專(zhuān)利名稱(chēng)：核苷氨基磷酸酯的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)涉及核苷氨基磷酸酯和它們作為治療病毒疾病的藥劑的用途。這些化合物是RNA-依賴(lài)性RNA病毒復(fù)制的抑制劑，并且可用作HCVNS5B聚合酶的抑制劑，作為HCV復(fù) 制的抑制劑，和用于在哺乳動(dòng)物中治療丙型肝炎感染。
背景技術(shù)：
丙型肝炎病毒(HCV)感染是在大量感染個(gè)體(估計(jì)為世界人ロ的2-15% )中導(dǎo)致慢性肝病例如肝硬化和肝細(xì)胞癌主要的健康問(wèn)題。根據(jù)美國(guó)疾病控制中心的數(shù)據(jù)，單美國(guó)就估計(jì)有450萬(wàn)的感染人口。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)，全世界有超過(guò)2億的感染人口，并且每年有至少300-400萬(wàn)人ロ被感染。一旦被感染，約20%的人清除病毒，但其余的人可能在其余下的生命中將攜帯HCV。10-20%的慢性感染個(gè)體最終發(fā)展為肝破壞性肝硬化或癌癥。病毒疾病通過(guò)污染的血液和血液制品、污染的注射針以胃腸外方式傳播、或通過(guò)性行為并從感染的母親或攜帯者母親垂直傳播到其后代。HCV感染的現(xiàn)有治療局限于單用重組干擾素α或聯(lián)合使用核苷類(lèi)似物利巴韋林的免疫治療，該治療取得有限的臨床益處。而且，尚未建立用于HCV的疫苗。因此，急切需要一種可有效對(duì)抗慢性HCV感染的改善的治療藥齊 。HCV病毒體是具有約9600個(gè)堿基的單寡核糖核苷酸基因序列的有包膜正鏈RNA病毒，編碼約3，010個(gè)氨基酸的多聚蛋白。HCV基因的蛋白產(chǎn)物包括結(jié)構(gòu)蛋白C、El和Ε2，以及非結(jié)構(gòu)蛋白NS2、NS3、NS4A與NS4B、NS5A和NS5B。據(jù)信非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白提供病毒復(fù)制的催化作用。NS3蛋白酶釋放NS5B，多聚蛋白鏈的RNA依賴(lài)性RNA聚合酶。HCV NS5B聚合酶是從單鏈病毒RNA合成雙鏈RNA所必需的，單鏈病毒RNA在HCV的復(fù)制循環(huán)中作為模板。因此，認(rèn)為NS5B聚合酶是HCV復(fù)制復(fù)合體中的必要組分(K. Ishi，等，H印tology (肝臟病學(xué))，1999，29 :1227-1235 ;V. Lohmann，等·，Virology (病毒學(xué))，1998，249 :108-118)。HCVNS5B聚合酶的抑制防止形成雙鏈HCV RNA,因而構(gòu)成開(kāi)發(fā)HCV特異性抗病毒療法的具有吸引力的方法。HCV屬于具有許多共性的很大的病毒科。黃病毒科病毒的黃病毒科包括至少三種不同的屬瘟病毒屬，它導(dǎo)致牛和豬的疾??；黃病毒屬，它是導(dǎo)致例如登革熱和黃熱病的疾病的主要原因；和丙型肝炎病毒屬(hepaciviruses),其卩隹一成員是HCV?；谘鍖W(xué)相關(guān)性分組,黃病毒屬包括多于68個(gè)成員(Calisher等·，J. Gen. Virol (遺傳病毒學(xué)雜志)，1993，70，37-43)。臨床癥狀各不相同，包括發(fā)熱、腦炎和出血熱(Fields Virology (費(fèi)氏病毒學(xué))，編輯=Fields,B. N. ,Knipe,D. M.,和 Howley, P. M. , Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA, 1996, Chapter31,931-959)。全球關(guān)注的與人類(lèi)疾病相關(guān)的黃病毒屬包括登革出血熱病毒(DHF)、黃熱病病毒、休克綜合癥和日本腦炎病毒(Halstead, S. B. , Rev. Infect. Dis. , 1984,6, 251-264 ；Halstead, S. B.，Science (科學(xué))，239 :476-481,1988 ；Monath, T. P.，New Eng. J. Med,(新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志)1988，319，641-643)。
瘟病毒屬包括牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、豬瘟病毒(CSFV，也稱(chēng)為豬霍亂病毒)和綿羊瘟病毒(BDV) (Moennig，V.等· Adv. Vir. Res. 1992，41，53-98)。家畜(牛、豬和羊)的瘟病毒感染造成世界范圍內(nèi)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。BVDV導(dǎo)致牛的粘膜病且對(duì)于家畜產(chǎn)業(yè)具有顯著的經(jīng)濟(jì)重要性(Meyers, G.和 Thiel, H. J. , Advances in Virus Research(病韋研究進(jìn)展)，1996，47，53-118 ；Moennig V.，等，AdV. Vir. Res. 1992，41，53-98)。尚未像動(dòng)物瘟病毒那樣全面了解人瘟病毒。然而，血清學(xué)研究顯示人類(lèi)中有相當(dāng)多的瘟病毒接觸。瘟病毒和丙型肝炎病毒是黃病毒科內(nèi)密切相關(guān)的病毒屬。該科內(nèi)其它密切相關(guān)的病毒包括GB病毒A、GB病毒A-類(lèi)似物、GB病毒-B和GB病毒-C(也稱(chēng)為G型肝炎病毒，HGV)。丙型肝炎病毒屬(丙型肝炎病毒；HCV)由許多可感染人體的密切相關(guān)但不同基因型的病毒組成。至少有6種HCV基因型和大于50種亞型。由于瘟病毒和丙型肝炎病毒的相似性，加上丙型肝炎病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中很難有效生長(zhǎng)，所以，在HCV病毒研究中常常使用牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)作為代用品。瘟病毒和丙型肝炎病毒的遺傳組構(gòu)非常相似。這些正鏈RNA病毒具有單個(gè)大的開(kāi)放式讀碼框(ORF)，編碼所有病毒復(fù)制所需的病毒蛋白。這些蛋白表達(dá)為多聚蛋白，多聚蛋白被細(xì)胞和病毒編碼的蛋白酶同時(shí)翻譯加工或翻譯后加工，產(chǎn)生成熟的病毒蛋白。負(fù)責(zé)病毒基因組RNA復(fù)制的病毒蛋白位于大致羧基末端之內(nèi)。ORF的三分之ニ稱(chēng)為非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白。瘟病毒和丙型肝炎病毒的ORF非結(jié)構(gòu)蛋白部分的基因組構(gòu)和多聚蛋白加工非常相似。對(duì)于瘟病毒和丙型肝炎病毒，從非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)域的氨基末端到ORF的羧基末端的連續(xù)順序，成熟非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白由p7，NS2，NS3，NS4A，NS4B, NS5A和NS5B組成。瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白共有具有特殊蛋白質(zhì)功能特征的序列結(jié)構(gòu)域。例如，兩種病毒屬中病毒的NS3蛋白都含有具有絲氨酸蛋白酶和解旋酶特征的氨基酸序列基序(Gorbalenya 等·，Nature (自然)，1988, 333, 22 ；Bazan 和 Fletterick Virology (病毒學(xué))，1989，171,637-639 ；Gorbalenya 等·，Nucleic Acid Res.(核酸研究)，1989，17，3889-3897)。類(lèi)似地，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有以針對(duì)RNA的RNA聚合酶為特征的基序(Koonin, E. V.和 Dolja, V. V.，Crir. Rev. Biochem. Molec. Biol. 1993, 28，375-430)。瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白在病毒生命周期中的實(shí)際作用和功能是直接類(lèi)似的。在兩種情況下，NS3絲氨酸蛋白酶負(fù)責(zé)ORF中其位置下游的多聚蛋白前體的所有蛋白水解加工(Wiskerchen 和 Collett, Virology (病毒學(xué)),1991,184, 341-350 ；Bartenschlager 等·，J. Virol (病毒學(xué)雜志).1993,67, 3835-3844 ；Eckart 等.Biochem.Biophys. Res. Comm.生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評(píng)論1993,192, 399-406 ；Grakoui等.，J. Virol (病毒學(xué)雜志)· 1993，67，2832-2843 ；Grakoui 等·，Proc. Natl. Acad Sci. USA (美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊)1993，90，10583-10587 ；Hiiikata 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)1993，67，4665-4675 ；Tome 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)，1993，67，4017-4026)。在兩種情況下，NS4A蛋白起NS3絲氨酸蛋白酶的輔因子的作用(Bartenschlager等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)1994，68，5045-5055 ；Failla 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)1994，68，3753-3760 ；Xu等.，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)，1997，71 :5312-5322)。兩種病毒的NS3蛋白還都作為解旋酶起作用(Kim等·，Biochem. Biophys. Res. Comm.(生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評(píng)論),1995,215,160-166 ;Jin 和 Peterson,Arch. Biochem. Biophys. ,1995, 323,47-53 ；ffarrener和Collett，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)1995，69，1720-1726)。最后，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有預(yù)見(jiàn)的針對(duì)RNA的RNA聚合酶的活性(Behrens等.，ΕΜΒ0，1996，15，12-22 ；Lechmann 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)，1997，71，8416-8428 ；Yuan 等·，Biochem.Biophys. Res. Comm (生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評(píng)論)· 1997，232，231-235 ；Hagedorn,PCTW097/12033 ；Zhong 等，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)，1998，72，9365-9369)。目前，對(duì)于感染丙型肝炎病毒的個(gè)體具有有限的治療選擇。目前批準(zhǔn)的治療選擇 是單用重組干擾素α或聯(lián)合使用核苷類(lèi)似物利巴韋林的免疫治療。該療法的局限在于其臨床有效性，并且僅50%的治療的患者對(duì)于療法有反應(yīng)。因此，非常需要更有效和新穎的療法來(lái)解決HCV感染所面臨的未滿(mǎn)足的醫(yī)療需要?，F(xiàn)在已經(jīng)鑒定了用于直接作用抗病毒劑的藥物開(kāi)發(fā)的許多潛在的分子靶作為抗-HCV療法，包括但不限于NS2-NS3自身蛋白酶、Ν3蛋白酶、Ν3解旋酶和NS5B聚合酶。RNA-依賴(lài)性RNA聚合酶是單鏈正義RNA基因組的復(fù)制所絕對(duì)必需的，并且該酶已經(jīng)在藥物化學(xué)師中引起極大的興趣。作為HCV感染的潛在療法的HCV NS5B抑制劑已經(jīng)在下列文獻(xiàn)中綜述Tan，
S.-L.,等·，Nature Rev. Drug Discov.(藥物開(kāi)發(fā)自然評(píng)論)，2002,1,867-881 ；Walker, Μ. P.等·，Exp. Opin. Investigational Drugs (研究藥物實(shí)驗(yàn)觀點(diǎn))，2003,12，1269-1280 ；Ni, Z-J.,等· , Current Opinion in Drug Discovery and Development (現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)觀點(diǎn))，2004, 7,446-459 ；Beaulieu, P. L.,等·，Current Opinion inInvestigational Drugs (現(xiàn)代研究藥物觀點(diǎn))，2004, 5,838-850 ；ffu, J.,等· ,Current DrugTargets-Infectlous Disorders (現(xiàn)代藥物祀-感染性病癥)，2003, 3, 207-219 ；Griff ith,R. C.,等，Annual Reports in Medicinal Chemistry (藥物化學(xué)年度報(bào)告)，2004, 39,223-237 ； Carro I, S.,等· , Infectious Disorders-Drug Targets (感染性病癥-藥物革巴)，2006，6，17-29。出現(xiàn)抗性HCV菌株的可能性和需要鑒定具有廣泛基因型覆蓋度的藥劑支持繼續(xù)努力來(lái)鑒定新穎和更有效的核苷作為HCV NS5B抑制劑的需要。NS5B聚合酶的核苷抑制劑可起到導(dǎo)致鏈終止的非天然底物的作用或和核苷酸競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合聚合酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的作用。為了起到鏈終止劑的作用，核苷類(lèi)似物必須被細(xì)胞所攝取并且體內(nèi)轉(zhuǎn)化為三磷酸酯以競(jìng)爭(zhēng)聚合酶核苷酸的結(jié)合位點(diǎn)。該轉(zhuǎn)化至三磷酸酯通常受到細(xì)胞激酶的介導(dǎo)，所述細(xì)胞激酶賦予潛在核苷聚合酶抑制劑另外的結(jié)構(gòu)要求。不幸的是，這限制了作為HCV復(fù)制的抑制劑的核苷直接演變?yōu)槟軌蛟涣柞；幕诩?xì)胞的測(cè)定。
在一些情況下，核苷的生物活性受到其較差的底物特性的妨礙，所述特性用于ー種或多種需要將其轉(zhuǎn)化為活性三磷酸酯形式的激酶。通過(guò)核苷激酶形成單磷酸酷通常被認(rèn)為是三個(gè)磷?；录南匏俨襟E。為了避免下列需要，已經(jīng)報(bào)道制備穩(wěn)定的磷酸酯前藥在核苷的代謝中初始磷酰化步驟至活性三磷酸酯類(lèi)似物。核苷氨基磷酸酯前藥已經(jīng)顯示為活性三磷酸核苷的前體，并且當(dāng)施用至病毒感染的全細(xì)胞時(shí)抑制病毒的復(fù)制(McGuigan，C.，等·，J. Med. Chem.(醫(yī)學(xué)和化學(xué)雜志)，1996，39，1748-1753 ;Valette, G.，等·，J. Med.Chem.(醫(yī)學(xué)和化學(xué)雜志)，1996, 39,1981-1990 ；Balzarini, J.,等·，Proc. National AcadSci USA(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊)，1996，93，7295-7299 ；Siddiqui, A. Q.，等·，J. Med.Chem.(醫(yī)學(xué)和化學(xué)雜志)，1999,42,4122-4128 ；Eisenberg, Ε· J.,等·，Nucleosides,Nucleotides and Nucleic Acids (核苷、核苷酸和核酸)，2001，20，1091-1098 ;Lee，W. A.，等·，Antimicrobial Agents and Chemotherapy (抗微生物劑和化學(xué)治療)，2005, 49, 1898) ;US2006/0241064 和 WO 2007/095269。此外限制核苷用作可行病毒治療劑的效用是它們有時(shí)較差的物理化學(xué)和藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。這些較差的性質(zhì)可限制藥劑的腸吸收并且限制攝取到靶組織或細(xì)胞中。為了改善它們的性質(zhì)，已經(jīng)使用核苷的前藥。已經(jīng)證實(shí)核苷氨基磷酸酯的制備改善了核苷的全身吸收，而且這些"前核苷酸(pronucleotide)"的氨基磷酸酯部分被中性親脂性基團(tuán)所掩蔽以獲得合適的分配系數(shù)，從而優(yōu)化至細(xì)胞中的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)而相對(duì)于僅施用母體核苷，顯著地提高核苷單磷酸酯類(lèi)似物的細(xì)胞內(nèi)濃度。磷酸酯部分的酶介導(dǎo)的水解產(chǎn)生核苷單磷酸酷，其中限速性初始磷酰化是不需要的。發(fā)明概述本發(fā)明涉及由式I表示的氨基磷酸酯核苷、或其立體異構(gòu)體、鹽、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、晶體、或其代謝物形式
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權(quán)利要求
1.一種由式I表示的化合物、或其立體異構(gòu)體、鹽、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、晶體、或其代謝物形式
2.一種用于治療和/或預(yù)防本文中公開(kāi)的任ー種病毒劑的組合物，所述組合物包含選自賦形劑、載體、稀釋劑和等同介質(zhì)的藥學(xué)上可接受的介質(zhì)、以及權(quán)利要求I所述的化合物。
3.權(quán)利要求I所述的化合物在制備治療由丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髄灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒的感染導(dǎo)致的任意病癥的藥物中的用途。
4.一種在有需要的受試者中治療的方法，其包括施用治療有效量的權(quán)利要求I所述的化合物。
5.一種在有需要的受試者中治療的方法，其包括使至少ー種權(quán)利要求I所述的化合物接觸至少ー種丙型肝炎病毒感染的細(xì)胞。
6.一種由式I表示的化合物、或其代謝物或鹽或代謝物鹽
7.ー種用于治療和/或預(yù)防本文中公開(kāi)的任ー種病毒劑的組合物，所述組合物包含選自賦形劑、載體、稀釋劑和等同介質(zhì)的藥學(xué)上可接受的介質(zhì)、以及權(quán)利要求6所述的化合物。
8.權(quán)利要求6所述的化合物在制備治療由丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髄灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒感染導(dǎo)致的任意病癥的藥物中的用途。
9.一種在有需要的受試者中治療的方法，其包括施用治療有效量的權(quán)利要求6所述的化合物。
10.一種在有需要的受試者中治療的方法，其包括使至少ー種權(quán)利要求6所述的化合物接觸至少ー種丙型肝炎病毒感染的細(xì)胞。
全文摘要
公開(kāi)了針對(duì)丙型肝炎病毒具有活性的核苷化合物。
文檔編號(hào)A61K31/7076GK102695513SQ200980157336
公開(kāi)日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2009年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月23日
發(fā)明者杜錦發(fā), 王培源, 達(dá)納帕蘭·納加拉特南, 邁克爾·約瑟夫·索菲婭 申請(qǐng)人:吉利德制藥有限責(zé)任公司