專利名稱：一種亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物及其制備方法，以及在制備用于治療貧血和解毒藥物中的用途。
背景技術：
葉酸是核酸蛋白合成及紅細胞生成過程中不可缺少的成份，對某些巨紅細胞貧血患者，它可以刺激其紅細胞及血小板的生成，但葉酸在體內必須先在肝臟和骨髓中轉化成有效形態(tài)的甲酰四氫葉酸，然后作為輔酶參與核酸的合成。亞葉酸鈣(Calcium Folinate，CF)是葉酸還原型的甲酰化衍生物，系葉酸在體內的活化形式，進入體內不需轉化即為有效形態(tài)，因此亞葉酸鈣的作用大大優(yōu)于葉酸。
下圖是亞葉酸鈣的結構式
亞葉酸鈣對甲氨蝶呤(MTX)具有解毒作用。MTX為葉酸拮抗劑，MTX的抗腫瘤作用機理在于其結構類似于葉酸，可抑制二氫葉酸還原酶的活性，造成細胞四氫葉酸(FH4)缺乏，從而影響嘌呤及嘧啶類核苷酸合成，抑制腫瘤細胞生長。MTX抑制腫瘤細胞生長的同時亦使得正常細胞尤其是生長較快的細胞內FH4缺乏，而產(chǎn)生較大的毒性作用。因此MTX的抗腫瘤作用不僅取決于其對腫瘤細胞的抑制，機體對MTX的耐受性亦影響其最終結果。CF是葉酸還原型的甲?；苌铮等~酸在體內的活化形式，可為細胞直接提供FH4，而不需要二氫葉酸還原酶的作用，從而CF可以明顯拮抗MTX的毒性作用。
亞葉酸鈣能增強5-氟尿嘧啶(5-FU)的抗腫瘤活性。5-FU能在體內轉變?yōu)榉撗鹾塑账?FdUMP)，抑制胸苷酸合成酶(TS)，進而抑制DNA的合成。FdUMP與TS的結合需甲酰四氫葉酸(CH2FH4)的參與，在細胞內形成TS-CH2FH4-FdUMP三元復合物。但生理濃度的CH2FH4形成的三元復合物容易分離。提供大劑量的CF后可使細胞內CH2FH4達到高濃度，使TS-CH2FH4-FdUMP三元復合物結合緊密、穩(wěn)定，從而增強了5-FU的抗腫瘤活性。
近年，亞葉酸鈣因參與抗腫瘤藥物的生化調節(jié)而備受重視，其臨床應用亦更趨廣泛。近年來CF/5-FU聯(lián)用在治療鼻咽癌、胃癌、胃腸道癌、結直腸癌、大腸癌、頭頸癌、食管癌、乳腺癌中取得較好的療效。它不僅增強了5-FU的抗癌活性，還降低了毒性作用，因此在臨床中廣泛應用。
左亞葉酸為5-甲酰四氫葉酸(即亞葉酸)的同分異構體。左亞葉酸鈣由美國惠氏藥品公司首先研制成功，于1994年首先在英國上市，現(xiàn)已在包括意大利、加拿大、日本、南非、芬蘭、冰島等10幾個國家上市，其制劑有片劑、水針劑及凍干針劑，并已被《歐洲藥典》所收載，國外臨床應用已充分證實了該藥的安全有效性。
目前市售的亞葉酸鈣水針不穩(wěn)定，遇光易降解，儲存期穩(wěn)定性差。此外，亞葉酸鈣在水中的溶解度不太理想，對溫度、PH值、氧氣等因素敏感，使其制劑應用和臨床應用都受到一定限制，且增加了制劑成本。雖然亞葉酸鈣降低了抗腫瘤藥物MTX的毒性作用，但是它的毒性仍不容忽視。
L-苯丙氨酸是人體八種必需的氨基酸之一，研究表明，以氨基酸為載體把抗癌藥物的分子或基因導入癌瘤區(qū)，就能達到既抑制癌瘤生長，又能降低原腫瘤藥物的毒副作用，而這些氨基酸載體中以L-苯丙氨酸為最理想，其效果是其他氨基酸的3-5倍。

發(fā)明內容
為了克服亞葉酸鈣水溶性差、穩(wěn)定性不好及毒性作用的問題，使患者使用更安全，成本更低，本發(fā)明人提供了一種亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物及其制備方法。
本發(fā)明通過大量實驗驚奇的發(fā)現(xiàn)，亞葉酸鈣與苯丙氨酸以一定比例組合后，完全解決了其水溶性和穩(wěn)定性問題，方便臨床用藥，并且加入L-苯丙氨酸可起到協(xié)同增效作用，比單用亞葉酸鈣更能增強5-氟尿嘧啶的抗腫瘤活性及降低甲氨喋呤毒副作用。
本發(fā)明的目的是提供含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，該組合物增強對抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶的活性及降低甲氨喋呤毒副作用。
本發(fā)明的另一目的是提供含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針，該凍干粉針的水溶性及穩(wěn)定性好，可以較長時間貯存。
本發(fā)明的再一目的是提供含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針的制備方法，該方法制得的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針質地疏松，加水后能迅速溶解而恢復藥液的原有特性，且制備成本低，質量可控。
本發(fā)明的還一目的是提供含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物在制備用于治療貧血和解毒藥物中的應用。
本發(fā)明提供了含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物及其制備方法，技術方案如下 本發(fā)明提供的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，所述的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比為1∶0.01～0.8。
所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比優(yōu)選為1∶0.05～0.5。
所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比進一步優(yōu)選為1∶0.1～0.3。
所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比再一步優(yōu)選為1∶0.2。
所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，為凍干粉針制劑。
在制備凍干制劑時，為了獲得飽滿外觀及調節(jié)復配后溶液的滲透壓，常加入賦形劑，本發(fā)明的凍干產(chǎn)品中加入甘露醇、山梨醇、右旋糖酐40、葡萄糖、木糖醇、乳糖、果糖、麥芽糖或氯化鈉，進一步優(yōu)選為右旋糖酐40。
從處方中輔料的選擇來分析，本發(fā)明人遵循的原則是，在不影響藥物穩(wěn)定性、滿足臨床需要的產(chǎn)品的前提下，輔料的成分越簡單，用量越少越好。輔料的成分越簡單，制劑在生產(chǎn)工藝中可大大簡化配料步驟，同時，可避免輔料成分復雜帶來的難以預料的副作用；輔料用量越少，生產(chǎn)工藝中越容易進行，成本相對較低。因此，本發(fā)明僅僅選用苯丙氨酸和右旋糖酐40作為輔料。
本發(fā)明加入的苯丙氨酸對亞葉酸鈣有良好的助溶作用，解決了其水溶性差的問題，避免引入過多的雜質，某些無機鹽助溶劑的加入會使凍干粉針出現(xiàn)體積縮小、硬殼和脆散等現(xiàn)象；同時苯丙氨酸也有很好的膨松骨架作用，通過添加苯丙氨酸使得所制備的亞葉酸鈣凍干粉針基本保持原來的體積，色澤均勻，易于溶解形成澄明的溶液。
所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針，其特征在于所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸組合物的凍干粉針的制備方法為 (1)依處方量稱取賦形劑與苯丙氨酸，溶于注射用水中，加入1％(w/v)針用活性炭，攪拌，趁熱過濾除炭。
(2)依處方量稱取亞葉酸鈣，溶于注射用水中，加入針用活性炭，攪拌，趁熱過濾除炭。
(3)將步驟(1)、步驟(2)得到的兩濾液合并，補充注射用水至足量，同時調節(jié)溶液pH值。
(4)將步驟(3)得到的合格藥液過濾，無菌條件下分裝，冷凍干燥后壓蓋、鋁封，即得。
所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸組合物的凍干粉針，其特征在于，所述的步驟(2)中活性炭的用量為溶液體積的0.5％。
本發(fā)明還要求保護所述的制備方法中針用活性炭的用量?；钚蕴康挠昧坑绊懏a(chǎn)品，如果活性炭用量太多，會導致吸附溶液中的活性成分，使其產(chǎn)品的產(chǎn)率降低，如果活性炭用量太少，不能完全將溶液脫色、去熱源、除雜質，進而影響產(chǎn)品的質量、純度等性能。所以對活性炭的用量的選擇應該綜合考慮。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在亞葉酸鈣和苯丙氨酸組合物的溶液中，加入0.5％(g/mL)的活性炭，此時活性炭對主藥亞葉酸鈣幾乎不存在吸附作用，過濾之后為淺黃色澄清溶液，經(jīng)活性炭吸附后的亞葉酸鈣進行有關物質的檢測，其總雜質在0.6％以下，最大雜質在0.2％以下，細菌內毒素符合規(guī)定。詳見實驗例1。
所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，其特征在于在制備用于治療貧血和解毒藥物中的應用。
本發(fā)明的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物及其制備方法與最接近的現(xiàn)有相近技術相比，具有以下優(yōu)點 本發(fā)明通過加入苯丙氨酸，降低甲氨喋呤毒副作用，同時，還增加了氟尿嘧啶的抗腫瘤活性；提高了亞葉酸鈣凍干粉針的水溶性，較易制成高濃度的制劑，方便臨床用藥；輔料用量少，可以最大可能的避免輔料之間的相互作用或者輔料對藥物、人體的負面影響；本發(fā)明通過對亞葉酸鈣處方和凍干工藝的改進，使所制得的亞葉酸鈣凍干粉的質地疏松，加水后能迅速溶解而恢復藥液的原有特性，并且亞葉酸鈣的穩(wěn)定性提高。同時，使得所得產(chǎn)品起效快，生物利用度高；劑量可控，外觀優(yōu)良；制作工藝簡單，使用可靠、方便，安全實用，能降低生產(chǎn)成本，適用于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
以下通過實驗例進一步闡述本發(fā)明的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的有益效果，但不應將此理解為本發(fā)明的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物僅具有下列有益效果。
實驗例1活性炭濃度的篩選實驗 分別選用不同濃度的注射用活性炭進行吸附，以亞葉酸鈣的含量為考察指標，篩選活性炭的用量。具體實驗方法和結果如下 1、實驗方法 取亞葉酸鈣原料87.5g，溶于300ml 50-60℃的注射用水中，取溶液75ml四份，分別不加和加入1％、0.5％、0.3％(w/v)針用活性炭，于50-60℃溫度下吸附15分鐘后，趁熱過濾除炭，濾液加水定容至250ml，分別取樣檢測各溶液中亞葉酸鈣的含量。
2、實驗結果 表1亞葉酸鈣用炭量篩選實驗結果
根據(jù)實驗結果，加炭量為0.3％和0.5％時對亞葉酸鈣含量的影響都比較小。為了能完全將溶液脫色、去熱源、除雜質，有效保證產(chǎn)品的質量、純度等性能，所以綜合考慮后，確定以0.5％(w/v)量活性炭，于50-60℃條件下吸附15分鐘。
實驗例2穩(wěn)定性實驗 本實驗例是利用本發(fā)明所制備的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針與專利CN1456162A左亞葉酸鈣凍干粉針產(chǎn)品進行穩(wěn)定性實驗(包括加速實驗、室溫留樣實驗和影響因素實驗)來比較兩者的穩(wěn)定性。
本發(fā)明的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針采用實施例4的方法制備，專利CN1456162A的左亞葉酸鈣凍干粉針采用專利中優(yōu)選處方(左亞葉酸鈣100mg，右旋糖酐20mg，注射用水20ml)、依專利中提及的凍干制品的方法制備。具體實驗及結果如下 1、實驗方法及結果 (1)加速實驗 將本發(fā)明的組合物和專利CN1456162A的樣品模擬上市包裝，于溫度40℃±2℃條件下，進行加速實驗，分別于第1、2、3、6月，取樣考察性狀、酸堿度、澄明度、有關物質和含量，測定結果與0月數(shù)后比較，結果見表2。
表2加速實驗結果
由加速實驗結果可見，本發(fā)明組合物于溫度40℃±2℃條件下放置6個月后，性狀、酸堿度均無明顯改變，澄明度符合規(guī)定，有關物質和含量變化也很小，與專利CN1456162A樣品比較，穩(wěn)定性更好。
(2)室溫留樣實驗 將本發(fā)明的組合物和專利CN1456162A的樣品模擬上市包裝，分別于3、6、9月取樣，考察性狀、酸堿度、澄明度、有關物質和含量，測定結果與0月數(shù)值比較，結果見表3。
表3長期實驗考察結果
由長期實驗考察結果可見，本發(fā)明組合物放置9個月后，性狀、酸堿度均無明顯改變，澄明度符合規(guī)定，有關物質和含量變化也很?。欢鴮＠鸆N1456162A樣品的有關物質和含量變化較為明顯。說明本發(fā)明組合物的穩(wěn)定性更好。
(3)影響因素實驗 將本發(fā)明的組合物和專利CN1456162A的樣品分別置于光照(照度4000±500Lx)、高溫(溫度60℃)、高濕(相對濕度92.5％)的條件下，于5、10天分別取樣，考察性狀、酸度、有關物質和含量，測定結果與0月數(shù)值比較，結果見表4。
表4影響因素實驗結果
由影響因素實驗結果可見，本發(fā)明組合物在不同影響條件下放置10天后，性狀、酸堿度均無明顯改變，有關物質和含量變化微小，與專利CN1456162A樣品比較，穩(wěn)定性更好。
2、結論 穩(wěn)定性實驗(包括加速實驗、室溫留樣實驗和影響因素實驗)結果顯示本發(fā)明的亞葉酸鈣和苯丙氨酸組合物的穩(wěn)定性好，相對于專利CN1456162A的制劑更加穩(wěn)定，更適合長期儲存，更適用于工業(yè)大生產(chǎn)。
實驗例3凍干粉針性能檢測 本實驗例對五批本發(fā)明的亞葉酸鈣與苯丙氨酸組合物的凍干粉針性能檢測，具體檢測方法均按照《中國藥典》2005年版二部，結果見下表 表5本發(fā)明的亞葉酸鈣與苯丙氨酸組合物凍干粉針的性能檢測
可以得知，本發(fā)明所得亞葉酸鈣與苯丙氨酸組合物的凍干粉針的各項性能均合格，并且有關物質的含量、水分含量均比現(xiàn)有技術提高。
實驗例4溶解速度實驗 本實驗例是利用本發(fā)明所制備的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針與專利CN1456162A左亞葉酸鈣凍干粉針產(chǎn)品進行溶解速度對比研究。
本發(fā)明的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針采用實施例4的方法制備，專利CN1456162A的左亞葉酸鈣凍干粉針采用專利中優(yōu)選處方(左亞葉酸鈣100mg，右旋糖酐20mg，注射用水20ml)、依專利中提及的凍干制品的方法制備。
按中國藥典中亞葉酸鈣的pH測定方法，分別測定本發(fā)明與專利CN1456162A處方的pH值。分別取1g，加100mL水，輕輕振搖測定其溶解速度。對比測定結果如下表 表6本發(fā)明和專利CN101224196鹽酸氨溴索的溶解速度
結果顯示本發(fā)明制得凍干粉針的溶解速度遠遠快于專利CN1456162A制得凍干粉針的溶解速度。
實驗例5對氟脲嘧啶增效作用的體外比較實驗 1、材料與藥品 取30例胃癌患者術后新鮮活體組織標本置于RPMI-1640培養(yǎng)液中，4h內制備成單細胞懸液。
實驗采用的化療藥物均為臨床常用注射液5-Fu、順鉑(cisplatin，DDP)、絲裂霉素(mitomycin，MMC)(山東齊魯制藥廠)，吡喃阿霉素(pirarubicin，THP-ADM)(深圳萬樂制藥有限公司)、羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin，HCPT)(湖北黃石制藥集團)、足葉乙甙(etoposide，VP-16)(江蘇連云港恒瑞制藥集團)、亞葉酸鈣(浙江萬馬藥業(yè)有限公司)、本發(fā)明組合物(以實施例4處方及工藝自制)。
2、方法 2.1、抗癌藥物劑量 根據(jù)臨床化療藥物成人靜脈常用劑量，按Limberg公式計算。
2.2、單細胞懸液制備 上述標本用PBS洗凈后剪成1mm×1mlTl×1mm碎塊，置于100目不銹鋼網(wǎng)上輕碾，邊以PBS沖洗，邊收集沖下的懸液，然后用200目尼龍膜過濾，1500r/min離心5min.PBS洗2次，去上清，沉淀細胞加RPMI-1640培養(yǎng)液，待用。
2.3、MTT法檢測 根據(jù)Mosmann建立的方法，先在96孔板上每孔加入細胞懸液80μL，實驗組和對照組再分別加入藥液和PBS，使終體積為100μL；每塊板設不加藥的腫瘤細胞對照組和無細胞的空白對照組。培養(yǎng)板放在37℃、5％ CO2的培養(yǎng)箱中孵育48h后，每孔加入MTT液10μL，孵育4h。吸取培養(yǎng)液，加入二甲基亞砜100μL。將培養(yǎng)板震蕩10min后，在自動酶標儀吸收波長570nm條件下測定吸光度(OD值)。
2.4、評價指標 評價指標為細胞抑制率(cells inhibitory，CI)。先計算各孔平均OD值，再根據(jù)[(1-實驗組OD值/對照組OD值)×100]計算各組CI值。
2.5、統(tǒng)計學方法 采用SPSS 10.0軟件包進行處理.數(shù)據(jù)以(mean±s)表示，經(jīng)方差齊性檢驗，各組間行配對t檢驗。
3、結果與結論 3.1、不同化療方案的OD值見表7。
LFAM方案X，5-Fu，THP-ADM，MMC； HLFP方案X，HCPT，5-Fu，DDP； LFAP方案X，5-Fu，THP-ADM，DDP； ELF方案X，VP-16，5-Fu。
其中X為亞葉酸鈣或本發(fā)明組合物。
表74種化療方案中OD值比較 n＝30，mean±s
*P＜0.05，t檢驗，20mg·m-2 從表中數(shù)據(jù)可見，X為本發(fā)明組合物的方案的OD值低于X為亞葉酸鈣的方案的OD值.且有顯著性差異(P＜0.05)。
3.2、不同化療方案的CI值見表8。
表84種化療方案中CI值比較 n＝30，mean±s，％
*P＜0.05，t檢驗，20mg·m-2 上述4種方案中，X為本發(fā)明組合物的方案的OD值高于X為亞葉酸鈣的方案的OD值，且有顯著性差異(P＜0.05)。
結論從OD值和CI值的比較結果可以看出，本發(fā)明組合物體外增強5-Fu的治療效果高于單獨的亞葉酸鈣，且有顯著性差異(P＜0.05)。
實驗例6對大劑量甲氨喋呤的解毒作用 1、材料 動物昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18～22g。
藥品亞葉酸鈣(原料)為浙江萬馬藥業(yè)有限公司產(chǎn)品； 甲氨喋呤(MTX)，連云港恒瑞制藥有限公司生產(chǎn)； 本發(fā)明組合物(以實施例4處方及工藝自制)。
2、方法 2.1、亞葉酸鈣(CF)對大劑量MTX毒性的影響 取100只昆明種小鼠，雌雄各半，稱重后隨機分成4組，每組25只動物，即正常對照組(等容積生理鹽水)、模型組、CF組及本發(fā)明組合物組。給小鼠皮下注射MTX(800mg·kg-1)，20小時后CF或本發(fā)明組合物灌胃，每天2次，連續(xù)3天，觀察小鼠的死亡情況。
2.2、統(tǒng)計方法 計量資料結果以mean±s表示，組間比較采用t檢驗；死亡率比較采用X檢驗。
3、結果與結論 按表9分組與給藥。
表9亞葉酸鈣對大劑量甲氨喋呤的解毒作用 (mean±s，n＝25)
注與模型組比較*P＜0.05，觀察時間為7天。
結論本發(fā)明組合物與MTX恰當?shù)穆?lián)合應用，和CF與MTX聯(lián)合應用比較，小鼠生存率及存活時間均顯著提高，更能提高機體對MTX的耐受性，即減弱MTX的毒性作用能力增強，即使在相同毒性反應下，可用較大劑量的MTX，提高MTX的抗腫瘤作用，延長患者的生存時間。
具體實施例方式 以下通過實施例和實驗例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發(fā)明上述內容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
實施例本發(fā)明的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物凍干粉針制劑的制備 1、處方 處方1 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸5g 右旋糖酐40 55g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方2 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸10g 右旋糖酐40 50g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方3 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸15g 右旋糖酐40 45g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方4 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸20g 右旋糖酐40 40g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方5 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸25g 右旋糖酐40 35g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方6 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸30g 右旋糖酐40 30g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方7 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸40g 右旋糖酐40 20g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方8 亞葉酸鈣100g 苯丙氨酸50g 右旋糖酐40 10g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方9 亞葉酸鈣200g 苯丙氨酸10g 右旋糖酐40 50g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方10 亞葉酸鈣200g 苯丙氨酸20g 右旋糖酐40 40g 注射用水加至1200mL 共制成 1000瓶 處方11 亞葉酸鈣 200g 苯丙氨酸 30g 右旋糖酐4030g 注射用水加至 1200mL 共制成1000瓶 處方12 亞葉酸鈣 200g 苯丙氨酸 35g 甘露醇25g 注射用水加至 1200mL 共制成1000瓶 處方13 亞葉酸鈣 200g 苯丙氨酸 40g 右旋糖酐4020g 注射用水加至 1200mL 共制成1000瓶 處方14 亞葉酸鈣 200g 苯丙氨酸 45g 右旋糖酐4015g 注射用水加至 1200mL 共制成1000瓶 處方15 亞葉酸鈣 200g 苯丙氨酸 50g 右旋糖酐4010g 注射用水加至 1200mL 共制成1000瓶 2、制備方法 (1)依處方量稱取右旋糖酐40和苯丙氨酸，溶于總液量60％的90-100℃注射用水中，加入1％(w/v)針用活性炭，保持溫度攪拌吸附15分鐘，趁熱過濾除炭，備用。
(2)依處方量稱取亞葉酸鈣，溶于總液量30％的50-60℃注射用水中，加入0.5％(w/v)針用活性炭，保持溫度攪拌吸附15分鐘，趁熱過濾除炭，備用。
(3)將上述兩濾液合并，補充注射用水至足量，同時調節(jié)溶液pH值為7.0-8.0，取樣做中間體檢測。
(4)合格藥液以0.45μm微孔濾膜粗濾后，再以0.22μm微孔濾膜做除菌過濾。
(5)百級層流條件下無菌分裝于處理好的抗生素瓶中，以處理好的硅化丁基塞半壓塞，放入冷凍干燥機內。
(6)于-40℃條件下預凍10小時，抽真空升華16-18小時，升溫干燥2-3小時，壓膠塞，從冷凍干燥機內取出。
(7)以處理好的鋁塑蓋鎖口，取樣進行半成品檢測。
(8)合格品貼標簽，裝盒及大箱。
權利要求
1.一種含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，其特征在于所述的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比為1∶0.01～0.8。
2.如權利要求1所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，其特征在于所述的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比為1∶0.05～0.5。
3.如權利要求2所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，其特征在于所述的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比為1∶0.1～0.3。
4.如權利要求3所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，其特征在于所述的亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比為1∶0.2。
5.如權利要求1～4任一項權利要求所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，其特征在于所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物為凍干粉針制劑。
6.如權利要求5所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針，其特征在于其凍干粉針加入賦形劑，所述的賦形劑選自甘露醇、山梨醇、右旋糖酐40、葡萄糖、木糖醇、乳糖、果糖、麥芽糖或氯化鈉。
7.如權利要求6所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針，其特征在于所述的賦形劑選自右旋糖酐40。
8.如權利要求6～7任一項權利要求所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物的凍干粉針，其特征在于所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸組合物的凍干粉針的制備方法為
(1)依處方量稱取賦形劑與苯丙氨酸，溶于注射用水中，加入1％(w/v)針用活性炭，攪拌，趁熱過濾除炭。
(2)依處方量稱取亞葉酸鈣，溶于注射用水中，加入針用活性炭，攪拌，趁熱過濾除炭。
(3)將步驟(1)、步驟(2)得到的兩濾液合并，補充注射用水至足量，同時調節(jié)溶液pH值。
(4)將步驟(3)得到的合格藥液過濾，無菌條件下分裝，冷凍干燥后壓蓋、鋁封，即得。
9.如權利要求8所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸組合物的凍干粉針，其特征在于所述的步驟(2)中活性炭的用量為溶液體積的0.5％。
10.如權利要求1～4任一項權利要求所述的含有亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物，其特征在于在制備用于治療貧血和解毒藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種亞葉酸鈣與苯丙氨酸的組合物及其制備方法，其中，該組合物中亞葉酸鈣與苯丙氨酸的重量比為1∶0.01～0.8。本發(fā)明還提供了該組合物凍干粉針制劑的制備方法，以及該組合物在制備用于治療貧血和解毒藥物中的用途。
文檔編號A61K9/19GK101780083SQ20091000126
公開日2010年7月21日 申請日期2009年1月16日 優(yōu)先權日2009年1月16日
發(fā)明者車馮升, 郭維城, 賈中新, 霍彩霞, 孟憲慧 申請人:海南四環(huán)醫(yī)藥有限公司, 海南四環(huán)心腦血管藥物研究院有限公司