專利名稱：尼古丁免疫納米療法的制作方法
尼古丁免疫納米療法
相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)是2008年10月12日提交的PCT申請(qǐng)系列No. PCT/US08/011932的部分繼續(xù)，并且要求其優(yōu)先權(quán)。本申請(qǐng)還要求2009年4月22日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào) 12/428, 388的優(yōu)先權(quán)。在此將上述申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考。
政府支持本發(fā)明是在由NIH 授予的 Grant Nos. EB003647、AI072252 和 AI069259 的政府支持下進(jìn)行的。政府在本發(fā)明中具有一定的權(quán)利。
背景技術(shù)：
很多現(xiàn)有的對(duì)抗微生物病原體的疫苗包含病原微生物的活減毒或非劇毒株。很多疫苗包含殺滅的或其他滅活的微生物。其它疫苗利用病原體裂解物的純化成分，如表面碳水化合物或重組病原體衍生的蛋白。利用活減毒的或滅活的病原體的疫苗通常產(chǎn)生有力的免疫應(yīng)答，但是它們的用途有局限性。例如，活的疫苗株有時(shí)候會(huì)引起傳染性病狀，尤其是施用于免疫受損的受體時(shí)。此外，很多病原體，特別是病毒，它們的基因組經(jīng)受了持續(xù)快速的突變，這使其能夠逃脫針對(duì)抗原上不同的疫苗株的免疫應(yīng)答。鑒于疫苗產(chǎn)生的困難，很多疫苗供應(yīng)嚴(yán)重短缺。例如，2007年10月美國(guó)發(fā)生了流感、水痘和甲肝疫苗的短缺。在一些情況下，疫苗短缺的發(fā)生是由于沒(méi)有足夠的生產(chǎn)商將其設(shè)備投入到疫苗生產(chǎn)以維持需求。在一些情況下，疫苗短缺是由于疫苗效力低造成的，這意味著必須向每個(gè)個(gè)體施以很大數(shù)量的疫苗產(chǎn)品以達(dá)到預(yù)防性效果。例如，一些疫苗不能作為完整生物體施用(即使是減毒的或殺滅的)，因?yàn)樗鼈円饌魅拘圆?。替代地，這樣的疫苗通常包含純化的病原體成分，其通常導(dǎo)致效力小得多的免疫應(yīng)答。因此，本領(lǐng)域?qū)ιa(chǎn)高免疫原性、有效疫苗的系統(tǒng)和方法存在著需求。對(duì)能夠有效地誘導(dǎo)長(zhǎng)效免疫應(yīng)答的改良疫苗組合物也存在著需求。為了治療和預(yù)防傳染性疾病，對(duì)高免疫原性但不引起疾病的改良疫苗組合物存在著需求。香煙、雪茄和煙斗的吸煙在美國(guó)和全世界是普遍問(wèn)題。有煙煙草和無(wú)煙煙草富含尼古丁，這是已知的使人上癮的物質(zhì)。在吸煙的10-15分鐘內(nèi)，獲得尼古丁的血液峰值水平，約25至50毫微克/毫升。在人體內(nèi)，由于尼古丁從肺部快速傳送至心臟，吸煙導(dǎo)致動(dòng)脈尼古丁濃度高于靜脈尼古丁濃度10倍(參見(jiàn)，Henningfield(1993)Drug Alcohol Depend. 33 :23-29) 0這導(dǎo)致高動(dòng)脈濃度的尼古丁快速傳送至大腦。一旦尼古丁穿過(guò)血腦屏障，證據(jù)表明其結(jié)合膽堿能受體。尼古丁結(jié)合這些受體時(shí)，通過(guò)引發(fā)其他神經(jīng)遞質(zhì)(如多巴胺)的釋放，其可以影響正常的大腦功能。在涉及愉悅的情緒、動(dòng)機(jī)和感覺(jué)的大腦區(qū)域中發(fā)現(xiàn)多巴胺。神經(jīng)遞質(zhì)(尤其是多巴胺)的釋放引起了煙草使用者對(duì)尼古丁或其他尼古丁攝入的上癮。尼古丁是源自煙草植物的生物堿，其造成吸煙的心理活性和上癮作用的后果。尼古丁由通過(guò)單鍵連接在一起的兩個(gè)環(huán)形成芳香族六元環(huán)(嘧啶)和脂肪族五元環(huán)(吡咯烷)。吡咯烷是N-甲基化的，并且通過(guò)其碳-2與嘧啶的碳-3連接。因此，碳_2是手性的，并且在連接兩個(gè)環(huán)的單鍵周?chē)鷮?shí)質(zhì)性地存在自由旋轉(zhuǎn)。已經(jīng)確定了碳_2的絕對(duì)構(gòu)型是S。 因此，尼古丁的天然構(gòu)型是(s)-(-)-尼古丁。已經(jīng)發(fā)展了用于尼古丁上癮的療法，但很大程度上是無(wú)效的。兩種最普遍的療法保留了尼古丁經(jīng)皮貼和將尼古丁摻入口香糖中。這些療法，稱為“尼古丁替代療法”(NRT)， 替代使用者之前從吸煙接受到的尼古丁含量，并用來(lái)使使用者戒掉尼古丁。然而，使用這種類(lèi)型的療法看到了特定的缺陷。特別地，存在低濃度的尼古丁滲透進(jìn)入血流，并因此存在提高的對(duì)煙的渴望。本領(lǐng)域?qū)Πl(fā)展治療上癮(如，對(duì)尼古丁、可卡因、海洛因、乙醇和其他藥物的上癮) 的改良方法仍然存在著需求。用于治療上癮的理想方法將，例如，導(dǎo)致最小的斷癮癥狀，通過(guò)簡(jiǎn)單管理而鼓勵(lì)患者依從，并導(dǎo)致患者中低的復(fù)發(fā)率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了用于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的合成納米載體。合成納米載體包含一個(gè)或多個(gè)表面。在一些具體實(shí)施方案中，至少一個(gè)表面包含免疫特征表面。任選，本發(fā)明的合成納米載體進(jìn)一步含有一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和靶向劑(本文中也稱為“靶向部分”)。免疫調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)B和/或T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答。免疫刺激劑幫助刺激免疫系統(tǒng)(以一種最終能夠加強(qiáng)、抑制、引導(dǎo)或重引導(dǎo)免疫應(yīng)答的方式)。免疫特征表面識(shí)別一個(gè)或多個(gè)與抗原呈遞細(xì)胞相關(guān)的目標(biāo)。任選的靶向劑識(shí)別一個(gè)或多個(gè)與特定的器官、組織、細(xì)胞和/ 或亞細(xì)胞位點(diǎn)相關(guān)的目標(biāo)。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體包含如下的表面該表面包含含量能給部分有效提供體液應(yīng)答的多個(gè)部分。例如，將合成納米載體施用于患者時(shí)，獲得體液應(yīng)答。納米載體在預(yù)防和/或治療那些通過(guò)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)而易于治療的疾病、失調(diào)或癥狀的藥物制劑和藥盒中是有用的。這樣的癥狀包括那些通過(guò)特異性或非特異性加強(qiáng)免疫應(yīng)答、特異性或非特異性抑制免疫應(yīng)答或特異性或非特異性引導(dǎo)/重引導(dǎo)免疫應(yīng)答而調(diào)節(jié)的疾病、失調(diào)或癥狀。如本發(fā)明中將更詳細(xì)描述的免疫特征表面，為將納米載體特異性地靶向抗原呈遞細(xì)胞(APC)作好了準(zhǔn)備。特別地，免疫特征表面為納米載體高親合力地結(jié)合APC表面作好了準(zhǔn)備。此外，高親合力結(jié)合特異于APC細(xì)胞。例如，在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體能夠特異性地靶向被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞(SCS-Mph)。施用于患者時(shí)，這樣的納米載體聚集在淋巴結(jié)的被膜下淋巴竇區(qū)域。在其他具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體能夠特異性地靶向樹(shù)突細(xì)胞并引發(fā)T-細(xì)胞應(yīng)答。在一些優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，免疫特征表面提供了納米載體與APC表面的低親和性、高親合力結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，包含免疫特征表面的納米載體呈現(xiàn)出與APC的特定低親和性高親合力結(jié)合，但未提供這樣的與其他類(lèi)型細(xì)胞的結(jié)合。本發(fā)明中將提供免疫特征表面的更多詳細(xì)內(nèi)容。免疫特征表面與目標(biāo)APC的能力是施用于患者時(shí)，使得本發(fā)明的納米載體可以將免疫刺激劑和免疫調(diào)節(jié)劑傳送至B-細(xì)胞和/或T-細(xì)胞的關(guān)鍵特征。這種傳送使得本發(fā)明的納米載體可以引發(fā)免疫系統(tǒng)應(yīng)答，或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的合成納米載體包含如下的表面該表面包含含量能給部分有效提供體液應(yīng)答的多個(gè)部分。例如，在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面包含尼古丁部分。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識(shí)到的，免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)在如下情況中尤其有用，其中，與醫(yī)學(xué)治療相關(guān)的情況，如，例如，用于預(yù)防和/或治療傳染病、癌癥、自體免疫疾病(包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)，與移植相關(guān)的免疫抑制，以改善移植排斥，抵抗令人上癮的物質(zhì)的免疫，以及對(duì)抗生物危害物和其它毒性物質(zhì)的免疫。免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)作為工業(yè)和學(xué)術(shù)研究環(huán)境中的工具也是有用的，例如，如，免疫動(dòng)物以生產(chǎn)抗體。本發(fā)明的一個(gè)方面是提供疫苗。根據(jù)本發(fā)明的疫苗通常含有抗原。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，抗原通過(guò)共價(jià)或非共價(jià)方式與納米載體物理“結(jié)合”。非共價(jià)鍵包括，例如，離子鍵、疏水鍵、物理截留等，以下將全部進(jìn)行更詳細(xì)的描述。將這樣自身攜帶抗原的納米載體包括在以下稱為疫苗納米載體的范疇內(nèi)。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，納米載體具有與之結(jié)合的免疫刺激劑，以用于增強(qiáng)、抑制、引導(dǎo)或重引導(dǎo)免疫應(yīng)答，優(yōu)選為對(duì)抗原的免疫應(yīng)答。在這種情況下，抗原可以與結(jié)合試劑的納米載體(載體上結(jié)合了免疫刺激劑)制備物混合以形成疫苗。當(dāng)然抗原也可以與納米載體結(jié)合，包括下面所討論的，結(jié)合了免疫刺激試劑的相同納米載體?？乖部梢允敲庖咛卣鞅砻娴囊徊糠?。在很多情況下，本發(fā)明的制備物將包括一個(gè)或多個(gè)納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，制備物包括具有免疫特征表面的納米載體，其中納米載體結(jié)合免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和靶向劑中的一種或多種，但不是全部。在一些具體實(shí)施方案中，制備物是納米載體的混合物，其具有攜帶免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和靶向劑中的一種或多種，但不是全部的亞群體。在一些具體實(shí)施方案中，制備物是不同納米載體的混合物，每種納米載體攜帶免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和靶向劑中的一種或多種，但不是全部。制備物同樣可以是納米載體中的一個(gè)，其中每個(gè)納米載體具有與之結(jié)合的全部免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和靶向劑。在這種情況下，納米載體自身，除了它們輸送的試劑之外，可以是相同或不同的。在此提及的靶向劑 (并且本發(fā)明中將更詳細(xì)地描述)是，例如，B-細(xì)胞靶向部分或T-細(xì)胞靶向部分。將認(rèn)識(shí)到，在整個(gè)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容中，這些部分是除存在于免疫特征表面上的多個(gè)部分以外的并且提供納米載體靶向APC的部分。重要的是，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的納米載體對(duì)于刺激免疫系統(tǒng)是強(qiáng)有力的。重要的是，發(fā)現(xiàn)納米載體可以被制成，從免疫學(xué)觀點(diǎn)來(lái)看，是模擬暴露于自然界中的抗原時(shí)或在疫苗技術(shù)之前免疫系統(tǒng)所“看到”的情況的改進(jìn)。在這個(gè)方面，出乎意料地發(fā)現(xiàn)了如果與納米載體共價(jià)結(jié)合，佐劑的活性會(huì)顯著增強(qiáng)。還出乎意料地發(fā)現(xiàn)了納米載體的免疫特征表面甚至能夠在沒(méi)有特定細(xì)胞靶向劑的情況下幫助將免疫調(diào)節(jié)劑或免疫刺激劑靶向合適的免疫細(xì)胞。本文中描述的系統(tǒng)允許以產(chǎn)生改善的免疫調(diào)節(jié)的方式操作那些影響免疫系統(tǒng)的參數(shù)。本發(fā)明的一個(gè)重要方面是可以控制納米載體的尺寸、試劑密度、靶向程度和位置、降解和試劑釋放等。本發(fā)明的眾多方面實(shí)現(xiàn)這些益處中的一個(gè)或多個(gè)，以下將更詳細(xì)地描述。 特別地，以下描述了免疫調(diào)節(jié)制備物，這樣的制備物的合成納米載體成分，特異性和優(yōu)選的納米載體，特異性和優(yōu)選的免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和靶向劑，本發(fā)明納米載體的成分部分和構(gòu)建模塊，以及制造這樣的納米載體的方法，包括涉及自體裝配的納米載體的優(yōu)選方法。 此外，描述了用于產(chǎn)生與弱抗原和不被T細(xì)胞識(shí)別的抗原(例如，碳水化合物和小分子抗原)相關(guān)的有力的免疫調(diào)節(jié)的制備物和系統(tǒng)。在一些方面中，提供了包含納米載體(例如， 靶向特定器官、組織、細(xì)胞或亞細(xì)胞位點(diǎn)的納米載體)的組合物。在一些具體實(shí)施方案中， 納米載體靶向一種或多種次級(jí)淋巴組織或器官。在一些具體實(shí)施方案中，次級(jí)淋巴組織或器官是淋巴結(jié)、脾、派亞氏淋巴叢、闌尾或扁桃體。納米載體骨架(和本文中所提供的試劑結(jié)合或包埋的納米載體)可以由聚合物和 /或非聚合物分子組成。因此，納米載體骨架可以是基于蛋白、基于核酸或基于碳水化合物的。在一些具體實(shí)施方案中，骨架是大分子。在一些具體實(shí)施方案中，骨架由氨基酸或核酸組成。在一些具體實(shí)施方案中，骨架由分子的交聯(lián)鏈組成，如核酸。在一些具體實(shí)施方案中，骨架由RNAi交聯(lián)鏈組成。在一些具體實(shí)施方案中，骨架是基于聚氨基的。納米載體可以是，但不限于，一個(gè)或多個(gè)基于脂質(zhì)的納米顆粒、聚合納米顆粒、金屬納米顆粒、基于表面活性劑的乳液、樹(shù)枝狀化合物和/或使用納米材料的組合發(fā)展出來(lái)的納米顆粒，如脂質(zhì)_聚合物納米顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體由一個(gè)或多個(gè)聚合物組成。在一些具體實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)聚合物是水溶性的、無(wú)粘附性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是聚乙二醇(PEG)或聚環(huán)氧乙烷(PEO)。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)聚合物是生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)聚合物是生物相容性聚合物，其為水溶性的、無(wú)粘附性聚合物和生物可降解聚合物的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，生物可降解聚合物是聚乳酸(PLA)、 聚(羥基乙酸)(PGA)或聚(乳酸/羥基乙酸)(PLGA)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體由PEG-PLGA聚合物組成。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體通過(guò)自體裝配形成。自體裝配指的是使用那些能夠使自身適應(yīng)以可預(yù)見(jiàn)的方式可預(yù)見(jiàn)地且可再生地形成納米載體的成分形成納米載體的過(guò)程。在一些具體實(shí)施方案中，使用兩性生物材料形成納米載體，該生物材料相對(duì)彼此使自身適應(yīng)來(lái)形成可預(yù)見(jiàn)尺寸、組成和組成位置的納米載體。根據(jù)本發(fā)明，兩性生物材料可以結(jié)合免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和/或靶向劑，從而當(dāng)納米載體自體裝配時(shí)，在納米載體上/ 內(nèi)存在可再生模式的試劑的位置和密度。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是微米顆粒、納米顆?；蛭⑽⒚最w粒。在一些具體實(shí)施方案中，微米顆粒、納米顆?；蛭⑽⒚最w粒是自體裝配的。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有正ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體在中性PH下帶有凈正電荷。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體在其表面包含一個(gè)或多個(gè)胺部分。在一些具體實(shí)施方案中，胺部分是伯、仲、叔或季胺。在一些具體實(shí)施方案中，胺部分是脂肪族胺。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含含有胺的聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含含有胺的脂質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含在中性PH 下帶有正電荷的蛋白或肽。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是乳膠顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，在其表面具有一個(gè)或多個(gè)胺部分的納米載體在中性PH下帶有凈正電荷。在一些具體實(shí)施方案中，本文中提供的組合物的納米載體具有500納米以下的平均幾何直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有50納米以上但500納米以下的平均幾何直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體群體的平均幾何直徑為約60納米、75納米、 100納米、125納米、150納米、175納米、200納米、225納米、250納米、275納米、300納米、 325納米、350納米、375納米、400納米、425納米、450納米或475納米。在一些具體實(shí)施方案中，平均幾何直徑為100-400納米、100-300納米、100-250納米或100-200納米。在一些具體實(shí)施方案中，平均幾何直徑為60-400納米、60-350納米、60-300納米、60-250納米或60-200納米。在一些具體實(shí)施方案中，平均幾何直徑為75-250納米。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體的群體中30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有500 納米以下的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體的群體中10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%,70%,80%、90%或更多的納米載體具有50納米以上但500納米以下的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體的群體中10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多的納米載體具有約60納米、75納米、100納米、125納米、150納米、175納米、200納米、225納米、250納米、275納米、300納米、325納米、350納米、375納米、400納米、425納米、450納米或475納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體的群體中10%、20%、 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有 100-400 納米、100-300 納米、100-250納米或100-200納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體的群體中10%、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有 60-400 納米、60-350 納米、60-300納米、60-250納米或60-200納米的直徑。在一些前述的具體實(shí)施方案中，納米載體為納米顆粒。本文中提供的納米載體可用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答(例如，增強(qiáng)、抑制、引導(dǎo)或重引導(dǎo))， 并包含免疫特征表面。在一些具體實(shí)施方案中，這樣的免疫應(yīng)答是體液免疫應(yīng)答。在其他具體實(shí)施方案中，這樣的免疫應(yīng)答是細(xì)胞免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，這樣的免疫應(yīng)答是細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答的組合。納米載體可以包含免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑和靶向劑中的至少一種。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含B細(xì)胞抗原、T細(xì)胞抗原、免疫刺激劑和靶向劑中的至少一種。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含B細(xì)胞抗原、T細(xì)胞抗原、 免疫刺激劑和靶向劑中的至少兩種。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含B細(xì)胞抗原、T 細(xì)胞抗原、免疫刺激劑和靶向劑中的至少三種。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含B細(xì)胞抗原、T細(xì)胞抗原、免疫刺激劑和靶向劑的全部。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含B細(xì)胞抗原。B細(xì)胞抗原位于納米載體的免疫特征表面上，納米載體的第二個(gè)表面上，包埋于納米載體內(nèi)，或其組合。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原以激活B細(xì)胞受體的密度位于納米載體的表面上。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原與納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原與納米載體共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原與納米載體非共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中， 納米載體進(jìn)一步包含靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是弱免疫原性抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是小分子。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是令人上癮的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是毒素。在一些具體實(shí)施方案中，包含于納米載體中的毒素是完整分子或其部分。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原不是T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是碳水化合物。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、令人上癮的物質(zhì)或代謝性疾病酶或酶產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原位于納米載體的免疫特征表面上，納米載體的第二個(gè)表面上，包埋于納米載體內(nèi)，或其組合。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原與納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，T 細(xì)胞抗原與納米載體共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原與納米載體非共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、令人上癮的物質(zhì)或代謝性疾病酶或酶產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原是“通用”T細(xì)胞抗原(即，可以與不相關(guān)B細(xì)胞抗原使用的T細(xì)胞抗原，包括碳水化合物，以刺激T細(xì)胞輔助)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向部分。再次，在此提及的靶向部分(并且在本發(fā)明中將有更詳細(xì)的描述)是除了存在于免疫特征表面上的多個(gè)部分以外并且提供納米載體靶向APC的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體同時(shí)包含B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原是不同的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原是相同的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原位于納米載體的免疫特征表面上，納米載體的第二個(gè)表面上(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)或同時(shí)位于納米載體的表面上(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)和包埋于納米載體內(nèi)(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)，而 T細(xì)胞抗原位于納米載體的免疫特征表面上，納米載體的第二個(gè)表面上(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)，包埋于納米載體內(nèi)(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)，或同時(shí)位于納米載體的表面上 (例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)和包埋于納米載體內(nèi)(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)。在其中納米載體同時(shí)包含B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原的一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑位于納米載體的表面上和/或包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑與納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑與納米載體共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑與納米載體非共價(jià)結(jié)合。在其中納米載體同時(shí)包含B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原的一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向劑。再次，在此提及的靶向劑(并且在本發(fā)明中將有更詳細(xì)的描述) 是除了存在于免疫特征表面上的多個(gè)部分以外并且提供納米載體靶向APC的靶向劑。在一些具體實(shí)施方案中，靶向劑位于納米載體的免疫特征表面上，或納米載體的第二個(gè)表面上。 在一些具體實(shí)施方案中，靶向劑與納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，靶向劑與納米載體共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，靶向劑與納米載體非共價(jià)結(jié)合。在其中納米載體同時(shí)包含B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原的一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含免疫刺激劑和靶向劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑位于納米載體的表面上(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)和/或包埋于納米載體內(nèi)(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)，而靶向劑位于納米載體的表面上(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑位于納米載體的表面上。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑同時(shí)位于納米載體的表面上和包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，位于納米載體表面上的免疫刺激劑不同于包埋于納米載體內(nèi)的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，位于納米載體表面上的與包埋于納米載體內(nèi)的免疫刺激劑是相同的。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含一種以上的免疫刺激劑，在該情況中，免疫刺激劑是不同的。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含免疫特征表面，免疫刺激劑和抗原。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是B細(xì)胞抗原或T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑是免疫抑制劑(抑制免疫應(yīng)答)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫抑制劑是環(huán)孢霉素、類(lèi)固醇、氨甲蝶呤或任何干擾T細(xì)胞激活的試劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞(例如TGF-β、雷帕霉素或維甲酸)。在一些具體實(shí)施方案中，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的免疫抑制劑或試劑促進(jìn)對(duì)抗原耐受的獲得。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向劑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可用于抑制患者中的免疫系統(tǒng)和/或促進(jìn)耐受性。在其中納米載體包含免疫特征表面和免疫刺激劑的一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含B細(xì)胞抗原和/或T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是小分子。在一些具體實(shí)施方案中，B 細(xì)胞抗原是碳水化合物。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是令人上癮的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是毒素。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原是退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、令人上癮的物質(zhì)或代謝性疾病酶或酶產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原是通用T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向劑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可用于在患者中誘導(dǎo)或增強(qiáng)對(duì)弱免疫原性的抗原(例如，小分子或碳水化合物)的免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可用于在患者中誘導(dǎo)或增強(qiáng)對(duì)令人上癮的物質(zhì)的免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可用于在患者中誘導(dǎo)或增強(qiáng)對(duì)毒素的免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可用于治療已經(jīng)上癮或易于上癮的患者。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可用于治療已經(jīng)暴露于或即將暴露于毒素的患者。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可用于治療和/或預(yù)防傳染病、 癌癥或自體免疫疾病(包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)。在其它具體實(shí)施方案中，納米載體可用于與移植相關(guān)的免疫抑制，以改善移植排斥。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中， 靶向部分位于納米載體的免疫特征表面上，或納米載體的第二個(gè)表面上。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體非共價(jià)結(jié)合。在一些方面中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含(a)聚合物與免疫特征部分(即，免疫特征表面上多個(gè)部分中的一個(gè))的偶聯(lián)物，(b)聚合物與抗原的偶聯(lián)物，(c)聚合物與免疫刺激劑的偶聯(lián)物，和/或(d)聚合物與靶向部分的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含聚合物與抗原的偶聯(lián)物，和聚合物與免疫刺激劑的偶聯(lián)物。 在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含聚合物與抗原的偶聯(lián)物，和聚合物與靶向部分的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含聚合物與免疫刺激劑的偶聯(lián)物，和聚合物與靶向部分的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含聚合物與抗原的偶聯(lián)物、聚合物與免疫刺激劑的偶聯(lián)物，和聚合物與靶向部分的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是共價(jià)偶聯(lián)物或非共價(jià)偶聯(lián)物或其任意組合。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是B細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含聚合物與T細(xì)胞抗原的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，這樣的偶聯(lián)物是共價(jià)的或非共價(jià)的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含聚合物與B細(xì)胞抗原的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，這樣的偶聯(lián)物是共價(jià)的或非共價(jià)的偶聯(lián)物。在一些方面中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含一個(gè)或多個(gè)下式X-L1-Y-L2-Z的分子，其中X是生物可降解聚合物，Y是水溶性的、無(wú)粘附性聚合物，Z是靶向部分、免疫調(diào)節(jié)劑、免疫刺激劑或藥劑，Ll和L2是鍵或連接分子，其中Y或Z可以不存在，但Y和Z不能同時(shí)不存在。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含抗原、免疫刺激劑或二者。在一些具體實(shí)施方案中，藥劑是抗原。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、令人上癮的物質(zhì)或代謝性疾病酶或酶產(chǎn)物。Z可以是本文中所述的任何抗原。在一些具體實(shí)施方案中，Z是靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，Z是與細(xì)胞表面上表達(dá)的受體結(jié)合的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，Z是與可溶性受體結(jié)合的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，可溶性受體是補(bǔ)體蛋白或預(yù)先存在的抗體。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是用于將納米載體輸送至抗原呈遞細(xì)胞、T細(xì)胞或B細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)、濾泡樹(shù)突狀細(xì)胞(FDC)或巨噬細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，巨噬細(xì)胞是被膜下竇巨噬細(xì)胞(SCS-Mph)。在一些具體實(shí)施方案中，Y是PEG或ΡΕ0。在一些具體實(shí)施方案中，Y是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實(shí)施方案中，X是PLGA、PLA或 PGA。在一些具體實(shí)施方案中，Z不存在。本發(fā)明的納米載體包含如下的表面該表面包含免疫特征表面。在一些方面中，組合物包含納米載體，所述納米載體包含一個(gè)或多個(gè)下式X-L1-Y-L2-I的分子，其中X、Li、Y 和L2如之前所述的，并且I是免疫特征部分(即，免疫特征表面上的多個(gè)部分中的一個(gè))。 如在此所述的，免疫特征表面(通過(guò)免疫特征表面上的多個(gè)部分)提供了與APC的低親和性、高親合力的結(jié)合。在一些方面中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含免疫特征表面。 在一些方面中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步包含抗原和/或靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，抗原、靶向部分和免疫刺激劑中的至少一個(gè)與水溶性的、無(wú)粘附性聚合物偶聯(lián)。在一些具體實(shí)施方案中，抗原、靶向部分和免疫刺激劑中的至少一個(gè)與生物可降解聚合物偶聯(lián)。在一些具體實(shí)施方案中，抗原、靶向部分和免疫刺激劑中的至少一個(gè)與生物相容性聚合物偶聯(lián)。在一些具體實(shí)施方案中，生物相容性聚合物為水溶性的、無(wú)粘附性聚合物偶聯(lián)至生物可降解聚合物的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是B細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原不是T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是T細(xì)胞抗原。在一些方面中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含免疫特征表面、 小分子、免疫刺激劑和T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，小分子位于納米載體的免疫特征表面上，納米載體的第二個(gè)表面上或同時(shí)在納米載體的表面上和包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，小分子是令人上癮的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，令人上癮的物質(zhì)是尼古丁。在一些具體實(shí)施方案中，小分子是毒素。在一些具體實(shí)施方案中，毒素來(lái)自于化學(xué)武器、生物戰(zhàn)的試劑或有害的環(huán)境試劑。在一些具體實(shí)施方案中，小分子偶聯(lián)至聚合物。 在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑位于納米載體的表面上，或同時(shí)在納米載體的表面上和包埋于納米載體內(nèi)。 在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物或生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，水溶性的無(wú)粘附性聚合物是PEG或ΡΕ0。在一些具體實(shí)施方案中，水溶性的無(wú)粘附性聚合物是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實(shí)施方案中，生物可降解聚合物是PLGA、PLA或PGA。在一些具體實(shí)施方案中，生物相容性聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含尼古丁、免疫刺激劑、T細(xì)胞抗原和靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑是TLR 7/8 激動(dòng)劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑是R848(也稱為CL097)或咪喹莫特。在一些具體實(shí)施方案中，尼古丁位于納米載體的表面上，或同時(shí)位于納米載體的表面上和包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，尼古丁偶聯(lián)至聚合物，優(yōu)選共價(jià)偶聯(lián)。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，尼古丁偶聯(lián)至生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑位于納米載體的表面上，包埋于納米載體內(nèi)，或同時(shí)位于納米載體的表面上和包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑偶聯(lián)至生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、 生物可降解聚合物或生物相容性聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分偶聯(lián)至生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，水溶性的無(wú)粘附性聚合物是PEG 或ΡΕ0。在一些具體實(shí)施方案中，水溶性的無(wú)粘附性聚合物是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實(shí)施方案中，生物可降解聚合物是PLGA、PLA或PGA。在一些具體實(shí)施方案中，生物相容性聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)物。在一些方面中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含弱免疫原性抗原、免疫刺激劑和T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原位于納米載體的表面上，或同時(shí)位于納米載體的表面上和包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原是小分子或碳水化合物。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原是令人上癮的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原是毒素。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原共價(jià)偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑位于納米載體的表面上，或同時(shí)位于納米載體的表面上和包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑共價(jià)偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體還包含靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分共價(jià)偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物生物可降解聚合物。
在一些方面中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體靶向特異性細(xì)胞、組織或器官并調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，所述納米載體包含在其表面上密度為激活B細(xì)胞的B細(xì)胞抗原和免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，組合物是藥物組合物并進(jìn)一步包含藥物學(xué)上可接受的載體。在一些具體實(shí)施方案中，藥物組合物是疫苗組合物。在一些方面中，提供了包含抗原呈遞細(xì)胞-靶向部分和納米載體的組合物，如藥物組合物。在一些具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞-靶向部分和納米載體是偶聯(lián)的。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是共價(jià)偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是非共價(jià)偶聯(lián)物。在一些方面中，提供了包含免疫刺激劑和納米載體的組合物，如藥物組合物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑和納米載體是偶聯(lián)的。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是共價(jià)偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是非共價(jià)偶聯(lián)物。在一些方面中，提供了包含具有式X-L1-Y-L2-Z的分子的組合物，其中X是生物可降解聚合物，Y是水溶性的無(wú)粘附性聚合物，Z是靶向部分、免疫刺激劑或藥劑，并且Ll和 L2是鍵或連接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同時(shí)不存在。在一些方面中，提供了包含具有式X-L1-Y-L2-I的分子的組合物，其中I是免疫特征部分，X是生物可降解聚合物，Y是水溶性的無(wú)粘附性聚合物，并且Ll和L2是鍵或連接分子，其中Y或I可以不存在，但Y或I不能同時(shí)不存在。在一些方面中，提供了包含具有式T-L1-X-L2-Y-L3-Z的分子的組合物，其中T是 T細(xì)胞抗原，X是生物可降解聚合物，Y是水溶性的無(wú)粘附性聚合物，Z是靶向部分、免疫刺激劑或藥劑，其中L1、L2和L3是鍵或連接分子，并且其中T、Y和Z中的任意一個(gè)或兩個(gè)可以不存在，但Τ、Υ和Z不能三者同時(shí)不存在。在一些具體實(shí)施方案中，藥劑是抗原。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是B細(xì)胞抗原或T細(xì)胞抗原。在一些方面中，提供了包含具有式T-L1-X-L2-Y-L3-I的分子的組合物，其中I是免疫特征部分，T是T細(xì)胞抗原，X是生物可降解聚合物，Y是水溶性的無(wú)粘附性聚合物，Z 是靶向部分、免疫刺激劑或藥劑，其中L1、L2和L3是鍵或連接分子，并且其中T、Y和Z中的任意一個(gè)或兩個(gè)可以不存在，但Τ、Υ和Z不能三者同時(shí)不存在。在一些具體實(shí)施方案中，藥劑是抗原。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是B細(xì)胞抗原或T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，Z是退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、半抗原、令人上癮的物質(zhì)或代謝性疾病酶或酶產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，Z是任一種本文中所描述的B細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，Z是任一種本文中所提供的T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，Z是結(jié)合細(xì)胞表面上表達(dá)的受體的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，Z是結(jié)合可溶性受體的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，可溶性受體是補(bǔ)體或預(yù)先存在的抗體。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分用于靶向抗原呈遞細(xì)胞、T細(xì)胞或 B細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，Y是PEG或ΡΕ0。在一些具體實(shí)施方案中，Y是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實(shí)施方案中，X是PLGA、PGA或PLA。在一些具體實(shí)施方案中，Z不存在。在一些具體實(shí)施方案中，Y不存在。
在一些方面中，提供了包含免疫刺激劑和聚合物的偶聯(lián)物的藥物組合物。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是共價(jià)偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是非共價(jià)偶聯(lián)物。 在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，生物相容性聚合物是生物可降解聚合物或水溶性的無(wú)粘附性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，生物相容性聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是合成的。在一些具體實(shí)施方案中，藥物組合物包含一個(gè)或多個(gè)納米載體，其中偶聯(lián)物是一個(gè)或多個(gè)納米載體的成分。在一些具體實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步包含抗原。在一些具體實(shí)施方案中，藥物組合物不包含抗原。在一些具體實(shí)施方案中， 組合物還包含靶向劑。在一些方面中，提供了包含免疫刺激劑和聚合物的偶聯(lián)物的疫苗組合物。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是共價(jià)偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物是非共價(jià)偶聯(lián)物。 在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物、生物可降解聚合物或生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，水溶性的無(wú)粘附性聚合物是聚乙二醇。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是生物相容性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，生物相容性聚合物是生物可降解聚合物或水溶性的無(wú)粘附性聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，生物相容性聚合物是水溶性的無(wú)粘附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是合成的。在一些具體實(shí)施方案中，藥物組合物包含一個(gè)或多個(gè)納米載體，其中偶聯(lián)物是一個(gè)或多個(gè)納米載體的成分。在一些具體實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步包含抗原。在一些具體實(shí)施方案中，藥物組合物不包含抗原。在一些具體實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步包含靶向劑。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是蛋白或肽。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是非蛋白抗原(即，不是蛋白或肽)。在一些具體實(shí)施方案中，蛋白或肽來(lái)自傳染劑。在一些具體實(shí)施方案中，傳染劑是細(xì)菌、真菌、病毒、原生動(dòng)物或寄生蟲(chóng)。在一些具體實(shí)施方案中，病毒是痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人免疫缺陷病毒、人乳頭瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細(xì)胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、 乳頭瘤病毒、細(xì)小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風(fēng)疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是小分子。在一些具體實(shí)施方案中，小分子是被濫用的物質(zhì)、令人上癮的物質(zhì)或毒素。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是令人上癮的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中， 令人上癮的物質(zhì)是尼古丁、麻醉藥、迷幻劑、刺激物、咳嗽抑制劑、鎮(zhèn)定劑或止痛藥。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是鴉片或苯化重氮。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是毒素。在一些具體實(shí)施方案中，毒素來(lái)自化學(xué)武器。在一些具體實(shí)施方案中，來(lái)自化學(xué)武器的毒素是肉毒桿菌毒素或磷雜環(huán)戊二烯。來(lái)自化學(xué)武器的毒素還包括，但不限于，0-烷基(<C10，包括環(huán)烷基)烷基(Mejt、n-ft·或 i-Pr)_膦?；?例如，沙林0-異丙基甲基磷?；?，梭曼0-頻哪基甲基磷?；?，0-烷基(< C10，包括環(huán)烷基)N，N- 二烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)磷酰胺氰化物(例如，塔崩0-乙基N，N-二甲基磷酰胺氰化物)，0-烷基氓或<(10，包括環(huán)烷基) S-2- 二烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)-氨基乙基烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)硫代磷酸鹽及相應(yīng)的烷基化或質(zhì)子化鹽(例如，VX 0-乙基S-2- 二異丙基氨基乙基甲基硫代磷酸鹽)， 硫芥子氣2-氯乙基氯甲基硫醚，芥子氣雙(2-氯乙基)硫醚、雙(2-氯乙基硫)甲烷， 倍半芥子氣1，2-雙(2-氯乙基硫)乙烷、1，3-雙O-氯乙基硫)_正丙烷、1，4-雙O-氯乙基硫)_正丁烷、1，5-雙(2-氯乙基硫)-正戊烷、雙(2-氯乙基硫甲基)乙醚，0-芥子 雙(2-氯乙基硫乙基)乙醚，路易斯毒氣(Lewisite)路易斯毒氣1 :2_氯乙烯二氯胂，路易斯毒氣2 雙(2-氯乙烯)氯胂，路易斯毒氣3 三(2-氯乙烯)胂，氮芥HN1 雙(2-氯乙基)乙胺，HN2:雙(2-氯乙基)甲胺，HN3:三(2-氯乙基)胺，蛤蛘毒素，蓖麻毒素，阿米噸(Amiton) :0，0_ 二乙基S42-(二乙基氨基)乙基)硫代磷酸鹽及相應(yīng)的烷基化或質(zhì)子化鹽，PFIB 1，1，3，3，3-五氟-2-(三氟甲基)-1-丙烯，二苯羥乙酸_3_喹嚀環(huán)酯(BZ)，光氣碳酰氯，氯化氰，氰化氫和三氯硝基甲三氯硝基甲烷。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體中包含的毒素是上述任何一項(xiàng)的完整分子或其一部分。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是生物危害性或有害環(huán)境試劑。在一些具體實(shí)施方案中，有害環(huán)境試劑是砷、鉛、汞、氯乙烯、多氯聯(lián)苯、苯、多環(huán)芳香烴、鎘、苯并(a) 芘、苯并(b)熒蒽、氯仿、二氯-二苯基-三氯乙烯(DDT)，P，P，-、阿羅克洛12M(arOClor 1254)，阿羅克洛1260(arOClor 1260)、二苯并(a, h)蒽、三氯乙烯、狄氏劑(dieldrin)、六價(jià)鉻或P，P，- 二氯二苯基二氯乙烯(DDE，P，P，)。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是碳水化合物。在一些具體實(shí)施方案中，碳水化合物來(lái)自傳染劑。在一些具體實(shí)施方案中，傳染性試劑是細(xì)菌、真菌、病毒、原生動(dòng)物或寄生蟲(chóng)。在一些具體實(shí)施方案中，細(xì)菌是假單胞菌屬(I^seudomonas)、 月市炎球菌屬(Pneumococcus)、大腸桿菌(E. coli)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、 鏈球菌屬(Str印tococcus)、密螺旋體(Tr印onema)、包柔氏螺旋體(Borrelia)、衣原體(Chlamydia)、嗜血桿菌屬(Haemophilus)、梭菌屬(Clostridium)、沙門(mén)氏菌屬 (Salmonella)、軍團(tuán)桿菌屬(Legionella)、弧菌(Vibrio)或腸球菌屬(Enterococci)細(xì)菌或分支桿菌屬(Mycobacterium)。在一些具體實(shí)施方案中，病毒是痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒、人類(lèi)乳頭瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細(xì)胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細(xì)小病毒、小核糖核酸病毒、 脊髓灰質(zhì)炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風(fēng)疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是自體抗原。在一些具體實(shí)施方案中，自體抗原是蛋白或肽、脂蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物或核酸。在一些具體實(shí)施方案中，自體抗原是酶、結(jié)構(gòu)蛋白、分泌的蛋白、細(xì)胞表面受體或細(xì)胞因子。在一些具體實(shí)施方案中，細(xì)胞因子是 TNF、IL-1或IL-6。在一些具體實(shí)施方案中，自體抗原是膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)、與阿爾茨海默氏病相關(guān)的Αβ蛋白、加工Αβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶、與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的LDL或HIV-I的共同受體。在一些具體實(shí)施方案中，加工Αβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶是分泌酶。在一些具體實(shí)施方案中，與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的LDL是氧化的或最小化修飾的。在一些具體實(shí)施方案中，HIV-I的共同受體是CCR5。在一些具體實(shí)施方案中，自體抗原是自體免疫疾病抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原或代謝性疾病酶或其酶產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，抗原是癌癥抗原。在一些具體實(shí)施方案中，癌癥抗原是 Melan-A/MART-Ι，二肽酰肽酶IV(DPPIV)，腺苷脫氨酶-結(jié)合蛋白(ADAbp)，親環(huán)蛋白b，結(jié)直腸相關(guān)抗原(CRC)—C017-1A/GA733，癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-I和CAP-2， etv6,aml 1，前列腺特異性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-I、PSA_2和PSA-3，前列腺特異性膜抗原( 3嫩)，1~-細(xì)胞受體/0)3-4鏈，腫瘤抗原的MAGE家族(例如，MAGE-Al、MAGE_A2、 MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-AlO, MAGE-AlU MAGE-A12、MAGE-Xp2 (MAGE-B2)、MAGE-Xp3 (MAGE-B3)、MAGE-Xp4 (MAGE-B4)、MAGE-CU MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)，腫瘤抗原的 GAGE 家族(例如，GAGE-I、GAGE-2、 GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE4)，BAGE，RAGE,LAGE-I，NAG，GnT-V， MUM-I，CDK4，酪氨酸酶，p53，MUC 家族，HER2/neu，p21ras，RCASl，α -胎蛋白，E-鈣粘附蛋白，α-鈣緊張素，β-鈣緊張素和 Y-鈣緊張素，pl20ctn, gpl00Pmel117, PRAME, NY-ESO-l， 大腦糖原磷酸酶，SSX-I，SSX-2 (H0M-MEL-40)，SSX-I, SSX-4，SSX-5，SCP-I, CT-7，cdc27,腺瘤樣的結(jié)腸息肉病蛋白(APC)，胞襯蛋白，P1A，連接蛋白37，Ig-獨(dú)特型，pl5，gp75，GM2和 GD2神經(jīng)節(jié)苷脂，病毒產(chǎn)品例如人乳頭瘤病毒蛋白，腫瘤抗原的Smad家族，lmp-1, EBV編碼的核抗原 ΦΒΝΑ) -1，或 c-erbB-2。在一些具體實(shí)施方案中，傳染病抗原是病毒抗原。在一些具體實(shí)施方案中，病毒抗原是來(lái)自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、 呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人免疫缺陷病毒、人乳頭瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細(xì)胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細(xì)小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、 呼吸道腸道病毒、風(fēng)疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是弱免疫原性抗原。在一些具體實(shí)施方案中， 弱免疫原性抗原是非蛋白抗原。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原是碳水化合物或小分子。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原是被濫用的物質(zhì)、令人上癮的物質(zhì)或毒素。在一些具體實(shí)施方案中，毒素來(lái)自化學(xué)武器。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原是有害環(huán)境試劑。在一些具體實(shí)施方案中，弱免疫原性抗原是自體抗原。通常，T細(xì)胞抗原是蛋白或肽。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原是退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、接觸致敏劑、半抗原或代謝性疾病酶或酶產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原來(lái)自傳染劑。在一些具體實(shí)施方案中，傳染劑是細(xì)菌、真菌、病毒、原生動(dòng)物或寄生蟲(chóng)。在一些具體實(shí)施方案中，傳染病抗原是病毒抗原。 在一些具體實(shí)施方案中，病毒抗原是來(lái)自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人免疫缺陷病毒、人乳頭瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細(xì)胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細(xì)小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風(fēng)疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原是通用T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中， 通用T細(xì)胞抗原是源自破傷風(fēng)類(lèi)毒素、EB病毒或流感病毒的一種或多種肽。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑是白細(xì)胞介素、干擾素、細(xì)胞因子等。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑是鐘樣(toll-like)受體(TLR)激動(dòng)劑、細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑、CD40激動(dòng)劑、Fc受體激動(dòng)劑、含有CpG的免疫刺激核酸、補(bǔ)體受體激動(dòng)劑或佐劑。在一些具體實(shí)施方案中，TLR 激動(dòng)劑是 TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、 TLR-9或TLR-10激動(dòng)劑。在一些具體實(shí)施方案中，F(xiàn)c受體激動(dòng)劑是Fc-γ受體激動(dòng)劑。在一些具體實(shí)施方案中，補(bǔ)體受體激動(dòng)劑與CD21或CD35結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，補(bǔ)體受體激動(dòng)劑誘導(dǎo)納米載體的內(nèi)源性補(bǔ)體調(diào)理。在一些具體實(shí)施方案中，細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑是細(xì)胞因子。在一些具體實(shí)施方案中，細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑是小分子、抗體、融合蛋白或適配子。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑是佐劑。在一些具體實(shí)施方案中，佐劑誘導(dǎo)細(xì)胞因子的生物合成。在一些具體實(shí)施方案中，佐劑是明礬、MF59、R848、霍亂毒素、鯊烯、磷酸鹽佐劑或四氯十氧化物。在一些具體實(shí)施方案中，佐劑是單磷酰脂質(zhì)A(MPL，SmithKline Beecham)；皂角苷，包括QS21 (SmithKline Beecham)；免疫刺激寡核苷酸(例如，Kreig等， Nature 374 :546-9,1995，首先描述的CpG免疫刺激寡核苷酸)；不完全弗氏佐劑；完全弗氏佐劑；montanide ；維生素E和各種從生物可降解油(如，鯊烯和/或生育酚、Quil A、Ribi Detox、CRL-1005或L-121)制備的油包水型乳劑。在特定的具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是天然或合成的鐘樣受體(TLR)的激動(dòng)劑。在特定的具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是鐘樣受體(TLR)-7的配體，如CpG，其誘導(dǎo)I型干擾素的產(chǎn)生；DC表面分子CD40的激動(dòng)劑；促進(jìn)DC成熟的試劑；TLR-4激動(dòng)劑； 細(xì)胞因子；從壞死細(xì)胞中釋放的促炎性刺激劑(例如，尿酸鹽晶體)；激活的補(bǔ)體級(jí)聯(lián)成分 (例如CD21、CD35等)；等等。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分結(jié)合細(xì)胞表面上表達(dá)的受體。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分結(jié)合可溶性受體。在一些具體實(shí)施方案中，可溶性受體是補(bǔ)體蛋白或預(yù)先存在的抗體。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分用于將納米載體傳送至抗原呈遞細(xì)胞、T細(xì)胞或B細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中， 巨噬細(xì)胞是被膜下竇巨噬細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是樹(shù)突狀細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是濾泡樹(shù)突細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是結(jié)合⑶lib、⑶169、甘露糖受體、DEC-205、 ⑶11c、⑶21/⑶35、CX3CR1或Fc受體的分子。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是結(jié)合 ⑶169、CX3CR1或Fc受體的分子。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合⑶169的分子是抗-⑶169 抗體。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合CX3CR1的分子是CX3CLl(fractalkine)。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分包含免疫球蛋白的Fc部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分包含IgG的Fc部分。在一些具體實(shí)施方案中，免疫球蛋白的Fc部分是人免疫球蛋白的Fc部分。 在一些具體實(shí)施方案中，IgG的Fc部分是人IgG的Fc部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是可溶性受體，CRFc0在一些具體實(shí)施方案中，CRFc可用于靶向被膜下竇中的巨噬細(xì)胞，但不靶向髓質(zhì)的巨噬細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是一個(gè)或多個(gè)胺部分。在一些方面中，本文中提供的組合物是免疫原性的。在一些方面中，提供了一種方法，包括向患者施用有效量的本文中提供的任意組合物以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，組合物為有效誘導(dǎo)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答的量。在一些具體實(shí)施方案中，組合物為有效抑制免疫應(yīng)答的量。在一些具體實(shí)施方案中，組合物為有效引導(dǎo)或重引導(dǎo)免疫應(yīng)答的量。在一些具體實(shí)施方案中，該方法用于本文中所鑒定癥狀的預(yù)防和/或治療。在一些具體實(shí)施方案中，其中將方法用于誘導(dǎo)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答，患者患有或者易于患上癌癥、傳染病、非自體免疫代謝性或退行性疾病、特應(yīng)性疾病或上癮。在一些具體實(shí)施方案中，患者已經(jīng)暴露于或可能暴露于毒素。在一些具體實(shí)施方案中，患者已經(jīng)暴露于或可能暴露于來(lái)自化學(xué)武器的毒素。在一些具體實(shí)施方案中，患者已經(jīng)暴露于或可能暴露于來(lái)自有害環(huán)境物質(zhì)的毒素。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含B細(xì)胞抗原、免疫刺激劑和T細(xì)胞抗原，如通用T細(xì)胞抗原。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體進(jìn)一步包含靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，其中將方法用于治療或預(yù)防上癮(或用于治療暴露于或可能暴露于毒素的患者)，納米載體包含令人上癮的物質(zhì)或毒素、佐劑和T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，該方法在刺激物到達(dá)其效應(yīng)物部位(例如，大腦)之前產(chǎn)生結(jié)合并中和刺激物的高效價(jià)抗體。在一些具體實(shí)施方案中，令人上癮的物質(zhì)或毒素以高密度位于納米載體表面上。 在一些具體實(shí)施方案中，傳染病是慢性病毒感染。在一些具體實(shí)施方案中，慢性病毒感染是HIV、HPV、HBV或HCV感染。在一些具體實(shí)施方案中，傳染病是細(xì)菌感染或由細(xì)菌感染引起。在一些具體實(shí)施方案中，患者患有或易于患上假單胞菌感染、肺炎球菌感染、肺結(jié)核、瘧疾、利什曼病、幽門(mén)螺旋桿菌(H. pylori)感染、葡萄球菌感染或沙門(mén)氏菌感染。在一些具體實(shí)施方案中，傳染病是真菌感染或由真菌感染引起。在一些具體實(shí)施方案中，傳染病是寄生蟲(chóng)感染或由寄生蟲(chóng)感染引起。在一些具體實(shí)施方案中，傳染病是原生動(dòng)物感染或由原生動(dòng)物感染引起。在一些具體實(shí)施方案中，患者患有或易于患上流感。在一些具體實(shí)施方案中，自體免疫疾病是狼瘡、多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、炎癥性腸病、甲狀腺炎或乳糜瀉。在一些具體實(shí)施方案中，患者已經(jīng)接受或即將接受移植，并且該方法可用于防止或改善移植排斥。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含抗原和免疫抑制劑或誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體還包含靶向部分。通常，其中方法是用于抑制免疫應(yīng)答的方法，在佐劑不存在的情況下提供抗原。在一些方面中，提供了用于將免疫調(diào)節(jié)劑傳送至免疫系統(tǒng)細(xì)胞的疫苗納米載體。 在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種能夠誘導(dǎo)B細(xì)胞和/或T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)劑。在特定的具體實(shí)施方案中，存在于納米載體表面上的免疫調(diào)節(jié)劑刺激B細(xì)胞，而包埋于納米載體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)劑得到加工并遞呈至T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一個(gè)用于將疫苗納米載體選擇性地傳送至特異性抗原呈遞細(xì)胞(APC)的靶向部分。
在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包含分離的和/或重組的蛋白或肽、碳水化合物、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、滅活的生物體和病毒、死的生物體和病毒、遺傳改變的生物體或病毒，和細(xì)胞提取物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包含核酸、碳水化合物、脂質(zhì)和/或小分子。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是引發(fā)免疫應(yīng)答的試劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是抗原。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑用于疫苗。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是源自病原體的任何蛋白和/或其它抗原。 病原體可以是病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、寄生蟲(chóng)等。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以為完整的殺滅生物體、肽、蛋白、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、碳水化合物或其組合的形式。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體的所有免疫調(diào)節(jié)劑彼此相同。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體的所有免疫調(diào)節(jié)劑是不同的。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體精確地包含一種截然不同類(lèi)型(即，物種)的免疫調(diào)節(jié)劑。例如，免疫調(diào)節(jié)劑是抗原時(shí)， 疫苗納米載體中的所有抗原都相同。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體精確地包含兩種截然不同類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上的截然不同類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含單一類(lèi)型的刺激B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含單一類(lèi)型的刺激T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)試劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型免疫調(diào)節(jié)劑， 其中第一種免疫調(diào)節(jié)劑刺激B細(xì)胞，和第二種免疫調(diào)節(jié)劑刺激T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，上述任一種試劑可以同時(shí)刺激B細(xì)胞和T細(xì)胞，但不必需是這樣。在特定的具體實(shí)施方案中，上述免疫調(diào)節(jié)劑分別只刺激B細(xì)胞或T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其中一種或多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激B細(xì)胞，和一種或多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包括脂膜(例如，脂雙層、脂單層等)。至少一種免疫調(diào)節(jié)劑可以與脂膜結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種免疫調(diào)節(jié)劑嵌入疫苗納米載體的脂膜內(nèi)，嵌入脂雙層的腔內(nèi)，與脂膜的內(nèi)表面結(jié)合，和/或包埋于脂膜內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包括聚合物(例如，聚合核心)。免疫調(diào)節(jié)劑可以與聚合物結(jié)合，和在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑與聚合物結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)試劑嵌入疫苗納米載體的聚合物內(nèi)，與聚合物的內(nèi)表面結(jié)合，和/或包埋于聚合物內(nèi)，和，在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑嵌入疫苗納米載體的聚合物內(nèi)，與聚合物的內(nèi)表面結(jié)合，和/或包埋于聚合物內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含低于90重量％、低于75重量％、低于50重量％、低于40重量％、低于30重量％、低于20重量％、低于15重量％、低于10重量％、低于5重量％、低于1重量％、或者低于0.5重量％的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，除了與免疫特征表面結(jié)合的多個(gè)部分(即，提供納米載體靶向APC的部分)以外，疫苗納米載體與至少一個(gè)靶向部分結(jié)合。附加的靶向部分不同于存在于免疫特征表面上的多個(gè)部分，因?yàn)楦郊影邢虿糠滞ǔＬ峁┡c受體的高親和性結(jié)合 (并且，因此，在本文中可替換地稱為“高親和性靶向部分”)。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分可以是核酸、多肽、肽、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、碳水化合物、脂質(zhì)、小分子等。例如， 靶向部分可以是結(jié)合細(xì)胞型特異性標(biāo)記物的核酸靶向部分(例如，適配子，Spiegelmer 等)。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分可以是針對(duì)細(xì)胞表面蛋白的天然產(chǎn)生的或合成的配體，例如，DEC-205、⑶169、⑶lib等。靶向部分的實(shí)例還包括本文中其它地方提供的那些， 例如上文描述的那些。根據(jù)本發(fā)明，靶向部分識(shí)別一個(gè)或多個(gè)與特定的器官、組織、細(xì)胞和/或亞細(xì)胞位點(diǎn)相關(guān)的“受體”、“目標(biāo)”或“標(biāo)記物”。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以是與一種或一些細(xì)胞類(lèi)型、與一種或一些疾病，和/或與一個(gè)或一些發(fā)育階段唯一相關(guān)或主要相關(guān)的標(biāo)記物。 所靶向的細(xì)胞的實(shí)例包括抗原呈遞細(xì)胞(APC)，如樹(shù)突細(xì)胞、濾泡樹(shù)突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞的一個(gè)實(shí)例是被膜下竇巨噬細(xì)胞。所靶向的其它的細(xì)胞包括T細(xì)胞和B細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以包含蛋白、碳水化合物、脂質(zhì)和/或核酸。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是腫瘤標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是APC標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是T細(xì)胞標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分靶向次級(jí)淋巴組織或器官。 次級(jí)淋巴組織或器官包括淋巴結(jié)、脾、派亞氏淋巴叢、闌尾或扁桃體。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是樹(shù)突細(xì)胞標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，DC標(biāo)記物包括 DC-205、CDllc、II 類(lèi) MHC、CD80、CD86、DC-SIGN、CDllb、BDCA-1、BDCA-2、BDCA-4、 Siglec-H、CX3CR1和/或Langerin。本發(fā)明中其他地方提供了這樣的標(biāo)記物的實(shí)例。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是被膜下竇巨噬細(xì)胞標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，SCS-Mph標(biāo)記物包括CD169(即，唾液酸粘附素)、CDllb (即，CDllb/CD18、Mac_l、CR3或 α Μβ 2整合素)、Fc受體和/或甘露糖受體(即，多價(jià)血凝素)，這些皆為主要在SCS-Mph 上表達(dá)的蛋白。本發(fā)明中其他地方提供了這樣的標(biāo)記物的實(shí)例。在特定的具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是B細(xì)胞標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞標(biāo)記物可以包括補(bǔ)體受體、CR1( BP,⑶3 或CR2( S卩，⑶21)，這些是在B細(xì)胞上表達(dá)的蛋白。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)B細(xì)胞標(biāo)記物(如⑶19、⑶20和/或⑶22)實(shí)現(xiàn)B 細(xì)胞靶向。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)B細(xì)胞標(biāo)記物(如⑶40、⑶52、⑶80、CXCR5、 VLA-4、II類(lèi)MHC、表面IgM或IgD、APRL和/或BAFF-R)實(shí)現(xiàn)B細(xì)胞靶向。本發(fā)明中其他地方提供了這樣的標(biāo)記物的實(shí)例。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是FDC標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，F(xiàn)DC標(biāo)記物包括補(bǔ)體受體、CRl (S卩，⑶35)或CR2(S卩，⑶21)，這些是在FDC上表達(dá)的蛋白。本發(fā)明中其他地方提供了這樣的標(biāo)記物的實(shí)例。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含單一類(lèi)型的靶向部分，其引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至單一的細(xì)胞類(lèi)型(例如，僅傳送至SCS-Mph)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含單一類(lèi)型的靶向部分，其引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至多種細(xì)胞類(lèi)型(例如，既輸送至SCS-Mph又輸送至FDC，或既輸送至SCS-Mph又輸送至DC)。在一些具體實(shí)施方案中， 疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的靶向部分，其中第一種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至一種細(xì)胞類(lèi)型，和第二種類(lèi)型靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至第二種細(xì)胞類(lèi)型。例如，在一些具體實(shí)施方案中，第一種類(lèi)型靶向部分引導(dǎo)傳送至SCS-Mph，和第二種類(lèi)型靶向部分引導(dǎo)傳送至DC。作為另一個(gè)實(shí)例，第一種類(lèi)型靶向部分引導(dǎo)傳送至SCS-Mph，和第二種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)傳送至FDC。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含低于50重量％、低于40重量％、低于30重量％、低于20重量％、低于15重量％、低于10重量％、低于5重量％、低于1重量％或低于0. 5重量％的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以轉(zhuǎn)運(yùn)一種或多種類(lèi)型的能夠幫助刺激免疫應(yīng)答的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑通過(guò)激活A(yù)PC以增強(qiáng)其免疫刺激能力而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑通過(guò)擴(kuò)大針對(duì)特異性抗原的淋巴細(xì)胞應(yīng)答而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑通過(guò)誘導(dǎo)介質(zhì)的局部釋放(例如，從多種細(xì)胞類(lèi)型中釋放的細(xì)胞因子)而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含同時(shí)刺激B細(xì)胞和T細(xì)胞的單一類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫刺激劑，其中第一種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激B細(xì)胞，和第二種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫刺激劑，其中一種或多種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激B細(xì)胞，和一種或多種類(lèi)型免疫刺激劑刺激T細(xì)胞。 在一些具體實(shí)施方案中，可以使用各種試驗(yàn)來(lái)確定在B細(xì)胞或B細(xì)胞組，或T細(xì)胞或T細(xì)胞組中的免疫應(yīng)答是否被調(diào)節(jié)。在一些具體實(shí)施方案中，該試驗(yàn)確定了細(xì)胞或細(xì)胞組是否變成“激活”的。在一些具體實(shí)施方案中，可以使用各種試驗(yàn)來(lái)確定在T細(xì)胞或T細(xì)胞組中的免疫應(yīng)答是否得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)測(cè)定抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子情況來(lái)確定T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)測(cè)定抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞的增殖情況來(lái)確定T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的刺激。在一些具體實(shí)施方案中，如果T細(xì)胞激活的細(xì)胞標(biāo)記物相對(duì)于未刺激的細(xì)胞在不同水平(例如，更高或更低的水平) 表達(dá)，則確定T細(xì)胞中有免疫應(yīng)答待刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以使用各種試驗(yàn)來(lái)確定在B細(xì)胞或B細(xì)胞組中的免疫應(yīng)答是否得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)測(cè)量抗體效價(jià)、抗體親和性、中和試驗(yàn)中的抗體表現(xiàn)、類(lèi)別轉(zhuǎn)換重組、抗原特異性抗體的親和成熟、記憶B細(xì)胞的發(fā)育、長(zhǎng)生血漿細(xì)胞(其能夠長(zhǎng)時(shí)間地產(chǎn)生大量的高親和性抗體)的發(fā)育、生發(fā)中心的反應(yīng)和/或中和試驗(yàn)中的抗體表現(xiàn)來(lái)確定B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的刺激。疫苗納米載體是包含免疫特征表面的實(shí)體。疫苗納米載體還可以包含至少一種能夠刺激B細(xì)胞和/或T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)劑?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明使用任何疫苗納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有100微米(μπι)以下的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有300納米或以下的最大尺寸(例如， 直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有250納米或以下的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有200納米或以下的最大尺寸 (例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有150納米或以下的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有100納米或以下最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有25納米至200納米的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有20納米至100納米的最大尺寸。根據(jù)本發(fā)明可以使用多種不同的納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為球體或橢圓體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為平的或板狀的。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為立方體或長(zhǎng)方體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為橢圓或橢圓形。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為圓柱體、圓錐體或棱錐。納米載體包含一個(gè)或多個(gè)表面，所述一個(gè)或多個(gè)表面的至少一個(gè)包含免疫特征表面。納米載體可以是實(shí)心的或空心的，且可以包含一層或多層。在一些具體實(shí)施方案中，每層相對(duì)于其它層具有獨(dú)特的組成和獨(dú)特的性質(zhì)。僅舉一例，納米載體可以具有核心/殼結(jié)構(gòu)，其中核心是一層(例如，聚合核心)，而殼是第二層(例如，脂雙層或單層)。納米載體可以包含多個(gè)不同的層。在一些具體實(shí)施方案中，一層可以是實(shí)質(zhì)上交聯(lián)的，第二層不是實(shí)質(zhì)上交聯(lián)的，等等。在一些具體實(shí)施方案中， 一層、一些層或所有不同的層可以包含一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/ 或其組合。在一些具體實(shí)施方案中，一層包含免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑，第二層不包含免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑，等等。在一些具體實(shí)施方案中，每個(gè)單層包含不同的免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或其組合。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以任選包含一種或多種脂質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是脂質(zhì)體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含脂雙層，和/或多個(gè)脂雙層。例如，脂雙層可以形成納米載體的外表面，在這種情況中，將包含脂雙層殼的納米載體稱為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體納米載體通常具有相對(duì)可塑的表面，并且納米載體可以采用各種形狀(例如，球形、橢圓形、圓柱形等)，這將取決于環(huán)境因素。因此，將認(rèn)識(shí)到，這些納米載體的最大直徑在不同的環(huán)境中將有所改變。通常，脂質(zhì)體納米載體包含磷脂。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含脂單層。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是膠束。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含由脂質(zhì)層(例如，脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的聚合基質(zhì)核心。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含由脂質(zhì)層(例如，脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的非聚合物核心(例如，金屬顆粒、量子點(diǎn)、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含一個(gè)或多個(gè)聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合基質(zhì)可由包被層(例如，脂質(zhì)體、脂單層、膠束等)環(huán)繞。在一些具體實(shí)施方案中， 免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與聚合基質(zhì)結(jié)合。在這樣的具體實(shí)施方案中， 免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑有效包埋于納米載體內(nèi)。然而，將認(rèn)識(shí)到，免疫特征表面上的多個(gè)部分(即，提供靶向APC)是位于納米載體的表面上，該表面是外表面，并且暴露于納米載體周?chē)沫h(huán)境中。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與納米載體共價(jià)結(jié)合。在此提及的靶向部分(并且在本文中將更詳細(xì)地描述)是，例如，B細(xì)胞靶向部分或T-細(xì)胞靶向部分。將認(rèn)識(shí)到這些部分是除了免疫特征表面上存在的多個(gè)部分以外的并且提供納米載體靶向APC的部分。在一些具體實(shí)施方案中，共價(jià)結(jié)合由連接物介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑與納米載體非共價(jià)結(jié)合。例如，在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑包埋于聚合基質(zhì)、脂膜等內(nèi)，或由聚合基質(zhì)、脂膜等環(huán)繞，和/或分散在整個(gè)聚合基質(zhì)、脂膜等中。可替換地或另外地，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以通過(guò)疏水性相互作用、電荷相互作用、 范德華力等與聚合基質(zhì)、脂膜等結(jié)合。各種聚合物以及從其形成聚合基質(zhì)的方法在藥物傳送領(lǐng)域中是已知的。通常，聚合基質(zhì)包含一個(gè)或多個(gè)聚合物。根據(jù)本發(fā)明可以使用任何聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是包含兩個(gè)或更多個(gè)單體的均聚物或共聚物。就序列而言，共聚物可以是無(wú)規(guī)，嵌段或包含無(wú)規(guī)和嵌段序列的組合。根據(jù)本發(fā)明的聚合物可以是有機(jī)聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是樹(shù)狀聚合物或聚合物的共混物。聚合物的實(shí)例包括聚乙烯，聚碳酸酯(例如，聚(1，3-二噁烷-2酮))，聚酐 (例如，聚(癸二酸酐))，聚羥基酸(例如，聚(β-羥基烷酸酯))，聚丙基延胡索酸酯 (polypropylfumerate)，聚己內(nèi)酯，聚酰胺(例如，聚己內(nèi)酰胺)，聚縮醛，聚醚，聚酯(例如， 聚交酯，聚乙交酯)，聚(原酸酯)，聚氰基丙烯酸酯，聚乙烯醇，聚氨酯，聚磷腈，聚丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸酯，聚脲，聚苯乙烯和聚胺。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含包埋于反膠束內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)劑。僅舉一例， 脂質(zhì)體納米載體可以包含包埋于脂質(zhì)體膜內(nèi)的疏水性免疫調(diào)節(jié)劑，和在脂質(zhì)體納米載體內(nèi)部發(fā)現(xiàn)的與反膠束包埋的親水性免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體不包括聚合成分。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含金屬顆粒、量子點(diǎn)、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑與這樣的非聚合納米載體的表面結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，非聚合納米載體是非聚合成分的聚集體，如金屬原子(例如，金原子)的聚集體。 在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑與非聚合成分的聚集體的表面結(jié)合，包埋于非聚合成分的聚集體內(nèi)，由非聚合成分的聚集體環(huán)繞，和/或分散在整個(gè)非聚合成分的聚集體中。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以任選包含一個(gè)或多個(gè)兩性實(shí)體(S卩，同時(shí)具有親水性和疏水性的實(shí)體)。在一些具體實(shí)施方案中，兩性實(shí)體可以促進(jìn)具有增加的穩(wěn)定性、改善的一致性或提高的粘性的納米載體的產(chǎn)生。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含一個(gè)或多個(gè)與納米載體的外表面結(jié)合和/ 或包埋于納米載體內(nèi)的納米顆粒。可以使用本領(lǐng)域已知的任何方法制備納米載體。例如，顆粒納米載體制劑可以通過(guò)以下方法制成如，納米沉淀，使用流體通道的流動(dòng)聚焦，噴霧干燥，單一和雙乳劑溶劑揮發(fā)，溶劑提取，相分離，碾磨，微乳化程序，納米印跡法，微制造，納米制造，犧牲層，單凝聚和復(fù)凝聚，以及本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的其他方法?？商鎿Q地或另外地，可以使用用于單分散半導(dǎo)體、導(dǎo)電性的、磁性的、有機(jī)的和其它納米顆粒的水性和有機(jī)溶劑綜合體。在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征部分、免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑不與納米載體共價(jià)結(jié)合。例如，納米載體可以包含聚合基質(zhì)，和免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/ 或免疫刺激劑等與本發(fā)明的納米載體的聚合基質(zhì)的表面結(jié)合，包埋于本發(fā)明的納米載體的聚合基質(zhì)內(nèi)，和/或分散在整個(gè)本發(fā)明的納米載體的聚合基質(zhì)中。免疫調(diào)節(jié)劑可以通過(guò)納米載體的擴(kuò)散、降解和/或其組合而被釋放。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體的聚合物通過(guò)骨架侵蝕而降解。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體的聚合物通過(guò)表面侵蝕而降解。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑與顆粒共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，共價(jià)結(jié)合通過(guò)一個(gè)或多個(gè)連接物介導(dǎo)。根據(jù)本發(fā)明可以使用任何合適的連接物。在一些具體實(shí)施方案中，連接物是可分裂的連接物(例如，酯鍵、酰胺鍵、二硫鍵等)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體通過(guò)自體裝配來(lái)制備。舉例來(lái)說(shuō)，將脂質(zhì)與親脂性免疫調(diào)節(jié)劑混合，然后在固體表面上制成薄膜。將親水性免疫調(diào)節(jié)劑溶于水性溶液中，然后將其加入脂膜中，以在振蕩下將脂質(zhì)水解。將具有親脂性免疫調(diào)節(jié)劑的脂質(zhì)體整合入雙層壁中，并且脂質(zhì)體腔內(nèi)的親水性免疫調(diào)節(jié)劑自發(fā)組裝。在一些具體實(shí)施方案中，將預(yù)制的聚合納米顆粒在輕微振蕩下與小脂質(zhì)體混合以誘導(dǎo)脂質(zhì)體融合至聚合納米顆粒表面上。作為另一個(gè)實(shí)例，首先將待包埋的親水性免疫調(diào)節(jié)劑通過(guò)在揮發(fā)性的水混溶性有機(jī)溶劑中與天然來(lái)源的且無(wú)毒的兩性實(shí)體混合而整合至反膠束中。在一些具體實(shí)施方案中，在形成反膠束完成后，加入生物可降解聚合物。將所得到的生物可降解聚合物-反膠束混合物與不可溶于聚合物的親水性非溶劑結(jié)合，通過(guò)溶劑快速擴(kuò)散至非溶劑中以及有機(jī)溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，脂單層穩(wěn)定的聚合納米載體用于傳送一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，首先將親水性免疫調(diào)節(jié)分子與脂質(zhì)的極性端基團(tuán)進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)。在含有一種或多種水混溶溶劑的水性溶液中將偶聯(lián)物與一定比例的未偶聯(lián)脂質(zhì)分子混合。在水混溶性或部分水混溶性的有機(jī)溶劑中將生物可降解聚合材料與待包埋的疏水性免疫調(diào)節(jié)劑混合。將所得到的聚合物溶液加入偶聯(lián)和未偶聯(lián)脂質(zhì)的水性溶液中，通過(guò)有機(jī)溶劑快速擴(kuò)散至水中以及有機(jī)溶劑的揮發(fā)而產(chǎn)生納米顆粒。本文中所述的組合物和方法可用于預(yù)防和/或治療多種傳染病、失調(diào)和/或病癥。 本文中的其他地方提供了其它疾病、失調(diào)和/或病癥的實(shí)例。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的疫苗納米載體可用于疾病、失調(diào)和/或病癥的一個(gè)或多個(gè)癥狀或特征的治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進(jìn)展，減輕其嚴(yán)重程度和/或降低其發(fā)生率。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體可用于微生物感染(例如，細(xì)菌感染、真菌感染、病毒感染、寄生蟲(chóng)感染等)的一個(gè)或多個(gè)癥狀或特征的治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、 抑制其進(jìn)展，減輕其嚴(yán)重程度和/或降低其發(fā)生率。在一些具體實(shí)施方案中，微生物感染的預(yù)防和/或治療包括向有需要的患者施用治療有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體，以達(dá)到所需要效果所必需的量和時(shí)間來(lái)施用。在本發(fā)明的特定具體實(shí)施方案中，本發(fā)明疫苗納米載體的“治療有效量”是指對(duì)本文中提供的疾病、失調(diào)和/或病癥的一個(gè)或多個(gè)征狀或特征能有效地治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進(jìn)展，減輕其嚴(yán)重程度和/或降低其發(fā)生率的量。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的預(yù)防和/或治療實(shí)驗(yàn)方案包括向患者施用治療有效量的一種或多種本發(fā)明的疫苗納米載體，從而調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答(例如，同時(shí)刺激T細(xì)胞和 /或B細(xì)胞)。本發(fā)明提供了新型的組合物，其包含治療有效量的一種或多種疫苗納米載體和一種或多種藥物學(xué)上可接受的賦形劑。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含本文中所述的本發(fā)明疫苗納米載體的藥物組合物。組合物可以包括一種以上類(lèi)型的納米載體，每種類(lèi)型具有不同的成分(例如，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向劑、免疫刺激劑、賦形劑等)。根據(jù)一些具體實(shí)施方案，提供了向有需要的患者(例如，人)施用包含本發(fā)明組合物的藥物組合物的方法。在一些具體實(shí)施方案中，在診斷疾病、失調(diào)和/或病癥之前、同時(shí)和/或之后將治療有效量的本發(fā)明疫苗納米載體組合物傳送至病人和/或動(dòng)物。在一些具體實(shí)施方案中， 在疾病、失調(diào)和/或病癥的癥狀發(fā)作之前、同時(shí)和/或之后將治療量的本發(fā)明疫苗納米載體組合物傳送至病人和/或動(dòng)物。在特定的具體實(shí)施方案中，在暴露于傳染劑之前將治療量的本發(fā)明疫苗納米載體組合物傳送至病人和/或動(dòng)物。在特定的具體實(shí)施方案中，在暴露于傳染劑之后將治療量的本發(fā)明疫苗納米載體組合物傳送至病人和/或動(dòng)物。在特定的具體實(shí)施方案中，在暴露于令人上癮的物質(zhì)或毒素之前將治療量的本發(fā)明疫苗納米載體組合物傳送至病人和/或動(dòng)物。在特定的具體實(shí)施方案中，在暴露于令人上癮的物質(zhì)或毒素之后將治療量的本發(fā)明疫苗納米載體組合物傳送至病人和/或動(dòng)物。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物通過(guò)多種途徑施用，包括口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、心室內(nèi)、經(jīng)皮、真皮內(nèi)、直腸、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(通過(guò)粉末、膏劑、霜?jiǎng)┖?或滴液)、經(jīng)皮、粘膜、鼻、口腔、腸、舌下；通過(guò)氣管內(nèi)灌注、支氣管灌注和/或吸入；和/或作為口噴霧劑、鼻噴霧劑和/或氣溶膠。在特定的具體實(shí)施方案中， 組合物經(jīng)口服施用。在特定的具體實(shí)施方案中，組合物通過(guò)非腸道施用。在特定的具體實(shí)施方案中，組合物通過(guò)肌內(nèi)注射施用。在特定的具體實(shí)施方案中，延緩疾病、失調(diào)和/或病癥(例如，特定的微生物感染) 發(fā)作和/或進(jìn)展的疫苗納米載體可以通過(guò)與一種或多種治療疾病、失調(diào)和/或病癥的癥狀的另外的治療劑聯(lián)合施用。例如，疫苗納米載體可以與抗癌劑、抗炎劑、抗生素或抗病毒劑聯(lián)合使用。本發(fā)明提供了多種包含一種或多種本發(fā)明的納米載體的藥盒。例如，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的納米載體和使用說(shuō)明書(shū)的藥盒。藥盒可以包含多種不同的納米載體。藥盒可以包含以任何組合的各種附加成分或反應(yīng)劑中的任何一種。根據(jù)本發(fā)明的特定具體實(shí)施方案，藥盒可以包括，例如(i)包含至少一種免疫調(diào)節(jié)劑(其中至少一種免疫調(diào)節(jié)劑能夠同時(shí)刺激T細(xì)胞和/或B細(xì)胞應(yīng)答)，至少一種靶向部分，和/或至少一種免疫刺激劑的納米載體；(ii)向有需要的患者施用納米載體的說(shuō)明書(shū)。在特定的具體實(shí)施方案中，藥盒可以包括，例如，(i)至少一種免疫調(diào)節(jié)劑，其中至少一種免疫調(diào)節(jié)劑能夠同時(shí)刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞應(yīng)答；( )至少一種靶向部分；(iii)至少一種免疫刺激劑；(iv)聚合基質(zhì)前體；(ν)脂質(zhì)和兩性實(shí)體；(vi)從單獨(dú)成份(i)-(v)制備本發(fā)明的疫苗納米載體的說(shuō)明書(shū)。在一些具體實(shí)施方案中，藥盒包含本發(fā)明的納米載體和進(jìn)行混合的說(shuō)明書(shū)。在一些具體實(shí)施方案中，這樣的藥盒還包含免疫刺激劑和/或抗原。這樣的藥盒的納米載體可以包含免疫調(diào)節(jié)劑(例如，T細(xì)胞抗原，如通用T細(xì)胞抗原)和/或靶向部分。T細(xì)胞抗原和/或靶向部分可以在納米載體的表面上。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗原是相同的。在一些具體實(shí)施方案中，它們是不同的。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含以下成分(1)具有至少一個(gè)表面的合成納米載體，其中合成納米載體的第一個(gè)表面包含免疫特征表面，所述免疫特征表面包含多個(gè)選自尼古丁或其衍生物的部分；( 免疫刺激劑，其中免疫刺激劑 (i)與免疫特征表面結(jié)合；(ii)與納米載體的第二個(gè)表面結(jié)合；或(iii)包埋在納米載體的核心區(qū)域內(nèi)，和C3)藥物學(xué)上可接受的賦形劑。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，包括將至少一個(gè)劑量的這樣的組合物施用于患者。在之前的一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面包含多個(gè)含量能有效提供免疫特征表面與抗原呈遞細(xì)胞的低親和性和高親合力結(jié)合的部分。如以下將進(jìn)一步詳細(xì)討論的，本發(fā)明中所呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)提供了證據(jù)可以產(chǎn)生結(jié)合了本發(fā)明中別處所定義的免疫特征表面的合成納米載體。圖35提供了證據(jù)尼古丁誘導(dǎo)的靶向被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞(SCS-Mph)和樹(shù)突細(xì)胞(DC)。這點(diǎn)通過(guò)以下方法來(lái)證明將熒光合成納米載體注入小鼠的腳墊中，接著隨后分析合成納米載體分布以及與引流淋巴結(jié)中的專職抗原呈遞細(xì)胞(APC)的結(jié)合。如下所述，圖36證明了尼古丁免疫特征表面通過(guò)低親和性/高親合力相互作用與專職APC相互作用。微量滴定平板表面覆蓋寬范圍濃度的尼古丁(使用尼古丁-PEG-PLA) 或⑶Ilc的高親和性MAb，這是在DC上特異性表達(dá)的糖蛋白。圖36(a)顯示了高親和性MAb 有效地結(jié)合并固定了已經(jīng)加入微量滴定平板中的懸浮DC。相反，如圖36(b)中所示，即使在最高的可用尼古丁密度(1015分子/平方厘米)下，該密度高于相同試驗(yàn)條件下介導(dǎo)有效DC結(jié)合的MAb密度至少3個(gè)數(shù)量級(jí)，與未覆蓋的對(duì)照表面相比時(shí)，尼古丁免疫特征表面覆蓋的平板沒(méi)有有效地捕獲DC。這證明了在所用的試驗(yàn)條件下，尼古丁免疫特征表面對(duì)小鼠DC的親和性太低，以致在體外實(shí)驗(yàn)環(huán)境中不能產(chǎn)生足夠機(jī)械強(qiáng)度的DC結(jié)合來(lái)抵抗DC分離。無(wú)論如何，基于本發(fā)明中所呈現(xiàn)的體內(nèi)靶向結(jié)果，尼古丁免疫特征表面可以以足夠高的親合力結(jié)合APC，以抵抗具有尼古丁免疫特征表面的合成納米載體的分離。通過(guò)以下的情況來(lái)解釋兩個(gè)試驗(yàn)之間的差異體內(nèi)試驗(yàn)過(guò)程中作用于尼古丁-APC鍵上的力量遠(yuǎn)低于體外試驗(yàn)中DC結(jié)垢平板洗滌經(jīng)受的力量。因此，即使尼古丁對(duì)于APC的結(jié)合親和性太低，以致通過(guò)體外捕獲試驗(yàn)無(wú)法檢測(cè)，但尼古丁是可以形成免疫特征表面并增強(qiáng)合成納米載體免疫原性的部分的一個(gè)特定實(shí)例。圖33和34中的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了包含免疫特征表面(如，包含尼古丁的免疫特征表面)的合成納米載體有效地將佐劑和基于蛋白的抗原傳送至APC，導(dǎo)致有效的T輔助細(xì)胞激活。這通過(guò)以下事實(shí)來(lái)證明用結(jié)合了 R848和OVA抗尼古丁 IgG的PLA-PEG-尼古丁合成納米載體免疫時(shí)，與未接受OT-II細(xì)胞的小鼠相比，接受了天然OT-II (即，OVA-特異性的)T輔助細(xì)胞小鼠中的效價(jià)增強(qiáng)了約10倍。這種效應(yīng)表明免疫特征修飾的合成納米載體內(nèi)所含的佐劑(R848)和T細(xì)胞抗原(OVA)有效地靶向了將OVA遞呈至T細(xì)胞的DC。已經(jīng)接受了 OT-II細(xì)胞的動(dòng)物中的OVA-特異性T細(xì)胞的更高可用性導(dǎo)致了增強(qiáng)的輔助應(yīng)答， 其隨后增強(qiáng)了 B細(xì)胞的抗尼古丁抗體的產(chǎn)生。在上文描述的任何具體實(shí)施方案中，除非文中另外明確指出，否則單詞“偶聯(lián)的” 意思是共價(jià)或非共價(jià)偶聯(lián)。在上文描述的任何具體實(shí)施方案中，單詞“包埋的”意思是通過(guò)混合、通過(guò)環(huán)繞核心的殼、通過(guò)共價(jià)結(jié)合納米載體表面的內(nèi)部等方式物理地陷在其中。本申請(qǐng)參考各種授權(quán)的專利、公開(kāi)的專利申請(qǐng)、期刊論文和其他出版物，通過(guò)引用全部并入本文中。


圖1 用于最佳體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答的聯(lián)合疫苗靶向策略。復(fù)合疫苗攜帶內(nèi)源的T 細(xì)胞抗原、佐劑(未顯示)和用于DC、FDC和SCS-Mph的靶向部分，以及用于B細(xì)胞識(shí)別的表面抗原。在s. c.或i.m.注射時(shí)，材料通過(guò)引流淋巴管到達(dá)淋巴結(jié)并在每個(gè)APC上積累 (為了簡(jiǎn)明只顯示了 APC特異性的靶向部分，但每個(gè)APC都獲得了整個(gè)復(fù)合物)。DC將復(fù)合物內(nèi)在化并消化，將I類(lèi)和II類(lèi)MHC中的抗原性肽分別呈遞至CD8和CD4T細(xì)胞。激活的T細(xì)胞分化成調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答的效應(yīng)/記憶(TEff/MJ細(xì)胞。Tfh細(xì)胞向B細(xì)胞提供幫助，B細(xì)胞最初被SCS-Mph上的抗原刺激，并在此過(guò)程中獲得并加工T細(xì)胞抗原以重新刺激 Tfho Tfh細(xì)胞提供的幫助允許發(fā)生GC反應(yīng)，在該過(guò)程中，B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生高親和性抗體。
圖2 =SCS-Mph結(jié)合淋巴上攜帶的病毒顆粒并將其遞呈至濾泡B細(xì)胞。㈧小鼠胭淋巴結(jié)的皮層的免疫組織化學(xué)染色，用抗-CD169染色，并用小麥胚芽凝集素復(fù)染。在足墊注射紅色熒光泡性口炎病毒(VSV)后30分鐘，收獲淋巴結(jié)。在引流淋巴結(jié)的被膜下竇中， 紅色的病毒專有性地與⑶169+巨噬細(xì)胞共區(qū)域化。(B)注射VSV后30分鐘，在被膜下竇 (SCSf)的基底下面的淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞(Mph)和濾泡B細(xì)胞(Bi)的電子顯微鏡圖顯示VSV 位于表面，位于Mph的吞噬溶酶體內(nèi)以及Mph和B細(xì)胞的交界處(箭頭)。(C)向未處理小鼠(B6)的足墊中注射VSV導(dǎo)致病毒特異性B細(xì)胞上表面表達(dá)的IgM的迅速下調(diào)，這是B細(xì)胞激活的信號(hào)。足墊注射氯屈膦酸脂質(zhì)體(CLL)后SCS-Mph的耗盡消除了 B細(xì)胞激活，這表明SCS-Mph對(duì)于將微?？乖f呈至B細(xì)胞是必需的。圖3 示例性脂質(zhì)體納米載體，其中親脂性免疫調(diào)節(jié)劑整合在膜中，和親水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于脂質(zhì)體內(nèi)。圖4 示例性納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體納米載體，其中親脂性免疫調(diào)節(jié)劑整合在膜中，和親水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于脂質(zhì)體內(nèi)。圖5 示例性脂質(zhì)體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調(diào)節(jié)劑整合在膜中，和疏水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于聚合物納米顆粒內(nèi)。圖6 示例性納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調(diào)節(jié)劑整合在膜中，和疏水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于聚合納米顆粒內(nèi)。圖7 示例性的含有反膠束的脂質(zhì)體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調(diào)節(jié)劑整合在膜中，和親水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于反膠束內(nèi)。圖8 示例性的含有反膠束的納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調(diào)節(jié)劑整合在膜中，和親水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于脂質(zhì)體內(nèi)。圖9 示例性的脂質(zhì)穩(wěn)定化的聚合物納米載體，其中親水性免疫調(diào)節(jié)劑與脂單層偶聯(lián)，和疏水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于聚合物核心內(nèi)。圖10 示例性的含有反膠束的脂質(zhì)穩(wěn)定化的聚合納米載體，其中親水性免疫調(diào)節(jié)劑與脂單層偶聯(lián)，和親水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋于聚合物核心內(nèi)。圖11 淋巴攜帶的VSV被SCS巨噬細(xì)胞捕獲。(A)胭LN中的VSV的MP-IVM顯微圖像(數(shù)字足墊注射后的分鐘；比例尺標(biāo)記100微米)。(B)注射后三個(gè)小時(shí)，VSV在 C57BL/6 — Act (EGFP)接受者中聚集(比例尺標(biāo)記50微米)。(C)注射后5分鐘，LN中的 VSV的電子顯微鏡圖像。顯示中心顯微鏡圖像的示意圖(左)，和更高的放大倍數(shù)(右)。箭頭指明VSV顆粒(比例尺標(biāo)記2微米)。(D)VSV-引流LN的共焦顯微鏡圖像(30分鐘)。 比例尺標(biāo)記100微米(左)，15微米(右)。(E)注入野生型、C3缺陷型或CLL耗盡的小鼠后2小時(shí)，胭LN中的VSV效價(jià)。_ φ < 0. 001 (雙因子變異數(shù)分析(two-way AN0VA)， Bonferroni' s post-test)。(F)DH_LMP2a 小鼠中的 VSV 捕獲。* :p < 0. 05(未配對(duì) t 檢驗(yàn))。(G)未處理小鼠和CLL處理小鼠中足墊注射后的VSV效價(jià)(兩個(gè)相似實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)； η = 3)。ftOxLN 腹股溝、主動(dòng)脈旁的LN ；BrachLN 臂LN。(H)TD插管后淋巴、脾和血液中的病毒效價(jià)；％P<0.05(未配對(duì)t檢驗(yàn))。(E-H)中的水平線代表平均值。圖12 外周LN中CD169+巨噬細(xì)胞的表征。(A-C)從天然C57BL/6小鼠的LN匯聚的單核細(xì)胞的世系標(biāo)記物表達(dá)分析。(A)在對(duì)⑶169+群體選通(gating)后(中圖)， 分析細(xì)胞中兩個(gè)與巨噬細(xì)胞結(jié)合的表面標(biāo)記物(I-Ab(II類(lèi)MHC)和CDllb)的表達(dá)(下圖)。在上圖顯示了用抗-⑶169同種型對(duì)照的染色。(B)進(jìn)一步分析⑶169+I-Ab+⑶Ilb+ 細(xì)胞中⑶68、F4/80、⑶Ilc和Gr-I的表達(dá)。選通以鑒別標(biāo)記物+的細(xì)胞，除了⑶Ilc染色外，其中放置標(biāo)記物以鑒定常規(guī)⑶Ilchigh樹(shù)突細(xì)胞(覆蓋)。數(shù)字表示在直方圖門(mén)下面的 ⑶169+I-Ab+⑶Ilb+細(xì)胞的百分率。數(shù)據(jù)是3-5個(gè)具有相似結(jié)果的實(shí)驗(yàn)的代表。(C)圖B中數(shù)據(jù)的定量分析，誤差條表示SEM。(D-G)來(lái)自天然C57BL/6小鼠的胭LN的共焦顯微鏡圖像，顯示了在⑶169+細(xì)胞上所選標(biāo)記物的共表達(dá)(箭頭)。比例尺標(biāo)記左欄為125微米和所有其它欄為20微米。圖13 =CLL處理之后胭LN的形態(tài)學(xué)變化。(A)未處理對(duì)照小鼠(-CLL，左欄)和 6-10天前接受CLL足墊注射的動(dòng)物的胭LN(上面三行)和脾(下面一行)的共焦顯微鏡圖像。CLL處理耗盡了 LN中的⑶169+巨噬細(xì)胞(上面一行)，但未耗盡脾中的；Lyve-Γ髓質(zhì)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞(第二行)和皮層的CDllchigh樹(shù)突細(xì)胞(第三行)不受影響。(B)經(jīng)過(guò)和不經(jīng)過(guò)CLL處理的胭LN中的細(xì)胞亞群頻率，數(shù)據(jù)來(lái)自η = 3小鼠，以平均值士SEM表示廣ρ <0. 05,** :ρ<0.01 ；未配對(duì)斯氏t檢驗(yàn)。(C)足墊注射50微升CLL后6-10天，胭LN中不同的I-Ab+CDllb+白細(xì)胞亞群的頻率。每個(gè)符號(hào)表示從一只小鼠匯聚的胭LN。對(duì)I-Ab+⑶lib+ 細(xì)胞選通后通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)檢測(cè)胭LN中總的單核細(xì)胞中的細(xì)胞亞群頻率，如圖12A所示。(D)未處理(-CLL)或足墊注射CLL(+CLL)后7天，胭LN的免疫組織化學(xué)分析。比例尺標(biāo)記300毫米。(E) CLL處理后7天和足墊注射20微克VSV-IND后5分鐘，代表性的胭LN 中的SCS的超結(jié)構(gòu)。注意到完全不存在SCS巨噬細(xì)胞和病毒顆粒。比例尺標(biāo)記2微米。圖14 胭LN中熒光病毒和乳膠納米顆粒的保留。(A)足墊注射Alexa-568標(biāo)記的腺病毒(AdV)后30分鐘，胭LN的共焦顯微鏡圖像。用FITC-α -CD169和Alexa-647-α -B220 將冷凍切片染色以鑒別B細(xì)胞。比例尺標(biāo)記100微米(左圖)和15微米(右圖)。(B)SCS 巨噬細(xì)胞捕獲的AdV顆粒的透射電子顯微鏡圖像。上圖顯示低放大倍數(shù)視圖(中圖)的帶注釋示意圖。中圖中的帶框區(qū)域在下圖中被放大，箭頭表示電子密集的球狀A(yù)dV顆粒。比例尺標(biāo)記2微米(上圖和中圖)和1微米(下圖)。(C-D)經(jīng)足墊注射20微克Alexa-568 標(biāo)記的UV滅活的AdV(C)或VV⑶后30分鐘，來(lái)自C57BL/6小鼠胭LN的共焦顯微鏡圖像。 熒光病毒聚集在B濾泡上面的皮層SCS中，通過(guò)FITC- α -Β220染色鑒定，也聚集在髓質(zhì)中， 其中病毒不僅被⑶169+巨噬細(xì)胞結(jié)合，還被LYVE-Γ淋巴內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合。比例尺標(biāo)記代表 125微米(左圖)和25微米(右圖)。(E)后足墊注射Alexa-568標(biāo)記的VSV和大約IO11個(gè) Crimson熒光團(tuán)(直徑200納米)后30分鐘，胭LN的共焦顯微鏡圖像。用FITC-α -CD169 將冷凍的LN切片進(jìn)行復(fù)染。注意到與VSV不同，乳膠珠在引流LN中保留性較差。比例尺標(biāo)記125微米。圖15 足墊注射CLL對(duì)引流LN中VSV分布的影響。共焦顯微鏡圖像顯示無(wú)CLL 處理(A)或CLL處理后7天(B)，熒光VSV顆粒定位于胭LN中。通過(guò)FITC- α -Β220染色鑒別B濾泡。在髓質(zhì)(加框區(qū)域)中，VSV被LYVE-Γ細(xì)胞結(jié)合，這不受CLL處理的影響。比例尺標(biāo)記125微米(左欄)和25微米(右欄)。圖16 =SCS巨噬細(xì)胞將源自淋巴的AdV遞呈至濾泡B淋巴細(xì)胞。㈧胭LN中B濾泡上面的SCS中的⑶169+巨噬細(xì)胞的共焦顯微鏡圖像。用小麥胚芽凝集素(WGA)將冷凍切片進(jìn)行復(fù)染以鑒別胞外基質(zhì)，并用α-Β220進(jìn)行復(fù)染以檢測(cè)B細(xì)胞。注意到一些B細(xì)胞位于SCS中，并且一個(gè)B細(xì)胞似乎在濾泡和SCS之間遷移(箭頭)。比例尺標(biāo)記25微米。足墊注射AdV后30分鐘，胭LN中的SCS巨噬細(xì)胞和周?chē)?xì)胞的電子顯微鏡圖像(B)和示意圖(C)。比例尺標(biāo)記2微米。(C)中畫(huà)出的框表示在圖(D)和(E)中以更高倍數(shù)顯示的區(qū)域。這些圖顯示了 SCS巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞之間的界面處(箭頭)的AdV顆粒的兩個(gè)實(shí)例。 星號(hào)表示其它的結(jié)合巨噬細(xì)胞的AdV顆粒。比例尺標(biāo)記500納米。圖17 巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的淋巴攜帶的VSV跨越SCS基底的轉(zhuǎn)移改變了病毒特異性B 細(xì)胞的行為。(A)電子顯微鏡圖像和示意圖(中間)顯示了 VSV注射后30分鐘，巨噬細(xì)胞滲透胭LN的SCS的基底。比例尺標(biāo)記10微米(左)和2微米(右)。箭(arrow)含有經(jīng)消化的VSV的液泡。箭頭巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞之間接觸的區(qū)域中的病毒體。⑶胭LN中的多克隆和VI10YEN B細(xì)胞的MP-IVM。比例尺標(biāo)記50微米。(C) VSV注射后VI10YEN B細(xì)胞/對(duì)照B細(xì)胞的區(qū)域比例。結(jié)果來(lái)自3個(gè)圖像/組。(D、E)胭LN中相對(duì)于SCS的VI10YEN B細(xì)胞定位。** :p < 0. 01 (用 Bonferroni，s post-test 的單因素方差分析(one-way ANOVA))。圖18 =VSV血清型和VSV-IND特異性VI10YEN B細(xì)胞的表征。(A)純化的VSV裂解液的SDS-PAGE凝膠(12% )。頂端VSV_IND和VSV-NJ。N和P蛋白在VSV-NJ中共同遷移，大約的分子量顯示于括號(hào)中。(B)Alexa-488標(biāo)記的VSV-IND(中間一行)或VSV-NJ(下面一行)與來(lái)自C57BL/6小鼠(左欄)或VI10YEN小鼠(右欄)的B細(xì)胞的結(jié)合。上面一行顯示用針對(duì)VI10YEN BCR的抗-個(gè)體基因型抗體35. 61進(jìn)行的對(duì)照染色(Dang和Rock， 1991，J. Immunol.，146 :3273)。(C)經(jīng) CD43Mg 純化的、Fluo-LOJO 裝載的來(lái)自 VI10YEN 小鼠 (上面一行)或C57BL/6小鼠(下面一行)的B細(xì)胞中的胞內(nèi)鈣流動(dòng)。隨時(shí)間進(jìn)程連續(xù)收集事件，星號(hào)表示加入抗體或病毒的時(shí)間點(diǎn)。以1000/B細(xì)胞使用病毒顆粒，以10微克/10 細(xì)胞使用抗-IgM-(Fab) 2。(D)足墊注射 10 微克 UV-VSV 或 UV-VSV-AlexaFluor-488-IND 免疫后4天和10天，C57BL/6小鼠血清中的總Ig和IgG的中和試驗(yàn)。(E)暴露于來(lái)自VSV貯液的上清液的VI10YEN B細(xì)胞中的鈣流動(dòng)。通過(guò)透過(guò)蔗糖墊進(jìn)行超離心產(chǎn)生上清液，引起病毒效價(jià)下降大約10，000倍，以不稀釋(右上)或1 100稀釋(右下)用于B細(xì)胞中。 作為對(duì)照，將VSV貯液稀釋至相等的病毒效價(jià)(Μ0Ι ；左圖)。結(jié)果證明存在抗原性的VSV-G， 其不與我們的病毒制備物中的病毒顆粒結(jié)合。圖19 :VSV誘導(dǎo)的VI10YEN B細(xì)胞與ICAM-I和VCAM-I的粘附。(A，B)純化的天然和VSV-IND激活(30分鐘暴露)的VI10YEN B細(xì)胞粘附至以所示濃度的重組ICAM-I-Fc (A) 或VCAM-I-Fc(B)覆蓋的塑料板。顯示了兩個(gè)三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的匯集數(shù)據(jù)。水平線表示平均數(shù)。(C，D)C57BL/6小鼠的胭LN中ICAM-I和VCAM-I表達(dá)的共焦顯微鏡圖像。比例尺標(biāo)記 50微米。(E)純化的天然野生型和VI10YEN B細(xì)胞粘附至以所示pfu-等價(jià)濃度的UV滅活的VSV-IND覆蓋的塑料皿。數(shù)據(jù)以三次重復(fù)的平均值士SEM來(lái)表示。圖20 =SCS巨噬細(xì)胞對(duì)于LN中VSV特異性B細(xì)胞的早期激活是必需的。㈧共焦顯微鏡圖像顯示MHC-II與VSV-IND定殖于(注射后30分鐘)SCS處(箭頭)的VI10YEN χ MHCII (EGFP) B細(xì)胞，而不是深層濾泡(星號(hào))。比例尺標(biāo)記25微米。⑶與VSV結(jié)合的和與 VSV分離的VI10YEN χ MHCII (EGFP) B細(xì)胞與SCS的距離。水平線中值。足墊注射VSV-IND 后，VIIOYEN(C)和多克隆B細(xì)胞(D)上的BCR表達(dá)的動(dòng)力學(xué)。(E)注射VSV-IND (20微克) 后，經(jīng)CLL處理的或未處理的胭LN中的VI10YEN細(xì)胞上的BCR表達(dá)。平均熒光強(qiáng)度按照無(wú)病毒值(虛線)進(jìn)行校正。平均值士SEM(3-5只小鼠)。注射VSV-IND (0. 4微克)后6小時(shí)，對(duì)照(F)和CLL處理的(G)胭LN中的VI10YEN B細(xì)胞的共焦顯微鏡圖像。比例尺標(biāo)記125微米。(H)注射所示劑量的VSV-IND后6小時(shí)，T/B邊界和濾泡中的VI10YEN B細(xì)胞頻率。平均值士SEM ；η = 3-4 個(gè)濾泡 /2 只小鼠；* :ρ < 0. 05 ；** :ρ < 0. 01 ；*** :ρ < 0. 001 (t 檢驗(yàn))。圖21 病毒注射后引流LN中的VI10YEN B細(xì)胞移動(dòng)性。VSV足墊注射后約5_35分鐘，深層濾泡和SCS/表面濾泡中野生型(三角)和VI10YEN B細(xì)胞(圓圈)的3D瞬時(shí)速率的中值。水平線代表平均值；* =P < 0. 05廣:p<0.01;(單因素方差分析，Bonferroni' s post-test)。注意到特異性B細(xì)胞在整個(gè)濾泡中減慢下來(lái)，可能是我們的制備物中游離 VSV-G的影響結(jié)果(參見(jiàn)圖18)。CLL處理和未處理的popLN中的對(duì)照實(shí)驗(yàn)顯示了相似的B 細(xì)胞移動(dòng)性參數(shù)。圖22 注射VSV-IND后，病毒引流和非引流LN中的VI10YEN B細(xì)胞上激活標(biāo)記物誘導(dǎo)的時(shí)間過(guò)程。用CMTMR將VI10YEN B細(xì)胞熒光標(biāo)記，并將其轉(zhuǎn)移至天然小鼠，18小時(shí)后接受20微克UV滅活的VSV-IND注射(時(shí)間0小時(shí))。在所示的時(shí)間間隔后收集引流胭 LN(popLN)和末梢臂LN(brachLN)以產(chǎn)生單細(xì)胞懸浮液。對(duì)(A) B220+CMTMR+VI10YEN細(xì)胞或 (B) B220+CMTMR—內(nèi)源性對(duì)照B細(xì)胞選通后，通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)檢測(cè)B細(xì)胞上⑶69和⑶86 的表達(dá)。圖23 接受過(guò)繼性轉(zhuǎn)移CMTMR標(biāo)記的VI10YEN B細(xì)胞和CMAC標(biāo)記的多克隆B細(xì)胞的混合物的小鼠(右欄)的胭LN的共焦(左欄和中欄)和MP-IVM顯微鏡圖像(右欄)。 接下來(lái)的一天，在足墊注射20微克UV滅活的VSV-IND，并在所示的時(shí)間點(diǎn)通過(guò)外科手術(shù)制備用于MP-IVM的引流胭LN或收獲用于共焦分析的冷凍切片。MP-IVM圖像顯示早在病毒注射后30分鐘，VSV特異性的B細(xì)胞，而不是多克隆B細(xì)胞，就與SCS中的VSV接觸了。在注射后6個(gè)小時(shí)，VI10YEN B細(xì)胞重新定位至T/B邊界。比例尺標(biāo)記左欄為150微米，其它欄為25微米。圖M 使用來(lái)自人IgG的Fc片段的SCS-Mph體內(nèi)靶向。㈧左邊的FACS直方圖記錄了熒光PEG-PLGA納米顆粒(直徑約100納米)與淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞的結(jié)合。(B)Fc-納米顆粒(NP)靶向SCS-Mph和濾泡樹(shù)突細(xì)胞。圖25 在淋巴結(jié)被膜下竇(SCS)中的巨噬細(xì)胞上，而非髓質(zhì)中的巨噬細(xì)胞中，鑒別出趨化因子受體CX3CRl(fractalkine受體)。右側(cè)顯微鏡圖像是來(lái)自雙敲入小鼠的淋巴結(jié)的3D影像，其中綠色熒光蛋白(GFP)在CX3CR1基因座中表達(dá)，而紅色熒光蛋白(RFP)報(bào)告另一種趨化因子受體CCR2的表達(dá)。通過(guò)它們明顯的綠色熒光可以容易地鑒別出SCS-Mph， 而髓質(zhì)巨噬細(xì)胞主要表達(dá)RFP。圖沈SCS_Mph表達(dá)趨化因子受體CX3CR1。圖像顯示了來(lái)自敲入小鼠(其經(jīng)過(guò)遺傳工程化以從CX3CR1基因座表達(dá)GFP)的淋巴結(jié)的單細(xì)胞懸浮液的FACS曲線。通過(guò)可溶性受體CRFc (其結(jié)合SCS中的巨噬細(xì)胞，而不是髓質(zhì)中的巨噬細(xì)胞)染色而鑒別SCS-Mph。 CRFc陰性CX3CR1表達(dá)(即，GFP-high)細(xì)胞是常規(guī)的表達(dá)該趨化因子受體的樹(shù)突細(xì)胞。圖27 足墊注射直徑為0. 2微米的表面用胺(左圖和中圖)或羧基部分(右圖) 修飾的乳膠珠后M小時(shí)，來(lái)自小鼠胭淋巴結(jié)的冷凍切片的熒光顯微鏡圖像。兩套珠子均購(gòu)自Invitrogen(Cat. no. F8763和F8805)。用抗-CD169將左側(cè)和右側(cè)的切片進(jìn)行復(fù)染。 將圖像方向進(jìn)行調(diào)整，使得髓質(zhì)(用抗-CD169進(jìn)行淺的彌漫染色)面向右邊，而被膜下竇 (SCS)區(qū)域(用抗-CD169進(jìn)行深度染色)面向左邊。注意到紅色的胺修飾的顆粒主要定位于SCS，而藍(lán)色的羧基修飾的珠子主要保留在髓質(zhì)中。圖觀(A)攜帶抗原的靶向納米顆粒是高度免疫原性的并誘導(dǎo)高抗體效價(jià)。⑶納米顆粒疫苗引發(fā)的誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答賦予針對(duì)致死劑量的VSV的有力保護(hù)。圖四通過(guò)免疫調(diào)節(jié)納米顆粒在體內(nèi)激活T細(xì)胞。(A)NP對(duì)⑶4T細(xì)胞激活的影響。(B)與CpG佐劑(TLR9激動(dòng)劑)混合的NP對(duì)CD8T細(xì)胞應(yīng)答的影響。(C)共包埋的佐劑對(duì)CD8T細(xì)胞激活的影響。圖30 顯示了示例性的尼古丁偶聯(lián)策略。圖31 顯示了示例性的R848偶聯(lián)策略。圖3 和32b 顯示了使用各種組合物制備含有偶聯(lián)尼古丁的納米顆粒。圖33 顯示了施與小鼠各種組合物后長(zhǎng)達(dá)23周，小鼠抗-尼古丁 IgG效價(jià)和濃度。圖34 顯示了施與小鼠各種組合物后21天，小鼠抗-尼古丁 IgG效價(jià)和濃度。圖35a:顯示了與對(duì)照納米顆粒相比，注入小鼠足墊后4小時(shí)，SCS中尼古丁修飾的納米顆粒的相對(duì)積聚。圖35b 顯示了與對(duì)照納米顆粒相比，注入小鼠足墊后M小時(shí)，尼古丁修飾納米顆粒與DC的相對(duì)定殖。圖36a 顯示了體外DC粘附至具有固定化抗-⑶lie抗體的表面。圖36b 顯示了體外DC粘附至具有固定化尼古丁的表面。圖37 (a) - (b)顯示了與對(duì)照納米顆粒相比，在注入小鼠足墊后，在SCS中尼古丁修飾納米顆粒的積聚。
具體實(shí)施例方式定義被濫用的物質(zhì)如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“被濫用的物質(zhì)”是指由患者(例如，人)為了該物質(zhì)所指明的目的之外的目的而攝入或以醫(yī)生所指導(dǎo)的方式或劑量之外的方式或劑量而攝入的任何物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，被濫用的物質(zhì)是藥物，如非法藥物。在某些具體實(shí)施方案中，被濫用的物質(zhì)是非處方藥。在一些具體實(shí)施方案中，被濫用的物質(zhì)是處方藥。在一些具體實(shí)施方案中，被濫用的物質(zhì)是令人上癮的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，被濫用的物質(zhì)具有改變情緒的效應(yīng)，并且因此包括吸入劑和溶劑。在其他具體實(shí)施方案中，被濫用的物質(zhì)是不具有改變情緒效應(yīng)或興奮性質(zhì)的物質(zhì)，并且因此包括合成代謝類(lèi)固醇。被濫用的物質(zhì)包括但不限于，大麻成分(例如，印度大麻、大麻)、鎮(zhèn)靜劑(例如，巴比妥酸鹽、 苯二氮卓、氟硝西泮(Rohypn0l)、GHB、安眠酮(quaaludes))、意識(shí)狀態(tài)分離麻醉藥(例如， 克他命、PCP)、迷幻劑(例如，LSD、酶斯卡靈、裸蓋菇素)、鴉片樣物質(zhì)和嗎啡衍生物(例如， 可待因、芬太奴、海洛因、嗎啡、鴉片)、刺激劑(安非他明、可卡因、狂喜迷幻藥(MDMA)、甲基苯丙胺、哌醋甲酯(利他林)、尼古丁)、合成代謝類(lèi)固醇和吸入劑。在一些具體實(shí)施方案中， 用于包含在納米載體中的被濫用的物質(zhì)是完整分子或其一部分。令人上癮的物質(zhì)如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“令人上癮的物質(zhì)”是引起迷念、強(qiáng)迫或物理依賴性或心理依賴性的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，令人上癮的物質(zhì)是非法藥物。在其它具體實(shí)施方案中，令人上癮的物質(zhì)是非處方藥。在其他具體實(shí)施方案中，令人上癮的物質(zhì)是處方藥。令人上癮的物質(zhì)包括，但不限于，可卡因、海洛因、大麻、甲基苯丙胺和尼古丁。在一些具體實(shí)施方案中，用于包含在納米載體中的令人上癮的物質(zhì)是完整分子或其一部分。施用或施與(1)以藥理學(xué)上有用的方式將藥理學(xué)上活性的材料，如本發(fā)明的組合物，給藥于患者，( 以藥理學(xué)上有用的方式將給藥的這些材料指引至患者，或(3)以藥理學(xué)上有用的方式指弓I患者自體給藥這些材料。氨基酸如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“氨基酸”在其最廣泛意義上是指能夠被引入多肽鏈中的任何化合物和/或物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，氨基酸具有一般結(jié)構(gòu)H2N-C(H) (R)-COOH0在一些具體實(shí)施方案中，氨基酸是天然產(chǎn)生的氨基酸。在一些具體實(shí)施方案中， 氨基酸是合成氨基酸；在一些具體實(shí)施方案中，氨基酸是D-氨基酸；在一些具體實(shí)施方案中，氨基酸是L-氨基酸。“標(biāo)準(zhǔn)氨基酸”或“天然氨基酸”是指天然產(chǎn)生的肽中通常發(fā)現(xiàn)的二十種標(biāo)準(zhǔn)L-氨基酸中的任何一種?！胺菢?biāo)準(zhǔn)氨基酸”是指除了標(biāo)準(zhǔn)氨基酸之外的任何氨基酸，不論其是合成制備的還是從天然來(lái)源獲得的。如本文中所用的，“非天然氨基酸”包括化學(xué)產(chǎn)生的或修飾的氨基酸，包括但不限于鹽，氨基酸衍生物(如，酰胺)和/或取代物。 氨基酸，包括肽的羧基-和/或氨基-端氨基酸，可以通過(guò)能夠改變肽的循環(huán)半衰期而對(duì)其活性沒(méi)有不利影響的甲基化、酰胺化、乙?；?或以其它化學(xué)基團(tuán)的取代而被修飾。氨基酸可以參與二硫鍵。術(shù)語(yǔ)“氨基酸”與“氨基酸殘基”可互換使用，并可以指代游離氨基酸和 /或肽的氨基酸殘基。在使用該術(shù)語(yǔ)的上下文中可以清晰地顯示其是指游離氨基酸還是指肽的殘基。動(dòng)物如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”是指動(dòng)物界的任何成員。在一些具體實(shí)施方案中，“動(dòng)物”是指任何發(fā)育階段的人。在一些具體實(shí)施方案中，“動(dòng)物”是指任何發(fā)育階段的非人動(dòng)物。在某些具體實(shí)施方案中，非人動(dòng)物是指哺乳動(dòng)物(例如，嚙齒動(dòng)物、小鼠、大鼠、 兔、猴、狗、貓、綿羊、牛、靈長(zhǎng)類(lèi)和/或豬)。在一些具體實(shí)施方案中，動(dòng)物包括，但不限于，哺乳動(dòng)物、鳥(niǎo)類(lèi)、爬行動(dòng)物、兩棲動(dòng)物、魚(yú)和/或軟體動(dòng)物。在一些具體實(shí)施方案中，動(dòng)物可以是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、遺傳工程化動(dòng)物和/或克隆體。抗體如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“抗體”是指任何免疫球蛋白，不論是天然的或完全或部分合成產(chǎn)生的。其所有的保持特異性結(jié)合能力的衍生物也包括在該術(shù)語(yǔ)中。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋了任何具有與免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域同源或很大程度上同源的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的蛋白。這樣的蛋白可以來(lái)自天然來(lái)源，或部分或全部合成產(chǎn)生。抗體可以是單克隆或多克隆的。抗體可以是任何免疫球蛋白類(lèi)別的成員，包括任何的人類(lèi)類(lèi)別IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“抗體片段”或“抗體的特征性部分”可互換使用，并且指抗體的任何小于其全長(zhǎng)的衍生物?？贵w片段能夠保持全長(zhǎng)抗體的特異性結(jié)合能力的至少顯著性的部分。這樣的抗體片段的實(shí)例包括但不限于Fab、Fab，、F (ab，)2、scFv、Fv、dsFv 二抗和Fd片段。抗體片段還包括Fc片段。抗體片段可以通過(guò)任何方式產(chǎn)生。例如，抗體片段可以通過(guò)完整抗體的片段化經(jīng)酶或化學(xué)產(chǎn)生和/或其可以通過(guò)從編碼部分抗體序列的基因經(jīng)重組產(chǎn)生?？商鎿Q地或另外地，抗體片段可以全部或部分合成產(chǎn)生。抗體片段可任選包含單鏈抗體片段。 可替換地或另外地，抗體片段可以包含多條連接在一起(例如，通過(guò)二硫鍵)的鏈。抗體片段可任選包含多分子復(fù)合體。功能性抗體片段通常包含至少約50個(gè)氨基酸，更通常將包含至少約200個(gè)氨基酸。大約除非另有指明或從上下文可以斷定，否則在指稱數(shù)字時(shí)如本文所用的術(shù)語(yǔ)“大約”或“約”通常包括落在該數(shù)字的每一方向(大于或小于)5110115%或20%范圍內(nèi)的數(shù)字(除非當(dāng)這樣的數(shù)字將低于可能數(shù)值的0%或超過(guò)可能數(shù)值的100% )。
與……結(jié)合如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“與……結(jié)合”是指兩個(gè)或更多實(shí)體通過(guò)直接或間接的共價(jià)或非共價(jià)相互作用而連接的狀態(tài)。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是共價(jià)的。在一些具體實(shí)施方案中，共價(jià)結(jié)合由連接物部分介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是非共價(jià)的(例如，電荷相互作用、親和性相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水性相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用等)。例如，在一些具體實(shí)施方案中，實(shí)體(例如，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑、納米顆粒等)可以與疫苗納米載體共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中， 實(shí)體(例如，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑、納米顆粒等)可以與疫苗納米載體非共價(jià)結(jié)合。例如，實(shí)體可以與本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合基質(zhì)等的表面結(jié)合，包埋于本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合物質(zhì)等之內(nèi)，由本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合基質(zhì)等環(huán)繞，和/或分布在整個(gè)本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合基質(zhì)等之中。在實(shí)體可以通過(guò)游離(即，非偶聯(lián)的)形式的特定名稱提及的情況中，將認(rèn)識(shí)到，除非特意指出，即使實(shí)體與第二個(gè)實(shí)體偶聯(lián)時(shí)，實(shí)體也可以通過(guò)相同名稱來(lái)表示。例如，名稱“ (S)-(-)-尼古丁”指的是化合物3-[ (2S)-1-甲基吡咯烷-2-基] 吡啶。相似地，名稱“ (S)-(-)-尼古丁”、“ (S)-(-)-尼古丁片段”、“ (S)-(-)-尼古丁部分，， 和“(S)-(-)-尼古丁類(lèi)似物”也稱為化學(xué)部分
其中與一個(gè)原子的鍵(通常，盡管不是必需的，與H原子的鍵)由與第二個(gè)部分的鍵替代。生物相容性如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“生物相容性”是指對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，如果在體內(nèi)向細(xì)胞加入一種物質(zhì)而不在體內(nèi)誘導(dǎo)炎性和/或其它副作用，則認(rèn)為該物質(zhì)是“生物相容性”。在一些具體實(shí)施方案中，如果在體外或在體內(nèi)向細(xì)胞加入一種物質(zhì)而引起低于或等于約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約 20%、約15%、約10%、約5%、或低于約5%的細(xì)胞死亡，則認(rèn)為該物質(zhì)是“生物相容性”。生物可降解如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“生物可降解”是指在生理?xiàng)l件下降解的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，生物可降解物質(zhì)是通過(guò)細(xì)胞機(jī)制分解的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，生物可降解物質(zhì)是通過(guò)化學(xué)過(guò)程分解的物質(zhì)。B細(xì)胞抗原如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“B細(xì)胞抗原”是指任何由B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答識(shí)別并激發(fā)B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，是B細(xì)胞抗原的抗原也是 T細(xì)胞抗原。在某些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原不同時(shí)是T細(xì)胞抗原。在某些具體實(shí)施方案中，當(dāng)本文提供的納米載體同時(shí)包含B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原時(shí)，B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原不是相同的抗原，雖然在一些具體實(shí)施方案中B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原每個(gè)均可以同時(shí)是B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原。在其它具體實(shí)施方案中，納米載體的B細(xì)胞抗原和T細(xì)胞抗原是相同的。細(xì)胞類(lèi)型如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞類(lèi)型”是指具有定義細(xì)胞類(lèi)型的一組與眾不同的形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和/或功能特征的細(xì)胞形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可以在不同的特異性水平定義細(xì)胞類(lèi)型。例如，T細(xì)胞和B細(xì)胞是不同的細(xì)胞類(lèi)型，其可以彼此區(qū)分開(kāi)來(lái)，但共同具有某些作為更廣的“淋巴細(xì)胞”(其均為淋巴細(xì)胞的成員)細(xì)胞類(lèi)型的特性的特征。通常，不同類(lèi)型的細(xì)胞可以基于多種基因(本領(lǐng)域稱為特定細(xì)胞類(lèi)型(例如，特性世系的細(xì)胞類(lèi)型)的“標(biāo)記物”)的差異性表達(dá)而彼此區(qū)分開(kāi)來(lái)。在一些具體實(shí)施方案中， 不同類(lèi)型的細(xì)胞可以基于其不同的功能而彼此區(qū)分開(kāi)來(lái)?！凹?xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物”是這樣的基因產(chǎn)物或其修飾形式，其在一種或多種細(xì)胞類(lèi)型上相對(duì)于全部其它或多數(shù)其它細(xì)胞類(lèi)型來(lái)說(shuō)有顯著較高水平的表達(dá)，并且其表達(dá)是該細(xì)胞類(lèi)型的特征。很多細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物在本領(lǐng)域中是這樣識(shí)別的。劑型適于施用于患者的介質(zhì)、載體、媒介或裝置中的藥物。本文中將提供劑型的實(shí)例。有害環(huán)境試劑如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“有害環(huán)境試劑”是指環(huán)境中發(fā)現(xiàn)的任何有害物質(zhì)。這樣的物質(zhì)通常被認(rèn)為具有健康風(fēng)險(xiǎn)。有害環(huán)境試劑包括被認(rèn)為具有健康風(fēng)險(xiǎn)而實(shí)際上可能不具有風(fēng)險(xiǎn)的物質(zhì)。有害環(huán)境試劑包括但不限于砷、鉛、汞、氯乙烯、多氯聯(lián)苯、 苯、多環(huán)芳香烴、鎘、苯并(a)芘、苯并(b)熒蒽、氯仿、DDT，P，P’-、阿羅克洛12M、阿羅克洛 1沈0、二苯并(a，h)蒽、三氯乙烯、狄氏劑、六價(jià)鉻和DDE，P，P’。在一些具體實(shí)施方案中，包含于納米載體中的有害環(huán)境試劑是完整分子或其一部分。體外如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“體外”是指在人工環(huán)境中發(fā)生的事件，例如，在試管或反應(yīng)管中，在細(xì)胞培養(yǎng)物中等，而不是在生物體內(nèi)(例如動(dòng)物、植物和/或微生物)。體內(nèi)如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“體內(nèi)”是指在生物體(例如，動(dòng)物、植物和/或微生物)內(nèi)發(fā)生的事件。免疫刺激劑如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“免疫刺激劑”是指調(diào)節(jié)針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的試劑，但不是抗原或源自抗原。如本文中所用的，“調(diào)節(jié)”是指誘導(dǎo)、增強(qiáng)、抑制、引導(dǎo)或重引導(dǎo)免疫應(yīng)答。這樣的試劑包括刺激(或增強(qiáng))針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的免疫刺激劑，但是如上所述，其不是抗原或源自抗原。因此，免疫刺激劑包括佐劑。在一些具體實(shí)施方案中， 免疫刺激劑位于納米載體表面上和/或包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體表面上的免疫刺激劑與包埋于納米載體內(nèi)的免疫刺激劑不同。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體包含一種以上類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，一種以上類(lèi)型的免疫刺激劑作用于不同的途徑。免疫刺激劑的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，所有合成納米載體的免疫刺激劑彼此相同。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體包含各種不同類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體包含多個(gè)單獨(dú)的免疫刺激劑，其全部彼此相同。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體僅僅只包含一種類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體只包含兩種不同類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體包含多于兩種不同類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體包含脂膜(例如，脂雙層、脂單層等)，其中至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑與脂膜結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑包埋于脂膜內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑包埋于脂雙層的腔內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，合成納米載體包含至少一種類(lèi)型的與脂膜內(nèi)表面結(jié)合的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑包埋于合成納米載體的脂膜內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑可以位于合成納米載體的多個(gè)位置。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到之前的實(shí)施例只是許多不同方式的代表，其中多個(gè)免疫刺激劑可以與合成納米載體的不同位點(diǎn)結(jié)合。多個(gè)免疫刺激劑可以位于任意組合的合成納米載體的位
點(diǎn)ο尼古丁 除非另外指出，貫穿本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容，術(shù)語(yǔ)“尼古丁”，“尼古丁部分”和 “尼古丁半抗原”可互換使用，并且用來(lái)包括尼古丁本身(即，(S)-(-)-，(R)-(-)，或其組合)及其代謝物、衍生物和類(lèi)似物。尼古丁的代謝物包括為尼古丁代謝過(guò)程產(chǎn)物的任何化合物，如可鐵寧、可鐵寧N’-氧化物(CNO)、5’_羥基可鐵寧(5HC)、3’_羥基可鐵寧(3HC)、 5’ -羥基可鐵寧(5HC)、5’ -羥基可鐵寧-N-氧化物、3’ -羥基可鐵寧葡糖苷酸、降可鐵寧 (norcotinine)、降煙堿、尼古丁-N’ -氧化物(NNO)、(S)-尼古丁-N-B-葡糖苷酸(尼古丁 -Gluc)和可鐵寧-葡糖苷酸(可鐵寧-Gluc)。尼古丁的衍生物包括共價(jià)結(jié)合另一種物質(zhì)(如，聚合物、寡聚物或小分子)的尼古丁偶聯(lián)物。類(lèi)似物包括，例如，其中N-甲基已經(jīng)被高級(jí)烷基取代的尼古丁。相似地，術(shù)語(yǔ)“抗-尼古丁抗體”指的是通常在生物有機(jī)體(如動(dòng)物)中形成的結(jié)合尼古丁和/或其代謝物、衍生物或類(lèi)似物的抗體。核酸如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“核酸”在其最廣泛的意義上是指被引入或能夠被引入寡核苷酸鏈的任何化合物和/或物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，核酸是指通過(guò)磷酸二酯鍵被引入或能夠被引入寡核苷酸鏈的化合物和/或物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，“核酸” 是指單個(gè)核酸殘基(例如，核苷酸和/或核苷)。在一些具體實(shí)施方案中，“核酸”是指包含單個(gè)核酸殘基的寡核苷酸鏈。如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“寡核苷酸”和“多核苷酸”可以互換使用。在一些具體實(shí)施方案中，“核酸”包括RNA以及單鏈和/或雙鏈DNA和/或cDNA。此外，術(shù)語(yǔ)“核酸”、“DNA”、“RNA”和/或相似的術(shù)語(yǔ)包括核酸類(lèi)似物，即，具有磷酸二酯骨架之外的類(lèi)似物。例如，所謂的“肽核酸”，其在本領(lǐng)域是已知的，在骨架中具有肽鍵而不是磷酸二酯鍵，被認(rèn)為包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。術(shù)語(yǔ)“編碼氨基酸序列的核苷酸序列”包括彼此為簡(jiǎn)并形式和/或編碼相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。編碼蛋白和/或RNA的核苷酸序列可以包括內(nèi)含子。核酸可以從天然來(lái)源純化，使用重組表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生，并任選進(jìn)行純化、 化學(xué)合成等。在合適的情況下，例如，在化學(xué)合成分子的情況中，核酸可以包含核苷酸類(lèi)似物，如具有化學(xué)修飾的堿基或糖、骨架修飾等的類(lèi)似物。除非另外指出，否則核酸序列以5’ 至3’的方向呈現(xiàn)。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“核酸片段”是指為較長(zhǎng)的核酸序列的一部分的核酸序列。在很多具體實(shí)施方案中，核酸片段包含至少3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)殘基。在一些具體實(shí)施方案中，核酸是天然核苷或包含天然核苷(例如，腺苷、胸苷、鳥(niǎo)苷、胞苷、尿苷、 脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥(niǎo)苷和脫氧胞苷)；核苷類(lèi)似物(例如，2-氨基腺苷、2-硫胸苷、 肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、C-5溴尿苷、C-5氟尿苷、C-5碘尿苷、C-5丙炔基-尿苷、C-5丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脫氮腺苷、7-脫氮鳥(niǎo)苷、8-加氧腺苷、8-加氧鳥(niǎo)苷、0 (6)-甲基鳥(niǎo)苷和2-硫胞苷)；化學(xué)修飾的堿基；生物修飾的堿基(例如，甲基化的堿基)；夾層堿基；修飾的糖(例如，2’ -氟核糖、核糖、2’ -脫氧核糖、阿拉伯糖和己糖)；和/或修飾的磷酸基團(tuán) (例如，硫代磷酸鹽和5’ -N-亞磷酰胺連接)。顆粒如本文中所用的術(shù)語(yǔ)，“顆粒”是指任何具有10微米(μπι)以下直徑的實(shí)體。 通常，顆粒具有最長(zhǎng)為1000納米或更低的尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有300納米或更低的直徑。顆粒包括微米顆粒、納米顆粒和微微米顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，納米顆粒具有200納米或更低的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米顆粒具有 100納米或更低的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米顆粒具有50納米或更低的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米顆粒具有30納米或更低的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米顆粒具有20納米或更低的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米顆粒具有10納米或更低的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，顆?？梢允蔷酆衔锏幕|(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆?？梢允欠蔷酆项w粒(例如，金屬顆粒、量子點(diǎn)、陶瓷、無(wú)機(jī)材料、骨等)。顆粒還可以是脂質(zhì)體和 /或膠束。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“納米顆?！笔侵溉魏尉哂械陀?000納米直徑的顆粒。藥物學(xué)上可接受的賦形劑加入本發(fā)明組合物中以進(jìn)一步幫助組合物施用的藥物學(xué)上無(wú)活性的物質(zhì)。藥物學(xué)上可接受的賦形劑的實(shí)例包括，但不限于，碳酸鈣、磷酸鈣、各種稀釋劑、各種糖和各種類(lèi)型的淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇。弱免疫原性的抗原如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“弱免疫原性的抗原”是指沒(méi)有引發(fā)任何或所需的足夠水平的免疫應(yīng)答的抗原。如本文中所用的“足夠”是指當(dāng)在不含本文描述的納米載體的組合物中施用時(shí)(例如，在不存在納米載體時(shí)作為游離抗原與佐劑混合)，引發(fā)可檢測(cè)的或保護(hù)性免疫應(yīng)答的能力。在一些具體實(shí)施方案中，所需的免疫應(yīng)答是治療或預(yù)防疾病或病癥。在某些具體實(shí)施方案中，所需的免疫應(yīng)答減緩疾病或病癥的一種或多種癥狀。弱免疫原性的抗原包括但不限于自體抗原、小分子和碳水化合物。自體抗原如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“自體抗原”是指針對(duì)動(dòng)物內(nèi)的抗原引發(fā)免疫應(yīng)答時(shí)，動(dòng)物體內(nèi)可以產(chǎn)生自體免疫性(例如，自體免疫疾病)的正常物質(zhì)。自體抗原可以是蛋白或肽、脂蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物或核酸。核酸可以是DNA或RNA。自體抗原包括但不限于酶、結(jié)構(gòu)蛋白、分泌的蛋白、細(xì)胞表面受體和細(xì)胞因子。在一些具體實(shí)施方案中，自體抗原是細(xì)胞因子，并且細(xì)胞因子是TNF、IL-1或IL-6。在一些具體實(shí)施方案中，自體抗原是膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)、負(fù)責(zé)將膽固醇從高密度脂蛋白(HDL)轉(zhuǎn)移到低密度脂蛋白膽固醇 (LDL)的血清蛋白、與阿爾茨海默氏病相關(guān)的Αβ蛋白、加工Αβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶、與動(dòng)脈硬化癥相關(guān)的LDL或HIV-I的共同受體。在一些具體實(shí)施方案中，加工Αβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶是分泌酶。在一些具體實(shí)施方案中，與動(dòng)脈硬化癥相關(guān)的 LDL是氧化的或最小化修飾的。在一些具體實(shí)施方案中，HIV-I的共同受體是CCR5。小分子通常，“小分子”在本領(lǐng)域中被理解為具有低于約2000克/摩爾大小的有機(jī)分子。在一些具體實(shí)施方案中，小分子為低于約1500克/摩爾或低于約1000克/摩爾。 在一些具體實(shí)施方案中，小分子為低于約800克/摩爾或低于約500克/摩爾。在一些具體實(shí)施方案中，小分子是非聚合和/或非寡聚的。在一些具體實(shí)施方案中，小分子不是蛋白、 肽或氨基酸。在一些具體實(shí)施方案中，小分子不是核酸或核苷酸。在一些具體實(shí)施方案中， 小分子不是糖或多糖。特異性結(jié)合如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”是指第一個(gè)和第二個(gè)部分的非共價(jià)物理結(jié)合，其中第一個(gè)和第二個(gè)部分之間的結(jié)合為每個(gè)部分與發(fā)生結(jié)合的環(huán)境中存在的多數(shù)或所有其它部分間的結(jié)合的至少2倍強(qiáng)、至少5倍強(qiáng)、至少10倍強(qiáng)、至少50倍強(qiáng)、至少100倍強(qiáng)，或比之更強(qiáng)烈。如果在所應(yīng)用的條件下，例如在生理?xiàng)l件下，如那些在細(xì)胞內(nèi)或與細(xì)胞存活相一致，平衡解離常數(shù)Kd為IO3M或更低、10_4Μ或更低、10_5Μ或更低、10_6Μ或更低、IQ-7M或更低、IQ-8M或更低、IQ-9M或更低、10_1(ΙΜ或更低、KT11M或更低或10—Μ或更低，則兩個(gè)或更多實(shí)體的結(jié)合可以認(rèn)為是特異性的。在一些具體實(shí)施方案中，特異性結(jié)合可以通過(guò)多個(gè)較弱的相互作用(例如，多個(gè)單獨(dú)的相互作用，其中每個(gè)單獨(dú)的相互作用的特征在于高于10- 的Kd)來(lái)實(shí)現(xiàn)。在一些具體實(shí)施方案中，特異性結(jié)合(其可被稱為“分子識(shí)別”)是兩個(gè)實(shí)體之間的可飽和結(jié)合相互作用，其依賴于每個(gè)實(shí)體上的官能團(tuán)的互補(bǔ)方向。 特異性結(jié)合相互作用的實(shí)例包括適配子-適配子靶向相互作用、抗體-抗原相互作用、抗生物素蛋白-生物素相互作用、配體-受體相互作用、金屬-螯合劑相互作用、互補(bǔ)核酸之間的雜交等。患者如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“患者”或“病人”是指可以施用本發(fā)明組合物的任何生物體，例如，用于實(shí)驗(yàn)、診斷和/或治療目的。典型的患者包括動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物， 如非人靈長(zhǎng)類(lèi)和人；禽類(lèi)；家養(yǎng)或家畜，如貓、狗、綿羊、山羊、牛、馬和豬；實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物，如小鼠、大鼠和豚鼠；兔子；魚(yú)；爬行動(dòng)物；動(dòng)物園和野生動(dòng)物)和/或植物。通常，“患者”是動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物，如人和靈長(zhǎng)類(lèi)；等等?；加小盎加小奔膊?、失調(diào)和/或病癥的個(gè)體已經(jīng)被診斷、可能被診斷或表現(xiàn)出疾病、失調(diào)和/或病癥的一個(gè)或多個(gè)癥狀。易于患上“易于患上”疾病、失調(diào)和/或病癥的個(gè)體尚未被診斷患有和/或可能未表現(xiàn)出疾病、失調(diào)和/或病癥的癥狀。在一些具體實(shí)施方案中，疾病、失調(diào)和/或病癥與微生物感染(例如，細(xì)菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生蟲(chóng)感染等)相關(guān)。在一些具體實(shí)施方案中，易于患上微生物感染的個(gè)體可能暴露于微生物(例如，通過(guò)攝取、吸入、身體接觸等)。在一些具體實(shí)施方案中，易于患上微生物感染的個(gè)體可能暴露于被微生物感染的個(gè)體。在一些具體實(shí)施方案中，易于患上微生物感染的個(gè)體是在微生物流行地點(diǎn)的個(gè)體(例如，旅行到微生物流行地點(diǎn)的個(gè)體)。在一些具體實(shí)施方案中，易于患上疾病、失調(diào)和/或病癥的個(gè)體將會(huì)患上疾病、失調(diào)和/或病癥。在一些具體實(shí)施方案中，易于患上疾病、失調(diào)和/或病癥的個(gè)體將不會(huì)患上疾病、失調(diào)和/或病癥。在一些具體實(shí)施方案中，患者患有或易于患上癌癥、傳染性疾病、非自體免疫代謝性疾病或退行性疾病或上癮。在一些具體實(shí)施方案中，患者患有或易于患上細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、寄生蟲(chóng)或病毒感染。這樣的傳染的誘因可以是本文中提供的任何一種生物體。在一些具體實(shí)施方案中，患者患有或易于患上結(jié)核、 瘧疾、利什曼病、幽門(mén)螺旋桿菌(H. pylori)、葡萄球菌Staphylococcus)感染或沙門(mén)氏菌 (Salmonella)感染。在一些具體實(shí)施方案中，患者患有或易于患上流感。在一些具體實(shí)施方案中，患者患有或易于患上自體免疫疾病。合成納米載體“合成納米載體”意思是未在自然界中發(fā)現(xiàn)的并且至少具有低于或等于5微米大小尺寸的不連續(xù)物體。特別將白蛋白納米顆粒包括為合成的納米載體。根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體沒(méi)有引起實(shí)質(zhì)性的載體效應(yīng)；優(yōu)選它們沒(méi)有引起載體效應(yīng)。在某些優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，將合成納米載體進(jìn)行修飾以降低或消除載體效應(yīng)。例如，這可以通過(guò)將各種材料(例如，聚乙二醇)與合成納米載體偶聯(lián)來(lái)實(shí)現(xiàn)，以降低合成納米載體的免疫原性性質(zhì)。合成納米載體可以是，但不限于，一個(gè)或多個(gè)基于脂質(zhì)的納米載體、聚合納米顆粒、金屬納米顆粒、基于表面活性劑的乳液、樹(shù)狀聚合物、巴克球(buckyball)、納米線、病毒樣顆粒、基于肽或蛋白的顆粒(如白蛋白納米顆粒)和/或使用納米材料的組合物(如， 脂質(zhì)-聚合物納米顆粒)產(chǎn)生的納米顆粒。合成納米載體可以是各種不同的形狀，包括但不限于，球形、立方體、金字塔形、長(zhǎng)方形、圓柱形、環(huán)形等。根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體包含一個(gè)或多個(gè)表面。適用于本發(fā)明實(shí)踐的示例性合成納米載體包含=(I)Gref等的US專利 5，543, 158中公開(kāi)的生物可降解納米顆粒，O) Saltzman等的公開(kāi)US專利申請(qǐng)20060002852 的聚合納米顆粒，或⑷DeSimone等的公開(kāi)US專利申請(qǐng)20090(^8910的平板印刷構(gòu)建的納米顆粒。根據(jù)本發(fā)明的具有等于或低于約100納米最小尺寸(優(yōu)選等于或低于約100納米)的合成納米載體不包含具有激活補(bǔ)體的羥基的表面，或可替換地包含基本上由不是激活補(bǔ)體的羥基的部分組成的表面。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的具有等于或低于約100納米最小尺寸(優(yōu)選等于或低于約100納米)的合成納米載體不包含基本上激活補(bǔ)體的表面，或可替換地包含基本上由基本上不激活補(bǔ)體的部分組成的表面。在更優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的具有等于或低于約100納米最小尺寸(優(yōu)選等于或低于約 100納米)的合成納米載體不包含激活補(bǔ)體的表面，或可替換地包含基本上由不激活補(bǔ)體的部分組成的表面。術(shù)語(yǔ)“納米載體”、“合成納米載體”及其變形通常可以在本文中互換使用。T細(xì)胞抗原如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“T細(xì)胞抗原”是指任何由T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答識(shí)別并激發(fā)的抗原(例如，由T細(xì)胞上的T細(xì)胞受體通過(guò)結(jié)合至主要組織相容性復(fù)合體分子(MHC)的抗原或其一部分的遞呈而被特異性識(shí)別的抗原)。在一些具體實(shí)施方案中，是T 細(xì)胞抗原的抗原也是B細(xì)胞抗原。在其它具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原不同時(shí)是B細(xì)胞抗原。T細(xì)胞抗原通常是蛋白或肽。T細(xì)胞抗原可以是刺激CD8+T細(xì)胞應(yīng)答、刺激CD4+T細(xì)胞應(yīng)答或同時(shí)刺激二者的抗原。因此，在一些具體實(shí)施方案中，納米載體能夠有效地同時(shí)刺激兩種類(lèi)型的應(yīng)答。目標(biāo)如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“目標(biāo)”或“標(biāo)記物”是指能夠特異性結(jié)合至特定靶向部分的任何實(shí)體。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)與一種或多種特定的組織類(lèi)型特異性結(jié)合。 在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)與一種或多種特定的細(xì)胞類(lèi)型特異性結(jié)合。例如，細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物通常比參考細(xì)胞群體中的細(xì)胞類(lèi)型的表達(dá)水平高至少2倍。在一些具體實(shí)施方案中，細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物的存在水平比參考群體中的平均表達(dá)高至少3倍、至少4倍、 至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。對(duì)細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物的檢測(cè)或測(cè)量使得可能將一種或多種目標(biāo)細(xì)胞類(lèi)型從很多、大部分或所有其它細(xì)胞類(lèi)型中區(qū)分開(kāi)。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)包含蛋白、 碳水化合物、脂質(zhì)和/或核酸，如本文中所述。靶向的如果特異性結(jié)合目標(biāo)，對(duì)于本文描述的目的，則認(rèn)為該物質(zhì)是“靶向的”。 在一些具體實(shí)施方案中，在嚴(yán)格條件下靶向部分特異性結(jié)合目標(biāo)。如果靶向部分特異性結(jié)合目標(biāo)，從而將完整納米載體傳送至特異性器官、組織、細(xì)胞和/或亞細(xì)胞位點(diǎn)，則認(rèn)為包含靶向部分的本發(fā)明的納米載體，如疫苗納米載體，是“靶向的”。靶向部分如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“靶向部分”和“高親和性靶向部分”可互換使用， 并且指的是任何與細(xì)胞的成分結(jié)合的部分。通常，靶向部分與細(xì)胞成分的結(jié)合將是高親和性結(jié)合相互作用。除了免疫特征表面上存在的并提供靶向(和高親合力結(jié)合)APC的多個(gè)部分，本發(fā)明的納米載體可以進(jìn)一步包含一個(gè)或多個(gè)其他靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分與細(xì)胞的成分特異性結(jié)合。這樣的成分被稱為“目標(biāo)”或““標(biāo)記物”。靶向部分可以是多肽、糖蛋白、核酸、小分子、碳水化合物、脂質(zhì)等。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是抗體或其特征性部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是受體或其特征性部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是配體或其特征性部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分是與細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物結(jié)合的核酸靶向部分(例如，適配子)。在一些具體實(shí)施方案中， 靶向部分是小分子。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分位于納米載體的表面上。在其它具體實(shí)施方案中，靶向部分包埋于納米載體內(nèi)。在其它具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體共價(jià)結(jié)合。在其它具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體非共價(jià)結(jié)合。在其它具體實(shí)施方案中，靶向部分結(jié)合細(xì)胞表面上表達(dá)的受體。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分結(jié)合可溶性受體。在一些具體實(shí)施方案中，可溶性受體是補(bǔ)體蛋白或預(yù)先存在的抗體。在其它具體實(shí)施方案中，靶向部分用于將納米載體傳送至抗原呈遞細(xì)胞、T細(xì)胞或B細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。 在其它具體實(shí)施方案中，巨噬細(xì)胞是被膜下竇巨噬細(xì)胞。在其它具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是樹(shù)突細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是濾泡樹(shù)突細(xì)胞。靶向部分的特異性非限制性實(shí)例包括與CDllb、CD169、甘露糖受體、DEC-205、CDllc、CD21/CD35、CX3CR1 或Fc受體結(jié)合的分子。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合上述任何一個(gè)的分子是抗體或其抗原結(jié)合片段(例如，抗-CD169抗體)。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合Fc受體的分子是包含免疫球蛋白(例如，IgG)的Fc部分的分子。在其它具體實(shí)施方案中，免疫球蛋白的Fc部分是人Fc部分。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合CX3CR1的分子是CX3CLl(fractalkine)。結(jié)合⑶169的靶向部分包括抗-⑶169抗體和⑶169的配體，例如，唾液酸化的⑶227、⑶43、 ⑶206或這些配體的保持結(jié)合功能的部分，例如可溶性部分。治療有效量如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“治療有效量”意思是向患有或易于患上疾病、 失調(diào)和/或病癥的患者施用時(shí)，對(duì)于疾病、失調(diào)和/或病癥足以治療、減輕、改善、緩解、減輕其征狀、預(yù)防、延遲其發(fā)作、抑制其進(jìn)展，減輕其嚴(yán)重程度和/或降低其發(fā)生率的治療性、預(yù)防性和/或診斷性試劑(例如本發(fā)明的疫苗納米載體)的量。該術(shù)語(yǔ)還旨在指本文提供的調(diào)節(jié)患者的免疫應(yīng)答的納米載體或其組合物的量。治療劑如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“治療劑”是指向患者施用時(shí)具有治療性、預(yù)防性和 /或診斷性效應(yīng)和/或引發(fā)所需生物學(xué)和/或藥理學(xué)效應(yīng)的任何試劑。治療如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“治療”是指特別的疾病、失調(diào)和/或病癥的一個(gè)或多個(gè)癥狀或特征的部分或完全地減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進(jìn)展，減輕其嚴(yán)重程度和/或降低其發(fā)生率。例如，“治療”微生物感染可以指的是抑制微生物的存活、生長(zhǎng)和/或傳播?？梢詾榱私档桶l(fā)展與疾病、失調(diào)和/或病癥相關(guān)的病理的風(fēng)險(xiǎn)的目的而向未表現(xiàn)出疾病、失調(diào)和/或病癥的跡象的患者和/或只表現(xiàn)出疾病、失調(diào)和/或病癥的早期跡象的患者施加治療。在一些具體實(shí)施方案中，治療包括向患者傳送本發(fā)明的疫苗納米載體。通用T細(xì)胞抗原如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“通用T細(xì)胞抗原”是指能夠促進(jìn)T細(xì)胞幫助并增強(qiáng)針對(duì)完全不相關(guān)抗原的免疫應(yīng)答的T細(xì)胞抗原。通用T細(xì)胞抗原包括破傷風(fēng)類(lèi)毒素，以及源自破傷風(fēng)類(lèi)毒素、EB病毒或流感病毒的一種或多種肽。通用T細(xì)胞抗原還包括流感病毒的成分，如紅血球凝聚素、神經(jīng)氨糖酸苷酶或核蛋白，或一種或多種源自其的肽。疫苗納米載體如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“疫苗納米載體”是指包含至少一種免疫調(diào)節(jié)劑或免疫刺激劑的合成納米載體。在某些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包括至少兩種類(lèi)型免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是抗原，并且疫苗納米載體包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多種抗原。不同的抗原可以是完全不同的抗原分子或源自完全不同的抗原分子，或者不同的抗原可以是來(lái)自相同的抗原分子的不同表位。在其它具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)來(lái)自相同抗原分子的不同表位。疫苗納米載體可以是任何形式的顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體能夠刺激T細(xì)胞和/或B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答。在其它具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體能夠增強(qiáng)、抑制、引導(dǎo)或重引導(dǎo)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，本領(lǐng)域可利用的任何試驗(yàn)可用于確定T細(xì)胞和/或B細(xì)胞是否已經(jīng)被刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)監(jiān)控抗原誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生、抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞的增殖和/或抗原誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)變化來(lái)檢驗(yàn)T細(xì)胞刺激。 在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)監(jiān)控抗體效價(jià)、抗體親和性、中和檢驗(yàn)中抗體的表現(xiàn)、類(lèi)別轉(zhuǎn)換重組、抗原特異性抗體的親和成熟、記憶B細(xì)胞的發(fā)育、長(zhǎng)生血漿細(xì)胞(其能夠長(zhǎng)時(shí)間地產(chǎn)生大量的高親和性抗體)的發(fā)育、生發(fā)中心的反應(yīng)和/或中和檢驗(yàn)中抗體的表現(xiàn)來(lái)檢驗(yàn)B細(xì)胞的刺激。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體還包含至少一個(gè)能夠幫助將疫苗納米載體傳送至患者內(nèi)的特定目標(biāo)(例如，器官、組織、細(xì)胞和/或亞細(xì)胞位點(diǎn))的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體還包含至少一種能夠幫助刺激T細(xì)胞和/或B 細(xì)胞中免疫應(yīng)答的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體還包含至少一個(gè)允許可調(diào)的膜堅(jiān)固性和可控的脂質(zhì)體穩(wěn)定性的納米顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含脂質(zhì)、兩性化合物、聚合物、糖、聚合基質(zhì)和/或非聚合顆粒。載體效應(yīng)建立對(duì)合成納米載體的免疫應(yīng)答，而不是對(duì)期望適應(yīng)性免疫應(yīng)答的抗原。由于其化學(xué)組成或結(jié)構(gòu)，合成納米載體的材料能夠刺激強(qiáng)烈免疫應(yīng)答時(shí)，可以產(chǎn)生載體效應(yīng)。水溶性的無(wú)粘附性聚合物如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“水溶性的無(wú)粘附性聚合物”是指在水中可溶并且可賦予降低的生物垢特性的聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，水溶性的無(wú)粘附性聚合物是聚乙二醇、聚環(huán)氧乙烷、聚烷撐二醇和聚亞烷基氧化物。
疫苗疫苗接種通常本質(zhì)上是被動(dòng)或主動(dòng)的。通常，主動(dòng)疫苗接種包括將患者的免疫系統(tǒng)暴露于一種或多種被識(shí)別為不需要、不想要和/或異源并且激發(fā)內(nèi)源性免疫應(yīng)答的試劑，這些免疫應(yīng)答引起抗原特異性原態(tài)淋巴細(xì)胞的激活，然后產(chǎn)生分泌抗體的B細(xì)胞或抗原特異性效應(yīng)和記憶T細(xì)胞或二者。這種方式可以引起長(zhǎng)期的保護(hù)性免疫力，其可通過(guò)重新暴露于相同的抗原性材料而不時(shí)地被增強(qiáng)。針對(duì)主動(dòng)免疫接種的成功免疫應(yīng)答的長(zhǎng)期性的前景使得該策略在多數(shù)臨床實(shí)踐中比被動(dòng)免疫接種更可取，在被動(dòng)免疫接種中，接受者被注射預(yù)制的抗體或抗原特異性效應(yīng)淋巴細(xì)胞，這產(chǎn)生迅速的特別的保護(hù)，但通常不會(huì)建立持久性免疫力。在人體中正在應(yīng)用或已經(jīng)應(yīng)用了大量多種的疫苗制劑。人體中最常見(jiàn)的施用途徑是肌肉內(nèi)(i.m.)注射，但是疫苗還可以通過(guò)口服、鼻內(nèi)、皮下、吸入或靜脈內(nèi)使用。在多數(shù)情況下，源自疫苗的抗原最初被遞呈至區(qū)域淋巴結(jié)中的天然淋巴細(xì)胞。目前一些針對(duì)例如微生物病原體的疫苗由活的減毒的微生物或微生物的非毒性變體菌株或殺滅的或另外滅活的生物體組成。其它疫苗利用或多或少的純化的病原體裂解物的成分，如表面碳水化合物或重組的源自病原體的蛋白，其有時(shí)與其它分子融合，特別是可賦予輔助活性的蛋白。
使用活的減毒的或滅活的病原體的疫苗通常產(chǎn)生有力的免疫應(yīng)答，但是它們的使用具有局限性。例如，活的疫苗菌株有時(shí)候會(huì)引起傳染性病狀，特別是施用于免疫受損的接受者時(shí)。此外，很多病原體，特別是病毒，在它們的基因組中持續(xù)進(jìn)行迅速的變異，這允許它們逃脫針對(duì)抗原性不同疫苗菌株的免疫應(yīng)答。但是，大部分或所有的病原體被認(rèn)為具有不容易突變的特定抗原性決定簇，因?yàn)樗鼈兣c必需的功能相關(guān)。針對(duì)這些保守性表位(而不是更可變的、非必需的表位)的抗體能夠提供抵抗高度突變的病毒的保護(hù)(Baki等，2000， Nat. Med.，6 :200 ；通過(guò)引用并入本文中)。基于活的或殺滅的完整病原體的疫苗不一定促進(jìn)對(duì)這些關(guān)鍵表位的識(shí)別，但是可能實(shí)質(zhì)上“迷惑”免疫系統(tǒng)將其攻擊聚集在高度可變的決定簇。因此，本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)模擬病毒顆粒的高免疫原性顆粒性質(zhì)但呈現(xiàn)出選擇性的必需的不可變表位的工程化疫苗納米載體能夠產(chǎn)生比完整微生物有力得多且“防逃脫的” 的中和抗體和效應(yīng)T細(xì)胞應(yīng)答。仍然尚未完全了解疫苗刺激引流淋巴結(jié)中的抗體應(yīng)答(或不能這樣)的精確機(jī)理。B和T細(xì)胞最初被隔絕在不同的解剖區(qū)域，分別為位于表面的B濾泡和周?chē)母逼べ|(zhì)區(qū)和深皮層。在抗原激發(fā)時(shí)，濾泡中的抗原特異性B細(xì)胞和T細(xì)胞區(qū)域中的CD4T細(xì)胞被激活，然后朝著兩個(gè)隔間之間更寬的區(qū)域遷移。吞噬了淋巴攜帶的抗原的B細(xì)胞加工所獲得的材料并開(kāi)始遞呈Π類(lèi)MHC表面分子中的抗原性肽，然后由激活的CD4T細(xì)胞(Tfh細(xì)胞) 識(shí)別?？乖R(shí)別允許Tfh細(xì)胞向B細(xì)胞提供幫助，這構(gòu)成有力的存活信號(hào)并激發(fā)B濾泡內(nèi)生發(fā)中心(GC)的形成。GC反應(yīng)促進(jìn)類(lèi)別轉(zhuǎn)換重組、抗原特異性抗體的親和成熟，和記憶B細(xì)胞與長(zhǎng)生血漿細(xì)胞(其能夠長(zhǎng)時(shí)間地產(chǎn)生大量的高親和性抗體)的形成。因此，本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)疫苗納米載體可以具有允許抗原性材料被B和T細(xì)胞同時(shí)有效識(shí)別并誘導(dǎo)有力的GC反應(yīng)的成分(圖1)。本發(fā)明描述了用來(lái)開(kāi)發(fā)用于疫苗傳送的疫苗納米載體的系統(tǒng)，其能夠克服目前疫苗技術(shù)的上述這些局限性。本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)淋巴攜帶的病毒顆粒(其具有數(shù)十至數(shù)百納米的直徑并誘導(dǎo)有力的細(xì)胞和抗體應(yīng)答)被捕獲并被保留在引流淋巴結(jié)的被膜下竇的巨噬細(xì)胞(即，被膜下竇巨噬細(xì)胞，縮寫(xiě)為SCS-Mph)的表面上。這些巨噬細(xì)胞參與完整的病毒顆粒至濾泡B細(xì)胞的有效的早期遞呈。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體模擬病毒顆粒并靶向SCS-Mph。如實(shí)施例1所示，在皮下注射Cy5包被的聚(乳酸羥基乙酸) (PLGA)納米顆粒(50納米-150納米)(其被單層脂和聚乙二醇表面穩(wěn)定化)后，注射的納米顆粒容易地進(jìn)入淋巴并結(jié)合在引流淋巴結(jié)的被膜下竇，與淋巴攜帶的病毒相似。攜帶刺激B細(xì)胞和/或T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)劑的相似納米載體在免疫接種患者中是特別有用的。因此，本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)攜帶免疫調(diào)節(jié)劑的納米載體(例如，淋巴攜帶的病毒大小的納米載體)能夠在淋巴結(jié)中被識(shí)別，就像它們是病毒一樣，并且可以激發(fā)有力的免疫應(yīng)答，例如，顆粒包括由B細(xì)胞和/或T細(xì)胞識(shí)別的免疫調(diào)節(jié)劑時(shí)。通過(guò)在表面上攜帶免疫調(diào)節(jié)劑和/或在內(nèi)部裝載相似或不同的免疫調(diào)節(jié)劑，納米載體能夠?qū)⑦@些免疫調(diào)節(jié)劑同時(shí)傳送到免疫系統(tǒng)的不同細(xì)胞并刺激它們。在某些具體實(shí)施方案中，存在于納米載體表面上的免疫調(diào)節(jié)劑刺激B細(xì)胞，包埋于納米載體內(nèi)部的免疫調(diào)節(jié)劑在淋巴組織內(nèi)(和通過(guò)激活后的B細(xì)胞)被抗原呈遞細(xì)胞(APC)，如樹(shù)突細(xì)胞(DC)，加工并呈遞給T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)用靶向部分(例如，抗體或其片段、肽或多肽、Affibody煙、Nanobody 、AdNectin 、Avimer 、適配子、Spiegelmer 、小分子、脂質(zhì)、碳水化合物等)修飾納米載體的表面，納米載體能夠選擇性地將免疫調(diào)節(jié)劑傳送至特異性抗原呈遞細(xì)胞，如DC、SCS-Mph、FDC、T細(xì)胞、B細(xì)胞和/或其組合。納米載體可以是，但不限于，一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)納米顆粒、聚合納米顆粒、金屬納米顆粒、基于表面活性劑的乳劑、樹(shù)狀聚合物和/或使用納米材料的組合(例如脂質(zhì)-聚合物納米顆粒)產(chǎn)生的納米顆粒。在標(biāo)題為“疫苗納米載體”的部分中進(jìn)一步詳細(xì)描述了疫苗納米載體。 T細(xì)胞本發(fā)明提供了用于將例如免疫調(diào)節(jié)劑傳送至免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的疫苗納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種能被傳送至APC的免疫調(diào)節(jié)劑，然后APC 加工該免疫調(diào)節(jié)劑并將其輸送至T細(xì)胞。專職APC可以非常有效地使抗原內(nèi)在化，通過(guò)吞噬或通過(guò)內(nèi)吞，然后展示抗原的片段，與APC膜上的II類(lèi)主要組織相容性復(fù)合體(II類(lèi)MHC)分子或I類(lèi)MHC分子相結(jié)合。 ⑶4T細(xì)胞識(shí)別APC膜上的抗原-II類(lèi)MHC分子復(fù)合體并與之相互作用，而⑶8T細(xì)胞識(shí)別抗原-I類(lèi)MHC分子復(fù)合體并與之相互作用。然后APC產(chǎn)生另外的共刺激信號(hào)以及調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子，從而引起T細(xì)胞的激活。
免疫調(diào)節(jié)劑本發(fā)明提供了包含一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑的疫苗納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，包含一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑的本發(fā)明的納米載體被用作疫苗。在一些具體實(shí)施方案中， 免疫調(diào)節(jié)劑可以包含分離和/或重組的蛋白或肽、碳水化合物、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、滅活的生物體和病毒、死的生物體和病毒、遺傳改變的生物體或病毒，和細(xì)胞提取物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包含核酸、碳水化合物、脂質(zhì)和/或小分子。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是激發(fā)免疫應(yīng)答的試劑。在其他具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是編碼蛋白或肽的多核苷酸，蛋白或肽被表達(dá)時(shí)，免疫應(yīng)答被激發(fā)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是抗原。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是蛋白或肽。在一些具體實(shí)施方案中，將免疫調(diào)節(jié)劑用于疫苗。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是源自病原體的任何蛋白和/或其它抗原。病原體可以是病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、寄生蟲(chóng)等。在一些具體實(shí)施方案中， 免疫調(diào)節(jié)劑可以包括細(xì)菌生物體的抗原，如包柔氏螺旋體屬(Borrelia)物種、炭疽芽胞桿菌(Bacillus anthracis)、伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)、百日咳 Bf il ff (Bordetella pertussis)、胃曲木干胃(Camphylobacter jejuni) > ^ J^ # M (Chlamydia)物種、鸚鵡熱衣原體(Chlamydial psittaci)、生殖道沙眼衣原體(Chlamydial trachomatis)、梭菌屬(Clostridium)物種、破傷風(fēng)梭菌(Clostridium tetani)、內(nèi)毒桿菌(Clostridium botulinum)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、白
木干胃(Corynebacterium diphtheriae) > M 3 T # M (Coxiella) 禾中、J 王求胃 M (Enterococcus)物種、埃立克體屬(Erlichia)物種、大腸桿菌(Escherichia coli)、土拉熱弗郎西絲菌(Francisella tularensis)、嗜血桿菌屬(Haemophilus)物種、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、苜I(mǎi)j流感嗜血桿菌(Haemophilus parainfluenzae) > 乳酸菌屬(Lactobacillus)物種、軍團(tuán)桿菌屬(Legionella)物種、嗜肺軍團(tuán)菌 (Legionella pneumophila)、問(wèn)號(hào)鉤端螺方寵體(Leptospirosis interrogans)、李斯特菌屬(Listeria)物種、單核增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、分支桿菌屬(Mycobacterium)物種、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻風(fēng)分枝桿菌(Mycobacterium leprae)、支原體屬(Mycoplasma)物禾中、月市炎支原體(Mycoplasma pneumoniae)、奈瑟菌屬(Neisseria)物禾中、腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、 淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、肺炎球菌屬(Pneumococcus)物種、假單胞菌屬 (Pseudomonas)物禾中、綠胺桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、沙門(mén)氏菌屬(Salmonella) 物種、傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonella typhi)、鼠傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonella enterica)、 立克次氏體屬(Rickettsia)物種、落磯山熱立克次體(Rickettsia ricketsii)、地方性斑疹傷寒立克次氏體(Rickettsia typhi)、志賀氏桿菌屬(Shigella)物種、葡萄狀球菌屬(Staphylococcus)物種、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus)物種、鏈球菌屬(Streptococcus)物禾中、月市炎鏈球菌(Streptococccus pnuemoniae)、胺鏈球菌(Streptococcus pyrogenes)、變禾中鏈球菌(Streptococcus mutans)、密螺方寵體屬 (Treponema)物種、梅毒螺旋體(TMponema pallidum)、弧菌屬(Vibrio)物種、霍亂弧菌 (Vibrio cholerae)、鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis)等。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包括病毒生物體的抗原，如痘病毒、小痘病毒(天花)、埃博拉病毒、嗜肝DNA病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹(麻疹病毒)、人免疫缺陷病毒(HIV)、人乳頭瘤病毒(HPV)、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒1和2、細(xì)胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、正粘病毒、乳頭瘤病毒、細(xì)小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、腮腺炎、狂犬病、呼吸道腸道病毒、風(fēng)疹病毒、外衣病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、柯薩奇病毒、馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒和戊肝病毒等。病毒生物體包括為dsDNA病毒、ssDNA病毒、dsRNA病毒、(+) ssRNA病毒(-)sRNA病毒、ssRNA-RT病毒和dsDNA-RT病毒的那些。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包括真菌、原生動(dòng)物和/或寄生蟲(chóng)生物的抗原，如曲霉屬(Aspergillus)物種、假絲酵母屬(Candida)物種、白色念珠菌(Candida albicans)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)、隱球酵母屬(Cryptococcus)物種、新型隱球酵母(Cryptococcus neoformans)、溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoeba histolytica)、莢膜組織胞漿菌(Histoplasma capsulatum)、利什曼蟲(chóng)屬(Leishmania)物種、星形諾卡氏菌 (Nocardia asteroides) 、惡性瘧原蟲(chóng)(Plasmodium falciparum)、剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)、陰道毛滴蟲(chóng)(Trichomonas vaginalis)、弓形體屬CToxoplasma)物種、布氏錐蟲(chóng) (Trypanosoma brucei) >M^Kftifil 1S-Jil (Schistosoma mansoni)等。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包括HCV的El和/或E2蛋白。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包括HIV的gpl20。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包括流感病毒的紅血球凝聚素和/或神經(jīng)氨糖酸苷酶。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包括肺炎鏈球菌的肺炎球菌多糖或家族1和/或家族2PspA或金黃色葡萄球菌的5型和8型莢膜多糖或識(shí)別粘附性基質(zhì)分子的微生物表面成分。在一些具體實(shí)施方案中， 免疫調(diào)節(jié)劑可以包括白色念珠菌的甘露聚糖或新型隱球酵母的隱球菌莢膜多糖。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包括惡性瘧原蟲(chóng)的PfEMPl或其它在瘧原蟲(chóng)感染的紅血球上表達(dá)的源自寄生蟲(chóng)的抗原或剛地弓形蟲(chóng)的GRA7。本文中所述的任何抗原均可以是完全殺滅的生物體、肽、蛋白、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、編碼蛋白或肽的核酸、碳水化合物、小分子或其組合的形式。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑源自已經(jīng)存在至少一種疫苗的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑源自尚未開(kāi)發(fā)疫苗的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體的所有免疫調(diào)節(jié)劑彼此相同。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含許多不同的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含多個(gè)單獨(dú)的免疫調(diào)節(jié)劑，它們均是相同的。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體只包含一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體只包含兩種不同類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑。 在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上不同類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含3、4、5、6、7、8、9、10或更多種不同類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，二者源自同一個(gè)屬的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，二者源自同一個(gè)屬和種的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，二者源自同一個(gè)屬、種和株的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，二者源自同一個(gè)克隆的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其均源自同一個(gè)屬的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其均源自同一個(gè)屬和種的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其均源自同一個(gè)屬、種和株的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其均源自同一個(gè)克隆的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種或更多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其均源自同一個(gè)屬的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種或更多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其均源自同一個(gè)屬和種的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種或更多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其均源自同一個(gè)屬、種和株的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種或更多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其源自同一個(gè)種的不同株的微生物。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種或更多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其源自同一個(gè)屬的不同種的微生物。在其它具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種或更多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，每個(gè)源自不同屬的微生物。 在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其同時(shí)刺激B 細(xì)胞和T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其中第一種免疫調(diào)節(jié)劑刺激B細(xì)胞，第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激T細(xì)胞。在某些具體實(shí)施方案中，一種或兩種試劑可以刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其中一種或多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激B細(xì)胞，并且一種或多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激T細(xì)胞。 在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種類(lèi)型免疫調(diào)節(jié)劑，其與疫苗納米載體的外表面結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是共價(jià)的。在一些具體實(shí)施方案中， 共價(jià)結(jié)合由一個(gè)或多個(gè)連接物介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是非共價(jià)的。在一些具體實(shí)施方案中，非共價(jià)結(jié)合由電荷相互作用、親和性相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水性相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵結(jié)合相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合所介導(dǎo)。對(duì)于免疫調(diào)節(jié)試劑如何與疫苗納米載體結(jié)合的更詳細(xì)描述，請(qǐng)參見(jiàn)以下標(biāo)題為“疫苗納米載體的產(chǎn)生”的部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包括脂膜(例如，脂雙層、脂單層等)。至少一種免疫調(diào)節(jié)劑可以與脂膜結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種免疫調(diào)節(jié)劑包埋于脂膜內(nèi)。一些具體實(shí)施方案中，至少一種免疫調(diào)節(jié)劑包埋在脂雙層的腔內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種與脂膜的內(nèi)表面結(jié)合的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種免疫調(diào)節(jié)劑包埋于疫苗納米載體的脂膜內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以位于疫苗納米載體的多個(gè)位點(diǎn)。例如，第一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以嵌入脂膜內(nèi)，第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以包埋于疫苗納米載體的脂膜內(nèi)。再舉另一個(gè)實(shí)例，第一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以與脂膜的外表面結(jié)合，第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以與疫苗納米載體的脂膜的內(nèi)表面結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，第一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以嵌于疫苗納米載體的脂雙層的腔內(nèi)，并且脂雙層可以包埋聚合基質(zhì)，第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以分布在整個(gè)所述聚合基質(zhì)中。在一些具體實(shí)施方案中，第一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑和第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以位于疫苗納米載體的相同位點(diǎn)(例如，它們都與疫苗納米載體的外表面結(jié)合；它們都包埋于疫苗納米載體內(nèi)；等)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包括聚合物(例如，聚合物核心)。至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以與聚合物結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑嵌入聚合物內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種類(lèi)型與聚合物的內(nèi)表面結(jié)合的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑包埋于疫苗納米載體的聚合物內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以位于疫苗納米載體的多個(gè)位點(diǎn)。例如，第一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以嵌于聚合物內(nèi)，而第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以包埋于環(huán)繞疫苗納米載體的聚合物核心的脂膜內(nèi)。再舉另一個(gè)實(shí)例，第一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以與聚合物的外表面結(jié)合，而第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑可以嵌于疫苗納米載體的聚合物內(nèi)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到之前的實(shí)例只是多種免疫調(diào)節(jié)劑可以與疫苗納米載體的不同位點(diǎn)結(jié)合的很多不同方式的代表。多種免疫調(diào)節(jié)劑可以位于疫苗納米載體的任意位點(diǎn)的組合。另外，之前的實(shí)例也適用于納米載體的其它試劑(例如，免疫刺激劑)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是T細(xì)胞抗原，并且T細(xì)胞抗原源自疫苗接種所要針對(duì)的相同病原體。在這種情況下，最初刺激少量的天然T細(xì)胞以產(chǎn)生病原體特異性效應(yīng)和記憶T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，抗原可以取自不相關(guān)的來(lái)源，例如對(duì)其已經(jīng)存在廣泛的免疫力的傳染劑(例如，破傷風(fēng)類(lèi)毒素或流感病毒的常見(jiàn)成分，例如紅血球凝聚素、神經(jīng)氨糖酸苷酶或核蛋白)。在后一種情況下，疫苗利用針對(duì)以前的感染或疫苗接種而產(chǎn)生的記憶T細(xì)胞的存在。記憶細(xì)胞通常對(duì)抗原重新激發(fā)反應(yīng)更加迅速并且有力，因此，可以提供幫助B細(xì)胞的優(yōu)越來(lái)源。其它的T細(xì)胞抗原包括，但不限于，退行性疾病抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、同種抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、接觸敏感劑、半抗原、異種抗原或代謝性疾病酶或其酶產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，傳染病抗原是病毒抗原，其包括源自本文中描述的任何病毒的任何抗原。T細(xì)胞抗原的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，將T細(xì)胞抗原作為完整蛋白整合至納米載體中。在一些具體實(shí)施方案中，將T細(xì)胞抗原作為修飾的蛋白整合至納米載體中。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原作為突變的蛋白整合至納米載體中。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原作為重疊肽的集合來(lái)提供，其可以增強(qiáng)抗原整合至II類(lèi)MHC復(fù)合體中，從而進(jìn)一步促進(jìn)輔助應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原作為非重疊肽的集合來(lái)提供，其可以增強(qiáng)抗原整合至II類(lèi)MHC復(fù)合體中，從而進(jìn)一步促進(jìn)輔助應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞抗原作為編碼抗原的核酸來(lái)提供。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體，如疫苗納米載體，包含低于90重量％，低于75重量％、低于50重量％、低于40重量％、低于30重量％、低于20重量％、低于15重量％、低于10重量％、低于5重量％、低于1重量％或低于0. 5重量％的免疫調(diào)節(jié)劑。
靶向部分在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體包含一個(gè)或多個(gè)靶向部分。在本發(fā)明的某些具體實(shí)施方案中，納米載體與一個(gè)或多個(gè)靶向部分結(jié)合。靶向部分可以是與器官、組織、細(xì)胞、胞外基質(zhì)和/或亞細(xì)胞位點(diǎn)相關(guān)成分結(jié)合的任何部分。在一些具體實(shí)施方案中， 將這樣的成分稱為“目標(biāo)”或“標(biāo)記物”，這些在以下進(jìn)一步詳細(xì)討論。靶向部分可以是核酸、多肽、糖蛋白、碳水化合物、脂質(zhì)、小分子等。例如，靶向部分可以是結(jié)合細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物的核酸靶向部分(例如，適配子，Spiegelmer· ，等)。 通常，適配子是結(jié)合特定目標(biāo)(如，多肽)的寡核苷酸(例如，DNA、RNA或其類(lèi)似物或衍生物)。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分可以是細(xì)胞表面受體的天然產(chǎn)生的或合成的配體， 例如生長(zhǎng)因子、激素、LDL、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等。靶向部分可以是抗體，該術(shù)語(yǔ)旨在包括抗體片段、抗體的特征性部分、單鏈抗體等?？梢允褂煤铣傻慕Y(jié)合蛋白，如Affibodies 、Nanobodies , AdNectins , Avimers 等。例如，可以通過(guò)使用如噬菌體展示這樣的程序來(lái)鑒定肽靶向部分。已經(jīng)使用這個(gè)廣泛使用的技術(shù)來(lái)鑒定多種不同細(xì)胞類(lèi)型的細(xì)胞特異性配體。根據(jù)本發(fā)明，靶向部分識(shí)別與特定器官、組織、細(xì)胞和/或亞細(xì)胞位點(diǎn)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)“目標(biāo)”或“標(biāo)記物”。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以是與一種或一些細(xì)胞類(lèi)型、 與一種或一些疾病和/或與一種或一些發(fā)育時(shí)期獨(dú)特地相關(guān)或主要相關(guān)的標(biāo)記物。細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物通常在該細(xì)胞類(lèi)型中比在參考細(xì)胞群體(其可以由例如含有大約相同數(shù)量細(xì)胞(例如，大約相同數(shù)目的細(xì)胞、大約相同體積的細(xì)胞、大約相同質(zhì)量的細(xì)胞等)的混合物組成)中的表達(dá)水平高至少2倍。在一些具體實(shí)施方案中，細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物的存在水平比參考群體中的平均表達(dá)高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、 至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍、至少1000倍、至少 5000倍或至少10，000倍。對(duì)細(xì)胞類(lèi)型特異性標(biāo)記物的檢測(cè)或測(cè)量使得可以將目標(biāo)細(xì)胞類(lèi)型從很多、大部分或所有其它細(xì)胞類(lèi)型中區(qū)分開(kāi)。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以包含蛋白、碳水化合物、脂質(zhì)和/或核酸。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以包含蛋白和/或其特征性部分，如腫瘤標(biāo)記物、整聯(lián)蛋白、細(xì)胞表面受體、跨膜蛋白、胞間蛋白、離子通道、膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、酶、抗體、嵌合蛋白、糖蛋白等。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以包含碳水化合物和/或其特征性部分，如糖蛋白、糖(例如， 單糖、二糖、多糖)、多糖包被(即，大部分真核細(xì)胞外表面上的富含碳水化合物的外周區(qū)) 等。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以包含脂質(zhì)和/或其特征性部分，如油、脂肪酸、甘油酯、激素、類(lèi)固醇(例如，膽固醇、葉酸)、維生素(例如，維生素E)、磷脂、鞘脂類(lèi)、脂蛋白等。 在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)可以包含核酸和/或其特征性部分，如DNA核酸；RNA核酸；修飾的DNA核酸；修飾的RNA核酸；包括DNA、RNA、修飾的DNA和修飾的RNA的任意組合的核
酸；等。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分可以是來(lái)自VSV的表面糖蛋白分子。VSV包含單一表面分子VSV-G，其為鐘樣受體激動(dòng)劑。VSV有效地靶向免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，所以在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以包含VSV表面分子，以將疫苗納米載體靶向免疫系統(tǒng)的細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是腫瘤標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，腫瘤標(biāo)記物是在腫瘤細(xì)胞中但不在健康和/或正常細(xì)胞中表達(dá)的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，腫瘤標(biāo)記物是在腫瘤細(xì)胞中比在健康和/或正常細(xì)胞中更普遍存在的抗原。示例性腫瘤標(biāo)記物包括但不限于gplOO ；MeIan-A ；酪氨基酸激酶；PSMA ；HER-2/neu ；MUC-I ；拓?fù)洚悩?gòu)酶IIa ； 唾液酸-Tn ；癌胚抗原；ErbB-3-結(jié)合蛋白； α -胎蛋白；和睪丸癌抗原MAGE-Al、MAGE A4 和 NY-ES0-1。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是APC標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，APC目標(biāo)是在APC中但不在非APC中表達(dá)的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，APC目標(biāo)是在APC中比在非 APC中更普遍存在的抗原。示例性APC標(biāo)記物包括，但不限于，⑶11c、⑶lib、⑶14、⑶40、 CD45、CD163、CD169 (唾液酸粘附素)、DEC205 (CD205)、II 類(lèi) MHC、DC-SIGN、CD21/CD35 和 FcyRI, PD-L2。在一些具體實(shí)施方案中，APC標(biāo)記物包括任何DC和/或巨噬細(xì)胞標(biāo)記物， 其實(shí)例在本文中有描述。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是DC標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，DC目標(biāo)是在 DC中但不在非DC中表達(dá)的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，DC目標(biāo)是在DC中比在非DC中更普遍存在的抗原。示例性DC標(biāo)記物在下面標(biāo)題為“樹(shù)突細(xì)胞”的部分列出并且包括本文在別處所提供的那些。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是T細(xì)胞標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞目標(biāo)是在T細(xì)胞中但不在非T細(xì)胞中表達(dá)的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，T細(xì)胞目標(biāo)是在T 細(xì)胞中比在非T細(xì)胞中更普遍存在的抗原。示例性T細(xì)胞標(biāo)記物在下面標(biāo)題為“T細(xì)胞靶向部分”的部分列出并且包括本文在別處所提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)優(yōu)選在特定的細(xì)胞類(lèi)型中表達(dá)。例如，APC、DC和/或 T細(xì)胞中的APC、DC和/或T細(xì)胞目標(biāo)的表達(dá)相對(duì)于參考群體來(lái)說(shuō)在APC、DC和/或T細(xì)胞中為至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100 倍、至少500倍或至少1000倍過(guò)表達(dá)。在一些具體實(shí)施方案中，參考群體可以包含非APC、 FDC和/或T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，激活的APC、DC和/或T細(xì)胞中的APC、DC和/或T細(xì)胞目標(biāo)的表達(dá)相對(duì)于參考群體來(lái)說(shuō)在激活的APC、DC和/或T細(xì)胞中為至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000 倍過(guò)表達(dá)。在一些具體實(shí)施方案中，參考群體可以包含非激活的APC、DC和/或T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體，如疫苗納米載體，包含低于50重量％、低于40重量％、低于30重量％、低于20重量％、低于15重量％、低于10重量％、低
48于5重量％、低于1重量％或低于0.5重量％的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中， 共價(jià)結(jié)合由連接物介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分與納米載體不是共價(jià)結(jié)合。例如，靶向部分可以與本發(fā)明顆粒的聚合基質(zhì)的表面結(jié)合、包埋于本發(fā)明顆粒的聚合基質(zhì)中、 由本發(fā)明顆粒的聚合基質(zhì)環(huán)繞和/或分布遍及本發(fā)明顆粒的聚合基質(zhì)中。例如，在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分可以包埋于納米載體的脂質(zhì)體膜和/或聚合基質(zhì)內(nèi)、由納米載體的脂質(zhì)體膜和/或聚合基質(zhì)環(huán)繞和/或分布遍及納米載體的脂質(zhì)體膜和/或聚合基質(zhì)中。 可替換地或另外地，靶向部分可以通過(guò)電荷相互作用、親和性相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水性相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵結(jié)合相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合與納米載體結(jié)合。靶向部分與疫苗納米載體的結(jié)合在以下標(biāo)題為“疫苗納米載體的產(chǎn)生”的部分中有更詳細(xì)的描述。樹(shù)突細(xì)胞樹(shù)突細(xì)胞(DC)是一類(lèi)骨髓白細(xì)胞；它們是在對(duì)T淋巴細(xì)胞的最有力的抗原呈遞細(xì)胞之中。靜止DC以非成熟的耐受態(tài)存在于很多組織中，包括淋巴結(jié)，S卩，它們遞呈中等至高水平的肽-MHC復(fù)合體，但其中幾乎沒(méi)有或沒(méi)有共刺激分子并且不分泌T細(xì)胞所需的用于分化成效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞因子。接受非成熟DC遞呈的特異性抗原的T細(xì)胞開(kāi)始增殖幾天，但是然后它們通過(guò)細(xì)胞凋亡而死亡或變得對(duì)進(jìn)一步激活無(wú)反應(yīng)。接著發(fā)生的抗原特異性T細(xì)胞應(yīng)答的消除賦予宿主針對(duì)該抗原的選擇性耐受。與此相反，當(dāng)DC獲得抗原而它們暴露于成熟刺激物時(shí)，細(xì)胞迅速上調(diào)MHC和共刺激分子并分泌幾種細(xì)胞因子。現(xiàn)在成熟的DC是效應(yīng) T細(xì)胞和免疫記憶的有力誘導(dǎo)者。DC的成熟可以由很多信號(hào)誘導(dǎo)，如某些炎性細(xì)胞因子、DC 表達(dá)的⑶40的連接、TLR的激動(dòng)劑(例如，細(xì)菌內(nèi)毒素)、免疫復(fù)合體、激活的補(bǔ)體、壞死細(xì)胞、凋亡細(xì)胞、游離尿酸鹽、尿素鹽晶體和/或HMGB-I。DEC_205( S卩，0)20 是表面表達(dá)的多功能血凝素，其在DC和淋巴組織中的胸腺上皮細(xì)胞中選擇性表達(dá)。皮下注射嵌合a-DEC-205單克隆抗體進(jìn)行的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)表明 在小鼠和人類(lèi)中，配體與DEC-205的結(jié)合誘導(dǎo)有效的內(nèi)在化和后續(xù)的內(nèi)吞材料的加工以在 MHC 分子中遞呈(Hawiger 等，2001，J. Exp. Med. 194:769 ；Bonifaz 等，2002，J. Exp. Med., 196 1627 ；和 Bozzacco 等，2007，Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 104 :1289 ；每篇均通過(guò)引入并入本文中)。在皮內(nèi)或皮下注射時(shí)，嵌合抗體通過(guò)淋巴管轉(zhuǎn)運(yùn)至引流淋巴結(jié)，在引流淋巴結(jié)嵌合抗體與常駐的DC特異性結(jié)合，因此提供將抗原靶向靜止DC的方式，而沒(méi)有引起它們的成熟。靶向的DC然后將誘導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)所遞呈抗原的耐受性，而不是免疫力。然而，與誘導(dǎo)DC成熟的免疫刺激劑(例如α -CD40或一種或多種DC表達(dá)的TLR的配體；在以下標(biāo)題為“免疫刺激試劑”的部分有更進(jìn)詳細(xì)的討論)一起靶向DEC-205時(shí)，疫苗則作為有力的免疫刺激劑優(yōu)先促進(jìn)細(xì)胞毒性和Thl型的效應(yīng)T細(xì)胞應(yīng)答。可以通過(guò)結(jié)合DC-205、CDllc, II 類(lèi) MHC、CD80、CD86、DC-SIGN、CDllb、BDCA-U BDCA-2、BDCA-4、Siglec-H、CX3CR1 和 / 或 Langerin 的部分來(lái)實(shí)現(xiàn)靴向 DC。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)與任何主要在DC上表達(dá)和/或存在的實(shí)體 (即，DC標(biāo)記物)(例如，蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物、小分子等)特異性結(jié)合的任何靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)DC靶向。示例性DC標(biāo)記物包括但不限于，CDla (R4, T6，HTA-1) ；CDlb (Rl)；CDlc (M241, R7) ； CDld(R3) ； CDle(R2) ； CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3, Mol，C3niR, Mac-1) ；CDllc(aX 整聯(lián)蛋白，pl50，95，AXb2) ；CDwl 17(乳糖基神經(jīng)酰胺，LacCer)； CD19(B4) ；CD33(gp67) ；CD 35(CRl, C3b/C4b 受體)；CD 36(GpIIIb, GPIV, PASIV)； CD39 (ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-1) ；CD40 (Bp50) ；CD45(LCA, T200, B220, Ly5) ；CD45RA ； CD45RB ;CD45RC ;CD45R0 (UCHL-I) ;CD49d(VLA-4 α，α4 整聯(lián)蛋白)；CD49e (VLA-5 α， α5 整聯(lián)蛋白)；CD58(LFA-3) ； CD64(Fc y RI) ；CD72 (Ly_19. 2，Ly-32. 2, Lyb-2)； CD73(Ecto-5，核苷酸酶)；CD74(Ii，不變鏈)；CD80(B7, B7-1，BBl) ；CD81 (ΤΑΡΑ-Ι)； CD83(HB15) ；CD85a(ILT5, LIR3, HL9) ；CD85d(ILT4, LIR2, MIR10) ；CD85j(ILT2, LIR1, MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HM18) ；CD86(B7-2/B70) ；CD88(C5aB) ；CD97(BL-KDD/F12)； CD 101(IGSF2, P126, V7) ；CDl16(GM-CSFRα) ；CD120a(TMFRI，p55) ；CD120b(TNFRII， p75, TNFR p80) ；CD123(IL-3Rα ) ；CD139 ;CD148(ΗΡΤΡ-η，p260, DEP-1) ；CD 150 (SLAM, IP0-3) ；CD 156b(TACE, ADAM 17，cSVP) ；CD 157(Mo5, BST-1) ；CD 167a(DDR1, trkE, cak) ；CD168(RHAMM, IHABP, HMMR) ；CD169 (唾液酸粘附素，Siglec-1) ；CD170 (Siglec-5)； CD171(L1CAM, NILE) ；CD172(SIRP-1α，MyD-1) ；CD172b(SIRPβ) ；CD180(RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD193(CCR3) ；CD196(CCR6) ；CD197 (CCR7(wsCDwl97))； CDwl97(CCR7, EBI1,BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205(DEC-205) ；CD206(MMR) ；CD207(Langerin)； CD208(DC-LAMP) ；CD209(DC-SIGN) ；CDw218a(IL18Rα ) ；CDw218b(IL8Rβ ) ；CD227(MUC1, PUM，PEM，EMA) ；CD23O (朊病毒蛋白(IM3)) ；CD252 (0X40L, TNF (配體)超家族，成員 4) ；CD258(LIGHT，TNF(配體)超家族，成員 14)；(擬65 (TRANCE-R，TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD271(NGFR, p75, TNFR 超家族，成員 16) ；CD273(B7DC, PDL2) ；CD274(B7H1, PDL1)； CD275(B7H2, IC0SL) ；CD276(B7H3) ；CD277(BT3. 1，B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；CD283(TLR3, 鐘樣受體幻；CD289(TLR9，鐘樣受體 9) ；CD295 (LEPR) ；CD298 (ATP1B3, Na K ATP 酶 β 3 亞基)；CD300a(CMRF-35H) ；CD300c(CMRF-35A) ；CD301(MGL1，CLECSF14) ；CD302 (DCLl)； CD303 (BDCA2) ；CD304(BDCA4) ；CD312(EMR2) ；CD317(BST2) ；CD319(CRACC, SLAMF7)； CD320 (8D6)；和 CD68(gpllO，巨噬涎蛋白)；II 類(lèi) MHC ；BDCA-I ；Siglec-H ；其中括號(hào)中所列名稱代表別名。T細(xì)胞靶向部分在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)特異性結(jié)合任何主要在T細(xì)胞上表達(dá)和/或存在的實(shí)體(即，T細(xì)胞標(biāo)記物)(例如蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物、小分子等)的任何靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞靶向。示例性T細(xì)胞標(biāo)記物包括，但不限于，⑶2(E-玫瑰花結(jié)R，Tll, LFA-2) ；CD3(T3) ；CD3 α ；CD3 β ；CD3 ε ；CD4(L3T4, W3/25, T4) ；CD5(T1, Tp67, Leu-1, LY-1) ；CD6 (T12) ；CD7(gp40, Leu 9) ；CD8a(Leu2, T8, Lyt2,3) ；CD8b (CD8, Leu2, Lyt3)； CDlla(LFA-l α，α 整聯(lián)蛋白鏈)；CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3, Mol，C3niR, Mac-1)； CDllc(aX 整聯(lián)蛋白，pl50，95，AXb2) ；CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u (3，硫代 Lewis X)； CD15siK6 硫代-唾液酰 Lewis X) ；CD16b (FcgRlllb) ；CDwl7 (乳糖基神經(jīng)酰胺，LacCer)； CD 18 (整聯(lián)蛋白 3 2CDlla，b，c3-亞基)；C· (DPP IV 外酶，ADA 結(jié)合蛋白)；CD27(T14， S152) ；CD28(Tp44, T44) ；CD29(血小板 GPlla，β _1 整聯(lián)蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1， Endocam) ；CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD37 (gP52_40) ；CD38 (ADP-核糖基 / 環(huán)化酶，T10)； CD43(涎福林(Sialophorin)，白細(xì)胞唾液素(Leukosialin)) ；CD44 (ECMRII, H-CAM，Pgp-D ；CD45 (LCA, T200, B220, Ly5) ；CD45RA (p561ck，p59fyn，Src 激酶)；CD45RB (p561ck， p59fyn，Src 激酶)；CD45RC (p561ck，p59fyn，Src 激酶)；CD46(MCP) ； CD47 (gp42，ΙΑΡ，0A3， Neurophi11 in) ；CD47R(MEM_133) ；CD48(Blast-1，Hulym3，BCM-1，0X-45) ；CD49c(VLA-3α， α 3 整聯(lián)蛋白)；CD49d(VLA_4 α，α 4 整聯(lián)蛋白)；CD49e (VLA-5 α，α 5 整聯(lián)蛋白)； CD49f(VLA-6a，α 6整聯(lián)蛋白 gplc) ；CD50 (ICAM-3) ；CD52 (CAMPATH_1，HES) ；CD53 (0X-44)； CD54(ICAM-I) ；CD55(DAF) ；CD56(Leu-19，NKH-1，NCAM) ；CD57(HNK1，Leu_7) ；CD58(LFA_3)； CD59(lF5Ag, H19,保護(hù)素(Protectin)，MACIF, MIRL, P-18) ； CD60a(GD3) ； CD60b (9-0-乙?；?GD3) ；CD60c(7-0 乙?；?GD3) ；CD62L(L_ 選擇素，LAM-1，LECAM-I, MEL-14，Leu8, TQl) ；CD73(Ecto-5’-核苷酸酶)；⑶75 (唾液酸掩蔽的乳糖胺)；CD75S ( α 2，6唾液酸化的乳糖胺)；CD81(TAPA-1) ；CD82(4F9, C33, IA-4，KAI1, R2) ；CD84(P75, GR6) ；CD85a(ILT5, LIR3，HL9) ;CD85j(ILT2，LIRl，MIR7) ；CD87(uPAR) ；CDw92 (p70) ；CD94(Kp43) ；CD95(AP0_1， FAS, TNFRSF6) ；CD98(4F2, FRP-I, RL-388) ；CD99(MIC2, E2) ；CD99R(CD99Mab 限制的)； CDlOO (SEMA4D) ；CD 102 (ICAM-2) ;CD108(SEMA7A，JMH 血型組抗原)；CDw119(IFNYR， IFN y Ra) ；CD120a(TNFRI, p55) ;CD120b(TNFRII，p75, TNFR p80) ；CD121a(l 型 IL-1R)； CD121b(2 型 IL-1R) ； CD122 (IL2R β ) ；CD124 (IL-4R α ) ； CD 126(IL_6Ra) ； CD127(p90, IL-7R, IL-7Ra ) ；CD128a(IL-8Ra,CXCRl,(暫時(shí)重命名為 CD181)) ;CD128b(IL_8Rb，CXCR2， (暫時(shí)重命名為 CD182)) ； CD 130 (gp 130) ；CD132(常見(jiàn)的 γ 鏈，IL_2Ry) ； CD 147(Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD 148 (ΗΡΤΡ- η , ρ260, DEP-1) ；CD150(SLAM, ΙΡ0-3) ；CD153(CD30L, TNSF8) ；CD156b(TACE, ADAMl7, cSVP) ；CD158a (KIR2DL1，p58. 1) ；CD158bl(KIR2DL2, p58.2) ；CD158b2(KIR2DL3, p58.3) ；CD158c(KIR2DS6, KIRX) ；CD158|el/e2(KIR3DLI/S1, p70) ；CD159F(KIR2DL5) ；CD158g(KIR2DS5) ；CD158h(KIR2DS1, p50.1) ；CD158i(KIR2DS4, p50.3) ；CD158j(KIR2DS2, p50. 2) ；CCD158k(KIR3DL2, pl40) ;CD159a(NKG2A) ；CD160(BY55, NKl, NK28) ；CD161(NKR, NKRPlΑ) ；CD162(PSGL-1) ;CD164(MGC_24，MUC-24) ；CD171(L1CAM, NILE) ； CD172g (SIRPg) ；CD181 (CXCR1,(以前稱作 CDl^a)) ； CD182 (CXCR2,(以前稱作 CD128b)) ；CD183(CXCR3, GPR9) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD185(CXCR5) ；CD186(CXCR6)； CD191 (CCRl) ；CD192(CCR2) ；CD193(CCR3) ；CD195(CCR5) ；CD196(CCR6) ；CD197(CCR7(以前是 CDwl97)) ；CDwl97(CCR7, EBI1, BLR2) ；CDwl98(CCR8) ；CDwl99(CCR9) ；CD205(DEC-205)； CDw210(CK) ；CDw217(CK) ；CDw218a(IL18Rα) ；CDw218b(IL18Rβ) ；CD220(胰島素 R)； CD221(IGFlR) ；CD222 (M6P-R, IGFII-R) ；CD223(LAG-3) ；CD224(GGT) ；CD225 (Leul3)； CD226(DNAM-1，PTA1) ;CDM9(Ly9) ;CD230(朊病毒蛋白(IM3)) ;CDM4 (2B4，P38， NAIL) ;CD245(p220/240) ;CD247(CD3ζ 鏈)；CD261(TRAIL-R1， TNF-R 超家族，成員 10a) ；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ；CD263 (TRAIL-R3, TNF-R 超家族，成員 IOc) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族， 成員 Ila) ； CD268(BAFFR, TNF-R 超家族，成員 13C) ； CD272 (BTLA) ； CD275(B7H2, IC0SL)； CD277(BT3. 1，B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；Q^94(CRTH2，PGRD2，G 蛋白偶聯(lián)受體 44)； CD295 (LEPR) ；CD296(ART1, ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶 1) ；CD298 (ATP1B3, Na K ATP 酶 β 3 亞基)； CD300a(CMRF-35H) ；CD300c(CMRF-35A) ；CD305 (LAIRl) ；CD314(NKG2D) ；CD316(EW12)； CD317(BST2) ；CD319(CRACC, SLAMF7) ；CD321 (JAMl) ；CD322(JAM2) ；CDw328(Siglec7)；和 ⑶68(gp 110，巨噬涎蛋白)；其中括號(hào)中所列名稱代表別名。
在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)結(jié)合(如特異性結(jié)合)激活時(shí)主要在T細(xì)胞上表達(dá)和/或存在的任何實(shí)體(即，激活的T細(xì)胞目標(biāo))(例如，蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物、小分子等)的任何靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞靶向。示例性的激活T細(xì)胞的靶向部分包括，但不限于，CDla (RA，T6, HTA-1) ；CDlb (Rl) ；Cdlc(M241, R7) ；CDld(R3) ；CD9(p24， DRAP-I, MRP-1) ；CD25(Tac 抗原，IL_2Ra，p55) ；CD30 (Ber-H2, Ki-I) ；CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-1) ；CD45R0 (UCHL-I) ；CD49a(VLA_l α，α 1 整合素)；CD49b (VLA-2 α， gpla, α 2 整聯(lián)蛋白)；CD69(AIM，EAl，MLR3, gp34/28, VEA) ；CD70(Ki_24，CD27 配體)； CD74(Ii，不變鏈)；CD80(B7, B7-1，BBl) ；CD86 (B7-2/B70) ；CD96 (TACTILE) ；CD97 (BL-KDD/ F12) ；CD101(IGSF2, P126, V7) ；CD103 (HML-1，整聯(lián)蛋白 α Ε, ITGAE) ；CD107a (LAMP-1)； CD107b(LAMP-2) ；CD109(8A3, E123 7D1) ；CD134(0X40, TNFRSF4) ；CDwl370-1BB，I LA)； CD146(Muc 18，S-endo，MCAM, Mel-CAM) ;CD152(CTLA_4) ；CD154(CD40L, gp39, TRAP-I, T-BAM) ；CD166 (ALCAM, KG-CAM，SC-1，BEN，DM-GRASP) ；CD178 (Fas 配體)；CD227 (MUC1，PUM， PEM, EMA) ；CD253(TRAIL, TNF(配體)超家族，成員 10) ；CD254(TRANCE, RANKL, TNF(配體)超家族，成員 11) ；CD258(LIGHT, TMF(配體)超家族，成員 14) ；CD267(TACI, TNF-R 超家族，成員 13B) ；CD273(B7DC, PDL2) ；CD274(B7H1, PDL1) ；CD278 (ICOS) ；CD279(PD1)；和 CD312(EMR2)；其中括號(hào)中所列名稱代表別名。靶向部分的分子特征核酸靶向部分。如本文中所用，“核酸靶向部分”是選擇性地結(jié)合目標(biāo)的核酸。在一些具體實(shí)施方案中，核酸靶向部分是核酸適配子。適配子通常是與特定器官、組織、細(xì)胞、 細(xì)胞外基質(zhì)成分和/或亞細(xì)胞位點(diǎn)相關(guān)的特異性目標(biāo)結(jié)構(gòu)結(jié)合的多核苷酸。一般地，適配子的靶向功能是基于適配子的三維結(jié)構(gòu)。在一些具體實(shí)施方案中，適配子與目標(biāo)的結(jié)合通常是由適配子和目標(biāo)的二維和/或三維結(jié)構(gòu)之間的相互作用所介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，適配子與目標(biāo)的結(jié)合不僅僅是基于適配子的初級(jí)序列，還基于適配子和/或目標(biāo)的三維結(jié)構(gòu)。在一些具體實(shí)施方案中，適配子通過(guò)互補(bǔ)性Watson-Crick堿基配對(duì)與它們的目標(biāo)結(jié)合，這種結(jié)合被打亂堿基配對(duì)的結(jié)構(gòu)(例如，發(fā)夾環(huán))所打亂。在一些具體實(shí)施方案中，核酸靶向部分是Spiegelmer 。通常，Spiegelmer 是高親和性的L-對(duì)映體的寡核苷酸配體，與D-寡核苷酸相比，其顯示出對(duì)酶降解的高度抗性。 在一些具體實(shí)施方案中，Spiegelmer. 按照適配子的設(shè)計(jì)和使用來(lái)進(jìn)行設(shè)計(jì)和使用。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，根據(jù)本發(fā)明，可以使用本文中所述的任何能夠特異性結(jié)合目標(biāo)的核酸。本發(fā)明的核酸(包括核酸靶向部分和/或待傳送的功能性RNA，例如RNAi試劑、核酶、tRNA等，以下更詳細(xì)描述)可以根據(jù)任何可獲得的技術(shù)來(lái)制備，包括但不限于，化學(xué)合成、酶合成、較長(zhǎng)前體的酶或化學(xué)分裂等。合成RNA的方法在本領(lǐng)域是已知的 (參見(jiàn)，例如 Gait, Μ. J.(編輯)Oligonucleotide synthesis :a practical approach, Oxford [Oxfordshire], Washington, DC : IRL Press, 1984 ；禾口 Herdewi jn，P.(編輯) Oligonucleotide synthesis :methods and applications, Methods in molecular biology, v. 288 (Clifton, N. J. )Totowa,N. J. =Humana Press, 2005 ；兩篇均通過(guò)引用并入本文中)。形成核酸靶向部分的核酸可以包含天然產(chǎn)生的核苷、修飾的核苷、天然產(chǎn)生的在一個(gè)或多個(gè)核苷之間插入烴連接物(例如，亞烴基)或聚醚連接物(例如PEG連接物)的核苷、在一個(gè)或多個(gè)核苷之間插入烴或PEG連接物的修飾核苷，或其組合。在一些具體實(shí)施方案中，核酸靶向部分的核苷酸或修飾核苷酸可以被烴連接物或聚醚連接物替換，只要核酸靶向部分的結(jié)合親和性和選擇性不被該替換實(shí)質(zhì)性降低(例如，目標(biāo)的核酸靶向部分的解離常數(shù)應(yīng)該不高于約1 X I(T3M)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到根據(jù)本發(fā)明的核酸可以包含完全是在天然產(chǎn)生的核酸中發(fā)現(xiàn)的核苷酸類(lèi)型，或者替代地可以包括一個(gè)或多個(gè)核苷酸類(lèi)似物或具有與天然產(chǎn)生的核酸不同的結(jié)構(gòu)。U. S.專利 6，403，779 ；6，399，754 ；6，225，460 ；6，127，533 ；6，031，086 ； 6，005，087 ；5, 977，089及其中的參考文獻(xiàn)公開(kāi)了可以使用的各種特異性核苷酸類(lèi)似物和修飾。參見(jiàn) Crooke，S.(編輯)Antisense Drug Technology :Principles, Strategies, and Applications(第 1 版)，Marcel Dekker ；ISBN :0824705661,第 1 版 Q001)；通過(guò)引用并入本文中；以及其中的參考文獻(xiàn)。例如，2’ -修飾包括鹵素、烷氧基和烯丙氧基基團(tuán)。在一些具體實(shí)施方案中，2’ -OH基團(tuán)被選自H、OR、R、鹵素、SH、SR1、NH2、NHκ、N 或CN的基團(tuán)取代， 其中R是C1-C6烷基、烯基或炔基，并且鹵素是F、Cl、Br或I。修飾的連接的實(shí)例包括硫代磷酸酯和5’ -N-亞磷酰胺連接。根據(jù)本發(fā)明可以使用包含各種不同的核苷酸類(lèi)似物、修飾的骨架或非天然產(chǎn)生的核苷間連接的核酸。本發(fā)明的核酸可以包括天然核苷(即，腺苷、胸苷、鳥(niǎo)苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥(niǎo)苷和脫氧胞苷)或修飾的核苷。修飾的核苷的實(shí)例包括堿基修飾的核苷(例如，阿糖胞苷、肌苷、異鳥(niǎo)苷、水粉蕈素、假尿苷、2，6- 二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、 2-硫胸苷、3-脫氮-5-氮胞苷、2’ -脫氧尿苷、3-硝基吡咯、4-甲基吲哚、4-硫尿苷、4-硫胸苷、2-氨基腺苷、2-硫胸苷、2-硫尿苷、5-溴胞苷、5-碘尿苷、肌苷、6-氮尿苷、6-氯嘌呤、 7-脫氮腺苷、7-脫氮鳥(niǎo)苷、8-氮腺苷、8-疊氮腺苷、苯并咪唑、Ml-甲基腺苷、吡咯并嘧啶、 2-氨基-6-氯嘌呤、3-甲基腺苷、5-丙炔基胞苷、5-丙炔基尿苷、5-溴尿苷、5-氟尿苷、5-甲基胞苷、7-脫氮腺苷、7-脫氮鳥(niǎo)苷、8-加氧腺苷、8-加氧鳥(niǎo)苷、0(6)-甲基鳥(niǎo)苷和2-硫胞苷)，化學(xué)或生物修飾的堿基(例如，甲基化的堿基)，修飾的糖(例如，2’-氟核糖、2’-氨基核糖、2’ -疊氮核糖、2’ -0-甲基核糖、L-對(duì)映體核苷阿拉伯糖和己糖)，修飾的磷酸酯基團(tuán)(例如，硫代磷酸酯和5’ -N-亞磷酰胺連接)及其組合。用于核酸的化學(xué)合成的天然和修飾的核苷酸單體可以容易地獲得。在一些情況下，包含這樣的修飾的核酸相對(duì)于僅由天然核苷酸組成的核酸表現(xiàn)出提高的特性。在一些具體實(shí)施方案中，本文中所述的核酸修飾用于減少和/或防止核酸酶(例如，外切核酸酶、內(nèi)切核酸酶等)的消化。例如，可以通過(guò)在一條鏈或兩條鏈的3’端加入核苷酸類(lèi)似物以減少消化，從而穩(wěn)定核酸的結(jié)構(gòu)。修飾的核酸不必在分子的全長(zhǎng)上統(tǒng)一修飾。不同的核苷酸修飾和/或骨架結(jié)構(gòu)可以存在于核酸的不同位置。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到核苷酸類(lèi)似物或其它修飾可以位于核酸的任何位置，使得核酸的功能實(shí)質(zhì)上不受影響。僅舉一例，修飾可以位于適配子的任何位置，使得適配子特異性結(jié)合適配子目標(biāo)的能力實(shí)質(zhì)上不受影響。修飾區(qū)域可以位于一條鏈或兩條鏈的5’ -端和/或3’ -端。例如，可以使用其中兩條鏈的任一條鏈的5’ -和 /或3’-端的大約1個(gè)至大約5個(gè)殘基是核苷酸類(lèi)似物和/或具有骨架修飾的修飾適配子。 修飾可以是5’或3’端修飾。核酸鏈可以包含至少50%未修飾的核苷酸，至少80%未修飾的核苷酸，至少90%未修飾的核苷酸或100%未修飾的核苷酸。
根據(jù)本發(fā)明的核酸可以包含例如糖、核苷或核苷間連接的修飾，如在U. S.專利公開(kāi) 2003/0175950,2004/0192626,2004/0092470,2005/0020525 和 2005/0032733 中描述的那些。本發(fā)明包括使用具有其中所述的任意一種或多種修飾的任意核酸。例如，已經(jīng)報(bào)道許多末端偶聯(lián)物，例如，脂質(zhì)，如膽固醇、石膽酸、月桂酸或長(zhǎng)烷基支鏈，能夠提高細(xì)胞攝入。 可以使用例如本領(lǐng)域已知的任何合適的試驗(yàn)測(cè)試類(lèi)似物和修飾，例如，來(lái)選擇那些產(chǎn)生提高的治療劑的傳送，提高的適配子與適配子目標(biāo)的特異性結(jié)合等。在一些具體實(shí)施方案中， 根據(jù)本發(fā)明的核酸可以包含一個(gè)或多個(gè)非天然核苷連接。在一些具體實(shí)施方案中，將適配子的3’ -端、5’ -端或3’ -端和5’ -端的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部核苷酸顛倒以產(chǎn)生連接，例如 3’ -3’連接或5’ -5’連接。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸是非合成的，而是從其天然環(huán)境中分離的天然產(chǎn)生的物質(zhì)。小分子靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的靶向部分可以是小分子。 在特定的具體實(shí)施方案中，小分子為低于約2000克/摩爾的大小。在一些具體實(shí)施方案中， 小分子為低于約1500克/摩爾或低于約1000克/摩爾。在一些具體實(shí)施方案中，小分子為低于約800克/摩爾或低于約500克/摩爾。在特定的具體實(shí)施方案中，小分子是寡聚體。在一些具體實(shí)施方案中，小分子是非寡聚體。在一些具體實(shí)施方案中，小分子是天然產(chǎn)物或具有基于天然產(chǎn)物的完整結(jié)構(gòu)的部分結(jié)構(gòu)(例如，亞結(jié)構(gòu))的天然產(chǎn)物樣化合物。在特定的具體實(shí)施方案中，小分子是合成產(chǎn)物。在一些具體實(shí)施方案中，小分子可以來(lái)自化學(xué)文庫(kù)。在特定的具體實(shí)施方案中，小分子可以來(lái)自制藥公司的歷史文庫(kù)。在一些具體實(shí)施方案中，小分子是美國(guó)食品與藥品管理局批準(zhǔn)的藥物，如在美國(guó)聯(lián)邦法規(guī)(C.F.R.)中所提供的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到根據(jù)本發(fā)明可以使用特異性結(jié)合本文中所述的所需目標(biāo)的任何小分子。蛋白靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的靶向部分可以是蛋白或肽。 在特定的具體實(shí)施方案中，肽大小的范圍為約5至約100、約5至約50、約10至約75、約15 至約50或約20至約25個(gè)氨基酸。在一些具體實(shí)施方案中，肽序列可以基于蛋白的序列。 在一些具體實(shí)施方案中，肽序列可以是氨基酸的隨機(jī)排列。術(shù)語(yǔ)“多肽”和“肽”在本文中可互換使用，“肽”通常是指長(zhǎng)度為低于約100個(gè)氨基酸的多肽。多肽可以含有L-氨基酸、D-氨基酸或二者，并且可以含有任何的各種氨基酸修飾或本領(lǐng)域中已知的類(lèi)似物。有用的修飾包括例如末端乙酰化、酰胺化、脂化、磷酸化、糖基化、?；?、法呢基化、硫酸化等。根據(jù)本發(fā)明可以用作靶向部分的示例性蛋白包括但不限于抗體、受體、細(xì)胞因子、 肽激素、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、源自組合文庫(kù)的蛋白(例如，AVimerSTM、AffibodieS 等)， 及其特征性部分?？梢允褂煤铣傻慕Y(jié)合蛋白，如Nanobodies 、AdNectins 等。在一些具體實(shí)施方案中，蛋白靶向部分可以是肽。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將體會(huì)到根據(jù)本發(fā)明可以使用特異性結(jié)合本文中所述的所需目標(biāo)的任何蛋白和/或肽。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分可以是抗體和/或其特征性部分。術(shù)語(yǔ)“抗體” 是指任何免疫球蛋白，不論是天然的或完全或部分合成產(chǎn)生的，還指其衍生物及其特征性部分?？贵w可以是單克隆或多克隆的?？贵w可以是任何免疫球蛋白類(lèi)別的成員，包括任何人類(lèi)別IgG、IgM、IgA、IgD 和 IgE。如本文中所用的，抗體片段(即，抗體的特征性部分)是指小于全長(zhǎng)的抗體的任何衍生物。在一些具體實(shí)施方案中，抗體片段保持全長(zhǎng)抗體的特異性結(jié)合能力的至少顯著部分。這樣的抗體片段的實(shí)例包括但不限于Fab、Fab，、F (ab，)2、scFv、Fv、dsFv 二抗和Fd片段?？贵w片段還包括但不限于Fc片段?？贵w片段可以通過(guò)任何方式產(chǎn)生。例如，抗體片段可以通過(guò)完整抗體的的片段化而酶或化學(xué)產(chǎn)生和/或其可以通過(guò)從編碼部分抗體序列的基因經(jīng)重組產(chǎn)生?？商鎿Q地或另外地，抗體片段可以全部或部分合成產(chǎn)生。抗體片段可任選包含單鏈抗體片段。可替換地或另外地，抗體片段可以包含多條鏈，例如通過(guò)二硫鍵連接在一起。抗體片段任選包含多分子復(fù)合體。功能性抗體片段通常包含至少約50個(gè)氨基酸，更通常將包含至少約200個(gè)氨基酸。在一些具體實(shí)施方案中，抗體可以包括嵌合(例如，“人源化”)和單鏈(重組)抗體。在一些具體實(shí)施方案中，抗體可以具有減少的效應(yīng)功能和/或雙特異性分子。在一些具體實(shí)施方案中，抗體可以包括通過(guò)Fab表達(dá)文庫(kù)產(chǎn)生的片段。單鏈Fv (scFv)是僅由通過(guò)多肽連接物共價(jià)互相結(jié)合的可變輕鏈(VL)和可變重鏈 (VH)組成的重組抗體片段。VL或VH可以包含NH2-末端結(jié)構(gòu)域。多肽連接物的長(zhǎng)度和組成可以變化，只要兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域能夠無(wú)顯著空間位阻地橋連。通常，連接物主要包含一段甘氨酸和絲氨酸殘基，其中散布一些谷氨酸或賴氨酸殘基以增加溶解性。二抗是二聚的scFv。二抗通常具有比大部分scFv更短的肽連接物，并且它們經(jīng)常顯示出作為二聚體結(jié)合的偏愛(ài)。Fv片段是由通過(guò)非共價(jià)相互作用結(jié)合在一起的一個(gè)VH和一個(gè)VL結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“dsFv”是指具有以穩(wěn)定VH-VL對(duì)的工程化分子間二硫鍵的 Fv0F(ab' ) 2片段是實(shí)質(zhì)上等同于通過(guò)胃蛋白酶在pH 4. 0_4. 5消化免疫球蛋白而獲得的抗體片段。片段可以通過(guò)重組產(chǎn)生。Fab'片段是實(shí)質(zhì)上等同于通過(guò)連接F (ab’)2片段中的兩個(gè)重鏈片段的二硫橋的還原而獲得的抗體片段。Fab’片段可以通過(guò)重組產(chǎn)生。Fab片段是實(shí)質(zhì)上等同于通過(guò)酶(例如，木瓜蛋白酶)消化免疫球蛋白而獲得的抗體片段。Fab片段可以通過(guò)重組產(chǎn)生。Fab片段的重鏈片段是Fd片。碳水化合物靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的靶向部分可以包含碳水化合物。在一些具體實(shí)施方案中，碳水化合物可以是包含由糖苷鍵連接的單糖(或其衍生物)的多糖，如本領(lǐng)域所知。這樣的糖包括，但不限于，葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、纖維二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡萄糖胺、半乳糖胺和神經(jīng)氨酸。在一些具體實(shí)施方案中，碳水化合物可以是普魯蘭多糖、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥基纖維素、甲基纖維素、右旋糖苷、環(huán)右旋糖苷、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、卡拉膠、糖基、直鏈淀粉、殼聚糖、N，0-羥甲基殼聚糖、海藻膠和海藻酸、淀粉、幾丁質(zhì)、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素、肝素、透明質(zhì)酸、卡德蘭和黃原膠中的一種或多種。
在一些具體實(shí)施方案中，碳水化合物可以是酰胺化、羧基化和/或硫酸化的。在一些具體實(shí)施方案中，親水性多糖可以通過(guò)引入大量的側(cè)鏈?zhǔn)杷曰鶊F(tuán)而被修飾成疏水性的。在一些具體實(shí)施方案中，疏水性碳水化合物可以包括醋酸纖維素、醋酸普魯蘭多糖、醋酸魔芋、醋酸直鏈淀粉和醋酸右旋糖苷。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到根據(jù)本發(fā)明可以使用特異性結(jié)合本文中所述的所需目標(biāo)的任何碳水化合物。脂質(zhì)靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的靶向部分可以包含一個(gè)或多個(gè)脂肪酸基團(tuán)或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以包含可消化的長(zhǎng)鏈(例如，C8-C5tl)、取代或非取代的烴。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是Cltl-C^l脂肪酸或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是C15-C2tl脂肪酸或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是C15-C25脂肪酸或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是不飽和的。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是單不飽和的。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是多不飽和的。在一些具體實(shí)施方案中，不飽和脂肪酸基團(tuán)的雙鍵可以是順式構(gòu)象。在一些具體實(shí)施方案中，不飽和脂肪酸的雙鍵可以是反式構(gòu)象。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸、山崳酸或二十四酸中的一種或多種。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是棕櫚油酸、油酸、十八碳烯酸、亞油酸、α-亞油酸、Y-亞油酸、花生四烯酸、鱈烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸中的一種或多種。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到根據(jù)本發(fā)明可以使用特異性結(jié)合本文中所述的所需目標(biāo)的任何脂肪酸基團(tuán)。新型靶向部分任何新型靶向部分可以應(yīng)用于根據(jù)本發(fā)明的疫苗納米載體中。本領(lǐng)域已知的任何方法可以用于設(shè)計(jì)、鑒別和/或分離新型靶向部分。例如，利用分子庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)和體外結(jié)合試驗(yàn)可以用于鑒定新型靶向部分。核酸靶向部分(例如，適配子、Spiegelmers )可以使用任何可獲得的方法來(lái)設(shè)計(jì)和/或鑒別。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)鑒別來(lái)自核酸候選混合物的核酸靶向部分而設(shè)計(jì)和/或鑒別核酸靶向部分。指數(shù)級(jí)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化(SELEX)或其變化形式是常用的從核酸候選混合物中鑒別與目標(biāo)結(jié)合的核酸靶向部分的方法(參見(jiàn)例如美國(guó)專利 6，482，594 ；6，458，543 ；6，458，539 ；6，376，190 ；6，344，318 ；6，242，246 ；6，184，364 ； 6，001，577 ；5，958，691 ；5，874，218 ；5，853，984 ；5，843，732 ；5，843，653 ；5，817，785 ； 5，789，163 ；5，763，177 ；5，696，249 ；5，660，985 ；5，595，877 ；5，567，588 和 5，270，163 ； 每篇均通過(guò)引用并入本文中)?？商鎿Q地或另外地，Polyplex In Vivo Combinatorial Optimization (PICO)是一種用于在體內(nèi)和/或體外從核酸候選混合物中鑒別與目標(biāo)結(jié)合的核酸靶向部分(例如，適配子)的方法，在發(fā)明名稱為“System for Screening Particles”，2006年12月15日提交的同時(shí)待決的PCT申請(qǐng)US06/47975中有描述，通過(guò)引用并入本文中。
免疫刺激劑在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以轉(zhuǎn)運(yùn)一種或多種幫助刺激免疫應(yīng)答的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑通過(guò)激活A(yù)PC以增強(qiáng)它們的免疫刺激能力而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑通過(guò)擴(kuò)大對(duì)特異性抗原的淋巴細(xì)胞應(yīng)答而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑通過(guò)誘導(dǎo)介質(zhì)的局部釋放(如來(lái)自多種細(xì)胞類(lèi)型的細(xì)胞因子)而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑抑制或重引導(dǎo)免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體的所有免疫刺激劑彼此相同。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含許多不同類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含多個(gè)單獨(dú)的免疫刺激劑，它們彼此都相同。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體只包含一種類(lèi)型免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體只包含兩種不同類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含多于兩種的不同類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含同時(shí)刺激B細(xì)胞和T細(xì)胞的單一類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫刺激劑，其中第一種類(lèi)型免疫刺激劑刺激B細(xì)胞，第二種類(lèi)型免疫刺激劑刺激T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含多于兩種類(lèi)型的免疫刺激劑，其中一種或多種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激B細(xì)胞，一種或多種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種類(lèi)型的與疫苗納米載體的外表面結(jié)合的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是共價(jià)的。在一些具體實(shí)施方案中， 共價(jià)結(jié)合由一個(gè)或多個(gè)連接物介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是非共價(jià)的。在一些具體實(shí)施方案中，非共價(jià)結(jié)合由電荷相互作用、親和性相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水性相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵結(jié)合相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合所介導(dǎo)。免疫刺激劑與疫苗納米載體的結(jié)合在以下標(biāo)題為“疫苗納米載體的產(chǎn)生”的部分中有更詳細(xì)的描述。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含脂膜(例如，脂雙層、脂單層等)，其中至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑可以與脂膜結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑嵌入脂膜內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑嵌入脂雙層的腔內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種類(lèi)型的與脂膜的內(nèi)表面結(jié)合的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑包埋于疫苗納米載體的脂膜內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一種類(lèi)型的免疫刺激劑可以位于疫苗納米載體的多個(gè)位點(diǎn)。例如，第一種類(lèi)型的免疫刺激劑可以嵌于脂膜內(nèi)，第二種類(lèi)型的免疫刺激試劑可以包埋于疫苗納米載體的脂膜內(nèi)。再舉另一個(gè)實(shí)例，第一種類(lèi)型的免疫刺激劑可以與脂膜的外表面結(jié)合，第二種類(lèi)型的免疫刺激劑可以與疫苗納米載體的脂膜的內(nèi)表面結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，第一種類(lèi)型的免疫刺激劑可以嵌于疫苗納米載體的脂雙層的腔內(nèi)，脂雙層中可以包埋聚合物基質(zhì)，第二種類(lèi)型的免疫刺激劑可以分布在所述聚合物基質(zhì)中。在一些具體實(shí)施方案中，第一種類(lèi)型的免疫刺激劑和第二種類(lèi)型的免疫刺激劑可以位于疫苗納米載體的相同位點(diǎn)(例如，它們都與疫苗納米載體的外表面結(jié)合；它們都包埋于疫苗納米載體內(nèi)，等)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到之前的實(shí)例只是多種免疫刺激劑可以與疫苗納米載體的不同位點(diǎn)結(jié)合的很多不同方式的代表。多種免疫刺激劑可以位于疫苗納米載體的任意位點(diǎn)的組合。在某些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是白細(xì)胞介素、干擾素、細(xì)胞因子等。在特定的具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是鐘樣受體(TLR)的天然或合成的激動(dòng)劑。在特定的具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體引入鐘樣受體(TLR)_7的配體，例如CpG，其誘導(dǎo)I型干擾素的產(chǎn)生。在特定的具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是DC表面分子CD40的激動(dòng)劑。 在某些具體實(shí)施方案中，為了刺激免疫力而不是耐受性，納米載體引入促進(jìn)DC成熟(引發(fā)天然T細(xì)胞的需要)和細(xì)胞因子(如，I類(lèi)干擾素，其促進(jìn)抗體應(yīng)答和抗病毒免疫力)產(chǎn)生的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以是TLR-4激動(dòng)劑，例如細(xì)菌脂多糖 (LPS)、VSV-G和/或HMGB-1。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是細(xì)胞因子，其為通過(guò)細(xì)胞釋放的小蛋白或生物因子(5kD-20kD的范圍)且對(duì)于細(xì)胞-細(xì)胞相互作用、交流和其它細(xì)胞的行為具有特異性效應(yīng)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是從壞死細(xì)胞釋放的促炎性刺激劑(例如，尿酸鹽晶體)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是激活的補(bǔ)體級(jí)聯(lián)成分(例如CD21、CD35等)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是激活的免疫復(fù)合體的成分。免疫刺激劑包括TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、 TLR-8、TLR-9和TLR-10激動(dòng)劑。免疫刺激劑還包括補(bǔ)體受體激動(dòng)劑，如與CD21或CD35結(jié)合的分子。在一些具體實(shí)施方案中，補(bǔ)體受體激動(dòng)劑誘導(dǎo)納米載體的內(nèi)源性補(bǔ)體調(diào)理。免疫刺激劑還包括細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑，如細(xì)胞因子。在一些具體實(shí)施方案中，細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑是小分子、抗體、融合蛋白或適配子。在一些具體實(shí)施方案中，存在超過(guò)一種類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，不同的免疫刺激劑各自作用于不同的途徑。因此，免疫刺激劑可以是不同的鐘樣受體、 鐘樣受體和CD40、鐘樣受體和炎性體的成分，等等。在一些具體實(shí)施方案中，免疫刺激劑可以是佐劑。因此，在一些具體實(shí)施方案中， 本發(fā)明提供了包含與一種或多種佐劑配制的疫苗納米載體的藥物組合物。如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)“佐劑”指的是不構(gòu)成特異性抗原但是增強(qiáng)對(duì)所施用抗原的免疫應(yīng)答的試劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體與一種或多種佐劑配制，如凝膠類(lèi)型的佐劑(例如，氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣等)；微生物佐劑(例如，包括CpG基序的免疫調(diào)節(jié)DNA 序列；內(nèi)毒素，例如單磷?；|(zhì)A ；外毒素，例如霍亂毒素、大腸桿菌熱不穩(wěn)定毒素和百日咳毒素；胞壁酰二肽等)；油乳劑和基于乳化劑的佐劑(例如，弗氏佐劑，MF59[Novartis], SAF等)；顆粒佐劑(例如，脂質(zhì)體、生物可降解微球體、皂角苷等)；合成佐劑(例如，非離子嵌段共聚物、胞壁酰肽類(lèi)似物、聚磷腈、合成多核苷酸等)；基于表面活性劑的佐劑，和/ 或其組合。其它的示例性佐劑包括一些聚合物(例如，U. S.專利5，500，161中描述的聚磷腈，將其引入本文中作為參考))、QS21、鯊烯、四氯十氧化物等。
T細(xì)胞激活試驗(yàn)在一些具體實(shí)施方案中，可以應(yīng)用各種試驗(yàn)來(lái)確定T細(xì)胞或T細(xì)胞組中的免疫應(yīng)答是否被激活(即，T細(xì)胞或T細(xì)胞組是否變成“激活的”)。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)測(cè)量抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子而確定T細(xì)胞中免疫應(yīng)答的刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)測(cè)量抗原誘導(dǎo)的τ細(xì)胞產(chǎn)生的IFN y、IL-4、IL-2、IL-10、IL-17和/ 或TNFa而確定T細(xì)胞中免疫應(yīng)答的刺激。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色然后進(jìn)行流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)而測(cè)定抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)表面捕獲染色然后進(jìn)行流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)而測(cè)定抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)確定激活的T細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中細(xì)胞因子的濃度而測(cè)定抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生。在一些具體實(shí)施方案中，這可以通過(guò)ELISA來(lái)測(cè)量。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)ELISP0T試驗(yàn)測(cè)量抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生。通常，ELISP0T試驗(yàn)應(yīng)用與三明治酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)技術(shù)非常相似的技術(shù)。將抗體(例如，單克隆抗體，多克隆抗體等)無(wú)菌地覆蓋在后襯為PVDF(聚偏二氟乙烯)的微型板上。根據(jù)對(duì)待測(cè)細(xì)胞因子的特異性選擇抗體。將平板封閉(例如，使用與該試驗(yàn)中的任一種抗體非反應(yīng)性的血清蛋白)。以不同的密度將目標(biāo)細(xì)胞與抗原或有絲分裂原一起涂布于平板上，然后置于潮濕的37°C CO2孵箱內(nèi)持續(xù)一定的時(shí)間。激活的細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子在局部被高表面區(qū)域的PVDF膜上覆蓋的抗體所捕獲。洗滌孔以除去細(xì)胞、碎片和培養(yǎng)液成分后，向孔中加入對(duì)細(xì)胞因子特異性的二抗(例如，生物素化的多克隆抗體)。該抗體與靶細(xì)胞因子的不同表位反應(yīng)，并因此用于檢測(cè)所捕獲的細(xì)胞因子。在洗滌以除去任何未結(jié)合的生物素化抗體后，然后使用抗生物素-HRP和沉淀底物(例如，AEC、BCIP/NBT)顯示所檢測(cè)的細(xì)胞因子。著色的終產(chǎn)物(點(diǎn)，通常為黑藍(lán)色)通常代表單個(gè)的產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞?？梢酝ㄟ^(guò)人工對(duì)點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)(例如，使用解剖顯微鏡)，或使用自動(dòng)計(jì)數(shù)器，以捕獲微孔圖像并分析點(diǎn)的數(shù)目和大小。在一些具體實(shí)施方案中，每個(gè)點(diǎn)對(duì)應(yīng)于單個(gè)的產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，如果約至約100%的抗原特異性T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，則稱T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，如果至少約1%、至少約 5%、至少約10%、至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約90%、至少約95%、至少約99%或約100%的抗原特異性T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，則稱T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，如果免疫的患者比天然對(duì)照包含高至少約10倍、至少約 50倍、至少約100倍、至少約500倍、至少約1000倍、至少約5000倍、至少約10，000倍、至少約50，000倍、至少約100，000倍或高出至少約100，000倍以上的產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞， 則稱T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)測(cè)量抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞的增殖來(lái)確定T細(xì)胞中免疫應(yīng)答的刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)分裂T細(xì)胞中H3-胸苷的攝入來(lái)測(cè)量抗原誘導(dǎo)的增殖(有時(shí)稱為“淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化測(cè)試”，或“LTT”)。在一些具體實(shí)施方案中，如果H3-胸苷的攝入(以Y計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)數(shù)目給出)比天然對(duì)照高至少約5倍、至少約10倍、至少約 20倍、至少約50倍、至少約100倍、至少約500倍、至少約1000倍、至少約5000倍、至少約 10，000倍、或高至少約10，000倍，則稱發(fā)生了抗原誘導(dǎo)的增殖。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)來(lái)測(cè)量抗原誘導(dǎo)的增殖。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(CFSE)稀釋試驗(yàn)來(lái)測(cè)量抗原誘導(dǎo)的增殖。CFSE是一種無(wú)毒的、熒光的、透膜染料，其通過(guò)琥珀酰反應(yīng)性基團(tuán)結(jié)合細(xì)胞質(zhì)蛋白 (例如，T細(xì)胞蛋白)的氨基基團(tuán)。當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)，CFSE標(biāo)記的蛋白在子代細(xì)胞中均等分布， 因此隨著每次分裂細(xì)胞熒光減半。因此，在各自的抗原存在下培養(yǎng)后，抗原特異性T細(xì)胞的熒光喪失(CFSE1 )，可以與培養(yǎng)物中的其它細(xì)胞(CFSEhigh)區(qū)分開(kāi)來(lái)。在一些具體實(shí)施方案中，如果CFSE稀釋(以CFSE1 細(xì)胞占所有的CFSE+細(xì)胞的百分率表示)是至少約5%、至少約10 %、至少約25 %、至少約50 %、至少約75 %、至少約90 %、至少約95 %或至少約100 %， 則稱發(fā)生了抗原誘導(dǎo)的增殖。在一些具體實(shí)施方案中，如果T細(xì)胞激活的細(xì)胞標(biāo)記物相對(duì)于未刺激細(xì)胞以不同的水平(例如，更高或更低的水平)表達(dá)，則稱T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，⑶Ila⑶27、⑶25、⑶40L、⑶44、⑶45R0和/或⑶69在激活的T細(xì)胞中比在未刺激的T細(xì)胞中表達(dá)更高。在一些具體實(shí)施方案中，L-選擇素(⑶62L)、⑶45RA和/或 CCR7在激活的T細(xì)胞中比在未刺激的T細(xì)胞中表達(dá)更低。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)檢測(cè)效應(yīng)CD8+T細(xì)胞對(duì)抗抗原脈沖的靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性來(lái)測(cè)量T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答。例如，可以進(jìn)行51鉻(51Cr)釋放試驗(yàn)。在該試驗(yàn)中，效應(yīng) CDS+T細(xì)胞結(jié)合感染的在I類(lèi)MHC上遞呈病毒肽的細(xì)胞，并給感染的細(xì)胞發(fā)出細(xì)胞凋亡的信號(hào)。如果加入效應(yīng)CD8+T細(xì)胞前用51Cr標(biāo)記細(xì)胞，則釋放到上清液中的51Cr的含量與被殺滅的目標(biāo)的數(shù)目成比例。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到以上所述的試驗(yàn)僅僅是可用于確定是否發(fā)生T細(xì)胞激活的示例性方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的可用于確定是否發(fā)生T細(xì)胞激活的任何試驗(yàn)均落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。本文中所述的試驗(yàn)以及其它可用于確定是否發(fā)生T細(xì)胞激活的試驗(yàn)描述于Current Protocols in Immunology (免疫學(xué)通用實(shí)驗(yàn)方案)(John Wiley & Sons, Hoboken, NY, 2007 ；引入本文中作為參考)。
B細(xì)胞本發(fā)明提供了用于將例如免疫調(diào)節(jié)劑傳送至免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的疫苗納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一種可以被呈遞至B細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)劑(即， B細(xì)胞抗原)。
免疫調(diào)節(jié)劑B細(xì)胞和T細(xì)胞通過(guò)不同的機(jī)理識(shí)別抗原。如上所述，T細(xì)胞識(shí)別加工形式的抗原(例如，被APC的MHC分子遞呈至T細(xì)胞受體的肽片段)。B細(xì)胞識(shí)別天然形式的抗原。 B細(xì)胞通過(guò)B細(xì)胞受體(BCR)和/或膜上結(jié)合的免疫球蛋白識(shí)別血液或淋巴中的游離(例如，可溶性的)抗原。免疫調(diào)節(jié)試劑可以是B細(xì)胞抗原。B細(xì)胞抗原包括，但不限于，蛋白、肽、小分子和碳水化合物。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是非蛋白抗原(S卩，不是蛋白或肽抗原)。 在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是與傳染性試劑結(jié)合的碳水化合物。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是與傳染劑結(jié)合的糖蛋白或糖肽。傳染劑可以是細(xì)菌、病毒、真菌、原生動(dòng)物或寄生蟲(chóng)。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是被濫用的物質(zhì)或其部分。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是令人上癮的物質(zhì)或其部分。令人上癮的物質(zhì)包括，但不限于，已知能引起上癮的藥物，包括刺激劑、鎮(zhèn)靜劑和鴉片劑、安非他命、可卡因、海洛因、咖啡因、酒精、巴比妥酸鹽、苯化重氮、安眠酮、嗎啡、芬太尼、溶劑、合成代謝類(lèi)固醇、大麻、尼古丁、麻醉藥、咳嗽抑制劑、鎮(zhèn)定劑、鎮(zhèn)靜劑及其所有代謝物、類(lèi)似物和衍生物。令人上癮的物質(zhì)的更多實(shí)例包括本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，令人上癮的物質(zhì)包含一個(gè)或多個(gè)手性碳中心，并因此可以以光學(xué)異構(gòu)純形式或異構(gòu)體混合物存在。在一些具體實(shí)施方案中，其中令人上癮的物質(zhì)的令人上癮的特性取決于手性碳的立體化學(xué)，本文中所述組合物中所用的令人上癮的物質(zhì)在使用者中作為最令人上癮的異構(gòu)體存在，或作為最常見(jiàn)可用的異構(gòu)體存在，或作為最常見(jiàn)引起上癮的異構(gòu)體存在。
例如，令人上癮的物質(zhì)是尼古丁。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，例如，令人上癮的物質(zhì)是(S)-(-)-尼古丁或(R)-(-)_尼古丁。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，令人上癮的物質(zhì)是 (s)-(-)-尼古丁。認(rèn)為藥物上癮是一種病態(tài)，涉及急性藥物使用的進(jìn)展至尋找藥物行為的產(chǎn)生， 復(fù)發(fā)的脆弱性和降低的、緩慢的應(yīng)答天然有益刺激物的能力。The Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (精神障礙的診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè))，第四版 (DSM-IV)，將上癮分成三個(gè)階段關(guān)注/期待，bingelintoxication和停藥/負(fù)面影響。這些階段的特征各自在于，在任何地方對(duì)獲得物質(zhì)有著不變的渴望和關(guān)注；使用比體驗(yàn)使人興奮效果需要更多的物質(zhì)；和經(jīng)歷耐受性、停藥癥狀以及降低的對(duì)正常生活活動(dòng)的動(dòng)力。根據(jù)令人上癮藥物美國(guó)協(xié)會(huì)的定義，藥物上癮不同于藥物依賴性和耐藥性。術(shù)語(yǔ)藥物上癮還用作包括可以給予物質(zhì)依賴或物質(zhì)濫用診斷的相同人員的類(lèi)別。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是毒素，例如來(lái)自化學(xué)武器的毒素。在一些具體實(shí)施方案中，來(lái)自化學(xué)武器的毒素是肉毒桿菌毒素或磷雜環(huán)戊二烯。來(lái)自化學(xué)武器的毒素包括，但不限于，0-烷基(< C10，包括環(huán)烷基)烷基(MeJt、n-ft·或i-pr)-膦?；?例如，沙林0-異丙基甲基磷?；?，梭曼0-頻哪基甲基磷?；?，0-烷基(< C10，包括環(huán)烷基)N，N- 二烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)磷酰胺氰化物(例如，塔崩 0-乙基N，N-二甲基磷酰胺氰化物)，0-烷基01或<(10，包括環(huán)烷基)5-2-二烷基(Me、 Et、n-Pr或i-Pr)-氨基乙基烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)硫代磷酸鹽及相應(yīng)的烷基化或質(zhì)子化鹽(例如，VX 0-乙基S-2-二異丙基氨基乙基甲基硫代磷酸鹽)，硫芥子氣2-氯乙基氯甲基硫醚，芥子氣雙(2-氯乙基)硫醚、雙(2-氯乙基硫)甲烷，倍半芥子氣1，2_雙 (2-氯乙基硫)乙烷、1，3-雙(2-氯乙基硫)-η-丙烷、1，4-雙(2-氯乙基硫)_η_ 丁烷、1， 5-雙(2-氯乙基硫)-η-戊烷、雙(2-氯乙基硫甲基)乙醚，0-芥子雙(2-氯乙基硫乙基) 乙醚，路易斯毒氣(Lewisite)路易斯毒氣1 :2_氯乙烯二氯胂，路易斯毒氣2 雙(2_氯乙烯)氯胂，路易斯毒氣3 三(2-氯乙烯)胂，氮芥HN1 雙(2-氯乙基)乙胺，HN2 雙O-氯乙基)甲胺，HN3 三氯乙基)胺，蛤蛘毒素，蓖麻毒素，阿米噸(Amiton) :0，0-二乙基 S-(二乙基氨基)乙基)硫代磷酸鹽及相應(yīng)的烷基化或質(zhì)子化鹽，PFIB :1，1，3，3，3-五氟-2-(三氟甲基)-1-丙烯，二苯羥乙酸-3-喹嚀環(huán)酯(BZ)，光氣碳酰氯，氯化氰，氰化氫和三氯硝基甲三氯硝基甲烷。B細(xì)胞抗原還可以是有害環(huán)境試劑。有害環(huán)境試劑包括，但不限于，砷、鉛、汞、氯乙烯、多氯聯(lián)苯、苯、多環(huán)芳香烴、鎘、苯并(a)芘、苯并(b)熒蒽、氯仿、DDT、P，P’-，阿羅克洛 1254(aroclor 1254)、阿羅克洛 1260 (aroclor 1260)、二苯并(a，h)蒽、三氯乙烯、狄氏劑、 六價(jià)鉻和DDE，P，P’。這樣的試劑的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是自體抗原。在其它具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞抗原是同種抗原、接觸致敏劑、退行性疾病抗原、半抗原、傳染病抗原、癌癥抗原、特應(yīng)性疾病抗原、自體免疫疾病抗原、令人上癮的物質(zhì)、異種抗原或代謝性疾病酶或其酶產(chǎn)物。這樣的抗原的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。如上所述，本發(fā)明提供了包含例如一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑的疫苗納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，包含一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑的本發(fā)明納米載體用作疫苗。在一些具體實(shí)施方案中，向B細(xì)胞的抗原遞呈可以通過(guò)在納米載體的表面上遞呈結(jié)構(gòu)上完整的免疫調(diào)節(jié)劑而最優(yōu)化。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)上完整的免疫調(diào)節(jié)劑以高拷貝數(shù)目和/或密度在疫苗納米載體的表面上得到呈遞。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包含分離的和/或重組的蛋白或肽、滅活的生物體和病毒、死的生物體和病毒、遺傳改變的生物體或病毒，和細(xì)胞提取物。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以包含核酸、碳水化合物、脂質(zhì)和/或小分子。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是激發(fā)免疫應(yīng)答的試劑。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是抗原。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑用于疫苗?？梢栽谝陨蠘?biāo)題為“B細(xì)胞”的部分中找到對(duì)于免疫調(diào)節(jié)試劑的進(jìn)一步描述。如上所述，疫苗納米載體可以包含一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其同時(shí)刺激B細(xì)胞和T 細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其中第一種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激B細(xì)胞，第二種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中， 疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑，其中一種或多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激B 細(xì)胞，一種或多種類(lèi)型的免疫調(diào)節(jié)劑刺激T細(xì)胞。
靶向部分如上所述，本發(fā)明的納米載體包含一個(gè)或多個(gè)靶向部分。關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的靶向部分的一般性和特異性特性的討論，參見(jiàn)以上標(biāo)題為“T細(xì)胞”的部分中小標(biāo)題為“靶向部分”的內(nèi)容。在一些具體實(shí)施方案中，靶向部分靶向特定的細(xì)胞類(lèi)型。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是B細(xì)胞標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞目標(biāo)是在B細(xì)胞中而不在非B細(xì)胞中表達(dá)的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞目標(biāo)是在B細(xì)胞中比在非B細(xì)胞中更普遍存在的抗原。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是SCS-Mph標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中， SCS-Mph目標(biāo)是在SCS-Mph中但不在非SCS-Mph中表達(dá)的抗原。在一些具體實(shí)施方案中， SCS-Mph目標(biāo)是在SCS-Mph中比在非SCS-Mph中更普遍存在的抗原。示例性的SCS-Mph標(biāo)記物在下面標(biāo)題為“被膜下竇巨噬細(xì)胞”的部分列出并且包括本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是SCS-Mph時(shí)，疫苗納米載體上的靶向部分是尼古丁，或尼古丁的衍生物或類(lèi)似物(如，尼古丁的片段)。具有尼古丁靶向部分的納米載體的實(shí)例包括其中尼古丁與納米載體的成分之一結(jié)合(如通過(guò)共價(jià)鍵)的情況。一個(gè)實(shí)例是尼古丁-聚合物偶聯(lián)物，其中尼古丁與作為納米載體一部分的聚合物分子共價(jià)結(jié)合。在某些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)是FDC標(biāo)記物。在一些具體實(shí)施方案中，F(xiàn)DC目標(biāo)是在FDC中但不在非FDC中表達(dá)的抗原。在一些具體實(shí)施方案中，F(xiàn)DC目標(biāo)是在FDC中比在非FDC中更普遍存在的抗原。示例性FDC標(biāo)記物在下面標(biāo)題為“濾泡樹(shù)突狀細(xì)胞”的部分列出并且包括本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)優(yōu)先在特定的細(xì)胞類(lèi)型中表達(dá)。例如，SCS_Mph、FDC 禾口 /或B細(xì)胞中的SCS-Mph、FDC和/或B細(xì)胞目標(biāo)的表達(dá)相對(duì)于參考群體在SCS_Mph、FDC 和/或B細(xì)胞中為至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50 倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍過(guò)表達(dá)。在一些具體實(shí)施方案中，參考群體可以包含非SCS-Mph, FDC和/或B細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，激活的SCS-Mph、FDC和/或B細(xì)胞中的SCS-Mph、FDC和 /或B細(xì)胞目標(biāo)的表達(dá)相對(duì)于參考群體在激活的SCS-Mph、FDC和/或B細(xì)胞中為至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍過(guò)表達(dá)。在一些具體實(shí)施方案中，參考群體可以包含非激活的SCS-Mph、FDC 和/或B細(xì)胞。被膜下竇巨噬細(xì)胞本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)抗原靶向被膜下竇巨噬細(xì)胞(SCS-Mph)涉及淋巴攜帶的病原體(如病毒)向?yàn)V泡B細(xì)胞的有效早期遞呈(圖2)。如實(shí)施例1所述，向小鼠足墊皮下注射泡性口炎病毒(VSV)或腺病毒(AdV)后，病毒顆粒被引流胭淋巴結(jié)中的⑶169+SCS-Mph 有效地且選擇性地保留。這些淋巴結(jié)中的VSV特異性B細(xì)胞受體(BCR)轉(zhuǎn)基因B細(xì)胞被迅速激活并在該病毒攻擊時(shí)產(chǎn)生特別高的抗體效價(jià)。通過(guò)注射負(fù)載了氯曲膦酸鹽的脂質(zhì)體 (其對(duì)Mph是毒性的)耗盡SCS-Mph消除了早期的B細(xì)胞激活，這表明SCS-Mph對(duì)于淋巴攜帶顆?？乖駼細(xì)胞遞呈來(lái)說(shuō)是必需的。在固定表面上，而不是在溶液中，通過(guò)呈遞至B細(xì)胞的多價(jià)抗原更有力地激活了 B細(xì)胞。不希望受到任一種理論的束縛，本發(fā)明提出了為什么許多包被的病毒(例如VSV) 引發(fā)針對(duì)其包被糖蛋白的有力中和抗體應(yīng)答的原因抗原性蛋白在病毒顆粒的表面上以非常高的密度得到呈遞，并且病毒顆粒以相對(duì)不可移動(dòng)的方式被呈遞至B細(xì)胞，S卩，結(jié)合 SCS-Mph的質(zhì)膜。本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)通過(guò)在皮下注射時(shí)靶向SCS-Mph并在其表面上遞呈多價(jià)的構(gòu)象完整的抗原而模擬病毒顆粒的疫苗載體能夠刺激有力的B細(xì)胞應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，SCS-Mph靶向通過(guò)結(jié)合⑶169(即，唾液酸粘附素)、 CDllb (即，CDllb/CD18、Mac-I、CR3或α Μβ 2整聯(lián)蛋白)、和/或甘露糖受體(即，多價(jià)凝集素)、蛋白(這些蛋白皆為主要在SCS-Mph上表達(dá))的部分實(shí)現(xiàn)。這樣的部分的例子包括在本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)特異性結(jié)合主要在巨噬細(xì)胞上表達(dá)和/或存在的任意實(shí)體(例如蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物、小分子等)(即，SCS-Mph標(biāo)記物)的任意靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)SCS-Mph靶向。示例性的SCS-Mph標(biāo)記物包括，但不限于，⑶4(L3T4，W3/25， T4) ；CD9(p24，DRAP-I，MRP-I) ；CDlla(LFA-l α , α L 整聯(lián)蛋白鏈)；CDllb ( α M 整聯(lián)蛋白鏈，CR3, Mol, C3niR, Mac-1) ；CDllc(a X 整聯(lián)蛋白，pl50，95，AXb2) ；CDwl2 (p90_120)； CD13(APN, gpl50, EC 3. 4. 11. 2) ；CD 14(LPS-R) ；CD15(X_ 半抗原，Lewis, X，SSEA-I, 3-FAL) ；CD15s(唾液酰 LewisX) ；CD15u(3'硫代 Lewis X) ；CD15su (6 硫代-唾液酰 Lewis X) ；CD16a (FCRIIIA) ；CD16b (FcgRIIIb) ；CDwl7(乳糖基神經(jīng)酰胺，LacCer) ；CD18(整聯(lián)蛋白β 2，CDlla，b，亞基)；Q^6(DPP IV外酶，ADA結(jié)合蛋白)；(皿9(血小板 GPIIa, β-l 整聯(lián)蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1，Endocam) ；CD32(FCyRII) ；CD33(gp67)； CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD36(GpIIIb，GPIV, PASIV) ；CD37(gp52_40) ；CD38(ADP-核糖基環(huán)化酶，T10) ；CD39(ATP脫氫酶，NTP脫氫酶-1) ；CD40(Bp50) ；CD43(涎福林，白細(xì)胞唾液素)；CD44(ECMRII，Η-CAM, Pgp-1) ；CD45(LCA，T200, B220, Ly5) ；CD45RA ； CD45RB ；CD45RC ；CD45R0(UCHL-I) ；CD46(MCP) ；CD47(gp42, IAP, 0A3, Neurophillin)； CD47R(MEM-133) ；CD48 (Blast-1, Hulym3, BCM-1, 0X-45) ；CD49a(VLA_l α，α 1 整聯(lián)蛋白)； CD49b (VLA-2 α，gpla, α 2 整聯(lián)蛋白)；CD49c (VLA-3 α，α 3 整聯(lián)蛋白)；CD49e (VLA-5 α， α 5 整聯(lián)蛋白)；CD49f(VLA-6a , a 6 整聯(lián)蛋白，gplc) ；CD50(ICAM_3) ；CD51(整聯(lián)蛋白 α ， VNR-α ， Vitronectin-R a) ；CD52(CAMPATH-1, HE5) ；CD53(0X-44) ；CD54(ICAM-I)；CD55 (DAF) ；CD58(LFA-3) ；CD59(lF5Ag, H19,保護(hù)素(Protectin)，MACIF, MIRL, P-18)； CD60a(GD3) ；CD60b(9_0_ 乙?；?GD3) ；CD61(GP Ilia, β3 整聯(lián)蛋白)；CD62L(L_ 選擇素，LAM-1，LECAM-I, MEL-14, Leu8, TQl) ；CD63(LIMP, MLA1, gp55, NGA, LAMP-3，ME491)； CD64(Fc y RI) ；CD65 (神經(jīng)酰胺，VIM-2) ；CD65s (唾液?；?CD65，VIM2) ；CD72 (Ly_19. 2， Ly-32. 2, Lyb-2) ；CD74(Ii,不變鏈)；CD75 (唾液酸遮掩的乳糖胺)；CD75S(a2，6 唾液?；樘前?；CD80(B7，B7-1, BBl) ；CD81 (ΤΑΡΑ-Ι) ；CD82(4F9, C33, IA4, KAI1, R2)； CD84(p75, GR6) ；CD85a(ILT5, LIR2, HL9) ；CD85d(ILT4, LIR2, MIR10) ；CD85j(ILT2, LIRl， MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HM18) ；CD86(B7-2/B70) ；CD87(uPAR) ；CD88(C5aR) ；CD89(IgA Fc 受體，F(xiàn)caR) ；CD91(a2M-R，LRP) ； CDw92(p70) ； CDw93 (GRll) ；CD95(AP0_1，F(xiàn)AS, TNFRSF6) ；CD97(BL-KDD/F12) ；CD98 (4F2, FRP-I, RL-388) ；CD99(MIC2, E2) ；CD99R(CD99 Mab 限制的)；CD100(SEMA4D) ；CDlOl(IGSF2, P126, V7) ；CD102(ICAM-2) ;CD111(PVRL1， HveC, PRRl, Nectin 1，HIgR) ；CD112(HveB, PRR2, PVRL2, Nectin2) ；CDl14(CSF3R, G-CSRF, HG-CSFR) ；CDl15(c-fms, CSF-1R，M-CSFR) ；CDl16(GM-CSFRα) ；CDwl19(IFNyR, IFN y RA) ；CD120a(TNFRI，p55) ;CD120b(TNFRII，p75, TNFR p80) ；CD121b(2 型 IL-1R)； CD122 (IL2R^ ) ；CD123 (IL-3R α ) ；CD124 (IL-4R α ) ；CD127(p90, IL-7R, IL_7Ra)； CD128a(IL-8Ra, CXCRl，(暫時(shí)命名為 CD181)) ;CD128b(IL_8Rb，CSCR2,(暫時(shí)命名為 CD182)) ；CD130(gpl30) ；CD131(常見(jiàn)的 β 亞基)；CD132(常見(jiàn)的 γ 鏈，IL-2Ry)； CDwl36 (MSP-R, RON, pl58-ron) ；CDwl37 (4-1BB, ILA) ；CD139 ；CD141 (血栓調(diào)節(jié)蛋白，胎兒調(diào)節(jié)素)；CD147(Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD148 (HPTP- η , p260, DEP-1) ；CD 155 (PVR)； CD 156a (CD 156, ADAM8, MS2) ；CD156b (TACE，ADAMl7, cSVP) ；CDwl56C (ADAMlO) ；CD157(Mo5, BST-1) ；CD162(PSGL-I) ；CD164(MGC-24，MUC-24) ；CD 165 (AD2, gp37) ；CD168(RHAMM, IHABP, HMMR) ；CD169 (唾液酸粘附素，Siglec-1) ；CD170 (Siglec 5) ；CD171 (L1CAM, NILE)； CD172(SIRP-1α，MyD-I) ；CD172b(SIRPβ) ；CD180(RP105, Bgp95, Ly64) ；CD181(CXCR1， (以前稱作 CDU8a)) ；CD182(CXCR2,(以前稱作 CD12m3)) ；CD184(CXCR4，NPY3R)； CD191 (CCRl) ；CD192(CCR2) ；CD195(CCR5) ；CDwl97 (CCR7 (以前是CDwl97)) ；CDw 198 (CCR8)； CD204 (MSR) ；CD205(DEC-205) ；CD206(MMR) ；CD207(Langerin) ；CDw210(CK) ；CD213a(CK)； CDw217(CK) ；CD220(胰島素 R) ；CD221(IGFlR) ；CD222(M6P-R, IGFII-R) ；CD224(GGT)； CD226(DNAM-1, PTA1) ；CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ；CD232(VESP-R) ；CD244(2B4, P38, NAIL) ；CD245(p220/240) ；CD256 (APRIL，TALL2，TNF (配體)超家族，成員 13) ；CD257(BLYS, TALLl，TNF (配體)超家族，成員 13b)；(擬61 (TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成員 IOa)； CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ；CD263 (TRAIL-R3, TNBF-R 超家族，成員 IOc)； CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila)； CD277 (BT3. 1，B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；CD280 (TEM22, ENDO 180) ；CD281 (TLR1，鐘樣受體 1) ；CD282(TLR2,鐘樣受體 2) ；CD284(TLR4,鐘樣受體 4) ；CD295 (LEPR) ；CD298 (ATP1B3, Na K ATP 酶，β 3 亞基)；CD300a (CMRF-35H) ；CD300c (CMRF-35A) ；CD300e (CMRF-35L1)； CD302 (DCLl) ；CD305(LAIRl) ；CD312(EMR2) ；CD315 (CD9P1) ；CD317(BST2) ；CD321(JAMl)； CD322 (JAM2) ；CDw328 (Siglec7) ；CDw329 (Siglec9) ；CD68 (gp 110，巨噬涎蛋白)；和 / 或甘露糖受體；其中括號(hào)中所列名稱代表別名。這樣的標(biāo)記物的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。
在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)特異性結(jié)合激活時(shí)主要在巨噬細(xì)胞上表達(dá)和 /或存在的任意實(shí)體(例如蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物、小分子等)(即，激活的SCS-Mph標(biāo)記物)的任意靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)SCS-Mph靶向。示例性的激活的SCS-Mph標(biāo)記物包括， 但不限于，CDla(R4，T6, HTA-I) ；CDlb(Rl) ；CDlc(M241, R7) ；CD44R(CD44v, CD44v9)； CD49d (VLA-4 α，α 4 整聯(lián)蛋白)；CD69(AIM，EAl, MLR3, gp34/28, VEA) ；CD105(內(nèi)皮糖蛋白(Endoglin)) ；CD142 (組織因子，促凝血酶原激酶，F(xiàn)3) ；CD143 (ACE，肽基二肽酶A，激肽酶 II) ；CD153(CD30L, TNSF8) ；CD163(M130, GHI/61, RM3/1) ；CD166 (ALCAM, KG-CAM，SC-I, BEN, DM-GRASP) ；CD227 (MUC1，PUM，PEM，EMA) ；CD253 (TRAIL，TNF(配體)超家族，成員 10)； CD273(B7DC, PDL2) ；CD274(B7H1, PDL1) ；CD275(B7H2, IC0SL) ；CD276(B7H3) ；CD297(ART4, ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶4)；和Dombrock血型糖蛋白；其中括號(hào)中所列名稱代表別名。這樣的標(biāo)記物的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。B細(xì)胞靶向部分在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)結(jié)合補(bǔ)體受體，CR1( BP,⑶35)或CR2(即， ⑶21)，B細(xì)胞以及FDC上表達(dá)的蛋白的部分來(lái)實(shí)現(xiàn)B細(xì)胞靶向。在一些具體實(shí)施方案中， 可以通過(guò)B細(xì)胞標(biāo)記物，如⑶19、⑶20和/或⑶22，來(lái)實(shí)現(xiàn)B細(xì)胞靶向。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)B細(xì)胞標(biāo)記物，如^40、^52、^80丄乂0 5、￥1^-4、11類(lèi)]\^(、表面IgM或 IgD, APRL和/或BAFF-R來(lái)實(shí)現(xiàn)B細(xì)胞靶向。本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)通過(guò)補(bǔ)體受體或其它 APC相關(guān)的分子特異性的部分同時(shí)靶向B細(xì)胞會(huì)增強(qiáng)體液應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)特異性結(jié)合主要在B細(xì)胞上表達(dá)和/或存在的任意實(shí)體(例如蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物、小分子等)(即，B細(xì)胞標(biāo)記物)的任意靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)B細(xì)胞靶向。示例性的B細(xì)胞標(biāo)記物包括，但不限于，⑶lc(MMl，R7)； CDld(R3) ；CD2(E-玫瑰花結(jié) R，Tll，LFA-2) ；CD5(T1, Tp67, Leu-I, Ly-1) ；CD6 (Τ12)； CD9 (p24, DRAP-I, MRP-1) ;CDlla(LFA_la，a L 整聯(lián)蛋白鏈)；CDl lb ( a M 整聯(lián)蛋白鏈， CR3, Mol，C3niR, Mac-1) ；CDllc(a X 整聯(lián)蛋白，P150，95，AXb2) ；CDwl7(乳酸神經(jīng)酰胺，LacCer) ；CD18(整聯(lián)蛋白 β 2，CDlla, b，c β -亞基)；CD19(B4) ；CD20(B1, Bp35)； CD21(CR2, EBV-R, C3dR) ；CD22(BL-CAM，Lyb8, Siglec-2) ；CD23(FceRII, B6, BLAST-2， Leu-20) ；CD24(BBA-1, HSA) ；CD25(Tac 抗原，IL_2Ra，p55) ；CD26 (DPP IV 內(nèi)酶，ADA 結(jié)合蛋白)；CD27(T14，S152) ；CD^ (血小板 GPIIa，β _1 整聯(lián)蛋白，GP) ； CD31 (PECAM-1， Endocam) ；CD32(FCyRII) ；CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD37(gp52_40) ；CD38(ADP-核糖基環(huán)化酶，T10) ；CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶 _1) ；CD40(Bp50) ；CD44(ECMRII， Η-CAM, Pgp-1) ；CD45 (LCA, T200, B220, Ly5) ；CD45RA ；CD45RB ；CD45RC ；CD45R0 (UCHL-I)； CD46 (MCP) ；CD47(gp42, IAP, 0A3，神經(jīng)菌毛素)；CD47R(MEM_133) ；CD48 (Blast-1, Hulym3, BCM-1, 0X-45) ；CD49b (VLA-2 α，gpla, α 2 整聯(lián)蛋白)；CD49c (VLA-3 α，α 3 整聯(lián)蛋白)； CD49d(VLA-4a，a4 整聯(lián)蛋白)；CD50 (ICAM-3) ；CD52 (CAMPATH-1，HES) ；CD53 (0X-44)； CD54 (ICAM-I) ；CD55(DAF) ；CD58 (LFA-3) ；CD60a(GD3) ；CD62L (L-選擇素，LAM-1, LECAM-I, MEL-14, Leu8, TQ 1) ；CD72 (Ly_19. 2，Ly-32. 2, Lyb-2) ；CD73(Ecto-5，-核苷酸酶)； ⑶74(Ii，不變鏈)；⑶75(唾液酸遮掩的乳糖胺)；⑶75S(a2，6唾液酰化乳糖胺)； CD77(Pk 抗原，BLA，CTH/Gb3) ；CD79a (Ig α，MBl) ；CD79b (Ig β，Β29) ；CD80 ；CD81 (TAPA-I)； CD82(4F9, C33, IA4, KAI1，R2) ；CD83(HB15) ；CD84(P75, GR6) ；CD85j(ILT2, LIRl，MIR7)；CDw92(p70) ；CD95(AP0-1, FAS, TNFRSF6) ；CD98(4F2, FRP-I, RL-388) ；CD99(MIC2, E2)； CDlOO(SEMA4D) ；CD102(ICAM-2) ；CD108(SEMA7A, JMH 血型組抗原)；CDwl19(IFN γR， IFN y Ra) ；CD120a(TNFRI, p55) ；CD 120b (TNFRII, p75, TNFR p80) ；CD121b(2 型 IL-1R)； CD122(IL2R3 ) ;CD124(IL-4Ra ) ;CD130(gpl30) ;CD132(常見(jiàn)的 Y 鏈，IL_2Ry); CDw137(4-1BB, I LA) ；CD139 ；CD147 (Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ； CD150 (SLAM, IP0-3)； CD162 (PSGL-I) ;CD164(MGC_24，MUC-24) ；CD166(ALCAM, KG-CAM, SC-I, BEN, DM-GRASP)； CD167a(DDRl，trkE，cak) ；CD171 (L1CMA, NILE) ；CD175s (唾液酸-Tn (S-Tn)) ；CD180 (RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD185(CXCR5) ；CD192(CCR2) ；CD196(CCR6)； CD197(CCR7(以前是 CDwl97)) ；CDwl97 (CCR7, EBI1, BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205 (DEC-205)； CDw210 (CK) ；CD213a(CK) ；CDw217(CK) ；CDw218a(IL18Rα ) ；CDw218b (IL18Rβ )； CD220(胰島素 R) ； CD221 (IGFlR) ； CD222 (M6P-R, IGFII-R) ； CD224(GGT) ； CD225 (Leul3)； CD226(DNAM-1，PTA1) ；CD227(MUC1，PUM, PEM, EMA) ；CD229(Ly9) ；CD230(朊病毒蛋白 (Prp)) ；CD232 (VESP-R) ；CD245 (p220/240) ；CD247(CD3 ζ 鏈)；CD261 (TRAIL-R1，TNF-R 超家族，成員 IOa) ；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ；CD263 (TRAIL-R3, TNF-R 超家族，成員 IOc) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD267(TACI, TNF-R 超家族，成員 13B) ；Q^68(BAFFR，TNF-R 超家族，成員 13C) ；CD269(BCMA, TNF-R 超家族，成員 16) ；CD275(B7H2, IC0SL) ；CD277 (BT3. 1. B7 家族 嗜乳脂蛋白 3) ；CD295 (LEPR) ；CD298 (ATP1B3 Na K ATP 酶 β 3 亞基)；CD300a (CMRF-35H)； CD300c (CMRF-35A) ；CD305 (LAIRl) ；CD307 (IRTA2) ；CD315(CD9P1) ；CD316(EW12)； CD317(BST2) ；CD319(CRACC, SLAMF7) ；CD321(JAMl) ；CD322(JAM2) ；CDw327(Siglec6, CD33L) ；CD68(gp 100，巨噬涎蛋白)；C)(CR5 ;VLA_4 ;11 類(lèi)MHC ；表面 IgM ；表面 IgD !AI3RL ；和 /或BAFF-R ；其中括號(hào)中所列名稱代表別名。標(biāo)記物的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)特異性結(jié)合激活時(shí)主要在B細(xì)胞上表達(dá)和/或存在的任意實(shí)體(例如蛋白、脂質(zhì)、碳水化合物、小分子等)(即，激活的B細(xì)胞標(biāo)記物)的任意靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)B細(xì)胞靶向。示例性的激活的B細(xì)胞標(biāo)記物包括，但不限于，CDla(R4，T6， HTA-1) ；CDlb (Rl) ；CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3'硫代 Lewis X) ；CD15su (6 硫代-唾液酰 Lewis X) ；CD30(Ber-H2, Ki-I) ；CD69(AIM, EA 1，MLR3, gp34/28, VEA) ；CD70(Ki_24， CD27 配體)；CD80(B7，B7-1，BBl) ；CD86 (B7-2/B70) ；CD97 (BL-KDD/F12) ；CD125 (IL-5R α )； CD126(IL-6Ra) ；CD138 (多配體蛋白聚糖-1 (Syndecan-1)，類(lèi)肝素硫酸鹽蛋白聚糖)； CD152(CTLA-4) ；CD252 (0X40L，TNF (配體)超家族，成員 4) ；CD253 (TRAIL，TNF (配體)超家族，成員10) ；CD279(PD1) ；0^89 (TLR9，鐘樣受體9)；和CD312 (EMR2)；其中括號(hào)中所列名稱代表別名。標(biāo)記物的實(shí)例包括本文中別處提供的那些。濾泡樹(shù)突細(xì)胞最初檢測(cè)到之前未知抗原的B細(xì)胞通常表達(dá)對(duì)該抗原具有亞最適結(jié)合親和性的B 細(xì)胞受體出0 ，8卩，具有跨膜結(jié)構(gòu)域的抗體)。然而，當(dāng)B細(xì)胞進(jìn)入生發(fā)中心(GC)反應(yīng)時(shí)， B細(xì)胞能夠?qū)⑵洚a(chǎn)生的抗體的親和性增加幾個(gè)數(shù)量級(jí)。這個(gè)通常持續(xù)幾周的事件取決于累積、保留并遞呈抗原性材料至激活的B細(xì)胞的FDC。B細(xì)胞，雖然有力地增殖，反復(fù)地使編碼抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的遺傳序列發(fā)生變異并進(jìn)行類(lèi)別轉(zhuǎn)換重組以形成分泌的高親和性抗體，大部分為IgG同種型。GC反應(yīng)還刺激長(zhǎng)命的記憶B細(xì)胞和保持高保護(hù)性抗體效價(jià)(通常為很多年)的漿細(xì)胞的產(chǎn)生。預(yù)測(cè)在皮下注射時(shí)靶向FDC并被長(zhǎng)期保留在FDC表面的疫苗載體增強(qiáng)針對(duì)疫苗接種應(yīng)答的GC反應(yīng)并提高所需體液免疫應(yīng)答的親和性和長(zhǎng)期性。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)結(jié)合補(bǔ)體受體，CR1( BP,⑶35)或CR2(即， ⑶21)，F(xiàn)DC以及B細(xì)胞上表達(dá)的蛋白的部分來(lái)實(shí)現(xiàn)FDC靶向。部分的例子包括本文中別處提供的那些。包含多個(gè)靶向部分的疫苗納米載體GC反應(yīng)和B細(xì)胞存活不僅需要FDC，而且還依賴于由激活的⑶4T細(xì)胞提供的幫助。當(dāng)⑶4T細(xì)胞首先被將II類(lèi)MHC中的同源肽(pMHC)呈遞以獲得濾泡幫助(Tfh)表型的 DC刺激時(shí)，提供的幫助是最有效的。然后新生成的Tfh細(xì)胞朝著B(niǎo)濾泡遷移并向呈遞相同 PMHC復(fù)合體的那些B細(xì)胞提供幫助。為此，B細(xì)胞首先獲得抗原性材料(例如，病毒或病毒樣疫苗)，將其內(nèi)在化并加工(即，提取裝載至II類(lèi)MHC的肽)，然后將pMHC呈遞至Tfh細(xì)胞。因此，本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)刺激最適體液免疫力的疫苗能夠結(jié)合幾個(gè)特征和成分(圖1) (a)靶向DC并被DC呈遞的針對(duì)CD4T細(xì)胞的抗原性材料；(b)能夠以天然形式被SCS-Mph遞呈至抗原特異性濾泡B細(xì)胞的高密度表面抗原；(c)為了遞呈至Tfh細(xì)胞，被濾泡B細(xì)胞獲得并被濾泡B細(xì)胞加工的能力(本發(fā)明包括以下認(rèn)識(shí)B細(xì)胞容易獲得來(lái)自 SCS-Mph的顆粒物質(zhì)并將其內(nèi)在化)；(d)到達(dá)FDC并以完整形式被長(zhǎng)期保留在FDC上的能力；和(e)賦予APC完全免疫原性并避免或克服耐受的輔助活性。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一個(gè)靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體的所有靶向部分是彼此相同的。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含各種不同類(lèi)型的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含多個(gè)單獨(dú)的靶向部分，所有的彼此相同。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體只包含一種類(lèi)型的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體只包含兩種不同類(lèi)型的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含多于兩種不同類(lèi)型的靶向部分。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含單一類(lèi)型的靶向部分，其引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至單一的細(xì)胞類(lèi)型(例如，只傳送至SCS-Mph)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含單一類(lèi)型的靶向部分，其引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至多種細(xì)胞類(lèi)型(例如，同時(shí)傳送至SCS-Mph和FDC)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的靶向部分， 其中第一種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至一種細(xì)胞類(lèi)型，第二種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至第二種細(xì)胞類(lèi)型。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的靶向部分，其中一種或多種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至一種細(xì)胞類(lèi)型，一種或多種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至第二種細(xì)胞類(lèi)型。僅舉一例，疫苗納米載體可以包含兩種類(lèi)型的靶向部分，其中第一種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至DC，第二種類(lèi)型的靶向部分引導(dǎo)疫苗納米載體傳送至SCS-Mph。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含至少一個(gè)靶向部分，其與疫苗納米載體的外表面結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是共價(jià)的。在一些具體實(shí)施方案中，共價(jià)結(jié)合由一個(gè)或多個(gè)連接物介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)合是非共價(jià)的。在一些具體實(shí)施方案中，非共價(jià)結(jié)合由電荷相互作用、親和性相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水性相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合所介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包括脂膜(例如，脂雙層、脂單層等)，其中至少一個(gè)靶向部分與脂膜結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，至少一個(gè)靶向部分嵌入脂膜內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一個(gè)靶向部分嵌入脂雙層的腔內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，至少一個(gè)靶向部分可以位于疫苗納米載體的多個(gè)位點(diǎn)。例如，第一個(gè)靶向部分可以嵌于脂膜內(nèi)， 第二種免疫刺激劑可以與疫苗納米載體的外表面結(jié)合。再舉一例，第一個(gè)靶向部分和第二個(gè)靶向部分均可以與疫苗納米載體的外表面結(jié)合。
免疫刺激劑如上所述，在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以轉(zhuǎn)運(yùn)一種或多種幫助刺激免疫應(yīng)答的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含同時(shí)刺激B細(xì)胞和T 細(xì)胞的單一類(lèi)型的免疫刺激劑。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種類(lèi)型的免疫刺激劑，其中第一種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激B細(xì)胞，第二種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激T細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含兩種以上類(lèi)型的免疫刺激劑，其中一種或多種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激B細(xì)胞，一種或多種類(lèi)型的免疫刺激劑刺激T細(xì)胞。對(duì)于根據(jù)本發(fā)明可以使用的免疫刺激劑的更詳細(xì)描述，參見(jiàn)以上部分。
B細(xì)胞激活試驗(yàn)在一些具體實(shí)施方案中，可以使用各種試驗(yàn)來(lái)確定B細(xì)胞或B細(xì)胞組中的免疫應(yīng)答是否得到刺激(即，B細(xì)胞或B細(xì)胞組是否變成“激活的”)。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)測(cè)量抗體效價(jià)來(lái)測(cè)定B細(xì)胞中免疫應(yīng)答的刺激。通常，“抗體效價(jià)”是指在特定的稀釋度下抗體結(jié)合并中和抗原的能力。例如，高抗體效價(jià)是指在甚至是高稀釋度下抗體結(jié)合并中和抗原的能力。在一些具體實(shí)施方案中，如果在比未免疫個(gè)體或預(yù)免疫血清高至少約 5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約50倍、至少約100倍、至少約500倍、至少約1000 倍或多于約1000倍的稀釋度下，測(cè)量抗體效價(jià)為陽(yáng)性，則稱B細(xì)胞中免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)測(cè)量抗體親和性來(lái)測(cè)定B細(xì)胞中免疫應(yīng)答的刺激。特別地，如果抗體具有低于10_7M、低于10_8M、低于10_9M、低于ΙΟ,Μ、低于10_"Μ、低于 IO-12M或更低的平衡解離常數(shù)(Kd)，則稱B細(xì)胞中免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，如果發(fā)生了類(lèi)別轉(zhuǎn)換重組，則稱B細(xì)胞中T細(xì)胞依賴性免疫應(yīng)答得到刺激。特別地，從IgM轉(zhuǎn)換至IgG同種型或轉(zhuǎn)換至IgA或轉(zhuǎn)換至這些同種型的混合物是B細(xì)胞中T細(xì)胞依賴性免疫應(yīng)答的指征。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)測(cè)量抗原特異性抗體的親和性成熟來(lái)測(cè)定B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答。親和性成熟發(fā)生于生發(fā)中心反應(yīng)過(guò)程中，由此激活的B細(xì)胞反復(fù)地使編碼抗原結(jié)合區(qū)域的免疫球蛋白基因發(fā)生變異。產(chǎn)生突變抗體(其對(duì)抗原具有更高的親和性)的 B細(xì)胞優(yōu)選被允許存活并增殖。因此，隨著時(shí)間的進(jìn)行，GC中的B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體逐漸獲得更高的親和性。在一些具體實(shí)施方案中，該過(guò)程的結(jié)果是高抗體效價(jià)的存在(例如，甚至在高稀釋度下，結(jié)合并中和抗原的高親和性IgG抗體)。在一些具體實(shí)施方案中，如果形成了記憶B細(xì)胞和/或能夠長(zhǎng)時(shí)間地產(chǎn)生大量高親和性抗體的長(zhǎng)生血漿細(xì)胞，則稱B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中， 在為了測(cè)試記憶B細(xì)胞和/或能夠長(zhǎng)時(shí)間地產(chǎn)生大量高親和性抗體的長(zhǎng)生血漿細(xì)胞的存在而進(jìn)行疫苗接種后的不同的時(shí)間間隔(例如，2周、1個(gè)月、2個(gè)月、6個(gè)月、1年、2年、5年、10年、15年、20年、25年或更長(zhǎng))測(cè)定抗體效價(jià)。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)測(cè)量體液應(yīng)答來(lái)確定存在記憶B細(xì)胞和/或能夠長(zhǎng)時(shí)間地產(chǎn)生大量高親和性抗體的長(zhǎng)生血漿細(xì)胞(例如，如果相對(duì)于最初致敏的過(guò)程，在之后的加強(qiáng)疫苗接種后體液應(yīng)答顯著性更迅速且產(chǎn)生更高的效價(jià))。在一些具體實(shí)施方案中，如果發(fā)生有力的生發(fā)中心反應(yīng)，則稱B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)進(jìn)行組織學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)目測(cè)有力的生發(fā)中心反應(yīng)。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)進(jìn)行含有抗原的淋巴組織(例如，疫苗引流淋巴結(jié)、 脾等)的免疫組織化學(xué)來(lái)檢測(cè)有力的生發(fā)中心反應(yīng)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫組織化學(xué)之后進(jìn)行流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)鑒定抗體同種型(例如，IgG, IgA, IgE, IgM)來(lái)確定B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的刺激。在某些具體實(shí)施方案中，B細(xì)胞產(chǎn)生IgG同種型的抗體是所需的B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)在中和試驗(yàn)中分析抗體功能來(lái)確定B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答。特別地，將不存在血清時(shí)微生物(例如，病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、寄生蟲(chóng)等)在體外感染易感細(xì)胞系的能力與向細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中加入了不同稀釋度的免疫和非免疫血清的狀態(tài)相比較。在某些具體實(shí)施方案中，如果微生物的感染在約1 5、約1 10、約 1 50、約 1 100、約 1 500、約 1 1000、約 1 5000、約 1 10，000 或更低的稀釋度下被中和，則稱B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答得到刺激。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)用通常為致死劑量的微生物感染經(jīng)免疫的和未免疫的小鼠組(例如，疫苗接種后3周或更久)來(lái)確定疫苗在動(dòng)物模型中的功效。監(jiān)控兩個(gè)組的存活程度和存活持續(xù)時(shí)間，通常描繪于Kaplan-Meier曲線中。為了確定增強(qiáng)的存活是否是由B細(xì)胞應(yīng)答引起，可以將來(lái)自免疫小鼠的血清轉(zhuǎn)移為“被動(dòng)疫苗”，以確定對(duì)非免疫小鼠對(duì)抗致死性感染的保護(hù)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到以上所述的試驗(yàn)僅僅是可用于確定是否發(fā)生B細(xì)胞激活的示例性方法。可用于確定是否發(fā)生B細(xì)胞激活的任何本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的試驗(yàn)皆落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。此處描述的試驗(yàn)以及其它的可用于確定是否發(fā)生B細(xì)胞激活的試驗(yàn)在 Current Protocols in Immunology (免疫學(xué)通用實(shí)驗(yàn)方案)(John Wiley & Sons， Hoboken,NY,2007 ；引入本文中作為參考)中有描述。
納米載體本文中所述的任一種納米載體可以是疫苗納米載體。盡管本文中提供的一些公開(kāi)內(nèi)容特意提出了疫苗納米載體，將認(rèn)識(shí)到，除非另外指出，公開(kāi)內(nèi)容不限于疫苗納米載體， 而且適用于本文中所述的任一種納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體是合成納米載體，其包含例如至少一種能夠刺激B細(xì)胞和T細(xì)胞中的一種或兩種中的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)劑。免疫調(diào)節(jié)劑可以以本文中更詳細(xì)描述的任一種方式與納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是生物可降解和生物相容性的。通常，生物相容性物質(zhì)對(duì)細(xì)胞是非毒性的。在一些具體實(shí)施方案中，如果加入細(xì)胞中導(dǎo)致低于一定闕值的細(xì)胞死亡(例如，低于50%、20 ^UOW、5%或更低的細(xì)胞死亡)，則認(rèn)為該物質(zhì)是生物相容性的。在一些具體實(shí)施方案中，如果加入細(xì)胞中沒(méi)有引起不利作用，則認(rèn)為該物質(zhì)是生物相容性的。通常，生物可降解物質(zhì)是在治療相關(guān)時(shí)間段(例如、幾周、幾個(gè)月或幾年)之內(nèi)在生理?xiàng)l件下進(jìn)行分解的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，生物可降解物質(zhì)是通過(guò)細(xì)胞機(jī)制分解的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，生物可降解物質(zhì)是通過(guò)化學(xué)過(guò)程分解的物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體既是生物相容性物質(zhì)又是生物可降解物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是生物相容性物質(zhì)但不是生物可降解物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是生物可降解物質(zhì)但不是生物相容性物質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的納米載體是具有低于5微米(μπι)最大尺寸(例如，直徑)的任何實(shí)體。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有低于3微米的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有低于1000納米(nm)的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有低于900納米、800納米、700納米、 600納米、500納米、400納米、300納米、200納米或100納米的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有300納米或更低的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有250納米或更低的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有200納米或更低的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有150納米或更低的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有100納米或更低的最大尺寸(例如，直徑)。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中使用更小的納米載體，例如具有50納米或更低的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有25納米至200納米范圍的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有20納米至100納米范圍的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本文中提供的組合物的納米載體具有低于500納米的平均幾何直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有高于50納米但低于500納米的平均幾何直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體群的平均幾何直徑為約60納米、75納米、100納米、125納米、150 納米、175納米、200納米、225納米、250納米、275納米、300納米、325納米、350納米、375 納米、400納米、425納米、450納米或475納米。在一些具體實(shí)施方案中，平均幾何直徑為 100-400納米、100-300納米、100-250納米或100-200納米。在一些具體實(shí)施方案中，平均幾何直徑為60-400納米、60-350納米、60-300納米、60-250納米或60-200納米。在一些具體實(shí)施方案中，平均幾何直徑為75-250納米。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有高于1000納米(nm)的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有高于900納米、800納米、700納米、600納米、500納米、400納米、300納米、200納米或100納米的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有300納米或更高的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有250納米或更高的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有200納米或更高的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有150納米或更高的最大尺寸(例如，直徑)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體具有100納米或更高的最大尺寸(例如，直徑)。在本發(fā)明一些實(shí)施方案中，使用了更小的納米載體，例如，具有 50納米或更高的最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有低于1000納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約750納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約500 納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約450納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約400納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約 350納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約300納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約275納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約250納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約225納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約200納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約175納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約150納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約125納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約100納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約75納米的直徑。 在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約50納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體具有大約25納米的直徑。在某些具體實(shí)施方案中，納米載體尺寸大于腎臟排泄限制(例如，具有大于6納米直徑的納米載體)。在某些具體實(shí)施方案中，納米載體足夠小，以避免通過(guò)肝臟將納米載體從血流中清除出來(lái)(例如，具有小于1000納米直徑的納米載體)。通常，納米載體的生物化學(xué)特征應(yīng)當(dāng)通過(guò)降低腎臟排泄和肝臟清除，使得納米載體可以在血漿中循環(huán)更長(zhǎng)時(shí)間。通常希望使用就大小、形狀和/或組成而言相對(duì)統(tǒng)一的納米載體群，使得每個(gè)納米載體具有相似的特性。例如，至少80%，至少90%，或至少95%的納米載體可以具有落入5%、10%或20%平均直徑或最大尺寸內(nèi)的直徑或最大尺寸。在一些具體實(shí)施方案中， 對(duì)于大小、形狀和/或組成，納米載體群可以是不同的。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體群的30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有低于500納米的直徑。 在一些具體實(shí)施方案中，納米載體群的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多的納米載體具有高于50納米但低于500納米的直徑。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體群的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有約60 納米、75納米、100納米、125納米、150納米、175納米、200納米、225納米、250納米、275納米、300納米、325納米、350納米、375納米、400納米、425納米、450納米或475納米的直徑。 在一些具體實(shí)施方案中，納米載體群的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多的納米載體具有100-400納米，100-300納米、100-250納米或100-200納米的直徑。 在一些具體實(shí)施方案中，納米載體群的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多的納米載體具有60-400納米、60-350納米、60-300納米、60-250納米或60-200納米的直徑。根據(jù)本發(fā)明可以使用各種不同的納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體是球體或橢球體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為平的或板狀的。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為立方體或長(zhǎng)方體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為橢圓或橢圓形。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體為圓柱體、圓錐體、環(huán)形線圈(即，甜甜圈形)或棱錐形。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒是脂質(zhì)體。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒是膠束。將清楚這些形狀中的每一種落入“顆?！钡囊话泐?lèi)別中，并且本發(fā)明的納米載體可以包含納米顆粒(即，具有低于1000納米直徑的顆粒)、微米顆粒(即，具有低于1000微米直徑的顆粒)或微微米顆粒(即，具有低于1納米直徑的顆粒)。將進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到，在一些具體實(shí)施方案中(如，基于脂質(zhì)的納米載體，如以下將更詳細(xì)描述的)，納米載體不是剛性的并且具有基于環(huán)境而改變的形狀和直徑。
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“合成納米載體的最大尺寸”意思是沿著合成納米載體任何一個(gè)軸測(cè)量的納米載體的最大尺寸?！昂铣杉{米載體的最小尺寸”意思是沿著合成載體任何一個(gè)軸測(cè)量的合成納米載體的最小尺寸。例如，對(duì)于球狀合成納米載體，合成納米載體的最大和最小尺寸基本上是相同的，并且將是其直徑的大小。相似地，對(duì)于立方體的合成納米載體，合成納米載體的最小尺寸將是其高、寬或長(zhǎng)的最小數(shù)值，同時(shí)合成納米載體的最大尺寸將是其高、寬或長(zhǎng)的最大數(shù)值。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，基于樣品中的合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%， 優(yōu)選80%，更優(yōu)選90%的合成納米載體的最小尺寸高于100納米。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，基于樣品中的合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%，優(yōu)選80%，更優(yōu)選90%的合成納米載體的最大尺寸等于或低于5微米。優(yōu)選，基于樣品中的合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75 %，優(yōu)選80 %，更優(yōu)選90 %的合成納米載體的最小尺寸高于110納米，更優(yōu)選高于120 納米，更優(yōu)選高于130納米，再更優(yōu)選高于150納米。優(yōu)選，基于樣品中的合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%，優(yōu)選80%，更優(yōu)選90%的合成納米載體的最大尺寸等于或低于3微米，更優(yōu)選等于或低于2微米，更優(yōu)選等于或低于1微米，更優(yōu)選等于或低于800納米，更優(yōu)選等于或低于600納米，再更優(yōu)選等于或低于500納米。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，基于樣品中的合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%，優(yōu)選80%，更優(yōu)選90%的合成納米載體的最大尺寸等于或高于100納米，更優(yōu)選等于或高于120，更優(yōu)選高于130納米，更優(yōu)選高于 140納米，再更優(yōu)選高于150納米。通過(guò)將合成納米載體懸浮于液體(通常為水性)介質(zhì)中并使用動(dòng)態(tài)光散射(例如，使用Brookhaven ξ PALS工具)來(lái)獲得合成納米載體大小的測(cè)量。納米載體可以是實(shí)心的或空心的，并且可以包含一個(gè)或多個(gè)層。在一些具體實(shí)施方案中，每個(gè)層相對(duì)于其它層具有獨(dú)特的成分和獨(dú)特的特性。僅舉一例，納米載體可以具有核心 /外殼結(jié)構(gòu)，其中核心是一層(例如，聚合核心)，而外殼是第二層(例如，脂雙層或單層)。 納米載體可以包含多個(gè)不同的層。在一些具體實(shí)施方案中，一層可以是實(shí)質(zhì)上交聯(lián)的，第二層不是實(shí)質(zhì)上交聯(lián)的，等等。在一些具體實(shí)施方案中，一層、一些層或所有不同的層可以包含一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或其組合。在一些具體實(shí)施方案中， 一層包含免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑，第二層不包含免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和 /或免疫刺激劑，等等。在一些具體實(shí)施方案中，每一個(gè)單獨(dú)的層包含不同的免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或其組合。
脂質(zhì)納米載體在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可任選地包含一種或多種脂質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含脂質(zhì)體。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含脂雙層。 在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含脂單層。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含膠束。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含核心，核心包含由脂質(zhì)層(例如，脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的聚合基質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含由脂質(zhì)層 (例如，脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的非聚合核心(例如，金屬顆粒、量子點(diǎn)、陶瓷顆粒、骨顆粒、 病毒顆粒等)。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含脂雙層，所述脂雙層的方向使得納米載體的內(nèi)部和外部是親水性的，而脂雙層的腔是疏水性的。包含脂雙層的疫苗納米載體的實(shí)例描述于實(shí)施例2中并在圖3-8中顯示。在一些具體實(shí)施方案中，疏水性免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與脂雙層的腔結(jié)合(例如，嵌于其內(nèi))。在一些具體實(shí)施方案中，親水性免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與納米載體內(nèi)部和/或外部結(jié)合 (例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合、包埋于其內(nèi)等)。在一些具體實(shí)施方案中，親水性免疫調(diào)節(jié)劑、 靶向部分和/或免疫刺激劑可以與脂雙層的內(nèi)表面和/或外表面結(jié)合(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合、包埋于其內(nèi)等)。在一些具體實(shí)施方案中，脂雙層的內(nèi)部親水性表面與兩性實(shí)體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，兩性實(shí)體的方向使得兩性實(shí)體的親水端與脂雙層的內(nèi)表面結(jié)合，并且兩性實(shí)體的疏水端朝向納米載體的內(nèi)部，從而在納米載體內(nèi)部產(chǎn)生疏水性的環(huán)境。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含脂單層，所述脂單層的方向使得納米載體的內(nèi)部是疏水性的，納米載體的外部是親水性的。包含脂單層的疫苗納米載體的實(shí)例描述于實(shí)施例2中并在圖9和10中顯示。在一些具體實(shí)施方案中，疏水性免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與納米載體的內(nèi)部和/或脂單層的內(nèi)表面結(jié)合(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合、包埋于其內(nèi)等)。在一些具體實(shí)施方案中，親水性免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/ 或免疫刺激劑可以與納米載體的外部和/或脂單層的外表面結(jié)合(例如，共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合、包埋于其內(nèi)等)。在一些具體實(shí)施方案中，脂雙層的內(nèi)疏水性表面與兩性實(shí)體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，兩性實(shí)體的方向使得兩性實(shí)體的疏水端與脂雙層的內(nèi)表面結(jié)合，并且兩性實(shí)體的親水端朝向納米載體的內(nèi)部，從而在納米載體內(nèi)部產(chǎn)生親水性的環(huán)境。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含一個(gè)或多個(gè)與納米載體的外表面結(jié)合的納米顆粒。包含與納米載體的外表面結(jié)合的納米顆粒的疫苗納米載體的實(shí)例描述于實(shí)施例2中并在圖4、6和8中顯示。納米載體中脂質(zhì)的百分比范圍可以為0重量％至99重量％、10重量％至99重量％、25重量％至99重量％、50重量％至99重量％或75重量％至99重量％。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體中脂質(zhì)的百分比范圍可以為0重量％至75重量<%、0%至50重量％、 0重量％至25重量％或0%至10重量％。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體中脂質(zhì)的百分比為大約1重量％、大約2重量％、大約3重量％、大約4重量％、大約5重量％、大約10重量％、大約15重量％、大約20重量％、大約25重量％或大約30重量％。在一些具體實(shí)施方案中，脂質(zhì)是油。通常，納米載體中可以包括任何本領(lǐng)域已知的任何油。在一些具體實(shí)施方案中，油可以包含一個(gè)或多個(gè)脂肪酸基團(tuán)或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)包含可消化的長(zhǎng)鏈(例如，C8-C5tl)取代的或未取代的烴。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是Cltl-C2tl脂肪酸或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是C15-C2tl脂肪酸或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是C15-C25脂肪酸或其鹽。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是不飽和的。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是單不飽和的。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是多不飽和的。在一些具體實(shí)施方案中，不飽和脂肪酸基團(tuán)的雙鍵可以是順式構(gòu)象。在一些具體實(shí)施方案中， 不飽和脂肪酸的雙鍵可以是反式構(gòu)象。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸，棕櫚酸，硬脂酸，花生酸、二十二酸或二十四酸中的一種或多種。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是棕櫚油酸、油酸、十八碳烯酸、亞油酸、α-亞麻酸、Y-亞油酸、花生四烯酸、廿碳烯-9-酸、花生四烯酸、十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸中的一種或多種。在一些具體實(shí)施方案中，油是液態(tài)甘油三酯。
適合用于本發(fā)明的油包括，但不限于，扁桃(almond)、杏仁(apricot kernel)、 鱷梨、巴西櫚(babassu)、香檸檬、黑加侖種子、琉璃苣、刺檜、甘菊、油菜、香菜、巴西棕櫚(carnaiAa)、蓖麻、肉桂、可可脂、椰子、鱈魚(yú)肝、咖啡、玉米、棉花種子、鴯鹋、桉樹(shù)、夜來(lái)香、魚(yú)類(lèi)、亞麻籽、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子堅(jiān)果、牛膝草、荷荷巴油、夏威夷胡桃、薰衣草 (Iavandin)、薰衣草(lavender)、檸檬、木姜子、澳洲堅(jiān)果、錦葵、芒果籽、繡線菊籽、水貂、肉豆蔻、橄欖、橙、橘棘鯛、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟種子、南瓜種子、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、sasquana、香薄荷、沙棘、芝麻、牛油樹(shù)脂、硅樹(shù)脂、大豆、向日葵、茶樹(shù)、薊、椿 (tsiAaki)、香根草、胡桃和小麥胚芽油，及其組合。適合用于本發(fā)明的油，包括，但不限于硬脂酸丁酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯、環(huán)甲硅油、癸二酸二乙酯、二甲硅油360、豆蔻酸異丙酯、礦物油、辛基十二醇、油醇、硅樹(shù)脂油，及其組合。在一些具體實(shí)施方案中，脂是激素 (例如，雌激素、睪丸激素)、類(lèi)固醇(例如，膽固醇、葉酸)、維生素(例如，維生素E)、磷脂 (例如，縮醛磷脂酰膽堿)、鞘脂類(lèi)(例如，神經(jīng)酰胺)或脂蛋白(例如，阿樸脂蛋白)。
句,含聚合某質(zhì)的納米載體在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含一種或多種聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合基質(zhì)可由覆蓋層(例如脂質(zhì)體、脂單層、膠束等)環(huán)繞。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與聚合基質(zhì)結(jié)合。在這樣的具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑有效包埋于納米載體內(nèi)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與聚合基質(zhì)共價(jià)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，共價(jià)結(jié)合由連接物介導(dǎo)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑與聚合基質(zhì)非共價(jià)結(jié)合。例如，在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以包埋于聚合基質(zhì)內(nèi)、由聚合基質(zhì)環(huán)繞，和/ 或分布在整個(gè)聚合基質(zhì)中?？商鎿Q地或另外地，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以通過(guò)疏水性相互作用、電荷相互作用、范德華力等與聚合基質(zhì)結(jié)合。各種聚合物以及從其形成聚合基質(zhì)的方法在藥物傳送領(lǐng)域中是已知的。通常，聚合基質(zhì)包含一個(gè)或多個(gè)聚合物。根據(jù)本發(fā)明可以使用任何聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是包含兩個(gè)或更多個(gè)單體的均聚物或共聚物。就序列而言，共聚物可以是無(wú)規(guī)，嵌段或包含無(wú)規(guī)和嵌段序列的組合。通常，根據(jù)本發(fā)明的聚合物是有機(jī)聚合物。聚合物的實(shí)例包括聚乙烯，聚碳酸酯(例如，聚(1，3_ 二噁烷-2酮))，聚酐(例如，聚(癸二酸酐))，聚羥基酸(例如，聚(β-羥基烷酸酯))，聚丙基延胡索酸酯，聚己內(nèi)酯，聚酰胺(例如，聚己內(nèi)酰胺)，聚縮醛，聚醚，聚酯(例如，聚交酯，聚乙交酯)，聚(原酸酯)，聚氰基丙烯酸酯，聚乙烯醇，聚氨酯，聚磷腈，聚丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸酯，聚脲，聚苯乙烯和聚胺。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聚合物包括根據(jù)21C. F. R. § 177. 2600由美國(guó)食品與藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)用于人類(lèi)的聚合物，包括但不限于聚酯(例如，聚乳酸、 聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚己內(nèi)酯、聚戊內(nèi)酯、聚(1，3_ 二噁烷-2酮))；聚酐(例如，聚 (癸二酸酐))；聚醚(例如，聚乙二醇)；聚脲；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；和聚腈基丙烯酸酯。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是親水性的。例如，聚合物可以包含陰離子基團(tuán)(例如，磷酸鹽基團(tuán)、硫酸鹽基團(tuán)、羧酸鹽基團(tuán))；陽(yáng)離子基團(tuán)(例如，季胺基團(tuán))；或極性基團(tuán)(例如，羥基基團(tuán)、巰基基團(tuán)、胺基團(tuán))。在一些具體實(shí)施方案中，包含親水性聚合基質(zhì)的納米載體在納米載體內(nèi)產(chǎn)生親水性環(huán)境。在一些具體實(shí)施方案中，親水性免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與親水性聚合基質(zhì)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是疏水性的。在一些具體實(shí)施方案中，包含疏水性聚合物基質(zhì)的納米載體在納米載體內(nèi)產(chǎn)生疏水性環(huán)境。在一些具體實(shí)施方案中，疏水性免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與疏水性聚合基質(zhì)結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，可以用一個(gè)或多個(gè)部分和/或官能團(tuán)來(lái)修飾聚合物。根據(jù)本發(fā)明可以使用任何部分或官能團(tuán)。在一些具體實(shí)施方案中，可以用聚乙二醇(PEG)、碳水化合物和/或源自多糖的聚縮醛來(lái)修飾聚合物(Pap i so ν，2001，ACS Symposium Series, 786 301 ；引入本文中作為參考)。在一些具體實(shí)施方案中，可以用脂質(zhì)或脂肪酸基團(tuán)來(lái)修飾聚合物，其性質(zhì)在下文中更詳細(xì)描述。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、 肉豆蔻酸，棕櫚酸，硬脂酸，花生酸、二十二酸或二十四酸中的一種或多種。在一些具體實(shí)施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是棕櫚油酸、油酸、十八碳烯酸、亞油酸、α-亞油酸、Y-亞油酸、 花生四烯酸、廿碳烯-9-酸、花生四烯酸、十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸中的一種或多種。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是聚酯，包括包含乳酸和羥基乙酸單元的共聚物，如聚(乳酸-共-羥基乙酸)和聚(丙交酯-共-乙交酯)共聚物，在本文中一起被稱為“PLGA”;以及包含羥基乙酸單元的均聚物(本文稱為“PGA”)和包含乳酸單元的均聚物 (例如，聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D，L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯和聚-D，L-丙交酯，在本文中一起被稱為“PLA”)。在一些具體實(shí)施方案中，示例性的聚酯包括，例如，聚羥基酸；PEG共聚物以及丙交酯和乙交酯的共聚物(例如，PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG共聚物，及其衍生物)。在一些具體實(shí)施方案中，聚酯包括，例如，聚酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-PEG共聚物、聚(己內(nèi)酯)、聚(己內(nèi)酯)-PEG共聚物、聚賴氨酸、聚賴氨酸-PEG共聚物、聚(吖丙啶)、聚(吖丙啶)-PEG的共聚物、聚(L-丙交酯-共-L-賴氨酸)、聚(絲氨酸酯)、聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-羥基乙酸]， 及其衍生物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是PLGA。PLGA是乳酸和羥基乙酸的生物相容性和生物可降解共聚物，并且各種形式的PLGA是通過(guò)乳酸羥基乙酸的比率來(lái)表征的。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸或D，L-乳酸。可以通過(guò)改變?nèi)樗崃u基乙酸的比率來(lái)調(diào)整PLGA 的降解速率。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的所用PLGA的特征在于乳酸羥基乙酸的比率是大約85 15、大約75 25、大約60 40、大約50 50、大約40 60、大約 25 75 或大約 15 85。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是一種或多種丙烯酸聚合物。在某些具體實(shí)施方案中，丙烯酸聚合物包括，例如，丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、 甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯，和包含一種或多種前述聚合物的組合。丙烯酸聚合物可以包含丙烯酸和甲基丙烯酸酯完全聚合化的共聚物，具有少量的季銨基團(tuán)。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是陽(yáng)離子聚合物。通常，陽(yáng)離子聚合物能夠縮合和/或保護(hù)帶負(fù)電的核酸鏈(例如，DNA、RNA或其衍生物)。含有胺的聚合物，如聚(賴氛酸)(Zauner 等，1998，Adv. Drug Del. Rev. ,30 :97 ；禾口 Kabanov 等，1995，Bioconjugate Chem.，6 7 ；將兩篇都引入本文中作為參考)、聚(吖丙啶)(PEI ；Boussif等，1995，Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 1995,92 7297 ；引入本文中作為參考)和聚(酰氨基胺)樹(shù)狀聚合物(Kukowska-Latallo 等，1996，Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 93 :4897 ；Tang 等，1996， Bioconjugate Chem. ,7 :703 ；禾口 Haensler 等，1993, Bioconjugate Chem. ,4 :372 ；所有文獻(xiàn)引入本文中作為參考)，在生理PH下帶正電，與核酸形成離子對(duì)，在各種細(xì)胞系中介導(dǎo)轉(zhuǎn)
^fe ο在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是帶有陽(yáng)離子側(cè)鏈的可降解聚酯(Putnam 等，1999，Macromolecules, 32 :3658 ；Barrera 等，1993，J.Am. Chem. Soc.，115 :11010 ； Kwon 等，1989，Macromolecules，22 :3250 ；Lim 等，1999，J. Am. Chem. Soc.，121 :5633 ；和 Zhou 等， 1990,Macromolecules, 23 :3399 ；所有文獻(xiàn)引入本文中作為參考)。這樣的聚酯的實(shí)例包括聚(L-丙交酯-共-L-賴氨酸)(Barrera 等，1993，J.Am· Chem. Soc.，115 :11010 ；引入本文中作為參考)，聚(絲氨酸酯)Oiou等，1990，Macromolecules, 23 :3399 ；引入本文中作為參考)，聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)(Putnam 等，1999，Macromolecules，32 :3658 ；和 Lim 等， 1999，J.Am. Chem. Soc. , 121 :5633 ； 二者皆引入本文中作為參考)，和聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)(Putnam 等，1999，Macromolecules，32 :3658 ；禾口 Lim 等人，1999，J. Am. Chem. Soc.，121 5633 ；二者皆引入本文中作為參考)。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聚合物可以是碳水化合物，其性質(zhì)將在下文中更詳細(xì)描述。在一些具體實(shí)施方案中，碳水化合物可以是包含由糖苷鍵連接的單糖 (或其衍生物)的多糖，如本領(lǐng)域所知。在一些具體實(shí)施方案中，碳水化合物可以是普魯蘭多糖、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥基纖維素、甲基纖維素、右旋糖苷、環(huán)右旋糖苷、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、卡拉膠、糖基、直鏈淀粉、殼聚糖、N，0-羥甲基殼聚糖、海藻膠和海藻酸、淀粉、幾丁質(zhì)、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素、肝素、透明質(zhì)酸、卡德蘭和黃原膠中的一種或多種。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聚合物可以是蛋白或肽，其性質(zhì)將在下文中更詳細(xì)描述。根據(jù)本發(fā)明可用的示例性蛋白包括，但不限于，白蛋白、膠原、聚(氨基酸) (例如，聚賴氨酸)、抗體等。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聚合物可以是核酸(即，多核苷酸)，其性質(zhì)將在下文中更詳細(xì)描述。根據(jù)本發(fā)明可用的示例性多核苷酸包括，但不限于，DNA、RNA等。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及聚合納米顆粒-尼古丁生物偶聯(lián)物系統(tǒng)作為誘導(dǎo)抗尼古丁抗體的平臺(tái)的用途。如本文中所用的受控釋放聚合物系統(tǒng)或基于系統(tǒng)的囊泡是結(jié)合活性劑(如，治療劑、診斷劑、預(yù)測(cè)劑或預(yù)防劑)的聚合物，使得活性劑以預(yù)先設(shè)計(jì)的方式從材料中釋放和/或引發(fā)出來(lái)?？梢詫⒕酆衔?尼古丁生物偶聯(lián)物系統(tǒng)合成為均聚物，雙嵌段、三嵌段和/或多嵌段共聚物。聚合物-尼古丁生物偶聯(lián)物系統(tǒng)的合成包括從單體聚合以及不同聚合物的偶聯(lián)。納米顆粒系統(tǒng)可以包括生物可降解、化學(xué)可降解或同時(shí)生物和化學(xué)可降解的聚合物。用于受控釋放聚合物系統(tǒng)的合適聚合物的實(shí)例包括，但不限于，聚(乳酸)、聚(乳酸)衍生物、PEG化聚(乳酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)衍生物、PEG化聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚(酐)、PEG化聚(酐)、 聚(原酸酯)、聚(原酸酯)衍生物、PEG化聚(原酸酯)、聚(己內(nèi)酯)、聚(己內(nèi)酯)衍生物、PEG化聚(己內(nèi)酯)、聚賴氨酸、聚賴氨酸衍生物、PEG化聚賴氨酸、聚(吖丙啶)、聚(吖丙啶)衍生物、PEG化聚(吖丙啶)、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸)衍生物、PEG化聚(丙烯酸)、聚(尿烷)、PEG化聚(尿烷)、聚(尿烷)衍生物，及其組合。這些和其它聚合物的性質(zhì)及其制備方法在本領(lǐng)域是已知的(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào) 6，123，727,5, 804，178,5, 770，417,5, 736，372,5, 716，404,6, 095，148,5, 837，752、 5，902，599,5，696，175,5，514，378,5，512，600,5，399，665,5，019，379,5，010，167, 4，806，621、4，638，045 和 4，946，929 ；Wang 等，2001，J.Am. Chem. Soc.，123 :9480 ；Lim 等， 2001，J.Am. Chem. Soc.，123 :2460 ；Langer,2000, Acc.Chem. Res. ,33 :94 ；Langer,1999， J. Control. Release,62 :7 ；和 Uhrich 等，1999，Chem. Rev. ,99 :3181 ；所有文獻(xiàn)引入本文中作為參考)。一般地說(shuō)，多種合成合適聚合物的方法在以下的文獻(xiàn)中有描述=Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and Ammonium Salts (聚合物科學(xué)以及聚合胺和銨鹽的簡(jiǎn)明百科全書(shū))，Goethals編輯，Pergamon Press, 1980 ；Odian的 Principles of Polymerization (聚合原理)，John Wiley & Sons，第四版，2004 ；Allcock 等的 Contemporary Polymer Chemistry, Prentice-Hall, 1981 ；Deming 等，1997, Nature, 390 386 ；和美國(guó)專利號(hào) 6，506，577,6, 632，922,6, 686，446 和 6，818，732 ；所有文獻(xiàn)引入本文中作為參考。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是直鏈或支鏈聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是樹(shù)狀聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是彼此實(shí)質(zhì)上交聯(lián)的。 在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以是無(wú)實(shí)質(zhì)交聯(lián)的。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物可以不進(jìn)行交聯(lián)步驟而用于本發(fā)明。還應(yīng)該理解，本發(fā)明的納米載體可以包含嵌段共聚物、接枝共聚物、共混物、混合物和/或任何前述和其它聚合物的加合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到本文中所列舉的聚合物表示根據(jù)本發(fā)明可用的聚合物的示例性而非窮舉性的列舉。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含嵌入反膠束內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)劑。僅舉一例，脂質(zhì)體納米載體可以包含嵌入脂質(zhì)體膜內(nèi)的疏水性免疫調(diào)節(jié)劑，和嵌入脂質(zhì)體納米載體的內(nèi)部中發(fā)現(xiàn)的反膠束內(nèi)的親水性免疫調(diào)節(jié)劑。
非聚合納米載體在一些具體實(shí)施方案中，納米載體不包含聚合成分。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以包含金屬顆粒、量子點(diǎn)、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等。在一些具體實(shí)施方案中， 免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑可以與這樣的非聚合物納米載體的表面結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，非聚合納米載體是非聚合成分的聚集體，例如金屬原子(例如，金原子)的聚集體。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑與非聚合成分的聚集體的表面結(jié)合，包埋于非聚合成分的聚集體內(nèi)，或由非聚合成分的聚集體環(huán)繞，和/或分布在整個(gè)非聚合成分的聚集體中。在本發(fā)明的某些具體實(shí)施方案中，非聚合納米載體包含梯度或單相合金。在本發(fā)明的某些具體實(shí)施方案中，納米載體包含具有光學(xué)和/或磁性可測(cè)性質(zhì)的顆粒。
包含兩件實(shí)體的納米載體在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可以任選包含一個(gè)或多個(gè)兩性實(shí)體。在一些具體實(shí)施方案中，兩性實(shí)體能夠促進(jìn)產(chǎn)生具有增加的穩(wěn)定性、改善的一致性或提高的粘性的納米載體。在一些具體實(shí)施方案中，兩性實(shí)體可以與脂膜(例如，脂雙層、脂單層等)的內(nèi)表面結(jié)合。例如，如果脂膜的內(nèi)表面是親水性的，則包埋于脂納米載體內(nèi)的空間是親水性的。 但是，如果兩性實(shí)體與親水性脂膜的內(nèi)表面結(jié)合以致于兩性實(shí)體的親水端與親水性脂膜的內(nèi)表面結(jié)合并且兩性實(shí)體的疏水端與納米載體的內(nèi)部結(jié)合，則包埋于納米載體內(nèi)的空間是疏水性的。納米載體中的兩性實(shí)體的百分比范圍可以為0重量％至99重量％、10重量％至 99重量％、25重量％至99重量％、50重量％至99重量％或75重量％至99重量％。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體中兩性實(shí)體的百分比范圍可以為0重量％至75重量％、0重量％至50重量％、0重量％至25重量％或0重量％至10重量％。在一些具體實(shí)施方案中， 納米載體中兩性實(shí)體的百分比可以為大約1重量％、大約2重量％、大約3重量％、大約4 重量％、大約5重量％、大約10重量％、大約15重量％、大約20重量％、大約25重量％或大約30重量％。任何本領(lǐng)域已知的兩性實(shí)體均適合用于制造根據(jù)本發(fā)明的納米載體。這樣的兩性實(shí)體包括，但不限于，磷酸甘油酯；磷脂酰膽堿；二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC) ；二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE) ；二油酰基氧基丙基三乙基銨(DOTMA) ；二油?；字Ｄ憠A；膽固醇； 膽固醇酯；二酰基甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；二磷脂酰甘油(DPPG)；十六烷醇；脂肪醇， 如聚乙二醇(PEG)；聚環(huán)氧乙烷-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，如棕櫚酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸單甘油酯；脂肪酸二甘油酯；脂肪酸酰胺；三油酸山梨酯(Span ^)甘膽酸鹽；單月桂酸山梨酯(Span 20)；聚山梨酸酯20 (Tween 20)；聚山梨酸酯60 (Tween 60)；聚山梨酸酯65 (Tween 65)；聚山梨酸酯80 (Tween 80)；聚山梨酸酯85 (Tween 85)；聚環(huán)氧乙烷單硬脂酸酯；表面活性肽；poloxomer ；脂肪酸山梨酯，如三油酸山梨酯；卵磷脂；溶血卵磷脂； 磷脂酰絲氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂； 聯(lián)十六烷醇磷酸酯；二棕櫚酰磷脂酰甘油；硬脂酸胺；十二烷基胺；十六烷基胺；棕櫚酸乙酯；蓖麻醇酸甘油酯；硬脂酸十六烷酯；肉豆蔻酸異丙酯；四丁酚醛 ’聚(乙二醇)5000-磷脂酰乙醇胺 ’聚(乙二醇)400-單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面積性質(zhì)的合成和/或天然去污劑；脫氧膽酯；環(huán)化糊精；離液序列高的鹽；離子配對(duì)試劑；及其組合。兩性實(shí)體成分可以是不同兩性實(shí)體的混合物。這些兩性實(shí)體可以從天然來(lái)源提取和純化，或者在實(shí)驗(yàn)室中合成制備。在某些特定的具體實(shí)施方案中，可購(gòu)得兩性實(shí)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，這僅僅是具有表面活性的物質(zhì)的示例性而非窮舉性的列舉。任何兩性實(shí)體可用于生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明所用的納米載體。
包含碳水化合物的疫苗納米載體在一些具體實(shí)施方案中，納米載體可任選包含一種或多種碳水化合物。納米載體中的碳水化合物的百分比范圍可以為0重量％至99重量％、10重量％至99重量％、25重量％至99重量％、50重量％至99重量％或75重量％至99重量％。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體中碳水化合物的百分比范圍可以為0重量％至75重量％、0重量％至50重量％、0重量％至25重量％或0重量％至10重量％。在一些具體實(shí)施方案中，納米載體中碳水化合物的百分比可以為大約1重量％、大約2重量％、大約3重量％、大約4重量％、大約5重量％、大約10重量％、大約15重量％、大約20重量％、大約25重量％或大約30重量％。 碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以源自天然的碳水化合物。在某些具體實(shí)施方案中，碳水化合物是單糖，包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、 蔗糖、麥芽糖、海藻糖、纖維二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡萄糖胺、半乳糖胺和神經(jīng)氨酸。在某些具體實(shí)施方案中，碳水化合物是二糖，包括但不限于乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖和纖維二糖。在某些具體實(shí)施方案中，碳水化合物是多糖，包括但不限于，普魯蘭多糖、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥基纖維素(HC)、甲基纖維素(MC)、右旋糖苷、環(huán)右旋糖苷、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、卡拉膠、糖基、 直鏈淀粉、殼聚糖、N, 0-羥甲基殼聚糖、海藻膠和海藻酸、淀粉、幾丁質(zhì)、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素、肝素、透明質(zhì)酸、卡德蘭和黃原膠。在某些具體實(shí)施方案中，碳水化合物是糖醇， 包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇和乳糖醇。在一些具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的疫苗納米載體可以包含一個(gè)或多個(gè)顆粒。 在一些具體實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)顆粒與疫苗納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含一個(gè)或多個(gè)與納米載體的外表面結(jié)合的顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，顆?？梢耘c疫苗納米載體通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，顆?？梢耘c疫苗納米載體通過(guò)非共價(jià)相互作用結(jié)合(例如，電荷相互作用、親和性相互作用、金屬配合、物理吸附、 主客體相互作用、疏水性相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合)。在一些具體實(shí)施方案中， 疫苗納米載體包含一個(gè)或多個(gè)包埋于納米載體中的顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體包含一個(gè)或多個(gè)嵌于納米載體表面中的顆粒(例如，嵌于脂雙層中)。在一些具體實(shí)施方案中，與納米載體結(jié)合的顆粒允許可調(diào)的膜剛性和可控的脂質(zhì)體穩(wěn)定性。在一些具體實(shí)施方案中，與疫苗納米載體結(jié)合的疫苗納米載體顆?？梢园酆匣|(zhì)，如上所述。在一些具體實(shí)施方案中，與疫苗納米載體結(jié)合的疫苗納米載體顆粒可以包含非聚合成分(例如，金屬顆粒、量子點(diǎn)、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等)，如上所述。在一些具體實(shí)施方案中，與疫苗納米載體結(jié)合的疫苗納米載體顆?？梢詭в胸?fù)電荷。在一些具體實(shí)施方案中，與疫苗納米載體結(jié)合的疫苗納米載體顆?？梢詭в姓姾?。在一些具體實(shí)施方案中，與疫苗納米載體結(jié)合的疫苗納米載體顆粒可以是電中性的。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒在其表面具有一個(gè)或多個(gè)胺部分。胺部分可以是，例如，脂肪族胺部分。在某些具體實(shí)施方案中，胺是伯、仲、叔或季胺。在某些具體實(shí)施方案中， 顆粒包含含有胺的聚合物。在某些具體實(shí)施方案中，顆粒包含含有胺的脂質(zhì)。在某些具體實(shí)施方案中，顆粒包含在中性PH帶有正電荷的蛋白或肽。在一些具體實(shí)施方案中，在顆粒表面具有一個(gè)或多個(gè)胺部分的顆粒在中性PH下帶有凈正電荷。在本發(fā)明的顆粒中還可以使用在中性PH下提供正電荷的其它化學(xué)部分。
在一些具體實(shí)施方案中，顆粒在表面上具有一個(gè)或多個(gè)負(fù)電荷(在中性PH下)部分。例如，顆粒在表面上具有一個(gè)或多個(gè)羧酸或磷酸基團(tuán)。在一些具體實(shí)施方案中，在其表面上具有一個(gè)或多個(gè)羧酸或磷酸部分的顆粒在中性PH下具有凈負(fù)電荷。在中性pH下提供負(fù)電荷的其他化學(xué)部分也可以用于本發(fā)明的顆粒中。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒在表面上具有一個(gè)或多個(gè)基本上中性(在中性pH 下)的部分。例如，顆粒在表面上具有一個(gè)或多個(gè)醚基團(tuán)。在一些具體實(shí)施方案中，在其表面上具有一個(gè)或多個(gè)醚部分的顆粒在中性PH下基本上不具有凈電荷。在中性pH下提供中性電荷的其他化學(xué)部分也可以用于本發(fā)明的顆粒中。為了影響表面的電荷而存在于納米載體表面上的化合物的一些非限制實(shí)例包括 1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-膽堿磷酸(POPC) ,1,2- 二油酰_3_三甲銨-丙烷氯化物鹽(DOTAP)、單唾液酰神經(jīng)節(jié)苷脂GM3、1，2- 二十六烷酰-sn-甘油_3_磷酸-L-絲氨酸鈉鹽 (DPPS)、單磷酰脂質(zhì)A和N-4-硝基苯并-2-氧雜-1，3- 二唑磷脂酰乙醇胺(NBD-PE)。ζ電勢(shì)是顆粒的表面電勢(shì)的度量。在一些具體實(shí)施方案中，與納米載體結(jié)合的納米載體顆粒具有正的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有_50mV至+50mV范圍的ζ 電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有_25mV至+25mV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有-IOmV至+IOmV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有_5mV 至+5mV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有OmV至+50mV范圍的ζ電勢(shì)。 在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有OmV至+25mV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有OmV至+IOmV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有OmV至+5mV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有_50mV至OmV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有_25mV至OmV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有-IOmV 至OmV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有_5mV至OmV范圍的ζ電勢(shì)。在一些具體實(shí)施方案中，顆粒具有基本上中性的ζ電勢(shì)(即，大約OmV)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域任何已知的方法制備顆粒(例如，納米顆粒、微米顆粒)。例如， 顆粒制劑可以通過(guò)以下方法制成如納米沉淀、使用液體通道的流動(dòng)聚焦、噴霧干燥、單一和雙乳劑溶劑揮發(fā)、溶劑提取、相分離、碾磨、微乳程序、微細(xì)加工、納米級(jí)加工、犧牲層、單凝聚和復(fù)凝聚，以及其它本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法?？商鎿Q地或另外地，用于單分散半導(dǎo)體、導(dǎo)電性的、磁性的、有機(jī)的和其它納米顆粒的水性和有機(jī)溶劑體系已經(jīng)得到了描述(Pellegrino 等，2005，Small, 1 :48 ；Murray 等，2000，Ann. Rev. Mat. Sci. ,30 :545 ；和 Trindade等，2001，Chem. Mat. ,13 :3843 ；所有文獻(xiàn)引入本文中作為參考)。在某些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)納米沉淀方法或噴霧干燥來(lái)制備顆粒?？梢愿淖冎苽漕w粒中所用的條件以產(chǎn)生所需的尺寸或性質(zhì)(例如，疏水性、親水性、外部形狀、“粘度”、形狀等)的顆粒。所用的制備顆粒的方法和條件(例如，溶劑、溫度、濃度、空氣流速等)可以取決于待傳送的治療劑和/或聚合基質(zhì)的組成。制備用于傳送膠囊化試劑的微米顆粒的方法在文獻(xiàn)中有描述(參見(jiàn)，例如， Doubrow 編輯，"Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy，，(醫(yī)學(xué)和藥學(xué)中的微膠囊和納米顆粒)，CRC Press, Boca Raton, 1992 ；Mathiowitz等， 1987, J. Control. Release, 513 ；Mathiowitz 等，1987, Reactive Polymers, 6 :275 ； 禾口 Mathiowitz等，1988，J. Appl. Polymer Sci. ,35 :755 ；將所有文獻(xiàn)引入本文中作為參考)。
如果通過(guò)以上任何方法制備的顆粒具有所需范圍外的尺寸范圍，則可使用例如篩網(wǎng)對(duì)顆粒進(jìn)行大小篩分。
免疫特征表面本發(fā)明的合成納米載體包含一個(gè)或多個(gè)表面，并且在一些具體實(shí)施方案中，至少一個(gè)表面包含免疫特征表面。免疫特征表面是包含多個(gè)部分的表面，其中(1)免疫特征表面不包括是抗體Fc 片段(portion)的部分；和( 這些部分以有效提供基于親合力的與哺乳動(dòng)物抗原呈遞細(xì)胞結(jié)合的含量存在?；谟H合力的結(jié)合是基于親合力作用的結(jié)合(這種類(lèi)型的結(jié)合也稱為“高親合力”結(jié)合)。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，如下使用體內(nèi)試驗(yàn)接著體外試驗(yàn)來(lái)確定免疫特征表面的存在(盡管確定基于親合力作用的結(jié)合(即，“高親合力”結(jié)合)存在的其他方法也可以用于本發(fā)明的實(shí)踐中)。體內(nèi)試驗(yàn)使用兩組攜帶不同熒光標(biāo)記的合成納米載體，一組合成納米載體具有免疫特征表面，而另一組用作對(duì)照。為了測(cè)試免疫特征表面在體內(nèi)是否可以將合成納米載體靶向抗原呈遞細(xì)胞，將兩組合成納米載體1 1混合并注射入小鼠的足墊中。通過(guò)在納米載體注射后1至4小時(shí)和M小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)分別收集注射小鼠的引流胭淋巴結(jié)來(lái)測(cè)量樹(shù)突細(xì)胞和被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞上的合成納米載體積聚。將淋巴結(jié)進(jìn)行加工，用于冷凍切片的共焦熒光免疫組織學(xué)，用小鼠-⑶1 Ic (克隆HL3，BD BIOSCIENCES 或小鼠-⑶169 (來(lái)自 SEROTEC 的克隆3D6. 112))的熒光抗體進(jìn)行復(fù)染，并使用合適圖像處理軟件，如ADOBE PHOTOSHOP ，通過(guò)測(cè)面積法來(lái)分析。如果包含免疫特征表面的合成納米載體結(jié)合樹(shù)突細(xì)胞和/或被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞的頻率高于對(duì)照納米載體至少1. 2倍，優(yōu)選至少1. 5倍，更優(yōu)選至少2倍，則建立了由免疫特征表面引起的抗原呈遞細(xì)胞的靶向。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，伴隨體內(nèi)試驗(yàn)的體外試驗(yàn)確定了生物相容性表面上人或小鼠樹(shù)突細(xì)胞或小鼠被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞(總地稱為“體外抗原呈遞細(xì)胞”)的固定，該生物相容性表面覆蓋有免疫特征表面包含的部分或體外抗原呈遞細(xì)胞表達(dá)的表面抗原特異性的抗體(對(duì)于人樹(shù)突細(xì)胞來(lái)自Miltenyi BIOTEC 的抗-CDlc (BDCA-I)克隆 AD5-8E7，對(duì)于小鼠樹(shù)突細(xì)胞抗-CDllc(aX整聯(lián)蛋白)克隆HL3，BD BIOSCIENCES ，或?qū)τ谛∈蟊荒は铝馨透]巨噬細(xì)胞來(lái)自SEROTEC 的抗-⑶169克隆3D6. 112)，使得(i)對(duì)應(yīng)于最大的固定于已經(jīng)用免疫特征表面包含的部分覆蓋的表面的體外抗原呈遞細(xì)胞的最佳覆蓋密度不可檢測(cè)或是用抗體覆蓋表面觀察到的至少10%，優(yōu)選至少20%，更優(yōu)選至少 25% ；和(ii)如果通過(guò)免疫特征表面的體外抗原呈遞細(xì)胞的固定化是可檢測(cè)的，待檢測(cè)的免疫特征表面在免疫特征表面包含的部分的覆蓋密度高于支持半最大結(jié)合的抗體覆蓋密度的至少2倍，優(yōu)選至少3倍，更優(yōu)選至少4倍下支持半最大結(jié)合。免疫特征表面在pH = 7. 2-7. 4下可以是正電荷的、負(fù)電荷的或中性電荷的。免疫特征表面可以由相同部分或不同部分的混合物構(gòu)成。在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面可以包含B細(xì)胞抗原。在免疫特征表面中可能有用的部分的實(shí)例包括甲氧基基團(tuán)、正電荷的胺基(例如，叔胺)、唾液酸乳糖、抗生物素蛋白和/或抗生物素蛋白衍生物，如中性鏈親和素(NeutrAvidin)，以及上述任一種的殘基。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，免疫特征表面包含的部分與本發(fā)明的納米載體的表面偶聯(lián)。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，免疫特征表面與本發(fā)明的納米載體的表面偶聯(lián)。應(yīng)當(dāng)注意到免疫特征表面包含的部分給予了高親合力結(jié)合。不是所有存在于納米載體上的部分將給予高親合力結(jié)合，如該定義中特意限定的，以及本發(fā)明說(shuō)明書(shū)中概括描述的。因此，即使表面可以包含多個(gè)部分(有時(shí)稱為“矩陣”)，這并不意味著這樣的表面自然就是免疫特征表面，缺少表明這樣的表面給予根據(jù)本發(fā)明的定義和公開(kāi)內(nèi)容的結(jié)合的數(shù)據(jù)。在一些具體實(shí)施方案中，多個(gè)部分是除了抗體Fc片段以外的部分。在一些具體實(shí)施方案中，多個(gè)部分選自免疫刺激部分(如本文中所述的)、免疫調(diào)節(jié)部分(如本文中所述的)、靶向部分(如本文中所述的)、小的有機(jī)部分(例如，尼古丁)、寡聚物和聚合物(包括合成的聚合物，如PEG)、無(wú)機(jī)部分、核酸和多核苷酸(例如，DNA和RNA片段)、氨基酸、多肽、 糖蛋白、生物活性物質(zhì)(如本文中所述的)、神經(jīng)節(jié)苷脂、脂質(zhì)、磷脂、碳水化合物、多糖和上述任一種的片段。在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面可以包含B-細(xì)胞抗原或T-細(xì)胞抗原。上述部分的任意組合也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。將認(rèn)識(shí)到這些部分與免疫特征表面的鍵合可能涉及合適的修飾，如用與表面結(jié)合的鍵替代與部分中原子結(jié)合的鍵。在一些具體實(shí)施方案中，多個(gè)部分與免疫特征表面的鍵合是通過(guò)部分和納米載體成分之間的共價(jià)鍵。例如，在包含聚合材料的納米載體的情況中，多個(gè)部分可以與聚合物共價(jià)鍵合。然而，在一些情況中，可以使用非共價(jià)相互作用，包括離子或氫鍵合，或分散力。免疫特征表面可以包含多個(gè)相同的部分或不同部分的混合物。例如，2、3、4、5、6、 7、8、9或10個(gè)不同類(lèi)型的部分可以存在于免疫特征表面中。當(dāng)免疫特征表面存在于pH范圍為7. 2-7. 4的緩沖水溶液中時(shí)，免疫特征表面可以是全部正電荷的、負(fù)電荷的或中性電荷的。將清楚，在不同部分的混合物存在于免疫特征表面上時(shí)，免疫特征表面可以在任何特定PH下結(jié)合正電荷、負(fù)電荷和/或中性電荷部分的組
I=I ο免疫特征表面提供了與抗原呈遞細(xì)胞(APC)的高親合力結(jié)合，特別是表達(dá)MHC II 分子的APC。例如，在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面提供與樹(shù)突細(xì)胞(DC)的高親合力結(jié)合。在一些其他具體實(shí)施方案中，免疫特征表面提供與巨噬細(xì)胞的高親合力結(jié)合，例如， 被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞(SCS Mphs) 0在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面提供了與B細(xì)胞的高親合力結(jié)合(即，包含B-細(xì)胞抗原的免疫特征表面)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面提供了與DC、SCSMphs或B-細(xì)胞的高親合力和低親和性結(jié)合。免疫特征表面包含多個(gè)部分，并且多個(gè)部分可以是全部相同的部分或是不同部分的混合物。多個(gè)部分存在于能夠以高親合力結(jié)合APC表面的表面上。在一些具體實(shí)施方案中，多個(gè)部分存在于能夠以高親合力和低親和性結(jié)合APC表面的表面上。免疫特征表面中有用部分的實(shí)例包括小的有機(jī)分子，如尼古丁、甘露糖、馬來(lái)酰亞胺、POPC、DPPS、 D0PS、單磷?；|(zhì)A、NBD-PE及其衍生物；官能團(tuán)，如甲氧基、胺、羧酸及其類(lèi)似物；多糖， 如唾液酸乳糖和單唾液酰神經(jīng)節(jié)苷脂GM3;蛋白和多肽，如抗生物素蛋白、中性鏈親和素 (NeutrAvidin)、溶菌酶、寡聚物G、蛋白G及其衍生物，等等。免疫特征表面中存在的部分能夠指引納米載體至APC的程度將改變。例如，提供更特異性靶向APC(即，更特異性地能夠以高親合力和低親和性結(jié)合APC)的免疫特征表面的部分將導(dǎo)致在如SCS這樣的區(qū)域中更高積聚的納米載體制劑。
應(yīng)當(dāng)注意到免疫特征表面包含的部分給予了高親合力結(jié)合。不是所有存在于納米載體上的部分將給予高親合力結(jié)合，如該定義中特意列出的，以及本發(fā)明說(shuō)明書(shū)中概括描述的。因此，即使表面可以包含多個(gè)部分(有時(shí)稱為“矩陣”)，這并不意味著這樣的表面自然就是免疫特征表面，缺少表明這樣的表面給予根據(jù)本發(fā)明的定義和公開(kāi)內(nèi)容的結(jié)合的數(shù)據(jù)。在一些具體實(shí)施方案中，施予患者時(shí)，具有包含免疫特征表面的表面的納米載體能夠靶向特異性APC。例如，在一些具體實(shí)施方案中，具有免疫特征表面的納米載體能夠靶向DC。在一些具體實(shí)施方案中，具有免疫特征表面的納米載體能夠靶向巨噬細(xì)胞，如 SCS-Mph0在一些具體實(shí)施方案中，具有免疫特征表面的納米載體能夠靶向B-細(xì)胞。在該上下文中，術(shù)語(yǔ)“靶向”用來(lái)表示施予患者時(shí)，具有免疫特征表面的納米載體的組合物易于在特定的區(qū)域中積聚。這樣的積聚可以在施予的幾分鐘(例如，少于1分鐘，少于5分鐘， 或少于10分鐘，或少于30分鐘)、幾小時(shí)(例如，少于1小時(shí)，或少于2小時(shí)，或少于5小時(shí)，或少于10小時(shí))，或幾天(例如，少于1天，或少于2天，或少于5天)內(nèi)發(fā)生。在一些具體實(shí)施方案中，免疫特征表面上的多個(gè)部分包括尼古丁。在這樣的具體實(shí)施方案中，尼古丁部分至少起兩個(gè)作用(1)尼古丁部分提供納米載體靶向SCS-Mph ；和 (2)尼古丁部分作為B細(xì)胞抗原，以刺激抗-尼古丁抗體的產(chǎn)生。在一些具體實(shí)施方案中，通過(guò)本發(fā)明的納米載體基本上不能激活補(bǔ)體系統(tǒng)。例如， 在一些具體實(shí)施方案中，納米載體不激活典型的補(bǔ)體途徑和/或可替換的補(bǔ)體途徑。與US 公開(kāi)專利申請(qǐng)2008/0031899的實(shí)施例9中公開(kāi)的羥基化納米載體相比，并且使用相同實(shí)施例9的方法來(lái)測(cè)定，基本上不激活補(bǔ)體的納米載體顯示出低于50%，優(yōu)選低于35%，更優(yōu)選低于25%的C3a含量增加。
納米載體的生產(chǎn)可以使用本領(lǐng)域任何已知的方法制備合成的納米載體。例如，顆粒納米載體制劑可以通過(guò)以下方法制成如納米沉淀，使用流體通道的流動(dòng)聚焦，噴霧干燥，單一和雙乳劑溶劑揮發(fā)，溶劑提取，相分離，碾磨，微乳程序，微細(xì)加工，納米級(jí)加工，犧牲層，單凝聚和復(fù)凝聚，以及其它本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法?？商鎿Q地或另外地，用于單分散半導(dǎo)體、導(dǎo)電性的、磁性的、有機(jī)的和其它納米顆粒的水性和有機(jī)溶劑合成已經(jīng)得到了描述(Pellegrino 等，2005，Small, 1 :48 ；Murray 等，2000，Ann. Rev. Mat. Sci. ,30 :545 ；和 Trindade等，2001，Chem. Mat. ,13 :3843 ；所有文獻(xiàn)都引入本文中作為參考)。在某些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)納米沉淀方法或噴霧干燥來(lái)制備合成的納米載體?？梢愿淖冎苽浼{米載體中所用的條件以產(chǎn)生所需的尺寸或性質(zhì)(例如，疏水性、親水性、外部形狀、“粘度”、形狀等)的顆粒。所用的制備納米載體的方法和條件(例如，溶劑、 溫度、濃度、空氣流速等)可以取決于納米載體的組成和/或所得結(jié)構(gòu)。制備根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體中有用的方法在文獻(xiàn)中有描述(參見(jiàn)，例如， Doubrow 編輯，"Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy，，(醫(yī)學(xué)和藥學(xué)中的微膠囊和納米載體)，CRC Press, Boca Raton, 1992 ；Mathiowitz等， 1987, J. Control. Release, 5 13 ；Mathiowitz 等，1987, Reactive Polymers, 6 :275 ； 禾口 Mathiowitz 等，1988，J. Appl. Polymer Sci. ,35 :755 ；所有文獻(xiàn)引入本文中作為參考)。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一種免疫調(diào)節(jié)劑，任選包含，脂膜、聚合基質(zhì)和/或非聚合顆粒。在某些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一種免疫調(diào)節(jié)劑；脂膜、聚合基質(zhì)和/或非聚合顆粒；和至少一個(gè)靶向部分。在某些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一種免疫調(diào)節(jié)劑；脂膜、聚合基質(zhì)和/ 或非聚合顆粒；至少一個(gè)靶向部分；和至少一種免疫刺激劑。在某些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一種免疫調(diào)節(jié)劑；脂膜、聚合基質(zhì)和/或非聚合顆粒；至少一個(gè)靶向部分；至少一種免疫刺激劑；和至少一個(gè)納米顆粒。本發(fā)明的納米載體可以使用任何可獲得的方法制備。希望將免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑結(jié)合疫苗納米載體，而沒(méi)有對(duì)免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分和/或免疫刺激劑的三維特征和構(gòu)象有不利影響。希望疫苗納米載體應(yīng)該能夠在全身施用后避免被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)攝入，從而其能夠到達(dá)體內(nèi)的特異性細(xì)胞。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒不與疫苗納米載體共價(jià)結(jié)合。例如，疫苗納米載體可以包含聚合基質(zhì)，和免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、 免疫刺激劑和/或納米顆?？膳c本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合基質(zhì)的表面結(jié)合，包埋于本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合基質(zhì)內(nèi)，和/或分布在整個(gè)本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合基質(zhì)中。免疫調(diào)節(jié)劑可以通過(guò)疫苗納米載體的擴(kuò)散、降解和/或其組合而被釋放。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物通過(guò)骨架侵蝕而降解。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物通過(guò)表面侵蝕而降解。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒與疫苗納米載體共價(jià)結(jié)合。對(duì)于這樣的疫苗納米載體，通過(guò)破壞結(jié)合而實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)劑釋放并傳送至目標(biāo)位點(diǎn)。例如，如果免疫調(diào)節(jié)劑與納米載體通過(guò)可分裂連接物結(jié)合，則在連接物分裂后，免疫調(diào)節(jié)劑被釋放并傳送至目標(biāo)位點(diǎn)。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒不與疫苗納米載體共價(jià)結(jié)合。例如，疫苗納米載體可以包含聚合物，并且免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、 免疫刺激劑和/或納米顆粒與本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物的表面結(jié)合，包埋于本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物內(nèi)，由本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物環(huán)繞，和/或分布在整個(gè)本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物中。在一些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒與疫苗納米載體物理結(jié)合。物理結(jié)合可以通過(guò)多種不同方式來(lái)實(shí)現(xiàn)。物理結(jié)合可以是共價(jià)的或非共價(jià)的。疫苗納米載體、免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒可以彼此直接結(jié)合，例如， 通過(guò)一個(gè)或多個(gè)共價(jià)鍵，或通過(guò)一個(gè)或多個(gè)連接物結(jié)合。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，連接物與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒形成一個(gè)或多個(gè)共價(jià)或非共價(jià)鍵，且與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒形成一個(gè)或多個(gè)共價(jià)或非共價(jià)鍵，從而將它們彼此連接起來(lái)。在一些具體實(shí)施方案中，第一個(gè)連接物與疫苗納米載體形成共價(jià)或非共價(jià)鍵，且第二個(gè)連接物與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒形成共價(jià)或非共價(jià)鍵。這兩個(gè)連接物彼此之間形成一個(gè)或多個(gè)共價(jià)或非共價(jià)鍵。根據(jù)本發(fā)明可使用任何合適的連接物。連接物可用于形成酰胺鍵、酯鍵、二硫鍵等。連接物可以含有碳原子或雜原子(例如，氮、氧、硫等)。通常，連接物為1至50個(gè)原子長(zhǎng)、1至40個(gè)原子長(zhǎng)、1至25個(gè)原子長(zhǎng)、1至20個(gè)原子長(zhǎng)、1至15個(gè)原子長(zhǎng)、1至10個(gè)原子長(zhǎng)或1至10個(gè)原子長(zhǎng)。連接物可以被各種取代基取代，包括但不限于，氫原子、烷基、烯基、炔基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羥基、烷氧基、商素、芳基、雜環(huán)、芳香族雜環(huán)、氰基、酰胺、氨基甲酰、羧酸、酯、硫醚、烷基硫醚、硫醇和脲基基團(tuán)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識(shí)到的，這些基團(tuán)的每一個(gè)可以依次被取代。在一些具體實(shí)施方案中，連接物是脂肪族或雜脂肪族連接物。在一些具體實(shí)施方案中，連接物是聚烷基連接物。在某些具體實(shí)施方案中，連接物是聚醚連接物。在某些具體實(shí)施方案中，連接物是聚乙烯連接物。在某些特定的具體實(shí)施方案中，連接物是聚乙二醇 (PEG)連接物。在一些具體實(shí)施方案中，連接物是可分裂的連接物。僅舉一些實(shí)例，可分裂的連接物包括蛋白酶可分裂的肽連接物、核酶敏感性核酸連接物、脂酶敏感性脂連接物、糖苷酶敏感性碳水化合物連接物、PH敏感性連接物、缺氧敏感性連接物、光可分裂連接物、熱不穩(wěn)定性連接物、酶可分裂連接物(例如，酯酶分裂連接物)、超聲敏感性連接物、χ-射線可分裂連接物等。在一些具體實(shí)施方案中，連接物不是可分裂的連接物。多種方法中的任何方法可用于將連接物與疫苗納米載體結(jié)合。一般的策略包括被動(dòng)吸附(例如，通過(guò)靜電相互作用)、多價(jià)鰲合、特異性結(jié)合對(duì)成員之間的高親和性非共價(jià)結(jié)合、共價(jià)鍵形成等(Gao等，2005，Curr. Op. Biotechnol.，16 :63 ；引入本文中作為參考)。 在一些具體實(shí)施方案中，可以使用點(diǎn)擊化學(xué)將連接物與顆粒結(jié)合?？梢允褂秒p功能交聯(lián)試劑。這樣的試劑含有兩個(gè)反應(yīng)基團(tuán)，從而提供共價(jià)連接兩個(gè)目標(biāo)基團(tuán)的方式?；瘜W(xué)交聯(lián)試劑中的反應(yīng)基團(tuán)通常屬于不同類(lèi)別的官能團(tuán)，如琥珀酰亞胺酯、馬來(lái)酰亞胺和吡啶二硫化物。示例性交聯(lián)劑包括，例如，碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺-4-疊氮水楊酸(NHS-ASA)、二甲基庚二亞胺二鹽酸鹽(DMP)、二甲基辛二亞胺(DMS)、 3,3' - 二硫雙丙亞胺(DTBP)、N-琥珀酰亞胺3-[2-吡啶二硫]-丙氨(SPDP)、琥珀酰亞胺 α -甲基丁酸酯、生物素氨基己酰-6-氨基-己酸N-羥基-琥珀酰亞胺酯(SMCC)、琥珀酰亞胺-[(N-馬來(lái)酰亞胺丙氨)_十二乙二醇]酯(NHS-PE012)等。例如，碳二亞胺介導(dǎo)的酰胺的形成和活性酯馬來(lái)酰亞胺酯介導(dǎo)的胺和巰基偶聯(lián)是廣泛使用的方法。在一些具體實(shí)施方案中，可以通過(guò)將一個(gè)分子上的胺基團(tuán)偶聯(lián)至第二個(gè)分子上的硫醇基團(tuán)(有時(shí)通過(guò)兩步或三步反應(yīng)序列)而形成疫苗納米載體。含有硫醇的分子可以通過(guò)使用雜雙功能交聯(lián)試劑(例如，同時(shí)含有琥珀酰亞胺酯和馬來(lái)酰亞胺、吡啶二硫或碘乙酰胺的試劑)與含有胺的分子反應(yīng)。可以使用胺-羧酸和硫醇-羧酸交聯(lián)、巰基馬來(lái)酰亞胺偶聯(lián)化學(xué)(例如，馬來(lái)酰亞胺苯甲酰-N-羥基馬來(lái)酰亞胺酯(MBQ方法)等?？梢苑謩e通過(guò)賴氨酸或半胱氨酸側(cè)鏈中的胺或硫醇基團(tuán)，或通過(guò)N-端氨基，將多肽方便地偶聯(lián)至顆粒。核酸(如RNA)可以通過(guò)末端氨基合成?？梢允褂酶鞣N偶聯(lián)試劑(例如，琥珀酰亞胺 3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)和硫代琥珀酰亞胺-4-(N-馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸鹽(硫-SMCC))來(lái)結(jié)合疫苗納米載體的各種成分。疫苗納米載體可以使用表面具有的官能團(tuán)(例如，氨基或羧基基團(tuán))來(lái)制備，以促進(jìn)與生物分子的結(jié)合?？梢允褂梅枪矁r(jià)特異性結(jié)合相互作用。例如，顆粒或生物分子可以用生物素官能團(tuán)化，而另一個(gè)則進(jìn)行鏈霉菌抗生物素官能團(tuán)化。這兩個(gè)部分彼此非共價(jià)地特異性結(jié)合且具有高親和性，從而將顆粒和生物分子結(jié)合起來(lái)?？梢灶?lèi)似地使用其它特異性結(jié)合對(duì)?；蛘?，組氨酸標(biāo)記的生物分子可以與偶聯(lián)至鎳-氮川三乙酸(Ni-NTA)的顆粒結(jié)合。任何生物分子與顆粒、靶向部分和/或治療劑結(jié)合。間隔物可以是，例如，短肽鏈
85(例如，長(zhǎng)度為1至10個(gè)氨基酸，例如，長(zhǎng)度為1、2、3、4或5個(gè)氨基酸)核酸、烷基鏈等。對(duì)于其它的關(guān)于結(jié)合和/或偶聯(lián)方法和交聯(lián)劑的一般性信息，可參見(jiàn)期刊 Bioconjugate Chemistry,American Chemical Society 出片反，Columbus OH,PO Box 3337, Columbus, OH, 43210 ;“Cross_Linking，，(交聯(lián))，Pierce Chemical Technical Library,可在Pierce網(wǎng)站獲得，最初在1994-95 Pierce Catalog出版，及其中引用的參考文獻(xiàn)；Wong SS,Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking(蛋白偶聯(lián)禾口交聯(lián)化學(xué))，CRC Press Publishers, Boca Raton, 1991 ；禾口 Hermanson, G. Τ· , Bioconjugate Techniques (生物偶聯(lián)結(jié)合)，Academic Press, Inc.，San Diego, 1996?？商鎿Q地或另外地，疫苗納米載體可以通過(guò)非共價(jià)相互作用直接或間接地與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。非共價(jià)相互作用包括但不限于電荷相互作用、親和性相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水性相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以通過(guò)電荷相互作用與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。例如，疫苗納米載體可以具有陽(yáng)離子表面或與陽(yáng)離子聚合物(如聚(賴氨酸)或聚(吖丙啶))反應(yīng)以提供陽(yáng)離子表面。然后疫苗納米載體表面可以通過(guò)電荷相互作用與帶負(fù)電的免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。通常，免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的一端與帶負(fù)電的聚合物(例如，聚(羧酸))或另外的可以與陽(yáng)離子聚合物表面相互作用的寡核苷酸序列結(jié)合， 而沒(méi)有破壞免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的功能。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以通過(guò)親和性相互作用與免疫調(diào)節(jié)劑、 靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。例如，生物素可以與疫苗納米載體的表面結(jié)合而鏈霉菌抗生物素可以與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合；或者相反，生物素可以與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合而鏈霉菌抗生物素可以與疫苗納米載體的表面結(jié)合。生物素基團(tuán)和鏈霉菌抗生物素可以通過(guò)連接物(如亞烴基連接物或聚醚連接物)與疫苗納米載體結(jié)合或與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。生物素和鏈霉菌抗生物素通過(guò)親和性相互作用結(jié)合，從而將疫苗納米載體與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以通過(guò)金屬配位與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。例如，聚組氨酸可以與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的一端結(jié)合，和氮川三乙酸可以與疫苗納米載體的表面結(jié)合。金屬(如 Ni2+)將鰲合聚組氨酸和氮川三乙酸，從而將免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒與疫苗納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以通過(guò)物理吸附與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。例如，疏水性尾巴(如聚甲基丙烯酸酯或具有至少約 10個(gè)碳的烷基基團(tuán))可以與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的一端結(jié)合。疏水性尾巴將吸附至疏水性疫苗納米載體的表面，從而將免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒與疫苗納米載體結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以通過(guò)主客體相互作用與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。例如，大環(huán)主體(如葫蘆脲或環(huán)狀糊精)可以與疫苗納米載體的表面結(jié)合，和客體基團(tuán)(如烷基基團(tuán)、聚乙二醇或二氨基烷基基團(tuán))可以與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合；或者相反，主體基團(tuán)可以與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合，和客體基團(tuán)可以與疫苗納米載體的表面結(jié)合。在一些具體實(shí)施方案中，主體和/或客體分子可以通過(guò)連接物(如亞烴基連接物或聚醚連接物)與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆?；蛞呙缂{米載體結(jié)
I=I O在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體可以通過(guò)氫鍵相互作用與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒結(jié)合。例如，具有特定序列的寡核苷酸可以與疫苗納米載體的表面結(jié)合，和基本上互補(bǔ)的序列可以與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的一端或兩端結(jié)合，使得沒(méi)有破壞免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的功能。然后免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒通過(guò)與疫苗納米載體結(jié)合的寡核苷酸的互補(bǔ)性堿基配對(duì)而與疫苗納米載體結(jié)合。如果一個(gè)寡核苷酸上約80%的核酸堿基通過(guò)寡核苷酸堿基配對(duì)系統(tǒng)(如Watson-Crick堿基配對(duì)、反向Watson-Crick堿基配對(duì)、Hoogsten堿基配對(duì)等)與第二個(gè)寡核苷酸上的堿基形成氫鍵，則兩個(gè)寡核苷酸是基本上互補(bǔ)的。通常，希望與疫苗納米載體結(jié)合的寡核苷酸序列和與免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、 免疫刺激劑和/或納米顆粒通過(guò)與疫苗納米載體結(jié)合的互補(bǔ)性寡核苷酸之間形成至少約6 個(gè)互補(bǔ)性堿基對(duì)。在一些具體實(shí)施方案中，疫苗納米載體通過(guò)自體裝配形成。對(duì)于疫苗納米載體的自體裝配的詳細(xì)實(shí)例，參見(jiàn)實(shí)施例1和2。在某些具體實(shí)施方案中，制備小脂質(zhì)體(10納米-1000納米)并用于將一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑傳送至免疫系統(tǒng)的細(xì)胞(圖3)。通常，脂質(zhì)體是人工構(gòu)建的圓球體脂泡，其數(shù)十至數(shù)千納米的可控直徑意味著單獨(dú)的脂質(zhì)體包含體積為仄升(I(T21L)至飛升(I(T15L)的生物相容性腔室，這些腔室可用于包埋并儲(chǔ)存各種物質(zhì)，如蛋白、酶、DNA和藥物分子。脂質(zhì)體可以包含具有兩性性質(zhì)的脂雙層雙層的內(nèi)表面和外表面均為親水性的，雙層的腔是疏水性的。親脂性分子可以自主嵌入脂質(zhì)體膜并將其親水性結(jié)構(gòu)域保留在外面，由于膜的雙功能性的優(yōu)勢(shì)，親水性分子可以與脂質(zhì)體的外表面化學(xué)地偶聯(lián)。在某些具體實(shí)施方案中，脂質(zhì)與親脂性免疫調(diào)節(jié)劑混合，然后在固體表面上形成薄膜。親水性免疫調(diào)節(jié)劑溶解于水性溶液中，然后將其加入脂膜中，以在振蕩下將脂質(zhì)水解。脂質(zhì)體與整合到雙層壁中的親脂性免疫調(diào)節(jié)劑和位于脂質(zhì)體腔內(nèi)的親水性免疫調(diào)節(jié)劑自發(fā)組裝。在某些具體實(shí)施方案中，用于脂質(zhì)體中的脂質(zhì)可以是下列物質(zhì)中的一種或多種， 但不限于此磷脂酰膽堿、脂質(zhì)A、膽固醇、多萜醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、糖基神經(jīng)酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在某些具體實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑可以與脂質(zhì)體的表面偶聯(lián)。 在一些具體實(shí)施方案中，脂質(zhì)體內(nèi)攜帶相同或不同的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些具體實(shí)施方案中， 脂質(zhì)體表面膜可以用能夠選擇性地將免疫調(diào)節(jié)劑傳送至特異性抗原表達(dá)細(xì)胞的靶向部分修飾。在一些具體實(shí)施方案中，將納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體用于將一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑傳送至免疫系統(tǒng)的細(xì)胞(圖4)。通過(guò)允許小的帶電的納米顆粒(1納米-30納米)吸附至脂質(zhì)體表面上，脂質(zhì)體-納米顆粒復(fù)合體不但具有上述僅僅脂質(zhì)體的性質(zhì)(圖幻，還具有可調(diào)的膜剛性和可控的脂質(zhì)體穩(wěn)定性。當(dāng)小的帶電的納米顆粒到達(dá)帶有相反電荷或無(wú)凈電荷的脂質(zhì)體表面時(shí)，納米顆粒與膜之間的靜電或電荷-偶極相互作用吸引納米顆粒停留在膜表面上，被脂膜部分包裹住。這誘導(dǎo)脂質(zhì)體的局部膜彎曲和小球表面的張力，二者均能夠調(diào)節(jié)膜的剛性。這個(gè)方面對(duì)于使用脂質(zhì)體進(jìn)行疫苗傳送是至關(guān)重要的，脂質(zhì)體用以模擬病毒，病毒的堅(jiān)固性取決于病毒膜內(nèi)其它生物成分的組成。此外，被吸附的納米顆粒形成帶電的殼，其保護(hù)脂質(zhì)體抵抗融合，從而增強(qiáng)脂質(zhì)體穩(wěn)定性。在某些具體實(shí)施方案中，將小的納米顆粒與脂質(zhì)體在輕微振蕩下混合，并且納米顆粒自主粘附至脂質(zhì)體表面。在特定的具體實(shí)施方案中，小的納米顆粒可以是，但不限于，聚合納米顆粒、金屬納米顆粒、無(wú)機(jī)或有機(jī)納米顆粒、其雜合物，和/或其組合。在一些具體實(shí)施方案中，脂質(zhì)體-聚合物納米載體用于將一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑傳送至免疫系統(tǒng)的細(xì)胞(圖幻。替代保持脂質(zhì)體內(nèi)部中空，可以將親水性免疫調(diào)節(jié)劑包埋。 圖3顯示了裝載了雙嵌段共聚物納米顆粒的脂質(zhì)體，以形成脂質(zhì)體包被的聚合納米載體， 其同時(shí)具有脂質(zhì)體和聚合物納米顆粒的性質(zhì)，而排除了一些它們的局限性。在一些具體實(shí)施方案中，脂質(zhì)體殼可用于攜帶親脂性或偶聯(lián)親水性免疫調(diào)節(jié)劑，并且聚合核心可用于傳送疏水性免疫調(diào)節(jié)劑。在某些具體實(shí)施方案中，將預(yù)制的聚合納米顆粒GO納米-1000納米)與小的脂質(zhì)體(20納米-100納米)在輕微振蕩下混合，以誘導(dǎo)脂質(zhì)體融合至聚合物納米顆粒表面上。在特定的具體實(shí)施方案中，雙嵌段共聚物納米顆?？梢允牵幌抻?，一種或多種的以下物質(zhì)聚(0，1^乳酸)-嵌段-聚(乙二醇)(PLA-b-PEG)、聚(D，L羥基乙酸)-嵌段-聚 (乙二醇)(PLG-b-PEG)、聚(D，L乳酸-共-羥基乙酸)-嵌段-聚(乙二醇)(PLGA-b-PEG) 和聚(ε -己內(nèi)酯)-嵌段-聚(乙二醇)(PCL-b-PEG)。在一些具體實(shí)施方案中，將納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體-聚合物納米載體用于輸送一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑(圖6)。通過(guò)小的納米顆粒(1納米-30納米)吸附至脂質(zhì)體-聚合物納米載體表面，納米載體不但具有上述納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體(圖4)和上述脂質(zhì)體-聚合物納米顆粒(圖幻的性質(zhì)，還具有可調(diào)的膜剛性和可控的脂質(zhì)體穩(wěn)定性。在一些具體實(shí)施方案中，將含有反膠束的脂質(zhì)體-聚合物納米載體用于輸送一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑(圖7)。由于上述脂質(zhì)體-聚合物納米載體(圖5和6)限于攜帶聚合納米顆粒內(nèi)的疏水性免疫調(diào)節(jié)劑，所以在此將小的反膠束(1納米-20納米)制成包埋親水性免疫調(diào)節(jié)劑，然后與雙嵌段共聚物混合以制成脂質(zhì)體的聚合核心。在某些具體實(shí)施方案中，首先將待包埋的親水性免疫調(diào)節(jié)劑通過(guò)在揮發(fā)性的可與水混溶的有機(jī)溶劑中與天然來(lái)源的且無(wú)毒的兩性實(shí)體混合而整合至反膠束中。在某些具體實(shí)施方案中，兩性實(shí)體可以是，但不限于，以下物質(zhì)中的一種或多種磷脂酰膽堿、脂質(zhì)A、 膽固醇、多萜醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、糖基神經(jīng)酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具體實(shí)施方案中，揮發(fā)性的可與水混溶的有機(jī)溶劑可以是，但不限于四氫呋喃、丙酮、乙腈或二甲基甲酰胺。在一些具體實(shí)施方案中，在完成反膠束形成后向該混合物中加入生物可降解聚合物。將得到的生物可降解聚合物-反膠束混合物與聚合物不溶性的親水性非溶劑混合，通過(guò)溶劑快速擴(kuò)散至非溶劑中以及有機(jī)溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。在某些具體實(shí)施方案中，聚合物不溶性的親水性非溶劑可以是，但不限于，以下物質(zhì)中的一種或多種水、乙醇、甲醇及其混合物。含有反膠束的聚合物納米顆粒與脂分子混合以形成上述脂質(zhì)體-聚合物復(fù)合體結(jié)構(gòu)(圖5)。在一些具體實(shí)施方案中，含有反膠束的納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體-聚合物納米載體用于傳送一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑(圖8)。通過(guò)將小的納米顆粒(1納米-30納米)吸附至脂質(zhì)體-聚合物納米載體表面上，納米載體不但具有上述納米顆粒穩(wěn)定化的脂質(zhì)體(圖 4)和上述含有反膠團(tuán)的脂質(zhì)體-聚合物納米顆粒(圖7)的性質(zhì)，還具有可調(diào)的膜剛性和可控的脂質(zhì)體穩(wěn)定性。在一些具體實(shí)施方案中，脂單層穩(wěn)定化的聚合物納米載體用于傳送一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑(圖9)。與上述脂質(zhì)體-聚合物納米載體(圖5-8)相比，這個(gè)系統(tǒng)就試劑和制備而言具有簡(jiǎn)單性的性質(zhì)。在一些具體實(shí)施方案中，疏水性均聚物可以形成聚合物核心，與圖 5-8中所用的雙嵌段共聚物(其同時(shí)具有疏水性和親水性片段)相反。脂質(zhì)穩(wěn)定化的聚合納米載體可以在一個(gè)單一步驟內(nèi)制成，而不是先分別制備聚合物納米顆粒和脂質(zhì)體然后再將其融合在一起。在某些具體實(shí)施方案中，親水性免疫調(diào)節(jié)分子首先與脂質(zhì)頭部基團(tuán)化學(xué)偶聯(lián)。偶聯(lián)物在含有一種或多種與水混溶的溶劑的水性溶液中以特定比例與未偶聯(lián)的脂質(zhì)分子混合。在某些具體實(shí)施方案中，兩性實(shí)體可以是，但不限于，以下物質(zhì)中的一種或多種磷脂酰膽堿、脂質(zhì)A、膽固醇、多萜醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、糖基神經(jīng)酰胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具體實(shí)施方案中，與水混溶的溶劑可以是，但不限于丙酮、乙醇、甲醇和異丙醇。生物可降解聚合物材料與疏水性免疫調(diào)節(jié)劑混合以包埋于與水混溶或部分與水混溶的有機(jī)溶劑中。在特定的具體實(shí)施方案中，生物可降解聚合物可以是，但不限于，以下物質(zhì)中的一種或多種聚(D，L_乳酸)、聚(D，L_羥基乙酸)、聚(ε-己內(nèi)酯)，或其以各種摩爾比例的共聚物。在一些具體實(shí)施方案中，與水混溶的有機(jī)溶劑可以是但不限于丙酮、乙醇、甲醇或異丙醇。在一些具體實(shí)施方案中，部分與水混溶的有機(jī)溶劑可以是，但不限于乙腈、四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、乙酸異丙酯或二甲基甲酰胺。將所得到的聚合物溶液加入到偶聯(lián)的和未偶聯(lián)的脂質(zhì)的水性溶液中，通過(guò)有機(jī)溶劑快速擴(kuò)散至水中以及有機(jī)溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。在一些具體實(shí)施方案中，將包含反膠束的脂單層穩(wěn)定化的聚合納米顆粒用于傳送一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑(圖10)。由于上述脂質(zhì)體穩(wěn)定化的聚合物納米載體(圖9)限制于攜帶疏水性免疫調(diào)節(jié)劑，所以在此制成小的反膠束(1納米-20納米)，以包埋親水性免疫調(diào)節(jié)劑，然后與生物可降解聚合物混合，以制成聚合納米載體核心。應(yīng)該理解，可以以任何合適的方式制備本發(fā)明的組合物，并且本發(fā)明不以任何方式限于使用本文中所述方法產(chǎn)生的組合物。合適方法的選擇可能需要注意所結(jié)合的特定部分的性質(zhì)。如果需要，可以使用各種方法將結(jié)合了免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的疫苗納米載體與未結(jié)合免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的疫苗納米載體分離開(kāi)來(lái)，或與結(jié)合了不同數(shù)目的免疫調(diào)節(jié)劑、靶向部分、免疫刺激劑和/或納米顆粒的疫苗納米載體分離開(kāi)來(lái)。例如，可以使用尺寸排除色譜、瓊脂糖凝膠電泳或過(guò)濾以分離結(jié)合了不同數(shù)目實(shí)體的疫苗納米載體群和/或?qū)⒁呙缂{米載體與其它實(shí)體分離開(kāi)來(lái)。一些方法包括尺寸排除或陰離子交換色譜。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體在無(wú)菌條件下制備。這可以保證所得到的疫苗是無(wú)菌的和無(wú)傳染性的，從而與活體疫苗相比改善了安全性。這提供了有價(jià)值的安全度量，特別是當(dāng)接受疫苗的患者具有免疫缺陷、患有感染和/或易于感染的時(shí)候。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗納米載體可以是凍干的并儲(chǔ)存在懸浮液中或作為凍干粉末儲(chǔ)存，這取決于為了延長(zhǎng)時(shí)間而不損失活性的制備策略。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米載體包含聚合物分子，并且免疫特征表面的多個(gè)部分與聚合物分子結(jié)合。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，多個(gè)部分與聚合物分子共價(jià)結(jié)合。在各種具體實(shí)施方案中，多個(gè)部分中的每一個(gè)與分開(kāi)的聚合物分子結(jié)合，或多個(gè)部分中的幾個(gè)可以結(jié)合相同的聚合物分子。作為一個(gè)實(shí)例具體實(shí)施方案，提供了包含與聚合物偶聯(lián)的(S)-(-)_尼古丁或其代謝物的組合物。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，偶聯(lián)物通過(guò)共價(jià)連接偶聯(lián)。聚合物可以是本文中所述的聚合物中的任何一種。例如，在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是生物相容性、生物可降解聚合物。在一些具體實(shí)施方案中，聚合物是均聚物，而在其他具體實(shí)施方案中，聚合物是共聚物。例如，聚合物是包含具有疏水性末端的疏水性嵌段和具有相應(yīng)親水性末端的親水性嵌段的線性共聚物。例如，聚合物是包含嵌段的共聚物，其中嵌段選自聚(乳酸)、聚(乳酸)衍生物、PEG化聚(乳酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)衍生物、PEG化聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚(酐)、PEG化聚(酐)、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)衍生物、PEG化聚(原酸酯)、聚(己內(nèi)酯)、聚(己內(nèi)酯)衍生物、PEG化聚(己內(nèi)酯)、聚賴氨酸、聚賴氨酸衍生物、PEG化聚賴氨酸、聚(吖丙啶)、聚(吖丙啶)衍生物、PEG化聚(吖丙啶)、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸)衍生物、PEG化聚(丙烯酸)、聚(尿烷)、PEG化聚(尿烷)，聚(尿烷)衍生物，及其組合。在一些具體實(shí)施方案中，多個(gè)尼古丁部分與聚合物偶聯(lián)，而在其他具體實(shí)施方案中，單個(gè)尼古丁部分與聚合物偶聯(lián)。在前一種情況中，尼古丁部分可以作為結(jié)合聚合物主鏈的側(cè)鏈存在，或聚合物可以包含多個(gè)端基(例如，在樹(shù)突或分支聚合物中)，其中多個(gè)結(jié)合尼古丁部分。在后一種情況中，尼古丁部分可以位于沿著聚合物主鏈的任何點(diǎn)。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，尼古丁部分位于聚合物的一個(gè)末端。例如，在具有疏水性末端的疏水性嵌段和親水性末端的親水性嵌段的兩性聚合物的情況中，尼古丁部分可以在親水性或疏水性末端共價(jià)結(jié)合。例如，尼古丁部分位于親水性末端。尼古丁包含吡啶環(huán)和吡咯烷環(huán)，并且與聚合物的共價(jià)連接可以在吡啶環(huán)的2_、4_、 5-或6-位，或在吡咯烷環(huán)的3-、4_或5-位。例如，組合物可以包含偶聯(lián)物，偶聯(lián)物包含與聚合物偶聯(lián)的尼古丁或其代謝物。例如，聚合物偶聯(lián)物可以具有式(I)的結(jié)構(gòu)
(I)⑴ n-LHY)m-L2-A其中X是疏水性聚合物片段；Y是親水性聚合物片段；
η和m選自0禾口 1，只要η和m不同時(shí)為0 ；Ll和L2獨(dú)立地選自鍵和連接基團(tuán)；和A 是(S)-(-)_ 尼古丁。例如，A可以具有結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包含(1)具有至少一個(gè)表面的合成納米載體，其中合成納米載體的第一個(gè)表面包含免疫特征表面，該免疫特征表面包含多個(gè)尼古丁部分；和(2)藥物學(xué)上可接受的賦形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含免疫刺激劑，其中所述免疫刺激劑(i)與免疫特征表面結(jié)合；( )與納米載體的第二個(gè)表面結(jié)合；或(iii)包埋在納米載體內(nèi)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中施用于人時(shí)，所述合成納米載體能夠激活CD4+T 細(xì)胞、NKT細(xì)胞或兩者。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中施用于人時(shí)，所述合成納米載體能夠刺激抗-尼古丁 IgG抗體的產(chǎn)生。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述合成納米載體能夠引發(fā)人患者中的體液免疫應(yīng)答。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，將所述合成納米載體施用于人患者時(shí)，所述合成納米載體能夠通過(guò)患者中的SCS巨噬細(xì)胞穿過(guò)被膜下淋巴竇(SCS)基底而遷移。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述免疫刺激劑選自TLR激動(dòng)劑、白細(xì)胞間介素、干擾素、細(xì)胞因子和佐劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述合成納米載體包含聚合物分子，并且其中多個(gè)尼古丁部分與聚合物分子共價(jià)連接。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述多個(gè)尼古丁部分是(S)-(-)-尼古丁部分， 并且其中所述合成納米載體包含具有式(I)結(jié)構(gòu)的聚合物(I)⑴ n-LHY)m-L2-A其中X是疏水性聚合物片段；Y是親水性聚合物片段；η禾口 m選自0禾口 1，只要η和m不同時(shí)為0 ；Ll和L2獨(dú)立地選自鍵和連接基團(tuán)；和A 是(S)-(-)-尼古丁。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述多個(gè)尼古丁部分包含具有以下結(jié)構(gòu)的 (s)-(-)-尼古丁其中R1-R7中的一個(gè)表示聚合物，并且其他的選自H、烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷芳基和芳烷基，其中任意一個(gè)可以是取代或未取代的，并可以含有一個(gè)或多個(gè)雜原子。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述多個(gè)尼古丁部分以獲得至少10%的在抗原呈遞細(xì)胞(APC)結(jié)合試驗(yàn)中對(duì)于單克隆抗體(MAb)觀察到的最大固定化需要的密度相等或更高的密度存在，只要在APC結(jié)合試驗(yàn)中，對(duì)于多個(gè)部分的半最大結(jié)合密度是對(duì)于MAb的半最大結(jié)合密度的至少兩倍。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述多個(gè)尼古丁部分以獲得至少20%的在 APC結(jié)合試驗(yàn)中對(duì)于MAb觀察到的最大固定化需要的密度相等或更高的密度存在。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中對(duì)于多個(gè)部分的半最大結(jié)合密度是對(duì)于MAb 的半最大結(jié)合密度的至少四倍。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述APC結(jié)合試驗(yàn)包括(a)制備一系列底物，其具有一系列表面涂層密度的功能性部分的涂層，其中所述功能性部分能夠結(jié)合樹(shù)突細(xì)胞(DC)或被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞表面受體；(b)將一系列底物暴露于DC或被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液，持續(xù)預(yù)定的時(shí)間段；(c)從一系列底物中除去未粘附的APC，并將粘附的APC固定于一系列底物；(d)對(duì)于一系列底物中的每種底物，定量每單位表面積的粘附APC數(shù)量；(e)將來(lái)自(d)的結(jié)果相對(duì)功能性部分的涂層密度作出曲線；(f)通過(guò)測(cè)定一系列底物的每單位表面積的粘附APC的最大數(shù)量來(lái)獲得最大固定化的值；和(g)通過(guò)測(cè)定提供50%最大值的表面涂層密度來(lái)獲得半最大結(jié)合密度的值。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述MAb是抗-⑶Ic(BDCA-I)克隆AD5-8E7， 或大鼠抗-小鼠CD169，克隆3D6. 112，同種型IgG2a。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述尼古丁包含尼古丁的衍生物、代謝物或類(lèi)似物。
17.一種方法，包括將權(quán)利要求1的組合物施用于具有低于100毫微克/毫升的基線 IgG抗-尼古丁抗體血清濃度的患者，其中患者中施用后的抗-尼古丁 IgG抗體峰血清濃度高于200毫微克/毫升。
18.一種方法，包括將權(quán)利要求1的組合物施用于之前尚未針對(duì)尼古丁接種疫苗的患者，其中患者中施用后的抗_尼古丁抗體峰濃度高于或等于100毫微克/毫升。
19.一種方法，包括將最初劑量的權(quán)利要求1的組合物施用于患者；和在施用最初劑量后的一定時(shí)間段，將第一次后續(xù)劑量的權(quán)利要求1的組合物施用于患者O
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中施用最初劑量后的時(shí)間段為1天至1年之間。
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，進(jìn)一步包括在第一次后續(xù)劑量施用后的一定時(shí)間段，將第二次后續(xù)劑量的權(quán)利要求1的組合物施用于患者。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中第一次后續(xù)劑量施用后的時(shí)間段為1天至1年之間。
23.一種組合物，其包含(1)具有至少一個(gè)表面的合成納米載體，其中合成納米載體的第一個(gè)表面包含多個(gè)尼古丁部分，多個(gè)尼古丁部分的含量能有效提供對(duì)尼古丁部分的體液應(yīng)答；和 (2)藥物學(xué)上可接受的賦形劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述尼古丁部分以有效提供基于親合力的與哺乳動(dòng)物抗原呈遞細(xì)胞結(jié)合的含量存在。
25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述納米載體的直徑高于100納米。
26.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述藥物學(xué)上可接受的賦形劑選自溶劑、分散介質(zhì)、稀釋劑或其他液體載體、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑和潤(rùn)滑劑。
27.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述組合物靶向被膜下淋巴竇巨噬細(xì)胞。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述組合物靶向樹(shù)突細(xì)胞。
29.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述組合物基本上沒(méi)有激活補(bǔ)體。
30.一種引發(fā)體液免疫應(yīng)答的方法，該方法包括施用權(quán)利要求1或23的組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于將納米載體傳送至免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的組合物和系統(tǒng)。本發(fā)明提供了能夠刺激T細(xì)胞和/或B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的納米載體。本發(fā)明提供了包含具有多個(gè)尼古丁部分的免疫特征表面的納米載體。本發(fā)明提供了包含納米載體的藥物組合物。本發(fā)明提供了設(shè)計(jì)、制造和使用納米載體及其藥物組合物的方法。例如，本發(fā)明描述了能夠引發(fā)免疫應(yīng)答的納米載體和抗尼古丁抗體的產(chǎn)生。
文檔編號(hào)A61K39/00GK102245200SQ200980149915
公開(kāi)日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2009年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月12日
發(fā)明者E·A·莫斯曼, E·通蒂, F·亞歷克西, J·史, M·揚(yáng)納科內(nèi), O·C·法魯赫扎德, P·巴斯托, R·蘭格, U·馮安德里安 申請(qǐng)人:哈佛大學(xué)校長(zhǎng)及研究員協(xié)會(huì), 布萊根婦女醫(yī)院, 麻省理工學(xué)院