一種具有生物活性器官的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有生物活性器官的制造方法，包括：讀取待加工器官的三維模型，對所述三維模型進行分層，讀取每層層文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)；在多孔基底上制作該層文件對應的器官截面，得到帶有器官截面的器官基底；對于任意兩個相鄰的器官截面，在多孔基底上制作該相鄰兩個器官截面之間的營養(yǎng)通道截面，得到帶有營養(yǎng)通道截面的營養(yǎng)通道基底；在器官基底上，根據(jù)每層層文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)信息，利用三維打印噴頭實現(xiàn)細胞在器官截面上的沉積；將器官基底和營養(yǎng)通道基底按照次序依次固定，培養(yǎng)，形成具有生物活性器官。本發(fā)明采用了無菌濾紙或多孔薄膜作為器官截面的支撐，避免了無強度的凝膠堆積形成的器官易坍塌，難以成型的缺點。
【專利說明】一種具有生物活性器官的制造方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物制造領(lǐng)域，尤其是涉及一種具有生物活性器官的制造方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 活性組織的制造可為人類的組織缺損提供最佳的替換品，因而一直是組織工程領(lǐng) 域的研究熱點。而血管作為生物體中的基本組織，承擔著營養(yǎng)輸送的重要任務，目前有關(guān)制 作血管的方法主要有以下幾類：
[0003] -類是以制作無生物活性的器官，主要以血管為主，例如：申請公布號為 CN100364489A的專利文獻公開了一種抗折型機織人造血管，血管管坯由經(jīng)緯紗交織而成， 在血管管坯的外表面有彈性帶；在管坯的外壁具有以挑紗方式將經(jīng)紗間隔挑成的一個個紗 圈，紗圈以螺旋狀或網(wǎng)絡狀排列于管坯的外壁，彈性帶穿入一個個紗圈內(nèi)，由紗圈定位于管 坯的外壁。申請公布號為CN1522675A的專利文獻公開了一種內(nèi)壁無褶型機織人造血管， 以平紋或斜紋與絞紗為基本組織，其特征是在構(gòu)成基本組織的經(jīng)紗間輔以一定間隔的經(jīng)浮 長紗，共同組成血管管坯的組織結(jié)構(gòu)，管坯緯紗間的間隔因壓縮而消除，形成光滑的血管 內(nèi)壁，管坯經(jīng)紗中的經(jīng)浮長紗則因壓縮而形成拱起，構(gòu)成血管外壁的皺褶。申請公布號為 CN1248156A的專利文獻公開了一種外科手術(shù)中之移植件的多層復合管狀結(jié)構(gòu)，包括：一包 括一生物相容性材料的外層；一包括冶金法粘接到該外層的一非透射性材料的中間層；和 一包括冶金法粘接到該中間層的一生物相容性材料的內(nèi)層。這一類制作方法，僅能制作無 活性的器官，適用性差。
[0004] 第二類是以非人動物制作活性器官，例如申請公布號為CN102512263A的專利文 獻公開了一種把異體的器官換為器官接受者細胞組成的器官：首先準備好器官大小與人 (器官接受者）器官大小差不多的動物（器官提供者），然后，在器官移植前或移植后向動 物的器官或循環(huán)的動物或器官接受者血液中注入相應的動物組織干細胞的抗體交聯(lián)物。接 下來在移植手術(shù)成功后按照常規(guī)劑量使用免疫抑制劑，同時注射干細胞動員劑，本發(fā)明具 有器官來源充足，成本低，而且患者無需等待器官捐獻者的出現(xiàn)就可以隨時買到合適的器 官，患者無需終身服用免疫抑制藥物。然而這種方法，以犧牲其他動物為前提，可實施性差。
[0005] 第三類是目前最具有研發(fā)前景的方法之一，該類方法以高分子等材料為主，基于 活體細胞直接制造血管，目前主要是方法是通過凝膠顆粒包裹細胞，然后使用三維運動平 臺控制凝膠顆粒有序的沉積，實現(xiàn)活性血管的制造。這種方法的主要缺點是沉積后的血管 組織，無法具有正常血管的功能，所沉積細胞間無法有效的建立通訊聯(lián)系，因而也就無法具 有正常血管的彈性、能分泌抗血栓物質(zhì)等特性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種具有生物活性器官的制造方法，可方便快速的制造出器官，該 方法適于各種生物器官的制造中，具有加工方便，效率高、易于給制造出的器官輸送營養(yǎng)、 易于對器官細胞施加各種模擬體內(nèi)器官所處環(huán)境的刺激。
[0007] -種具有生物活性器官的制造方法，包括：
[0008] (1)讀取待加工器官的三維模型，對所述三維模型進行分層，得到層文件，讀取每 層層文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)；
[0009] (2)對于每一個層文件，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)，分別在多孔基底上制作該層文件對 應的器官截面，得到帶有器官截面的器官基底；
[0010] (3)對于任意兩個相鄰的器官截面，在多孔基底上制作該相鄰兩個器官截面之間 的營養(yǎng)通道截面，得到帶有營養(yǎng)通道截面的營養(yǎng)通道基底；
[0011] (4)在器官基底上，根據(jù)每層層文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)信息，利用三維打印噴頭實現(xiàn) 細胞在器官截面上的沉積；
[0012] (5)將器官基底和營養(yǎng)通道基底按照次序依次固定，培養(yǎng)，形成具有生物活性器 官。
[0013] 步驟（1)中，待加工器官的三維模型可通過三維軟件得到，例如可采用 Solidworks、rhinocero等，也可采用CT掃描，然后三維重建的方式獲得。對三維模型進行 分層可采用常見的分層軟件，例如MagicRP、Slic3R、Skeinforge等。步驟（1)中分層厚度， 一般根據(jù)步驟（2)中多孔基底的厚度確定，一般為0. 1-lmm，進一步優(yōu)選為0. 1-0. 4mm。
[0014] 步驟（2)和步驟（3)中，所述多孔基底可獨立的選擇無菌濾紙或多孔薄膜；可以是 商品化的親水無菌濾紙、也可以是自制的多孔親水薄膜，厚度在0. lmm-lmm之間，親水無菌 濾紙或多孔親水薄膜的孔徑大小要能夠通過細胞，即孔徑控制在30 μ m-500 μ m之間。
[0015] 每層器官基底上主要包括如下結(jié)構(gòu)：器官截面、以及便于實現(xiàn)器官截面固定的其 他輔助結(jié)構(gòu)；所述器官截面包括與器官結(jié)構(gòu)對應的孔結(jié)構(gòu)、位于孔結(jié)構(gòu)內(nèi)壁的營養(yǎng)吸收纖 毛、以及除孔結(jié)構(gòu)以外的細胞組織區(qū)域。所述其他輔助結(jié)構(gòu)主要包括用于實現(xiàn)器官截面軸 向固定的組裝定位孔、用于實現(xiàn)器官截面與器官基底其余部分徑向固定的連接件。
[0016] 步驟（3)中，在多孔基底上制作兩個相鄰器官截面之間的營養(yǎng)通道截面時，一般 根據(jù)相鄰兩個器官截面中任一器官截面的結(jié)構(gòu)制作；營養(yǎng)通道基底一般包括營養(yǎng)通道截 面、以及便于實現(xiàn)營養(yǎng)通道截面固定的其他輔助結(jié)構(gòu)；營養(yǎng)通道截面包括與器官截面上孔 結(jié)構(gòu)對應的徑向傳輸孔結(jié)構(gòu)、以及軸向傳輸孔結(jié)構(gòu)，軸向傳輸孔結(jié)構(gòu)一般位于兩個相鄰器 官截面的細胞組織區(qū)域之間，便于實現(xiàn)對兩層細胞的營養(yǎng)輸送。所述其他輔助結(jié)構(gòu)主要包 括用于實現(xiàn)營養(yǎng)通道截面軸向固定的組裝定位孔、用于實現(xiàn)營養(yǎng)通道截面與營養(yǎng)通道基底 其余部分徑向固定的連接件。
[0017] 步驟（4)中，利用三維打印噴頭實現(xiàn)細胞在器官截面上的沉積，沉積區(qū)域為器官 截面上除孔結(jié)構(gòu)以外的細胞組織區(qū)域，與器官上細胞組織的分布一致。
[0018] 三維打印噴頭可使用壓電式噴頭、擠壓式、氣動式等各種噴頭。血管截面，由三層 環(huán)形截面構(gòu)成，最里面是內(nèi)皮細胞，中間是平滑肌細胞，外層是成纖維細胞。為固定住細胞， 可使用凝膠將細胞包裹，采用凝膠將細胞包裹可采用溫敏凝膠如明膠，也可采用離子反應 實現(xiàn)，如使用纖維蛋白+凝血酶獲得纖維蛋白凝膠、海藻酸鈉+氯化鈣獲得海藻酸鈉凝膠。
[0019] 對于明膠，可使用熱溶液將明膠熔化，混入細胞后，裝入噴頭，通過二維平臺的運 動，實現(xiàn)細胞在無菌濾紙或多孔薄膜上的沉積。然后對無菌濾紙或多孔薄膜降溫，使得明膠 凝結(jié)成凝膠，依次按順序使用三個噴頭沉積血管的三種細胞，從而獲得血管截面。
[0020] 如采用離子反應實現(xiàn)，以纖維蛋白凝膠為例，將纖維蛋白混合細胞后的溶液裝入 噴頭，通過二維平臺的運動，實現(xiàn)纖維蛋白及在無菌濾紙或多孔薄膜上的沉積。然后將無菌 濾紙或多孔薄膜浸入凝血酶溶液中，纖維蛋白形成纖維蛋白凝膠，依次按順序使用三個噴 頭沉積血管的三種細胞，從而獲得血管截面。
[0021] 步驟（4)完成后，根據(jù)需要，作為優(yōu)選，增加培養(yǎng)步驟，S卩：將帶沉積好的器官截面 的器官基底放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，1-2天。培養(yǎng)的目的是是剛沉積出的血管截面上的細胞適應 新的環(huán)境，可順利的和培養(yǎng)液進行營養(yǎng)交換，進行生長。本步驟為優(yōu)選，可根據(jù)實際情況省 略。
[0022] 當加入培養(yǎng)步驟時，步驟（4)的凝膠固化過程也可待步步驟（4)完成后進行，即在 培養(yǎng)步驟中的培養(yǎng)液中混入凝血酶，反應獲得凝膠。
[0023] 步驟（5)中，利用器官基底和營養(yǎng)通道基底上的組裝定位孔將多層器官截面和營 養(yǎng)通道截面軸向固定。同時，器官基底和營養(yǎng)通道基底上的徑向連接件實現(xiàn)對器官截面和 營養(yǎng)通道截面的徑向固定。固定完成后，多層器官截面和營養(yǎng)通道截面的孔結(jié)構(gòu)相互對應， 形成完整的培養(yǎng)流道。
[0024] 步驟（5)中，培養(yǎng)過程為：將固定好的三維器官放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在培養(yǎng)流道內(nèi) 通入培養(yǎng)液，施加流場刺激，模擬實際器官在流動時所受體內(nèi)流動剪切及器官的實際生長 環(huán)境，除對器官施加流場刺激外，也可對器官施加拉伸及剪切力作用。培養(yǎng)7-30天即可獲 得活性血管。
[0025] 本發(fā)明制作方法可以用于各種器官的制作，例如可用于環(huán)形截面的血管的制作， 除了環(huán)形截面，由橢圓形截面或其他無規(guī)則截面構(gòu)成的器官也同樣可以采用本發(fā)明的方式 進行制造，例如可用于制作半月板。
[0026] 本發(fā)明通過培養(yǎng)流道實現(xiàn)了對器官徑向的營養(yǎng)輸送，通過營養(yǎng)通道截面實現(xiàn)器官 軸向的營養(yǎng)輸送，保證器官在培養(yǎng)前期細胞的成活率，避免細胞死亡，保證器官制作的成功 率。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：
[0028] (1)、由于采用了無菌濾紙或多孔薄膜作為血管截面的支撐，避免了無強度的凝膠 堆積形成的器官易坍塌，難以成型的缺點。
[0029] (2)、本方法獲得的器官易于構(gòu)造擬器官生長的環(huán)境，通過特殊設計的器官培養(yǎng)流 道，很容易對器官施加流場刺激，也很容易施加拉伸及剪切力，更好的模擬器官生長環(huán)境。
[0030] (3)、通過特殊設計的營養(yǎng)吸收纖毛，便于器官吸收營養(yǎng)物質(zhì)，從而避免了現(xiàn)有制 造器官的技術(shù)中出現(xiàn)的營養(yǎng)只限于表面，難以達到組織內(nèi)部的情形。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1為本發(fā)明實施例1使用的無菌濾紙結(jié)構(gòu)圖。
[0032] 圖2為本發(fā)明實施例1中器官基底的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0033] 圖3為本發(fā)明實施例1中營養(yǎng)通道基底的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0034] 圖4為本發(fā)明實施例1中的帶有細胞的環(huán)形的血管截面圖。
[0035] 圖5為本發(fā)明實施例1中制備得到具有生物活性血管的二維結(jié)構(gòu)示意圖。
[0036] 圖6為本發(fā)明實施例2中需要制備的半月板的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0037] 圖7(a)-圖7(c)為本發(fā)明實施例2中制備的半月板基底的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0038] 圖8(a)-圖8(c)為本發(fā)明實施例2制備的營養(yǎng)通道基底的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0039] 圖9為本發(fā)明實施例2中制備的得到具有生物活性半月板的二維結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實施方式】
[0040] 實施例1 :制作血管
[0041] 利用三維軟件例如Solidworks制作血管的三維模型，對得到的三維模型進行分 層，得到多層層文件，厚度為0. 34mm，同時讀取每層層文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)信息，輸入到數(shù) 控激光切割機中，然后進行如下步驟。
[0042] (a)、如圖1所示，多孔基底采用無菌濾紙100,無菌濾紙采用Whatman濾紙，型號為 3030-961，厚度為0. 34_的濾紙。對于每一個層文件，使用數(shù)控激光切割機在圖1所示的 無菌濾紙100上切割出圖2所示的血管基底、以及與該層血管基底相鄰的圖3所示的營養(yǎng) 通道基底。
[0043] 制作圖2所示的血管基底時，利用數(shù)控激光切割機在圖1所示的無菌濾紙100上 加工出血管組裝定位孔101、血管培養(yǎng)流道外截面孔102、血管培養(yǎng)流道內(nèi)截面孔103、血管 固定連接件104、血管外壁營養(yǎng)吸收纖毛105、血管內(nèi)壁營養(yǎng)吸收纖毛106,血管外壁營養(yǎng)吸 收纖毛105及血管內(nèi)壁營養(yǎng)吸收纖毛106間為環(huán)形區(qū)域107,用于細胞在該處沉積，構(gòu)成圖 4所示的血管截面200。血管截面200,由三層環(huán)形截面構(gòu)成，最里面是內(nèi)皮細胞，中間是平 滑肌細胞，外層是成纖維細胞。
[0044] 制作圖3所示的營養(yǎng)通道基底時，利用數(shù)控激光切割機在圖1所示的無菌濾紙100 上加工出營養(yǎng)通道組裝定位孔301、血管培養(yǎng)流道外截面孔302、營養(yǎng)通道固定連接件304、 以及血管截面毛細輸送通道307。血管截面毛細輸送通道307為環(huán)形，位于兩個相鄰血管截 面200的中間，方便為血管內(nèi)外層通過濾紙的毛細效應輸送營養(yǎng)。
[0045] (b)、通過安裝有壓電式噴頭的二維工作平臺，在圖2所示的環(huán)形區(qū)域107位置沉 積出帶有細胞的環(huán)形的血管截面200,如圖4所示。共沉積三層細胞構(gòu)成血管截面200,最 里面是內(nèi)皮細胞，中間是平滑肌細胞，外層是成纖維細胞。使用三個獨立噴頭分別噴射纖維 蛋白溶液混合內(nèi)皮細胞、纖維蛋白溶液混合平滑肌細胞、纖維蛋白溶液混合成纖維細胞。沉 積完成血管截面200后，將濾紙浸入凝血酶溶液中，血管截面200處的纖維蛋白和凝血酶反 應形成纖維蛋白凝膠，起到固定血管截面上的各種細胞的作用。
[0046] (c)、將沉積好血管截面的濾紙放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)1-2天。培養(yǎng)的目的是剛沉積出 的血管截面上的細胞適應新的環(huán)境，可順利的和培養(yǎng)液進行營養(yǎng)交換，進行生長。培養(yǎng)液沒 有特殊要求，可采用常用的牛血清培養(yǎng)液。
[0047] (d)、將多片步驟（c)處理后帶有血管截面200的無菌濾紙及為血管細胞提供營 養(yǎng)輸送的帶有營養(yǎng)通道截面的無菌濾紙，通過血管組裝定位孔101和營養(yǎng)通道組裝定位孔 301，疊加組裝起來，實現(xiàn)從二維血管截面到三維血管502的制作，如圖5所示。血管基底 500和營養(yǎng)通道基底501的數(shù)量比為1-10,優(yōu)選為1 :1。由血管培養(yǎng)流道外截面孔102、血 管培養(yǎng)流道外截面孔302組成血管外壁培養(yǎng)流道503 ;由血管培養(yǎng)流道內(nèi)截面孔103、血管 截面毛細輸送通道307組成血管內(nèi)壁培養(yǎng)流道504。
[0048] (e)、將三維血管放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在血管外壁培養(yǎng)流道503及血管內(nèi)壁培養(yǎng)流 道504內(nèi)通入培養(yǎng)液，施加流場刺激，模擬實際血管在流動時所受體內(nèi)流動剪切及血管的 實際生長環(huán)境，除對血管施加流場刺激外，也可對血管施加拉伸及剪切力作用，培養(yǎng)10天 后獲得活性血管。
[0049] 在血管外壁培養(yǎng)流道503及血管內(nèi)壁培養(yǎng)流道504內(nèi)通入培養(yǎng)液可更好的促進內(nèi) 皮細胞間通訊，構(gòu)成血管內(nèi)膜，成纖維細胞間的通訊，構(gòu)成血管外膜，平滑肌細胞間的通訊 以及和內(nèi)皮細胞及成纖維細胞的通訊，構(gòu)成血管中間層。由于無菌濾紙或多孔薄膜所具有 的毛細效應，三維血管可通過血管外壁營養(yǎng)吸收纖毛105、血管內(nèi)壁營養(yǎng)吸收纖毛106,吸 收營養(yǎng)物質(zhì)，從而避免了現(xiàn)有制造血管的技術(shù)中出現(xiàn)的營養(yǎng)只限于表面，難以達到組織內(nèi) 部的情形。
[0050] 實施例2 :制作半月板
[0051] 利用三維軟件例如Solidworks制作半月板的三維模型，對得到的三維模型進行 分層，得到多層層文件，如圖6所示，厚度為0. 34mm，同時讀取每層層文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù) 信息，輸入到數(shù)控激光切割機中，然后進行如下步驟。
[0052] (a)、如圖1所示，多孔基底采用無菌濾紙100,無菌濾紙采用Whatman濾紙，型號為 3030-961，厚度為0. 34_的濾紙。對于每一個層文件，使用數(shù)控激光切割機在圖1所示的 無菌濾紙100上依次切割出圖7 (a)-圖7 (c)所示的半月板基底、以及與該層半月板基底相 鄰的圖8(a)-圖8(c)所示的營養(yǎng)通道基底。
[0053] 制作半月板基底時，利用數(shù)控激光切割機在圖1所示的無菌濾紙100依次切出半 月板截面700,用于細胞在該處沉積。圖7(a)-圖7(c)所示為半月板中不同位置層文件對 應的幾種半月板基底圖結(jié)構(gòu)。
[0054] 制作營養(yǎng)通道基底時，利用數(shù)控激光切割機在圖1所示的無菌濾紙100上加工出 以及半月板截面營養(yǎng)輸送通道800。圖8(a)-圖8(c)所示為半月板中不同位置層文件對應 的營養(yǎng)通道基底。半月板截面營養(yǎng)輸送通道800,位于兩個相鄰半月板截面700的中間，方 便為半月板外層通過濾紙的毛細效應輸送營養(yǎng)。
[0055] (b)、通過安裝有噴頭的二維工作平臺，在圖7所示的區(qū)域位置沉積出帶有軟骨細 胞的半月板截面700,使用一個噴頭噴射纖維蛋白溶液混合軟骨細胞。沉積完成半月板截面 700后，將濾紙浸入凝血酶溶液中，半月板截面700處的纖維蛋白和凝血酶反應形成纖維蛋 白凝膠，起到固定半月板截面上的細胞的作用。
[0056] (c)、將沉積好半月板截面的濾紙放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)1-2天。培養(yǎng)的目的是剛沉積 出的半月板截面上的細胞適應新的環(huán)境，可順利的和培養(yǎng)液進行營養(yǎng)交換，進行生長。培養(yǎng) 液沒有特殊要求，可采用常用的牛血清培養(yǎng)液。
[0057] (d)、將多片步驟（c)處理后帶有半月板截面700的無菌濾紙及為半月板細胞提供 營養(yǎng)輸送的帶有營養(yǎng)通道截面的無菌濾紙，疊加組裝起來，實現(xiàn)從二維半月板截面到三維 半月板903的制作，如圖9所示。半月板基底900和營養(yǎng)通道基底901的數(shù)量比為1-10,優(yōu) 選為1 :1。
[0058] (e)、將三維半月板放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在半月板外壁培養(yǎng)流道902內(nèi)通入培養(yǎng) 液，施加流場刺激，模擬實際半月板在流動時所受體內(nèi)流動剪切及半月板的實際生長環(huán)境， 除對半月板施加流場刺激外，也可對半月板施加拉伸及剪切力作用，培養(yǎng)10天后獲得活性 半月板。
【權(quán)利要求】
1. 一種具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，包括： (1) 讀取待加工器官的三維模型，對所述三維模型進行分層，得到層文件，讀取每層層 文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)； (2) 對于每一個層文件，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)，分別在多孔基底上制作該層文件對應的 器官截面，得到帶有器官截面的器官基底； (3) 對于任意兩個相鄰的器官截面，在多孔基底上制作該相鄰兩個器官截面之間的營 養(yǎng)通道截面，得到帶有營養(yǎng)通道截面的營養(yǎng)通道基底； (4) 在器官基底上，根據(jù)每層層文件的結(jié)構(gòu)特征數(shù)據(jù)信息，利用三維打印噴頭實現(xiàn)細胞 在器官截面上的沉積； (5) 將器官基底和營養(yǎng)通道基底按照次序依次固定，培養(yǎng)，形成具有生物活性器官。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，步驟（2) 和步驟（3)中，所述多孔基底為無菌濾紙或多孔薄膜；厚度為0. lmm-lmm，孔徑控制為 30 μ m_500 μ m〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，所述器官基底 和營養(yǎng)通道基底的數(shù)量比例為1:1-10。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，所述器官基底 和營養(yǎng)通道基底的數(shù)量比例為1:1。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，步驟（4)完成 后，先將沉積好細胞的器官基底放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，1-2天，然后再進行步驟（5)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，步驟（4)中，利 用三維打印噴頭實現(xiàn)細胞在器官截面上的沉積時，采用凝膠將細胞包裹打印。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，所述凝膠為明 膠；使用時將明膠熔化，混入細胞后，裝入噴頭，通過二維平臺的運動，實現(xiàn)細胞在器官截面 的沉積；然后對沉積后的器官截面降溫，使得明膠凝結(jié)成凝膠。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，所述凝膠為纖 維蛋白凝膠、海藻酸鈉凝膠；使用時，將纖維蛋白或海藻酸鈉與細胞混合后的溶液裝入噴 頭，通過二維平臺的運動，實現(xiàn)纖維蛋白或海藻酸鈉在器官截面上的沉積；然后將沉積后的 器官截面浸入凝血酶溶液或氯化鈣溶液中，纖維蛋白形成纖維蛋白凝膠或者海藻酸鈉形成 海藻酸鈉凝膠。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有生物活性器官的制造方法，其特征在于，所述具有生物 活性器官為血管或半月板。
【文檔編號】A61F2/06GK104146793SQ201410362702
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月28日
【發(fā)明者】賀永, 劉安, 肖簫, 傅建中, 嚴世貴 申請人:浙江大學