專利名稱：一種番石榴葉多糖的精制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種番石榴葉多糖的精制方法。
背景技術(shù)：
多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖，通過糖苷鍵連接在一起的聚合物，該類 物質(zhì)在自然界植物中尤為豐富。研究結(jié)果表明多糖在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、降血糖、抗 病毒等方面具有良好的活性作用。番石榴屬桃金娘科，是一種適應(yīng)性很強(qiáng)的熱帶果樹。番石榴葉全年可以采摘，葉的 主要成分有黃酮類化合物，揮發(fā)油，植物固醇、鞣質(zhì)，多糖等。研究表明番石榴葉具有極高 的藥用價(jià)值，如降血糖，抗菌、抗氧化、抗誘變、止血等。目前眾多研究結(jié)果表明，番石榴葉的 降血糖效果較為顯著，而番石榴葉多糖是其降血糖作用主要有效成分之一。作為一種天然 的藥物資源，番石榴葉在食品以及保健品行業(yè)中有著較好的開發(fā)前景。大孔樹脂分離技術(shù)作為一種常見的分離方法，已經(jīng)廣泛用于中藥和食品領(lǐng)域，它 具有設(shè)備簡單，能耗低，適用范圍廣，分離效果好，污染小等特點(diǎn)，而其在番石榴葉多糖精制 方面的使用還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種番石榴葉多糖的精制方法，該方法高效、簡便、成本 低，收率高。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的番石榴葉多糖的精制方法，包含下述步驟(1)取番石榴葉粗多糖，加水溶解后將其水溶液進(jìn)行大孔樹脂柱層析，上樣后采用 醇_水體系洗脫并收集洗脫液中醇/水比例為0% -50%的組分，合并洗脫液，濃縮干燥得 純化后的番石榴葉多糖；(2)將純化后的番石榴葉多糖加水溶解，在其水溶液中加入氯仿和正丁醇，攪拌、 離心后取上清液，在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇，攪拌、離心，如此反復(fù)處理3-5 次；(3)對步驟(2)得到的番石榴葉多糖上清液進(jìn)行濃縮除去有機(jī)溶劑，然后對濃縮 液進(jìn)行醇沉，收集沉淀并進(jìn)行洗滌和干燥后得到精制的番石榴葉多糖。在上述步驟中步驟(1)中番石榴葉粗多糖水溶液中番石榴葉粗多糖的含量是10-22g/L。步驟(1)中番石榴葉粗多糖水溶液上樣前需經(jīng)過濾處理。步驟⑴中大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。優(yōu)選的，所述的大孔 樹脂為HP-20大孔樹脂。步驟(1)中水-醇體系為水-乙醇體系或水_甲醇體系，二者的體積比為 100 % -0 % (水/醇體積比)，采用梯度洗脫方法洗脫，洗脫壓力為常壓，洗脫速度為 5-15mL/min。
步驟(2)中水的用量為純化后的番石榴葉多糖總重量的100-150倍。步驟(2)中氯仿的用量為純化后的番石榴葉多糖水溶液總體積的1/6-1/4，正丁 醇的用量為氯仿用量的1/5。步驟(3)中醇沉?xí)r采用的乙醇是體積百分含量為95%的乙醇或無水乙醇，其用量 為番石榴葉多糖濃縮液總體積的4-5倍，醇沉的時(shí)間為15-20h。步驟(3)中沉淀的洗滌過程是依次采用無水乙醇和丙酮進(jìn)行洗滌。本發(fā)明具有高效，簡便，成本低，收率高等特點(diǎn)，所得的番石榴葉多糖有利于進(jìn)一 步研究番石榴葉多糖在醫(yī)藥、食品以及保健品行業(yè)上的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以下試劑和原料等如無特殊說明均為市
售商品。實(shí)施例1將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中，將20g番石榴葉粗多糖加40mL 水溶解并稀釋至1L，過濾，用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢，以H20-乙醇體系洗脫，二者的體 積比為100% -0%遞減，流速為lOmL/min，常壓下洗脫，收集0% -50%組分，合并，濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖9. 5g。所得番石榴葉多糖用1L的水溶解，裝于試劑瓶中。 加入250mL的氯仿和50mL的正丁醇，攪拌30min，離心，棄去下層和中間層變性蛋白，上層清 液用去離子水補(bǔ)足體積，繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇，攪拌，離心，如此反復(fù)5次， 真空濃縮，除去有機(jī)溶劑，加入4倍體積量的95%乙醇，沉淀15h，5000rpm-10000rpm離心。 收集沉淀，依次用無水乙醇，丙酮洗滌沉淀，真空干燥得到精制的黃白色多糖4. 7g。實(shí)施例2將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中，將15g番石榴葉粗多糖加30mL 水溶解，并稀釋至1L，過濾，用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢，以H20-乙醇體系洗脫，二者的體 積比為100% -0%遞減，流速為lOmL/min，常壓下洗脫，收集0% -50%組分，合并，濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖8. 3g。所得番石榴葉多糖用1L的水溶解，裝于試劑瓶中。 加入250mL的氯仿和50mL的正丁醇，攪拌30min，離心，棄去下層和中間層變性蛋白，上層清 液用去離子水補(bǔ)足體積，繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇，攪拌，離心，如此反復(fù)5次， 真空濃縮，除去有機(jī)溶劑，加入4倍體積量的95%乙醇，沉淀16h，5000rpm-10000rpm離心。 收集沉淀，依次用無水乙醇，丙酮洗滌沉淀，真空干燥得到精制的黃白色多糖4. 3g。實(shí)施例3將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中，將22g番石榴葉粗多糖加60mL 水溶解并稀釋至1L，過濾，用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢，以H20-甲醇體系洗脫，二者的體 積比為100% -0%遞減，流速為15mL/min，常壓下洗脫，收集0% -50%組分，合并，濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖13. 4g。所得番石榴葉多糖用1. 8L的水溶解，裝于試劑瓶 中。加入300mL的氯仿和60mL的正丁醇，攪拌30min，離心，棄去下層和中間層變性蛋白，上 層清液用去離子水補(bǔ)足體積，繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇，攪拌，離心，如此反復(fù)5 次，真空濃縮，除去有機(jī)溶劑，加入5倍體積量的無水乙醇，沉淀17h，5000rpm-10000rpm離 心。收集沉淀，依次用無水乙醇，丙酮洗滌沉淀，真空干燥得到精制的黃白色多糖7. 5g。
實(shí)施例4將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中，將18. 5g番石榴葉粗多糖加50 毫升水溶解稀釋至1L，過濾，用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢，以H20-甲醇體系洗脫，二者的 體積比為100 % -0 %遞減，流速為lOmL/min，常壓下洗脫，收集0 % _50 %組分，合并，濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖11. 2g。所得番石榴葉多糖用1. 2L的水溶解，裝于試劑瓶 中。加入200mL的氯仿和40mL的正丁醇，攪拌30min，離心，棄去下層和中間層變性蛋白，上 層清液用去離子水補(bǔ)足體積，繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇，攪拌，離心，如此反復(fù)5 次，真空濃縮，除去有機(jī)溶劑，加入4. 5倍量的95%乙醇，沉淀19h，5000rpm-10000rpm離心。 收集沉淀，依次用無水乙醇，丙酮洗滌沉淀，真空干燥得到精制的黃白色多糖5. 4g。以上列舉的具體實(shí)施例是對本發(fā)明進(jìn)行的說明。需要指出的是，以上實(shí)施例只用 于對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，不代表本發(fā)明的保護(hù)范圍，其他人根據(jù)本發(fā)明的提示做出的非 本質(zhì)的修改和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于包含下述步驟(1)取番石榴葉粗多糖，加水溶解后將其水溶液進(jìn)行大孔樹脂柱層析，上樣后采用醇 水體系洗脫并收集洗脫液中醇/水比例為0％ 50％的組分，合并洗脫液，濃縮干燥得純化后的番石榴葉多糖；(2)將純化后的番石榴葉多糖加水溶解，在其水溶液中加入氯仿和正丁醇，攪拌、離心后取上清液，在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇，攪拌、離心，如此反復(fù)處理3 5次；(3)對步驟(2)得到的番石榴葉多糖上清液進(jìn)行濃縮除去有機(jī)溶劑，然后對濃縮液進(jìn)行醇沉，收集沉淀并進(jìn)行洗滌和干燥后得到精制的番石榴葉多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(1)中所述的 番石榴葉粗多糖水溶液中番石榴葉粗多糖的含量是10-22g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(1)中所述的 番石榴葉粗多糖水溶液上樣前需經(jīng)過濾處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(1)中所述的 大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于所述的大孔樹脂為 HP-20大孔樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(1)中所述的 水-醇體系為水-乙醇體系或水-甲醇體系，二者的體積比為0-100%，采用梯度洗脫方法 洗脫，洗脫壓力為常壓，洗脫速度為5-15mL/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(2)中所述的 水的用量為純化后的番石榴葉多糖總重量的100-150倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(2)中所述的 氯仿的用量為純化后的番石榴葉多糖水溶液總體積的1/6-1/4，正丁醇的用量為氯仿用量 的 1/5。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(3)中醇沉?xí)r 采用的乙醇是體積百分含量為95%的乙醇或無水乙醇，其用量為番石榴葉多糖濃縮液總體 積的4-5倍，醇沉的時(shí)間為15-20h。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法，其特征在于步驟(3)中所述的 沉淀的洗滌過程是依次采用無水乙醇和丙酮進(jìn)行洗滌。
全文摘要
一種番石榴葉多糖的精制方法，含下述步驟(1)取番石榴葉粗多糖，加水溶解后將其水溶液進(jìn)行大孔樹脂柱層析，上樣后采用水-醇體系洗脫并收集洗脫液中醇/水比例為0％-50％的組分，合并洗脫液，濃縮干燥得純化后番石榴葉多糖；(2)將純化后番石榴葉多糖加水溶解，在其水溶液中加入氯仿和正丁醇，攪拌、離心后取上清液，在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇，攪拌、離心，如此反復(fù)處理3-5次；(3)對番石榴葉多糖上清液進(jìn)行濃縮除去有機(jī)溶劑，然后對濃縮液進(jìn)行醇沉，收集沉淀并進(jìn)行洗滌和干燥后得到精制的番石榴葉多糖。本發(fā)明具有高效，簡便，成本低，收率高等特點(diǎn)，所得番石榴葉多糖有利于進(jìn)一步研究其在醫(yī)藥、食品及保健品行業(yè)上的應(yīng)用。
文檔編號A61P3/10GK101899121SQ20101023325
公開日2010年12月1日 申請日期2010年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月21日
發(fā)明者李春榮, 杜陽吉, 王三永 申請人:廣東省食品工業(yè)研究所