專利名稱：具有抑制α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物及制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有抑制α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤 氧化酶作用的中藥提取物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
《2007年中國(guó)2型糖尿病防治指南》指出，我國(guó)糖尿病人群數(shù)量已占全球的1/3， 居世界第2位，近20年來(lái)，我國(guó)2型糖尿病患病率在過(guò)去20年中上升了 4倍，城市的患病 率為4. 5%，農(nóng)村為1. 8%，這一數(shù)字與同等發(fā)展水平國(guó)家的數(shù)據(jù)相近[1.中國(guó)2型糖尿病 防治指南制訂委員會(huì).中國(guó)2型糖尿病防治指南2007版[EB]. http://www.docin.com/ p-7167841. html.]。2型糖尿病的發(fā)生是以胰島素作用進(jìn)行性減低，胰島β細(xì)胞功能衰竭到胰島素 分泌減少為特點(diǎn)。在出現(xiàn)2型糖尿病臨床癥狀前，糖代謝紊亂首先表現(xiàn)為葡萄糖耐量缺 損(IGT)，即餐后血糖升高，這是由于胰島素第一時(shí)相分泌缺失、外周組織胰島素敏感性降 低以及胰島素缺乏導(dǎo)致的餐后肝糖原輸出抑制減低。餐后高血糖也是1型和2型糖尿病 常見(jiàn)的癥狀，與 IGT、糖尿病并發(fā)癥關(guān)聯(lián)[2. A Ceriello and S Colagiuri International Diabetes Federation guideline formanagement of postmeal glucose :a review of recommendations [J]. Diabet Med，2008，25 (10) :151 11156.]。糖尿病前期的 IGT 階段 是可逆的，此期間經(jīng)過(guò)干預(yù)，血糖值可以恢復(fù)正常，而能否得到轉(zhuǎn)化，關(guān)鍵在于控制餐后高 血糖。為此在2007年第43屆EASD年會(huì)上，IDF發(fā)布《餐后血糖管理指南》，將α -葡萄 糖糖苷酶抑制劑(AGIs)列為一線藥物。α-葡萄糖苷酶抑制劑包括阿卡波糖和伏格列波糖 以及米格列醇。該類藥物能特異性地抑制位于小腸近端上皮細(xì)胞表面的α-葡萄糖苷酶， 延緩對(duì)雙糖和多種復(fù)雜的碳水化合物的水解，通過(guò)對(duì)此酶的可逆性抑制，使腸道對(duì)單糖的 吸收減慢，來(lái)控制餐后高血糖。我國(guó)IGT、糖尿病患者具有自己鮮明的臨床特點(diǎn)，其飲食結(jié)構(gòu)不同于西方人，以 碳水化合物為主，血糖代謝紊亂狀態(tài)與西方人不同，餐后高血糖比例較西方高。故選擇 AGIs來(lái)進(jìn)行干預(yù)是最為適宜的。如IGT阿卡波糖治療組經(jīng)隨訪3. 3年，糖尿病發(fā)病的危 險(xiǎn)下降了 31%，同時(shí)使新診斷高血壓的發(fā)病率下降34%，心肌梗塞發(fā)病的危險(xiǎn)下降91%， 任何心血管事件的發(fā)病率降低 49% [3. Chiasson JL, Gomis R, Hanefeld M, et al. The STOP-NIDDMTrial :an internationalstudy on the efficacy of an alpha-glucosidase inhibitor to prevent type 2diabetes in a populationwith impaired glucose tolerance :rationale, design, and preliminary screening data :Study to PreventNon-Insulin-Dependent Diabetes Mellitus [J. Diabetes Care, 1998, 21 1720~ 1725.]。阿卡波糖在中國(guó)2型糖尿病患者控制血糖效果顯著。[4. Pan, Chang-Yu ；Landen, Harald. Post-MarketingSurveillance of Acarbose Treatment in Patients with Type2Diabetes Mellitus and Subjects withlmpaired Glucose Tolerance in China[J]. Clinical Drug Investigation,2007,27 (6) :397 405.]。阿卡波糖能夠在降低代謝綜合征(MS)患者血糖值的同時(shí)，使其體重指數(shù)(BMI) 也明顯下降，提示患者的肥胖程度明顯改善，這些效應(yīng)可能與其對(duì)腸道碳水化合物代謝的 影響相關(guān)(葉文春，方向明，劉云，等.阿卡波糖對(duì)代謝綜合征的干預(yù)作用[J].中國(guó)藥業(yè)， 2008,17(13) :57-58·)。但是，上述這類抑制劑市場(chǎng)價(jià)格都比較貴，要滿足低收入患者長(zhǎng)期用其干預(yù)IGT、2 型糖尿病的餐后高血糖，延緩2型糖尿病的發(fā)生或減輕胰島β細(xì)胞功能的衰竭是件不容易 堅(jiān)持的事。高尿酸血癥是一種嘌呤代謝障礙性疾病，它不僅是老年人的高發(fā)病，而且還趨年 輕化。由于尿酸鹽結(jié)晶沉積在胰島β細(xì)胞，使其損傷而誘發(fā)2型尿病，其患者糖尿病的發(fā) 生率約5. 15. 74%。反之，糖尿病患者長(zhǎng)期高糖狀態(tài)損害腎功能，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)尿 酸下降，腎小管排泄能力減退，又加重了高尿酸血癥，二者互為因果，相互促進(jìn)[5.李長(zhǎng)貴， 王蓓.高尿酸血癥和糖代謝異常.中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào)，2006. 21 (22) :18.]。因此，控制高尿 酸血癥非常關(guān)鍵，其治療的首選藥物為黃嘌呤氧化酶抑制劑，主要是上世紀(jì)60年代上市的 別嘌呤醇，用于抑制嘌呤堿轉(zhuǎn)化為尿酸的過(guò)程，其療效肯定一直延用至今，但應(yīng)用后的副作 用也很明顯，患者可出現(xiàn)發(fā)熱、過(guò)敏性皮疹、腹痛、腹瀉、白細(xì)胞及血小板減少，甚至肝功能 損害等表現(xiàn)，故研究新的黃嘌呤氧化酶抑制劑十分必要。我國(guó)中藥資源豐富，價(jià)格低廉，從單味中藥或復(fù)方中篩選α-葡萄糖苷酶抑制劑 或黃嘌呤氧化酶抑制劑已有許多報(bào)道。但鑒于上述兩方面原因的考慮把中藥組合物，同時(shí) 作為α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶兩種酶抑制劑篩選，尚未見(jiàn)報(bào)道。用石見(jiàn)穿和石見(jiàn)穿 分別與大血藤，骨碎補(bǔ)組合物，同時(shí)進(jìn)行這兩種酶抑制劑作用的篩選，也未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供一種具有抑制α -葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化 酶作用的中藥提取物和制備方法，以及中藥提取物在制備治療葡萄糖耐量缺損、糖尿病、肥 胖、高尿酸血癥、痛風(fēng)癥藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案一種具有抑制α -葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物，其特征在于它 是由2份原料藥石見(jiàn)穿的水提物或浸膏或粗多糖所制成。上述的具有抑制α -葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物，其特征在于 在原料藥中還加有大血藤，由石見(jiàn)穿與大血藤按重量比為1 1的水提物或浸膏或粗多糖 所制成。所述具有抑制α -葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物，其特征在于在 原料藥石見(jiàn)穿中還加有骨碎補(bǔ)，由石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)按重量比為1 1的水提物或浸膏或粗 多糖所制成。一種制備石見(jiàn)穿中藥提取物的方法，其特征在于制備步驟如下(1)石見(jiàn)穿的水提取物的制備在以石見(jiàn)穿IOOg的藥材中，加藥材重量的20倍 蒸餾水，室溫冷浸2h，隔水煎煮lh，過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水重復(fù)煎煮1次；合并2次濾液，冷卻至室溫后離心3000rpm/min，lOmin，上清液部分沸水浴上濃縮，加熱濃縮后蒸餾水定容至 0. 5g 生藥 /mL ；(2)石見(jiàn)穿浸膏的制備按上述方法制備水提液，向水提濃縮液中加入乙醇濃度 達(dá)到50vt%，混勻，4°C冰箱過(guò)夜后離心3000rpm/min，lOmin，取上清液部分沸水浴上濃縮， 加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL，沉淀物備用；(3)石見(jiàn)穿粗多糖的制備在上述醇沉離心得到的沉淀物中，依次加入2倍量的無(wú) 水乙醇、丙酮、乙醚各2次，混勻后，經(jīng)離心3000rpm/min，lOmin,依次脫水，室溫下?lián)]干至粉 末，稱重，其得率為4. 18%，然后，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL。一種制備所述具有抑制α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物的方 法，其特征在于制備步驟為(1)石見(jiàn)穿分別與大血藤、骨碎補(bǔ)分別配伍的水提物的制備取石見(jiàn)穿、大血藤、 骨碎補(bǔ)飲片，在石見(jiàn)穿分別與大血藤，骨碎補(bǔ)按1 1重量比配伍的藥材中，加藥材重量的 20倍蒸餾水，室溫冷浸2h，隔水煎煮lh，過(guò)濾，再加蒸餾水重復(fù)煎煮1次；合并2次濾液，冷 卻至室溫后離心，加熱濃縮，加蒸餾水定容；(2)石見(jiàn)穿分別與大血藤、骨碎補(bǔ)分別配伍的浸膏的制備分別向上述步驟⑴的 兩種水提濃縮液中加入乙醇濃度達(dá)到50vt%，混勻，4°C冰箱過(guò)夜后離心，取上清液濃縮得 浸膏，加蒸餾水定容；(3)石見(jiàn)穿分別與大血藤、骨碎補(bǔ)配伍的粗多糖的制備在上述步驟(2)醇沉離心 得到的兩種沉淀物中，分別依次加入2倍重量的無(wú)水乙醇、丙酮和乙醚各2次，混勻后，經(jīng)離 心脫水，室溫下?lián)]干至粉末得粗多糖，稱重，計(jì)算其得率，再加蒸餾水定容。上述的石見(jiàn)穿或石見(jiàn)穿與大血藤或石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)中藥提取物在制備α _葡萄 糖苷酶和黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應(yīng)用。上述的石見(jiàn)穿或石見(jiàn)穿與大血藤或石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)中藥提取物在制備治療葡萄 糖耐量缺損、2型糖尿病、肥胖癥藥物中的應(yīng)用、上述的石見(jiàn)穿或石見(jiàn)穿與大血藤或石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)中藥提取物在制備治療高尿 酸血癥或痛風(fēng)癥藥物中的應(yīng)用。有益效果本發(fā)明來(lái)源于從迄今為止尚無(wú)降血糖、降血尿酸、α -葡萄糖苷酶抑制 劑和黃嘌呤氧化酶抑制劑作用的69種中藥和16種組合物中篩選得到，由石見(jiàn)穿與大血藤、 石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)分別配伍組成，此組合物對(duì)α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶的抑制作用比 石見(jiàn)穿單味效果更佳。從中醫(yī)理論看，本方中石見(jiàn)穿為唇形科鼠尾草植物紫參Salvia chi nensis Benth.的全草。味辛，苦；性微寒。歸肝，脾經(jīng)。有活血化瘀，清熱利濕，散結(jié)消腫功能。為 本方的主藥，有上述兩種酶的抑制作用，改善葡萄糖耐量缺損、糖尿病、肥胖癥、高尿酸血癥 的六郁化熱，臟腑絡(luò)脈受損。iCifil^^JTKilWi^^iil^Sargentodoxa cuneata(Oliv. )Rehd. et ffils.的g。 味苦，性涼，歸肝、大腸二經(jīng)。功效為敗毒消癰，活血通絡(luò)，祛風(fēng)殺蟲(chóng)。與石見(jiàn)穿配伍，不僅提 高對(duì)兩種酶的抑制作用，還有調(diào)和氣血，行經(jīng)通絡(luò)的功效，對(duì)降低餐后高血糖，治療葡萄糖 耐量缺損、糖尿病、肥胖導(dǎo)致的臟腑絡(luò)脈受損引起心血管等并發(fā)癥，以及對(duì)高血尿酸引起的 痛風(fēng)癥起重要作用。
骨碎補(bǔ)為水龍骨科多年生附生蕨類植物槲蕨Drynaria fortune! (Kunze) J. Sm的 根莖。味苦，性溫。歸腎、肝經(jīng)。具有補(bǔ)腎助陽(yáng)，強(qiáng)骨，續(xù)傷鎮(zhèn)痛，溫脾止瀉功效。與石見(jiàn)穿 配伍協(xié)同對(duì)兩種酶抑制，以及補(bǔ)腎溫脾，調(diào)節(jié)脾運(yùn)化水谷，化生氣血，來(lái)降低餐后高血糖和 高血尿酸，治療葡萄糖耐量缺損、2型糖尿病、肥胖癥、高尿酸血癥，以及骨質(zhì)疏松等并發(fā)癥 起重要作用。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)如下一、α -葡萄糖苷酶類抑制劑研究實(shí)驗(yàn)藥物石見(jiàn)穿、大血藤、骨碎補(bǔ)，購(gòu)于江蘇省中醫(yī)院，由本校藥學(xué)院陳建偉教授鑒定。拜唐 蘋(píng)(成分阿卡波糖，每片含50毫克，批號(hào)113608)，購(gòu)于拜耳醫(yī)藥保健有限公司；倍欣(成 分伏格列波糖，每片含0. 2毫克，批號(hào)070403)，天津武田藥品有限公司產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)試劑α-葡萄糖苷酶來(lái)源于Saccharomyces cerevisia購(gòu)于Sigma公司；對(duì)硝基苯 酚-α-吡喃葡萄糖苷(pNPG)，產(chǎn)于德國(guó)Merck公司；還原型谷胱甘肽，KHK進(jìn)口分裝；其他 試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性ICR小鼠，清潔級(jí)，18 20g，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證 號(hào)SCXK (滬)2007-0005。實(shí)驗(yàn)1石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的提取物抑制α -葡萄糖苷酶活性測(cè)定中藥管反應(yīng)系統(tǒng)為 67mmol/L 磷酸鉀緩沖液(37 °C, pH6. 8) 1. OmL，3mmol/L 谷胱甘肽溶液 25 μ L, 64013nkat/ L α-葡萄糖苷酶溶液25 μ L，分別與100 μ L石見(jiàn)穿和石見(jiàn)穿組合物提取物1. Omg, 3. Omg, 5. OmgUO. Omg相當(dāng)生藥/mL，(陽(yáng)性藥阿卡波糖濃度、加量與石見(jiàn)穿組合物水提物平行)混 勻，37°C水浴保溫IOmin后，加入20mmol/L pNPG溶液15 μ L，再置原水浴中繼續(xù)保溫IOmin 后，加入0. Olm0VLNa2CO3溶液5mL冷卻后，以空白管調(diào)零，于波長(zhǎng)400nm處測(cè)定在酶的作用 下釋放出對(duì)硝基酚(PNP)的吸光度(A)。α-葡萄糖苷酶管除不加石見(jiàn)穿和石見(jiàn)穿組合物 提取物、空白管內(nèi)加α-葡萄糖苷酶不加pNPG外，均由蒸餾水補(bǔ)足體積，其他反應(yīng)同前。中 藥空白管其提取物濃度、加量與中藥管平行，其他操作同空白管。α-葡萄糖苷酶抑制率計(jì) 算公式如下酶活性抑制率(1%)=[酶管A-(中藥管A-中藥空白管A)]/酶管A X 100石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的水提物對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表1。表1石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的水提物對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的影響 石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的浸膏對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表2。表2石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的浸膏對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的影響 石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的多糖對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表3。表3石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的多糖對(duì)α -葡萄糖苷酶活性的影響 實(shí)驗(yàn)2石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的提取物抑制ICR小鼠離體小腸α -麥芽糖酶活性測(cè)定ICR 小鼠禁食24h后，脫白頸椎處死，立即取小腸上端(約IOcm)，用冷生理鹽水沖洗數(shù)次，剪碎， 加5倍4°C預(yù)冷的0. lmol/LpH6. 8磷酸緩沖液，冰浴中勻漿機(jī)10000r/min，1 2min，多次， 直至呈勻漿，4°C、4000r/min，離心20min，取上清液分裝，_20°C冷凍備用。小腸勻漿α -麥芽糖酶管加入蒸餾水50 μ L，中藥管加入50 μ L不同濃度的石見(jiàn) 穿和石見(jiàn)穿組合物提取物(其分別為0. 025g、0. 05g、0. 10g、0. 15g、0. 2g相當(dāng)生藥/mL)、陽(yáng) 性藥管拜唐蘋(píng)、倍欣(其分別為10mg/mL、0. 2mg/mL)，然后各管加入小腸勻漿上清50 μ L，混勻，37°C水浴保溫IOmin后，再分別加入含42mmol/L麥芽糖的馬來(lái)酸緩沖液(1. 16g馬來(lái) 酸溶于 100mLlmol/L NaOH 中，pH7. 0) 50 μ L，混勻后，37°C溫孵 30min，加入 Tris-HCl (6. Ig Tris溶于5mol/L HC18. 5mL中，以NaOH調(diào)pH至7. 0)終止反應(yīng)。然后，分別取各管反應(yīng)液 20uL，加入酶酚試劑3mL，混勻，37°C水浴保溫IOmin后，以空白管調(diào)零，于波長(zhǎng)505nm處，測(cè) 定產(chǎn)生葡萄糖含量。空白管內(nèi)加酶不加麥芽糖，以等量的蒸餾水補(bǔ)足體積。中藥空白管其 提取物濃度、加量與中藥管平行，其他操作同空白管。按以下公式計(jì)算離體小腸α-麥芽糖 酶抑制百分率。酶活性抑制率(1%)=[酶管葡萄糖Α_(中藥管葡萄糖A-中藥空白管A)]/酶管 葡萄糖A) X 100石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的水提物對(duì)ICR小鼠離體小腸α-麥芽糖酶活性影響結(jié) 果見(jiàn)表4。表4石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的水提物對(duì)ICR小鼠離體小腸α -麥芽糖酶活性影響 石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的浸膏對(duì)ICR小鼠離體小腸α-麥芽糖酶活性影響結(jié)果 見(jiàn)表5。表5石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的浸膏對(duì)ICR小鼠離體小腸α -麥芽糖酶活性影響 另外，10mg/mL阿卡波糖，0. 2mg/mL伏格列波糖，對(duì)ICR小鼠離體小腸α -麥芽糖 酶抑制率分別為93. 和89. 6%。二、黃嘌吟氧化酶抑制劑研究實(shí)驗(yàn)藥物中藥同前。別嘌呤醇(每片含0. 1克，批號(hào)090804)，購(gòu)于上海信誼萬(wàn)象藥業(yè)股份 有限公司。實(shí)驗(yàn)試劑次黃嘌呤、黃嘌呤氧化酶，購(gòu)于Sigma公司；鹽酸羥胺、對(duì)氨基苯磺酸、N_l_萘乙胺鹽酸鹽、四硼酸鈉、EDTA-2鈉、冰醋酸等試劑，均為國(guó)產(chǎn)分析純。實(shí)驗(yàn)1石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的提取物抑制黃嘌呤氧化酶活性測(cè)定中藥管反應(yīng)系統(tǒng)為 50 μ LpH8. 2 緩沖液(20. 8mmol/L磷酸二氫鉀，15. 6mmol/L 四硼酸鈉，0. lmmol/L EDTA-2鈉) 配制0. lu/ml黃嘌呤氧化酶(XOD)，蒸餾水750 μ L，分別與100 μ L石見(jiàn)穿和石見(jiàn)穿組合物 提取物6. 25mg、12. 5mg、25mg、50mg、IOOmg相當(dāng)生藥/mL。100 μ L陽(yáng)性藥別嘌呤醇濃度25ug、 50ug、100ug、150ug、200ug/ml?；靹颍?7°C水浴保溫 15min 后，加入 100 μ L 0. 8mmol/L 次黃 嘌呤-lOmmol/L鹽酸羥胺溶液，再置原水浴中繼續(xù)保溫30min后，加入5. 2mmol/L對(duì)氨基 苯磺酸-3. 858mmol/L N-I-萘乙胺鹽酸鹽溶液2. OmL,混勻，冷卻后，以蒸餾水調(diào)零，于波長(zhǎng) 550nm處測(cè)定吸光度(A)。黃嘌呤氧化酶管除不加石見(jiàn)穿和石見(jiàn)穿組合物提取物、空白管內(nèi) 加黃嘌呤氧化酶不加次黃嘌呤外，均由蒸餾水補(bǔ)足體積，其他反應(yīng)同前。中藥空白管其提取 物濃度、加量與中藥管平行，其他操作同空白管。黃嘌呤氧化酶抑制率計(jì)算公式如下酶活性抑制率(1%)=[(酶管A-空白管A)_(中藥管A-中藥空白管A)]/(酶管 A-空白管A) XlOO石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的水提物對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表6。表6石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的水提物對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響 石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的浸膏對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表7。表7石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的浸膏對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響 石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿與其組合物的多糖對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表8。表8石見(jiàn)穿，石見(jiàn)穿組合物的多糖對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響 別嘌呤醇對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表1 表9別嘌呤醇對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響 根據(jù)我們以往在此類抑制劑研究中的積累，采用目前已報(bào)道的相關(guān)純酶和組織酶 來(lái)聯(lián)合篩選，經(jīng)陽(yáng)性藥作參照，結(jié)果更為可靠。從石見(jiàn)穿組合物的藥效分析，其水提和浸膏部分是這兩種類酶作用的主要有效部 位。尤其是此種浸膏的制備，呈極性，不影響酶促反應(yīng)體系，可以避免直接醇提物的非極性， 需加入的助溶劑溶解，進(jìn)而造成假陽(yáng)性結(jié)果的現(xiàn)象?？傊?，該中藥和其組合物基于α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶兩種酶抑制劑作 用，并與阿卡波糖和別嘌呤醇的作用一致，因此認(rèn)為其具有降餐后血糖，降血尿酸雙重功 能，本產(chǎn)品其資源豐富，價(jià)格低廉，安全無(wú)毒，故可用于治療葡萄糖耐量缺損、2型糖尿病、肥 胖癥，高尿酸血癥、痛風(fēng)癥等病癥。
具體實(shí)施例方式1.結(jié)合具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明如下實(shí)施例1 一種具有抑制α _葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物由石見(jiàn) 穿2份的水提物或浸膏或粗多糖；制備方法如下(1)石見(jiàn)穿的水提取物的制備在以石見(jiàn)穿IOOg的藥材中，加20倍蒸餾水，室溫 冷浸2h，隔水煎煮lh，過(guò)濾，再加蒸餾水重復(fù)煎煮1次；合并2次濾液，冷卻至室溫后離心 3000rpm/min, lOmin，上清液部分沸水浴上濃縮，加熱濃縮后蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL。(2)石見(jiàn)穿浸膏的制備按上述方法制備水提液，向水提濃縮液中加入乙醇濃度 達(dá)到50vt%，混勻，4°C冰箱過(guò)夜后離心3000rpm/min，lOmin，取上清液部分沸水浴上濃縮， 加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL。(3)石見(jiàn)穿粗多糖的制備在上述醇沉離心得到的沉淀物中，依次加入2倍量的無(wú) 水乙醇、丙酮、乙醚各2次，混勻后，經(jīng)離心3000rpm/min，lOmin,依次脫水，室溫下?lián)]干至粉 末，稱重，其得率為4. 18%，然后，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL。實(shí)施例2具有抑制α -葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物由石見(jiàn)穿1 份、大血藤1份的水提物或浸膏或粗多糖；
制備方法如下(1)石見(jiàn)穿與大血藤配伍的水提取物的制備取石見(jiàn)穿50g、大血藤50g飲片，在石 見(jiàn)穿與大血藤按1 1重量比配伍的藥材中，加藥材重量的20倍蒸餾水，室溫冷浸2h，隔水 煎煮lh，過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水重復(fù)煎煮1次。合并2次濾液，冷卻至室溫后離心3000rpm/ min, lOmin，上清液部分沸水浴上濃縮，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL ；(2)石見(jiàn)穿與大血藤配伍的浸膏的制備按上述方法制備水提液，向其濃縮液中 加入乙醇濃度達(dá)到50vt%，混勻，4°C冰箱過(guò)夜后離心3000rpm/min，lOmin，取上清液沸水 浴上濃縮，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL，沉淀物備用；(3)石見(jiàn)穿與大血藤配伍的多糖的制備在上述醇沉離心得到的沉淀物中，依次 加入2倍量的無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚各2次，混勻后，經(jīng)離心3000rpm/min，IOmin依次脫水， 室溫下?lián)]干至粉末，稱重，其得率為2. 45%，然后，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL。實(shí)施例3具有抑制α -葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物由石見(jiàn)穿1 份、骨碎補(bǔ)1份的水提物或浸膏或粗多糖。制備方法如下(1)石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)配伍的水提取物的制備取石見(jiàn)穿50g、骨碎補(bǔ)50g飲片，在石 見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)按1 1重量比配伍的藥材中，加藥材重量的20倍蒸餾水，室溫冷浸2h，隔水 煎煮lh，過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水重復(fù)煎煮1次。合并2次濾液，冷卻至室溫后離心3000rpm/ min, lOmin，上清液部分沸水浴上濃縮，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL ；(2)石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)配伍的浸膏的制備按上述方法制備水提液，向其濃縮液中 加入乙醇濃度達(dá)到50vt%，混勻，4°C冰箱過(guò)夜后離心3000rpm/min，lOmin，取上清液沸水 浴上濃縮，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL，沉淀物備用；(3)石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)配伍的多糖的制備在上述醇沉離心得到的沉淀物中，依次 加入2倍量的無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚各2次，混勻后，經(jīng)離心3000rpm/min，IOmin依次脫水， 室溫下?lián)]干至粉末，稱重，其得率為2. 27%，然后，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL。
權(quán)利要求
一種具有抑制α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物，其特征在于它是由2份原料藥石見(jiàn)穿的水提物或浸膏或粗多糖所制成。
2.如權(quán)利要求1所述的具有抑制α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物， 其特征在于在原料藥中還加有大血藤，由石見(jiàn)穿與大血藤按重量比為1 1的水提物或浸 膏或多糖所制成。
3.如權(quán)利要求1所述具有抑制α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥提取物，其 特征在于在原料藥中還加有骨碎補(bǔ)，由石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)按重量比為1 1的水提物或浸膏 或多糖所制成。
4.一種制備權(quán)利要求1所述中藥提取物的方法，其特征在于制備步驟如下(1)石見(jiàn)穿的水提取物的制備在以石見(jiàn)穿IOOg的藥材中，加藥材重量20倍的蒸餾 水，室溫冷浸2h，隔水煎煮lh，過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水重復(fù)煎煮1次；合并2次濾液，冷卻 至室溫后離心3000rpm/min，IOmin,上清液部分沸水浴上濃縮，加熱濃縮后蒸餾水定容至 0. 5g 生藥 /mL ；(2)石見(jiàn)穿浸膏的制備按上述方法制備水提液，向水提濃縮液中加入乙醇濃度達(dá)到 50vt %，混勻，4°C冰箱過(guò)夜后離心3000rpm/min，IOmin,取上清液部分沸水浴上濃縮，加蒸 餾水定容至0. 5g生藥/mL，沉淀物備用；(3)石見(jiàn)穿粗多糖的制備在上述醇沉離心得到的沉淀物中，依次加入2倍量的無(wú)水乙 醇、丙酮、乙醚各2次，混勻后，經(jīng)離心3000rpm/min，IOmin,依次脫水，室溫下?lián)]干至粉末， 稱重，其得率為4. 18%，然后，加蒸餾水定容至0. 5g生藥/mL。
5.一種制備權(quán)利要求2或3所述具有抑制α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶作用的中藥 提取物的方法，其特征在于制備步驟為(1)石見(jiàn)穿分別與大血藤、骨碎補(bǔ)分別配伍的水提物的制備取石見(jiàn)穿、大血藤、骨碎 補(bǔ)飲片，在石見(jiàn)穿分別與大血藤，骨碎補(bǔ)按1 1重量比配伍的藥材中，加藥材重量的20倍 蒸餾水，室溫冷浸2h，隔水煎煮lh，過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水重復(fù)煎煮1次；合并2次濾液，冷 卻至室溫后離心，加熱濃縮，加蒸餾水定容；(2)石見(jiàn)穿分別與大血藤、骨碎補(bǔ)分別配伍的浸膏的制備分別向上述步驟(1)的兩種 水提濃縮液中加入乙醇濃度達(dá)到50vt%，混勻，4°C冰箱過(guò)夜后離心，取上清液濃縮得浸膏， 加蒸餾水定容；(3)石見(jiàn)穿分別與大血藤、骨碎補(bǔ)配伍的粗多糖的制備在上述步驟(2)醇沉離心得到 的兩種沉淀物中，分別依次加入2倍重量的無(wú)水乙醇、丙酮和乙醚各2次，混勻后，經(jīng)離心脫 水，室溫下?lián)]干至粉末得粗多糖，稱重，計(jì)算其得率，再加蒸餾水定容。
6.如權(quán)利要求1、2或3所述的中藥提取物在制備α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶抑制 劑中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求1、2或3所述的中藥提取物在制備治療葡萄糖耐量缺損、2型糖尿病、月巴 胖癥藥物中的應(yīng)用、
8.如權(quán)利要求1、2或3所述的中藥提取物在制備治療高尿酸血癥或痛風(fēng)癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種具有α-葡萄糖苷酶和黃嘌呤氧化酶抑制劑作用的中藥提取物及其提取方法和用途，該中藥提取物是由石見(jiàn)穿或石見(jiàn)穿與大血藤或石見(jiàn)穿與骨碎補(bǔ)按一定重量配比分別配伍的水提取物、水提醇沉上清液濃縮的浸膏或水提醇沉的多糖。該中藥提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的作用，可用于治療葡萄糖耐量缺損、2型糖尿病、肥胖癥；該中藥提取物并具有抑制黃嘌呤氧化酶的作用，可用于治療高尿酸血癥、痛風(fēng)癥。
文檔編號(hào)A61K36/53GK101884665SQ201010219609
公開(kāi)日2010年11月17日 申請(qǐng)日期2010年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月6日
發(fā)明者嚴(yán)令耕, 倪荷芳, 吳慧平, 席蓓莉, 戴曉明, 李萍, 詹瑧, 許婷婷, 趙鳳鳴, 趙玉榮, 陳建偉, 陳美娟 申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)