專利名稱：：環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種黃芪制劑的制備方法，具體為一種環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法。
背景技術(shù)：
：黃芪為常用中藥材，具有養(yǎng)元，扶正去邪、養(yǎng)心通脈、健脾利濕之功效，現(xiàn)代臨床廣泛用于心氣虛損、血脈淤阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虛濕困之肝炎等。黃芪注射液是一種常見的劑型，黃芪注射液在臨床大量用于胸痹心痛癥的治療，療效確切。經(jīng)研究，其心血管系統(tǒng)活性主要有效成分為黃甚皂苷類，藥理實驗證明它與黃芪注射液療效相當(dāng)。目前臨床使用的黃芪注射液尚存在含量不高、缺乏可靠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥效不易控制、臨床使用會引起病人過敏等反應(yīng)，使用安全性不高等不足?，F(xiàn)有黃芪注射液的制備方法種類比較多，例如專利號為031419275公開了一種黃芪總苷注射劑制劑及其制備方法。在該專利申請中，提供了一種含量明確、質(zhì)量可控、性能穩(wěn)定的黃芪總皂苷注射液的制備方法。原料使用了黃茛總皂苷，助溶劑(尤其是以丙二醇、乙醇組合為最佳，而且用量為0。5:1-1:0。5)，黃芪總皂苷的含量為5-50毫克/瓶，在該專利說明書中，記載到該申請制造的藥物為地奧黃芪注射液。而且該注射液對犬急性心肌梗塞的保護(hù)作用進(jìn)行了實驗研究。直接以經(jīng)提取純化的黃芪總皂苷為原料制備成注射劑，可以提高黃芪總皂苷的含量，增加質(zhì)量可控性，使黃芪制劑更有效、安全。但黃芪總苷較難溶于水，將其制備成注射劑時需要尋找合適的方法增加其溶解度。專利號為200510095308.x的專利公布了一種黃甚甲苷環(huán)糊精包含物的制備方法，主要技術(shù)方案是將黃芪甲苷制成環(huán)糊精包合物，根據(jù)劑型的需要再配以輔料制備成各類不同的劑型。但黃芪總皂苷成分復(fù)雜，除黃芪甲苷還含其它皂苷類，各種皂苷間又存在性質(zhì)上的差異，實驗表明，僅用上述方法先制備出環(huán)糊精包合物再配制黃芪總皂苷注射液的過程中，環(huán)糊精經(jīng)過干燥且存放一段時間后再溶解于水的過程中就會出現(xiàn)包合不完全、原料損失大、不易制得澄清溶液、溶液不穩(wěn)定、易出現(xiàn)沉淀等問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明為了解決現(xiàn)有黃芪注射液制造過程中存在的質(zhì)量控制不穩(wěn)定的問題而提供了一種環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法。本發(fā)明是由以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，一種環(huán)糊精組合物制備黃甚總皂苷注射液的方法，步驟包括，(1)取2.4-3.0g黃芪總皂苷溶于500-1000ml乙醇中，取環(huán)糊精組合物溶于7000-9000毫升注射用水中，將黃芪總皂苷乙醇溶液加到環(huán)糊精溶液中，6(TC加熱攪拌至無醇味；(2)加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯50-200g，攪拌至溶液澄清；(3)加入氯化鈉90g，攪拌溶解，活性炭處理，過濾脫炭；(4)補(bǔ)充注射用水至10000毫升，精濾，灌封，滅菌。即得黃芪總皂苷含量為0.24-0.3毫克/毫升的黃芪總皂苷氯化鈉注射液。以0.27毫克/毫升為最佳。上述制備方法中，包合所用環(huán)糊精組合物是3-環(huán)糊精和羥丙基-^-環(huán)糊精按照質(zhì)量比1:l-2混合的組合物。包合時黃芪總皂苷和環(huán)糊精組合物所用質(zhì)量比為1:4-10。聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯的使用濃度為0.5%-2%或5mg/ml-20mg/ml。以不同投料比，采用攪拌法進(jìn)行包合，0-環(huán)糊精和羥丙基-3-環(huán)糊精按照質(zhì)量比l:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10進(jìn)行組合并與黃芪總皂苷1:l進(jìn)行包合，取樣測量黃芪總皂苷、黃芪甲苷含量，結(jié)果以e-環(huán)糊精和羥丙基-P-環(huán)糊精按照質(zhì)量比1:1、1:2的組合物投料比較適宜，1:3、1:4、1:5、1:IO的組合物投料與I:1、1:2的組合物投料比較，含量相差不是很明顯，說明1:1-2的組合物投料即可達(dá)到最佳的包合效果，隨著投料比例的增加而含量變化不明顯，說明部分環(huán)糊精為投料過量，未參與包合，屬無效成分，因此我們確定了P-環(huán)糊精和羥丙基-P-環(huán)糊精按照質(zhì)量比1:1-2為最佳組合投料比。不同的組合物投料比包合物中黃芪總皂苷、黃芪甲苷含量及包合率如下表所示。0.2735mg/ml，為0.0921mg/ml。表1不同的組合物投料比包合物中黃離總皂苷和黃芪甲苷含量及包合率<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>環(huán)糊精組合物比例確定后我們又以e-環(huán)糊精和羥丙基-e-環(huán)糊精按照質(zhì)量比l:2的組合物，與黃芪總皂苷按l:1、2:1、4:1、8:1、10:1、20:l進(jìn)行包合，測包合物中黃芪總皂苷和黃萬甲苷含量，結(jié)果以黃芪總皂苷與環(huán)糊精組合物按l:4-10的投料比較適宜，1:1-2投料，測得含量較低，說明包合不完全，1:20投料與1:4-10比較，含量相差不是很明顯，說明l:4-10之間投料即可達(dá)到最佳的包合效果，隨著投料比例的增加而含量變化不明顯，說明部分環(huán)糊精為投料過量，未參與包合，屬無效成分，因此我們確定了黃芪總皂苷和環(huán)糊精組合物的最佳投料比為1:4-10。不同投料比包合物中黃芪總皂苷和黃芪甲苷所含數(shù)量及包合率如下表所示。表2不同投料比包合物中黃芪總皂苷和黃芪甲苷所含數(shù)量及包合率<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>我們將上述方法制得的黃芪總皂苷包合物按照注射劑的制備方法制成黃甚總皂苷氯化鈉注射液，進(jìn)行留樣觀察，在貯存6個月后100瓶中有1瓶出現(xiàn)了輕微混濁，說明采用環(huán)糊精包合物制得的黃芪總皂苷氯化鈉注射液還是不理想，為此我們又在上述工藝中加入了聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯增溶劑，并對其用量及穩(wěn)定性進(jìn)行了試驗。我們選用e-環(huán)糊精和羥丙基-e-環(huán)糊精按照質(zhì)量比1:2的組合物，黃芪總皂苷和該環(huán)糊精組合物按質(zhì)量比為1:4進(jìn)行包合，并按0.1%-5%的濃度加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯，制備成黃芪總皂苷氯化鈉注射液，制備過程中發(fā)現(xiàn)加入0.5%-2%濃度的聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯明顯提高了黃芪甲苷的含量，并且在相同貯存條件下放置6個月進(jìn)行觀察，結(jié)果所有加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯的注射劑都沒有出現(xiàn)混濁，均為透明澄清液體。加入不同濃度聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯黃芪總皂苷與黃芪甲苷的含量如下表所示。表3不同濃度聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯中黃芪總皂苷和黃芪甲苷含量投料比聚聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯濃度黃芪總皂苷黃芪甲苷黃芪總皂苷e-環(huán)糊精羥丙基-e-環(huán)糊精為1:210g40g0.1%9.51g2.77g10g40g0.2%9.55g2.89g10g40g0.5%9.73g3.19g10g40g1.0%"lg3.28g10g40g2.0%9.79g3.29g10g40g3.0%9.82g3.27g10g40g4.0%9.77g3.26g10g40g5.0%9.78g3.26g為了進(jìn)一步驗證本發(fā)明所制得的注射劑的穩(wěn)定性，我們選擇同一批注射劑在6(TC、18-26°C、0-4°C、45761x光照條件下進(jìn)行試驗。結(jié)果如下表:表5注射劑穩(wěn)定性試驗結(jié)果條件時間(天)澄明度鑒別黃芪總皂苷的含量(mg/ml)黃芪甲苷的含量(mg/ml)0澄清陽性0.27420.093160°C3090澄清澄清陽性陽性0.27390.27370.09210.0918180澄清陽性0.27370.09170澄清陽性0.27440.093318-26。C3090澄清澄清0.27400.27380.09270.0919180澄清陽性0.27370.09150澄清陽性0.27380.09290-4°C30卯澄清澄清陽性陽性0.27390.27350.09250.0916180澄清陽性0.27310.09180澄清陽性0.27430.093445761x3090澄清澄清陽性陽性0.27390.27310.09270.0916180澄清陽性0.27270.0909經(jīng)過大量試驗可以發(fā)現(xiàn)黃芪總皂苷難溶于水，將黃芪總皂苷用兩種環(huán)糊精的組合物制成包合物且加入增溶劑聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯后有效成分的7溶解度和溶液的穩(wěn)定性顯著提高。與
背景技術(shù)：
中所述的先制造出黃芪總皂苷環(huán)糊精包含物，再利用包合物制備注射液的技術(shù)相比，用本發(fā)明方法直接制得的黃茛總皂苷氯化鈉注射液，穩(wěn)定性好，藥物含量高，療效好，毒副作用低。將本發(fā)明制得的黃芪總皂苷氯化鈉注射液的澄明液體在4-8°C、室溫及6(TC溫度條件下放置6個月，溶液性狀不發(fā)生任何變化，取樣測黃芪總苷含量，未發(fā)生變化，藥液穩(wěn)定、可靠。我們還對本發(fā)明所述的黃芪總皂苷氯化鈉注射液對垂體后葉素引起的大鼠心肌缺血的影響做了研究。受試藥物黃芪總皂苷氯化鈉注射液，本發(fā)明制得；黃芪注射液，上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，外觀呈褐色，每ml含生藥2g;垂體后葉素注射液上海第一生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，臨用前以生理鹽水配成2U/ml備用。以上兩種藥物均在所記錄的各項指標(biāo)穩(wěn)定30分鐘后靜脈滴注。動物健康雄性SD大鼠，第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供，50只，體重為350-450克，隨機(jī)分為5組如下分組動物數(shù)(只)劑量5ml/Kg2g/Kg1.5mg/Kg5mg/Kg15mg/Kg生理鹽水組黃芪注射液組黃芪總皂苷注射液低劑量組黃芪總皂苷注射液中劑量組黃芪總皂苷注射液高劑量組1010101010給藥途徑靜脈滴注靜脈滴注靜脈滴注靜脈滴注靜脈滴注實驗方法:大鼠用3%戊巴比妥鈉45mg/Kg腹腔注射麻醉。分離左股靜脈并留置聚乙烯管以備給藥。以針狀電極插入四肢皮下，記錄正常標(biāo)準(zhǔn)肢體II導(dǎo)心電圖(ECG-6511型心電圖機(jī)，上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司)。如有心電圖異常則該動物棄之不用。穩(wěn)定30min，靜脈滴注受試藥物。30min后從股靜脈10秒內(nèi)注入垂體后葉素5U/Kg，注射后立即連續(xù)記錄各時間點II導(dǎo)心電圖(走紙速度50mm/s,電壓10mmX1)。然后取給藥后15sec、30sec、60sec、2min、5min、10min、20min、和30min時間點進(jìn)行統(tǒng)計處理，觀察ST段抬高程度的變化。統(tǒng)計分析實驗結(jié)果中各時間段ST段抬高程度減去基礎(chǔ)值(A值)，以x士S表示，作時間T檢驗比較，P〈0.05判斷為具有顯著性的統(tǒng)計學(xué)差異。實驗結(jié)果-(1)靜脈注射垂體后葉素后一般心電圖變化結(jié)果表明大鼠靜脈注射垂體后葉素后一般心電圖主要表現(xiàn)為ST段迅速抬高，T波變低平或倒置，提示有心肌缺血。心率失常表現(xiàn)有頻發(fā)室早，亦可見高度至完全房室傳導(dǎo)阻滯。(2)受試藥物對損傷性ST段抬高的影響結(jié)果表明以注射垂體后葉素誘發(fā)損傷引起的ST段抬高程度為判斷指標(biāo)，黃芪總皂苷注射液低、中、高三個劑量組和陽性對照藥黃芪注射液均可顯著降低麻醉SD大鼠靜脈注射垂體后葉素引起心肌損傷造成的心電圖ST段抬高，其中以黃芪總皂苷中、高劑量組效果明顯，顯示有較好的量效關(guān)系。結(jié)論-黃芪總皂苷氯化鈉注射液1.5mg/Kg、5mg/Kg和15mg/Kg靜脈注射均可降低垂體后葉素誘發(fā)的SD大鼠心肌損傷引起的ST段抬高程度；小劑量組AST段與生理鹽水組比較絕對值雖有降低，但大部分時間段未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著差異，而中、高劑量組和生理鹽水組比較AST段抬高程度差異顯著，說明黃芪總皂苷對預(yù)防心肌血損傷有較好作用，并有一定的量效關(guān)系。具體實施例方式實施例1l.稱取黃芪總皂苷2.4g(其中含黃芪甲苷0.8g)，溶于約500ml乙醇中；取24g環(huán)糊精組合物(P-環(huán)糊精和羥丙基-e-環(huán)糊精按照質(zhì)量比1:1-2)溶于7000毫升注射用水中，將黃芪總皂苷乙醇溶液加到環(huán)糊精溶液中，60'C加熱攪拌至無醇味；2.加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯50g，攪拌至溶液澄清；3.加入氯化鈉90g，攪拌溶解，加O.1%活性炭處理，過濾脫炭；4潛足注射用水至10000ml,精濾，灌封，100ml/瓶，30min加壓滅菌，檢驗，包裝，即得。本實施例制得的黃芪總皂苷注射液，取樣測量，黃芪總皂苷含量為0.2397./ml，黃芪甲苷含量為0.0787mg/ml。將其置于4-8°C、室溫及6(TC溫度條件下放置十二個月，取出后觀察，結(jié)果藥液仍澄清透明，無任何析出物，藥液性狀未發(fā)生明顯變化。取樣測得黃芪總苷及黃芪甲苷的含量未發(fā)生明顯變化。實施例21.稱取黃芪總皂苷2.7g(其中含黃芪甲苷0.9g)，溶于約650ml乙醇中；取12g環(huán)糊精組合物(3-環(huán)糊精和羥丙基-P-環(huán)糊精按照質(zhì)量比1:l-2)溶于8000毫升注射用水中，將黃芪總皂苷乙醇溶液加到環(huán)糊精溶液中，60。C加熱攪拌至無醇味；2.加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯100g，攪拌至溶液澄清；3.加入氯化鈉90g，攪拌溶解，加0.1%活性炭處理，過濾脫炭；4.補(bǔ)足注射用水至lOOOOml，精濾，灌封，100ml/瓶，30min加壓滅菌，檢驗，包裝，即得。本實施例制得的黃芪總皂苷注射液，取樣測量，黃芪總皂苷含量為0.2735rag/ml，黃芪甲苷含量為0.0921mg/ml。將其置于4-8°C、室溫及60°C溫度條件下放置十二個月，取出后觀察，結(jié)果藥液仍澄清透明，無任何析出物，藥液性狀未發(fā)生明顯變化。取樣測得黃芪總苷及黃芪甲苷的含量未發(fā)生明顯變化。實施例31.稱取黃芪總皂苷3g(其中含黃芪甲苷lg)，溶于約750ml乙醇中；取24g環(huán)糊精組合物(e-環(huán)糊精和羥丙基-e-環(huán)糊精按照質(zhì)量比1:1-2)溶于9000毫升注射用水中，將黃芪總皂苷乙醇溶液加到環(huán)糊精溶液中，6CTC加熱攪拌至無醇味；2.加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯200g，攪拌至溶液澄清；3.加入氯化鈉90g，攪拌溶解，加O.1%活性炭處理，過濾脫炭；4.補(bǔ)足注射用水至10000ml，精濾，灌封，100ml/瓶，30min加壓滅菌，檢驗，包裝，即得。本實施例制得的黃芪總皂苷注射液，取樣測量，黃芪總皂苷含量為0.3112g/ml,黃茛甲苷含量為O.1022mg/ml。將其置于4-8°C、室溫及60'C溫度條件下放置十二個月，取出后觀察，結(jié)果藥液仍澄清透明，無任何析出物，藥液性狀未發(fā)生明顯變化。取樣測得黃芪總苷及黃芪甲苷的含量未發(fā)生明顯變化。權(quán)利要求1、一種環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法，其特征在于步驟包括，(1)取2.4-3.0g黃芪總皂苷溶于500-1000ml乙醇中，取環(huán)糊精組合物溶于7000-9000毫升注射用水中，將黃芪總皂苷乙醇溶液加到環(huán)糊精溶液中，60℃加熱攪拌至無醇味；(2)加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯50-200g，攪拌至溶液澄清；(3)加入氯化鈉90g，攪拌溶解，活性炭處理，過濾脫炭；(4)補(bǔ)充注射用水至10000毫升，精濾，灌封，滅菌，即得黃芪總皂苷含量為0.24-0.3毫克/毫升的黃芪總皂苷氯化鈉注射液。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法，其特征在于環(huán)糊精組合物為e-環(huán)糊精和羥丙基-e-環(huán)糊精按照質(zhì)量比l:1-2混合的組合物。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法，其特征在于包合時黃苠總皂苷和環(huán)糊精組合物所用質(zhì)量比為1:4-10。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法，其特征在于黃芪總皂苷含量為0.27毫克/毫升。全文摘要本發(fā)明涉及一種黃芪制劑的制備方法，具體為一種環(huán)糊精組合物制備黃芪總皂苷注射液的方法。解決現(xiàn)有黃芪注射液制造過程中存在的質(zhì)量控制不穩(wěn)定的問題。步驟包括，取黃芪總皂苷溶于乙醇中，取環(huán)糊精組合物溶于7000-9000毫升注射用水中，將黃芪總皂苷乙醇溶液加到環(huán)糊精溶液中，60℃加熱攪拌至無醇味；加入聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯，攪拌至溶液澄清；加入氯化鈉，攪拌溶解，活性炭處理，過濾脫炭；精濾，灌封，滅菌得黃芪總皂苷氯化鈉注射液。文檔編號A61K47/40GK101502558SQ200910073999公開日2009年8月12日申請日期2009年3月21日優(yōu)先權(quán)日2009年3月21日發(fā)明者劉近榮,達(dá)沈,韓雪鋒申請人:山西振東泰盛制藥有限公司