一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，它是以藥用的絞股藍(lán)總皂苷藥材為原料，采用連續(xù)逆流超聲波提取、陶瓷膜微濾和大孔樹(shù)脂吸附分離技術(shù)，結(jié)合傳統(tǒng)溶劑回流提取原理，通過(guò)高效提取和分離，從而得到高純度的目標(biāo)產(chǎn)物--獸藥用絞股藍(lán)總皂苷，提高了產(chǎn)品純度和得率，穩(wěn)定了產(chǎn)品質(zhì)量和高品質(zhì)，降低了生產(chǎn)成本，達(dá)到了開(kāi)發(fā)出高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷及其深加工產(chǎn)品的要求，并使生產(chǎn)過(guò)程符合環(huán)境保護(hù)要求，它通過(guò)技術(shù)的不斷提升，調(diào)整工藝流程和技術(shù)參數(shù)，解決了獸藥用絞股藍(lán)總皂苷量產(chǎn)過(guò)程中所遇到的提取、溶劑回收、富集、純化等工序的協(xié)調(diào)性方面的難點(diǎn)問(wèn)題。
【專利說(shuō)明】一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及獸用藥品，尤其是涉及一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法。【背景技術(shù)】
[0002]絞股藍(lán)為葫蘆科植物絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Mak.的全草。我國(guó)絞股藍(lán)資源極為豐富，是絞股藍(lán)植物的原產(chǎn)地之一。
[0003]絞股藍(lán)，又名五葉參、七葉膽，國(guó)外稱甘蔓絞股藍(lán)，屬葫蘆科多年生蔓草植物，長(zhǎng)于山間陰濕的地方，味甘、無(wú)毒，皂甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)與人參類似，有“南方人參”之譽(yù)，在日本被譽(yù)為“福音草”。在民間，將絞股藍(lán)用于治療咳嗽、痰喘、慢性氣管炎、傳染性肝炎等疾病。1974年以來(lái)，日本學(xué)者從該植物中分離出50多種皂甙，其中4種與人參皂苷結(jié)構(gòu)完全相同，11種完全相似。我國(guó)從1984年開(kāi)始對(duì)絞股藍(lán)的分布、資源進(jìn)行調(diào)查、開(kāi)發(fā)等工作。國(guó)內(nèi)外的研究一致表明，絞股藍(lán)具有抑制腫瘤細(xì)胞繁殖、抗疲勞、保肝、抗胃潰瘍、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等藥理作用。
[0004]我國(guó)是絞股藍(lán)總皂苷的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，每年銷量達(dá)到20萬(wàn)噸左右，世界總量排名第1，但我國(guó)的人均絞股藍(lán)總皂苷的消費(fèi)水平不高，尤其是在獸藥方面的使用，絞股藍(lán)總皂苷在我國(guó)主要是用于高檔保健絞股藍(lán)茶和天然日用化妝品的原料和制劑產(chǎn)品，絞股藍(lán)總皂苷有天然人參皂苷的美稱，我國(guó)對(duì)于絞股藍(lán)總皂苷的消費(fèi)水平大約是發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)于對(duì)應(yīng)產(chǎn)品消費(fèi)水平的1/20、或世界平均消費(fèi)水平的1/10。我國(guó)各類絞股藍(lán)資源十分豐富，利用潛力巨大，開(kāi)發(fā)絞股藍(lán)總皂苷的應(yīng)用有重要的現(xiàn)實(shí)意義和十分廣闊的前景。
[0005]我國(guó)獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的年總產(chǎn)量20萬(wàn)噸，絞股藍(lán)柏的原料非常豐富，價(jià)格低廉，我國(guó)也利用獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的開(kāi)發(fā)了許多產(chǎn)品(如獸藥用的絞股藍(lán)總皂苷添加劑、絞股藍(lán)總皂苷的洗面乳，液體 皂、輔膚產(chǎn)品等)。江西省是我國(guó)獸藥用絞股藍(lán)總皂苷樹(shù)的主產(chǎn)種植與絞股藍(lán)油的主要產(chǎn)區(qū)之一。
[0006]獸藥用的絞股藍(lán)總皂苷有良好的藥用價(jià)值，具有溶血、消炎、祛痰、抗真菌、抗突變的作用，可用作殺菌劑、殺蟲(chóng)劑、利尿劑、提高獸群的免疫力作用等。正因如此作用，股藍(lán)總皂苷已經(jīng)引起人們廣泛的關(guān)注。上世紀(jì)90年代末期，國(guó)內(nèi)興起了對(duì)獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的研究并有對(duì)應(yīng)的產(chǎn)業(yè)化的研究擴(kuò)大的發(fā)展趨勢(shì)。
[0007]目前，工業(yè)上對(duì)獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的提取主要有熱水提取及溶劑抽提兩種方法。熱水提取法溶劑成本低廉，但產(chǎn)品含量不高，成分混合、色澤深，且能耗較高，單一的熱水提取法產(chǎn)業(yè)化技術(shù)現(xiàn)已基本被淘汰；溶劑抽提法一般采用甲醇、或乙醇、正丁醇為抽提溶劑，能有效地提高產(chǎn)品的純度，降低能耗，是如今生產(chǎn)中最常用的方法。但溶劑提取法使用大量溶劑，盡管溶媒可以回收循環(huán)使用，但是直接增加了生產(chǎn)成本，有時(shí)還存在溶液殘留問(wèn)題、環(huán)保問(wèn)題等。這些不利因素限制了該產(chǎn)品的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。
[0008]獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的傳統(tǒng)提取技術(shù)先后經(jīng)歷了水提、含水乙醇、含水甲醇的提取工藝，從產(chǎn)品加工的成本，所得產(chǎn)品質(zhì)量都有了較大程度的提高，但從市場(chǎng)和經(jīng)濟(jì)效益的角度來(lái)看，仍不能令人滿意。主要存在的問(wèn)題是:產(chǎn)品質(zhì)量差，皂苷含量低，純度低，色澤深，并有大量的糖類、黃酮苷存在，大大限制了該產(chǎn)品的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用。隨著獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的工業(yè)化提取及應(yīng)用研究的發(fā)展，生產(chǎn)工藝也在不斷改進(jìn)，但至今未有大的突破，尤其是精制階段的工藝，至今未有大的突破。
[0009](I)水提法產(chǎn)品的得率為18.92%，一些可溶性的蛋白和多糖溶于熱水中，因此使得產(chǎn)品純度較低，一般為45%左右，但能滿足低純度要求的農(nóng)藥行業(yè)(作農(nóng)藥混配劑等)。
[0010](2)水提醇沉法可獲得較佳的產(chǎn)品質(zhì)量，產(chǎn)品純度為69%左右，比水提法所得產(chǎn)品的純度高，但產(chǎn)品得率有所降低；工藝過(guò)程較復(fù)雜，乙醇耗量雖減少，但水提液濃縮時(shí)的能耗相應(yīng)加大，另外設(shè)備投資費(fèi)用也較高。
[0011](3)醇提法獲得的產(chǎn)品純度雖較水提醇沉法有所降低，但無(wú)論從產(chǎn)品得率和皂苷提取率上都有所提高，且易進(jìn)行連續(xù)化生產(chǎn)，此方法有一定優(yōu)勢(shì)。
[0012](4)鈣鹽沉淀法是繼其它金屬鹽如鉛鹽、鋇鹽等)沉淀法后開(kāi)始研究使用的方法，生產(chǎn)過(guò)程中克服了重金屬污染的缺點(diǎn)，但是產(chǎn)品得率和純度都不太理想，用鹽酸溶液轉(zhuǎn)溶沉淀時(shí)需要消耗大量的鹽酸溶液，環(huán)境保護(hù)和污水的排放有問(wèn)題。因此，目前該方法仍存在一定的局限性。
[0013]因此，繼續(xù)深入研究產(chǎn)業(yè)化高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的提取與精制技術(shù)，要考慮的因素有提取率及殘留量；另一方面更重要的是節(jié)約生產(chǎn)成本和后續(xù)的純化方法結(jié)合起來(lái)，以達(dá)到滿意的產(chǎn)品純度，并降低成本。
[0014]另外，獸藥用的絞股藍(lán)總皂苷由于味苦，偶見(jiàn)有溶血性和魚(yú)毒性，限制了它的更多用途，因此至今尚未得到充分的開(kāi)發(fā)利用。`
【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]本發(fā)明的目的在于提供一種提高產(chǎn)品純度和得率、穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量、降低生產(chǎn)成本的高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法。
[0016]本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:
一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，特征是:具體步驟如下:
A、干燥:先將絞股藍(lán)藥材洗凈、晾干，經(jīng)過(guò)初步篩選后，將絞股藍(lán)藥材送入干燥機(jī)中，經(jīng)500C _65°C的熱風(fēng)連續(xù)動(dòng)態(tài)干燥至股藍(lán)藥材的水分低于10% ；
B、粉碎將干燥后的絞股藍(lán)藥材進(jìn)行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目數(shù)為10目一50目，得到絞股藍(lán)藥材粉末；
C、浸泡:按照絞股藍(lán)藥材粉末與乙醇的1: 6—8 W/V的比例加入70%的乙醇，即絞股藍(lán)藥材粉末用70%的乙醇溶液浸潤(rùn)，使得總體的含醇量達(dá)70%，室溫低于15°C ±1°C，浸泡時(shí)間為3小時(shí)，室溫高于16°C ±1°C，浸泡時(shí)間為2小時(shí)，注意密閉；
D、連續(xù)逆流超聲提取:將浸泡后的絞股藍(lán)藥材粉末采取連續(xù)逆流超聲提取，超聲波的頻率為15—50HZ，連續(xù)可調(diào)，超聲波的提取時(shí)間為30分鐘/次，濾過(guò)，分離溶媒和藥渣，共提取3次，提取溫度45°C~60°C，合并濾液，藥渣棄之，經(jīng)過(guò)分離得到提取液；藥渣經(jīng)擠干機(jī)和烘干系統(tǒng)連續(xù)回收乙醇溶劑后自動(dòng)排出藥渣；
E、第一次濃縮:提取液經(jīng)過(guò)濾后進(jìn)行減壓雙效濃縮回收乙醇至盡；提取液繼續(xù)在負(fù)壓為0.4-0.6Pa、溫度為55°C ±2°C的環(huán)境下減壓，濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥10.0g的濃縮液，在4°C中冷藏，靜置12小時(shí)，吸取上清液，下層再進(jìn)行高速離心澄清分離，合并濾液；F、陶瓷膜分離:將濾液通過(guò)陶瓷膜進(jìn)行微濾，得到有效地濾除大分子雜質(zhì)的濾液；
G、大孔樹(shù)脂純化:將濾液泵入預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱中進(jìn)行吸附富集，預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱應(yīng)符合中性要求，從提取的上柱液中選擇性地吸附皂苷成分，多次分別用水洗脫至無(wú)色、15%乙醇洗脫至基本無(wú)色，主要是洗去非皂苷類雜質(zhì)，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%—75%的乙醇按照5-10%的級(jí)差梯度洗脫，將去雜后的總皂苷洗脫下來(lái)，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的純度經(jīng)檢測(cè)在85%以上；如果純度不夠規(guī)定的要求，應(yīng)重新上柱分離，精制至合格才進(jìn)入下一步驟；收集洗脫液，減壓回收乙醇；
H、第二次濃縮:用70%的乙醇洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱，將去雜后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷洗脫下來(lái)，并將收集的洗脫液減壓回收乙醇至盡，余液繼續(xù)減壓濃縮至60°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.15-1.1.18的稠膏；
1、成品:將稠膏經(jīng)加壓送入至減壓噴霧干燥機(jī)進(jìn)行干燥，噴霧干燥機(jī)的進(jìn)風(fēng)口溫度為115°C，出風(fēng)口溫度為85°C、壓力位_60Pa，得到含水量為不超過(guò)5%的粉末，經(jīng)檢測(cè):粉末中絞股藍(lán)總皂苷的含量> 850mg/g，再分裝、噴批號(hào)、外包裝，即得獸藥用絞股藍(lán)總皂苷。
[0017]陶瓷膜的孔徑為0.28-3.2微米，大孔吸附樹(shù)脂的孔徑為90A~100A、比表面積為500m2/g ~550m2/g。
[0018]新購(gòu)樹(shù)脂常殘存較多有機(jī)溶劑、低分子聚合物及有機(jī)雜質(zhì)，使用前必須盡量除去，否則將影響樹(shù)脂的使用壽命。因此，在步驟G中樹(shù)脂要進(jìn)行預(yù)處理，步驟如下:
A、新樹(shù)脂預(yù)先用水洗凈，漂洗至PH中性，水棄之；
B、漂洗后的樹(shù)脂粒用2M的稀 鹽酸(HCl)浸泡24小時(shí)，再將樹(shù)脂與酸水層分離，將酸洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到酸洗后的中性樹(shù)脂，酸水層下次調(diào)整濃度另用；
C、將酸洗后的中性樹(shù)脂再用2M的氫氧化鈉(NaOH)溶液浸泡24小時(shí),后將堿洗后的樹(shù)脂與堿水層分離，堿洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到堿洗后的中性樹(shù)脂，堿水層下次調(diào)整濃度另用；
D、采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中，排空氣體，用水洗脫至中性，得到符合要求的預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱。
[0019]樹(shù)脂再生的條件:當(dāng)大孔吸附樹(shù)脂柱中的樹(shù)脂使用到一定的周期后，如果吸附效價(jià)下降到理論值的1/5，樹(shù)脂需要再生。如希望陽(yáng)離子樹(shù)脂為H型、Na型或NH4型，則可分別用鹽酸、氫氧化鈉或氫氧化銨處理；要使陰離子樹(shù)脂為Cl型、OH型，則可用鹽酸或氫氧化鈉分別處理。
[0020]大孔吸附樹(shù)脂柱中的失效后的樹(shù)脂的再生方法，步驟如下:
A、將失效后的樹(shù)脂放在耐酸耐堿的塑料槽內(nèi)，先用清水漂洗干凈，濾干；
B、將濾干后的樹(shù)脂用80%—90%的食用乙醇浸泡24小時(shí)，反復(fù)攪拌、翻動(dòng)，洗去樹(shù)脂內(nèi)的表面吸附的脂溶性有機(jī)物，分離樹(shù)脂和食用乙醇，然后樹(shù)脂通過(guò)自然風(fēng)進(jìn)行抽干；
C、將步驟B中抽干后的樹(shù)脂用40-50°C的熱水浸泡2小時(shí)，洗去水溶性的吸附雜質(zhì)，洗滌3次后，再通過(guò)14目的標(biāo)準(zhǔn)篩兩次篩選的方法浮選或篩選出合格的樹(shù)脂，目的是洗去樹(shù)脂內(nèi)的水溶性雜質(zhì)和殘破的樹(shù)脂，剩下完整的樹(shù)脂然后抽干；
D、將步驟C中抽干后的樹(shù)脂用4倍于樹(shù)脂量的2M/升鹽酸溶液(W/W)浸泡處理2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去酸溶性雜質(zhì)；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干；E、將步驟D中抽干后的樹(shù)脂用4倍于樹(shù)脂量的2摩爾/升的氫氧化鈉溶液(W/W)浸泡2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去堿溶性雜物；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干，得到再生后的樹(shù)脂，可以采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中。如果失效后的樹(shù)脂是陰離子樹(shù)脂，可轉(zhuǎn)型為Cl型或OH型，用鹽酸按再生方法處理一次即可；如果失效后的樹(shù)脂是陽(yáng)離子樹(shù)脂，可轉(zhuǎn)為H型或Na型，用氫氧化鈉按再生方法處理一次即可。再生后的樹(shù)脂的保存:將再生后的樹(shù)脂保存于室溫15 — 25度內(nèi)。短期存放可置于IM鹽酸或氫氧化鈉溶液中。長(zhǎng)期存放可加入防腐劑封存。遇到樹(shù)脂長(zhǎng)霉，可用1%甲醛浸泡I小時(shí)后，再漂洗干凈，然后再按預(yù)處理的方法處理。
[0021]本發(fā)明是以藥用的絞股藍(lán)總皂苷藥材為原料，采用連續(xù)逆流超聲波提取、陶瓷膜微濾和大孔樹(shù)脂吸附分離技術(shù)，結(jié)合傳統(tǒng)溶劑回流提取原理，通過(guò)高效提取和分離，從而得到高純度的目標(biāo)產(chǎn)物一獸藥用絞股藍(lán)總皂苷，提高了產(chǎn)品純度和得率，穩(wěn)定了產(chǎn)品質(zhì)量和高品質(zhì)，降低了生產(chǎn)成本，達(dá)到了開(kāi)發(fā)出高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷及其深加工產(chǎn)品的要求，并使生產(chǎn)過(guò)程符合環(huán)境保護(hù)要求，它通過(guò)技術(shù)的不斷提升，調(diào)整工藝流程和技術(shù)參數(shù)，解決了獸藥用絞股藍(lán)總皂苷量產(chǎn)過(guò)程中所遇到的提取、溶劑回收、富集、純化等工序的協(xié)調(diào)性方面的難點(diǎn)問(wèn)題。
[0022]本發(fā)明采用了如下技術(shù):
1、連續(xù)逆流超聲提取:
連續(xù)逆流超聲提取不僅實(shí)現(xiàn)了連續(xù)化作業(yè)、動(dòng)態(tài)逆流提取，而且通過(guò)配備超聲裝置，在超聲波的作用下，使得提取時(shí)間可縮短1/6~1/8，提取溫度可降低30~40°C，能較好地保護(hù)獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的有效成分，提取效率顯著提高。
[0023]2、陶瓷膜分離:
獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的分子質(zhì)量在300~1000左右，大分子雜質(zhì)如蛋白質(zhì)類、聚糖類、黏糖類、黏液質(zhì)等物質(zhì)的分子質(zhì)量在5000以上，選擇孔徑為0.28-3.2微米的MFS250無(wú)機(jī)陶瓷膜，能有效地濾除大分子雜質(zhì)，脫色并純化獸藥用絞股藍(lán)總皂苷。
[0024]3、大孔樹(shù)脂純化:
本項(xiàng)目選用DlOl型大孔吸附樹(shù)脂(孔徑為90A~100A、比表面積為500m2/g~550m2/
g)，從上柱液中選擇性地吸附皂苷成分，然后多次分別用水洗脫、15%乙醇洗脫至基本無(wú)色，主要是洗去非皂苷類雜質(zhì)，后再用70%乙醇將去雜后獸藥用絞股藍(lán)總皂苷洗脫下來(lái)。經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的純度得到提高。
[0025]本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
1、連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)的應(yīng)用，增大了獸藥用絞股藍(lán)浸提液與固體物料之間的接觸面積，也增加了濃度梯度，較好地體現(xiàn)了動(dòng)態(tài)多次浸取、連續(xù)浸取的思想，使連續(xù)逆流的擴(kuò)散和平衡過(guò)程確保了最大的平衡極限，同時(shí)獲得了較高的效率和浸出液濃度，總的效率相當(dāng)于多個(gè)單次的擴(kuò)散、平衡及分離階段，能較好地保護(hù)獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的有效成分，使有效成分提取效率顯著提高；
2、總體耗能低，只有原傳統(tǒng)提取方法的40—50% ；
3、絞股藍(lán)藥材的烘干和溶劑回收技術(shù)能提高溶劑回收率，降低提取成本，實(shí)現(xiàn)安全生
產(chǎn)
4、充分利用產(chǎn)品加工后的剩余物廢渣，提高了獸藥用絞股藍(lán)總體的綜合利用率。[0026]5、具有浸出效率高，時(shí)間短，勞動(dòng)強(qiáng)度低、生產(chǎn)能力大等特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0028]實(shí)施例1:室溫30度
一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，具體步驟如下:
A、干燥:先將絞股藍(lán)藥材洗凈、晾干，經(jīng)過(guò)初步篩選后，將絞股藍(lán)藥材送入干燥機(jī)中，經(jīng)500C _65°C的熱風(fēng)連續(xù)動(dòng)態(tài)干燥至股藍(lán)藥材的水分低于10% ；
B、粉碎將干燥后的絞股藍(lán)藥材進(jìn)行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目數(shù)為10目一50目，得到絞股藍(lán)藥材粉末；
C、浸泡:按照絞股藍(lán)藥材粉末與乙醇的1: 6 W/V的比例加入70%的乙醇，即絞股藍(lán)藥材粉末用70%的乙醇溶液浸潤(rùn)，使得總體的含醇量達(dá)70%，浸泡時(shí)間為2小時(shí)，注意密閉；
D、連續(xù)逆流超聲提取:將浸泡后的絞股藍(lán)藥材粉末采取連續(xù)逆流超聲提取，超聲波的頻率為15—50HZ，連續(xù)可調(diào)，超聲波的提取時(shí)間為30分鐘/次，濾過(guò)，分離溶媒和藥渣，共提取3次，提取溫度45°C~60°C，合并濾液，藥渣棄之，經(jīng)過(guò)分離得到提取液；藥渣經(jīng)擠干機(jī)和烘干系統(tǒng)連續(xù)回收乙醇溶劑后自動(dòng)排出藥渣；
E、第一次濃縮:提取液經(jīng)過(guò)濾后進(jìn)行減壓雙效濃縮回收乙醇至盡；提取液繼續(xù)在負(fù)壓為0.4-0.6Pa、溫度為55°C ±2°C的環(huán)境下減壓，濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥10.0g的濃縮液，在4°C中冷藏，靜置12小時(shí)，吸取上清液，下層再進(jìn)行高速離心澄清分離，合并濾液； F、陶瓷膜分離:將濾液通過(guò)陶瓷膜進(jìn)行微濾，陶瓷膜的孔徑為0.28-3.2微米，得到有效地濾除大分子雜質(zhì)的濾液；
G、大孔樹(shù)脂純化:將濾液泵入預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱中進(jìn)行吸附富集，預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱應(yīng)符合中性要求，大孔吸附樹(shù)脂的孔徑為90A~100A、比表面積為500m2/g~550m2/g，從提取的上柱液中選擇性地吸附皂苷成分，多次分別用水洗脫至無(wú)色、15%乙醇洗脫至基本無(wú)色，主要是洗去非皂苷類雜質(zhì)，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%—75%的乙醇按照5-10%的級(jí)差梯度洗脫，將去雜后的總皂苷洗脫下來(lái)，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的純度經(jīng)檢測(cè)在85%以上；如果純度不夠規(guī)定的要求，應(yīng)重新上柱分離，精制至合格才進(jìn)入下一步驟；收集洗脫液，減壓回收乙醇；
H、第二次濃縮:用70%的乙醇洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱，將去雜后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷洗脫下來(lái)，并將收集的洗脫液減壓回收乙醇至盡，余液繼續(xù)減壓濃縮至60°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.15-1.1.18的稠膏；
1、成品:將稠膏經(jīng)加壓送入至減壓噴霧干燥機(jī)進(jìn)行干燥，噴霧干燥機(jī)的進(jìn)風(fēng)口溫度為115°C，出風(fēng)口溫度為85°C、壓力位_60Pa，得到含水量為不超過(guò)5%的粉末，經(jīng)檢測(cè):粉末中絞股藍(lán)總皂苷的含量> 850mg/g，再分裝、噴批號(hào)、外包裝，即得獸藥用絞股藍(lán)總皂苷。
[0029]在步驟G中樹(shù)脂要進(jìn)行預(yù)處理，步驟如下:
A、新樹(shù)脂預(yù)先用水洗凈，漂洗至PH中性，水棄之；
B、漂洗后的樹(shù)脂粒用2M的稀鹽酸(HCl)浸泡24小時(shí)，再將樹(shù)脂與酸水層分離，將酸洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到酸洗后的中性樹(shù)脂，酸水層下次調(diào)整濃度另用；
C、將酸洗后的中性樹(shù)脂再用2M的氫氧化鈉(NaOH)溶液浸泡24小時(shí),后將堿洗后的樹(shù)脂與堿水層分離，堿洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到堿洗后的中性樹(shù)脂，堿水層下次調(diào)整濃度另用；
D、采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中，排空氣體，用水洗脫至中性，得到符合要求的預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱。
[0030]樹(shù)脂再生的條件:當(dāng)大孔吸附樹(shù)脂柱中的樹(shù)脂使用到一定的周期后，如果吸附效價(jià)下降到理論值的1/5，樹(shù)脂需要再生。如希望陽(yáng)離子樹(shù)脂為H型、Na型或NH4型，則可分別用鹽酸、氫氧化鈉或氫氧化銨處理；要使陰離子樹(shù)脂為Cl型、OH型，則可用鹽酸或氫氧化鈉分別處理。
[0031]大孔吸附樹(shù)脂柱中的失效后的樹(shù)脂的再生方法，步驟如下:
A、將失效后的樹(shù)脂放在耐酸耐堿的塑料槽內(nèi)，先用清水漂洗干凈，濾干；
B、將濾干后的樹(shù)脂用80%—90%的食用乙醇浸泡24小時(shí)，反復(fù)攪拌、翻動(dòng)，洗去樹(shù)脂內(nèi)的表面吸附的脂溶性有機(jī)物，分離樹(shù)脂和食用乙醇，然后樹(shù)脂通過(guò)自然風(fēng)進(jìn)行抽干；
C、將步驟B中抽干后的樹(shù)脂用40-50°C的熱水浸泡2小時(shí)，洗去水溶性的吸附雜質(zhì)，洗滌3次后，再通過(guò)14目的標(biāo)準(zhǔn)篩兩次篩選的方法浮選或篩選出合格的樹(shù)脂，目的是洗去樹(shù)脂內(nèi)的水溶性雜質(zhì)和殘破的樹(shù)脂，剩下完整的樹(shù)脂然后抽干；
D、將步驟C中抽干后的樹(shù)脂用4倍于樹(shù)脂量的2M/升鹽酸溶液(W/W)浸泡處理2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去酸溶性雜質(zhì)；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干；
E、將步驟D中抽干后的樹(shù)脂 用4倍于樹(shù)脂量的2摩爾/升的氫氧化鈉溶液(W/W)浸泡2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去堿溶性雜物；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干，得到再生后的樹(shù)脂，可以采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中。如果失效后的樹(shù)脂是陰離子樹(shù)脂，可轉(zhuǎn)型為Cl型或OH型，用鹽酸按再生方法處理一次即可；如果失效后的樹(shù)脂是陽(yáng)離子樹(shù)脂，可轉(zhuǎn)為H型或Na型，用氫氧化鈉按再生方法處理一次即可。再生后的樹(shù)脂的保存:將再生后的樹(shù)脂保存于室溫15 — 25度內(nèi)。短期存放可置于IM鹽酸或氫氧化鈉溶液中。長(zhǎng)期存放可加入防腐劑封存。遇到樹(shù)脂長(zhǎng)霉，可用1%甲醛浸泡I小時(shí)后，再漂洗干凈，然后再按預(yù)處理的方法處理。
[0032]實(shí)施例2:室溫10度
一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，具體步驟如下:
A、干燥:先將絞股藍(lán)藥材洗凈、晾干，經(jīng)過(guò)初步篩選后，將絞股藍(lán)藥材送入干燥機(jī)中，經(jīng)500C _65°C的熱風(fēng)連續(xù)動(dòng)態(tài)干燥至股藍(lán)藥材的水分低于10% ；
B、粉碎將干燥后的絞股藍(lán)藥材進(jìn)行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目數(shù)為10目一50目，得到絞股藍(lán)藥材粉末；
C、浸泡:按照絞股藍(lán)藥材粉末與乙醇的1: 8 W/V的比例加入70%的乙醇，即絞股藍(lán)藥材粉末用70%的乙醇溶液浸潤(rùn)，使得總體的含醇量達(dá)70%，浸泡時(shí)間為3小時(shí)，注意密閉；
D、連續(xù)逆流超聲提取:將浸泡后的絞股藍(lán)藥材粉末采取連續(xù)逆流超聲提取，超聲波的頻率為15—50HZ，連續(xù)可調(diào)，超聲波的提取時(shí)間為30分鐘/次，濾過(guò)，分離溶媒和藥渣，共提取3次，提取溫度45°C~60°C，合并濾液，藥渣棄之，經(jīng)過(guò)分離得到提取液；藥渣經(jīng)擠干機(jī)和烘干系統(tǒng)連續(xù)回收乙醇溶劑后自動(dòng)排出藥渣；
E、第一次濃縮:提取液經(jīng)過(guò)濾后進(jìn)行減壓雙效濃縮回收乙醇至盡；提取液繼續(xù)在負(fù)壓為0.4-0.6Pa、溫度為55°C ±2°C的環(huán)境下減壓，濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥10.0g的濃縮液，在4°C中冷藏，靜置12小時(shí)，吸取上清液，下層再進(jìn)行高速離心澄清分離，合并濾液；
F、陶瓷膜分離:將濾液通過(guò)陶瓷膜進(jìn)行微濾，陶瓷膜的孔徑為0.28-3.2微米，得到有效地濾除大分子雜質(zhì)的濾液；
G、大孔樹(shù)脂純化:將濾液泵入預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱中進(jìn)行吸附富集，預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱應(yīng)符合中性要求，大孔吸附樹(shù)脂的孔徑為90A~100A、比表面積為500m2/g~550m2/g，從提取的上柱液中選擇性地吸附皂苷成分，多次分別用水洗脫至無(wú)色、15%乙醇洗脫至基本無(wú)色，主要是洗去非皂苷類雜質(zhì)，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%—75%的乙醇按照5-10%的級(jí)差梯度洗脫，將去雜后的總皂苷洗脫下來(lái)，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的純度經(jīng)檢測(cè)在85%以上；如果純度不夠規(guī)定的要求，應(yīng)重新上柱分離，精制至合格才進(jìn)入下一步驟；收集洗脫液，減壓回收乙醇；
H、第二次濃縮:用70%的乙醇洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱，將去雜后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷洗脫下來(lái)，并將收集的洗脫液減壓回收乙醇至盡，余液繼續(xù)減壓濃縮至60°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.15-1.1.18的稠膏；
1、成品:將稠膏經(jīng)加壓送入至減壓噴霧干燥機(jī)進(jìn)行干燥，噴霧干燥機(jī)的進(jìn)風(fēng)口溫度為115°C，出風(fēng)口溫度為85°C、壓力位_60Pa，得到含水量為不超過(guò)5%的粉末，經(jīng)檢測(cè):粉末中絞股藍(lán)總皂苷的含量> 850mg/g，再分裝、噴批號(hào)、外包裝，即得獸藥用絞股藍(lán)總皂苷。
[0033]在步驟G中樹(shù)脂要進(jìn)行預(yù)處理，步驟如下:
A、新樹(shù)脂預(yù)先用水洗凈，漂洗至PH中性，水棄之；
B、漂洗后的樹(shù)脂粒用2M的稀鹽酸(HCl)浸泡24小時(shí)，再將樹(shù)脂與酸水層分離，將酸洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到酸洗后的中性樹(shù)脂，酸水層下次調(diào)整濃度另用；
C、將酸洗后的中性樹(shù)脂再用2M的氫氧化鈉(NaOH)溶液浸泡24小時(shí),后將堿洗后的樹(shù)脂與堿水層分離，堿洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到堿洗后的中性樹(shù)脂，堿水層下次調(diào)整濃度另用；
D、采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中，排空氣體，用水洗脫至中性，得到符合要求的預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱。
[0034]樹(shù)脂再生的條件:當(dāng)大孔吸附樹(shù)脂柱中的樹(shù)脂使用到一定的周期后，如果吸附效價(jià)下降到理論值的1/5，樹(shù)脂需要再生。如希望陽(yáng)離子樹(shù)脂為H型、Na型或NH4型，則可分別用鹽酸、氫氧化鈉或氫氧化銨處理；要使陰離子樹(shù)脂為Cl型、OH型，則可用鹽酸或氫氧化鈉分別處理。
[0035]大孔吸附樹(shù)脂柱中的失效后的樹(shù)脂的再生方法，步驟如下:
A、將失效后的樹(shù)脂放在耐酸耐堿的塑料槽內(nèi)，先用清水漂洗干凈，濾干；
B、將濾干后的樹(shù)脂用80%—90%的食用乙醇浸泡24小時(shí)，反復(fù)攪拌、翻動(dòng)，洗去樹(shù)脂內(nèi)的表面吸附的脂溶性有機(jī)物，分離樹(shù)脂和食用乙醇，然后樹(shù)脂通過(guò)自然風(fēng)進(jìn)行抽干；
C、將步驟B中抽干后的樹(shù)脂用40-50°C的熱水浸泡2小時(shí)，洗去水溶性的吸附雜質(zhì)，洗滌3次后，再通過(guò)14目的標(biāo)準(zhǔn)篩兩次篩選的方法浮選或篩選出合格的樹(shù)脂，目的是洗去樹(shù)脂內(nèi)的水溶性雜質(zhì)和殘破的樹(shù)脂，剩下完整的樹(shù)脂然后抽干；
D、將步驟C中抽干后的樹(shù)脂用4倍于樹(shù)脂量的2M/升鹽酸溶液(W/W)浸泡處理2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去酸溶性雜質(zhì)；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干；
E、將步驟D中抽干后的樹(shù)脂用4倍于樹(shù)脂量的2摩爾/升的氫氧化鈉溶液(W/W)浸泡2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去堿溶性雜物；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干，得到再生后的樹(shù)脂，可以采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中。如果失效后的樹(shù)脂是陰離子樹(shù)脂，可轉(zhuǎn)型為Cl型或OH型，用鹽酸按再生方法處理一次即可；如果失效后的樹(shù)脂是陽(yáng)離子樹(shù)脂，可轉(zhuǎn)為H型或Na型，用氫氧化鈉按再生方法處理一次即可。再生后的樹(shù)脂的保存:將再生后的樹(shù)脂保存于室溫15 — 25度內(nèi)。短期存放可置于IM鹽酸或氫氧化鈉溶液中。長(zhǎng)期存放可加入防腐劑封存。遇到樹(shù)脂長(zhǎng)霉，可用1%甲醛浸泡I小時(shí)后，再漂洗干凈，然后再按預(yù)處理的方法處理。`
【權(quán)利要求】
1.一種高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，其特征在于:步驟如下: A、干燥:先將絞股藍(lán)藥材洗凈、晾干，經(jīng)過(guò)初步篩選后，將絞股藍(lán)藥材送入干燥機(jī)中，經(jīng)500C _65°C的熱風(fēng)連續(xù)動(dòng)態(tài)干燥至股藍(lán)藥材的水分低于10% ； B、粉碎將干燥后的絞股藍(lán)藥材進(jìn)行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目數(shù)為10目一50目，得到絞股藍(lán)藥材粉末； C、浸泡:按照絞股藍(lán)藥材粉末與乙醇的1: 6—8 W/V的比例加入70%的乙醇，即絞股藍(lán)藥材粉末用70%的乙醇溶液浸潤(rùn)，使得總體的含醇量達(dá)70%，室溫低于15°C ± 1°C，浸泡時(shí)間為3小時(shí)，室溫高于16°C ±1°C，浸泡時(shí)間為2小時(shí)，注意密閉； D、連續(xù)逆流超聲提取:將浸泡后的絞股藍(lán)藥材粉末采取連續(xù)逆流超聲提取，超聲波的頻率為15—50HZ，連續(xù)可調(diào)，超聲波的提取時(shí)間為30分鐘/次，濾過(guò)，分離溶媒和藥渣，共提取3次，提取溫度45°C~60°C，合并濾液，藥渣棄之，經(jīng)過(guò)分離得到提取液；藥渣經(jīng)擠干機(jī)和烘干系統(tǒng)連續(xù)回收乙醇溶劑后自動(dòng)排出藥渣； E、第一次濃縮:提取液經(jīng)過(guò)濾后進(jìn)行減壓雙效濃縮回收乙醇至盡；提取液繼續(xù)在負(fù)壓為0.4-0.6Pa、溫度為55°C ±2°C的環(huán)境下減壓，濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥10.0g的濃縮液，在4°C中冷藏，靜置12小時(shí)，吸取上清液，下層再進(jìn)行高速離心澄清分離，合并濾液； F、陶瓷膜分離:將濾液通過(guò)陶瓷膜進(jìn)行微濾，得到有效地濾除大分子雜質(zhì)的濾液； G、大孔樹(shù)脂純化:將濾液泵入預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱中進(jìn)行吸附富集，預(yù)先活化好的大孔吸附 樹(shù)脂柱應(yīng)符合中性要求，從提取的上柱液中選擇性地吸附皂苷成分，多次分別用水洗脫至無(wú)色、15%乙醇洗脫至基本無(wú)色，主要是洗去非皂苷類雜質(zhì)，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%—75%的乙醇按照5-10%的級(jí)差梯度洗脫，將去雜后的總皂苷洗脫下來(lái)，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的純度經(jīng)檢測(cè)在85%以上；如果純度不夠規(guī)定的要求，應(yīng)重新上柱分離，精制至合格才進(jìn)入下一步驟；收集洗脫液，減壓回收乙醇； H、第二次濃縮:用70%的乙醇洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱，將去雜后的獸藥用絞股藍(lán)總皂苷洗脫下來(lái)，并將收集的洗脫液減壓回收乙醇至盡，余液繼續(xù)減壓濃縮至60°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.15-1.1.18的稠膏； 1、成品:將稠膏經(jīng)加壓送入至減壓噴霧干燥機(jī)進(jìn)行干燥，噴霧干燥機(jī)的進(jìn)風(fēng)口溫度為115°C，出風(fēng)口溫度為85°C、壓力位_60Pa，得到含水量為不超過(guò)5%的粉末，經(jīng)檢測(cè):粉末中絞股藍(lán)總皂苷的含量> 850mg/g，再分裝、噴批號(hào)、外包裝，即得獸藥用絞股藍(lán)總皂苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，其特征在于:陶瓷膜的孔徑為0.28-3.2微米，大孔吸附樹(shù)脂的孔徑為90A~100A、比表面積為500m2/g~550m2/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，其特征在于:在步驟G中樹(shù)脂要進(jìn)行預(yù)處理，步驟如下: A、新樹(shù)脂預(yù)先用水洗凈，漂洗至PH中性，水棄之； B、漂洗后的樹(shù)脂粒用2M的稀鹽酸(HCl)浸泡24小時(shí)，再將樹(shù)脂與酸水層分離，將酸洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到酸洗后的中性樹(shù)脂，酸水層下次調(diào)整濃度另用； C、將酸洗后的中性樹(shù)脂再用2M的氫氧化鈉(NaOH)溶液浸泡24小時(shí),后將堿洗后的樹(shù)脂與堿水層分離，堿洗后的樹(shù)脂用水反復(fù)沖洗至PH中性，得到堿洗后的中性樹(shù)脂，堿水層下次調(diào)整濃度另用； D、采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中，排空氣體，用水洗脫至中性，得到符合要求的預(yù)先活化好的大孔吸附樹(shù)脂柱。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，其特征在于:如陽(yáng)離子樹(shù)脂為H型、Na型或NH4型，則分別用鹽酸、氫氧化鈉或氫氧化銨處理；如陰離子樹(shù)脂為Cl型、OH型，則可用鹽酸或氫氧化鈉分別處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，其特征在于:大孔吸附樹(shù)脂柱中的失效后的樹(shù)脂的再生方法，步驟如下: A、將失效后的樹(shù)脂放在耐酸耐堿的塑料槽內(nèi)，先用清水漂洗干凈，濾干； B、將濾干后的樹(shù)脂用80%—90%的食用乙醇浸泡24小時(shí)，反復(fù)攪拌、翻動(dòng)，洗去樹(shù)脂內(nèi)的表面吸附的脂溶性有機(jī)物，分離樹(shù)脂和食用乙醇，然后樹(shù)脂通過(guò)自然風(fēng)進(jìn)行抽干； C、將步驟B中抽干后的樹(shù)脂用40-50°C的熱水浸泡2小時(shí)，洗去水溶性的吸附雜質(zhì)，洗滌3次后，再通過(guò)14目的標(biāo)準(zhǔn)篩兩次篩選的方法浮選或篩選出合格的樹(shù)脂，目的是洗去樹(shù)脂內(nèi)的水溶性雜 質(zhì)和殘破的樹(shù)脂，剩下完整的樹(shù)脂然后抽干； D、將步驟C中抽干后的樹(shù)脂用4倍于樹(shù)脂量的2M/升鹽酸溶液(W/W)浸泡處理2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去酸溶性雜質(zhì)；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干； E、將步驟D中抽干后的樹(shù)脂用4倍于樹(shù)脂量的2摩爾/升的氫氧化鈉溶液(W/W)浸泡2小時(shí)，經(jīng)常翻動(dòng)，目的是洗去堿溶性雜物；用去離子水或自來(lái)水洗至中性，抽干，得到再生后的樹(shù)脂，可以采用水裝法裝入大孔吸附樹(shù)脂柱中。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度獸藥用絞股藍(lán)總皂苷的制備方法，其特征在于:再生后的樹(shù)脂的保存:將再生后的樹(shù)脂保存于室溫15 — 25度內(nèi)；短期存放可置于IM鹽酸或氫氧化鈉溶液中；長(zhǎng)期存放可加入防腐劑封存；遇到樹(shù)脂長(zhǎng)霉，可用1%甲醛浸泡I小時(shí)后，再漂洗干凈，然后再按預(yù)處理的方法處理。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK103520256SQ201310480622
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月15日
【發(fā)明者】曹遠(yuǎn)東, 熊學(xué)敏, 鐘路明, 陳樂(lè) , 汪石糧 申請(qǐng)人:曹遠(yuǎn)東, 熊學(xué)敏