專利名稱：：眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxiii)在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途。
背景技術：
：蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多種組分構成的復雜混合物。蛇毒的干物質(zhì)中90%以上是蛋白質(zhì)，是其毒性和其生物學活性的主要成分。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學認為眼鏡蛇及其毒性成分可通經(jīng)絡，祛風濕，并具有強身健體之功效，早在二十世紀初，人們就開始應用蛇毒來緩解惡性腫瘤疼痛、神經(jīng)痛和關節(jié)痛，隨后出現(xiàn)一系列關于蛇毒有類似嗎啡樣鎮(zhèn)痛作用的報道。隨著研究的不斷深入，現(xiàn)在，蛇毒及其制品已應用于臨床，除了鎮(zhèn)痛作用外，在抗風濕、抗腫瘤以及在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療方面都有很好的療效。眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)其序列是mktllltllvvtivcldlgytlechnqqssqtptttgcsggetncykkrwrdhrgyrtergcgcpsvkngieinccttdrcnn，所提純的眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)含64-83個氨基酸，其分子量為6946左右。目前關于眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxiii)治療風濕性關節(jié)炎的研究還沒有報道，我們首先發(fā)現(xiàn)其有良好的抗風濕性關節(jié)炎的作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途。本發(fā)明的技術方案是一種眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxhi)在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途，所述藥物包括口服液、膠囊、涂劑、巴布劑、噴霧劑和注射劑等，所述藥物還包括各種單方和復方制劑。盡管中華眼鏡蛇蛇毒在臨床上已用于治療風濕和緩解惡性腫瘤疼痛、神經(jīng)痛和關節(jié)痛等，但目前還沒有文獻報道中華眼鏡蛇中提純的短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)可通過口服、鼻(口)粘膜噴霧、透皮給藥和注射給藥能治療風濕，尤其是類風濕的報道。我們研究發(fā)現(xiàn)眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)對弗氏完全佐劑導致的實驗動物類風濕性關節(jié)炎，包括原發(fā)性和繼發(fā)性類風濕性關節(jié)炎都有很好的治療作用。這一發(fā)現(xiàn)，將對風濕性關節(jié)炎的研究和藥物開發(fā)產(chǎn)生重大的影響，并有臨床實用價值，為眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素3(Cobrotoxin)開辟臨床新的用途。本發(fā)明的優(yōu)點是1.眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)不僅能改善關節(jié)腫大和疼痛等癥狀，還能改善骨關節(jié)和滑膜病理改變。2.眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)用量少，有效范圍大，從l-600fig/kg都有很好的治療風濕性關節(jié)炎的作用。3.眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)多種給藥途徑包括皮膚給藥、口服、口(鼻)粘膜噴霧和注射等均有效。下面結合實施例對本發(fā)明作進一步描述具體實施例方式實施例根據(jù)眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)在治療類風濕性關節(jié)炎中的動物實驗結果，以及眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxiii)可制成巴布劑的情況。本發(fā)明在治療關節(jié)炎時，可采用巴布劑，0.1-10毫克/貼，貼于患病關節(jié)處，二天一次。支持本發(fā)明的研究結果1、眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin，l-100jig/kg)腹腔注射給藥能降低原發(fā)性佐劑關節(jié)炎大鼠踝關節(jié)周長，提高大鼠機械痛閾。2、眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxiii，l-100pg/kg)腹腔注射給藥能降低繼發(fā)性佐劑關節(jié)炎大鼠踝關節(jié)周長，提高大鼠機械痛閾。3、眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxhi，l-400pg/kg)灌胃給藥能降低原發(fā)性佐劑關節(jié)炎大鼠踝關節(jié)周長，提髙大鼠機械痛閾。4、眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin，l-400jig/kg)皮膚涂布給藥能降低繼發(fā)性佐劑關節(jié)炎大鼠踝關節(jié)周長，提髙大鼠機械痛閾。5、眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin,l-400fig/kg)皮膚涂布給藥能降低繼發(fā)性佐劑關節(jié)炎大鼠踝關節(jié)周長，提高大鼠機械痛閾。支持本發(fā)明的部分實驗結果(圖表)如下表1眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)灌胃或經(jīng)皮膚給藥對弗氏完全佐劑致大鼠原發(fā)性關節(jié)炎踝關節(jié)周長的影響組別劑量(|ig/kg)6h關節(jié)周長差(mm)18h42h灌胃組5011.3±2.611.0±2.07.3±4.210010.7±1.7*10.7±1.45.0±3.6*20013.肚2.110.9±1,59.4±0.9*皮膚涂布4013.1±2.712.4±2.212.0±2.58015.8±2.710.0±1.2*9.3±1.51609.5±4.7*9.0±4.1*8,6±3.7空白對照——13.8士1.7##12.5±1廁11.9士1.8##正常對照—0.13±0.12O.ll士O.lO0.24±0.19*P<0.05，與空白對照組相比；糾P〈0.01，與正常對照組相比結果提示，與正常對照組相比，空白對照組大鼠在注射弗氏完全佐劑后，6，18和42小時，踝關節(jié)周長明顯增加。注射弗氏完全佐劑6小時，灌胃(IOOpg/kg)和皮膚涂劑(160pg/kg)與空白對照組相比，大鼠踝關節(jié)周長明顯降低；18小時，皮膚涂布(80，160pg/kg)與空白對照組相比，大鼠踝關節(jié)周長差明顯降低；42小時，眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)灌胃(100，200jig/kg)與空白對照組相比，大鼠踝關節(jié)周長差明顯降低。結果見表l。原發(fā)性佐劑關節(jié)炎病變持續(xù)3天后逐漸減輕，繼發(fā)性病變由遲發(fā)性超敏反應引起，于致炎10天后出現(xiàn)新一輪的腫脹。佐劑致炎后11-19天，與正常對照組相比，大鼠踝關節(jié)差明顯升高。13天，皮膚涂劑組(40,80pg/kg)明顯降低大鼠關節(jié)周長。15天，灌胃組(200pg/kg)和皮膚涂布組(40,80pg/kg)明顯降低大鼠關節(jié)周長差，17天，皮膚涂布組(40，80，160jig/kg)明顯降低大鼠關節(jié)周長差。結果見表2。另外，我們采用注射給藥的方法，考察眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxiii)對佐劑關節(jié)炎大鼠的抗炎和鎮(zhèn)痛作用，實驗結果如下眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin，9，18jig/kg)注射給藥能明顯降低原發(fā)性大鼠關節(jié)周長差，提髙痛閾，其鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于阿司匹林(100000pg/kg)。結果見表3,4。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表4眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)對弗氏完全佐劑致大鼠原發(fā)性關節(jié)炎機械痛閾的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*P<0.05，***P<0.001，與空白對照組相比眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)明顯降低繼發(fā)性大鼠關節(jié)周長差，提高痛閾。在注射弗氏完全佐劑后第15天，眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(18嗎/kg)與空白對照組相比，有顯著性差異。結果見表5。在注射弗氏完全佐劑后第15和17天，眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(9，18pg/kg)與空白對照組相比，有顯著性差異，提示其能降低關節(jié)炎疼痛。結果見表6。表5眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)對弗氏完全佐劑致大鼠繼發(fā)性關節(jié)炎踝關節(jié)周長的影響_關節(jié)周長差(ram)組別劑量11天13天15天17天19天_(^g/kg)_眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒95.6±1.1素阿司匹林1000004.2±0.9空白對照一5.4±組0.5#抑正常對照--0.4士0.2*P<0.05，***P<0.001，與空白對照組相比，###P<0.001，與正常對照組相比5.8±1.06.5±0.86.2±1.25.8±1.0*5.3±1.05.2±0.87.3±0.7腳0.2±0.24.1±1.1林*5.8±0.7*8.7±0.8甜tt0.5±0,26.4±0.74.3±0.9*6.9±0.8ffiW0.8±0.46.8±1.24.8±0.8*8.2±0.6#抑5.8±1.07表6眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)對弗氏完全佐劑致大鼠繼發(fā)性關節(jié)炎機械痛閾的影響組別劑量g)11天痛閾(g)13天15天17天19天眼鏡蛇短91820.6±3.419.3±8.739.7±9.6*42.0±11.4*37.7±10.3阿司匹林100000空白對照一組正常對照--組15.5±3.520.5±2.514.2±2.9#38,5±9.812.7±4.313.8±3.07.0±1.1#14.8±3.854.3±5.7氺氺氺60.0±0.o氺氺氺16.0±3.6tttt48.7±7.260.0±48.7±7.2*16.0±3.5tt35.5±7.945.0±15.054.3±5.733.7±8.654.3±5.7*P<0.05，*"P<0.001,與空白對照組相比，#P<0.05,##P<0.01，與正常對照組相比。8權利要求1.一種眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途。2.根據(jù)權利要求1所述的眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途，其特征在于所述藥物包括口服液、膠囊、涂劑、巴布劑、噴霧劑和注射劑等各種劑型。3.根據(jù)權利要求1所述的眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途，其特征在于所述藥物還包括各種單方和復方制劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)在制備治療關節(jié)炎藥物中的用途，眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素(Cobrotoxin)是從中華眼鏡蛇蛇毒中提純的神經(jīng)毒素。我們的研究發(fā)現(xiàn)眼鏡蛇短鏈神經(jīng)毒素在(1-600μg/kg)范圍內(nèi)對風濕性關節(jié)炎有明顯的治療作用，其能減輕關節(jié)腫大，疼痛等癥狀，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透過口鼻粘膜和皮膚給藥等優(yōu)點。文檔編號A61K38/17GK101648000SQ200910144909公開日2010年2月17日申請日期2009年9月7日優(yōu)先權日2009年9月7日發(fā)明者劉艷麗,秦正紅,容鄒申請人:蘇州大學