專利名稱：注射用黃芪皂苷的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是供注射劑用的黃芪皂苷的制備方法。
背景技術：
黃芪是一味傳統(tǒng)的補氣中藥，已有藥理研究表明，其中的主要有效成分黃芪皂苷能明顯改善心肌梗塞犬的心肌收縮性能，增加冠脈流量，縮小心肌梗塞面積，減輕心肌損傷，對心功能有保護作用。已有研究表明，黃芪中的主要有效成分為黃芪皂苷，但含量較低，特別是其中的黃芪甲苷成分在藥材中的含量僅約為0.04％，采用目前的傳統(tǒng)提取方法使其富集純化較為困難。
公開號為CN1557329A的中國專利文獻中報道有對黃芪皂苷的提取方法，采用的是先以常規(guī)水煎煮方式制取原料生藥黃芪的水提取液，濾液經常用的大孔樹脂，如平均孔徑為0.02～0.03μm，比表面積≥400m2/g的D-201、AB-8、DM-301等型號的大孔吸附樹脂進行吸附處理，吸附富集其中的皂苷成分。經水和含水乙醇溶液洗滌除雜后，用60％～95％的乙醇溶液解吸洗脫，除去乙醇后的洗脫液用水溶解，用正丁醇提取其中的黃芪總皂苷，并用氫氧化鈉/鉀、碳酸鈉、飽和石灰水或氨水等pH≥10的堿水洗滌正丁醇提取溶，除去正丁醇后再用丙酮回流脫脂，分離后即可得到黃芪甲苷含量≥20％(重量)的黃芪皂苷，并可以按《藥物分析雜志》1999，19(6)403～405和《中國藥學雜志》2002，37(4)298～300的報導，用高效液相色譜法和蒸發(fā)光散射檢測器，即HPLC-ELSD法測定所得到的黃芪皂苷提取物中的黃芪甲苷含量。試驗結果顯示，單純以水提取黃芪皂苷的轉移率低，且所得黃芪皂苷在澄明度、鞣質等多項指標上都不能符合注射用藥物的要求。

發(fā)明內容
針對上述情況，本發(fā)明將提供一種注射用的黃芪皂苷的制備方法，使其既能除去大量的酚性、酸性物質及鞣質等，又能保持黃芪皂苷的穩(wěn)定，滿足供注射劑使用的黃芪皂苷所需的性能指標，保證其使用的安全性。
本發(fā)明注射用黃芪皂苷的制備方法，是將藥物原料黃芪用體積濃度為40％～95％，更好的是用60％～80％的含水乙醇回流提取。試驗結果顯示，提取所用的乙醇濃度過低，提取物中的水溶性雜質過多；乙醇濃度過高時則又會過多地增加提取物中的脂溶性雜質。與常規(guī)的水提取方式相比，用40～95％乙醇循環(huán)回流提取黃芪皂苷，黃芪皂苷的轉移率更高，轉移率可達92％以上，而單純以水提取方式的轉移率僅為71％，二者存在著明顯差異(P＜0.01)。
回流提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至40％～95％，更好的是至乙醇含量達70％～90％進行沉淀和過濾。試驗結果顯示，將濾液調節(jié)至pH 6.0～11.0后，能有效地除去鞣質，其中優(yōu)選調節(jié)至pH 8.0～10.0的范圍進行沉淀過濾。將濾液調節(jié)至pH 6.0～8.0后，按原料藥/水重量比為0.5～3/1的量，其中更好的是按原料藥/水為1～2/1的量加水混合后，在保持不凍結的低溫條件，其中優(yōu)選在0℃～10℃條件下沉淀后過濾。濾液用制藥生產中常用的大孔吸附樹脂，如平均孔徑為0.02～0.03μm，比表面積≥400m2/g的常用D-101、Diaion HP-20、D-201、AB-8、DM-301等型號的大孔吸附樹脂進行吸附處理，再用濃度為50％～90％的含水乙醇解吸附洗脫并收集。試驗結果顯示，洗脫時所用乙醇濃度過低，洗脫液中會混有過多的水溶性雜質；乙醇濃度過高則可能會增大洗脫液中脂溶性雜質的量。將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調節(jié)pH至9.0～13.0后，用經水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后丙酮和乙醚中的至少一種進行沉淀分離沉淀物，即為本發(fā)明所說可供注射劑用的黃芪皂苷。
實驗表明，上述制備方法中，經乙醇沉淀處理和調節(jié)至近中性的pH 6.0～8.0的提取液，并進一步加水混合并于低溫下沉淀處理，對于保證使用時注射用黃芪皂苷溶液的澄清度都是重要和必須的。試驗結果顯示，加水混合前pH調節(jié)的偏酸或偏堿對黃芪甲苷的含量都會產生較明顯的不利影響。而不再經水沉淀除雜處理的樣品澄清度較差，經過水沉淀除雜處理的樣品澄清度則能符合注射劑的標準要求。
取相當于800g藥材經乙醇沉淀的濃縮液，分別按黃芪藥材/水為1/1、1.5/1、2/1和2.5/1等不同比例加水進行冷藏靜置沉淀的試驗結果如表1所示。
由表1結果可見經加水沉淀除雜處理后的樣品澄清度均可符合注射劑的標準要求，改變水量的多少對處理效果未見顯著影響，但在操作上則有不同的影響。從水沉液過濾速度看，藥材/水為1/1和1.5/1時，過濾速度較快，而當藥材/水為2.0/1和2.5/1時，過濾則比較困難。因此進行水沉淀處理時的加入水量，一般以藥材/水的比例為1～2/1，特別是以1～1.5/1時為佳。
經水沉淀處理后的提取液繼續(xù)用大孔樹脂吸附處理時，改變吸附樹脂的種類和/或型號，如在上述D-101、Diaion HP-20、D-201、AB-8、DM-301等多種非極性大孔吸附樹脂和/或弱極性吸附樹脂大孔吸附樹脂進行選擇的試驗證明，其均可使用，且所得產品的質量及穩(wěn)定性等都能符合要求。進一步，用大孔樹脂進行吸附處理時，在用50％～90％的含水乙醇進行洗解吸附洗脫前，如能先用20％～50％的含水乙醇洗滌吸附樹脂至洗滌液基本無色，則對進一步減少收集洗脫產物中的雜質，提高產品純度和質量是有益的。試驗顯示，初步洗滌雜質用的乙醇濃度過低可使所得提取物中的雜質量多；乙醇濃度過高則會影響提取物中黃芪皂苷的收率。
黃芪藥材中存在的大量和主要的雜質成分是極性與黃芪皂苷接近的酚性和酸性物質，去除比較困難。因此上述制備方法中，在用水飽和正丁醇萃取前，將解吸附濃縮后的提取液用常用的堿或堿性化合物調節(jié)pH至堿性，可以使酚性和酸性雜質成鹽，難溶于正丁醇而被除去，因而對于保證最終產品的質量和穩(wěn)定性都是重要的。所說的堿或堿性化合物一般可以使用常用的一價金屬的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，最為常用的氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉，或是氨水等堿或堿性化合物。此步優(yōu)選的pH值調節(jié)范圍是10.0～12.0，然后再用水飽和的正丁醇萃取。試驗顯示，改變調節(jié)pH時所用堿的種類對結果并無實質性的影響。對經大孔吸附樹脂吸附處理后的提取液分別用不同的堿調節(jié)pH后分別用水飽和正丁醇萃取完全，對黃芪皂苷和黃芪甲苷的保留率進行試驗。試驗結果如表2所示。
表2的結果表明，萃取前的提取液用不同的堿或堿性化合物處理，對萃取后黃芪皂苷的保留率無明顯差別。用堿度相對較弱的氨水和NaHCO3溶液處理時，萃取物中的黃芪甲苷含量相對偏低，而用0.5％和1％的NaOH溶液處理后，萃取物中黃芪甲苷的保留率明顯提高。用1％Na2CO3溶液處理時，可以提高黃芪甲苷的含量，并且處理后堿性混合液的顏色也較淺。但這并非意味堿性過強總是有利的，因為堿性過強對所得提取物的溶解性可能會有不利影響。因此可優(yōu)先選用Na2CO3調節(jié)pH。對萃取前的濃縮液不經上述的堿處理而直接用水飽和正丁醇提取的試驗顯示，所得的黃芪皂苷溶液在澄清度和顏色、鞣質、樹脂、草酸鹽等均難以達到有關中藥注射液的技術指標和規(guī)定的要求，不能作為注射用原料。以未經堿處理直接萃取得到的樣品的豚鼠試驗則偶有過敏反應，而用萃取前經堿處理后所得到的樣品進行的豚鼠試驗均無過敏反應。同時，穩(wěn)定性的考察試驗也顯示，以經堿處理過的原料制成的注射液，其安全性至少在2年內均符合要求。因此，萃取前進行堿處理對保證產品在用于注射劑時安全性和穩(wěn)定性等方面是有積極意義的。
由此可以理解，本發(fā)明的制備方法首先采用含水乙醇提取黃芪皂苷，可以獲得更高的黃芪皂苷轉移率；通過對提取液的多次乙醇處理、堿處理和沉淀處理，使黃芪藥材中存在的大量酚性和酸性物質被較為徹底的去除，有效地保證了注射用黃芪皂苷產品的澄清度與顏色、鞣質、樹脂、草酸鹽及穩(wěn)定性等各項指標均能達到注射劑的標準和要求。特別是不同形式的堿處理和低溫水沉淀除雜等步驟，更是保證和提高黃芪皂苷產物達到注射用藥標準和要求的重要措施。
表1 不同用水量的水沉對比試驗結果

表2 不同的堿處理條件的對比試驗結果

以下通過具體實施方式
的實例再對本發(fā)明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。在不脫離本發(fā)明上述技術思想情況下，根據(jù)本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均包括在本發(fā)明的范圍內。
具體實施例方式
實施例1取黃芪藥材20kg，切片，加體積濃度為70％的含水乙醇8倍回流提取。提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至65％進行沉淀和過濾，濾液調節(jié)至pH9.0后沉淀過濾。濾液調節(jié)至pH7.0左右，按原料藥/水為1.5/1的量加水混合后，在5℃低溫下沉淀后過濾。濾液用大孔吸附樹脂D-101吸附，以30％濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色除雜，再以75％濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集。將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調節(jié)pH至10.0后，用經水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚(1∶1)進行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷。按注射劑標準檢驗，所得黃芪皂苷經全檢完全符合注射用要求。
實施例2取黃芪藥材50kg，切片，加體積濃度為80％的含水乙醇8倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至50％進行沉淀和過濾，濾液調節(jié)至pH9.0后沉淀過濾。濾液調節(jié)至pH 7～8，按原料藥/水為1.5/1的量加水混合于5℃低溫下沉淀后過濾。濾液用大孔吸附樹脂D-201吸附后，先用30％濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色，再以80％濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集。將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調節(jié)pH至11.0后，用經水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚(1∶2)進行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷。所得黃芪皂苷經全檢，符合注射用要求。
實施例3取黃芪藥材30kg，切片，加體積濃度為50％的含水乙醇10倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至85％進行沉淀和過濾，濾液調節(jié)至pH 9.0后沉淀過濾。濾液調節(jié)至pH 6.5～7.5，按原料藥/水為1.8/1的量加水混合于5℃低溫下沉淀后過濾。濾液用大孔吸附樹脂D-101吸附后，先用30％濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色，再以75％濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集。將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調節(jié)pH至12.0后，用經水飽和的正丁醇提取。提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚(2∶1)進行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷。所得黃芪皂苷經全檢，符合注射用要求。
實施例4取黃芪藥材20kg，切片，加體積濃度為70％的含水乙醇8倍回流提取。提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至50％進行沉淀和過濾，濾液調節(jié)至pH9.0后沉淀過濾。濾液調節(jié)至pH7.0左右，按原料藥/水為1.5/1的量加水混合后，在5℃低溫下沉淀后過濾。濾液用大孔吸附樹脂D-101吸附，以30％濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色除雜，再以75％濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集。將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調節(jié)pH至10.0后，用經水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮進行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷。所得黃芪皂苷經全檢，符合注射用要求。
實施例5取黃芪藥材50kg，切片，加體積濃度為60％的含水乙醇8倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至60％進行沉淀和過濾，濾液調節(jié)至pH9.0后沉淀過濾。濾液調節(jié)至pH 7～8，按原料藥/水為1.5/1的量加水混合于5℃低溫下沉淀后過濾。濾液用大孔吸附樹脂D-201吸附后，先用30％濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色，再以80％濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集。將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調節(jié)pH至11.0后，用經水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用乙醚進行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷。所得黃芪皂苷經全檢，符合注射用要求。
權利要求
1.注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是將藥物原料黃芪用體積濃度為40％～95％的含水乙醇回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至40％～95％進行沉淀和過濾，濾液調節(jié)至pH6.0～11.0后沉淀過濾，將濾液調節(jié)至pH6.0～8.0后，按原料藥/水重量比為0.5～3/1的量加水混合，在保持不凍結的低溫條件下沉淀后過濾，濾液用大孔吸附樹脂吸附，以50％～90％濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集，將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調節(jié)pH至9.0～13.0后，用經水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮和乙醚中的至少一種進行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷。
2.如權利要求1所述的注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是所說的黃芪原料回流提取所用的含水乙醇的濃度為60％～80％。
3.如權利要求1所述的注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是所說的除去乙醇后的回流提取液重新加入乙醇進行沉淀的混合溶液乙醇體積濃度為70％～90％。
4.如權利要求1所述的注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是所說的除去乙醇后的回流提取液重新加入乙醇進行沉淀和過濾后，將濾液調節(jié)至pH8.0～10.0沉淀過濾。
5.如權利要求1所述的注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是所說的對經乙醇沉淀和過濾后的濾液調節(jié)至pH6.0～8.0后，按原料藥/水為1～2/1的量加水混合。
6.如權利要求1所述的注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是提取溶液用大孔樹脂吸附后，先用20％～50％濃度的含水乙醇洗滌吸附樹脂至洗液無色，再用50％～90％濃度的含水乙醇洗解吸附洗脫。
7.如權利要求1所述的注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是對收集并除去乙醇后的解吸附濃縮溶液用一價金屬或氨的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽調節(jié)pH10.0～12.0。
8.如權利要求7所述的注射用黃芪皂苷的制備方法，其特征是所說的一價金屬離子為鈉或鉀。
全文摘要
注射用黃芪皂苷的制備方法，對黃芪用含水乙醇回流提取后，除去乙醇的提取液再用乙醇進行沉淀和過濾，除去乙醇再加水低溫沉淀，濾液經大孔吸附樹脂吸附并用含水乙醇洗脫，洗脫液濃縮并調節(jié)至堿性后，用經水飽和的正丁醇萃取，最后對除去正丁醇后的萃取液用丙酮或乙醚沉淀并分離得到供注射劑用的黃芪皂苷沉淀物。該方法能較徹底地除去黃芪藥材中的大量酚性和酸性物質，有效保證了注射用黃芪皂苷產品所配制的注射液的澄清度與顏色、鞣質、樹脂、草酸鹽等各項指標的合格和穩(wěn)定。
文檔編號A61P9/10GK1682862SQ20051002040
公開日2005年10月19日 申請日期2005年2月24日 優(yōu)先權日2005年2月24日
發(fā)明者程志鵬, 梁隆, 胡思玉, 余啟波, 張德奎 申請人:四川科倫藥業(yè)股份有限公司