專利名稱：一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型領(lǐng)域，特別涉及一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary Hypertension, PH)主要臨床表現(xiàn)為肺動(dòng)脈壓力的增高，是人類重大的心肺血管疾病之一。PH動(dòng)物模型的建立是對(duì)該病進(jìn)行基礎(chǔ)和臨床研究的平臺(tái)。目前PH動(dòng)物模型分為急性和慢性二種類型。急性動(dòng)物模型的建立以低氧性或/和低壓低氧性PH動(dòng)物模型為主，以大白鼠較為常用(陳莉延等.白藜蘆醇苷對(duì)慢性常壓低氧性肺動(dòng)脈高壓模型中磷脂酶A_2、一氧化氮和內(nèi)皮素水平的影響.中國(guó)病理生理雜志2006)，其次有小鼠、兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
慢性動(dòng)物模型的建立以藥物誘導(dǎo)為主，國(guó)內(nèi)外常用的誘導(dǎo)藥物主要是野百合堿(Monocrotaline, MCT)或野百合堿活性代謝物。野百合堿屬雙稠吡咯啶生物堿，對(duì)癌細(xì)胞DNA可發(fā)生烴化作用，而起抗癌作用，注射后主要分布于肝、腎和胃，對(duì)多種實(shí)驗(yàn)性腫瘤有抑制作用，臨床主要試用于皮膚磷狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞癌，療效較好，對(duì)急性白血病、子宮頸癌和陰莖癌也有效。野百合堿是復(fù)制慢性PH疾病模型的常用藥物，無論大鼠、小鼠、兔子或犬，都可以復(fù)制成功，但是其病理特征不完全相同。MCT單次劑量(60 mg/kg)注射大白鼠后2 — 3周就形成大鼠慢性PH模型(JiangBH, Tawara S，Abe K，et al. Acute vasodilator effect of fasudil， a Rho—kinaseinhibitor,in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats. J CardiovascPharmacol, 2007，49(2) :85-89)。一般釆用右心導(dǎo)管插入術(shù)測(cè)量右心室收縮壓，確立PH的形成以及達(dá)到何種程度，同時(shí)進(jìn)行心、肺組織的大體解剖和組織學(xué)評(píng)價(jià)，其病理特征類似于臨床上原發(fā)性和繼發(fā)性PH。病理變化主要是肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，平滑肌明顯增生導(dǎo)致肺動(dòng)脈血管壁的重建和右心室肥厚，肺血管重構(gòu)引起的內(nèi)皮損傷的。組織學(xué)特征還包括在肺動(dòng)脈和小動(dòng)脈中層平滑肌細(xì)胞的肥大等等。但是由于模型動(dòng)物本身在生理學(xué)和解剖結(jié)構(gòu)等方面與人類差別較大，特別當(dāng)動(dòng)物處在麻醉狀態(tài)下，心率、呼吸頻率的變化較大，臨床表現(xiàn)不穩(wěn)定。Jones(2002)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)大鼠的心率(260 450次/分)下降到200次/min以下時(shí)(當(dāng)麻醉過深等條件下時(shí))，肺動(dòng)脈血流加速時(shí)間(PAAT)的長(zhǎng)度與肺動(dòng)脈收縮壓(PASP)的高度沒有相關(guān)性了。臨床上右心室的射血前期和射血前期與加速時(shí)間的比值都與PASP的增加具有相關(guān)性。然而大鼠模型中，射血前期不隨PASP的增加而延長(zhǎng)；反而加速時(shí)間與PASP 的增加緊密關(guān)聯(lián)。(JOHN E. JONES, I, 2 LISA MENDES, 2 M. AUDREY RUDD, 2 Serialnoninvasive assessment of progressive pulmonary hypertension in a rat model .Am J Physiol Heart Circ Physiol 283: H364 -H371, 2002)
陳洪茂等在對(duì)用MCT誘導(dǎo)的模型兔實(shí)時(shí)超聲監(jiān)測(cè)時(shí)，顯示并不是所有PH模型兔均出現(xiàn)三尖瓣反流及肺動(dòng)脈瓣反流，兔的肺動(dòng)脈瓣反流出現(xiàn)率只有53. 8% ;三尖瓣反流出現(xiàn)率僅為69. 2%(陳洪茂，段云友，周寧等.實(shí)時(shí)超聲監(jiān)測(cè)兔慢性肺動(dòng)脈高壓模型的建立及其意義·中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)雜志2008，24(8) :864-867.)?？偟膩碇v，小體型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由于心肺血管生理結(jié)構(gòu)的不同，所建立的藥物誘導(dǎo)模型與實(shí)際臨床特征存在很大差異，同時(shí)，也不適合實(shí)時(shí)超聲監(jiān)測(cè)。近年來較大的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一實(shí)驗(yàn)用犬(雜種犬或比格犬)已用于慢性PH模型復(fù)制和石開究(Takahashi M, Nakamura T, Toba T, Transplantation of endothelial progenitorcells into the lung to alleviate pulmonary hypertension in dogs. Tissue Eng.2004 May-Jun; 10 (5-6) :771_9)。但是犬的心臟結(jié)構(gòu)與人類有很大差異，并且常常表現(xiàn)為心律不齊；同時(shí)犬類屬于寵物，是人類的朋友，用犬做動(dòng)物試驗(yàn)愈來愈受到動(dòng)物保護(hù)主義者的限制和反對(duì)。尤其是人和犬對(duì)于藥品的代謝途徑不同，從而造成病理特征不同于臨床。如犬缺少野百合堿的代謝酶，只能代謝野百合堿的衍生物，因此用犬做動(dòng)物試驗(yàn)給藥劑量、方法與人不同。近年來豬也常用于急性低氧性PH動(dòng)物模型的研究(徐軍，侯恕，陳順存等.內(nèi)皮素在低氧肺動(dòng)脈高壓形成中的作用.中華結(jié)核和呼吸雜志.1995. 18(5) : 290-292)。但是，急性動(dòng)物模型的缺點(diǎn)在于不能連續(xù)、長(zhǎng)期觀察PH的形成過程和變化特點(diǎn)?！ひ虼耍惹行枰环N可進(jìn)行連續(xù)、長(zhǎng)期觀察、治療和研究，且接近人類肺動(dòng)脈高壓臨床特征的慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例所要解決的技術(shù)問題在于，提供一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法，所述小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型采用的小型豬的體型大小、結(jié)構(gòu)與人體相似，可以采用臨床設(shè)備進(jìn)行測(cè)定和臨床觀察，且其病理變化較其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物更接近人類臨床病理變化，有利于進(jìn)行長(zhǎng)期的觀察、治療和研究。為達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型，是將野百合堿溶液注射到健康的1飛月齡、雄性或雌性、體重3 15kg小型豬腹腔中，在注射野百合堿第4、周后得到小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型。優(yōu)選地，所述小型豬為健康的2 4月齡小型豬，雄性，體重4 14kg。優(yōu)選地，所述野百合堿溶液是將野百合堿溶于濃度為5(Γ80%的酒精溶液后所得的濃度為22 28mg/gl的溶液；
所述野百合堿溶液的注射劑量為9. (T25mg/kg。相應(yīng)地，本發(fā)明實(shí)施例還提供了一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括
選用健康的廣5月齡小型豬，所述小型豬為雄性或雌性，體重3 15kg ；
將野百合堿與酒精混合配成野百合堿溶液，將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中；
在將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔后第4、周內(nèi)將所述小型豬進(jìn)行心導(dǎo)管壓力測(cè)定。優(yōu)選地，所述小型豬為健康的，2 4月齡，雄性，體重為4 14kg的小型豬。優(yōu)選地，所述酒精的濃度為5(Γ80%，所述野百合堿溶液的濃度為22 28mg/gl，所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中的注射劑量為9. (T25mg/kg。
優(yōu)選地，所述心導(dǎo)管壓力測(cè)定為右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定，所述右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定對(duì)象包括平均肺動(dòng)脈壓、右心室壓力和右心房壓力。優(yōu)選地，在將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔后第4、周內(nèi)將所述小型豬進(jìn)行心導(dǎo)管壓力測(cè)定之后還包括
將所述小型豬進(jìn)行器官觀察和組織切片HE染色；
所述器官觀察的步驟為取所述小型豬的心臟和肺組織，稱量右心室和左心室加中隔重量，右心室重量/體重，左心室重量/體重，右心室/左心室比值；
所述組織切片HE染色的步驟為將所述心臟和肺組織用3. 5^4. 5%甲醛磷酸緩沖液固定2Γ50 h，然后沿著肺動(dòng)脈垂直方向取材，包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察肺血管形態(tài)學(xué)改變。優(yōu)選地，所述心臟和肺組織為將所述部分小型豬用麻醉劑致死后即刻取得的心臟和肺組織；
所述麻醉劑注射于所述小型豬的腹腔中；
所述麻醉劑為戊巴比妥鈉。實(shí)施本發(fā)明具有如下有益效果
本發(fā)明關(guān)于一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型是利用野百合堿建立一個(gè)慢性肺動(dòng)脈高壓模型，即慢性PH模型，其病理特征與人類臨床病理特征接近，方法簡(jiǎn)單，動(dòng)物也容易處理。一、選用小型豬用于慢性肺動(dòng)脈高壓模型的建立，與采用缺氧或低氧方法建立的急性模型相比，模型的構(gòu)建更加精確與穩(wěn)定，模型的可復(fù)制性也較強(qiáng)，可以進(jìn)行長(zhǎng)期的觀察、治療和研究。二、與大鼠、小鼠和兔相比,小型豬相對(duì)來講體型較大、血液量大、有利于外科手術(shù)操作等臨床治療研究，且其體型大小、結(jié)構(gòu)與人體相似，例如豬的心率、肺臟血管床結(jié)構(gòu)、呼 吸頻率、潮氣量等方面與人類極為相似。因此對(duì)于小型豬可以采用臨床設(shè)備進(jìn)行測(cè)定觀察，采用與臨床病人相同的方法進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定，既可以通過右心導(dǎo)管術(shù)進(jìn)行有創(chuàng)觀察，又可以利用臨床設(shè)備如超聲心動(dòng)圖進(jìn)行無創(chuàng)臨床研究。而檢測(cè)得到的指標(biāo)也更加接近臨床指標(biāo)，這樣可以從不同側(cè)面(動(dòng)物模型)和研究水平探討導(dǎo)致PH的發(fā)病機(jī)制和決定因素。三、與犬、猴實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相比，豬作為食用動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從倫理方面容易被人們接受。且豬的飼養(yǎng)成本低，價(jià)格便宜，又不易對(duì)人造成傷害。


圖I為本發(fā)明一種構(gòu)建小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型過程中右心導(dǎo)管術(shù)壓力的測(cè)定方法的流程 圖2為本發(fā)明一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法的流程 圖3為本發(fā)明一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法的又一流程 圖4為對(duì)照組小型豬肺動(dòng)脈壓力波曲線 圖5為實(shí)驗(yàn)組小型豬肺動(dòng)脈壓力波曲線 圖6為對(duì)照組小型豬右心室壓力波曲線 圖7為實(shí)驗(yàn)組小型豬右心室壓力波曲線圖；圖8為對(duì)照組小型豬肺組織切片 圖9為實(shí)驗(yàn)組小型豬肺組織切片圖。
具體實(shí)施例方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。本發(fā)明實(shí)施例提供了一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型，是將野百合堿溶液注射到健康的廣5月齡、雄性或雌性、體重3 15kg小型豬腹腔中，在注射野百合堿第4、周后得到小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型。優(yōu)選地，所述小型豬為健康的2 4月齡小型豬，雄性，體重4 14kg。 所述野百合堿溶液是將野百合堿溶于濃度為5(Γ80%的酒精溶液后所得的濃度為22 28mg/gl的溶液；
所述野百合堿溶液的注射劑量為9. (T25mg/kg。優(yōu)選地，所述野百合堿溶液是將野百合堿溶于濃度為55 75%的酒精溶液后所得的濃度為25mg/gl的溶液；
所述野百合堿溶液的注射劑量為l(T20mg/kg。需要說明的是，野百合堿為Monocrotaline,簡(jiǎn)稱為MCT。相應(yīng)地，本發(fā)明實(shí)施例還提供了小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。如圖I所示，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種構(gòu)建小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型過程中右心導(dǎo)管術(shù)壓力的測(cè)定方法，包括
S100，準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、麻醉劑、手術(shù)器械、生理鹽水、肝素、注射器、三通閥、實(shí)驗(yàn)用的插管、動(dòng)脈夾。需要說明的是，所述麻醉劑為戊巴比妥鈉，按50mg/kg腹腔注射。S10ljE0.9 %氯化鈉溶液和肝素10 U/ ml混合成肝素生理鹽水，用注射器吸入
一定容量備用。S102，把插管和換能器連接起來，并接入三通閥，把注射器插入換能器的另一端，慢慢推動(dòng)注射器，使換能器和插管中充滿肝素生理鹽水；
需要說明的是，在步驟S102的把注射器插入換能器的另一端，慢慢推動(dòng)注射器，使換能器和插管中充滿肝素生理鹽水操作中，不允許有氣泡的產(chǎn)生。S103，麻醉動(dòng)物，在準(zhǔn)備要插管的手術(shù)位置，暴露20mm左右的血管，用手術(shù)線結(jié)扎遠(yuǎn)心端，用動(dòng)脈夾夾住近心端，用剪刀在血管上剪一個(gè)小口，把插管插入，結(jié)扎好。S104，測(cè)平均肺動(dòng)脈壓、右心室壓力及右心房壓力；
自右側(cè)頸外靜脈插入直徑為Imm充有肝素溶液的聚乙烯塑料微導(dǎo)管，導(dǎo)管的另一端與微型壓力傳感器相連監(jiān)測(cè)壓力變化，在X光透視下，確定導(dǎo)管經(jīng)前腔靜脈進(jìn)入右心房、三尖瓣口、右心室(RV)，最后進(jìn)入肺動(dòng)脈干，測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)、右心室壓力(RVP)及右心房壓力。S105，另一充盈肝素溶液的微導(dǎo)管插入右側(cè)頸動(dòng)脈測(cè)定動(dòng)脈壓(mCAP)。S106，穩(wěn)定30 min后，應(yīng)用MedLab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)采集、記錄和分析各項(xiàng)指標(biāo)。
如圖2所示，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括
S200，選用健康的f 5月齡小型豬，所述小型豬為雄性或雌性，體重3 15kg ；
優(yōu)選地，所述小型豬為健康的，2 4月齡，雄性，體重為4 14kg的小型豬。S201，將野百合堿與酒精混合配成野百合堿溶液，將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中；
所述酒精的濃度為5(Γ80%，所述野百合堿溶液的濃度為22 28mg/gl，所述野百合堿溶 液注射于所述小型豬腹腔中的注射劑量為9. (T25mg/kg。優(yōu)選地，所述酒精的濃度為55 75%，所述野百合堿溶液的濃度為25mg/gl，所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中的注射劑量為l(T20mg/kg。S202，在將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔后第4、周內(nèi)將所述小型豬進(jìn)行心導(dǎo)管壓力測(cè)定；
優(yōu)選地，在將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔后第Γ8周內(nèi)將所述小型豬進(jìn)行心導(dǎo)管壓力測(cè)定。所述心導(dǎo)管壓力測(cè)定為右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定，所述右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定對(duì)象包括平均肺動(dòng)脈壓、右心室壓力和右心房壓力。需要說明的是，步驟S202可以采用圖I所示的右心導(dǎo)管術(shù)壓力的測(cè)定方法來測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓、右心室壓力和右心房壓力。如圖3所示，本發(fā)明實(shí)施例還提供了另一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括
S300，選用健康的2 4月齡小型豬，所述小型豬為雄性，體重4 14kg ；
S301，將野百合堿與酒精混合配成野百合堿溶液，將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中；
所述酒精的濃度為5(Γ80%，所述野百合堿溶液的濃度為22 28mg/gl，所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中的注射劑量為9. (T25mg/kg。優(yōu)選地，所述酒精的濃度為55 75%，所述野百合堿溶液的濃度為25mg/gl，所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中的注射劑量為l(T20mg/kg。S302，在將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔后第Γ8周內(nèi)將所述小型豬進(jìn)行心導(dǎo)管壓力測(cè)定。所述心導(dǎo)管壓力測(cè)定為右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定，所述右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定對(duì)象包括平均肺動(dòng)脈壓、右心室壓力和右心房壓力。需要說明的是，步驟S302可以采用圖I所示的右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定的方法來測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓、右心室壓力和右心房壓力。S303，將所述小型豬進(jìn)行器官觀察和組織切片HE染色；
所述器官觀察的步驟為將所述部分小型豬用麻醉劑致死后即刻取得的心臟和肺組織，
稱量右心室和左心室加中隔重量,右心室重量/體重,左心室重量/體重,右心室/左心室比值；
所述組織切片HE染色的步驟為將所述即刻取得的心臟和肺組織用3. 5^4. 5%甲醛磷酸緩沖液固定24飛0h，然后沿著肺動(dòng)脈垂直方向取材，包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察肺血管形態(tài)學(xué)改變。優(yōu)選地。所述組織切片HE染色的步驟為將所述心臟和肺組織用4. 0%甲醛磷酸緩沖液固定48 h。需要說明的是，本步驟通過把50mg/kg的戊巴比妥鈉麻醉劑注射于所述部分小型豬的腹腔中，待其麻醉致死后即刻取得所述小型豬的心臟和肺組織。S304，觀察所述心臟和肺組織的結(jié)構(gòu)變化，結(jié)合肺動(dòng)脈壓力指標(biāo)的變化，檢驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建成功與否。臨床上肺動(dòng)脈血壓增高的診斷標(biāo)準(zhǔn)為在海平面狀態(tài)下，靜息時(shí)右心導(dǎo)管檢查肺動(dòng)脈收縮壓>30mmHg (ImmHg=O. 133kPa)和/或肺動(dòng)脈平均壓>25mmHg,或者運(yùn)動(dòng)時(shí)肺動(dòng)脈平均壓>30mmHg。西藏小型豬的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo),正常肺動(dòng)脈平均壓為15. 1-19. 8mmHg,與人類的肺動(dòng)脈高壓的指標(biāo)接近。臨床上肺動(dòng)脈高壓特征性的病理改變?yōu)樾》蝿?dòng)脈內(nèi)膜纖維化，中膜肥厚，外膜增·生，叢樣病變及動(dòng)脈管腔閉塞。具體表現(xiàn)為肺泡充血、水腫、間隔增寬，小肺動(dòng)脈血管中膜肥厚，內(nèi)膜纖維化等。當(dāng)所述小型豬注射野百合堿溶液4、周后，平均肺動(dòng)脈壓由15. ImmHg上升至32. 5mmHg,同時(shí)出現(xiàn)明顯的肺動(dòng)脈高壓的病理特征肺泡充血、水腫、間隔增寬，小肺動(dòng)脈血管中膜肥厚，內(nèi)膜纖維化等，模型構(gòu)建成功。將構(gòu)建慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的小型豬進(jìn)行如下的動(dòng)物對(duì)比實(shí)驗(yàn)
一、實(shí)驗(yàn)材料西藏小型豬12頭，雄性，3-4月齡，體重13 14kg，實(shí)驗(yàn)組8頭，對(duì)照組
4頭，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。野百合堿(MCT)購自成都曼思特生物科技有限公司(HPLC, 99. 0%)
二、實(shí)驗(yàn)步驟
I、正常血流動(dòng)力指標(biāo)測(cè)定用3%戊巴比妥鈉按lml/kg的劑量將西藏小型豬麻醉后仰臥位捆綁在實(shí)驗(yàn)用床上，右側(cè)頸部剃毛，備皮，碘酒酒精消毒，鋪巾，切開局部皮膚(靠近氣管右側(cè))，游離皮下組織，暴露動(dòng)靜脈、分離右頸內(nèi)靜脈約20_后，用手術(shù)線結(jié)扎遠(yuǎn)心端，用動(dòng)脈夾夾住近心端，直視下用5F撓動(dòng)脈穿刺針法穿刺右頸內(nèi)靜脈，從穿刺針內(nèi)送入導(dǎo)引鋼絲(約IOcm)，退出穿刺針，沿導(dǎo)引鋼絲送入5F動(dòng)脈鞘后退出導(dǎo)引鋼絲，再經(jīng)動(dòng)脈鞘送入5F導(dǎo)管至前腔靜脈、右心房，右心室，肺動(dòng)脈主干，測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)包括中心靜脈壓(CVP)，右室壓(sRVP )，肺動(dòng)脈收縮壓(sPAP )，肺動(dòng)脈平均壓(mPAP )，肺動(dòng)脈舒張壓(dPAP)。使用MedLab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)監(jiān)測(cè)壓力。整個(gè)過程嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范。2、選用8頭小型豬按圖2或圖3所示的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，其中把野百合堿(MCT)用70%醫(yī)用酒精配成25%野百合堿注射溶液，按20. O mg/kg劑量腹腔注射，培養(yǎng)時(shí)間為5飛周；
3、選用4頭小型豬為對(duì)照組，在與實(shí)驗(yàn)組相同飲食及飼養(yǎng)環(huán)境條件下給予同樣劑量的70%醫(yī)用酒精腹腔注射，培養(yǎng)時(shí)間為5飛周；
4、培養(yǎng)5飛周后，將對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組依圖I所示的右心導(dǎo)管術(shù)壓力的測(cè)定方法分別檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的肺動(dòng)脈壓力和右心室壓力，得出如圖4所示的對(duì)照組小型豬肺動(dòng)脈壓力波曲線和圖5所示的實(shí)驗(yàn)組小型豬肺動(dòng)脈壓力波曲線，以及圖6所示的對(duì)照組小型豬右心室壓力波曲線和圖7所示的實(shí)驗(yàn)組小型豬右心室壓力波曲線；5、培養(yǎng)5飛周后，將對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組依圖3中步驟S303所示的方法，將所述小型豬進(jìn)行器官觀察和組織切片HE染色，分別檢測(cè)對(duì)照組小型豬和實(shí)驗(yàn)組小型豬的肺組織，得到圖8所示的對(duì)照組小型豬小型豬肺組織切片圖和圖9所示的實(shí)驗(yàn)組小型豬肺組織切片圖。三、實(shí)驗(yàn)分析
由圖4和圖5可看出，當(dāng)所述小型豬注射野百合堿溶液5飛周后，平均肺動(dòng)脈壓由15. IlmmHg上升至30. 952mmHg,收縮壓由25. 916mmHg上升至38. 383mmHg,舒張壓由9. 707mmHg 上升至 27. 237mmHg ；
由圖6和圖7可看出，當(dāng)所述小型豬注射野百合堿溶液5飛周后，右心室平均壓由16. 656 mmHg上升至22. 03ImmHg,收縮壓由26. 526mmHg上升至47. 825mmHg,舒張壓由
11.722mmHg 變化至 9. 135mmHg,脈壓差由 14. 805mmHg 上升至 38. 69mmHg ；
由圖8和圖9可看出，當(dāng)所述小型豬注射野百合堿溶液5飛周后，圖8顯示正常肺泡以及小肺動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)，而圖9所示的實(shí)驗(yàn)組小型豬的肺組織切片出現(xiàn)明顯的肺動(dòng)脈高壓的病理特征肺泡充血、水腫、間隔增寬，小肺動(dòng)脈血管中膜肥厚，內(nèi)膜纖維化等。因此，通過將野百合堿溶液注射到健康的I飛月齡、雄性或雌性、體重3 15kg小型豬腹腔中，在注射野百合堿第4、周后可以得到病理特征明顯且接近人類臨床病例特征(包括血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)和壓力波形)的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型。需要說明的是，圖8為對(duì)照組小型豬肺組織切片圖(HE染色X 100);圖9為實(shí)驗(yàn)組小型豬肺組織切片圖(HE染色X 200)。表一為小型豬注射野百合堿溶液8周前后部分血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的變化
權(quán)利要求
1.一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型，其特征在于，是將野百合堿溶液注射到健康的f 5月齡、雄性或雌性、體重3 15kg小型豬腹腔中，在注射野百合堿第4、周后得到小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型。
2.如權(quán)利要求I所述的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型，其特征在于，所述小型豬為健康的2 4月齡小型豬，雄性，體重4 14kg。
3.如權(quán)利要求2所述的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型，其特征在于，所述野百合堿溶液是將野百合堿溶于濃度為5(Γ80%的酒精溶液后所得的濃度為22 28mg/gl的溶液； 所述野百合堿溶液的注射劑量為9. (T25mg/kg。
4.一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括 選用健康的廣5月齡小型豬，所述小型豬為雄性或雌性，體重3 15kg ； 將野百合堿與酒精混合配成野百合堿溶液，將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中； 在將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔后第4、周內(nèi)將所述小型豬進(jìn)行心導(dǎo)管壓力測(cè)定。
5.如權(quán)利要求4所述的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述小型豬為健康的，2 4月齡，雄性，體重為4 14kg的小型豬。
6.如權(quán)利要求4所述的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述酒精的濃度為5(Γ80%，所述野百合堿溶液的濃度為22 28mg/gl，所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔中的注射劑量為9. (T25mg/kg。
7.如權(quán)利要求4所述的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述心導(dǎo)管壓力測(cè)定為右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定，所述右心導(dǎo)管術(shù)壓力測(cè)定對(duì)象包括平均肺動(dòng)脈壓、右心室壓力和右心房壓力。
8.如權(quán)利要求4所述的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法， 其特征在于，在將所述野百合堿溶液注射于所述小型豬腹腔后第4、周內(nèi)將所述小型豬進(jìn)行心導(dǎo)管壓力測(cè)定之后還包括 將所述小型豬進(jìn)行器官觀察和組織切片HE染色； 所述器官觀察的步驟為取所述小型豬的心臟和肺組織，稱量右心室和左心室加中隔重量，右心室重量/體重，左心室重量/體重，右心室/左心室比值； 所述組織切片HE染色的步驟為將所述心臟和肺組織用3. 5^4. 5%甲醛磷酸緩沖液固定2Γ50 h，然后沿著肺動(dòng)脈垂直方向取材，包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察肺血管形態(tài)學(xué)改變。
9.如權(quán)利要求8所述的小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法， 其特征在于，所述心臟和肺組織為將所述部分小型豬用麻醉劑致死后即刻取得的心臟和肺組織； 所述麻醉劑注射于所述小型豬的腹腔中； 所述麻醉劑為戊巴比妥鈉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型，是將野百合堿溶液注射到健康的1~5月齡、雄性或雌性、體重3~15kg小型豬腹腔中，在注射野百合堿第4~9周后得到小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型。相應(yīng)地，本發(fā)明公開了一種小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。采用本發(fā)明，所述小型豬慢性肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型采用的小型豬體型大小、結(jié)構(gòu)與人體相似，可以采用臨床設(shè)備進(jìn)行測(cè)定和臨床觀察，且其病理變化較其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物更接近人類臨床病理變化，有利于進(jìn)行長(zhǎng)期的觀察、治療和研究。
文檔編號(hào)A61P11/00GK102960309SQ20111025666
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2011年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月1日
發(fā)明者李洪濤, 劉蓉, 顧為望 申請(qǐng)人:廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院, 廣州呼吸疾病研究所, 東莞松山湖明珠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司