專利名稱：一種止血消毒劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種消毒劑及其制備方法，更具體地涉及一種止血消毒劑及其制備方 法。
背景技術(shù)：
隨著全球性氣候變暖和環(huán)境污染的惡化，各種微生物特別是致病性微生物的種類 和繁衍速度均在不斷上升，由此引發(fā)的人體和動物各種疾病的發(fā)病率也隨之迅速攀升，所 以消毒劑的使用顯得尤為重要。消毒劑主要應用于兩大方面其一是對空氣環(huán)境、設備設 施、服裝器具等物體表面的消毒；其二是醫(yī)療方面對皮膚、粘膜、傷口和創(chuàng)面等生物體表面 的消毒。消毒劑的使用應根據(jù)不同的消毒對象選擇不同的類型與濃度。在醫(yī)療方面，目前 醫(yī)院最常用消毒劑有紅汞、紫藥水、75%乙醇、碘伏、碘町、洗必泰等，對于外科手術(shù)創(chuàng)面或 創(chuàng)傷傷口的處理主要是先用大量的滅菌生理鹽水沖洗，然后用碘伏等消毒劑擦拭，最后包 扎或縫合傷口止血和防止污染。中藥不僅可以治療疾病，許多中藥在體外還具有較強的抗菌抗病毒作用，具有廣 泛的使用價值，但是中藥消毒劑的研究卻很少，而將消毒劑(特別是中藥消毒劑)與止血生 物酶結(jié)合，制備出一種在消毒的同時即可止血的消毒劑目前還沒見有報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供了一種止血消毒劑，通過將消毒劑與止血 生物酶結(jié)合，在消毒的同時達到止血作用，可廣泛地用于外科手術(shù)創(chuàng)面或創(chuàng)傷傷口的消毒 和止血。本發(fā)明還提供了該止血消毒劑的制備方法。本發(fā)明將適當濃度的消毒劑與止血生物酶結(jié)合，提供了一種低毒副作用且有止血 功能的消毒劑。在本發(fā)明中，根據(jù)具體情況加入適量的蛋白保護劑?，F(xiàn)有技術(shù)中的消毒劑大多數(shù) 通過菌體蛋白變性達到殺菌效果，如果簡單地將兩者結(jié)合，消毒劑會破壞止血生物酶的酶 活，降低或者失去止血效果。為了解決這個問題，本發(fā)明加入了適量的蛋白保護劑，確保酶 類不失活，起到止血效果。當止血生物酶濃度為0. lu/ml時，達到止血效果所需的時間較長，而當止血生物 酶濃度超過50u/ml時，盡管體外止血效果很好，但是高濃度的類凝血酶被組織吸收后會干 擾血液的凝固與溶解系統(tǒng)的平衡，同時造成使用成本提高。因此，根據(jù)止血時間長短、創(chuàng)面 大小、出血量多少以及生產(chǎn)成本等方面考慮，優(yōu)選止血生物酶的濃度為0. 1 50u/ml，更優(yōu) 選 1 20u/ml。本發(fā)明所述的消毒劑可以為化學消毒劑，也可以為中藥消毒劑。所述中藥消毒劑 為具有抗菌消炎作用的植物提取物或其主要活性成分。本發(fā)明中所采用的消毒劑濃度因消毒劑的種類不同而不同，本領域技術(shù)人員可以 根據(jù)所采用的具體消毒劑而確定能夠達到殺菌消毒效果的消毒劑濃度。因此，本發(fā)明中，所述適當濃度的消毒劑就是指能夠達到殺菌消毒效果的消毒劑濃度。S卩，在所述止血消毒劑的溶液中，包含濃度為0. 1 50u/ml的止血生物酶和具有 能夠達到殺菌消毒效果濃度的消毒劑。所述止血消毒劑的溶液優(yōu)選水溶液。例如，化學消毒劑的濃度范圍可以為0.01% (w/v或者ν/ν或者w/w)，中藥 消毒劑的濃度可以為10μ g/ml 500mg/ml。例如，所述化學消毒劑應作用快速、有效且對皮膚、粘膜無毒無刺激作用，例如，可 以為苯扎溴銨(新潔爾滅)、洗必泰、碘伏等，但不限于此?？紤]到本消毒劑主要用于皮膚 黏膜，特別是創(chuàng)面，故此處優(yōu)選刺激性小的碘伏，碘伏濃度可以為0. 05% 1. 0% (w/v或者 ν/ν 或者 w/w) O在本發(fā)明中，中藥消毒劑即是指具有抗菌消炎作用的植物提取物或其主要活性 成分，其應具有消炎、滅菌作用的提取物且對皮膚、粘膜無毒無刺激作用，例如，可以為魚 腥草素鈉、魚腥草提取液、新鮮大蒜提取物、金銀花提取物、馬齒莧提取物等，但不限于此。 考慮到殺菌效果、有效成分的測定方法以及成本問題，優(yōu)選魚腥草素鈉，濃度可以為50 400 μ g/ml。在本發(fā)明中，中藥消毒劑中的魚腥草素鈉微溶于水，為了增加溶解度，配制時加 入少量的助溶劑，例如甘油、tween-80等，例如在每100毫升水溶液中可加入0. 2_5ml的甘 油。所述止血生物酶為在體外具有止血功能的酶類，可以為凝血酶、類凝血酶或其它 酶類。類凝血酶可包括降纖酶、巴曲酶、立止血等，但不限于此。降纖酶的止血時間短，效果 較其它酶類好，考慮到制備的便利性和成本問題，這里優(yōu)選降纖酶，濃度可以為0. 1 50u/ ml，優(yōu)選降纖酶濃度為.1 20u/ml。本發(fā)明中，消毒劑中的酶類可為凍干產(chǎn)品或溶液，但是為了保持酶的生物活性以 及運輸和貯存的便利性，最好是凍干品，臨用時配制。凍干粉狀或水溶液止血生物酶制劑中一般都含有一定量的蛋白保護劑。例如，在 類凝血酶溶液中，通常包含0. 1 50mg/ml的蛋白保護劑；對于類凝血酶凍干產(chǎn)品，凍干 前的溶液中通常包含0. 1 50mg/ml的蛋白保護劑，類凝血酶和蛋白保護劑的比例優(yōu)選為 lOu/mg。因此，根據(jù)消毒劑對酶活影響大小，本發(fā)明中可以適當加入一定量的蛋白保護劑， 蛋白保護劑在本發(fā)明的止血消毒劑溶液中的濃度范圍優(yōu)選為1 100mg/ml。此處所述蛋白 保護劑為腦蛋白、精氨酸、賴氨酸、蔗糖、甘露醇等，但不限于此。加入精氨酸，酶活基本上不 降低，從成本上考慮比較適合，所以保護劑優(yōu)選精氨酸，其優(yōu)選濃度為5 15mg/ml，最優(yōu)選 10mg/mlo凝血酶是機體凝血系統(tǒng)中的天然成分，是一種生成于損傷處血管內(nèi)皮細胞的多功 能蛋白酶，它是參與凝血過程中各個環(huán)節(jié)反應中的關鍵酶，成品為白色無定形粉末，溶于 水，不溶于有機溶劑。類凝血酶大多數(shù)由蛇毒提取而來，蛇毒類凝血酶是一種具有精氨酸酯酶和酰胺酶 活性的絲氨酸蛋白酶，可在凝血過程中發(fā)揮重要作用，因其結(jié)構(gòu)和功能與人類凝血酶相似， 故稱“類凝血酶”。蛇毒類凝血酶與凝血酶具有相似的藥理作用，即他們都具有精氨酸酯酶 活性直接水解纖維蛋白原α鏈或β鏈，釋放血纖肽A或血纖肽B，并聚合成纖維蛋白多聚 體，促進血管破損處的血小板聚集，加速血小板止血栓的形成，起到止血作用。不同之處在 于，類凝血酶的凝血活性不受肝素、抗凝血酶III、水蛭素、大豆胰蛋白酶等抑制劑抑制。
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根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了所述止血消毒劑的制備方法，該制備方法 包括下述步驟配制止血消毒劑的溶液，其中，包含0. 1 50u/ml的止血生物酶、具有能夠 達到殺菌消毒效果濃度的消毒劑、以及濃度為1 100mg/ml的蛋白保護劑。該制劑最好臨 用時配制，即將單獨放置的止血生物酶和消毒劑相互混合，制成止血消毒劑；如果止血生物 酶和消毒劑均為固體，則可預先按比例混合在一起，用前加水溶解即成。由于止血生物酶產(chǎn) 品中通常已包含一定量的蛋白保護劑，因此，根據(jù)消毒劑對酶活影響大小，本發(fā)明可以選擇 不加入蛋白保護劑，也可適當加入一定量的蛋白保護劑。為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面通過對本發(fā)明中較佳實施方式的描述，詳細 說明但不限制本發(fā)明。
具體實施例方式本發(fā)明所用試驗材料，如無特別說明，均為市售產(chǎn)品。降纖酶為賽生藥業(yè)生產(chǎn)上市 的制劑或者其它廠家生產(chǎn)的市售產(chǎn)品。Ih血消毒劑的制備在下列實施例中使用的降纖酶本身含有l(wèi)mg/10U的精氨酸保護劑。實施例1魚腥草素鈉5mg、甘油0. 5ml，加水90ml溶解為A劑；降纖酶100單位(本 身含IOmg精氨酸)和精氨酸990mg為B劑。臨用前將A、B混合，加水定容至IOOml混勻， 即為含降纖酶lu/ml、魚腥草素鈉50μ g/ml的消毒溶液。實施例2魚腥草素鈉10mg、甘油1ml，加水90ml溶解為A劑；降纖酶5000單位(本 身含500mg精氨酸)和精氨酸500mg為B劑。臨用前將A、B混合，加水定容至IOOml混勻， 即為含降纖酶50u/ml、魚腥草素鈉100 μ g/ml的消毒溶液。實施例3魚腥草素鈉15mg、甘油1. 5ml，加水90ml溶解為A劑；降纖酶2000單位 (本身含200mg精氨酸)和精氨酸SOOmg為B劑。臨用前將A、B混合，加水定容至IOOml混 勻，即為含降纖酶20u/ml、魚腥草素鈉150 μ g/ml的消毒溶液。實施例4臨用前分別取魚腥草素鈉15mg，甘油2ml以及降纖酶2000單位(本身含 200mg精氨酸)和精氨酸800mg，加水定容至IOOml混勻。配制成含降纖酶20u/ml、魚腥草 素鈉150 μ g/ml的消毒溶液。實施例5魚腥草素鈉40mg、甘油4ml，加水90ml溶解為A劑；降纖酶100單位(本 身含精氨酸IOmg)和精氨酸990mg為B劑。臨用前將A、B混合，加水定容至IOOml混勻。 制成含降纖酶lu/ml、魚腥草素鈉400 μ g/ml的消毒溶液。實施例6魚腥草素鈉40mg，甘油4ml，加水90ml溶解為A劑；加入降纖酶5000單位 (本身含500mg精氨酸)和精氨酸500mg為B劑。臨用前將A、B混合，加水，定容至IOOml 混勻。配制成含降纖酶50u/ml、魚腥草素鈉400 μ g/ml的消毒溶液。實施例7魚腥草5Kg，洗凈，脫水干燥，粉碎；按照固液比為1 15加入水，90°C水 浴浸提3h，過濾；濾液中加入乙酸乙酯80°C萃取2h ；用95%乙醇除去多糖，過濾；濾液真空 濃縮干燥。取干燥提取物lOOmg，加入降纖酶5000單位(本身含精氨酸500mg)和精氨酸 500mg，加水定容至100ml混勻。配制成含降纖酶50u/ml、魚腥草提取物lmg/ml的消毒劑溶 液。實施例8魚腥草5Kg，洗凈，脫水干燥，粉碎；按照固液比為1 20加入水，90°C水浴浸提3h，過濾；濾液中加入乙酸乙酯80°C萃取2h ；用95%乙醇除去多糖，過濾；濾液真 空濃縮干燥。取500mg干燥提取物，加入降纖酶100單位(本身含精氨酸IOmg)和精氨酸 990mg，加水定容至IOOml混勻。配制成含降纖酶lu/ml、魚腥草提取物5mg/ml的消毒劑溶 液。實施例9魚腥草5Kg，洗凈，脫水干燥，粉碎；按照固液比為1 20加入水，90°C水 浴浸提2h，過濾；濾液中加入乙酸乙酯，80°C萃取2h，用95%乙醇除去多糖，過濾；濾液真空 濃縮干燥。取5g干燥提取物，加入降纖酶2000單位(本身含精氨酸200mg)和精氨酸800mg 混勻，加水定容至IOOml混勻。配制成含降纖酶20u/ml、魚腥草提取物50mg/ml的消毒劑溶液。實施例10新鮮馬齒莧Ikg洗凈，加水IOOOml急火煎開后，再用文火煎煮lOmin， 過濾，得濾出液約800ml。將濾出液濃縮至50ml左右，加入降纖酶1000u(本身含精氨酸 IOOmg)和精氨酸400mg，加水定容至IOOml混勻。配制成含降纖酶10u/ml的馬齒莧消毒溶液。實施例11稱取干燥的金銀花粉末lKg，加水煎煮3次，合并煎煮液；過濾，濾液冷 藏過夜；3500r/min離心25min ；取上清液于60°C減壓濃縮，向濃縮液中加入適量水，磁力攪 拌30min，冰箱過夜；過濾除去不溶性雜質(zhì)；濾液調(diào)pH值至5 7.；上大孔樹脂吸附柱。收 集洗脫液，濃縮至50ml左右，加入降纖酶IOOOu (本身含精氨酸IOOmg)和精氨酸400mg，加 水定容至IOOml混勻。配制成含降纖酶lOu/ml的金銀花消毒劑溶液。實施例12降纖酶2000u(內(nèi)含精氨酸200mg)和精氨酸800mg，用0. 05% 1. O% 的新潔爾滅溶液定容至IOOml混勻，配制成含降纖酶20u/ml的新潔爾滅消毒溶液。也可將 其單獨包裝，臨用前配制。止血消毒劑的消毒效果實施例13取實施例3制備的樣品進行消毒效果評價，具體如下1、菌懸液和菌片的制備取金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、銅綠假單胞菌(ATCC 15442)、白色念珠菌 (ATCC10231) 18 24h新鮮斜面培養(yǎng)物，用含有10g/L蛋白胨的0. 03mol/LPBS洗下并 稀釋至所需濃度，混勻，制成菌懸液。取20 μ 1上述菌懸液染于無菌的脫脂白平紋布片 (IOmmXlOmm)上，制成菌片。2、中和劑選擇試驗用金黃色葡萄球菌和白色念珠菌按照載體定量殺菌程序試驗。試驗進行6組平行 測試。結(jié)果判定按《消毒技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的標準執(zhí)行，試驗重復3次。結(jié)果如下表1中和劑鑒定試驗結(jié)果 中和劑選擇試驗結(jié)果證明，用含10g/L卵磷脂+10g/L吐溫80的PBS溶液作為中 和劑符合規(guī)定的標準。3、載體定量殺菌試驗配制不同濃度的消毒劑，按照1片菌片5ml消毒劑的用量分裝于平皿中，置 20士2°C水浴中至恒溫。分別加入試驗菌片，作用規(guī)定時間，將菌片移入裝有5ml中和劑的 試管中，中和作用lOmin，振打洗脫菌片上的細菌，混勻。取上述液體或其稀釋液0. 5ml接種 于平皿，并傾注各菌所需的瓊脂培養(yǎng)基，按各菌培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)，做活菌記數(shù)，計算殺滅 率。試驗重復3次取平均值。結(jié)果見表2。表2消毒劑對細菌的殺滅效果 4、穩(wěn)定性試驗結(jié)果將包裝好的消毒劑，置54°C恒溫箱內(nèi)14d后，取儲存前后的消毒劑進行殺菌試驗，用110mg/L的消毒劑作用5min，對布片上白色念珠菌的殺滅率由儲存前98. 93%下降到 98. 87%以上。與儲存前相比，其殺菌效果無明顯差異，說明其性能穩(wěn)定，符合技術(shù)規(guī)范要 求。采用由上述實施例1 12制備得到的止血消毒劑，按照實施例13的方法進行消 毒效果試驗，結(jié)果表明均具有較佳的殺菌效果。Ih血消毒劑的Ih血效果實施例14取實施例3制備的樣品進行止血效果評價，具體如下預試驗選用體重為1. 5士0. 25Kg的雌性新西蘭大白兔，參考文獻的方法制作兔 肝創(chuàng)傷出血模型，采用1. 5%戊巴比妥鈉，劑量為30mg/kg靜脈給藥進行麻醉。麻醉成功后， 逐層開腹，暴露肝臟，在距肝臟左葉下緣上2cm處切除部分肝組織，造成Icm2出血創(chuàng)面，應 用止血消毒劑和紗布進行止血，觀察并記錄止血時間和出血量等。確定止血效果后，預試驗 結(jié)束，逐層縫合傷口。試驗設計與分組選取24只新西蘭大白兔，隨機分為4組，每組6只。觀察指標1)出血時間分別在同樣大小的出血創(chuàng)面上噴灑不同濃度的止血消毒劑5ml，加蓋 紗布，用50g砝碼在紗布上加壓。每隔30s觀察1次出血情況至出血停止，記錄出血時間。2)出血量以精密電子天平預先稱重紗布和空稱量瓶，止血后將其放入稱量瓶密封 稱重，計算出血量。
,山旦 、 止血后重量(g) ~出血前重量(g)
出血量(ml) = -^―
血液比重(1.050g/ml)試驗結(jié)果表3結(jié)果表明，在出血創(chuàng)面上噴灑不同濃度的止血消毒劑降纖酶，其止 血時間和出血量均與對照組有顯著差異，并且隨著降纖酶濃度呈量效關系。20u/ml組既然 已經(jīng)具有非常明顯的止血效果，從安全性、實用性與經(jīng)濟性上考慮，優(yōu)選20u/ml的降纖酶 濃度較為合適。表3不同濃度消毒劑的止血時間和出血量
組別η止血時間(min)出血量(ml)對照64.38 士 0.782.62±0.59lu/ml62.48 士 0.45*0.82 士 0.3920u/ml60.81±0.28**0.37士0.4650u/ml60.28 士 0.37**0.29±0.42與對照組比較，*P< 0. 05 ；**P < 0. 01采用上述實施例制備得到的止血消毒劑，按照實施例14的方法進行止血效果試 驗，結(jié)果表明均具有較佳的止血效果。Ih血消毒劑的穩(wěn)定件實施例15取實施例3制備的樣品進行穩(wěn)定性加速試驗，取包裝好的消毒劑置37°C
8恒溫箱內(nèi)3個月，測定魚腥草素鈉的含量和降纖酶的活性。測定結(jié)果表明，魚腥草素鈉含量 為加速試驗前的98. 3%，降纖酶的活性為加速試驗前的97. 7%，均無明顯變化。采用上述實施例制備得到的止血消毒劑，按照實施例15的方法進行穩(wěn)定性加速 試驗，結(jié)果表明本發(fā)明的止血消毒劑是穩(wěn)定的。以上對本發(fā)明較佳實施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領域技術(shù)人員可以根據(jù)本 發(fā)明作出多種改變或組合，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。
權(quán)利要求
一種止血消毒劑，其特征在于，在所述止血消毒劑溶液中，包含具有局部快速止血作用的止血生物酶、具有能夠達到殺菌消毒效果的濃度的消毒劑、以及蛋白保護劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的止血消毒劑，其特征在于，所述消毒劑成分為化學消毒劑，所 述化學消毒劑的濃度為0. 01% 1%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的止血消毒劑，其特征在于，所述消毒劑成分為中藥消毒劑，所 述中藥消毒劑的濃度為10μ g/ml 500mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的止血消毒劑，其特征在于，所述止血生物酶為選自類凝血酶 和凝血酶的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的止血消毒劑，其特征在于，所述化學消毒劑為選自苯扎溴 銨、洗必泰、碘伏的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、5之一所述的止血消毒劑，其特征在于，所述化學消毒劑為碘伏。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的止血消毒劑，其特征在于，所述中藥消毒劑選自魚腥草素 鈉、魚腥草提取物、新鮮大蒜提取物、金銀花提取物、以及馬齒莧提取物的一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的止血消毒劑，其特征在于，所述中藥消毒劑為魚腥草素 鈉、魚腥草提取物或者金銀花提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的止血消毒劑，其特征在于，所述的類凝血酶為選自降纖 酶、巴曲酶、立止血的至少一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9之一所述的止血消毒劑，其特征在于，所述的類凝血酶為降纖酶。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的止血消毒劑，其特征在于，所述蛋白保護劑為選自腦蛋白、 精氨酸、賴氨酸、蔗糖、以及甘露醇的一種或多種。
12.—種制備權(quán)利要求1 11所述的止血消毒劑的方法，其特征在于，所述制備方法 包括下述步驟配制所述止血消毒劑溶液，其中，包含0. 1 50u/ml的止血生物酶、0. 01 的消毒劑、以及1 100mg/ml的蛋白保護劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種止血消毒劑，在止血消毒劑的溶液中，包含濃度為0.1～50u/ml的止血生物酶、具有能夠達到殺菌消毒效果的濃度的消毒劑、以及濃度為1～100mg/ml的蛋白保護劑。該止血消毒劑更適用于外科手術(shù)中皮膚、粘膜、或組織的創(chuàng)面清洗消毒以及外傷傷口的止血和消毒。本發(fā)明還提供了該止血消毒劑的制備方法，所述制備方法包括下述步驟配制止血消毒劑的溶液，其中，包含0.1～50u/ml的止血生物酶、具有能夠達到殺菌消毒效果的濃度的消毒劑、以及濃度為1～100mg/ml的蛋白保護劑。
文檔編號A61P17/02GK101926999SQ20091008742
公開日2010年12月29日 申請日期2009年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月22日
發(fā)明者喻贊偉, 孔雙泉, 欒美麗, 溫東焱, 馬骉 申請人:北京賽生藥業(yè)有限公司