一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應(yīng)用，通過將人體癌癥患者手術(shù)后的腫瘤組織移植到SCID小鼠的腎臟被膜下，在小鼠體內(nèi)存活并傳代保存，得到活體腫瘤組織庫，活體腫瘤組織庫是在單一的腫瘤組織異種移植基礎(chǔ)上，將眾多的人體腫瘤組織以活體組織庫的形式在動物體內(nèi)保存、備用。該活體腫瘤組織庫包括橫向的多種腫瘤，也包括縱向的某種腫瘤的各種亞型或者各種發(fā)展階段。該活體腫瘤組織庫具有多種用途，包括在確定癌癥患者手術(shù)后個性化治療方案方面的應(yīng)用，在抗癌藥物的腫瘤特異性篩選方面的應(yīng)用，以及在構(gòu)建人體癌癥研究的動物模型方面的應(yīng)用。
【專利說明】一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于癌癥治療【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥對人類的危害日趨嚴重，平均每四位死亡病人中至少有一位死于癌癥。目前對于癌癥治療的被動消極狀態(tài)主要歸因于兩個方面:一是癌癥本身的復(fù)雜性與高度的應(yīng)變性(包括對治療藥物的抗藥性);二是治療措施的單一性(無特異性及定向性)與不可變性。一個理想的治療措施應(yīng)該專一性地作用于腫瘤組織，達到以多對雜、以可變對多變，使癌癥與治療這一個矛盾的組合體在人體個性、腫瘤特性、細胞乃至分子特性各個層次上有機結(jié)合。癌癥與治療措施的動態(tài)監(jiān)測是達到上述目的不可缺或的前提條件。
[0003]癌癥工作者早已認識到腫瘤組織庫的重要性，在世界范圍內(nèi)建立了(或者正在建立)各種規(guī)模、多種類型的人體腫瘤組織庫。腫瘤組織庫作為寶貴的資源對癌癥的研究至關(guān)重要。但是，從這種傳統(tǒng)的組織庫得到的信息是腫瘤組織中已經(jīng)存在的、而且是靜態(tài)的，不可能獲得與治療方案有機結(jié)合的動態(tài)信息。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應(yīng)用，旨在解決傳統(tǒng)的組織庫不能獲得與治療方案有機結(jié)合的動態(tài)信息，為探索具有實際意義的有效治療途徑提供強有力的實驗平臺。
[0005]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種活體腫瘤組織庫的建立方法，包括以下步驟:`[0006]( I)將切取到的目的腫瘤組織預(yù)處理；
[0007](2)將所述腫瘤組織移植至小鼠腎臟被膜下；
[0008](3)待腫瘤生長到預(yù)定大小后，處死小鼠，在無菌條件下暴露腫瘤，獲取影像資料后切取腫瘤組織，將小鼠身上獲取的部分腫瘤組織分為兩組，其中一組進行冰凍保存；
[0009](4)將另一組腫瘤組織重復(fù)步驟(1)和(2)進行活體組織傳代，得到活體腫瘤組織庫；或者將所述冰凍保存的腫瘤組織復(fù)蘇后重復(fù)步驟(1)和(2)進行活體組織傳代，得到活體腫瘤組織庫。
[0010]優(yōu)選地，在步驟(1)中，所述腫瘤組織預(yù)處理包括:將手術(shù)切除的人體腫瘤組織立即放在無菌、低溫保存液中，去除可辨認的壞死組織；將腫瘤生長旺盛部位切成1X1X3_的組織塊。
[0011]優(yōu)選地，所述人體腫瘤為任何人體實體惡性腫瘤，包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、鼻咽癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、腎癌、皮膚癌、甲狀腺癌、膀胱癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、骨肉瘤。
[0012]優(yōu)選地，在步驟(2)中，所述小鼠為鼠齡4~5周的SCID小鼠。
[0013]優(yōu)選地，在步驟(2)中，所述移植包括:將小鼠在常規(guī)消毒、麻醉條件下暴露左側(cè)腎臟，于腎嵴上端用注射針頭挑起腎被膜，剪一個小口，然后用小玻璃棒剝離腎被膜至腎嵴下端，用小鑷子將腫瘤塊放于低端與上端各一塊；最后將腎臟復(fù)位、分別縫合肌肉與皮膚、常規(guī)復(fù)蘇與護理。
[0014]優(yōu)選地，在步驟(3)中，所述冰凍保存包括:將腫瘤組織放在含有1%DMS0的保存液中，以每分鐘降低I度的速度降至_80°C，3小時后轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)保存。
[0015]優(yōu)選地，在步驟(4)中，所述腫瘤組織復(fù)蘇包括:將冰凍保存的腫瘤組織置于37°C水浴中復(fù)蘇。
[0016]本發(fā)明進一步提供了上述活體腫瘤組織庫在確定癌癥患者手術(shù)后個性化治療方案方面的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明進一步提供了上述活體腫瘤組織庫在抗癌藥物的腫瘤特異性篩選方面的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明進一步提供了上述活體腫瘤組織庫在構(gòu)建人體癌癥研究的動物模型方面的應(yīng)用。
[0019]本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應(yīng)用，通過將人體癌癥患者手術(shù)后的腫瘤組織移植到SCID小鼠(Severe combinedimmunodeficient mice)的腎臟被膜下,在小鼠體內(nèi)存活并傳代保存,得到活體腫瘤組織庫，活體腫瘤組織庫是在單一的腫瘤組織異種移植基礎(chǔ)上，將眾多的人體腫瘤組織以活體組織庫(Living tissue bank)的形式在動物體內(nèi)保存、備用。該活體腫瘤組織庫包括橫向的多種腫瘤，也包括縱向的某種腫瘤的各種亞型或者各種發(fā)展階段。該活體腫瘤組織庫具有多種用途，包括在確定癌癥患者手術(shù)后個性化治療方案方面的應(yīng)用，在抗癌藥物的腫瘤特異性篩選方面的應(yīng)用，以及在構(gòu)建人體癌癥研究的動物模型方面的應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】`
[0020]圖1是本發(fā)明對比實施例中小鼠腎被膜和皮下腫瘤組織生長狀況實物圖；
[0021]圖2是本發(fā)明用途實施例1中活體腫瘤組織庫用于確定癌癥患者手術(shù)后治療的個性化方案的技術(shù)路線示意圖；
[0022]圖3是本發(fā)明用途實施例2中活體腫瘤組織庫用于抗癌藥物的腫瘤特異性篩選的技術(shù)路線不意圖；
[0023]圖4是本發(fā)明用途實施例3中活體腫瘤組織庫用于構(gòu)建人體癌癥研究的動物模型的技術(shù)路線示意圖。
【具體實施方式】
[0024]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0025]實施例1
[0026]1、活體腫瘤組織庫的建立及相關(guān)技術(shù)
[0027]動物選擇:SCID小鼠(Severe combined immunodeficient mice),性別不限，鼠齡
4~5周。[0028]2、腫瘤選擇:任何人體實體惡性腫瘤，包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、鼻咽癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、腎癌、皮膚癌、甲狀腺癌、膀胱癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、骨肉瘤等等。
[0029]3、數(shù)據(jù)庫檔案建立:包括(I)病人的一般病情資料；(2)腫瘤特殊檢查資料；(3)腫瘤組織庫相關(guān)資料。
[0030]4、活體腫瘤組織庫的建立:
[0031](I)組織處理:將手術(shù)切除的腫瘤組織立即放在無菌、低溫保存液中，在生物凈化臺內(nèi)修剪、去除可辨認的壞死組織。將腫瘤生長旺盛部位切成IX IX 3_的組織塊，視組織的大小取4~6塊組織用于移植、3~4塊組織冰凍保存。本過程在冰表面、無菌操作，應(yīng)該在30~60分鐘內(nèi)完成。
[0032](2)組織移植:將小鼠在常規(guī)消毒、麻醉條件下暴露左側(cè)腎臟，于腎嵴上端用注射針頭挑起腎被膜、剪一個小口，然后用小玻璃棒剝離腎被膜至腎嵴下端，用小鑷子將腫瘤塊放于低端與上端各一塊。最后將腎臟復(fù)位、分別縫合肌肉與皮膚、常規(guī)復(fù)蘇與護理。將首次移植確定為O代。
[0033](3)組織傳代:待腫瘤生長到體外可見或者可觸摸時，常規(guī)處死動物、在無菌條件下暴露腫瘤，獲取影像資料后切除腫瘤，然后按照上述步驟(1)和(2)重新進行組織移植，得到活體腫瘤組織庫。組織傳代的次數(shù)視后續(xù)需要而定，將I代組織(6~12塊)作為組織庫保存。
[0034](4)組織保存:將組織塊放在含有1%DMS0的保存液中，以每分鐘降低I度的速度降至-80°C，3小時后轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)保存。
[0035](5)組織復(fù)蘇:將保存的I代組織置于37°C水浴中復(fù)蘇，常規(guī)清洗后按照上述方法
(I)和(2)進行移植，得到活體腫瘤組織庫。
[0036]對比實施例
[0037]該對比實施例的各個步驟與實施例1中的步驟均相同，不同之處在于，本實施例是將腫瘤塊移植到小鼠的皮下。比較實施例1與對比實施例中腫瘤大小，如圖1所示，其中，圖a為初始腦膠質(zhì)瘤組織塊，圖b-Ι為實施例1中培養(yǎng)50天后小鼠腎被膜下腫瘤組織，圖b-2為對比實施例中培養(yǎng)40天后小鼠皮下腫瘤組織。由圖1可以看出，將同樣大小的腦膠質(zhì)瘤組織分別移植到小鼠的皮下和腎臟被膜下，40天后發(fā)現(xiàn)腎臟被膜下移植的腫瘤明顯大于皮下移植的腫瘤。
[0038]用途實施例1
[0039]實施例1所建立的活體腫瘤組織庫用于確定癌癥患者手術(shù)后治療的個性化方案，如圖2所示，由圖2可知，將某癌癥患者手術(shù)后的腫瘤組織移植到SCID小鼠腎被膜下，按圖1中A、B、C等不同方案治療，觀察不同治療方案對腫瘤生長抑制、殺傷及預(yù)后等效果，從而確定C為最佳個性化治療方案。
[0040]用途實施例2
[0041]實施例1所建 立的活體腫瘤組織庫用于抗癌藥物的腫瘤特異性篩選，如圖3所示，由圖3可知，將不同種類癌癥的腫瘤組織移植到同一只SCID小鼠腎被膜下，可以保證所有實驗對象在完全一致的條件下進行監(jiān)測。如圖3所示，接受被監(jiān)測的腫瘤藥物治療后，鼻咽癌(?)與腦膠質(zhì)瘤(_)繼續(xù)生長變大，肺癌(響)沒有明顯變化，而肝癌(.)則明顯變小或者消失，說明該腫瘤藥物最適合用于肝癌的治療。
[0042]用途實施例3
[0043]實施例1所建立的活體腫瘤組織庫用于構(gòu)建人體癌癥研究的動物模型，如圖4所示，由圖4可知，為了更好模擬癌癥在人體內(nèi)生長、轉(zhuǎn)移侵襲情況，將不同來源的人體腫瘤組織進行原位種植，圖中將活體腫瘤組織庫中的肝癌(.)肺癌(響)和腦膠質(zhì)瘤(_)組織分別移植到肝臟、肺臟和腦內(nèi)，建立相應(yīng)的原位癌動物模型。原位癌動物模型可用于癌癥發(fā)生、發(fā)展以及癌癥轉(zhuǎn)移機制的研究，也可以用于抗腫瘤藥物以及特殊治療途徑研發(fā)方面的實驗研究。
[0044]相比與現(xiàn)有技術(shù)的缺點和不足，本發(fā)明具有以下有益效果:本發(fā)明的活體腫瘤組織庫易于構(gòu)建，腫瘤傳代生長保留情況良好，效果突出；本發(fā)明的活體腫瘤組織庫具有多種用途，包括在確定癌癥患者手術(shù)后個性化治療方案方面的應(yīng)用，在抗癌藥物的腫瘤特異性篩選方面的應(yīng)用，以及在構(gòu)建人體癌癥研究的動物模型方面的應(yīng)用。
[0045]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、 等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種活體腫瘤組織庫的建立方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將切取到的目的腫瘤組織預(yù)處理； (2)將所述腫瘤組織移植至小鼠腎臟被膜下； (3)待腫瘤生長到預(yù)定大小后，處死小鼠，在無菌條件下暴露腫瘤，獲取影像資料后切取腫瘤組織，將小鼠身上獲取的部分腫瘤組織分為兩組，其中一組進行冰凍保存； (4)將另一組腫瘤組織重復(fù)步驟(1)和(2)進行活體組織傳代，得到活體腫瘤組織庫；或者將所述冰凍保存的腫瘤組織復(fù)蘇后重復(fù)步驟(1)和(2)進行活體組織傳代，得到活體腫瘤組織庫。
2.如權(quán)利要求1所述的活體腫瘤組織庫的建立方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述腫瘤組織預(yù)處理包括:將手術(shù)切除的人體腫瘤組織立即放在無菌、低溫保存液中，去除可辨認的壞死組織；將腫瘤生長旺盛部位切成I X I X 3mm的組織塊。
3.如權(quán)利要求2所述的活體腫瘤組織庫的建立方法，其特征在于，所述人體腫瘤為任何人體實體惡性腫瘤，包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、鼻咽癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、腎癌、皮膚癌、甲狀腺癌、膀胱 癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、骨肉瘤。
4.如權(quán)利要求3所述的活體腫瘤組織庫的建立方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述小鼠為鼠齡4~5周的SCID小鼠。
5.如權(quán)利要求4所述的活體腫瘤組織庫的建立方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述移植包括:將小鼠在常規(guī)消毒、麻醉條件下暴露左側(cè)腎臟，于腎嵴上端用注射針頭挑起腎被膜，剪一個小口，然后用小玻璃棒剝離腎被膜至腎嵴下端，用小鑷子將腫瘤塊放于低端與上端各一塊；最后將腎臟復(fù)位、分別縫合肌肉與皮膚、常規(guī)復(fù)蘇與護理。
6.如權(quán)利要求5所述的活體腫瘤組織庫的建立方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述冰凍保存包括:將腫瘤組織放在含有1%DMS0的保存液中，以每分鐘降低I度的速度降至-80°C，3小時后轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)保存。
7.如權(quán)利要求6所述的活體腫瘤組織庫的建立方法，其特征在于，在步驟(4)中，所述腫瘤組織復(fù)蘇包括:將冰凍保存的腫瘤組織置于37°C水浴中復(fù)蘇。
8.權(quán)利要求1至7任一項所述的活體腫瘤組織庫在確定癌癥患者手術(shù)后個性化治療方案方面的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1至7任一項所述的活體腫瘤組織庫在抗癌藥物的腫瘤特異性篩選方面的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1至7任一項所述的活體腫瘤組織庫在構(gòu)建人體癌癥研究的動物模型方面的應(yīng)用。
【文檔編號】A61B19/00GK103815973SQ201410083459
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月7日
【發(fā)明者】羅杰, 湯祥軍, 戴龍君, 張永, 張力, 郭新榮, 黃寬明, 鄒丹丹, 曹剛, 魯軍體, 楊明環(huán), 王娜, 武高 申請人:湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院