專利名稱：一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從原料中提取總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
番石槽葉為桃金娘科植物番石槽Psidium Guajaua L的干燥葉及帶葉嫩莖。收載于《廣西中藥材標準》，在布朗語稱“麻果”。氣清香，味澀、微甘苦，具有收斂止瀉，消炎止血。用于久痢，泄瀉，糖尿病，創(chuàng)傷出血，皮膚濕疹，搔癢，熱痱，牙痛，現(xiàn)代藥理研究表明，番石榴葉具有降血糖、抗菌、抗病毒、抗氧化作用。文獻對番石榴葉研究有很多，藥理學(xué)研究顯示，番石榴葉中提取的有效成分對2型糖尿病患者有效，并提示其藥理作用并非直接改善人體胰島素β細胞的分泌功能，而是提高了人體周圍組織對糖的利用。植物化學(xué)研究表明，番石榴葉提取的有效成分屬于黃酮 類化合物。具有降血糖、抗菌、抗病毒、活血化瘀的作用；因此，現(xiàn)在研究較多的番石榴葉總黃酮作為藥用活性部位具有極大的臨床應(yīng)用價值和市場開發(fā)價值。黃酮類成分的提取方法有很多，包括溶劑提取、微波提取、超臨界萃取、酶浸潰萃取、超聲波提取、回流、索氏提取、煎煮法和滲濾等。先進的提取技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用到中藥材提取加工的各個領(lǐng)域，但是，對于番石榴葉活性部位總黃酮的提取相關(guān)報道和相關(guān)專利中，多數(shù)仍然采取傳統(tǒng)的提取方法。傳統(tǒng)的提取方法成本高，獲得的提取物中總黃酮含量低，以蘆(C27H30O16)計在 70% 以下。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是要解決傳統(tǒng)的提取方法存在的成本高，獲得的提取物中總黃酮含量低的技術(shù)問題，從而提供了一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法。本發(fā)明的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法是按下述步驟進行一、取50 60kg番石榴葉，然后用水煎煮至少2次，過濾，合并煎煮液，然后在溫度為60 80°C條件下濃縮至相對密度為I. 12 I. 14g/cm3的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的14 20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的10 14倍，每次煎煮水的用量依次遞減20% 30%，每次煎煮耗時I 3小時；二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水至體積為150 200L，然后用2 4mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6. O 7. 0，浸泡12 24小時，收集上清液，用4 5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)上清液pH值至2. O 3. O后，靜置12 24小時，收集上層液體即得到提取液；三、聚酰胺樹脂的預(yù)處理取聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用5 8BV的丙酮以O(shè). 3 O. 5BV/h流速沖洗至洗出液無色，最后用5 8BV的體積濃度為95% 97%的乙醇溶液沖洗，流速為O. 3 O. 5BV/h，倒出，置于烘箱中80 90°C烘干；四、將步驟二得到的提取液用聚酰胺樹脂柱進行純化，聚酰胺樹脂與番石榴葉的質(zhì)量比為I : 2 4，再用水進行洗脫，洗脫用的水體積為6 10BV，再使用9 IlBV的體積濃度為50% 75%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，收集乙醇洗脫液；
五、減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，再對洗脫液濃縮，減壓干燥，即得到番石榴葉提取物。本發(fā)明包括以下效果I、本發(fā)明采用聚酰胺純化的方法，聚酰胺樹脂是由酰胺聚合而成的一類高分子物質(zhì)，它對黃酮類化合物有較強的吸附性能，主要通過氫鍵和范德華力吸附。本發(fā)明只采用乙醇、丙酮等價格低廉的洗脫液，因此成本較低，且存在方法簡單、效率高、穩(wěn)定性好和容易再生等特點，得到的產(chǎn)品安全，不存在重金屬、有機溶劑毒性殘留等問題；2、按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明中番石榴葉有效部位總黃酮制成適用于臨床的多種藥物制劑。各種劑型包括口服制劑以及非腸道給藥的劑型。所述的口服制劑可制成顆粒齊 、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸、混懸劑或口服液體制劑，所述的非腸道給藥劑型可制成注射齊U、氣霧劑、栓劑或者皮下給藥劑，本發(fā)明番石榴葉總黃酮制成各種劑型中，還可加入常規(guī)的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等； 3、本發(fā)明獲得的番石榴葉提取物中總黃酮含量以蘆(C27H3tlO16)計，不少于80%，單體成分中還有槲皮素、大豆異黃酮等。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式中一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法是按以下步驟進行的一、取50 60kg番石榴葉，然后用水煎煮至少2次，過濾，合并煎煮液，然后在溫度為60 80°C條件下濃縮至相對密度為I. 12 I. 14g/cm3的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的14 20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的10 14倍，每次煎煮水的用量依次遞減20% 30%，每次煎煮耗時I 3小時；二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水至體積為150 200L，然后用2 4mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6. O 7. 0，浸泡12 24小時，收集上清液，用4 5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)上清液pH值至2. O 3. O后，靜置12 24小時，收集上層液體即得到提取液；三、聚酰胺樹脂的預(yù)處理取聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用5 8BV的丙酮以O(shè). 3 O. 5BV/h流速沖洗至洗出液無色，最后用5 8BV的體積濃度為95% 97%的乙醇溶液沖洗，流速為O. 3 O. 5BV/h，倒出，置于烘箱中80 90°C烘干；四、將步驟二得到的提取液用聚酰胺樹脂柱進行純化，聚酰胺樹脂與番石榴葉的質(zhì)量比為I : 2 4，再用水進行洗脫，洗脫用的水體積為6 10BV，再使用9 IlBV的體積濃度為50% 75%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，收集乙醇洗脫液；五、減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，再對洗脫液濃縮，減壓干燥，即得到番石榴葉提取物。本實施方式包括以下效果I、本實施方式采用聚酰胺純化的方法，聚酰胺樹脂是由酰胺聚合而成的一類高分子物質(zhì)，它對黃酮類化合物有較強的吸附性能，主要通過氫鍵和范德華力吸附。本實施方式只采用乙醇、丙酮等價格低廉的洗脫液，因此成本較低，且存在方法簡單、效率高、穩(wěn)定性好和容易再生等特點，得到的產(chǎn)品安全，不存在重金屬、有機溶劑毒性殘留等問題；2、按藥劑學(xué)方法，可以將本實施方式中番石榴葉有效部位總黃酮制成適用于臨床的多種藥物制劑。各種劑型包括口服制劑以及非腸道給藥的劑型。所述的口服制劑可制成顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸、混懸劑或口服液體制劑，所述的非腸道給藥劑型可制成注射劑、氣霧劑、栓劑或者皮下給藥劑，本實施方式番石榴葉總黃酮制成各種劑型中，還可加入常規(guī)的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等；3、本實施方式獲得的番石榴葉提取物中總黃酮含量以蘆(C27H3tlO16)計，不少于80%，單體成分中還有槲皮素、大豆異黃酮等。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一中每次煎煮耗時I. 5小時。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟一中在溫度為80°C條件下濃縮至相對密度為I. 14g/cm3的清膏。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟二中用2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7. O。其它與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至四之一不同的是步驟二中用4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)上清液pH值至3. O。其它與具體實施方式
一至四之一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟三中用5BV的體積濃度為95%乙醇溶液沖洗。其它與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一至六之一不同的是步驟四中聚酰胺樹脂與番石榴葉的質(zhì)量比為I : 2。其它與具體實施方式
一至六之一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一至七之一不同的是步驟四中用IOBV體積濃度為75%的乙醇溶液洗脫樹脂柱。其它與具體實施方式
一至七之一相同。通過以下試驗驗證本發(fā)明的有益效果試驗一本實驗的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法是按以下步驟實現(xiàn)一、取50kg番石榴葉，然后用水煎煮2次，過濾，合并兩次煎煮液，然后在溫度為80°C條件下濃縮至相對密度為I. 14g/cm3的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的14倍，每次煎煮耗時I. 5小時；二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水至體積為150L，然后用2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 0，浸泡24小時，收集上清液，用4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)上清液pH值至3. O后，靜置24小時，收集上層液體即得到提取液；三、聚酰胺樹脂的預(yù)處理取聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用6BV的丙酮以O(shè). 3BV/h流速沖洗至洗出液無色，最后用5BV的體積濃度為95%的乙醇溶液沖洗，流速為O. 3BV/h,倒出，置于烘箱中90°C烘干；四、將步驟二得到的提取液用聚酰胺樹脂柱進行純化，聚酰胺樹脂與番石榴葉的質(zhì)量比為I : 2，再用水進行洗脫，洗脫用的水體積為6BV，再使用IOBV的體積濃度為75%的乙醇溶液洗脫樹脂柱,收集乙醇洗脫液；五、減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，再對洗脫液濃縮，減壓干燥，即得到番石榴葉提取物。本試驗得到的番石榴提取物收率彡3% ;本試驗采用聚酰胺純化的方法，只采用乙醇、丙酮等價格低廉的洗脫液，因此成本較低，且存在方法簡單、效率高、穩(wěn)定性好和容易再生等特點，得到的產(chǎn)品安全，不存在重金屬、有機溶劑毒性殘留等問題；本試驗制備的提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計為80% ;本試驗制備的番石榴葉提取物中總黃酮的應(yīng)用如下I、番石榴葉總黃酮膠囊的制備本發(fā)明番石榴葉總黃酮200g，藥用淀粉320g，混合均勻，裝入膠囊，每粒O. 25g，即得番石榴葉總黃酮膠囊。2、番石榴葉總黃酮片的制備本發(fā)明番石榴葉總黃酮200g，藥用淀粉335g，微晶纖維素80g，羧甲基纖維素鈉10g，混合均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒機整粒，加入硬脂酸鎂適量，壓片，每片O. 3g，即得 番石榴葉總黃酮片。
權(quán)利要求
1.一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于從番石榴葉中提取總黃酮的方法是按以下步驟進行 一、取50 60kg番石榴葉，然后用水煎煮至少2次，過濾，合并煎煮液，然后在溫度為60 80°C條件下濃縮至相對密度為I. 12 I. 14g/cm3的清膏；其中第一次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的14 20倍，第二次煎煮水的用量是番石榴葉質(zhì)量的10 14倍，每次煎煮水的用量依次遞減20% 30%，每次煎煮耗時I 3小時； 二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水至體積為150 200L，然后用2 4mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6. O 7. 0，浸泡12 24小時，收集上清液，用4 5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)上清液pH值至2. O 3. O后，靜置12 24小時，收集上層液體即得到提取液； 三、聚酰胺樹脂的預(yù)處理取聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用5 8BV的丙酮以O(shè).3 O.5BV/h流速沖洗至洗出液無色，最后用5 8BV的體積濃度為95% 97%的乙醇溶液沖洗，流速為O. 3 O. 5BV/h，倒出，置于烘箱中80 90°C烘干； 四、將步驟二得到的提取液用聚酰胺樹脂柱進行純化，聚酰胺樹脂與番石榴葉的質(zhì)量比為I : 2 4,再用水進行洗脫,洗脫用的水體積為6 10BV,再使用9 IlBV的體積濃度為50% 75%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，收集乙醇洗脫液； 五、減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，再對洗脫液濃縮，減壓干燥，即得到番石榴葉提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟一中在溫度為80°C條件下濃縮至相對密度為114g/cm3的清膏。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟一中每次煎煮耗時I. 5小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟二中用2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7. O。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟二中用4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)上清液pH值至3. O。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟三中用5BV的體積濃度為95%乙醇溶液沖洗。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟四中聚酰胺樹脂與番石榴葉的質(zhì)量比為I : 2。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟四中用IOBV體積濃度為75%的乙醇溶液洗脫樹脂柱。
全文摘要
一種從番石榴葉中提取總黃酮的方法，涉及一種從原料中提取總黃酮的方法。本發(fā)明是要解決傳統(tǒng)的提取方法存在的成本高，獲得的提取物中總黃酮含量低的技術(shù)問題。方法如下一、將番石榴葉用水煎煮后濃縮得到清膏；二、將清膏與水進行混合靜置收集上層液體即得到提取液；三、聚酰胺樹脂的預(yù)處理；四、將提取液進行聚酰胺樹脂純化收集乙醇洗脫液；五、減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，再對洗脫液濃縮，減壓干燥，即得到番石榴葉提取物。本發(fā)明方法的提取物中總黃酮含量超過80％，可作為藥用活性部位用于臨床應(yīng)用和市場開發(fā)。本發(fā)明應(yīng)用于番石榴葉提取物的制備領(lǐng)域。
文檔編號A61P3/10GK102920785SQ20121049072
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月27日
發(fā)明者吳志軍, 李云濤, 任瑞濤, 王麗娜, 單鈺毓, 陳玉, 李殿明 申請人:哈藥集團中藥二廠