專利名稱：一種治療婦科功血疾病的中藥組合物、其制備方法以及其膠囊劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體地說，涉及一種治療婦科功血疾病的中藥組合物 及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
崩漏是指月經(jīng)周期、經(jīng)期、經(jīng)量出現(xiàn)嚴(yán)重紊亂，經(jīng)血非時(shí)暴下或淋漓不盡者，是婦 科的多發(fā)病和疑難病。有人統(tǒng)計(jì)以崩漏而就診者約占婦科門診的1/3，本病相當(dāng)于西醫(yī)之功 能性子宮出血，而與無排卵型功血尤其相似。功能失調(diào)性子宮出血是由于神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能失調(diào)所引起的異常子宮出血，簡 稱“功血”，是婦產(chǎn)科常見病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)本病50%發(fā)生于更年期，30%發(fā)生于生育期，20% 發(fā)生于青春期。由于功血的發(fā)病機(jī)制不同，臨床上將功血分為無排卵型功血和排卵型功血 兩大類。無排卵型功血最常見，約占80%左右，多發(fā)生于青春期和更年期，臨床表現(xiàn)為月經(jīng) 失去周期性，出現(xiàn)不規(guī)則子宮出血。排卵型功血多發(fā)生于生育期女性，可分為排卵型月經(jīng) 過多、黃體功能不健、黃體萎縮不全及月經(jīng)中期出血幾種類型。其特點(diǎn)是排卵功能正常，月 經(jīng)尚有周期性，但月經(jīng)的周期、經(jīng)期、經(jīng)量發(fā)生異常改變。功血應(yīng)排除內(nèi)、外生殖器器質(zhì)性病 變、全身出血性疾病及妊娠所導(dǎo)致的異常子宮出血。關(guān)于無排卵型功血的治療西醫(yī)多以激素療法，止血藥物為主，如效果不好，可進(jìn)一 步采取手術(shù)刮宮甚至子宮摘除術(shù)，給病人造成了極大的痛苦。而中醫(yī)藥通過數(shù)千年的臨床 實(shí)踐，對本病的治療積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，創(chuàng)制了許多療效確切的方劑。作為治療婦科疾病如功能失調(diào)性子宮出血的良藥，本發(fā)明膠囊劑已經(jīng)由申請人申 請多項(xiàng)產(chǎn)品及方法專利并投入工業(yè)生產(chǎn)多年，推廣于市場，療效確切。隨著中藥技術(shù)的發(fā)展，提高藥效并且提高生產(chǎn)效率，提高藥品質(zhì)量的可控性，降低 成本是申請人要解決的一大難題。經(jīng)過長期理論研究和工業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐，申請人找到了最佳制備用量和制備方案以及 鑒別、含量測定等質(zhì)量控制方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療婦科功血疾病的中藥組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述中藥組合物的制備方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述中藥組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明提供的治療婦科功血疾病的中藥組合物，由如下重量份的原料組成赤芍 900-1100份、益母草900-1100份、三七200-400份、仙鶴草900-1100份、地榆炭500-700 份、蒲黃炭500-700份。優(yōu)選地，由如下重量份的原料組成赤芍1000份、益母草1000份、三七300份、仙 鶴草1000份、地榆炭600份、蒲黃炭600份。
上述中藥組合物可以通過添加適當(dāng)?shù)妮o料，制備成膠囊、片劑、顆粒劑、丸劑、軟膠囊劑。上述中藥組合物的制備方法，包括如下步驟1、按重量份稱取赤芍、益母草、三七、仙鶴草、地榆炭、蒲黃炭，備用；2、取赤芍、三七粉碎成粗粉，加4-8倍量80%乙醇，回流提取1_3次，每次lh_3h， 合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時(shí)相對密度1.05-1. 10的清膏，離心，濃縮至60°C 時(shí)相對密度1. 15-1. 20的稠膏，備用；3、取益母草等其余四味，加水煎煮1-3次，每次加8-12倍量的水，煎煮0. 5h_l. 5h， 合并水煎液，濾過，濾液濃縮至60°C時(shí)相對密度1. 15-1.20的稠膏，加乙醇制成含醇量為 70%的溶液，靜置16h-32h，取上清液，并濃縮至60°C時(shí)相對密度1. 15-1. 20的稠膏，與上述 赤芍等浸膏合并，制成各種劑型。此外，本發(fā)明還提供了上述制得的中藥組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法，該方法包 括鑒別和含量測定兩部分，其中鑒別包括采用薄層色譜法，分別用赤芍對照藥材、芍藥苷對 照品、三七對照藥材、仙鶴草對照藥材、益母草對照藥材和鹽酸水蘇堿對照品進(jìn)行的鑒別； 含量測定以含赤芍確定，以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于12. Omg/粒，膠囊粒重為0. 35g/ 粒-0. 45g/ 粒。其中，鑒別方法包括以下鑒別中的一種或多種A、赤芍的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0. 5g-l. 5g，加水12ml-38ml，超聲處理 15min-45min，濾過，濾液加水飽和的正丁醇溶液提取1_5次，每次10ml-30ml，合并提取液， 加氨試液20ml-60ml洗滌，棄去洗液，蒸干，加lml_3ml甲醇溶解殘?jiān)?，作為供試品溶液；取赤芍對照藥材lg_3g，加甲醇15ml-45ml，超聲處理0. 5h_l. 5h，濾過，濾液蒸干， 殘?jiān)铀?2ml-38ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法提取制成對照藥材溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成濃度為lmg/ml-3mg/ml的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各4μ1，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸為 30-50 2-8 5-15 0. 1-0. 3的混合液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以5%香草醛 硫酸甲醇溶液，在95°C-115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和 對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、三七的鑒別以A的供試品溶液作為供試品溶液；取三七對照藥材0. 5g-l. 5g，加水5d-15d，攪勻，加水飽和的正丁醇溶液 20ml-60ml，超聲處理20min_60min，濾過，濾液加氨試液20ml_60ml洗滌，棄去氨液，加入正 丁醇飽和的水溶液20ml-60ml洗滌，棄去正丁醇水溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解，作 為對照藥材溶液；取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成各濃度均為0. 5mg/ ml-1. 5mg/ml的混合溶液作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各2 μ 1，以在10°C以下放置過夜的三氯甲烷甲醇水為 10-16 4-10 1-3的混合液的下層溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以10%硫酸 乙醇溶液，在95°C-115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照 品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置365nm波長的紫外光燈下檢視，顯相同顏色的 熒光斑點(diǎn)；
C、仙鶴草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0. 5g-l. 5g，加0. 2% _0. 8%氫氧化鈉溶液 15ml-45ml，超聲處理10min-30min，濾過，濾液加鹽酸調(diào)pH值至2_3，濾過，濾液加乙酸乙酯 提取1-3次，每次10ml-30ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解，作為供試品溶 液；取仙鶴草對照藥材4g_12g，加水25ml_75ml，煎煮0. 5h_l. 5h，濾過，濾液蒸干，殘 渣加0. 2% -0. 8%氫氧化鈉溶液15ml-45ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法提 取制成對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各15 μ 1，以水飽和的甲苯乙酸乙酯甲酸為 4-8 2-4 0.5-1.5的混合溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以0.5%-1.5%三氯 化鐵乙醇溶液顯色，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；D、益母草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.9g-1.5g，加乙醇22ml-38ml，加熱回流 0. 5h-l. 5h，放冷，濾過，濾液濃縮至2. 5ml-7. 5ml，加于內(nèi)徑5mm-15mm、活性炭0. 3g_0. 7g、 100目-120目中性氧化鋁lg_3g的活性炭-氧化鋁柱上，用15ml-45ml乙醇洗脫，收集洗脫 液，蒸干，殘?jiān)?. 2ml-0. 8ml乙醇溶解，作為供試品溶液；取益母草對照藥材1. 5g-4. 5g，與供試品溶液同法制成對照藥材溶液；取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成濃度為2. 5mg/ml-7. 5m/mlg的溶液，作為對照 品溶液；吸取上述三種溶液各10 μ 1，以正丁醇鹽酸水為3-5 0. 5-1. 5 0. 2-0. 8的 混合溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色，供試品色譜中，在與 對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。稀碘化鉍鉀試液參照《中國藥典2005年版二部附錄XVB試液》取次硝酸鉍0. 85g， 加冰醋酸IOml與水40ml溶解后，即得。臨用前取5ml，加碘化鉀溶液(取碘化鉀溶液4ml 加水至10ml，混勻)5ml，再加冰醋酸20ml，加水稀釋至100ml，即得。碘化鉀溶液參照《中國藥典2005年版二部附錄XVB試液》取碘化鉀16. 5g，加水 使溶解成100ml，即得。本液應(yīng)臨用新制。其優(yōu)選的鑒別方法包括以下鑒別中的一種或多種A、赤芍的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物lg，加水25ml，超聲處理30min，濾過，濾液加水 飽和的正丁醇溶液提取3次，每次20ml，合并提取液，加氨試液40ml洗滌，棄去洗液，蒸干， 加2ml甲醇溶解殘?jiān)?，作為供試品溶液；取赤芍對照藥?g，加甲醇30ml，超聲處理lh，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml，溫 熱使溶解，濾過，濾液與供試品溶液同法提取制成對照藥材溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成濃度為2mg/ml的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各4μ1，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸為 40 5 10 0.2的混合液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以5%香草醛硫酸甲醇溶 液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、三七的鑒別以A的供試品溶液作為供試品溶液；取三七對照藥材lg，加水10d，攪勻，加水飽和的正丁醇溶液40ml，超聲處理 40min,濾過，濾液加氨試液40ml洗滌，棄去氨液，加入正丁醇飽和的水溶液40ml洗滌，棄去正丁醇水溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為對照藥材溶液；取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成各濃度均為lmg/ml的混 合溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各2 μ 1，以在10°C以下放置過夜的三氯甲烷甲醇水為 13 7 2的混合液的下層溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以10%硫酸乙醇溶液， 在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置365nm波長的紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；C、仙鶴草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物化，加0. 5%氫氧化鈉溶液30ml，超聲處理 20min,濾過，濾液加鹽酸調(diào)pH值至2_3，濾過，濾液加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并提 取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；取仙鶴草對照藥材8g，加水50ml，煎煮lh，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?. 5%氫氧化鈉 溶液30ml，溫?zé)崾谷芙猓瑸V過，濾液與供試品溶液同法提取制成對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各15 μ 1，以水飽和的甲苯乙酸乙酯甲酸為6 3 1的混 合溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以三氯化鐵乙醇溶液顯色，供試品色譜中，在 與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；D、益母草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物1.2g，加乙醇30ml，加熱回流lh，放冷，濾過， 濾液濃縮至5ml，加于內(nèi)徑10mm、活性炭0. 5g、100目-120目中性氧化鋁2g的活性炭-氧 化鋁柱上，用30ml乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙醇溶解，作為供試品溶液；取益母草對照藥材3g，與供試品溶液同法制成對照藥材溶液；取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成濃度為5mg/ml的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各10 μ 1，以正丁醇鹽酸水為4 1 0. 5的混合溶液為展 開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色，供試品色譜中，在與對照藥材色譜 和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法還包括以下含量測定1、精密稱取芍藥苷對照品10mg，W 50%甲醇制成濃度為0. lmg/ml的溶液，作為對 照品溶液；2、取所述膠囊內(nèi)容物0. lg，精密稱定，置具塞的三角燒瓶中，精密加入50%甲醇 50ml，稱定重量，冷浸過夜后，超聲處理30分鐘，再稱重，用50 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖 勻，0. 45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；3、精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，照高效液相色譜 法進(jìn)行測定，色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0. 05mol/L的磷酸二氫鉀 溶液甲醇為70 30的混合液為流動(dòng)相；檢測波長為230nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng) 不低于2500。本發(fā)明中藥組成物的處方中，赤芍，苦、微寒，歸肝經(jīng)，功能清熱涼血，善治血熱妄 行之出血癥。同時(shí)又有祛瘀止痛之功效，可治療婦女血脈瘀阻所致之崩漏腹痛等癥，用為君 藥。益母草，辛、苦，微寒。歸心、肝、膀胱經(jīng)。不僅能清熱解毒涼血，而且性善走散，能 活血祛瘀而止痛，為婦人經(jīng)產(chǎn)要藥。如《本草求真》云“行血，祛瘀生新，調(diào)經(jīng)解毒，為胎前 產(chǎn)后要?jiǎng)薄Ｈ?，甘、微苦，溫。歸肝，胃經(jīng)。能入血分，功善止血，又能化瘀生新，具有止血而留瘀之特長，對體內(nèi)外各種出血而兼有瘀滯者，尤為適宜。同時(shí)又有化瘀定痛之功，不僅 能治療各種外傷性瘀滯腫痛，而且對瘀血阻滯之腹痛亦有良效。二者共助君藥以增強(qiáng)其化 瘀之功，并協(xié)同發(fā)揮止血之效，用為臣藥。仙鶴草，苦、澀，平。歸肺、肝、脾經(jīng)。其藥性平和，入血分以收斂止血為其特長，臨 床上廣泛用于各種出血證，而尤以治療崩漏下血等下焦出血癥見長。地榆炭，苦、酸，微寒。 歸肝、胃、大腸經(jīng)。善入血分，有涼血泄熱，收斂止血之功，可用于多種出血證。由于本品性 沉降而走下焦，故對下焦血熱之疾效果更佳。如《太平圣惠方·卷第七十三·治婦人漏下 五色諸方》以地榆同醋煎服，治婦人漏下赤色不止。蒲黃炭，甘、平。歸肝、心包經(jīng)。功能專 擅收澀止血，用于崩漏不止。如《圣濟(jì)總錄·卷第一百五十二 ·經(jīng)血暴下》蒲黃丸，以之合 龍骨，艾葉同用，治婦人月經(jīng)過多，漏下不止?！秱浼鼻Ы鹨?卷四 赤白帶下崩中漏下第 三》蒲黃散，以之與鹿茸，當(dāng)歸二味補(bǔ)益肝腎、調(diào)理沖任之品同用，以治肝腎沖任虧損漏下不 止者。三者共助臣藥三七，以增強(qiáng)止血調(diào)經(jīng)之功，用為佐藥。諸藥合用，使血熱得涼，瘀血得散，出血得止，經(jīng)歸正常。本發(fā)明提供的治療婦科功血疾病的中藥組合物、其制備方法以及其膠囊劑的質(zhì)量 控制方法，具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明的中藥組合物具有療效更確切，止血速度更快等優(yōu)點(diǎn)。2、本發(fā)明制備方法將赤芍、三七用乙醇提取后采用了離心的制備方法，可以去除 不溶于乙醇的物質(zhì)和機(jī)械雜質(zhì)，使中藥組合物純度更高。3、本發(fā)明質(zhì)量控制方法中的鑒別方法用赤芍、三七、仙鶴草、益母草對照藥材和芍 藥苷、鹽酸水蘇堿對照品來做對照，直接比較斑點(diǎn)大小和位置，使操作更加簡便，直觀；含量 測定方法用芍藥苷對照品作檢測，使質(zhì)量更有保障，藥效更為確切。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。實(shí)施例1本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物膠囊劑的制備(1)稱取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鶴草1000g、地榆炭600g、蒲黃炭 600g，備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80 %乙醇，回流提取二次，第一次2h，第 二次lh，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對密度1.05-1. 10(60°C )的清膏，離心 (3000轉(zhuǎn)/分，5分鐘)，濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏，備用。(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮lh，合并水煎 液，濾過，濾液濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏，加乙醇制成含醇量為70%的溶 液，靜置24h，取上清液回收乙醇，并濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏，與上述赤 芍、三七浸膏合并，加34g淀粉，混勻，真空干燥制粒，加4g微粉硅膠，混勻，裝膠囊，制成 1000粒，粒重約為0. 4g/粒。實(shí)施例2本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物片劑的制備方法(1)稱取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鶴草1000g、地榆炭600g、蒲黃炭 600g，備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80 %乙醇，回流提取二次，第一次2h，第二次lh，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對密度1.05-1. 10(60°C )的清膏，離心 (3000轉(zhuǎn)/分，5分鐘)，濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏，備用。(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮lh，合并水煎 液，濾過，濾液濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏，加乙醇制成含醇量為70%的溶 液，靜置24h，取上清液回收乙醇，并濃縮至相對密度1. 15-1.20(60°C)的稠膏，取二分之一 的赤芍、三七浸膏合并，混勻，干燥成干膏粉，加入糊精30g，以余下的赤芍、三七清膏為粘合 劑，混勻，制粒，干燥，壓片，噴以320g包衣液，制得每片重約0. 38g的薄膜包衣片1000片。實(shí)施例3本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物顆粒劑的制備方法(1)稱取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鶴草1000g、地榆炭600g、蒲黃炭 600g，備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80 %乙醇，回流提取二次，第一次2h，第 二次lh，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對密度1.05-1. 10(60°C )的清膏，離心 (3000轉(zhuǎn)/分，5分鐘)，濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏，備用。(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮lh，合并水煎 液，濾過，濾液濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏，加乙醇制成含醇量為70%的溶 液，靜置24h，取上清液回收乙醇，并濃縮至相對密度1. 15-1.20(60°C)的稠膏，取二分之一 的赤芍、三七浸膏合并，混勻，干燥成干膏粉，加入糊精35g，以余下的赤芍、三七清膏為粘合 劑，混勻，制成顆粒，干燥，即得。實(shí)施例4本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物丸劑的制備方法(1)稱取赤芍900g、益母草900g、三七400g、仙鶴草900g、地榆炭700g、蒲黃炭 700g，備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加4倍量80 %乙醇，回流提取二次，第一次2h，第 二次lh，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對密度1.05-1. 10(60°C )的清膏，離心 (3000轉(zhuǎn)/分，5分鐘)，濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏，備用。(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮lh，合并水煎 液，濾過，濾液濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏，加乙醇制成含醇量為70%的溶 液，靜置24h，取上清液回收乙醇，并濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏，取二分之 一的赤芍、三七浸膏合并，混合，濃縮至80°C相對密度1.20的清膏，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入 150g乳糖、35g微晶纖維素、15g羧甲基淀粉鈉，混勻，以余下的赤芍、三七清膏為粘合劑制 軟材，煉丸，制丸，60°C條件下干燥14小時(shí)，拋光、干燥，即得成品。實(shí)施例5本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物軟膠囊劑的制備方法(1)稱取赤芍1100g、益母草1100g、三七200g、仙鶴草1100g、地榆炭500g、蒲黃炭 500g，備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80 %乙醇，回流提取二次，第一次2h，第 二次lh，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對密度1.05-1. 10(60°C )的清膏，離心 (3000轉(zhuǎn)/分，5分鐘)，濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏，備用。(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮lh，合并水煎 液，濾過，濾液濃縮至相對密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏，加乙醇制成含醇量為70%的溶 液，靜置24h，取上清液回收乙醇，并濃縮至相對密度1. 15-1.20(60°C)的稠膏，取二分之一的赤芍、三七浸膏合并，混合，濃縮至80°C相對密度為1. 20的清膏，混合，濃縮至70°C相對 密度為1. 22的清膏，干燥，粉碎成100目的細(xì)粉，細(xì)粉加入橄欖油520克，蜂蠟18克，以膠體 磨混合30分鐘，得混合物備用；將明膠、甘油、水以10 3 10的配比配制成明膠液240g， 與前述混合物用自動(dòng)旋轉(zhuǎn)軋囊機(jī)壓制成0. 6g/粒的軟膠囊，在溫度20°C、相對濕度52%的 條件下干燥24小時(shí)，取出，選丸，用乙醇洗滌，在上述條件下干燥48小時(shí)，即得軟膠囊劑。實(shí)施例6本發(fā)明中藥組合物膠囊劑的鑒別方法本發(fā)明中藥組合物膠囊劑的鑒別方法包括如下方法中的一種或多中A、赤芍的鑒別取實(shí)施例1膠囊劑內(nèi)容物lg，加水25ml，超聲處理30分鐘，濾過， 濾液加水飽和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，加氨試液40ml洗滌，棄去洗液， 正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液。取赤芍對照藥材2g，加甲醇30ml，超聲處理1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?25ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法提取制成對照藥材溶液。取芍藥苷對照品，加甲醇制成濃度為2mg/ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種 溶液各4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (40 5 10 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸甲醇溶液，105°C加 熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的斑點(diǎn)；B、三七的鑒別取A的供試品溶液作為供試品溶液。取三七對照藥材lg，加水10滴，攪勻，加水飽和的正丁醇40ml，超聲處理40分鐘， 濾過，濾液加氨試液40ml洗滌，棄去氨液，再加正丁醇飽和的水40ml洗滌，棄去水液，正丁 醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為對照藥材溶液。取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成各濃度均為lmg/ml的混 合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各 2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13 7 2)10°C以下放置過 夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色 清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 置紫外光燈(365nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。C、仙鶴草的鑒別取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物lg，加0. 5%氫氧化 鈉溶液30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2_3，濾過，濾液加乙酸乙酯 提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液。取仙鶴草對照藥材8g，加水50ml，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?. 5%氫氧 化鈉溶液30ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法提取制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各 15μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯(用水飽和)-乙酸乙酯-甲酸(6 3 1) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。D、益母草的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物1. 2g，加乙醇30ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，濾液濃縮至約5ml，加于活性炭_氧化鋁柱上(活性炭_氧化鋁柱為活性炭 0. 5g/100-120目中性氧化鋁2g，內(nèi)徑IOmm)，用乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)右?醇0. 5ml使溶解，作為供試品溶液。取益母草對照藥材3g，與供試品溶液同法制成對照藥材溶液。取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成濃度5mg/ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各 10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-鹽酸-水(4 1 0.5)為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例7本發(fā)明中藥組合物膠囊劑的鑒別方法Α、赤芍的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物0. 5g，加水12ml，超聲處理15分鐘，濾 過，濾液加水飽和的正丁醇提取1次，每次IOml，合并正丁醇液，加氨試液20ml洗滌，棄去洗 液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。取赤芍對照藥材lg，加甲醇15ml，超聲處理0. 5小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?12ml，溫?zé)崛芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法制成對照藥材溶液。取芍藥苷對照品，加甲醇制成濃度lmg/ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種 溶液各4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (30 8 5 0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸甲醇溶液，95°C加熱 至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的斑點(diǎn)；B、三七的鑒別取A的供試品溶液作為供試品溶液。取三七對照藥材0. 5g，加水5滴，攪勻，加水飽和的正丁醇20ml，超聲處理20分 鐘，濾過，濾液加氨試液20ml洗滌，棄去氨液，再加正丁醇飽和的水20ml洗滌，棄去水液，正 丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml溶解，作為對照藥材溶液。取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成各濃度均為0. 5mg/ml的 混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各 2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10 10 1)10°C以下放置 過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，95°C加熱至斑點(diǎn)顯色 清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 置紫外光燈(365nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。C、仙鶴草的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物0.5g，加0.2%氫氧化鈉溶15ml， 超聲處理10分鐘，濾過，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，濾過，濾液加乙酸乙酯提取1次，每次 10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。取仙鶴草對照藥材4g，加水25ml，煎煮0. 5小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?. 2%氫 氧化鈉溶液15ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各 15μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯(用水飽和)-乙酸乙酯-甲酸(4 4 0.5)
11為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；D、益母草的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物0.9g，加乙醇22ml，加熱回流0.5小 時(shí)，放冷，濾過，濾液濃縮至約2. 5ml，加于活性炭_氧化鋁柱上(活性炭_氧化鋁柱為活性 炭0. 3g/100-120目中性氧化鋁lg，內(nèi)徑5mm)，用乙醇15ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?乙醇0. 2ml使溶解，作為供試品溶液。取益母草對照藥材1. 5g，與供試品溶液同法制成對照藥材溶液；再取鹽酸水蘇堿 對照品，加乙醇制成2. 5mg/ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各 10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-鹽酸-水(3 1.5 0.2)為展開劑，展 開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例8本發(fā)明藥物膠囊劑的鑒別方法Α、赤芍的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物1. 5g，加水38ml，超聲處理45分鐘，濾 過，濾液加水飽和的正丁醇提取5次，每次30ml，合并正丁醇液，加氨試液60洗滌，棄去水 液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取赤芍對照藥材3g，加甲醇45ml，超聲處理1. 5小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?38ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法提取制成對照藥材溶液。取芍藥苷對照品，加甲醇制成3mg/ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中 國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(50 2 15 0. 1)為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以5%香草醛硫酸甲醇溶液，115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照 藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、三七的鑒別取上述的供試品溶液作為供試品溶液；另取三七對照藥材1. 5g， 加水15滴，攪勻，加水飽和的正丁醇60ml，超聲處理60分鐘，濾過，濾液加氨試液60ml洗 滌，棄去氨液，再加正丁醇飽和的水60ml洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使 溶解，作為對照藥材溶液；再取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成每Iml 各含1. 5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-7Κ (16 4 3)10°C以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇 溶液，115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈(365nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；C、仙鶴草的鑒別取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物1. 5g，加0. 8%氫氧 化鈉溶液45ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3，濾過，濾液加乙酸乙酯 提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另 取仙鶴草對照藥材12g，加水75ml，煎煮1. 5小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?. 8%氫氧化鈉溶 液45ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各15 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯 (用水飽和)_乙酸乙酯-甲酸(8 2 1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1.5%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；D、益母草的鑒別取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物1. 5g，加乙醇38ml， 加熱回流1. 5小時(shí)，放冷，濾過，濾液濃縮至約7. 5ml，加于活性炭-氧化鋁柱上，活性炭-氧 化鋁柱為活性炭0. 7g/中性氧化鋁100-120目，3g，內(nèi)徑15mm，用乙醇45ml洗脫，收集洗脫 液，蒸干，殘?jiān)右掖?. 8ml使溶解，作為供試品溶液。另取益母草對照藥材4. 5g，同法制成 對照藥材溶液；再取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每Iml含7. 5mg的溶液，作為對照品溶 液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μ 1， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-鹽酸-水(5 0.5 0.8)為展開劑，展開，取 出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位 置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例9本發(fā)明藥物膠囊劑的含量測定方法Α、精密稱取芍藥苷對照品IOmgJn 50%甲醇制成濃度0. lmg/ml的溶液，作為對照 品溶液；B、取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物0. lg，精密稱定，置具塞的三角燒 瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，冷浸過夜后，超聲處理30分鐘(功率200W，頻率 40KHz)，再稱重，用50 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0. 45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試 品溶液；C、照高效液相色譜法進(jìn)行測定，色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 以0. 05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇(70 30)為流動(dòng)相；檢測波長為230nm。理論板數(shù)按 芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相 色譜儀，測得供試品溶液和對照品溶液的峰面積分別為2059025和2432109，按公式“芍藥 苷含量=樣品峰面積X對照品濃度Χ50Χ平均粒重/(對照品峰面積X樣品重量)”計(jì) 算，即得芍藥苷含量為14. 58mg/粒，大于12. Omg/粒。實(shí)驗(yàn)例1實(shí)驗(yàn)條件 動(dòng)物清潔級ICR小白鼠。藥物本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊劑0. 4g/粒，每Ig膠囊內(nèi)容物含生藥11. 25g ；公開 號為CN1435243A的專利制得的膠囊劑0. 4g/粒，每Ig膠囊內(nèi)容物含生藥11. 25g ；均由湖 南株洲千金藥業(yè)股份有限公司提供。實(shí)驗(yàn)室溫度20°C -25°C，相對濕度42% -76%。實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果一、對小白鼠凝血時(shí)間的影響小白鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組10只。第一組為陰性對照組，給與等容積生理鹽 水；第二組為公開號為CN1435243A的專利制得的膠囊劑組，給與公開號為CN1435243A的專 利制得的膠囊劑0. 4g/kg ；第三組為本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊劑組，給與本發(fā)明膠囊劑11. 25g 生藥/kg。各組皆灌胃給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續(xù)3天。末次給藥60min后小鼠眼球 采血，用玻片法測定小鼠凝血時(shí)間。結(jié)果見表1。表1本發(fā)明膠囊對小鼠凝血時(shí)間的影響(X士S) 與陰性對照組比較，*P< 0.05由表1可見，本發(fā)明膠囊劑可縮短小鼠凝血時(shí)間，與陰性對照組比較，有顯著性差 異(P < 0. 05)，說明本發(fā)明膠囊劑對小鼠有促凝血作用，且較第二組促凝血效果更優(yōu)。二、對小白鼠出血時(shí)間的影響小白鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組10只。第一組為陰性對照組，給與等容積生理 鹽水第二組為公開號為CN1435243A的專利制得的膠囊劑組，給與公開號為CN1435243A的 專利制得的膠囊劑0. 4g/kg ；第三組為本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊劑組，給本發(fā)明膠囊劑11. 25g 生藥/kg。各組皆灌胃給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續(xù)3天。末次給藥60min后，距尾尖 1/3處剪斷鼠尾，測定出血時(shí)間。結(jié)果見表2。表2本發(fā)明膠囊對小鼠出血時(shí)間的影響(X士S)
組別動(dòng)物數(shù)(只)劑量(B/kg)出血時(shí)間(min)第一組1022. 37±5. 03第二組100. 4019. 68±9. 58第三組1011. 2515. 74±3. 39**與陰性對照組比較，#P< 0.01由表2可見，本發(fā)明膠囊可縮短小鼠出血時(shí)間，與陰性對照組比較，有顯著性差異 (P < 0.01)。說明本發(fā)明膠囊可縮短小鼠出血時(shí)間，而第二組膠囊對小鼠出血時(shí)間無明顯影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)論本發(fā)明膠囊與公開號為CN1435243A的專利制得的膠囊劑相比較，可以縮短小鼠 的出血時(shí)間，具有凝血更快，藥效更確切等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)例2實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)室溫度20°C -25°C，相對濕度42% -76%。一、對家兔血小板聚集功能的影響家兔40只，隨機(jī)分為5組，每組8只。第一組為陰性對照組，給與等容積生理鹽水； 第二組為陽性對照組，給宮血寧膠囊(云南白藥股份有限公司生產(chǎn))0. 15g/Kg;第三、四、五 組為本發(fā)明膠囊組，分別給與本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊組2. Ig生藥/kg、4. 2g生藥/kg、8. 4g 生藥/kg。各組皆灌胃給藥，5ml/kg，每天1次，連續(xù)7天。末次給藥60min后耳緣靜脈采血，用裝有A溶液(由0.077mol/LEDTA 3ml、4%甲醛溶液5ml、濃磷酸鹽緩沖液2ml、蒸餾水 12ml組成)或B溶液(由0. 077mol/LEDTA 3ml、濃磷酸鹽緩沖液5ml、蒸餾水12ml組成) 的注射器分別采血0. 5ml，充分混勻，室溫靜置15min，150g離心8min，取上清血漿計(jì)數(shù)血小 板，按下式計(jì)算循環(huán)血小板聚集率，結(jié)果見表3。
A溶液中血小板數(shù)
循環(huán)血小板聚集率(％) =1--χ 100
B溶液中血小板數(shù)
表3本發(fā)明膠囊對家兔循環(huán)血小板聚集率的影響(X士s) 與陰性對照組比較，*P < 0. 05，**P < 0. 01由表3可見，本發(fā)明膠囊可升高家兔循環(huán)血小板聚集率，與陰性對照組比較，大劑 量組有顯著性差異(P < 0. 05)，說明本發(fā)明膠囊可輕度促進(jìn)循環(huán)血小板聚集，陽性對照藥 宮血寧膠囊亦可升高家兔循環(huán)血小板聚集率。二、對家兔纖溶系統(tǒng)功能的影響家兔40只，隨機(jī)分為5組，每組8只。第一組為陰性對照組，給與等容積生理鹽 水；第二組為陽性對照組，給與宮血寧膠囊0. 15g/kg ；第三、四、五組為本發(fā)明膠囊組，分別 給本發(fā)明膠囊2. Ig生藥/kg、4. 2g生藥/kg、8. 4g生藥/kg。各組皆灌胃給藥，5ml/kg,每天 1次，連續(xù)7天。末次給藥60min后耳緣靜脈采血，3. 8%枸櫞酸鈉抗凝(1 9)，3000rpm離 心IOmin分離血漿。取0. 5ml血漿，加蒸餾水9. 0ml，再加1 %醋酸0. ImI使pH達(dá)到4. 5，充 分混合后，置于4°C冰箱lOmin，再以3000rpm離心lOmin。棄去上清液，加硼酸緩沖液(pH =9)0. 5ml，用玻璃棒攪拌約Imin0然后37°C水浴，2min后加l/40mol/L CaCl2O. 5ml，待其 凝固，觀察凝塊完全溶解所需時(shí)問(優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間，ELT)，結(jié)果見表4表4本發(fā)明膠囊對家兔優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間的影響(X士S)
由表4可見，本發(fā)明膠囊對家兔ELT有縮短趨勢，但與陰性對照組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯 著性差異(P >0.05)，說明本發(fā)明膠囊對家兔ELT無明顯影響。陽性對照組宮血寧膠囊對 家兔ELT亦無明顯影響。三、對家兔在體子宮收縮的影響家兔40只，隨機(jī)分為5組，每組8只。第一組為陰性對照組，給與等容積生理鹽水； 第二組為陽性對照組，給與縮宮素注射液0. 8U/kg;第三、四、五組為本發(fā)明膠囊組，分別給 與本發(fā)明實(shí)施例1膠囊2. Ig生藥/kg、4. 2g生藥/kg.、8. 4g生藥/kg。各組家兔靜脈注射 戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，仰臥固定，剪去腹部手術(shù)部位毛，消毒，于下腹部正中切開皮膚， 打開腹腔，找出子宮。在一側(cè)子宮角選取長約3cm的一段，中點(diǎn)穿一絲線與肌張力換能器連 接。子宮的陰道端和卵巢端分別縫合固定在塑料杯底部兩側(cè)支點(diǎn)上。將腹壁圍繞塑料杯四 周縫合固定。塑料杯內(nèi)放置樂氏液，用手術(shù)燈照射保溫。子宮負(fù)荷lg。待子宮收縮穩(wěn)定后描 記子宮正常收縮曲線，然后除陽性對照組肌肉注射縮宮素1次外，其余各組十二指腸給藥1 次，5ml/kg。觀察記錄給藥后3011^11、601^11、901^11、1201^11子宮收縮曲線，結(jié)果見表5-表8由表5可見，本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮收縮力，具有劑量依賴關(guān)系，與陰性對 照組比較，中、大劑量組各個(gè)觀察時(shí)間均有顯著性差異(P <0.05或P <0.01)中、大劑量 組作用持續(xù)2小時(shí)以上。由表6可見，本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮平均收縮力，具有劑量依賴關(guān)系，與陰 性對照組比較，大劑量組各個(gè)觀察時(shí)間均有顯著性差異(P < 0. 05或P < 0. 01)；大劑量組 作用持續(xù)2小時(shí)以上。由表7可見，本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮收縮頻率，具有劑量依賴關(guān)系，與陰性 對照組比較，中劑量組給藥后30min有顯著性差異(P < 0. 05)，大劑量組給藥后30min和 60min均有顯著性差異(P < 0. 01)作用持續(xù)1小時(shí)左右。由表8可見，本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮收縮張力，具有劑量依賴關(guān)系，與陰性 對照組比較，小劑量組給藥后60min有顯著性差異(P < 0. 01)，中、大劑量組給藥后30min、 60min和90min均有顯著性差異(P < 0_05或P < 0. 01)；作用持續(xù)90min左右。由此可見，本發(fā)明膠囊可加強(qiáng)家兔子宮收縮力和收縮頻率。陽性對照藥縮宮素注 射液亦可加強(qiáng)家兔子宮收縮力和收縮頻率。
與陰性對照組比較，*P<0.05. **P<0.01表7本發(fā)明膠囊對家免子宮收縮頻率的影響(Xis)
率，對家兔ELT有縮短趨勢；增強(qiáng)家免在體子宮收縮力、平均收縮力、收縮頻率和子宮收縮 張力。結(jié)果說明，本發(fā)明膠囊有促凝血作用和止血作用，輕度促進(jìn)循環(huán)血小板聚集，加強(qiáng)子 官收縮力和收縮頻率。實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明含量測定方法精密度試驗(yàn)取芍藥苷對照品2. 85mg，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對 照品溶液，按實(shí)施例3中“含量測定”方法測定5次，記錄峰面積積分值，結(jié)果見表9。表9、精密度試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明本發(fā)明含量測定方法精密度好。實(shí)驗(yàn)例4本發(fā)明含量測定方法穩(wěn)定性試驗(yàn)按實(shí)施例3中“含量測定”方法測定，對實(shí)施例12中制得的供試品溶液，分別在0、 4、8、16、24小時(shí)進(jìn)行測定，結(jié)果見表10。表10、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明，在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)例5本發(fā)明含量測定方法重復(fù)性試驗(yàn)取實(shí)施例1中制得的膠囊，去膠囊殼，稱樣量分別為0. IOllg, 0. 0997g,0. 1062g, 0. 1073g，0. 1023g，照實(shí)施例12中供試品溶液制備方法制備供試品溶液5份，按實(shí)施例9中 “含量測定”方法測定，結(jié)果見表11。表11、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明本發(fā)明含量測定方法重復(fù)性好。實(shí)驗(yàn)例6本發(fā)明含量測定方法加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量為14. 58mg/粒的實(shí)施例1中制得的樣品5份，每份約50mg，分 別精密加入芍藥苷對照品溶液(1. 77mg/ml) 1ml，按實(shí)施例9中“含量測定”方法測定，結(jié)果 見表12。表12、回收率測定結(jié)果 結(jié)果表明，本方法回收率較好。
權(quán)利要求
一種治療婦科功血疾病的中藥組合物，其特征在于，由如下重量份的原藥材組成赤芍900 1100份、益母草900 1100份、三七200 400份、仙鶴草900 1100份、地榆炭500 700份、蒲黃炭500 700份。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，由如下重量份的原藥材組成赤芍 1000份、益母草1000份、三七300份、仙鶴草1000份、地榆炭600份、蒲黃炭600份。
3.如權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物為膠囊劑、片劑、 顆粒劑、丸劑、軟膠囊劑。
4.權(quán)利要求1-3任一所述中藥組合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)按重量份稱取赤芍、益母草、三七、仙鶴草、地榆炭、蒲黃炭，備用；(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加4-8倍量80%乙醇，回流提取1-3次，每次lh-3h，合并 提取液，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時(shí)相對密度1. 05-1. 10的清膏，離心，濃縮至60°C時(shí)相 對密度1. 15-1.20的稠膏，備用；(3)取益母草等其余四味，加水煎煮1-3次，每次加8-12倍量的水，煎煮0.5h-l. 5h， 合并水煎液，濾過，濾液濃縮至60°C時(shí)相對密度為1. 15-1. 20的稠膏，加乙醇制成含醇量為 70%的溶液，靜置16h-32h，取上清液，并濃縮至60°C時(shí)相對密度1. 15-1. 20的稠膏，與步驟 (2)的浸膏合并，制成各種劑型。
5.權(quán)利要求1-3任一所述的中藥組合物的膠囊劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方 法包括鑒別和含量測定兩部分，其中鑒別包括采用薄層色譜法，分別用赤芍對照藥材、芍 藥苷對照品、三七對照藥材、仙鶴草對照藥材、益母草對照藥材和鹽酸水蘇堿對照品進(jìn)行 的鑒別；含量測定以含赤芍確定，以芍藥苷計(jì)，不得少于12. Omg/粒，膠囊粒重為0. 35g/ 粒-0. 45g/粒。
6.如權(quán)利要求5所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述鑒別包括如下鑒別中的一種 或多種A、赤芍的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.5g-l. 5g，加水12ml-38ml，超聲處理 15min-45min，濾過，濾液加水飽和的正丁醇溶液提取1_5次，每次10ml-30ml，合并提取液， 加氨試液20ml-60ml洗滌，棄去洗液，蒸干，加lml_3ml甲醇溶解殘?jiān)?，作為供試品溶液；取赤芍對照藥材lg_3g，加甲醇15ml-45ml，超聲處理0. 5h_l. 5h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?加水12ml-38ml，溫?zé)崾谷芙?，濾過，濾液與供試品溶液同法提取制成對照藥材溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成濃度為lmg/ml-3mg/ml的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各4μ1，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸為 30-50 2-8 5-15 0. 1-0. 3的混合液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以5%香草醛 硫酸甲醇溶液，在95°C _115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和 對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、三七的鑒別以A的供試品溶液作為供試品溶液；取三七對照藥材0. 5g-l. 5g，加水5d-15d，攪勻，加水飽和的正丁醇溶液20ml-60ml，超 聲處理20min-60min，濾過，濾液加氨試液20ml_60ml洗滌，棄去氨液，加入正丁醇的飽和水 溶液20ml-60ml洗滌，棄去正丁醇水溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解，作為對照藥材溶 液；取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成各濃度均為0. 5mg/ml-l. 5mg/ml的混合溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各2 μ 1，以在10°C以下放置過夜的三氯甲烷甲醇水為 10-16 4-10 1-3的混合液的下層溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以10%硫酸 乙醇溶液，在95°C _115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照 品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置365nm波長的紫外光燈下檢視，顯相同顏色的 熒光斑點(diǎn)；C、仙鶴草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.5g-l. 5g，加0. 2 % -0. 8 %氫氧化鈉溶液 15ml-45ml，超聲處理10min-30min，濾過，濾液加鹽酸調(diào)pH值至2_3，濾過，濾液加乙酸乙酯 提取1-3次，每次10ml-30ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解，作為供試品溶 液；取仙鶴草對照藥材4g-12g，加水25ml-75ml，煎煮0. 5h_l. 5h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?0.2% -0.8%氫氧化鈉溶液15ml-45ml，溫?zé)崾谷芙猓瑸V過，濾液與供試品溶液同法提取制 成對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各15μ 1，以水飽和的甲苯乙酸乙酯甲酸為 4-8 2-4 0.5-1. 5的混合溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以0.5-1. 5%三氯化 鐵乙醇溶液顯色，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；D、益母草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.9g-1.5g，加乙醇22ml-38ml，加熱回流 0. 5h-l. 5h，放冷，濾過，濾液濃縮至2. 5ml-7. 5ml，加于內(nèi)徑5mm-15mm、活性炭0. 3g_0. 7g、 100目-120目中性氧化鋁lg_3g的活性炭-氧化鋁柱上，用15ml-45ml乙醇洗脫，收集洗脫 液，蒸干，殘?jiān)?. 2ml-0. 8ml乙醇溶解，作為供試品溶液；取益母草對照藥材1. 5g-4. 5g，與供試品溶液同法制成對照藥材溶液；取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成濃度為2. 5mg/ml-7. 5m/mlg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各10 μ 1，以正丁醇鹽酸水為3-5 0. 5-1. 5 0. 2-0. 8的混合 溶液為展開劑，進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn)，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色，供試品色譜中，在與對照 藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
7.如權(quán)利要求5所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述含量測定包括以下步驟(1)精密稱取芍藥苷對照品IOmgJa50%甲醇制成濃度為0. lmg/ml的溶液，作為對照 品溶液；(2)取所述膠囊內(nèi)容物0.lg，精密稱定，置具塞的三角燒瓶中，精密加入50%甲醇 50ml，稱定重量，冷浸過夜后，超聲處理30分鐘(功率200W，頻率40KHz)，再稱重，用50%甲 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0. 45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；(3)精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法 進(jìn)行測定，色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0. 05mol/L的磷酸二氫鉀溶 液甲醇為70 30的混合液為流動(dòng)相；檢測波長為230nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低 于 2500。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療婦科功血疾病的中藥組合物，其由如下重量份的原藥材組成赤芍900-1100、益母草900-1100、三七200-400、仙鶴草900-1100、地榆炭500-700、蒲黃炭500-700。赤芍、三七用80％乙醇提取，益母草等其余四味用水提取，通過適當(dāng)?shù)墓に噥碇苽渖鲜鲋兴幗M合物。本發(fā)明還涉及該中藥組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法，包括鑒別和含量測定兩部分，其中鑒別采用薄層色譜法，分別用赤芍對照藥材、芍藥苷對照品、三七對照藥材、仙鶴草對照藥材、益母草對照藥材和鹽酸水蘇堿對照品進(jìn)行鑒別；含量測定以含赤芍確定，以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于12.0mg/粒。該中藥組合物具有止血速度快、效果好等優(yōu)點(diǎn)，并且其膠囊劑的質(zhì)量控制方法不僅能夠簡便、直觀地鑒定制劑，而且可以更好地保障該藥物的藥效。
文檔編號A61K36/88GK101919942SQ20091008710
公開日2010年12月22日 申請日期2009年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月10日
發(fā)明者劉建武 申請人:株洲千金藥業(yè)股份有限公司