專利名稱：分離的阪崎腸桿菌噬菌體、其組合物及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及分離的阪崎腸桿菌 (Enterobacter sakazakii)噬菌體、其組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來，阪崎腸桿菌通過嬰幼兒配方奶粉引起新生兒發(fā)病、導(dǎo)致死亡而受到廣泛 關(guān)注，2002國際食品微生物標準委員會將其定為威脅特殊人群生命或產(chǎn)生嚴重后遺癥的食 源性病原菌。該菌1984年前被稱為產(chǎn)黃色素的陰溝腸桿菌，之后重新劃分為腸桿菌屬的一 個新種。目前已從工廠加工環(huán)境、食品原料及多種食品中分離出阪崎腸桿菌，為此，各國食 品安全管理部門、生產(chǎn)嬰幼兒食品的企業(yè)對阪崎腸桿菌開始控制，研究人員對其生物學(xué)特 性、控制方法及溯源性方面開展研究。作為細菌病毒的噬菌體，以其嚴格的宿主特異性，應(yīng) 用于細菌的分型鑒定，作為一項新的菌種或?qū)俚蔫b定技術(shù)，受到廣泛的注意和重視。并逐步 在應(yīng)對多重耐藥菌株、醫(yī)學(xué)治療和預(yù)防、食品加工衛(wèi)生、建立新型畜牧和發(fā)酵工廠的消毒程 序等方面開發(fā)其應(yīng)用價值，被認為是未來有效、安全的病原體治療和生態(tài)環(huán)境凈化生物制 劑。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)用于殺滅阪崎腸桿菌的特異性噬菌體，其對阪崎腸桿 菌具有強烈的殺傷作用，同時其又能夠用于阪崎腸桿菌的分類以及監(jiān)控工廠環(huán)境和食品中 阪崎腸桿菌的污染等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是開發(fā)對阪崎腸桿菌具有強烈裂解作用的分離的阪崎腸桿菌 噬菌體，其可特異性的抑制或殺滅阪崎腸桿菌。本發(fā)明的另一個目的是提供鑒定阪崎腸桿菌表型特征的生物學(xué)方法，以便準確地 對阪崎腸桿菌進行分類、鑒別。本發(fā)明的再一個目的是提供能夠監(jiān)控、抑制或殺滅阪崎腸桿菌的特異性的阪崎腸 桿菌噬菌體在工廠環(huán)境以及制品領(lǐng)域中的應(yīng)用。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，本發(fā)明提供分離的阪崎腸桿菌噬菌體，其對阪崎腸 桿菌具有強烈的裂解作用。在一個實施方案中，本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體為阪崎 腸桿菌噬菌體SKI、SK2、SK3、SK4、SK5，這些阪崎腸桿菌噬菌體由本發(fā)明的發(fā)明人保藏在位 于中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心(CGMCC)，保藏日為2010年4月15日，保藏編號分別為CGMCC No. 374UCGMCC No. 3742、 CGMCC No. 3743、CGMCC No. 3744和CGMCCNo. 3745，這些生物材料的分類命名為阪崎腸桿菌 U·菌體，拉丁文學(xué)名為 Enterobacter sakazakii。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明提供一種組合物，該組合物包含一種或多種 本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包含選自SK1、SK2、SK3、SK4和SK5中的一種或多種噬菌體。在本發(fā)明的組合物中，所述阪崎腸桿菌噬菌 體可以單獨使用或兩種以上組合使用，可特異性地滅活阪崎腸桿菌。在一個優(yōu)選的實施方 案中，本發(fā)明的組合物包含SK2、SK3、SK4和SK5四種噬菌體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本 發(fā)明的組合物包含SKI、SK2、SK3、SK4和SK5五種噬菌體。在本發(fā)明中，所分離的阪崎腸桿菌噬菌體符合肌尾噬菌體科(My0Viridae)特征， 其基因組為單分子的線狀雙股DNA，對阪崎腸桿菌具有裂解活性。本發(fā)明中分離的噬菌體經(jīng)高度純化后，可開發(fā)成為生物殺菌劑，避免工廠和食品 中阪崎腸桿菌的污染。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物為生物制劑，其含有本發(fā)明的分 離的阪崎腸桿菌噬菌體。在其他實施方案中，本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包含本發(fā) 明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供包含選自SK1、SK2、 SK3、SK4和SK5中的一種或多種噬菌體的藥物組合物。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明 的藥物組合物包含SK2、SK3、SK4和SK5噬菌體。在本發(fā)明的藥物組合物中，還進一步包含 藥學(xué)可接受的載體。根據(jù)本發(fā)明的組合物也可以包含常用賦形劑，特別是助懸劑、保護劑、 雙蒸水等，還可以包含益生微生物。本發(fā)明組合物中使用的藥學(xué)可接受的載體不受任何限 制，只要該載體的存在并不干擾噬菌體的裂解作用。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以為任何 常用劑型，所述劑型包括但不僅限于噴霧劑、氣霧劑、混懸劑、洗劑、淋洗劑、分散體等。在一 個優(yōu)選的實施方案中，所述藥物組合物為噴霧劑、洗劑或淋洗劑的形式，其中含有結(jié)冷膠等 助懸劑、30%甘油等保護劑、培養(yǎng)液等溶劑。如果所述的藥物組合物配制成液體組合物時， 其可以與噴射劑混合，以有助于噴霧組合物形成噴霧。如果是噴霧劑，給藥裝置可通過設(shè)置 閥門來確定噴霧劑量。本發(fā)明中的分離的噬菌體SK1、SK2、SK3、SK4和SK5中一種或多種組合使用，可配 制成不同劑型，對環(huán)境或器具進行消殺，能夠裂解全部阪崎腸桿菌，可用于消除病原體、監(jiān) 控工廠環(huán)境中阪崎腸桿菌的污染情況。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明使用含有分離的 阪崎腸桿菌噬菌體SKI、SK2、SK3的組合物，配制成溶液、噴霧劑、分散體、混懸劑等，以用于 抑制或殺滅阪崎腸桿菌。在一個優(yōu)選的實施方案中，將本發(fā)明的含有分離的阪崎腸桿菌噬 菌體SKI、SK2、SK3的組合物配制成噴灑液或淋洗液，對環(huán)境或器具進行消殺，用于消除病 原體、監(jiān)控工廠環(huán)境中阪崎腸桿菌的污染情況。本發(fā)明中的分離的噬菌體對阪崎腸桿菌有強烈的裂解作用，還可為阪崎腸桿菌的 分型鑒定提供生物學(xué)方法，這有利于對阪崎腸桿菌進行生物學(xué)控制，并有利于流行病學(xué)的 調(diào)查分析。在一個實施方案中，本發(fā)明提供阪崎腸桿菌的分型方法，所述方法包括使用本 發(fā)明所述的分離的阪崎腸桿菌噬菌體或本發(fā)明所述的含有分離的阪崎腸桿菌噬菌體的組 合物。在一個優(yōu)選的實施方案中，在阪崎腸桿菌的分型方法中，使用SKI、SK2、SK3、SK4和 SK5噬菌體。在另一個優(yōu)選的實施方案中，在阪崎腸桿菌的分型方法中，使用SK2、SK3、SK4 和SK5噬菌體。在一個更優(yōu)選的實施方案中，在阪崎腸桿菌的分型方法中，使用噬菌體SK1、 SK2和SK3的組合。在一個具體的實施方案中，本發(fā)明中采用IRTD分型原則，用SKI、SK2、 SK3、SK4和SK55種噬菌體將阪崎腸桿菌分成10個型。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，本發(fā)明提供本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體或本發(fā)明 的含有一種或多種本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體的組合物用于監(jiān)控、抑制或殺滅工廠 環(huán)境或制品中的阪崎腸桿菌的應(yīng)用。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述制品為食品或飲料。
4
在本發(fā)明的一些實施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體或本 發(fā)明的含有一種或多種本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體的組合物在制備抑制或殺滅阪 崎腸桿菌的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的分離的噬菌體應(yīng)用于消除病原體、監(jiān)控工廠環(huán)境衛(wèi)生， 其包括但不局限于嬰幼兒配方粉生產(chǎn)等防止阪崎腸桿菌的污染。除了食品加工衛(wèi)生、發(fā)酵 工廠的消毒等，本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體還可以用于醫(yī)學(xué)治療和預(yù)防、建立新型 畜牧等多個領(lǐng)域方面，其能夠有效地消除病原體、監(jiān)控環(huán)境衛(wèi)生等。


本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體SKI、SK2、SK3、SK4、SK5由本發(fā)明的發(fā)明人保 藏在位于中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中心(CGMCC)，保藏日為2010年4月15日，保藏編號分別為CGMCC No. 3741、CGMCC No. 3742、CGMCCNo. 3743、CGMCC No.3744 和 CGMCC No. 3745。圖1 :5株噬菌體及2組噬菌體組合物噬菌斑形態(tài)，其中圖中1 5依次是噬菌體 SK5、SK4、SK3、SK2、SKl ；6、9為空白對照(未加噬菌體)；7、8為噬菌體組合物SK2、SK3、 SK4、SK5 和 SKI、SK2、SK3、SK4、SK5。圖2 :5株噬菌體SKI、SK2、SK3、SK4、SK5的噬菌體電鏡圖(從左至右的順序)。圖3 :5株噬菌體SKl、SK2、SK3、SK4、SK5隨機擴增多態(tài)DNA結(jié)果，其中，1 5依 次為 SKI、SK2、SK3、SK4、SK5。圖4 在不用濃度梯度的噬菌體菌液和試驗用阪崎腸桿菌同時存在下，阪崎腸桿 菌的生長曲線圖，其中，A-E依次為SKI、SK2、SK3、SK4、SK5。圖5 :5株噬菌體SKl、SK2、SK3、SK4、SK5在最適噬菌濃度下對阪崎腸桿菌的噬菌 效果圖，其中橫坐標為測定次數(shù)，每15分鐘測定一次，縱坐標為OD值。
具體實施例方式下面參照附圖結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步描述。以下的實施例只是作為舉例說 明目的，且無論如何不應(yīng)理解為限制本申請的主題。實施例1本發(fā)明噬菌體的分離和純化1.菌株及培養(yǎng)條件阪崎腸桿菌ATCC 29544，ATCC 29004，ATCC 12868，ATCC 51329，其余 27 株阪 崎腸桿菌IQCC10403、IQCC10403. 1-10403. 26為本實驗室收集的從奶粉中分離菌株，經(jīng) 與阪崎腸桿菌參考菌株ATCC29544的序列比對，其同源性均在99 %以上，證實分離的菌 株為阪崎腸桿菌屬細菌；陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae)ATCC 13047，產(chǎn)氣腸桿菌 (Enterobacteraero-gene)ATCC 13048，大腸埃希氏菌(Escherichia coli)ATCC11775，弗氏枸 櫞酸桿菌(Citrobacter freundii)ATCC 8090，奇異變形桿菌(Proteusmirabilis)ATCC 10005，產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)ATCC 43165，肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae) ATCC 4352，來自美國典型菌種保藏中心(American Type C μ Lture Collection, ATCC)。所用培養(yǎng)基為腦心浸液培養(yǎng)基(BHI)和胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)(北京陸橋技術(shù)有限責任公司)培養(yǎng)均在36°C進行。ATCC 29544、ATCC 51329、 ATCC29004，分離株10403. 7和10403. 14用于噬菌體的增殖。2.樣品的采集與處理本發(fā)明中樣品采自北京市朝陽區(qū)高碑店河水樣本，將采集的樣品用脫脂棉過濾得 上清液。3.樣品中針對阪崎腸桿菌的噬菌體特異性擴增取處理后的樣品IOOmL,加入預(yù)先擴增好含有IQCC10403. 7、IQCC10403. 14、 ATCC29544、ATCC29004、ATCC51329菌株的BHI培養(yǎng)基中(用前需滅菌)，(加入比例為 1 100)，將其至于恒溫搖床36°C，350r/min培養(yǎng)過夜。培養(yǎng)液經(jīng)無菌濾器(0. 22um微孔 濾膜)過濾除菌。4.斑點試驗(I)SKl斑點試驗用無菌移液管吸取上述培養(yǎng)的IQCC10403. 7菌液1-1. 5ml，滴入 上述一瓊脂平板中。傾斜并轉(zhuǎn)動平板，使菌液流布整個平板，并使剩余菌液積聚在平板的一 角，用無菌移液管吸出全部剩余菌液。略等數(shù)分鐘，使瓊脂表面菌層干燥，用微量移液器吸 取0.5ml SKl迅速滴注在瓊脂平板的不同部位，約10處左右，每處約滴加50ul SKI。滴加 完畢，略等數(shù)分鐘，待噬菌體被瓊脂完全吸收，翻轉(zhuǎn)平板，放置36°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h過 夜觀察觀察有無噬斑，如果有進行步驟5。以上操作均在無菌條件下進行。(2)SK2斑點試驗用無菌移液管吸取上述培養(yǎng)的IQCC 10403. 14菌液1_1. 5ml，滴 入上述一瓊脂平板中。用微量移液器吸取0.5ml SK2滴注在瓊脂平板的不同部位。具體操 作方法同(1)。(3) SK3斑點試驗用無菌移液管吸取上述培養(yǎng)的ATCC29544菌液1_1 述一瓊脂平板中。用微量移液器吸取0.5ml SK2滴注在瓊脂平板的不同部位。 法同(1)(4) SK4斑點試驗用無菌移液管吸取上述培養(yǎng)的ATCC29004菌液1_1 述一瓊脂平板中。用微量移液器吸取0.5ml SK4滴注在瓊脂平板的不同部位。 法同(1)(5)SK5斑點試驗用無菌移液管吸取上述培養(yǎng)的ATCC51329菌液1-1 述一瓊脂平板中。用微量移液器吸取0.5ml SK5滴注在瓊脂平板的不同部位。 法同⑴。5.噬菌體純化將步驟4中在阪崎腸桿菌雙層檢測平板中單個噬菌斑(透明、寬直徑)的瓊脂塊， 加入5mLBHI中，于36°C恒溫箱中培養(yǎng)18 24h，培養(yǎng)液經(jīng)無菌濾器(0. 22um微孔濾膜)過 濾除菌。然后重復(fù)上述分離純化步驟至少三次，直到在平板表面的菌苔中出現(xiàn)形態(tài)和大小 完全一致的噬菌體斑時，即可得到較純的阪崎腸桿菌噬菌體。結(jié)果有5份樣品增殖物能使阪崎腸桿菌裂解或在其菌苔上產(chǎn)生單獨噬菌斑，產(chǎn)生裂 解區(qū)域或噬菌斑的物質(zhì)能夠轉(zhuǎn)接或純化特性說明這些物質(zhì)不是抗生素或細菌毒素。挑單 個噬菌斑，傳代5次后，噬菌斑形態(tài)和大小保持均勻一直，斑呈圓形透明，邊緣清晰，直徑約 100mm，提示得到了純化的噬菌體，圖1 (1 5)為SK5、SK4、SK3、SK2、SKl噬菌斑。
5ml，滴入上 具體操作方
5ml，滴入上 具體操作方
5ml，滴入上 具體操作方
實施例2本實施例為本發(fā)明的噬菌體的生物學(xué)特性的表征。1.噬菌體滴度測定將噬菌體原種用液體培養(yǎng)基作10倍連續(xù)稀釋后，每稀釋度取10μ L，加入到 0.2mL宿主菌增菌液中，在雙層平板測定噬斑滴度，滴度(pfu/mL)=密度適當?shù)钠桨迳?的噬斑數(shù)X稀釋倍數(shù)X 100，通過觀察形成噬菌斑的情況確定工作滴度(Routine test dilution, RTD)。2.電鏡觀察挑取3 4個噬菌斑轉(zhuǎn)接到約400 μ L SM的緩沖液中(5. 8g NaCl, 2. Og MgSO4 · 7H20，50mL 的 lmol/L Tris (pH = 7. 5)，0. Ig 明膠，于 IL 去離子水中，IOOkPa 滅 菌15min)，樣品在室溫下放置lh，然后滴到碳質(zhì)柵網(wǎng)上用乙酸雙氧鈾進行負染，使用 Phi 1 ips/Tecnail2透射電鏡觀察和拍照。3.本發(fā)明噬菌體同源性及特異性分析將5株噬菌體SKI、SK2、SK3、SK4和SK5做生化反應(yīng)實驗，觀察實驗結(jié)果。按照使用說明用DNA提取試劑盒(Promega，美國)提取噬菌體DNA。通過引 物5，-GAAACGGGTG-3，對提取的噬菌體DNA進行隨機擴增多態(tài)性(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)實驗分析，比較擴增片斷的大小。50 μ L反應(yīng)液中含25 μ L 2x PCR 混合液(Promega)，0. 5 μ mol (2 μ L)引物，1 μ L分離DNA作為模板，22 μ L蒸餾水，。循環(huán)條 件為:94V 5min ；94°C lmin，37°C lmin，72°C 2min，40 個循環(huán)；72°C IOmin0 通過 2%瓊脂糖 凝膠電泳檢查擴增產(chǎn)物。結(jié)果1.噬菌體滴度測定5株噬菌體的工作滴度(RTD)和每mL空斑形成單位(pfu/mL) =SKl為10_4和 4. 4 X IO10 ；SK2 為 1(Γ2 和 1. 58 X IO9 ；SK3 為 10_2 禾口 1. 78 X IO7 ；SK4 為 1(Γ2 和 2. 12 X IO6 ；SK5 為 IO"2 和 1. 12 X IO6。2.噬菌體電鏡形態(tài)在電子顯微鏡下觀察磷酸鎢復(fù)染的噬菌體顆粒，如圖2所示。3本發(fā)明噬菌體同源性及特異性分析以來源于臨床和環(huán)境標本、具有代表性的阪崎腸桿菌作為指示菌，從污水中分離 出的5株阪崎腸桿菌噬菌體，SKl、SK2、SK3、SK4和SK5，在生物學(xué)特性試驗中，表現(xiàn)出清晰 的相同的特性，但對同種菌株的易感程度卻表現(xiàn)出寬窄不同的范圍。經(jīng)隨機擴增多態(tài)性(RAPD)分析，表明它們?yōu)?株不同的噬菌體，分別命名為SK1、 SK2、SK3、SK4和SK5，圖3為5株噬菌體隨機擴增多態(tài)DNA結(jié)果。實施例3本發(fā)明的噬菌體噬菌效果試驗1.噬菌體裂解譜的測定將27株阪崎腸桿菌分離株和其他7種來自ATCC的腸桿菌科細菌參考菌株和分離 菌株的工作菌株經(jīng)BHI增菌后，用無菌棉簽沾取培養(yǎng)液涂布于營養(yǎng)瓊脂，將10 μ L效價為 IO6 109pfU/mL的噬菌體滴在阪崎腸桿菌涂布區(qū)域，36°C培養(yǎng)18 24h，通過觀察菌苔上
7是否形成噬菌斑測定噬菌體的宿主范圍。2.本發(fā)明的噬菌體最適使用濃度及噬菌效果測定用BHI將待試菌株于36°C培養(yǎng)6h。取培養(yǎng)后菌液加入酶標板中，每孔150 μ L。取 等量噬菌體按濃度梯度IO6 10_6pfu/mL，依次加入向酶標板Al至A12各孔內(nèi)。將酶標板 放置36°C酶標儀(Thermo SN 1500-150)中，每15min讀數(shù)依次，共48次，時間為12h，儀器 自動記下噬菌圖及OD值。結(jié)果1.噬菌體裂解譜測定5株噬菌體SK1、SK2、SK3、SK4和SK5對非阪崎腸桿菌以外的7株腸桿菌科細菌不 敏感。SK5則能裂解24株(89% )，是5株噬菌體中裂解范圍最寬的噬菌體；SK4也表現(xiàn)出 較寬的裂解范圍(74% )，但是其形態(tài)學(xué)特征不同于SK5，對于SK4而言，63%為完全裂解或 融合性裂解(c0nfluentlySiS，CL)，而SK5，50%的裂解模式為不透明裂解(opaque lysis, 0L) ；SK3能裂解27株分離株中的6株(22%) ；SK2能裂解27株試驗菌株中的5株(18% )； SKl表現(xiàn)出較窄的裂解范圍，僅能裂解27株試驗菌株中的4株(14%)。5株噬菌體裂解譜 不同，證明它們是5株完全不同的噬菌體。裂解譜結(jié)果表明，噬菌體SK1、SK2和SK3可用于 阪崎腸桿菌的分型鑒定。盡管分離的噬菌體沒有一種能夠完全裂解27株阪崎腸桿菌，但是 4株噬菌體SK2、SK3、SK4和SK5結(jié)合使用能夠完全裂解27株試驗菌株，在噬菌體被認為是 一種消除病原體或減少其危害的有效手段前提下，通過進一步試驗，可用于嬰幼兒配方粉 生產(chǎn)過程及環(huán)境中阪崎腸桿菌的控制。2.本發(fā)明的噬菌體最適使用濃度測定酶標儀測定結(jié)果見圖4，結(jié)果表明當液體中噬菌體的含量達到106pfU/mL時，噬菌 體可以完全或部分殺滅阪崎腸桿菌。圖5為5株噬菌體的噬菌效果，從圖5結(jié)果可以看出， 噬菌體的潛伏期在30-50min內(nèi)，此后菌體量呈現(xiàn)下降趨勢。實施例4本實施例為使用本發(fā)明的噬菌體對阪崎腸桿菌進行分型鑒定。1.噬菌體5 種噬菌體SK1、SK2、SK3、SK4、SK5 原液效價為 IO6 101Qpfu/mL，RTD 在 10-2 10-4之間。臨用前用稀釋到1RTD。2.培養(yǎng)基1. 5% TSA平板，每個9cm平皿中約25mL，放在水平臺面上使其凝固，在36°C半開 皿放置約一小時，以烘干培養(yǎng)基表面水分。BHI管，每管約2mL。3.試驗菌液的準備將待試菌種接種于營養(yǎng)肉湯管內(nèi)，于36°C過夜。挑取此肉湯培養(yǎng)物一滿環(huán)，稀釋于 一管2mL蛋白胨水管內(nèi)，使之成為1 400稀釋菌液，含菌量約lX106cfu/mL。涂抹試驗菌液。4.斑點涂抹法將瓊脂平板表面分為三等份，每等份可供涂抹一株細菌培養(yǎng)物。每挑取試驗菌液 一滿環(huán)，涂抹直徑約Icm的菌斑一個，每株培養(yǎng)物涂抹7個菌斑。5.滴加噬菌體
將雙層瓊脂平板放在水平臺面上，用定量乳頭滴管滴加IRTD噬菌體，每mL約為 100滴，每支滴管只滴加一種噬菌體，防止交叉污染。待噬菌體滴加完畢，略等數(shù)分鐘，使噬 菌體被瓊脂完全吸收。翻轉(zhuǎn)平板，放36°C培養(yǎng)過夜，觀察結(jié)果。6.實驗結(jié)果判定按表判定噬菌體分型鑒定結(jié)果。表1阪崎腸桿菌噬菌體分型
噬菌體型 權(quán)利要求
分離的阪崎腸桿菌噬菌體，其為SK1、SK2、SK3、SK4和SK5，保藏編號分別為CGMCC No.3741、CGMCC No.3742、CGMCC No.3743、CGMCC No.3744和CGMCC No.3745。
2.一種組合物，其包含權(quán)利要求1中所述的分離的阪崎腸桿菌噬菌體中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其包含分離的阪崎腸桿菌噬菌體SK2、SK3、SK4和SK5。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的組合物，其為藥物組合物，進一步包含藥學(xué)可接受的載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，所述藥物組合物為噴霧劑、洗劑或淋洗劑的形式。
6.阪崎腸桿菌的分型方法，所述方法包括使用權(quán)利要求1中所述的分離的阪崎腸桿菌 噬菌體或權(quán)利要求2或3中所述的組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分型方法，其中所述方法包括使用噬菌體SK1、SK2和SK3的組合。
8.權(quán)利要求1中所述的分離的阪崎腸桿菌噬菌體或權(quán)利要求2-5中任一項所述的組合 物用于監(jiān)控、抑制或殺滅工廠環(huán)境或制品中的阪崎腸桿菌的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，所述制品為食品或飲料。
10.權(quán)利要求1中所述的分離的阪崎腸桿菌噬菌體或權(quán)利要求2-5中任一項所述的組 合物在制備抑制或殺滅阪崎腸桿菌的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及分離的阪崎腸桿菌噬菌體SK1、SK2、SK3、SK4和SK5，其保藏編號分別為CGMCC No.3741、CGMCC No.3742、CGMCC No.3743、CGMCC No.3744和CGMCC No.3745。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體的組合物，以及本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體及其組合物的應(yīng)用。本發(fā)明的分離的阪崎腸桿菌噬菌體及其組合物能夠有效地消除病原體、監(jiān)控工廠環(huán)境衛(wèi)生等。
文檔編號A61P31/04GK101942417SQ20101017154
公開日2011年1月12日 申請日期2010年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月28日
發(fā)明者姚李四, 暴書蟬, 袁飛, 趙勇勝, 趙貴明, 陳穎 申請人:中國檢驗檢疫科學(xué)研究院