015] 優(yōu)選地，在根據(jù)本發(fā)明的從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法中，勻漿-負 壓空化技術(shù)是由勻漿誘導后直接進行負壓空化提取。其中，勻漿誘導所用的提取溶劑為 60% (v/v)的色譜級乙醇，所用的提取溶劑體積與所述人心果葉子的質(zhì)量比為25 : 1? 30 : 1，勻漿提取時間為40?50s。此外，負壓空化提取時間為15?20min，負壓壓強 為-0· 06 ?-0· 08MPa。
[0016] 勻漿-負壓空化技術(shù)采用本領(lǐng)域常用的勻漿-負壓空化聯(lián)合裝置進行。優(yōu)選地， 如圖2所示，將人心果葉子與提取溶劑（例如60%的乙醇）一起加入勻漿裝置①中，經(jīng)勻漿 后直接導入至負壓空化提取裝置②中。在負壓空化提取裝置②中通入氮氣，經(jīng)負壓空化提 取后提取液進入收集裝置③中進行收集，隨后通過泵④輸出。
[0017] 在根據(jù)本發(fā)明的從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法中，大孔吸附樹脂選自 HP-20、D4020、AB-8、ADS-17、HPD722、DM130、HPD826 或 D3520,經(jīng)提取率及抗氧化活性和抑 菌活性驗證，優(yōu)選出DM130作為富集分離所用的大孔吸附樹脂。
[0018] 此外，合并的分離液在用大孔吸附樹脂進行富集分離之前，優(yōu)選進行濃縮，例如通 過蒸餾或真空濃縮。優(yōu)選地，經(jīng)過真空濃縮的分離液可形成為膏體。分離液經(jīng)真空濃縮形成 提取浸膏后，用水溶解，并經(jīng)過超聲震蕩混懸，配制成料液濃度為10?15mg/mL的混懸液， 然后再用大孔吸附樹脂進行富集分離。由于提取浸膏所含成分復雜，不容易用水溶解，利用 超聲震蕩混懸后，提取浸膏很均勻地與水混懸。因此，上樣后，大孔吸附樹脂可以更好地吸 附樣品，更便于后續(xù)的富集分離。
[0019] 上述真空冷凍干燥的時間為12?18小時，冷凍干燥的溫度為-45 ± 2°C，真空度為 15±3Pa。
[0020] 經(jīng)過上述方法提取得到的天然抗氧化物質(zhì)的顏色通常為深綠色。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的一個【具體實施方式】，上述從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的具體 方法步驟如下：
[0022] (1)取一定量的新鮮的人心果葉片，加入55?65% (v/v)的乙醇進行勻漿誘導， 所用溶劑體積（mL)與人心果葉片的質(zhì)量（g)之比為25 : 1?30 : 1。勻漿提取時間為 40?50s。然后將勻漿后的溶液和材料直接導入聯(lián)合的負壓空化提取裝置中，負壓空化提 取時間為15?20min，負壓壓強為-0. 06?-0. 08MPa。將上述勻漿-負壓空化聯(lián)合提取 后的乙醇水提取液進行離心或抽濾，得到分離液。之后，重復上述提取和離心或抽濾步驟2 次，合并分離液。
[0023] (2)然后，將合并的分離液真空濃縮至膏狀，得到提取浸膏。將所得的提取浸膏加 入水，于超聲波振蕩反應(yīng)器中進行溶解混懸。混懸后，配制成料液濃度為10?15mg/mL的 混懸溶液。
[0024] 同時，將大孔吸附樹脂采用濕法裝柱，保留液面，上樣量I. 0?I. 5BV，以流速 1 ±0. lmL/min條件下過吸附柱。吸附后，可選地先用純凈水3?5BV洗雜質(zhì)，然后再用70? 80% (v/v)的乙醇水溶液5?8BV洗脫，收集洗脫液。
[0025] (3)將收集到的洗脫液進行蒸餾濃縮，然后再經(jīng)過真空冷凍干燥，得到固體的人心 果葉子提取物。冷凍干燥的溫度為-45±2°C，時間為12?18小時，真空度為15±3Pa。
[0026] 由上述方法制得的固體提取物的顏色通常為深綠色。
[0027] 根據(jù)另一實施方式，提供了一種人心果葉子提取物用于制造抗氧化劑和抑菌劑的 應(yīng)用。
[0028] 經(jīng)檢測，根據(jù)本發(fā)明的方法提取人心果葉子得到的提取物主要成分為酚酸類化合 物。得到的人心果葉子提取物，對于DPPH自由基的清除能力較強（IC 5tl值為0. 04mg/mL)，是 Trolox的3. 7倍。對于ABTS自由基的清除能力也很強（IC5tl值為4. 67 μ g/mL)，是Trolox 的5. 48倍；對于鐵離子有較強的還原能力（2. 86mmol FeS04/g)，是Trolox的8. 8倍；同時 具有較強的抑菌活性。因此，可將根據(jù)本發(fā)明的人心果葉子提取物用于制備抗氧化劑和抑 菌劑等用途。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明的另一【具體實施方式】，上述人心果葉子提取物的提取方法可包括：
[0030] (1)提?。喝∫欢康男迈r人心果葉子，加入60% (v/v)的色譜級乙醇進行勻漿誘 導，所用色譜級乙醇體積（HiL)與人心果葉子的質(zhì)量（g)之比為25 : 1?30 : 1，勻漿提 取時間為40?50s，然后將勻漿后的溶液和人心果葉子直接導入聯(lián)合的負壓空化提取裝置 中，負壓空化提取時間為15?20min，負壓壓強為-0. 06?-0. 08MPa。
[0031] (2)離心或抽濾分離：提取液經(jīng)離心機在轉(zhuǎn)速10000 ± IOOrpm下離心20 ±2min，分 離出上清液，棄去沉淀物；或者提取液經(jīng)抽濾裝置，濾得分離液。
[0032] (3)重復上述提取和離心或抽濾步驟2次，合并分離液。然后將其真空濃縮至膏 狀，得到提取浸膏。
[0033] (4)吸附分離：將所得的提取浸膏加入水，于超聲波振蕩反應(yīng)器中進行溶解混懸。 混懸后，配制成料液濃度為10?15mg/mL的混懸溶液。同時將大孔吸附樹脂采用濕法裝柱， 保留液面，上樣量I. 〇?I. 5BV，以流速1 ±0. lmL/min條件下過吸附柱。吸附后先用純凈水 3?5BV洗雜質(zhì)，然后再用70?80% (v/v)的乙醇水溶液5?8BV洗脫，收集洗脫液。用 于富集分離的大孔吸附樹脂為DM130。
[0034] (5)濃縮：將收集的洗脫液蒸出乙醇得人心果葉子提取物濃縮溶液；
[0035] (6)真空冷凍干燥：將人心果提取物濃縮溶液經(jīng)冷卻后在真空冷凍下進行脫水 干燥，即得固體的人心果葉提取物，其中冷凍干燥的溫度為_45±2°C，冷凍干燥的時間為 12?18小時，真空度為15±3Pa。
[0036] 以下，將參照圖1對本發(fā)明涉及的從人心果葉中提取天然抗氧化物質(zhì)的方法進行 更詳細地說明。
[0037] 實施例1
[0038] (1)將新鮮的人心果葉子Ig和60% (v/v)乙醇25mL置于勻漿-負壓空化聯(lián)合提 取裝置的勻漿裝置中，然后進行提取。勻漿提取時間為40s，然后將勻漿后的溶液和材料直 接導入聯(lián)合的負壓空化提取裝置中，負壓空化提取時間為15min，負壓壓強為-0. 06MPa，得 乙醇水提取液；
[0039] (2)將乙醇提取液冷卻后經(jīng)離心機離心分離，設(shè)置離心機轉(zhuǎn)速為lOOOOrpm，離心 20min，得到分離液；
[0040] (3)重復2次上述提取和離心分離步驟，合并分離液；
[0041] (4)將上述合并的分離液真空濃縮，加水溶解后經(jīng)過超聲震蕩制成料液濃度為 10mg/mL的混懸液，以5ml/min的流速加至已經(jīng)過處理的DM130大孔吸附樹脂富集柱，之后 用3BV的純凈水洗柱，再用5BV的70% (v/v)的乙醇水溶液以1±0. lmL/min的流速洗脫， 且合并洗脫液。所有的操作在4°C低溫避光下進行。
[0042] (4)在常壓下（I. OlX IO5Pa)蒸餾出上述洗脫液中的乙醇，得到天然抗氧化物質(zhì)濃 縮溶液。
[0043] (5)真空冷凍干燥：將天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液經(jīng)冷卻后在真空下于_45°C進行 12小時的脫水干燥，真空度為12Pa，即得粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)0. 125g，得率12. 5%。
[0044] 實施例2
[0045] (1)將新鮮的人心果葉子Ig和色譜級60% (v/v)色譜級乙醇30mL置于勻漿-負 壓空化聯(lián)合提取裝置中。然后進行提取，勻漿提取時間為50s，然后將勻漿后的溶液和材料 直接導入聯(lián)合的負壓空化提取裝置中，負壓空化提取時間為20min，負壓壓強為-0. 08MPa， 得乙醇水提取液。
[0046] (2)將提取液直接經(jīng)抽濾裝置進行抽濾后，得澄清濾液。
[0047] (3)重復2次上述提取和抽濾分離步驟，合并濾液。
[0048] (4)將上述合并的濾液濃縮至膏體，再將該膏體加水后經(jīng)過超聲震蕩制成料液濃 度為15mg/mL的混懸液，以5ml/min的流速加至已經(jīng)過處理的DM130大孔樹脂富集柱，之后 用5BV純凈水洗柱，再用8BV的80% (v/v)的乙醇水溶液洗脫，合并洗脫液。
[0049] (5)在常壓下（I. 01 X IO5Pa)下從洗脫液中蒸出乙醇得到天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶 液。
[0050] (6)真空冷凍干燥：將天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液經(jīng)冷卻后在真空下_45°C進行18 小時的脫水干燥，真空度為12Pa，即得粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)0. 146g，得率14. 6%。
[0051] 對比例1
[0052] (1)將干凈并粉碎的人心果葉子Ig和60% (v/v)乙醇30mL置于IOOml單頸瓶中， 然后進行攪拌回流提取，控制回流溫度為55°C，回流時間為120min，得乙醇水提取液。
[0053] (2)將乙醇提取液冷卻后經(jīng)離心機離心分離，設(shè)置離心機轉(zhuǎn)速為lOOOOrpm，離心 20min，分離出上清液。
[0054] (3)重復2次上述浸提和離心分離步驟，合并上清液。
[0055] (4)將上述合并的上清液濃縮，加水后經(jīng)過超聲震蕩制成混懸液，以5ml/min的流 速加至已經(jīng)過處理的DM130大孔樹脂吸附富集柱，之后用3BV純凈水洗柱，再用70% (v/v) 的乙醇水溶液5BV，以1±0. lmL/min的流速洗脫，且合并洗脫液。所有的操作在4°C低溫避 光下進行。
[0056] (4)在常壓下（I. OlX IO5Pa)蒸出上述洗脫液中的乙醇，得到天然抗氧化活性物質(zhì) 溶液。
[0057] (5)真空冷凍干燥：將天然抗氧化物質(zhì)溶液經(jīng)冷卻后在真空下于_45°C進行脫水 干燥12小時，真空度為12Pa，即得粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)0. 102g，得率10. 2%。
[0058] 對比例2
[0059] (1)將干凈并粉碎的人心果葉子Ig和60% (v/v)乙醇9mL置于有蓋的玻璃試管 中，用漩渦儀混勻，然后進行超聲波水浴浸提?？刂瞥暡ㄋ囟葹?0°C，超聲時間為 30min，得乙醇水提取液。
[0060] (2)將乙醇提取液冷卻后經(jīng)離心機離心分離，設(shè)置離心機轉(zhuǎn)速為5000rpm，離心 30min，分離出上清液。
[0061] (3)重復2次上述提取和離心分離步驟，合并上清液。
[0062] (4)將上述合并的上清液濃縮，加水后經(jīng)過超聲震蕩制成混懸液，以5ml/min的 流速加至已經(jīng)過處理的DM 130大孔樹脂吸附富集柱，之后用3BV純凈水洗柱，再用5BV的 70% (v/v)的乙醇水溶液以1±0. lmL/min的流速洗脫，且合并洗脫液。所有的操作在4°C 低溫避光下進行。
[0063] (4)在常壓下（I. OlX IO5Pa)蒸出上述洗脫液中的乙醇，得到天然抗氧化活性物質(zhì) 溶液。
[0064] (5)真空冷凍干燥：將天然抗氧化物質(zhì)溶液經(jīng)冷卻后在真空下于_45°C進行脫水 干燥12小時，真空度為12Pa，即得粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)0. 110g，得率11. 0%。
[0065] 對比例3
[0066] (1)將新鮮的人心果葉子Ig和色譜級60% (v/v)乙醇30mL置于勻漿-負壓空化 聯(lián)合提取裝置中，然后進行提取，勻漿提取時間為50s。然后將勻漿后的溶液和材料直接導 入聯(lián)合的負壓空化提取裝置中，負壓空化提取時間為20min，負壓壓強為-0. OSMPa得乙醇 水提取液。
[0067] (2)將提取液冷卻后經(jīng)離心機離心分離，設(shè)置離心機轉(zhuǎn)速為lOOOOrpm，離心 20min，分離出上清液。
[0068] (3)重復2次上述提取和離心分離步驟，合并上清液。
[0069] (4)將上述合并的上清液濃縮，加水后經(jīng)過超聲震蕩制成混懸液，以5ml/min的 流速加至預先經(jīng)凈化處理的非極性的C18十八烷基固相萃取柱，之后用純凈水洗柱，再用 70% (v/v)的乙醇水溶液洗脫，合并洗脫液。
[0070] (5)在常壓下（I. 01 X IO5Pa)下從洗脫液中蒸出乙醇得到天然抗氧化物質(zhì)溶液。
[0071] (6)真空冷凍干燥：將天然抗氧化物質(zhì)溶液經(jīng)冷卻后在真空下_45°C進行脫水干 燥12小時，真空度為12Pa，即得粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)0. 103g，得率10. 3%。
[0072] 在根據(jù)本發(fā)明的提取方法中，應(yīng)用勻漿-負壓空化聯(lián)合提取，大孔吸附樹脂進行 富集，作為人心果葉子活性物質(zhì)的提取富集方法，其優(yōu)點在于：
[0073] (1)預先經(jīng)過勻漿處理后，與攪拌回流及超聲波水浴浸提的方法相比，其細胞破碎 程度較大，且植物材料充分混懸于溶液中，從而增加活性成分的游離，而且相比干燥粉碎再 提取，是環(huán)境友好型的，不會產(chǎn)生粉塵。
[0074] (2)同時，在根據(jù)本發(fā)明的方法中，聯(lián)合負壓空化進行提取，通過通入的氮氣在溶 液內(nèi)部和固液界面產(chǎn)生一系列的小氣泡，氣泡隨之上升，擴大，潰滅，在固體材料表面一瞬 間潰滅產(chǎn)生巨大的瞬時壓強。該過程隨著氮氣的不斷通入而反復進行，進一步破壞細胞壁， 釋放活性物質(zhì)。經(jīng)過釋放，傳質(zhì)，進而促進活性物質(zhì)在提取溶劑中的溶解。與攪拌回流的提 取方法相比，可最大程度地保護細胞中的有效成分，不至于因為高溫等因素的影響，而受到 破壞。
[0075] (3)本發(fā)明的方法再與超聲波水浴浸提的方法相比，要求的設(shè)備簡單，易于操作， 可實現(xiàn)大規(guī)模的生產(chǎn)。
[0076] (4)本發(fā)明采用大孔吸附樹脂進行富集，而非C18十八烷基固相萃取柱，因其具有 價格低、操作方便、選擇性好、再生處理方便，吸附速度快、重現(xiàn)性好、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，適合于 大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點。而C18十八烷基固相萃取柱價格較高，多用于顏色較豐富的提取物的 純化，去除較多的色素。
[0077] 因此，應(yīng)用本發(fā)明的方法獲得人心果葉活性物質(zhì)的提取率較高，提取時間較短，操 作簡單，提取物活性較強。
[0078] 以下對根據(jù)實施例2的天然抗氧化活性物質(zhì)進行活性物質(zhì)組成及抗氧化性和抑 菌性進行測試。
[0079] 測試例1
[0080] 將實施例2得到的人心果葉提取物干粉用于測定其多酚的組成和含量分析。
[0081] 采用高效液相色譜法測定了上述目標產(chǎn)物中的多酚組成。其中，高效液相色譜 (HPLC)條件為 ：
[0082] Supelco (Bellefonte，PA) Discovery C18 十八燒基固相萃取柱，柱溫 35°C ;
[0083] LC-20AD分離器單元；
[0084] SPD-20A UV/VIS 檢測器；
[0085] LC solutionl. 26SP1 色譜管理軟件；
[0086] 流動相為乙腈和10 %乙酸水溶液的混合液，流速為I. OmL/min，采用梯度洗脫；
[0087] 檢測波長為 370nm、280nm、520nm。
[0088] 同時在相同的色譜條件下繪制沒食子酸、綠原酸、表兒茶酸、花青素、香豆酸、阿魏 酸、鞣花酸、芥子酸、蘆丁、肉桂酸等標準樣品的標準曲線，從而定性和定量確定其中的多酚 組分和含量。
[0089] 目標產(chǎn)物中多酚物質(zhì)經(jīng)上述乙酸-乙腈體系分離后得到的HPLC圖譜（圖1)，再通 過與先用HPLC分析多酚物質(zhì)的標準樣品比較，通過標準樣品的分離時間和最大吸收確定 目標產(chǎn)物中的主要成分。
[0090] 如圖1所示，在370nm波長下檢測的目標產(chǎn)物中多酚物質(zhì)的HPLC色譜圖：
[0091] 1、沒食子酸；2、綠原酸；3、表兒茶酸；4、花青素；5、香豆酸；6、阿魏酸；7、鞣花酸； 8、芥子酸；9、蘆丁；10、肉桂酸。
[0092] 對以上色譜分析結(jié)果進行定量，并換算為各組分基于每克人心果葉子的含量示于 表1中。
[0093] 表1.人心果葉子中的多酚含量

【權(quán)利要求】
1. 一種從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法，包括以下步驟： 以新鮮的人心果葉子為原料，以55?65% (v/v)乙醇為溶劑，采用勻漿-負壓空化技 術(shù)進行聯(lián)合提取，得到乙醇水提取液； 所述乙醇水提取液經(jīng)離心或抽濾分離，得到分離液； 重復勻漿-負壓空化聯(lián)合提取和離心或抽濾步驟至少2次，并合并所述分離液； 合并的所述分離液進行真空濃縮后，用水溶解，并經(jīng)過超聲震蕩制得料液濃度為10? 15mg/mL的混懸液； 然后用大孔吸附樹脂對所述混懸液進行富集分離，并用70?80% (v/v)的乙醇水溶液 作為洗脫劑進行洗脫，并收集洗脫液； 將所述洗脫液蒸餾得到天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液； 所述天然抗氧化物質(zhì)濃縮溶液經(jīng)真空冷凍干燥得到固體的天然抗氧化物質(zhì)提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法，其特征在于，所 述勻漿-負壓空化技術(shù)是由勻漿誘導后直接進行負壓空化提取，其中，勻漿誘導所用的提 取溶劑為55?65% (v/v)的色譜級乙醇，所用的提取溶劑體積與所述人心果葉子的質(zhì)量比 為25 : 1?30 : 1，勻漿提取時間為40?50s，負壓空化提取時間為15?20min，負壓壓 強為-〇· 06 ?-0· 08MPa。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法，其特征在于，所 述大孔吸附樹脂選自 HP-20、D4020、AB-8、ADS-17、HPD722、DM130、HPD826 或 D3520。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從人心果葉子提取天然抗氧化物質(zhì)的方法，其特征在于，所 述真空冷凍干燥的時間為12?18小時，冷凍干燥的溫度為-45±2°C，真空度為15±3Pa。
【文檔編號】A61K127/00GK104256640SQ201410521401
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月30日
【發(fā)明者】張秀梅, 馬飛躍, 劉玉革, 涂行浩, 付瓊 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院南亞熱帶作物研究所