一種水溶性藥物脂質(zhì)體制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種簡(jiǎn)單有效的水溶性藥物的脂質(zhì)體制備方法，該方法是將磷脂、膽固醇和親水聚合物修飾的脂類溶解于有機(jī)溶劑中，形成脂相，然后通過(guò)小孔三通裝置高速注入水相，形成粒度均一的空白脂質(zhì)體，進(jìn)行孵育，最后采用主動(dòng)載藥法得到脂質(zhì)體。使用該方法制備得到的脂質(zhì)體具有較高的包封效率。
【專利說(shuō)明】一種水溶性藥物脂質(zhì)體制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種簡(jiǎn)單有效的水溶性藥物的脂質(zhì)體制備方法，以及由該方法制得的脂質(zhì)體，及其在制備用于治療腫瘤疾病的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]惡性腫瘤是世界上死亡率排名第一的疾病，藥物化療是最常用的一種腫瘤治療方式。目前臨床上應(yīng)用的抗腫瘤藥物眾多，大致可分為細(xì)胞毒類、激素類、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、單克隆抗體以及其他抗腫瘤藥物這五類。其中細(xì)胞毒類藥物占市場(chǎng)份額最大，其按照作用機(jī)制可以分為以下五類:(1)直接破壞DNA并阻止其復(fù)制的藥物，如:烷化劑、鉬類、喜樹(shù)堿類；
[2]影響核酸生物合成的藥物，如:甲氨蝶呤、氟尿嘧啶等；(3)作用于核酸轉(zhuǎn)錄的藥物，如:多柔比星、表阿霉素、米托蒽醌等；(4)影響蛋白質(zhì)合成的藥物，如:紫杉烷類、長(zhǎng)春堿類；(5 )其他細(xì)胞毒藥物。以上細(xì)胞毒類藥物雖然療效顯著，但由于選擇性較差，并且給藥后在機(jī)體內(nèi)非特異性分布，通常具有較為嚴(yán)重的臨床毒性，如骨髓抑制、消化道反應(yīng)、脫發(fā)等，對(duì)患者的身心健康產(chǎn)生極為不利的影響。
[0003]脂質(zhì)體是避免抗腫瘤藥物毒副作用的最好的方式之一，其作為抗腫瘤藥物的載體可以使藥物特異性的靶向腫瘤區(qū)并滯留于其中緩慢釋放，減少在正常組織中的分布，從而起到減毒、增效的作用。
[0004]脂質(zhì)體的適宜粒度是脂質(zhì)體得以向腫瘤區(qū)靶向的主要原因，也是控制藥物從脂質(zhì)體中釋放的關(guān)鍵因素。得到粒度合適并且分布均勻的脂質(zhì)體，是脂質(zhì)體制劑研究者的共同理想。自1965年Bangham發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體以來(lái)，已經(jīng)發(fā)展了近幾十種脂質(zhì)體制備技術(shù)，目前比較常用的有薄膜分散法、反相蒸發(fā)法、注入法、復(fù)乳法、冷凍干燥法等。以上這些制備技術(shù)大多只適用于實(shí)驗(yàn)室的研究工作，能夠產(chǎn)業(yè)化的并不多，并且以上制備方法的共同特點(diǎn)是最初形成的脂質(zhì)體為多室脂質(zhì)體，需要經(jīng)過(guò)整粒步驟才能獲得理想粒徑的單室脂質(zhì)體，即脂質(zhì)體的形成和粒度的降低分兩步進(jìn)行。目前應(yīng)用較為廣泛的的整粒方法包括超聲法、擠出法和均質(zhì)法，該三種方法均需配備專用的設(shè)備，價(jià)格高昂，且各有優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍。其中超聲法和均質(zhì)法適合制備小粒徑脂質(zhì)體，但該兩種方法產(chǎn)生熱量較高，容易導(dǎo)致生物大分子和一些敏感藥物分解，且超聲探頭在高頻震動(dòng)下極易掉屑，造成體系的污染。擠出法適合制備較大粒徑(通常大于80nm)的脂質(zhì)體，因?yàn)楫?dāng)使用小孔徑濾膜時(shí)擠出壓力非常大，有時(shí)高達(dá)15(T500psi，并且擠壓速率非常低，操作過(guò)程很容易堵膜，導(dǎo)致擠出無(wú)法繼續(xù)。
[0005]美國(guó)專利US6843942提供了一種簡(jiǎn)單易行的脂質(zhì)體制備方法，以下簡(jiǎn)稱為“小孔三通法”，使脂質(zhì)體的形成和粒度降低合并為一步。該方法設(shè)計(jì)了一種特殊的裝置，該裝置包括一條傳輸極性水相的管路，一條傳輸含脂有機(jī)相的管路和一個(gè)將水相管路和含脂有機(jī)相管路按垂直方向以小孔連接起來(lái)的元件(下面簡(jiǎn)稱為小孔三通)。該制備方法的原理為脂相乙醇溶液通過(guò)小孔被高速注射到與它流動(dòng)方向垂直的水相溶液中，形成非常小的脂相液滴，隨后乙醇迅速擴(kuò)散，導(dǎo)致磷脂聚集形成閉合的雙分子層，即脂質(zhì)體。發(fā)明人將重組人超氧化物歧化酶(rh-SOD)的磷酸鹽緩沖溶液(PBS溶液)作為水相，將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、膽固醇、硬脂酰胺的乙醇溶液作為有機(jī)相，兩相溶液加壓通過(guò)小孔三通后，即可形成粒徑分布均勻的載藥脂質(zhì)體，包封率為87.5-90.5%。
[0006]上述專利采用被動(dòng)載藥法一步完成了脂質(zhì)體的形成、整粒和載藥，雖簡(jiǎn)單快捷，但包封率不高，其原因在于rh-SOD為水溶性藥物，脂質(zhì)體形成初期未包裹于脂質(zhì)體內(nèi)的藥物可以良好的分散于脂質(zhì)體外的溶液中，脂質(zhì)體形成后藥物也無(wú)法進(jìn)行跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)而進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)部。由于我們所關(guān)心的藥物為水溶性抗腫瘤藥物，如鹽酸多柔比星、鹽酸米托蒽醌、酒石酸長(zhǎng)春瑞濱和鹽酸拓?fù)涮婵档?，為更好的降低毒性考慮，該類藥物脂質(zhì)體的包封率通常要求大于90% (如楷萊標(biāo)準(zhǔn))，因此該專利所述的被動(dòng)載藥的脂質(zhì)體制備方法并不理想。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供一種新的脂質(zhì)體制備方法，該脂質(zhì)體含有作為活性成分的水溶性藥物和脂質(zhì)體的雙分子層，雙分子層含有一種或多種磷脂、膽固醇和一種或多種親水聚合物修飾的脂類，該方法的特征在于先采用小孔三通裝置制備空白脂質(zhì)體，然后采用主動(dòng)載藥法完成藥物裝載。
[0008]該方法包括如下步驟:(1)將磷脂、膽固醇和親水聚合物修飾的脂類溶解于有機(jī)溶劑中，形成脂相，然后通過(guò)小孔三通裝置高速注入水相，形成粒度均一的空白脂質(zhì)體；
(2)將形成的空白脂質(zhì)體進(jìn)行孵育；(3)采用硫酸銨梯度法、pH梯度法、絡(luò)合梯度法等主動(dòng)載藥法完成藥物裝載。
[0009]其中所述水溶性藥物為抗腫瘤藥。
[0010]其中所述抗腫瘤藥為鹽酸多柔比星、鹽酸米托蒽醌、酒石酸長(zhǎng)春瑞濱或鹽酸拓?fù)涮婵档囊环N或多種。
[0011]其中步驟(2)的孵育在40-70°C進(jìn)行。
[0012]其中步驟(2)的孵育需進(jìn)行20-60分鐘。
[0013]其中小孔三通的孔徑為0.05-1.5mm，優(yōu)選0.2-0.5mm。
[0014]其中所述磷脂選自卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、雙肉豆蘧酸卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂或雙硬脂酸卵磷脂或者其任意組合。
[0015]其中所述親水聚合物修飾的脂類選自聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油、聚乙二醇修飾的膽固醇、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油、聚維酮修飾的膽固醇或者其任意組合。
[0016]其中所述水相溶液選自乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖或海藻糖水溶液。
[0017]本發(fā)明還提供一種脂質(zhì)體藥物制劑，其特征在于含有按照上述方法得到的脂質(zhì)體，和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦型劑。
[0018]該脂質(zhì)體藥物制劑還含有改變滲透壓的鹽、緩沖物質(zhì)和/或抗氧劑。
[0019]本發(fā)明還提供上述脂質(zhì)體藥物制劑在制備用于治療腫瘤患者的藥物中的用途。
[0020]雖然上述美國(guó)專利US6843942提供了一種簡(jiǎn)單易行的脂質(zhì)體制備方法(小孔三通法)，其中采用被動(dòng)載藥法裝載藥物；并且現(xiàn)有技術(shù)已教導(dǎo)使用主動(dòng)載藥法可以使水溶性藥物獲得更高的包封率。這似乎啟示我們可以將小孔三通法和主動(dòng)載藥法結(jié)合以制備水溶性藥物的脂質(zhì)體，但本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，這種結(jié)合——首先采用簡(jiǎn)單易行的小孔三通法制備空白脂質(zhì)體，然后采用主動(dòng)載藥法進(jìn)行藥物的裝載一一卻并未如所愿的那樣獲得較高的包封效率。
[0021]本發(fā)明的發(fā)明人通過(guò)調(diào)整三通孔徑，脂相濃度，親水性聚合物修飾的磷脂的含量，脂相和水相溶液的流速，制備得到粒徑范圍為5 O -12 O nm，粒徑的多分散指數(shù)(P DI)小于
0.16的空白脂質(zhì)體。將得到的空白脂質(zhì)體采用硫酸銨梯度法裝載多柔比星、米托蒽醌、長(zhǎng)春瑞濱和拓?fù)涮婵?，最?yōu)處方的包封率均大于95%。采用同樣處方對(duì)比擠出法、均質(zhì)法制備的多柔比星和米托蒽醌脂質(zhì)體時(shí)觀察到一個(gè)現(xiàn)象，當(dāng)藥脂比提高時(shí)，小孔三通法制備的脂質(zhì)體包封率下降；而采用擠出法制備得到的脂質(zhì)體的包封率隨藥脂比變化不大。
[0022]采用進(jìn)口鹽酸多柔比星脂質(zhì)體(楷萊)的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定多柔比星脂質(zhì)體的體外釋放率，結(jié)果顯示小孔三通法制備的脂質(zhì)體3小時(shí)釋放率不符合標(biāo)準(zhǔn)；而擠出法、均質(zhì)法制備得到的多柔比星脂質(zhì)體的體外釋放率則符合標(biāo)準(zhǔn)。由此看出，小孔三通法雖然簡(jiǎn)單易行，但對(duì)于裝載水溶性藥物卻存在著明顯的缺陷。
[0023]本發(fā)明的發(fā)明人分析小孔三通法脂質(zhì)體的形成過(guò)程，認(rèn)為由于脂質(zhì)體瞬間形成，因此脂膜很可能水化不完全，從而導(dǎo)致用該方法制備得到的脂質(zhì)體的包封率和釋放均與擠出法不同。發(fā)明人出乎意料的發(fā)現(xiàn)，在三通制備脂質(zhì)體后載藥前增加一個(gè)孵育的步驟，結(jié)果顯示高藥脂比時(shí)脂質(zhì)體的包封率與擠出法一致，仍然能達(dá)到95%以上，并且其釋放結(jié)果也符合要求。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面所述實(shí)施例的目的是為了更好的說(shuō)明本發(fā)明，但不應(yīng)對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成限定。
[0025]實(shí)施例1
空白脂質(zhì)體制備的一般方案
1.一般方案I
將氫化大豆卵磷脂(HSPC)、膽固醇按照3:1的質(zhì)量比混合，同時(shí)加入聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-mPEG2000)，其摩爾數(shù)為磷脂的0.1%至20%。將上述混合物溶解于95%叔丁醇中，凍干除去有機(jī)溶劑得到疏松的脂質(zhì)粉末，以250mM硫酸銨溶液水化脂質(zhì)粉末，60-65°C水化I小時(shí)，得到不均勻的多室脂質(zhì)體。使用微射流設(shè)備或高壓擠出設(shè)備降低脂質(zhì)體的粒度，將所獲得的樣品用水稀釋20-100倍，用NanoZS進(jìn)行檢測(cè)。使用超濾裝置移去空白脂質(zhì)體外相的硫酸銨，將外相置換成含290mM蔗糖和20mM組氨酸的水溶液，以便形成跨膜動(dòng)力梯度。按照合適的藥脂比，在空白脂質(zhì)體中加入藥物水溶液，60-65°C孵育I小時(shí)，使用凝膠排阻色譜測(cè)定包封效率。
[0026]2.一般方案2——小孔三通法
將HSPC、膽固醇按照3:1的質(zhì)量比混合，同時(shí)加入DSPE-mPEG2000，其摩爾數(shù)為磷脂的
0.1%至20%。將上述混合物溶解于95%乙醇中為脂相，以250mM硫酸銨溶液為水相，將脂相和水相預(yù)熱到60-65°C，以一定速度通過(guò)小孔三通裝置混合后得到脂質(zhì)體。將所獲得的脂質(zhì)體用水稀釋20-100倍，用NanoZS進(jìn)行檢測(cè)。使用超濾裝置移去空白脂質(zhì)體外相的硫酸銨，將外相置換成含290mM蔗糖和2 0mM組氨酸的水溶液，以便形成跨膜動(dòng)力梯度。按照合適的藥脂比，在空白脂質(zhì)體中加入藥物水溶液，60-65°C孵育I小時(shí)，使用凝膠排阻色譜測(cè)定包封效率。[0027]3.一般方案3——小孔三通孵育法
按照上述一般方案2的方法，在“按照合適的藥脂比，在空白脂質(zhì)體中加入藥物水溶液”操作前，將空白脂質(zhì)體放入60-65°C水浴中孵育I小時(shí)。
[0028]實(shí)施例2
不同孔徑三通制備得到的脂質(zhì)體粒徑對(duì)比
將HSPC、膽固醇、DSPE-mPEG2000按照3:1:1的質(zhì)量比混合，溶解于95%乙醇中，脂相中HSPC濃度為90mg/ml。按照一般方案3的方法，分別采用0.2,0.4,0.5mm孔徑的小孔三通，脂水相比為1:10 (體積比)，不同流速混合制備得到脂質(zhì)體。各參數(shù)設(shè)置及脂質(zhì)體粒徑如表1所示，結(jié)果顯示當(dāng)流速相同時(shí)，隨孔徑增大，脂質(zhì)體粒徑逐漸增大，且均勻度變差；當(dāng)孔徑相同時(shí)，隨流速增加，脂質(zhì)體粒徑和PDI逐漸減小；當(dāng)孔徑較小時(shí)，在較低的流速就能獲得理想的粒徑分布，有利于生產(chǎn)中節(jié)約成本。
[0029]表1:不同三通孔徑制備得到脂質(zhì)體粒徑對(duì)比
)
【權(quán)利要求】
1.一種脂質(zhì)體制備方法，該脂質(zhì)體含有作為活性成分的水溶性藥物和脂質(zhì)體的雙分子層，雙分子層含有磷脂、膽固醇和親水聚合物修飾的脂類，該方法的特征在于包括如下步驟:(I)將磷脂、膽固醇和親水聚合物修飾的脂類溶解于有機(jī)溶劑中，形成脂相，然后通過(guò)小孔三通裝置注入水相溶液，形成粒度均一的空白脂質(zhì)體；(2)將形成的空白脂質(zhì)體進(jìn)行孵育；(3)采用主動(dòng)載藥法完成藥物裝載。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體制備方法，其特征在于所述水溶性藥物為抗腫瘤藥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體制備方法，其特征在于所述抗腫瘤藥為鹽酸多柔比星、鹽酸米托蒽醌、酒石酸長(zhǎng)春瑞濱或鹽酸拓?fù)涮婵档囊环N或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體制備方法，其特征在于步驟(2)的孵育在40-70°C進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體制備方法，其特征在于步驟(2)的孵育需進(jìn)行20-60分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體制備方法，其特征在于小孔三通的孔徑為0.05-1.5mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體制備方法，其特征在于小孔三通的孔徑為0.2-0.5_。
8.一種脂質(zhì)體藥物制劑，其特征在于含有按照權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體制備方法得到的脂質(zhì)體，和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦型劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的脂質(zhì)體藥物制劑，其特征在于還含有改變滲透壓的鹽、緩沖物質(zhì)和/或抗氧劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8-9中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)體藥物制劑在制備用于治療腫瘤患者的藥物中的用途。
【文檔編號(hào)】A61K9/127GK103536533SQ201210247061
【公開(kāi)日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2012年7月17日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月17日
【發(fā)明者】張?zhí)m, 高玉清, 王艷玲, 李彥輝, 李春雷 申請(qǐng)人:石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司