專利名稱：一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥劑學(xué)領(lǐng)域，具體為一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。
背景技術(shù)：
固體脂質(zhì)納米粒是近年來發(fā)展較快的一種新型給藥載體。固體脂質(zhì)納米粒的粒徑 約為50-1000 nm，常溫下為固態(tài)，具有以下特點(diǎn)(1)良好的生物兼容性；(2)能有效地控制 藥物釋放，并可有效避免藥物的降解和泄漏；(3)適合于多種給藥途徑；(4)穩(wěn)定性好，能提 高不穩(wěn)定藥物的穩(wěn)定性。固體脂質(zhì)納米粒具備這些優(yōu)點(diǎn)，被認(rèn)為是一種極有發(fā)展前景的新 型給藥系統(tǒng)載體，在新藥開發(fā)領(lǐng)域舉足輕重，也日益受到各國研究者的重視。另外，固體脂 質(zhì)納米粒在很多疾病方面，特別是在癌癥治療中也顯示了特殊的優(yōu)越性。目前固體脂質(zhì)納米粒的制備，往往采用類脂材料熔化后以脂質(zhì)微粒的形式分散進(jìn) 入水溶性介質(zhì)中，再通過機(jī)械或熱力學(xué)的手段，以形成納米顆粒。因此，親脂性抗癌化合物， 包括紫杉醇類，喜樹堿類等細(xì)胞毒藥物，制備固體脂質(zhì)納米粒具有較高的包封率。然而很多 常用的化療藥物如蒽環(huán)類藥物、長春花堿類藥物等，臨床使用的是其鹽，這些抗腫瘤藥物鹽 在固體脂質(zhì)納米粒包封率差。如普通阿霉素固體脂質(zhì)納米粒的包封率僅30%左右。采用有機(jī)磷脂可使包封率提高，但由于這些水溶性抗腫瘤藥物(如阿霉素)分子量 小，可快速擴(kuò)散，磷脂固化過程造成化療藥物在固體脂質(zhì)納米粒表面的聚集，使藥物在介質(zhì) 中的快速泄漏(突釋)，產(chǎn)生化療藥物的高毒性。最近fesco等提出一種通過添加有機(jī)磷酸鹽使藥物膜分子上形成帶電荷的離子 對的方法，能有效地解決了蒽環(huán)類抗生素阿霉素和去甲氧柔紅霉素的固體脂質(zhì)納米粒的包 封率問題。這一方法主要是采用正癸烷基水楊磷酸鹽或十六烷基磷酸鹽，通過共價鍵連接 (如酯鍵)或成鹽的形式，用勻漿等方法在水溶性表面活性劑溶解形成納米制劑，以提高硬 脂酸固體脂質(zhì)納米粒裝載的阿霉素和去甲氧柔紅霉素的量。作者稱這種方法為“脂質(zhì)藥物 共軛”(lipid drug conjugate)納米粒制備方法。但這種制備方法采用了非常規(guī)材料正 癸烷基水楊磷酸鹽或十六烷基磷酸鹽，而且其包封率有賴于共價鍵的結(jié)合，包封率不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種水溶性抗腫瘤藥物固體 脂質(zhì)納米粒的制備方法的技術(shù)方案。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的制 備方法如下稱取硬脂酸0. 2g，溶于6mL丙酮乙醇混合溶液，然后與2mL卵磷脂乙醇溶液 混合，在73 °C水浴下攪拌滴加抗腫瘤藥物溶液lmL，繼續(xù)攪拌IOmin后，緩慢注入400 μ L 2. 5%海藻酸鈉，快速調(diào)整水浴溫度為68°C，繼續(xù)攪拌15min，水浴下探頭超聲，之后迅速倒 入40mL 4°C預(yù)冷的水中，繼續(xù)攪拌30min，分散形成固體脂質(zhì)納米粒，再過膜處理，制備完 成。
所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的丙 酮乙醇混合溶液中丙酮與乙醇的體積比為1:2。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的卵 磷脂乙醇溶液是由IOOmg卵磷脂溶于2mL乙醇制得。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的抗 腫瘤藥物溶液是由3mg阿霉素和13mg pluronic F87溶于ImL水制得。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的抗 腫瘤藥物溶液是由3mg表阿霉素和13mg pluronic F87溶于ImL水制得。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的抗 腫瘤藥物溶液是由3mg阿霉素和13mg pluronic F88溶于ImL水制得。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的抗 腫瘤藥物溶液是由3mg阿霉素和13mg pluronic P85溶于ImL水制得。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的水 浴下探頭超聲，工作2s，間歇3s，400 w超聲50次。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的過 膜分別為過0. 88 μ m、0. 45 μ m的膜。所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于在丙酮乙 醇溶液中添加陽離子修飾劑3β [ N-( N' ,N' - 二甲氨基乙基)氨甲?；鵠-膽固醇 50mg,即DC-膽固醇50mg，最終得到經(jīng)DC-膽固醇修飾的阿霉素固體脂質(zhì)納米粒；或者在丙 酮乙醇溶液中添加陽離子修飾劑十六烷基三甲基溴化銨20mg，即CTAB 20mg，最終得到經(jīng) CTAB修飾的阿霉素固體脂質(zhì)納米粒。本發(fā)明使包囊在固體脂質(zhì)納米粒中的阿霉素與海藻酸結(jié)合，既可以大幅提高包封 率，又通過降低表面藥物的吸附，從而延緩抗腫瘤藥物的釋放，以達(dá)到降低藥物突釋的目 的，與其它提高包封率的方法相比，簡便易行，制備材料要求低，包封率高，可有效克服多藥 耐藥。


圖1為阿霉素固體脂質(zhì)納米粒的透射電鏡圖；圖2 Pluronic F87制備的阿霉素固體脂質(zhì)納米粒和阿霉素溶液在K562/D0X耐藥細(xì)胞 的細(xì)胞攝取曲線；圖3 Pluronic F87制備的阿霉素固體脂質(zhì)納米粒和阿霉素溶液在K562/D0X耐藥細(xì)胞 的細(xì)胞外排曲線。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明制備方法如下稱取硬脂酸0. 2g，溶于6mL丙酮與乙醇的體積比為1:2的丙酮 乙醇混合溶液，然后與2mL卵磷脂乙醇溶液混合，其中卵磷脂乙醇溶液是由IOOmg卵磷脂溶 于2mL乙醇制得，在73°C水浴下攪拌滴加抗腫瘤藥物溶液lmL，其中，抗腫瘤藥物溶液是由 3mg阿霉素和13mg pluronic F87溶于ImL水制得，繼續(xù)攪拌IOmin后，緩慢注入400 μ L2. 5%海藻酸鈉，快速調(diào)整水浴溫度為68°C，繼續(xù)攪拌15min，水浴下探頭超聲，工作2s，間歇 3s, 400 w超聲50次，之后迅速倒入40mL 4°C預(yù)冷的水中，繼續(xù)攪拌30min，分散形成固體脂 質(zhì)納米粒，再過0. 88 μ m、0. 45 μ m的膜，制備完成。本發(fā)明制備的固體脂質(zhì)納米粒包封率為80. 3士 1. 2%，粒徑為319士75nm。本發(fā)明經(jīng)陰離子化合物離子交聯(lián)制得的固體脂質(zhì)納米粒，可明顯提高藥物包封 率，從普通的30%提高到80%，而且，通過與多藥耐藥細(xì)胞株K562/D0X細(xì)胞的孵育，大幅提高 藥物進(jìn)入細(xì)胞量，如圖2所示，減少細(xì)胞的外排，如圖3所示；圖2中各時間點(diǎn)是細(xì)胞與濃度 為5. 0 μ g/mL的阿霉素孵育后測定的結(jié)果，每時間點(diǎn)重復(fù)三次；圖3中各時間點(diǎn)是細(xì)胞與濃 度為相同濃度的5.0 μ g/mL的阿霉素孵育池后再經(jīng)過各時間點(diǎn)的測定結(jié)果，每時間點(diǎn)重復(fù) 三次。實施例2將pluronic F87改為pluronic F88，其它同實施例1，得到pluronic F88阿霉素固體 脂質(zhì)納米粒，包封率為81. 9士 1. 8%，粒徑為357士90nm。實施例3將pluronic F87改為pluronic P85，其它同實施例1，得到pluronic P85阿霉素固體 脂質(zhì)納米粒，包封率為78. 6士 1. 7%，粒徑為365士78nm。實施例4將阿霉素改為表阿霉素，其它同實施例1，得到pluronic F87表阿霉素固體脂質(zhì)納米 粒,包封率為77. 9 士 2. 2%，粒徑為334 士 59nm。實施例5在丙酮乙醇溶液中添加陽離子修飾劑3β [ N-( N' ,N' - 二甲氨基乙基)氨甲酰 基]-膽固醇50mg，即DC-膽固醇50mg，其它同實施例1，最終得到經(jīng)DC-膽固醇修飾的阿霉 素固體脂質(zhì)納米粒，包封率為75. 8 士 2. 3%，粒徑為310±48nm。實施例6在丙酮乙醇溶液中添加陽離子修飾劑十六烷基三甲基溴化銨20mg，即CTAB 20mg，其 它同實施例1，最終得到經(jīng)CTAB修飾的阿霉素固體脂質(zhì)納米粒，包封率為75. 5士2. 0%，粒徑 為 307士51nm。本發(fā)明的有益效果(1)本發(fā)明制備方法簡單首先將硬脂酸和卵磷脂溶解在有機(jī)溶劑后混合，水浴下滴加 抗腫瘤藥物，并在攪拌下緩慢注入聚陰離子的海藻酸鈉，使藥物與海藻酸鈉一起包裹入納 米粒中，并通過溫度的改變，探頭超聲和過膜等，制備獲得固體脂質(zhì)納米粒；采用陰離子化合物與陽離子的抗腫瘤藥物(如成鹽的小分子弱堿類抗腫瘤藥物蒽環(huán) 類藥物、長春花堿類藥物)交聯(lián)，再制備得到的一種新的固體脂質(zhì)納米粒；這種交聯(lián)作用可 以使固體脂質(zhì)納米粒的包封率大幅提高，同時使初始釋藥量得以有效的控制；(2)大幅固體脂質(zhì)納米粒的包封率添加了海藻酸鈉后，一方面可能與這些陽離子抗腫 瘤藥物(如成鹽的小分子弱堿性抗腫瘤藥物蒽環(huán)類藥物、長春花堿類藥物)形成了交聯(lián)物， 使其脂溶性增加，易被包裹于固體脂質(zhì)納米粒內(nèi)，大幅提高了包封率，另一方面通過與藥物 一起分布在固體脂質(zhì)納米粒表面的海藻酸的作用，可以延緩近表面抗腫瘤藥物的釋放，同 時使體脂質(zhì)納米粒表面吸附的藥物減少，以達(dá)到降低突釋的目的；與不加海藻酸鈉相比，通過本發(fā)明制備的阿霉素固體脂質(zhì)納米粒包封率從30%提高到 80%，存在顯著性差異；制備的表阿霉素固體脂質(zhì)納米粒包封率從38%提高到78%，同樣有顯 著性差異；此外，包封率的提高，并不改變固體脂質(zhì)納米粒釋放的性質(zhì)；(3)經(jīng)固體脂質(zhì)納米粒包裹的抗腫瘤藥物，可有效克服多藥耐藥；如以pluronicF87 為非離子型表面活性劑制備了阿霉素固體脂質(zhì)納米粒，在耐藥細(xì)胞K562/D0X細(xì)胞攝取實 驗結(jié)果顯示，4h進(jìn)入K562/D0X的藥物濃度DOX-SLN顯著高于溶液組，約為溶液組的2倍；(4)經(jīng)本發(fā)明制備的固體脂質(zhì)納米粒，可進(jìn)行一些必要的修飾，如進(jìn)行陽離子修飾等， 為固體脂質(zhì)納米粒包裹抗腫瘤藥物有效克服多藥耐藥提供幫助。
權(quán)利要求
1.一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于所述的制備方法 如下稱取硬脂酸0. 2g，溶于6mL丙酮乙醇混合溶液，然后與2mL卵磷脂乙醇溶液混合，在 73°C水浴下攪拌滴加抗腫瘤藥物溶液lmL，繼續(xù)攪拌IOmin后，緩慢注入400 μ L 2. 5%海 藻酸鈉，快速調(diào)整水浴溫度為68°C，繼續(xù)攪拌15min，水浴下探頭超聲，之后迅速倒入40mL 4°C預(yù)冷的水中，繼續(xù)攪拌30min，分散形成固體脂質(zhì)納米粒，再過膜處理，制備完成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的丙酮乙醇混合溶液中丙酮與乙醇的體積比為1:2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的卵磷脂乙醇溶液是由IOOmg卵磷脂溶于2mL乙醇制得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的抗腫瘤藥物溶液是由3mg阿霉素和13mg pluronic F87溶于ImL水制得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的抗腫瘤藥物溶液是由3mg表阿霉素和13mg pluronic F87溶于ImL水制得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的抗腫瘤藥物溶液是由3mg阿霉素和13mg pluronic F88溶于ImL水制得。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的抗腫瘤藥物溶液是由3mg阿霉素和13mg pluronic P85溶于ImL水制得。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的水浴下探頭超聲，工作2s，間歇3s，400 w超聲50次。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征 在于所述的過膜分別為過0. 88 μ m、0. 45 μ m的膜。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特 征在于在丙酮乙醇溶液中添加陽離子修飾劑3β [ N-( N' ,N' - 二甲氨基乙基)氨甲 ?；鵠-膽固醇50mg，即DC-膽固醇50mg，最終得到經(jīng)DC-膽固醇修飾的阿霉素固體脂質(zhì) 納米粒；或者在丙酮乙醇溶液中添加陽離子修飾劑十六烷基三甲基溴化銨20mg，即CTAB 20mg，最終得到經(jīng)CTAB修飾的阿霉素固體脂質(zhì)納米粒。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥劑學(xué)領(lǐng)域，具體為一種水溶性抗腫瘤藥物固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。將硬脂酸和卵磷脂溶解在有機(jī)溶劑后混合，水浴下滴加抗腫瘤藥物，并在攪拌下緩慢注入聚陰離子的海藻酸鈉，使藥物與海藻酸鈉一起包裹入納米粒中，并通過溫度的改變，探頭超聲和過膜等，制備獲得固體脂質(zhì)納米粒。本發(fā)明使包囊在固體脂質(zhì)納米粒中的阿霉素與海藻酸結(jié)合，既可以大幅提高包封率，又通過降低表面藥物的吸附，從而延緩抗腫瘤藥物的釋放，以達(dá)到降低藥物突釋的目的，與其它提高包封率的方法相比，簡便易行，制備材料要求低，包封率高，可有效克服多藥耐藥。
文檔編號A61K9/14GK102048697SQ201110022618
公開日2011年5月11日 申請日期2011年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月20日
發(fā)明者許東航 申請人:浙江大學(xué)