專利名稱：曲普瑞林注射液和制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及曲普瑞林的制劑，尤其是涉及曲普瑞林注射液。
背景技術(shù)：
:曲普瑞林，已以其醋酸鹽或者巴莫酸鹽的形式應(yīng)用于臨床，臨床適應(yīng)癥包括前列腺癌、性早熟、輔助生殖技術(shù)(ART)例如體外受精術(shù)(IVF)、子宮內(nèi)膜異位癥和子宮肌瘤等，已上市產(chǎn)品例如有達(dá)菲林靡。曲普瑞林英文名為=Triptorelin,別名有:垂普托雷林、色氨瑞林、Decap印tyl 等，其 CAS 登記號為 57773-63-4，分子式，C64H82N18013，分子量 1311.45。曲普瑞林的妝序?yàn)?Pyr_Hi S-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH20曲普瑞林系合成的促性腺激素釋放激素(GnRH)的類似物。其結(jié)構(gòu)的改良是將天然分子結(jié)構(gòu)中的第六個左旋氨基酸(甘氨酸)，以右旋色氨酸取代以使其促效作用更為顯著。曲普瑞林作用與GnRH相同，但其血漿半衰期延長且對GnRH受體的親和力更強(qiáng)，因此曲普瑞林成為GnRH受體的強(qiáng)力激動劑。曲普瑞林注射后,最初會刺激垂體分泌促性腺激素(Gn)，即黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)。當(dāng)垂體經(jīng)過長期的刺激后會進(jìn)入不應(yīng)期，促性腺激素的釋放會減少，因而使性類固醇(睪丸酮或雌激素)降低至去勢水平。上述作用是可逆轉(zhuǎn)的。1974年日本武天化工的Fujino Masahiko等人首先發(fā)明促黃體急速釋放激素的十肽酰胺類似物的合成工藝。并在日本，德國，美國等國家申請專利，專利號分別為:JP19740027442、DE2446005、US4008209 (液相法)。目前市售曲普瑞林制劑有水針劑(通常藥物濃度為lml:0.1mg;例如國藥準(zhǔn)字H20044922，醋酸曲普瑞林注射液，長`春金賽藥業(yè))、凍干粉針劑(通常藥物濃度為0.1mg ;例如注冊證號H20040237，輝凌制藥有限公司)，然而這些制劑通常需要在2_8°C避光條件下低溫貯藏，可見該產(chǎn)品的穩(wěn)定性問題是需要特別關(guān)注的。因此，提供一種方法以制備具有良好藥學(xué)性能例如穩(wěn)定性能的曲普瑞林制劑例如水溶液注射劑，仍然是本領(lǐng)域技術(shù)人員極其期待的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種方法以制備具有良好藥學(xué)性能例如穩(wěn)定性能的曲普瑞林制劑例如水溶液注射劑，期待該方法可以得到高性能例如較高穩(wěn)定性的曲普瑞林制齊U。本發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，使用特定配方制成的曲普瑞林具有良好的品質(zhì)。本發(fā)明因此而得以完成。為此，本發(fā)明第一方面提供了一種液體藥物組合物，其中包括:曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽、乙酸鈉、和水。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其每Iml中包含曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽的量以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg，例如0.05 0.5mg，例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其每Iml中包含乙酸鈉的量為I IOmg,例如2 8mg,例如3 7mg。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其中所述曲普瑞林的藥學(xué)可接受的鹽選自:醋酸鹽或者巴莫酸(亦稱雙羥萘酸)鹽。在一個實(shí)施方案中，所述曲普瑞林的藥學(xué)可接受的鹽是醋酸曲普瑞林。在一個實(shí)施方案中，所述曲普瑞林的藥學(xué)可接受的鹽是巴莫酸曲普瑞林。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，該溶液的pH值在4.0 7.0之間，優(yōu)選該溶液的PH值在4.5 6.5之間，優(yōu)選該溶液的pH值在5.0 6.0之間。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其中還包含藥學(xué)可接受的酸堿調(diào)節(jié)劑。在一個實(shí)施方案中，所述酸堿調(diào)節(jié)劑選自鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它們的水溶液。該酸堿調(diào)節(jié)劑的用量以足以使項(xiàng)目I所述配方的藥液的PH值達(dá)到規(guī)定值即可，而通常不必作特別的限制。通常藥液的酸堿調(diào)節(jié)操作是本領(lǐng)域技術(shù)人員具有的一般技能，并且通常是根據(jù)藥液的已有PH值和目標(biāo)pH值，再用適量酸堿調(diào)節(jié)劑例如IN鹽酸溶液或IN氫氧化鈉或者此二者組合來調(diào)節(jié)。在本發(fā)明液體藥物組合物中，其中包含的主要物質(zhì)是水，其作為該組合物的載體或溶媒。作為載體或溶媒的水的量是不必作特別限定的，本領(lǐng)域技術(shù)人員在配制液體藥物組合物時通常是向藥液中加入適量的水以使整個溶液體積達(dá)到規(guī)定的量；例如，在配制時加入適量的水，使最終溶液達(dá)到每Iml中包含曲普瑞林(C64H82N18013)的量為0.1mg的濃度，即水的量通常是以“定容量 、” “平衡量”等方式加入。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其每Iml中包含:曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽，其量為以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg,例如 0.05 0.5mg,例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg ；乙酸鈉，其量為I IOmg,例如2 8mg,例如3 7mg ；任選的酸堿調(diào)節(jié)劑，其量為使該溶液的pH值調(diào)節(jié)在4.0 7.0之間，優(yōu)選使該溶液的PH值調(diào)節(jié)在4.5 6.5之間，優(yōu)選使該溶液的pH值調(diào)節(jié)在5.0 6.0之間；和水。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其中所述的水是注射用水。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其為注射用制劑。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其為無菌產(chǎn)品和/或無熱源的注射液。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其為過濾除菌的無菌產(chǎn)品的注射液。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其是單位劑量包裝的制劑。例如，其是玻璃瓶包裝的單位劑量制劑，每瓶裝量可以是0.1 IOml,例如每瓶標(biāo)示裝量為0.5ml、Iml、2ml、5ml。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其中還包含選自下列的輔料:甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麥芽糖醇、氯化鈉及其組合。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其每Iml中包含上述輔料的量為2 20mg，例如5 10mg。進(jìn)一步地，本發(fā)明第二方面提供了制備液體藥物組合物例如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物的方法，其包括以下步驟:
步驟1:將曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽和乙酸鈉溶解于適量注射用水中；步驟2:測定步驟I所得藥液的pH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0 7.0之間，例如調(diào)節(jié)至4.5 6.5，例如調(diào)節(jié)至5.0 6.0 ;步驟3:測定步驟2所得藥液中的活性成分的濃度，加適量注射用水使活性成分的濃度達(dá)到所述液體藥物組合物中規(guī)定的濃度；再次測定藥液的pH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0 7.0之間，例如調(diào)節(jié)至4.5 6.5，例如調(diào)節(jié)至5.0
6.0 ；步驟4:將步驟3所得藥液經(jīng)過0.22 μ m微孔濾膜除菌過濾，灌裝到無菌玻璃瓶中，即得液體藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物每Iml中包含曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽的量以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg，例如0.05 0.5mg,例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物每Iml中包含乙酸鈉的量為I IOmg,例如2 8mg，例如3 7mg。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述曲普瑞林的藥學(xué)可接受的鹽選自:醋酸鹽或者巴莫酸(亦稱雙羥萘酸)鹽。在一個實(shí)施方案中，所述曲普瑞林的藥學(xué)可接受的鹽是醋酸曲普瑞林。在一個實(shí)施方案中，所述曲普瑞林的藥學(xué)可接受的鹽是巴莫酸曲普瑞林。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物的pH值在4.0
7.0之間，優(yōu)選該溶液的pH值在4.5 6.5之間，優(yōu)選該溶液的pH值在5.0 6.0之間。

根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物中還包含藥學(xué)可接受的酸堿調(diào)節(jié)劑。在一個實(shí)施方案中，所述酸堿調(diào)節(jié)劑選自鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它們的水溶液。該酸堿調(diào)節(jié)劑的用量以足以使項(xiàng)目I所述配方的藥液的pH值達(dá)到規(guī)定值即可，而通常不必作特別的限制。通常藥液的酸堿調(diào)節(jié)操作是本領(lǐng)域技術(shù)人員具有的一般技能，并且通常是根據(jù)藥液的已有PH值和目標(biāo)pH值，再用適量酸堿調(diào)節(jié)劑例如IN鹽酸溶液或IN氫氧化鈉或者此二者組合來調(diào)節(jié)。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物每Iml中包含:曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽，其量為以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg,例如 0.05 0.5mg,例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg ；乙酸鈉，其量為I IOmg,例如2 8mg,例如3 7mg ；任選的酸堿調(diào)節(jié)劑，其量為使該溶液的pH值調(diào)節(jié)在4.0 7.0之間，優(yōu)選使該溶液的PH值調(diào)節(jié)在4.5 6.5之間，優(yōu)選使該溶液的pH值調(diào)節(jié)在5.0 6.0之間；和水。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物為注射用制劑。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物為無菌產(chǎn)品和/或無熱源的注射液。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物為過濾除菌的無菌產(chǎn)品的注射液。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物是單位劑量包裝的制齊U。例如，其是玻璃瓶包裝的單位劑量制劑，每瓶裝量可以是0.1 IOml,例如每瓶標(biāo)示裝量為 0.5ml、lml、2ml、5ml。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的方法，其中所述液體藥物組合物中還包含選自下列的輔料:甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麥芽糖醇、氯化鈉及其組合。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的液體藥物組合物，其每Iml中包含上述輔料的量為2 20mg，例如5 IOmg0本發(fā)明引述的文獻(xiàn)資料，其全部內(nèi)容通過引用并入本文。在本發(fā)明的任一方面，其任一實(shí)施方案的任意一個或多個技術(shù)特征可以組合到該方面的任一其它實(shí)施方案中，也可以組合到另一方面的任一實(shí)施方案中，只要這種組合不會出現(xiàn)矛盾。本發(fā)明使用的各種術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)理解的一般含義，在與該一般含義不一致時，以本發(fā)明為準(zhǔn)。本發(fā)明總體上提供的是一種液體組合物，其中的主要載體是水，而溶質(zhì)包括活性成分以及乙酸鈉等。因此，為方便起見，在本發(fā)明中，在表示濃度百分?jǐn)?shù)的情況下使用到“ ％”時，如未另外說明，是指重量/體積百分?jǐn)?shù)。本發(fā)明使用的pH調(diào)節(jié)劑包括但不限于氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液，例如IM氫氧化鈉溶液、IM鹽酸溶液。在本發(fā)明中，提及本發(fā)明組合物或者用于對照的組合物的pH值時，該pH值是組合物的最終pH值，而不是其中間物料的pH值。在本發(fā)明中，曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽作為本發(fā)明藥物組合物的活性成分，其可以通過市售購得，例如可得自成都天臺山制藥有限公司的醋酸曲普瑞林(藥品批準(zhǔn)文號H20052269)，亦可參考文獻(xiàn)方法制得，例如參考中國專利申請?zhí)?013100137122中記載的方法獲得醋酸曲普瑞林，還可參考文獻(xiàn)該專利文獻(xiàn)中記載的方法獲得曲普瑞林，還可參考文獻(xiàn)該專 利文獻(xiàn)中記載的方法通過與巴莫酸形成鹽而獲得巴莫酸曲普瑞林；它們通常應(yīng)當(dāng)符合藥用原料藥的要求。在本發(fā)明中，乙酸鈉，亦可稱為醋酸鈉，其在本領(lǐng)域通常認(rèn)為具有緩沖作用，特別是具有使藥液的PH值穩(wěn)定的作用，也就是其可以具有緩沖劑的功能。然而本發(fā)明出人意料地發(fā)現(xiàn)，使用乙酸鈉具有使活性成分化學(xué)穩(wěn)定性改善的效果，而當(dāng)使用其它具有緩沖功能的藥用輔料例如磷酸鹽、枸櫞酸鹽等時，雖然它們可以使藥液的穩(wěn)定性保持穩(wěn)定，但是它們并不能使活性成分保持穩(wěn)定，這種現(xiàn)象是現(xiàn)有技術(shù)尚無法解釋的。本發(fā)明的組合物是一種可以直接靜脈注射的藥液，其符合注射液的一般質(zhì)量要求。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明曲普瑞林經(jīng)氨基酸光學(xué)純檢測，除了 Try以外，其它7個氨基酸的D-型對映體比例相對于其相應(yīng)氨基酸酸而言均小于0.2%。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明曲普瑞林經(jīng)氨基酸光學(xué)純檢測，除了 Try以外，其它7個氨基酸的D-型對映體比例相對于其相應(yīng)氨基酸酸而言均小于0.15%。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明曲普瑞林經(jīng)氨基酸光學(xué)純檢測，其中D-Arg相對于全部精氨酸而言均小于0.2%，優(yōu)選小于0.15。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種曲普瑞林，其中乙腈含量低于0.03%。本發(fā)明組合物在制備過程中加入了乙酸鈉；在該組合物例如制劑成品中，乙酸鈉的量可以通過本領(lǐng)域已知的方法測定，例如可通過離子色譜法(中國藥典2010年版二部附錄VJ)試驗(yàn)，用合適的陰離子交換柱，以含lmmol/L碳酸氫鈉和3.2mmol/L碳酸鈉的混合液為淋洗液,流速為每分鐘lml，以電導(dǎo)檢測器進(jìn)行測定其中乙酸鈉的含量。
曲普瑞林(Triptorelin)是一合成的十肽,是天然GnRH(促性腺激素釋放激素)的類似物。動物研究和人體研究表明，初始刺激后，長期使用曲普瑞林可抑制促性腺激素的分泌，從而抑制睪丸和卵巢的功能。動物研究和人體研究表明，初始刺激后，長期使用曲普瑞林可抑制促性腺激素的分泌，從而抑制睪丸和卵巢的功能。對動物進(jìn)行的進(jìn)一步研究提示另一作用機(jī)制:通過降低外周GnRH受體的敏感性產(chǎn)生直接性腺抑制作用。曲普瑞林在臨床上有廣泛用途，例如，前列腺癌:注射曲普瑞林，早期血LH和FSH水平升高，進(jìn)而血睪酮水平升高；繼續(xù)用藥2 3周，血LH和FSH水平降低，進(jìn)而血睪酮降至去勢水平；同時，治療初期酸性磷酸酶一過性增高；治療可使癥狀有所改善。性早熟:在兩性，曲普瑞林均可抑制垂體促性腺激素的分泌亢進(jìn)，表現(xiàn)為雌二醇或睪酮的分泌的抑制、LH峰值降低以及身高年齡/骨齡比例的提高；最初的性腺刺激有可能引起陰道的少量出血，需要使用醋酸甲羥孕酮或環(huán)丙孕酮醋酸酯治療。子宮內(nèi)膜異位癥:曲普瑞林持續(xù)用藥可抑制雌二醇的分泌，從而使異位的子宮內(nèi)膜組織處于休息狀態(tài)。不孕癥:曲普瑞林可抑制促性腺激素(FSH和LH)的分泌；這一治療確保抑制LH峰值，從而提高卵泡生成的質(zhì)量，增加卵泡數(shù)量。子宮肌瘤:研究表明某些子宮肌瘤的體積明顯縮小，在治療第3個月時最明顯。大多數(shù)患者在治療第I個月后出現(xiàn)閉經(jīng)，需糾正因月經(jīng)過多或子宮出血造成的貧血。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。在下面的例子中，當(dāng)使用到pH調(diào)節(jié)劑對物料進(jìn)行調(diào)節(jié)時，如無另外說明，是用IM氫氧化鈉溶液或者IM鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)，其用量是使物料特別是溶液的PH值調(diào)節(jié)至規(guī)定值(例如在標(biāo)明值的±0.1范圍內(nèi))或范圍，例如在當(dāng)前物料溶液的pH值為6.5而目標(biāo)pH值為5.5時，先用IM鹽酸溶液調(diào)節(jié)至5.0±0.1，如果調(diào)節(jié)過量，可用IM氫氧化鈉溶液回調(diào)，這些操作是本領(lǐng)域技術(shù)人員具備的一般技能。下文制備步驟為了舉例的目的，并基于各舉例的可比較性而作了某些具體描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)已有知識完全可以從中概括得到本發(fā)明制備藥物組合物的方法。在下面配制藥液時，以每Iml藥液及其中的組分和量羅列配方，但是具體投料時，每批次投量量為1000ml。此外，在下文羅列配方時，可能以曲普瑞林或者曲普瑞林藥學(xué)可接受的鹽投料，但在表述它們的量時，均折算成曲普瑞林(C64H82N18013)的量計算。制備例1:制備曲普瑞林及其藥學(xué)可接受的鹽.
步驟1:Fmoc-Gly-木對月旨的吿1|備(1)原輔料配比10g 的 Rink Amid MBHA 樹脂(0.84mmo1 /g), 9.51g 的 Fmoc-Gly-OH ；氨基酸(在本步驟中為Fmoc-Gly-ΟΗ):肽偶聯(lián)劑HBTU:酰胺鍵形成促進(jìn)劑(HOA T和HOBT以摩爾比1:2混合使用):有機(jī)堿DIEA=I:1:1:4(摩爾比)。溶劑用量根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和具體操作掌握，例如IOg樹脂中清洗、脫帽反應(yīng)、偶聯(lián)反應(yīng)中溶劑用量為50 150ml，特別是在清洗時每次盡量用盡量少的溶劑，后面的步驟亦可參考本步驟I的溶劑用量進(jìn)行。(2)操作:準(zhǔn)確稱取IOg Rink Amid MBHA樹脂(0.84mmol/g)于反應(yīng)器中，然后加入二氯甲烷100ml，振蕩并浸泡60分鐘，用二氯甲烷、甲醇、二甲基甲酰胺分別交替清洗兩次，抽濾以除去溶劑。加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺溶液(IOOml)室溫下振蕩進(jìn)行脫帽反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fmoc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂(I 3mg)利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色；若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取9.51g的Fmoc-Gly-ΟΗ、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)I小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測(即茚三酮檢測法)，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。本步驟I所得Fmoc-Gly-樹脂，經(jīng)檢測，偶聯(lián)率達(dá)0.89。該Fmoc-Gly-樹脂用于后續(xù)的反應(yīng)步驟。步驟2:Fmoc-Pro-Gly-樹脂的制備(I)原輔料配比在本實(shí)施例的本步驟2以及后續(xù)的各步驟中，上一步驟所得樹脂全部投料到下一步驟；并且使用的肽偶聯(lián)劑為HBTU，酰胺鍵形成促進(jìn)劑為HOBT:有機(jī)堿為DIEA。本步驟中，氨基酸(Fmoc-Pro-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm Oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測(在本發(fā)明中亦稱為KT檢測)，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取10.8g的Fmoc-Pro-OH、HBTU、HO BT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)2小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則 需延長反應(yīng)時間。步驟 3:Fmoc_Arg (Pbf)-Pro-Gly-木對月旨的吿l|備(I)原輔料配比本步驟中，氨基酸(Fmoc-Arg(Pbf) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm Oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取 20.76g 的 Fmoc-Arg(Pbf)-0H、乳酸(相當(dāng)于 Fmoc-Arg(Pbf)-OH 摩爾量的 0.2倍)、HBTU、Η0ΒΤ，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)2小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。本操作步驟獲得的Fmoc-Arg (Pbf)-Pro-Gly-樹脂繼續(xù)用于后續(xù)的步驟。本實(shí)施例1最終所得精制曲普瑞林經(jīng)氨基酸光學(xué)純檢測，精制曲普瑞林經(jīng)氨基酸光學(xué)純檢測，除了 Try以外,其它7個氨基酸的D-型對映體比例相對于其相應(yīng)氨基酸酸而言均小于0.15%，特別是結(jié)果顯示D-Arg相對于全部精氨酸的量而言的含量為0.07%。步驟 4:Fmoc_Leu—Arg (Pbf) _Pro_Gly_ 木對H旨的吿l|備(I)原輔料配比本步驟中，氨基酸(Fmoc-Leu-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fmoc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取11.31g的Fm0c-Leu-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)2.5小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。步驟 5:Fmoc-D-Trp (Boc)-Leu—Arg (Pbf)-Pro-Gly-木對H旨的吿 1|備(I)原輔料配比本步驟中，氨基酸(Fmoc-D-Trp(Boc)-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取16.85g的Fmoc-D-Trp (Boc)-OH、HBTU, H0BT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)3小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。步驟 6:Fmoc_Tyr (tBu) -D~Trp (Boc) ~Leu~Arg (Pbf) -Pro-Gly-木對H旨的吿l|備(I)原輔料配比·本步驟中，氨基酸(Fmoc-Tyr (tBu) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取17.4g的Fmoc-Tyr (tBu)_0H、HBTU、H0BT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)3小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。步驟 7:Fmoc~Ser (tBu) -Tyr (tBu) -D-Trp (Boc) -Leu-Arg (Pbf) -Pro-Gly- M H旨的制備(I)原輔料配比本步驟中，氨基酸(Fmoc-Ser(tBu) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取12.27g的Fmoc-Ser (tBu)-OH、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)4小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。步驟 8:Fmoc~Trp (Boc) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -D-Trp (Boc) -Leu-Arg (Pbf) -Pro-Gly-樹脂的制備(I)原輔料配比
本步驟中，氨基酸(Fmoc-Trp(Boc) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取16.85g的Fmoc-Trp (Boc)-OH、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)5小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。步驟 9:Fmoc_His (Trt) -Trp (Boc) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -D-Trp (Boc) -Leu-Arg (Pbf) -Pro-Gly-樹月旨的制備(I)原輔料配比本步驟中，氨基酸(Fmoc-His(Trt)-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取19.83g的Fmoc-His (Trt)-OH、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)5小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間。步驟 10:H-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg (Pbf)-Pr O-Gly-樹脂的制備

(I)原輔料配比本步驟中，氨基酸(H-Pyr-OH):HBTU:H0BT =DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲酰胺室溫下振蕩反應(yīng)60分鐘，去掉氮端Fm oc保護(hù)基。抽濾除去溶劑后，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，并抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應(yīng)檢測，顯藍(lán)色。若不顯藍(lán)色，則需重新進(jìn)行此步。稱取4.14g的H-Pyr-0H、HBTU、H0BT，加入二甲基甲酰胺待其溶解后再加入DIEA，攪拌混勻后，倒入反應(yīng)器中，室溫振蕩反應(yīng)6小時。抽濾除去反應(yīng)液，再分別用二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應(yīng)時間，接肽反應(yīng)結(jié)束后，放入真空干燥器內(nèi)干燥過夜，稱重，得保護(hù)的十肽樹脂。步驟11:、肽鏈的裂解將上一步驟所得樹脂轉(zhuǎn)移到500ml圓底燒瓶中，加入IOOml預(yù)冷切割液(95%三氟乙酸/2%TIS/29ffiDT/l%水)，室溫攪拌反應(yīng)3小時。抽濾以將樹脂與濾液分離，用20ml三氟乙酸洗滌樹脂2次，然后將濾液與洗滌液合并。然后加入冰凍乙醚1000ml，離心將沉淀與乙醚分離，將沉淀用5%醋酸溶解冷凍干燥后得醋酸曲普瑞林粗品。步驟12:精制鈍化將上一步驟所得凍干的醋酸曲普瑞林粗品溶于5%醋酸，用離子交換色譜系統(tǒng)(Sho dex IEC SP-420N,北京譜朋公司)，經(jīng)5%HAc洗脫分離后，收集醋酸曲普瑞林主峰流分。然后將主峰流分通過反向色譜柱用等度洗脫。
反向色譜洗脫條件如下:色譜儀:島津-高效液相色譜儀；色譜柱:Lichrospher RP-18色譜柱；流動相:20%CH3CN/H20 ;流速:10ml/min ;紫外檢測波長:280nm。將收集所得主峰流動相濃縮后，用冷凍干燥機(jī)凍干，冷凍干燥后得醋酸曲普瑞林精制品。以上12個步驟經(jīng)計算總收率達(dá)27.6%(以步驟I中IOg樹脂投料量計)。本實(shí)施例獲得的醋酸曲普瑞林精制品，其經(jīng)現(xiàn)行上市醋酸曲普瑞林原料藥的藥品標(biāo)準(zhǔn)測定，完全符合該標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。例如其按無水、無醋酸物計，含C64H82N18013為99.92% ;按無水、無醋酸物計，比旋度為-69.2。;測定甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸八種氨基酸組成，以各氨基酸總摩爾數(shù)的八分之一作為1，計算各氨基酸的相對比值，甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸均在
0.90 1.10之間，絲氨酸為1.02。制備例2:制備曲普瑞林及其藥學(xué)可接受的鹽.
參考上文制備例I的方法，不同的是在步驟11和步驟12中將其中使用的各種醋酸溶液替換為等濃度的巴莫酸溶液，得到巴莫酸曲普瑞林精制品，經(jīng)測定其完全符合該原料藥的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。例如其按無水、無醋酸物計，含C64H82N18013為99.87% ;按無水、無醋酸物計，比旋度為-69.5° ;測定甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸八種氨基酸組成，以各氨基酸總摩爾數(shù)的八分之一作為1，計算各氨基酸的相對比值，甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸均在0.93 1.07之間，絲氨酸為
1.01。制備例3:制備 曲普瑞林及其藥學(xué)可接受的鹽.
參照CN101357936A(中國專利申請?zhí)?00710044419.7，崔頎，等)說明書實(shí)施例1記載的方法制備得到醋酸曲普瑞林精制品，純度99.35%。測定法I:組合物或原料藥中活性成分的含暈測定照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄VD)；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.05mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)PH值至3.0)-乙腈(73:27)為流動相，流速為每分鐘1.0ml，檢測波長為 210nm ;取 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-OH 對照品與醋酸曲普瑞林對照品適量,加水溶解并稀釋制成每Iml中分別含0.1mg的混合溶液，取20 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數(shù)按曲普瑞林峰計算不低于3000 ；Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-OH峰和醋酸曲普瑞林峰的分離度應(yīng)符合要求；測定法:精密取供試品適量，加水溶解并稀釋至每Iml中含0.1mg的溶液(本發(fā)明液體組合物可以不加水溶解/稀釋處理)，精密量取20 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取醋酸曲普瑞林對照品適量，同法測定；按外標(biāo)法以峰面積計算，即得供試品中曲普瑞林的含量。測定法2:組合物或原料藥中活性成分的有關(guān)物質(zhì)測定取本品適量，加水溶解并稀釋制成每Iml中含0.1mg的溶液(本發(fā)明液體組合物可以不加水溶解/稀釋處理)，作為供試品溶液；精密量取1ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為對照溶液；照以上測定法I含量測定中的色譜條件，取對照溶液20 μ I注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成份峰高約為滿量程的10% 20%，再精密量取供試品溶液20 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成份峰保留時間的2.5倍，計算有關(guān)物質(zhì)的量。通常而言，對于醋酸曲普瑞林原料藥，規(guī)定其供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單一雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍(即小于0.5%)，各雜質(zhì)峰面積的總和不得大于對照溶液主峰面積的2倍(即小于2.0%)。本發(fā)明液體藥物組合物亦可作類似的規(guī)定?；瘜W(xué)穩(wěn)定性考察方法:本方法可以用于考察本發(fā)明各種產(chǎn)品模擬長期貯藏條件下的穩(wěn)定性特別是化學(xué)穩(wěn)定性。具體方法為:將制得的液體藥物組合物在30°C下放置6個月，測定試樣中曲普瑞林的含量[30°C6月，可稱為高溫平均含量，mg/ml，測定10瓶的平均值]相對于該試樣在5°C下處理相應(yīng)時間時曲普瑞林的含量[5°C 6月，可稱為低溫平均含量，mg/ml，測定10瓶的平
均值]的百分?jǐn)?shù)，可簡稱為殘余含量(%)，計算式如下:
權(quán)利要求
1.一種液體藥物組合物，其中包括:曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽、乙酸鈉、和水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的液體藥物組合物，其每Iml中包含曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽的量以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.0l Img0
3.根據(jù)權(quán)利要求1至2的液體藥物組合物，其每Iml中包含乙酸鈉的量為I IOmg,例如2 8mg，例如3 7mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3的液體藥物組合物，其中所述曲普瑞林的藥學(xué)可接受的鹽選自:醋酸鹽或者巴莫酸鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4的液體藥物組合物，該溶液的pH值在4.0 7.0之間。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5的液體藥物組合物，其中還包含藥學(xué)可接受的酸堿調(diào)節(jié)劑；例如選自鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它們的水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6的液體藥物組合物，其每Iml中包含:曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽，其量為以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 Img ;乙酸鈉，其量為I IOmg ;任選的酸堿調(diào)節(jié)劑，其量為使該溶液的PH值調(diào)節(jié)在4.0 7.0之間；和水。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7的液體藥物組合物，其特征在于: 其為注射用制劑； 其為無菌產(chǎn)品和/或無熱源的注射液； 其為過濾除菌的無菌產(chǎn)品的注射液；和/或 其是單位劑量包裝的制劑；例如，其是玻璃瓶包裝的單位劑量制劑，每瓶裝量可以是.0.1 IOml,例如每瓶標(biāo)示裝量為0.5ml、lml、2ml、5ml。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8的液體藥物組合物，其中還包含選自下列的輔料:甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麥芽糖醇、氯化鈉及其組合；例如，其每Iml中包含上述輔料的量為2 20mg。
10.制備液體藥物組合物例如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的液體藥物組合物的方法，其包括以下步驟: 步驟1:將曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽和乙酸鈉溶解于適量注射用水中； 步驟2:測定步驟I所得藥液的pH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0 7.0之間，例如調(diào)節(jié)至4.5 6.5，例如調(diào)節(jié)至5.0 6.0 ; 步驟3:測定步驟2所得藥液中的活性成分的濃度，加適量注射用水使活性成分的濃度達(dá)到所述液體藥物組合物中規(guī)定的濃度；再次測定藥液的PH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0 7.0之間，例如調(diào)節(jié)至4.5 6.5，例如調(diào)節(jié)至5.0 .6.0 ； 步驟4:將步驟3所得藥液經(jīng)過0.22 μ m微孔濾膜除菌過濾，灌裝到無菌玻璃瓶中，即得液體藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種曲普瑞林注射液和制法。具體地說，本發(fā)明液體藥物組合物曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽、乙酸鈉、和水。本發(fā)明方法包括以下步驟步驟1將曲普瑞林或其藥學(xué)可接受的鹽和乙酸鈉溶解于適量注射用水中；步驟2測定步驟1所得藥液的pH值，必要時用1N的氫氧化鈉或1N的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0～7.0之間；步驟3測定步驟2所得藥液中的活性成分的濃度，加適量注射用水使活性成分的濃度達(dá)到所述液體藥物組合物中規(guī)定的濃度；再次測定藥液的pH值，必要時用1N的氫氧化鈉或1N的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0～7.0之間；步驟4將步驟3所得藥液經(jīng)過0.22μm微孔濾膜除菌過濾，灌裝到無菌玻璃瓶中，即得液體藥物組合物。本發(fā)明組合物具有良好的藥學(xué)性能。
文檔編號A61P15/00GK103239711SQ20131019653
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月24日
發(fā)明者趙東明, 賈紅軍, 谷娟, 潘旭, 何玉祥, 董國明 申請人:成都天臺山制藥有限公司