專利名稱：一種銀杏內(nèi)酯制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑的制備方法，更具體地說，涉及一種銀杏內(nèi)酯K針劑的 制備方法。
背景技術(shù)：
目前，研究表明銀杏內(nèi)酯可改善腦缺血狀態(tài)，對抗缺血性腦損傷，具有明確的腦保 護作用，另外，銀杏內(nèi)酯為一類強特異性的PAF拮抗劑，可用于治療血瘀氣滯引起的缺血性 腦血管疾病。從銀杏葉中提取的多種有效成分中，銀杏內(nèi)酯類為其重要成分；而在銀杏內(nèi)酯 類中，銀杏內(nèi)酯K(Ginkgc)Iide K，以下簡稱GK)是最近開始研究的生物活性內(nèi)酯，因為原來 因其在植物含量較少，所以被人們忽視。目前，由于GK在銀杏葉中含量較低及分離純化較 困難等原因，故用混合內(nèi)酯(含內(nèi)酯A，B，C)做針劑的見有報道，本人通過化學(xué)半合成的方 法，得到大量GK單體化合物，所以GK單體制備針劑的國內(nèi)尚未見報道。在國內(nèi)外文獻中，未見GK的藥理研究，僅見有中國藥科大學(xué)樓鳳昌教授分離得到 過該化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種簡便、效果好的銀杏內(nèi)酯K針劑的制備方法。本發(fā)明的目的是通過如下措施來實現(xiàn)。選純品GK為原料藥，溶解于注射用的非水 溶劑-低分子量的聚乙二醇中，聚乙二醇可單獨使用，或與無水乙醇組成的混合溶劑使用； PEG與乙醇的比例(按體積計)可在1 9-9 1范圍，優(yōu)選3 1-1 3，混合溶劑中可加 或不加助溶劑、表面活性劑，如吐溫類(吐溫80等)?？墒笹K溶液在稀釋注射時不易析出， 充分攪拌或超聲震蕩，進行后處理；所述的后處理是指過濾、灌封、滅菌、檢測，即得產(chǎn)品，使 用前稀釋于適量的等滲氯化鈉注射液中，搖勻、供靜脈注射使用。本發(fā)明的針劑相比現(xiàn)有銀杏內(nèi)酯類藥物的如下優(yōu)點溶解性較好，活性較高，質(zhì)量 可控，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，制備工藝簡便，即將GK加選用的“溶劑”溶解，經(jīng)過濾、灌封、滅菌，即 得。每毫升含10-20毫克GK的滅菌溶液。臨用前稀釋于適量的等滲氯化鈉注射液中，含 GK10-40毫克/100毫升，供靜脈滴注用。經(jīng)藥效學(xué)實驗，對大鼠MCAO模型最低有效劑量為 2-8mg/kg/日，證明對心腦血管病有治療作用。銀杏內(nèi)酯K注射液兩種溶媒對MCAO大鼠腦梗塞范圍的影響地點中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院試驗材料一、藥物與試劑受試藥銀杏內(nèi)酯K注射液按實施例1制得，大鼠用量8、4、aiig/kg/日。對照藥-金納多注射液德國威瑪舒培博士藥廠產(chǎn)品，每支5ml，每毫升含黃酮苷 0.8%ig，批號1047425，人用量為20_40ml/人/日，大鼠用量6. 7ml/kg/日。化學(xué)試劑 Fecl3.6H20(A.R.)，北京化工廠生產(chǎn)，用lmol/L鹽酸配制；紅四氮哇(TTC)，美國SIGMA公司生產(chǎn)，批號:100321o二、動物SD大鼠，雌雄兼用，體重220_250g，由中國藥科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證 號=SCXK 10-12-0036。三、儀器MP2001-1型電子天平由上海第二天平儀器廠生產(chǎn)。FA1004N型電子天平由上 海精密科學(xué)儀器公司生產(chǎn)；臺式低速大容量離心機TDL-5型，江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠生 產(chǎn)；UV-2201紫外可見分光光度計由日本島津公司生產(chǎn)。四、方法與結(jié)果一、銀杏內(nèi)酯K注射液對大腦中動脈血栓模型大鼠神經(jīng)癥狀的影響(一)分組及給藥取健康大鼠，按性別體重隨機分為6組銀杏內(nèi)酯K注射液(8、4、2mg/kg)劑量組 和金納多注射液陽性對照、模型對照組(以上各組η = 27，早13 $ 14或早14 $ 13只)以 及假手術(shù)對照組(n = 10)，雌雄各半。各組分別于造模前給藥，每組動物尾靜脈注射相應(yīng)的 藥物溶液，各組給藥體積為1. 0ml/100g。每天給藥一次，連續(xù)7天，模型對照組和假手術(shù)對 照組給予等容量的生理鹽水。(二)模型制造術(shù)次給藥Ih后，用戊巴比妥鈉(約35mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定， 常規(guī)消毒皮膚，頸部正中切開，飩性分離左側(cè)頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)和頸內(nèi)動脈 (ICA)。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內(nèi)動脈上近頸總動脈分叉處剪一“V”字形切口，將一魚 線(直徑0.30mm)沿頸內(nèi)動脈緩慢插入至大腦中動脈(MCA) 口，略感阻力時停止(插入過 程中無阻力感)，插入長度約(18.5士0. 5)mm，結(jié)扎固定魚線。假手術(shù)組也同樣插線，但Imin 后立即拔出，除不阻斷大腦中動脈外，其余操作同手術(shù)組。銀杏內(nèi)酯B注射液注射液組、金 納多注射液組在缺血即刻和MCAO后池分別給予相應(yīng)劑量的銀杏內(nèi)酯B注射液、金納多溶 液，假手術(shù)對照組和模型對照組在同一時間點僅給予等容積生理鹽水。術(shù)后回籠飼養(yǎng)(3只 /籠)，注意保暖。造模后每組選取20只動物繼續(xù)試驗。(三)行為檢測在術(shù)后 24h)，按 Bederson 等[Lundy EF. 501ik BS, Frank RS et alMorphometric evaluation of brain infarcts in rats and gerbils. J Pharamacol Method, 1986,16 201]的方法并加以改進，對動物進行行為評分。1.提鼠尾離開地面約一 尺，觀察前肢屈曲情況。如雙前肢對稱伸向地面，記為0分；如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)肩屈曲、肘 屈曲、肩內(nèi)旋或既有腕肘的屈曲又有內(nèi)旋者，記為1分。2.將動物置于平滑地面上，分別推 雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力記0分；如向手術(shù)對側(cè)推動時阻力下降 者，記為1分。3.將動物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察兩前肢的肌張力。雙側(cè)肌張力對等且有 力者為0分；手術(shù)對側(cè)前肢肌張力下降記為1分。4.提鼠尾離開地面約一尺，動物有不停 地向手術(shù)對側(cè)旋轉(zhuǎn)者，記為1分。根據(jù)以上標準評分，滿分為4分，分數(shù)越高，動物的行為障 礙越嚴重。(四)結(jié)果分析對行為測試打分值進行組間比較，t檢驗。結(jié)果顯示，假手術(shù)組未見行為異常改變，MCAO模型組、銀杏內(nèi)酯K的不同計量組在 術(shù)后24h均出現(xiàn)偏癱樣癥狀，主要表現(xiàn)為手術(shù)對側(cè)前肢內(nèi)收，肩內(nèi)旋，前肢肌張力下降，肩抗力下降。銀杏內(nèi)酯K注射液各劑量組的大鼠在術(shù)后Mh，其神經(jīng)癥狀均有不同程度的改 善，統(tǒng)計學(xué)處理，差異顯著(P < 0. 05)。(四)腦栓塞范圍測定造模后Mh，每組取10只大鼠斷頭取血取腦，去除嗅球、小腦，生理鹽水洗凈，濾紙 吸盡水分，-20°C冷藏IOmin后，將大腦沿冠狀面切成厚約5mm腦片，置紅四氮唑(TTC) 磷酸鹽緩沖液中37°C避光溫孵15min，洗去染色液，再用10 %中性甲醛溶液固定Mh，取出 稱總?cè)局?，然后切取栓塞區(qū)稱重，計算栓塞范圍。結(jié)果進行組間比較，t檢驗。結(jié)果見表1。栓塞范圍=栓塞區(qū)重/總?cè)局豖100%。表-1銀杏內(nèi)酯K注射液對MCAO大鼠腦組織梗死面積的影響
組別劑量(mg/kg)例數(shù)梗死百分率(％)
MCAO 組-1224. 6±3.2銀杏內(nèi)酯K注射液組8YZ**11.5 ± 2.1412#15.1 ± Li212*20.7 ±1.8金納多注射液組6\2**12.4 ± 2.假手術(shù)組—10—注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0. 01(五)缺血區(qū)腦組織SOD、MDA測定造模后Mh，每組取10只大鼠斷頭處死，迅速取手術(shù)側(cè)皮質(zhì)和側(cè)皮基底核0. 4g 左右，稱重，加冰冷生理鹽水研磨成10%組織勻漿，勻漿液在2000r/mi基底節(jié)η下離心 IOmin,取上清液_20°C冷藏。羥胺法測定S0D、TBA法測定MDA。結(jié)果進行組間比較，t檢驗。 結(jié)果見表2。表-2銀杏內(nèi)酯B注射液對局灶性腦缺血大鼠腦組織SOD、MDA的影響
組別劑量(mg/kg)SOD 活性(U/ mgprot) MDA (nmol/mgprot)
模型對照組-1019. 44±92. 9910. 19±1. 33銀杏內(nèi)酯K注射液組8699. 57±75. 49*8.16±1. 79*4658. 36 ±74. 48*8..28±1. 30*2627. 71 ±44. 17*8. 78±1. 59*金納多注射液組6654. 0± 122. 40*8.55±1.65*假手術(shù)組-506. 52±159. 207. 05±2. 37與模型組比較，*Ρ< 0. 05，**P < 0. 01結(jié)果顯示，術(shù)后Mh，除假手術(shù)組未見異常改變外，MCAO模型組、銀杏內(nèi)酯K各給藥 組的大鼠均有不同程度梗塞灶、銀杏內(nèi)酯K注射液各劑量組可明顯減少梗塞程度，與模型組相比具有顯著差異(P < 0.01)。結(jié)果顯示，術(shù)后Mh，大鼠腦組織SOD、MDA的變化明顯，銀杏內(nèi)酯K注射液各劑量 組與MCAO模型組相比具有顯著差異(P<0. 05)。本發(fā)明表明，銀杏內(nèi)酯K注射液可顯著減 少大鼠局灶性腩缺血的梗塞范圍，明顯提高腦組織中的SOD活性，明顯降低腦組織中MDA的 含量。銀杏內(nèi)酯K注射液(8mg/kg)組對大鼠局灶性腦缺血的梗塞范圍的抑制作用更強一 些，說明銀杏內(nèi)酯K對腦缺血的保護作用呈劑量依賴性。具體實施方法實施例1
GK40， OOOmgPEG -2001000 ml
制得1000支配制稱取GK置容器中，加入溶劑PEG，攪拌或超聲震蕩溶解，至全量，混合均勻； 經(jīng)過濾、灌封、滅菌，即得。實施例2
GK20’ OOOmg
PEG - 3001000 ml
氣化鈉500g
注射用水適量制得 1000 瓶配制稱取GK置容器中，加入溶劑PEG，攪拌或超聲震蕩溶解，至全量，加注射用水 至100L，混合均勻；經(jīng)過濾、灌封、滅菌，即得。實施例權(quán)利要求
1.一種銀杏內(nèi)酯K針劑的制備方法，其特征在于包括以下順序步驟將銀杏內(nèi)酯K原 料溶解于聚乙二醇中，聚乙二醇可單獨使用或與乙醇配成混合溶劑可加或不加表面活性 劑，充分攪拌，進行后需處理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述針劑包括水針和輸液，制備輸液時需根據(jù)滲透壓適當添加氯化 鈉或者葡萄糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，聚乙二醇和乙醇混合使用時按體積 計比例為1 9-9 1，優(yōu)選為1 3-3 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的注射用非水溶劑，是低分子量 聚乙二醇PEG-200、PEG-300、PEG-400和PEG-600中的一種或者幾種混合使用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于表面活性劑，是吐溫-80或者斯盤中的 一種或者幾種混合使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種銀杏內(nèi)酯針劑的制備方法，該方法是把銀杏內(nèi)酯K溶于聚乙二醇，加或不加乙醇成混合溶劑，加或不加表面活性劑，經(jīng)攪拌或加熱，及后處理即得產(chǎn)品。本發(fā)明優(yōu)點是工藝簡單、成本低廉、不需凍干設(shè)備，性質(zhì)穩(wěn)定，方便貯運，藥效可靠。本發(fā)明產(chǎn)品主要用于治療心腦血管病、高血壓、哮喘等疾病。
文檔編號A61K31/365GK102058578SQ20111000220
公開日2011年5月18日 申請日期2011年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月7日
發(fā)明者何盛江, 楊中林, 殷華峰, 馬舒?zhèn)?申請人:中國藥科大學(xué)