專利名稱:一種番石榴葉多糖的精制方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種番石榴葉多糖的精制方法。
背景技術(shù):
多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖,通過糖苷鍵連接在一起的聚合物,該類 物質(zhì)在自然界植物中尤為豐富。研究結(jié)果表明多糖在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、降血糖、抗 病毒等方面具有良好的活性作用。番石榴屬桃金娘科,是一種適應(yīng)性很強(qiáng)的熱帶果樹。番石榴葉全年可以采摘,葉的 主要成分有黃酮類化合物,揮發(fā)油,植物固醇、鞣質(zhì),多糖等。研究表明番石榴葉具有極高 的藥用價(jià)值,如降血糖,抗菌、抗氧化、抗誘變、止血等。目前眾多研究結(jié)果表明,番石榴葉的 降血糖效果較為顯著,而番石榴葉多糖是其降血糖作用主要有效成分之一。作為一種天然 的藥物資源,番石榴葉在食品以及保健品行業(yè)中有著較好的開發(fā)前景。大孔樹脂分離技術(shù)作為一種常見的分離方法,已經(jīng)廣泛用于中藥和食品領(lǐng)域,它 具有設(shè)備簡單,能耗低,適用范圍廣,分離效果好,污染小等特點(diǎn),而其在番石榴葉多糖精制 方面的使用還未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種番石榴葉多糖的精制方法,該方法高效、簡便、成本 低,收率高。為達(dá)到上述目的,本發(fā)明提供的番石榴葉多糖的精制方法,包含下述步驟(1)取番石榴葉粗多糖,加水溶解后將其水溶液進(jìn)行大孔樹脂柱層析,上樣后采用 醇_水體系洗脫并收集洗脫液中醇/水比例為0% -50%的組分,合并洗脫液,濃縮干燥得 純化后的番石榴葉多糖;(2)將純化后的番石榴葉多糖加水溶解,在其水溶液中加入氯仿和正丁醇,攪拌、 離心后取上清液,在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇,攪拌、離心,如此反復(fù)處理3-5 次;(3)對步驟(2)得到的番石榴葉多糖上清液進(jìn)行濃縮除去有機(jī)溶劑,然后對濃縮 液進(jìn)行醇沉,收集沉淀并進(jìn)行洗滌和干燥后得到精制的番石榴葉多糖。在上述步驟中步驟(1)中番石榴葉粗多糖水溶液中番石榴葉粗多糖的含量是10-22g/L。步驟(1)中番石榴葉粗多糖水溶液上樣前需經(jīng)過濾處理。步驟⑴中大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。優(yōu)選的,所述的大孔 樹脂為HP-20大孔樹脂。步驟(1)中水-醇體系為水-乙醇體系或水_甲醇體系,二者的體積比為 100 % -0 % (水/醇體積比),采用梯度洗脫方法洗脫,洗脫壓力為常壓,洗脫速度為 5-15mL/min。
步驟(2)中水的用量為純化后的番石榴葉多糖總重量的100-150倍。步驟(2)中氯仿的用量為純化后的番石榴葉多糖水溶液總體積的1/6-1/4,正丁 醇的用量為氯仿用量的1/5。步驟(3)中醇沉?xí)r采用的乙醇是體積百分含量為95%的乙醇或無水乙醇,其用量 為番石榴葉多糖濃縮液總體積的4-5倍,醇沉的時(shí)間為15-20h。步驟(3)中沉淀的洗滌過程是依次采用無水乙醇和丙酮進(jìn)行洗滌。本發(fā)明具有高效,簡便,成本低,收率高等特點(diǎn),所得的番石榴葉多糖有利于進(jìn)一 步研究番石榴葉多糖在醫(yī)藥、食品以及保健品行業(yè)上的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明,以下試劑和原料等如無特殊說明均為市
售商品。實(shí)施例1將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中,將20g番石榴葉粗多糖加40mL 水溶解并稀釋至1L,過濾,用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢,以H20-乙醇體系洗脫,二者的體 積比為100% -0%遞減,流速為lOmL/min,常壓下洗脫,收集0% -50%組分,合并,濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖9. 5g。所得番石榴葉多糖用1L的水溶解,裝于試劑瓶中。 加入250mL的氯仿和50mL的正丁醇,攪拌30min,離心,棄去下層和中間層變性蛋白,上層清 液用去離子水補(bǔ)足體積,繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇,攪拌,離心,如此反復(fù)5次, 真空濃縮,除去有機(jī)溶劑,加入4倍體積量的95%乙醇,沉淀15h,5000rpm-10000rpm離心。 收集沉淀,依次用無水乙醇,丙酮洗滌沉淀,真空干燥得到精制的黃白色多糖4. 7g。實(shí)施例2將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中,將15g番石榴葉粗多糖加30mL 水溶解,并稀釋至1L,過濾,用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢,以H20-乙醇體系洗脫,二者的體 積比為100% -0%遞減,流速為lOmL/min,常壓下洗脫,收集0% -50%組分,合并,濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖8. 3g。所得番石榴葉多糖用1L的水溶解,裝于試劑瓶中。 加入250mL的氯仿和50mL的正丁醇,攪拌30min,離心,棄去下層和中間層變性蛋白,上層清 液用去離子水補(bǔ)足體積,繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇,攪拌,離心,如此反復(fù)5次, 真空濃縮,除去有機(jī)溶劑,加入4倍體積量的95%乙醇,沉淀16h,5000rpm-10000rpm離心。 收集沉淀,依次用無水乙醇,丙酮洗滌沉淀,真空干燥得到精制的黃白色多糖4. 3g。實(shí)施例3將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中,將22g番石榴葉粗多糖加60mL 水溶解并稀釋至1L,過濾,用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢,以H20-甲醇體系洗脫,二者的體 積比為100% -0%遞減,流速為15mL/min,常壓下洗脫,收集0% -50%組分,合并,濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖13. 4g。所得番石榴葉多糖用1. 8L的水溶解,裝于試劑瓶 中。加入300mL的氯仿和60mL的正丁醇,攪拌30min,離心,棄去下層和中間層變性蛋白,上 層清液用去離子水補(bǔ)足體積,繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇,攪拌,離心,如此反復(fù)5 次,真空濃縮,除去有機(jī)溶劑,加入5倍體積量的無水乙醇,沉淀17h,5000rpm-10000rpm離 心。收集沉淀,依次用無水乙醇,丙酮洗滌沉淀,真空干燥得到精制的黃白色多糖7. 5g。
實(shí)施例4將100g非極性大孔樹脂HP-20裝填于層析柱中,將18. 5g番石榴葉粗多糖加50 毫升水溶解稀釋至1L,過濾,用恒流泵緩慢上樣。上樣完畢,以H20-甲醇體系洗脫,二者的 體積比為100 % -0 %遞減,流速為lOmL/min,常壓下洗脫,收集0 % _50 %組分,合并,濃縮干 燥即得到純化后的番石榴葉多糖11. 2g。所得番石榴葉多糖用1. 2L的水溶解,裝于試劑瓶 中。加入200mL的氯仿和40mL的正丁醇,攪拌30min,離心,棄去下層和中間層變性蛋白,上 層清液用去離子水補(bǔ)足體積,繼續(xù)加入第一次比例的氯仿和正丁醇,攪拌,離心,如此反復(fù)5 次,真空濃縮,除去有機(jī)溶劑,加入4. 5倍量的95%乙醇,沉淀19h,5000rpm-10000rpm離心。 收集沉淀,依次用無水乙醇,丙酮洗滌沉淀,真空干燥得到精制的黃白色多糖5. 4g。以上列舉的具體實(shí)施例是對本發(fā)明進(jìn)行的說明。需要指出的是,以上實(shí)施例只用 于對本發(fā)明作進(jìn)一步說明,不代表本發(fā)明的保護(hù)范圍,其他人根據(jù)本發(fā)明的提示做出的非 本質(zhì)的修改和調(diào)整,仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于包含下述步驟(1)取番石榴葉粗多糖,加水溶解后將其水溶液進(jìn)行大孔樹脂柱層析,上樣后采用醇 水體系洗脫并收集洗脫液中醇/水比例為0% 50%的組分,合并洗脫液,濃縮干燥得純化后的番石榴葉多糖;(2)將純化后的番石榴葉多糖加水溶解,在其水溶液中加入氯仿和正丁醇,攪拌、離心后取上清液,在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇,攪拌、離心,如此反復(fù)處理3 5次;(3)對步驟(2)得到的番石榴葉多糖上清液進(jìn)行濃縮除去有機(jī)溶劑,然后對濃縮液進(jìn)行醇沉,收集沉淀并進(jìn)行洗滌和干燥后得到精制的番石榴葉多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(1)中所述的 番石榴葉粗多糖水溶液中番石榴葉粗多糖的含量是10-22g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(1)中所述的 番石榴葉粗多糖水溶液上樣前需經(jīng)過濾處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(1)中所述的 大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于所述的大孔樹脂為 HP-20大孔樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(1)中所述的 水-醇體系為水-乙醇體系或水-甲醇體系,二者的體積比為0-100%,采用梯度洗脫方法 洗脫,洗脫壓力為常壓,洗脫速度為5-15mL/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(2)中所述的 水的用量為純化后的番石榴葉多糖總重量的100-150倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(2)中所述的 氯仿的用量為純化后的番石榴葉多糖水溶液總體積的1/6-1/4,正丁醇的用量為氯仿用量 的 1/5。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(3)中醇沉?xí)r 采用的乙醇是體積百分含量為95%的乙醇或無水乙醇,其用量為番石榴葉多糖濃縮液總體 積的4-5倍,醇沉的時(shí)間為15-20h。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番石榴葉多糖的精制方法,其特征在于步驟(3)中所述的 沉淀的洗滌過程是依次采用無水乙醇和丙酮進(jìn)行洗滌。
全文摘要
一種番石榴葉多糖的精制方法,含下述步驟(1)取番石榴葉粗多糖,加水溶解后將其水溶液進(jìn)行大孔樹脂柱層析,上樣后采用水-醇體系洗脫并收集洗脫液中醇/水比例為0%-50%的組分,合并洗脫液,濃縮干燥得純化后番石榴葉多糖;(2)將純化后番石榴葉多糖加水溶解,在其水溶液中加入氯仿和正丁醇,攪拌、離心后取上清液,在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇,攪拌、離心,如此反復(fù)處理3-5次;(3)對番石榴葉多糖上清液進(jìn)行濃縮除去有機(jī)溶劑,然后對濃縮液進(jìn)行醇沉,收集沉淀并進(jìn)行洗滌和干燥后得到精制的番石榴葉多糖。本發(fā)明具有高效,簡便,成本低,收率高等特點(diǎn),所得番石榴葉多糖有利于進(jìn)一步研究其在醫(yī)藥、食品及保健品行業(yè)上的應(yīng)用。
文檔編號A61P3/10GK101899121SQ20101023325
公開日2010年12月1日 申請日期2010年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月21日
發(fā)明者李春榮, 杜陽吉, 王三永 申請人:廣東省食品工業(yè)研究所