專利名稱：預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種醫(yī)藥組組合物，且特別關(guān)于一種預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物。
現(xiàn)有技術(shù)骨質(zhì)疏松癥可分為兩大類一是因女性荷爾蒙缺乏所造成的“停經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥”，此病癥好發(fā)于停經(jīng)后的女性身上；而另一類發(fā)生的原因則是由于老化而產(chǎn)生的，我們稱之為“老年型骨質(zhì)疏松癥”，此癥不論男女只要活得夠老，都可能會(huì)發(fā)生。從臨床的研究報(bào)告中可發(fā)現(xiàn)，當(dāng)更年期婦女的女性荷爾蒙分泌不足時(shí)，骨頭流失的速率一年可高達(dá)百分之三至百分之五。骨頭加速流失后，就會(huì)造成骨質(zhì)疏松癥，當(dāng)骨頭結(jié)構(gòu)變的不良時(shí)，就可能在外力的作用下，造成骨折的發(fā)生。更年期后骨質(zhì)疏松癥有一些特定好發(fā)部位，人體的骨頭可粗分為兩大部份，一個(gè)是外層較堅(jiān)硬致密的部份，我們稱為硬骨；另外骨頭中間較松軟的部份也就是一般俗稱骨髓的部位，我們稱之為松骨，更年期后骨質(zhì)疏松癥好發(fā)的部位就是所謂松骨的部份。以人體來(lái)講，不同部位骨頭所含松骨和硬骨的比例都不相同，而更年期骨質(zhì)疏松癥好發(fā)于人體中松骨為主要構(gòu)成成份的部位，其中最主要就是脊椎部位，所以容易造成腰椎的壓迫性骨折；另外就是長(zhǎng)骨的終端，即四肢骨的終端部位，亦容易造成手腕部的骨折。更年期后骨質(zhì)疏松癥的婦女，易造成骨折的類型就是此二種。停經(jīng)后骨質(zhì)疏松(postmenopausal osteoporosis)是老年婦女?；嫉囊环N代謝性骨病。臨床的研究報(bào)告中可發(fā)現(xiàn)，當(dāng)更年期婦女的女性荷爾蒙分泌不足時(shí)，骨頭流失的速率一年可高達(dá)百分之三至百分之五，隨著人類平均壽命的延長(zhǎng)，停經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。停經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松發(fā)病機(jī)轉(zhuǎn)主要因停經(jīng)所致女性賀爾蒙缺乏所導(dǎo)致熟知此的技術(shù)人員骨質(zhì)大量流失(每年約下降3 6%甚至更高)。因正常時(shí)動(dòng)情激素能刺激“造骨細(xì)胞”(osteoblast)產(chǎn)生細(xì)胞介質(zhì)，一方面抑制“破骨細(xì)胞”(osteoclast)的活性，令一方面刺激“造骨細(xì)胞”以使骨質(zhì)維持平衡狀態(tài)。一旦缺乏女性激素，則骨質(zhì)大量流失，鈣離子從骨中大量釋出，壓抑了副甲狀腺濃度，引致活性維生素D合成減少，故減低了鈣離子在胃腸道熟知此的技術(shù)人員吸收，導(dǎo)致鈣離子“負(fù)平衡”，加速骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。臺(tái)灣已漸漸步入高齡化社會(huì)，由此聯(lián)想，將有更多人發(fā)生骨質(zhì)疏松癥。停經(jīng)后骨質(zhì)疏松(postmenopausal osteoporosis)是老年婦女?；嫉囊环N代謝性骨病。隨著國(guó)人平均壽命的延長(zhǎng)，停經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)停經(jīng)后骨質(zhì)疏松的治療方法主要是雌激素替代療法，但長(zhǎng)期使用有一定副作用(Colditz GA, Hankinson SE, Hunter DJ. The use of estrogen and progestins and the risk of breast cancer in postmenopausal women. N Eng J Med，1995，332 :1589-1593 ；Grady D，Gebretsadik T，Kelikowske K. Hormone replacement therapy and endometrial cancer risk :a
3meta-analysis. Obstet Gynecol, 1995,85 :304-313)，因此，目前亟需一種可用來(lái)預(yù)防及 / 或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為提供一種醫(yī)藥組合物，可用來(lái)預(yù)防及治療老人或停經(jīng)婦女的骨質(zhì)流失。為達(dá)成上述目的，本發(fā)明提供一種預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，包括有效量的甘草、黑豆、蛇床子及鹿角，其中各成份的重量比為甘草黑豆蛇床子鹿角= 1-10 2-10 1-10 1-10。為達(dá)成上述目的，本發(fā)明另提供一種預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，包括有效量的歐前胡素(imperatorin)，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。為達(dá)成上述目的，本發(fā)明另提供一種預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，包括有效量的香檸檬烯(bergapten)，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。圖式簡(jiǎn)單說(shuō)明第1圖顯示本發(fā)明醫(yī)藥組合物對(duì)大鼠體重的影響。第2圖顯示服用本發(fā)明醫(yī)藥組合物大鼠熟知此的技術(shù)人員骨組織切片。第3A-3B圖顯示本發(fā)明醫(yī)藥組合物中各成份對(duì)細(xì)胞增殖的影響。第4圖顯示醫(yī)藥組合物中各成份對(duì)骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性的影響。第5A-5B圖顯示醫(yī)藥組合物中各成份對(duì)骨細(xì)胞礦化的影響。第6A圖顯示醫(yī)藥組合物中各成份對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響。第6B圖顯示醫(yī)藥組合物中各成份對(duì)破骨細(xì)胞再吸收作用的影響。第7A圖顯示歐前胡素及香檸檬烯對(duì)骨細(xì)胞存活的影響。第7B圖顯示歐前胡素及香檸檬烯對(duì)骨細(xì)胞增殖的影響。第8A圖顯示歐前胡素及香檸檬烯對(duì)骨細(xì)胞ALP活性的影響。第8B圖顯示歐前胡素及香檸檬烯對(duì)骨細(xì)胞分泌膠原蛋白(collagen)的影響。第8C-8D圖顯示歐前胡素及香檸檬烯對(duì)骨細(xì)胞礦化的影響。第9A-9B圖顯示歐前胡素及香檸檬烯對(duì)骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP-2)基因的表達(dá)。第9C圖顯示歐前胡素、香檸檬烯及BMP拮抗劑(noggin)對(duì)骨細(xì)胞ALP活性的影響。第10A圖顯示歐前胡素對(duì)SMADs、p38及EI3K蛋白磷酸化的影響。第10B圖顯示香檸檬烯對(duì)SMADs、p38及EI3K蛋白磷酸化的影響。第1IA-IIB 圖顯示 p38 抑制劑(SB203580)及 ERK 抑制劑(PD98059)對(duì) p38 及 EPK
蛋白磷酸化的影響。第IlC圖顯示p38抑制劑(SB203580)及ERK抑制劑(PD98059)對(duì)骨細(xì)胞ALP活
性的影響。第IlD圖顯示p38突變株(DN_p38)及ERK突變株(DN-ERK)對(duì)骨細(xì)胞ALP活性的影響。第12圖顯示歐前胡素及香檸檬烯進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
為了讓本發(fā)明熟知此的技術(shù)人員上述和其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特別列舉優(yōu)選實(shí)施例，并配合所附附圖
，作詳細(xì)說(shuō)明如下實(shí)施方式本發(fā)明是提供一種預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物。在一種實(shí)施例中， 本發(fā)明的醫(yī)藥組合物包括甘草、黑豆、蛇床子、鹿角等，其中各成份的重量比為甘草黑豆蛇床子鹿角=1-10 2-10 1-10 1-10，優(yōu)選為 2-4 4-6 1-3 1-3。且本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中亦包含蛇床子素(osthol)、歐前胡素(imperatorin)及香檸檬烯 (bergapten)0本發(fā)明醫(yī)藥組合物的制作方法為特殊的加工制程，首先，將甘草加熱以萃取液萃取，其中使用的萃取液可為水、乙醇等。再將黑豆和蛇床子以乙醇浸泡約2-40小時(shí)，優(yōu)選約 10-20小時(shí)，再加熱萃取。之后，將黑豆、蛇床子萃取液與甘草萃取液合并，彼此的體積比為甘草黑豆+蛇床子=1 2，經(jīng)減壓濃縮后得濃縮液10-100公升，將10-40公斤的鹿角粉加至濃縮液中后并干燥，將干燥物粉碎、造粒并制成劑型，即為本發(fā)明醫(yī)藥組合物。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可用于預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失，其中骨質(zhì)流失包括骨質(zhì)疏松癥或骨質(zhì)疏松性骨折。此醫(yī)藥組合物可增加個(gè)體的骨密度(BMD)、骨含量(BMC)及骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性。一般而言，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可增加5. 15%的骨密度、3. 77%的骨含量及30. 0%的骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性，在優(yōu)選實(shí)施中可增加10. 30%的骨密度、 11. 32%的骨含量及68.0%的骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性。且此醫(yī)藥組合物亦可增加個(gè)體骨組織的最大應(yīng)力(maximal load)、斷裂力量(ultimate loading)、楊氏系數(shù)(young's modulus)及斷裂強(qiáng)度(ultimate stress) 0 一般而言，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可增加3. 14% 的最大應(yīng)力、5. 23%的斷裂力量、7. 49%的楊氏系數(shù)及15. 65%的斷裂強(qiáng)度，在優(yōu)選實(shí)施中可增加10. 的最大應(yīng)力、13. 15%的斷裂力量、10. 07%的楊氏系數(shù)及37. 39%的斷裂強(qiáng)度。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可依實(shí)際需要制作成各種不同形式的劑型，例如錠劑、膠囊、 顆粒、粉末、液劑、或丸劑等。在另一種實(shí)施例中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物包括有效量的歐前胡素(imperatorin) 以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，其可為口服或注射劑型，注射劑型可為肌肉注射或皮下注射。此醫(yī)藥組合物可增加個(gè)體的骨密度、骨含量及骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性，一般而言， 本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可增加12. 22%的骨密度、28. 91%的骨含量及6.0%的骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性，在優(yōu)選實(shí)施中可增加90%的骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性。在另一種實(shí)施例中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物包括有效量的香檸檬烯(bergapten)以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，其可為口服或注射劑型，注射劑型可為肌肉注射或皮下注射。此醫(yī)藥組合物可增加個(gè)體的骨密度、骨含量及骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性，一般而言，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可增加12. 22%的骨密度、33. 73%的骨含量及5%的骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性，在優(yōu)選實(shí)施中可增加75%的骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性。本發(fā)明中所提及的個(gè)體為動(dòng)物，包括人類或非人類的動(dòng)物，如狗、貓、小鼠、大鼠、 牛、綿羊、豬、山羊、或非人熟知此的技術(shù)人員靈長(zhǎng)類。在一種實(shí)施例中，哺乳類動(dòng)物為人，在另一種實(shí)施例中，哺乳類動(dòng)物為嚙齒類動(dòng)物，如小鼠或大鼠。以下通過(guò)實(shí)施例以更進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的特征及優(yōu)點(diǎn)。實(shí)施例1.本發(fā)明醫(yī)藥組合物熟知此的技術(shù)人員制備本發(fā)明的醫(yī)藥組合物，由甘草(購(gòu)自金保安貿(mào)易有限公司)30公斤、黑豆(購(gòu)自迪泰貿(mào)易有限公司)60公斤、蛇床子(購(gòu)自易承貿(mào)易有限公司)10公斤、鹿角(購(gòu)自迪泰貿(mào)易有限公司)8公斤組成。首先，將甘草加熱至100°C，以水萃取，取萃取液150公升。再將黑豆和蛇床子以30%的乙醇浸泡20小時(shí)，再加熱至80°C萃取，與甘草萃取液合并，彼此的體積比為甘草黑豆+蛇床子=1 2，經(jīng)減壓濃縮得濃縮液30公升，于濃縮液中加入鹿角粉后于60°C下干燥48小時(shí)。干燥物粉碎后造粒并制成劑型。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)熟知此的技術(shù)人員步驟采用國(guó)科會(huì)國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖及研究中心，Sprague-Dawley品種、8周齡的雌性大鼠，經(jīng)飼養(yǎng)4周后，進(jìn)行切除卵巢手術(shù)。隨機(jī)分為⑴假手術(shù)組，(2)卵巢切除控制組和 (3)卵巢切除給予醫(yī)藥組合物治療三組，將Sprague-Dawley大鼠用400mg/kg的三氯乙醛 (trichloroacetaldehyde)麻醉，無(wú)菌操作，經(jīng)腰椎旁切口進(jìn)入大鼠腹腔背側(cè)，將去卵巢控制組及卵巢切除+股立補(bǔ)組的大鼠雙側(cè)卵巢完全切除，假手術(shù)組不切卵巢，止血縫合。術(shù)后攝食和飲水如前。隔天后醫(yī)藥治療組開(kāi)始經(jīng)口灌服醫(yī)藥組合物，每公斤體重每天1. 2克，每天1次，假手術(shù)組和去卵巢組則灌服羧基甲基纖維素(Carboxymethyl cellulose,CMC)。給藥劑量每周按體重校正1次，共喂養(yǎng)、給藥6周，6周后處死全部大鼠。3.醫(yī)藥組合物對(duì)骨長(zhǎng)度及重量的影響上述大鼠處死后，將二側(cè)股骨(femur)及脛骨(tibia)取出儲(chǔ)存于_80°C熟知此的技術(shù)人員冰箱，且將股骨及脛骨外的肌肉與結(jié)締組織剃除，利用微量天平測(cè)量骨頭的重量， 骨頭長(zhǎng)度則是利用微量表尺測(cè)量(士0. 05mm)，骨量(BMD)及骨密度(BMC)是以dual-energy X-ray absorptiometer (DEXA, XR-26 ；Norland, Fort Atkinson, WI)測(cè)量。且將股骨于 4% 福爾馬林中固定二天后，置于4°C的EDTA(10% )脫鈣二星期，利用酒精脫水后將股骨包埋 31 " ^ + ! 5mm ^j>t。禾Offl Mayer’ s hematoxylin-eosinImage-pro plus (3. Oed)軟件定量二級(jí)海綿骨(secondary spongiosa)的骨量(bone volume)。參照第 1圖，去卵巢組的體重比假手術(shù)組重，且服用本發(fā)明的醫(yī)藥組合物并不會(huì)抑制大鼠體重的增加。參照第2圖，由骨組織切片中可發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的醫(yī)藥組合物有防止骨質(zhì)流失的作用。其它數(shù)據(jù)如表一所示。表一、醫(yī)藥組合物對(duì)骨組織的影響
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，包括有效量的歐前胡素；以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，其中該骨質(zhì)流失包括骨質(zhì)疏松癥或骨質(zhì)疏松性骨折。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，其中該醫(yī)藥組合物增加95. 0%以上的骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，其中該醫(yī)藥組合物增加骨細(xì)胞102.0%以上的膠原蛋白含量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，其中該醫(yī)藥組合物增加骨細(xì)胞110.0%以上的礦化能力。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，其中該醫(yī)藥組合物增加12. 2%以上的骨密度。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，其中該醫(yī)藥組合物增加觀.9%以上的骨含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失的醫(yī)藥組合物，其中該醫(yī)藥組合物包括口服或注射劑型。
全文摘要
本發(fā)明提供一種醫(yī)藥組合物，包括有效量的歐前胡素以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，且該醫(yī)藥組合物可預(yù)防及/或治療骨質(zhì)流失。
文檔編號(hào)A61K9/20GK102172350SQ201110066200
公開(kāi)日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2006年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月18日
發(fā)明者張金鳴, 符文美, 簡(jiǎn)美英, 陳兆祥 申請(qǐng)人:科達(dá)制藥股份有限公司