專利名稱：使用環(huán)磷酰胺治療神經(jīng)性自身免疫疾病的制作方法
使用環(huán)磷酰胺治療神經(jīng)性自身免疫疾病交叉引用本申請要求2008年7月25日提交的美國臨時申請第61/083，607號、2008年3月 17日提交的美國臨時申請第61/037，059號以及2007年10月1日提交的美國臨時申請第 60/997，074號的權(quán)益，通過引用將這些申請分別整體并入本文。
背景技術(shù)：
自身免疫疾病是一種以免疫系統(tǒng)無法識別自身為特征的疾病。神經(jīng)性自身免疫疾 病的例子包括，但不限于，多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力 綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、 自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直和精神分裂癥。多發(fā)性硬化癥是一種以神 經(jīng)元脫髓鞘和軸突的損傷以及神經(jīng)膠質(zhì)增生為特征的自身免疫疾病。多發(fā)性硬化癥影響約 2 到 150 人 /100，000 人。

發(fā)明內(nèi)容
在某些實施方案中，治療方法包括對患有神經(jīng)性自身免疫疾病的個體施用起免疫 清除劑(immimoablative agent)作用的藥劑。在某些實施方案中，免疫清除劑是化療劑、 生物制劑或放射性制劑。在某些實施方案中，化療劑是細(xì)胞生長抑制劑、烷化劑、抗代謝藥 和細(xì)胞毒性抗生素。在某些實施方案中，烷化劑是確唑堿(oxazophorine)。在某些實施方 案中，礎(chǔ)唑堿是環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，生物制劑是消耗T細(xì)胞的抗體。在某些實施 方案中，消耗T細(xì)胞的抗體是抗淋巴細(xì)胞球蛋白、抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)、抗IL-2受體抗 體、抗⑶-3受體抗體(如0KT3)或其組合。在進一步的實施方案中，在個體接受了治療有效量的免疫清除劑后，對個體施用 治療有效量的至少一種免疫系統(tǒng)重建劑(reconstituting agent)以重建個體被清除的免 疫系統(tǒng)。在某些實施方案中，這種免疫系統(tǒng)重建劑是集落刺激因子、造血干細(xì)胞或其組合。 在某些實施方案中，集落刺激因子是粒細(xì)胞_巨噬細(xì)胞CSF (GM-CSF)、粒細(xì)胞CSF (G-CSF)和 巨噬細(xì)胞CSF (M-CSF)或其組合。在某些實施方案中，在個體接受了(a)治療有效量的免疫清除劑；和(b)治療有效 量的至少一種免疫系統(tǒng)重建劑之后，對個體施用治療有效量的至少一種免疫調(diào)節(jié)劑。在某 些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是醋酸格拉默、5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷(AICAR)、干擾 素(如IFN β-Ia和IFNP-Ib)或其組合。本文在某些實施方案中公開了一種治療神經(jīng)性自身免疫疾病的方法，所述方法包 括向CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè)的臨界值的有此需要的個體施用(a)約10到 約70mg/kg/日的環(huán)磷酰胺；(b)約1到約10 μ g/kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子；以及(c) 約IOmg/日到約80mg/日的醋酸格拉默。在某些實施方案中，該方法進一步包括確定個體 CD4+T細(xì)胞中的醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，該方法進一步包括監(jiān)測個體CD4+T細(xì) 胞中的醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，向個體施用至少約50mg/kg/日的環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，向個體施用至少約5 μ g/kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子。在某些實施方案 中，向個體施用至少約40mg/日的醋酸格拉默。在某些實施方案中，該方法進一步包括使用 包括第一篩查、第二篩查和環(huán)磷酰胺限制分配的方法來控制該療法的使用。在某些實施方 案中，第一篩查包括(a)確定個體是否符合治療標(biāo)準(zhǔn)；(b)如果個體是女性，檢測個體懷孕 情況并為個體提供懷孕咨詢；(c)確定與個體CD4+T細(xì)胞相關(guān)的醛脫氫酶水平；和(d)為個 體匹配紅細(xì)胞和血小板供應(yīng)源。在某些實施方案中，第二篩查包括在個體是女性的情況下， 監(jiān)測其懷孕情況；和/或監(jiān)測不良事件。在某些實施方案中，不良事件是中毒(toxicity)。 在某些實施方案中，如果個體懷孕，和/或經(jīng)歷不良事件，則停止對其的治療。在某些實施 方案中，環(huán)磷酰胺的限制分配包括(a)為每個個體分配一個識別號碼；(b)使每個識別號 碼關(guān)聯(lián)一個環(huán)磷酰胺容器；和(c)對個體施用來自環(huán)磷酰胺容器的環(huán)磷酰胺，該個體的識 別號碼對應(yīng)于與所述容器關(guān)聯(lián)的識別號碼。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺至少連續(xù)施用約 4天。在某些實施方案中，在施用環(huán)磷酰胺完成后5到7天內(nèi)開始施用粒細(xì)胞集落刺激因 子。在某些實施方案中，對個體施用粒細(xì)胞集落刺激因子直至個體絕對嗜中性粒細(xì)胞計數(shù) 連續(xù)兩天超過約1. OX IO9個細(xì)胞/L。在某些實施方案中，在施用環(huán)磷酰胺完成后28到35 天內(nèi)開始施用醋酸格拉默。在某些實施方案中，醋酸格拉默的劑量至少約40mg/日。在某 些實施方案中，在開始施用醋酸格拉默2. 5到4個月內(nèi)，醋酸格拉默的劑量被減至約20mg/ 日。在某些實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、 急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其 組合。在某些實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。在某些實施方案中，多發(fā) 性硬化癥已復(fù)發(fā)。在某些實施方案中，多發(fā)性硬化癥在緩解。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺 從重構(gòu)的凍干環(huán)磷酰胺制得。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺通過靜脈內(nèi)施用。在某些實施 方案中，該方法進一步包括對個體施用多至約5mg/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白。
本發(fā)明某些實施方案公開了一種治療神經(jīng)性自身免疫疾病的方法，所述方法包 括向CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè)臨界值的有此需要的個體施用(a)約10到約 70mg/kg/日的環(huán)磷酰胺；(b)多至約5mg/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白；(c)約1到約10 μ g/ kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子。在某些實施方案中，該方法進一步包括確定個體⑶4+T細(xì)胞 中醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，該方法進一步包括監(jiān)測個體CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶 水平。在某些實施方案中，向個體施用至少約50mg/kg/日的環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中， 向個體施用至少約5 μ g/kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子。在某些實施方案中，向個體施用至 少約2.5yg/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白。在某些實施方案中，該方法進一步包括使用包括 第一篩查、第二篩查和環(huán)磷酰胺限制分配的方法來控制該療法的使用。在某些實施方案中， 第一篩查包括(a)確定個體是否符合治療標(biāo)準(zhǔn)；(b)如果個體是女性，檢測個體懷孕情況 并為個體提供懷孕咨詢；(c)確定與個體CD4+T細(xì)胞相關(guān)的醛脫氫酶水平；和(d)為個體匹 配紅細(xì)胞和血小板供應(yīng)源。在某些實施方案中，第二篩查包括在個體是女性的情況下，監(jiān)測 其懷孕情況；和/或監(jiān)測不良事件。在某些實施方案中，不良事件是中毒。在某些實施方案 中，如果個體懷孕，和/或經(jīng)歷不良事件，則停止對其的治療。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺 的限制分配包括(a)為每個個體分配一個識別號碼；(b)每個識別號碼關(guān)聯(lián)一個環(huán)磷酰胺 容器；和(c)對個體施用來自環(huán)磷酰胺容器的環(huán)磷酰胺，該個體的識別號碼對應(yīng)于與所述容器關(guān)聯(lián)的識別號碼。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺至少連續(xù)施用約4天。在某些實施方案 中，抗胸腺細(xì)胞球蛋白在環(huán)磷酰胺之前、之后或與環(huán)磷酰胺同時施用。在某些實施方案中， 在施用環(huán)磷酰胺完成后5到7天內(nèi)開始施用粒細(xì)胞集落刺激因子。在某些實施方案中，對 個體施用粒細(xì)胞集落刺激因子直至個體絕對嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過約1.0X109 個細(xì)胞/L。在某些實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜 合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或 狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂 癥或其組合。在某些實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。在某些實施方案 中，多發(fā)性硬化癥已復(fù)發(fā)。在某些實施方案中，多發(fā)性硬化癥在緩解。在某些實施方案中， 環(huán)磷酰胺從重構(gòu)的凍干環(huán)磷酰胺制得。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺通過靜脈內(nèi)施用。在 某些實施方案中，該方法進一步包括對個體施用約IOmg/日到約80mg/日的醋酸格拉默。本發(fā)明某些實施方案公開了一種選擇使用環(huán)磷酰胺治療的個體的方法，該方法包 括，如果個體生物樣品的醛脫氫酶水平超過預(yù)設(shè)的臨界值則為該個體選擇治療；或在所述 生物樣品的醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè)的臨界值的情況下選擇替代的治療。在某些實施方案 中，生物樣品是血液和/或白細(xì)胞。在某些實施方案中，白細(xì)胞是T細(xì)胞。在某些實施方案 中，T細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞。在某些實施方案中，通過熒光醛脫氫酶底物實驗測定醛脫氫酶水 平。在某些實施方案中，熒光醛脫氫酶底物是ALDEFLU0R , 。在某些實施方案中，通過測量 RNA水平測定醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，通過使生物樣品與醛脫氫酶抗體接觸來測 定醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，抗體是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的 或生物素化的。在某些實施方案中，對選定的個體施用環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，個體 患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無 力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳 疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。在某些實 施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。本發(fā)明某些實施方案公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，包括測定 至少第一生物樣品和第二生物樣品中的醛脫氫酶的水平，其中第一生物樣品和第二生物樣 品是在不同時間從個體取得的。在某些實施方案中，如果在生物樣品中觀察到的醛脫氫酶 水平超過預(yù)設(shè)的臨界值，則該方法進一步包括中斷治療。在某些實施方案中，基于在第一生 物樣品、第二生物樣品或其組合中觀察到的醛脫氫酶水平，該方法進一步包括修改治療。在 某些實施方案中，如果在第一生物樣品、第二生物樣品或其組合中觀察到的醛脫氫酶水平 超過預(yù)設(shè)臨界值，該方法進一步包括選擇替代的治療。在某些實施方案中，生物樣品是血液 和/或白細(xì)胞。在某些實施方案中，白細(xì)胞是τ細(xì)胞。在某些實施方案中，T細(xì)胞是CD4+T 細(xì)胞。在某些實施方案中，通過熒光醛脫氫酶底物實驗測定醛脫氫酶水平。在某些實施方 案中，熒光醛脫氫酶底物是ALDEFLUOR 。在某些實施方案中，通過測量RNA水平測定醛脫 氫酶水平。在某些實施方案中，通過使生物樣品與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫酶水平。 在某些實施方案中，抗體是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生物素化的。在 某些實施方案中，個體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌 無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊 髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。在某些實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。本發(fā)明某些實施方案公開了一種選擇使用環(huán)磷酰胺治療的個體的方法，該方法包 括使個體的生物樣品與環(huán)磷酰胺接觸。在某些實施方案中，該方法進一步包括在個體的生 物樣品與環(huán)磷酰胺接觸后測定樣本中細(xì)胞死亡水平。在某些實施方案中，生物樣品是血液 和/或白細(xì)胞。在某些實施方案中，白細(xì)胞是τ細(xì)胞。在某些實施方案中，T細(xì)胞是CD4+T 細(xì)胞。在某些實施方案中，通過熒光醛脫氫酶底物實驗測定醛脫氫酶水平。在某些實施方 案中，熒光醛脫氫酶底物是ALDEFLUOR。在某些實施方案中，通過測量RNA水平測定醛脫 氫酶水平。在某些實施方案中，通過使生物樣品與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫酶水平。 在某些實施方案中，抗體是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生物素化的。在 某些實施方案中，個體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌 無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊 髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其組合的神經(jīng)性自 身免疫疾病。在某些實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。本發(fā)明某些實施方案公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，該方法包 括使個體的生物樣品與環(huán)磷酰胺接觸。在某些實施方案中，該方法進一步包括在個體的生 物樣品與環(huán)磷酰胺接觸后測定樣本中細(xì)胞死亡水平。在某些實施方案中，如果生物樣品中 觀察到的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè)的臨界值，該方法進一步包括中斷治療。在某些實施方案 中，該方法進一步包括基于生物樣品中觀察到的細(xì)胞死亡水平來調(diào)整治療方法。在某些實 施方案中，如果生物樣品中觀察到的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè)的臨界值，該方法進一步包括 選擇替代的治療。在某些實施方案中，生物樣品是血液和/或白細(xì)胞。在某些實施方案中， 白細(xì)胞是τ細(xì)胞。在某些實施方案中，T細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞。在某些實施方案中，通過熒光醛 脫氫酶底物實驗測定醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，熒光醛脫氫酶底物是ALDEFLUOR. 。在某些實施方案中，通過測量RNA水平測定醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，通過使生 物樣品與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，抗體是同位素標(biāo)記 的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生物素化的。在某些實施方案中，個體患有選自多發(fā)性 硬化癥、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓 炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡 病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。在某些實施方案中，神經(jīng) 性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。本發(fā)明某些實施方案公開了一種組合物，該組合物包括溶液中的環(huán)磷酰胺，其中 溶液中的環(huán)磷酰胺是從凍干的環(huán)磷酰胺重構(gòu)的。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺在磷酸緩沖 鹽水中重構(gòu)。在某些實施方案中，溶液中環(huán)磷酰胺的濃度至少約20mg/ml。在某些實施方案 中，組合物在患有神經(jīng)性自身免疫疾病的個體中被用作免疫清除劑。在某些實施方案中，個 體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌 無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi) 耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。在某些 實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。附圖簡述本發(fā)明的新特征在附帶的權(quán)利要求中詳細(xì)地列出。參考下面提供了本發(fā)明原理的說明性實施例的詳細(xì)描述以及其附圖，可以更好理解本發(fā)明的特征和優(yōu)勢

圖1是一個說明性圖示，顯示了使用HiGa治療的個體在其接受隨訪的時間中，均 沒有經(jīng)歷MS的復(fù)發(fā)。發(fā)明詳述在某些實施方案中，治療方法包括對患有神經(jīng)性自身免疫疾病的個體施用起免疫 清除劑作用的藥劑。在某些實施方案中，免疫清除劑是化療劑、生物制劑或放射性制劑。在 某些實施方案中，化療劑是細(xì)胞生長抑制劑、烷化劑、抗代謝藥和細(xì)胞毒性抗生素。在某些 實施方案中，烷化劑是喊唑堿。在某些實施方案中，喊唑堿是環(huán)磷酰胺。在某些實施方案 中，生物制劑是消耗T細(xì)胞的抗體。在某些實施方案中，消耗T細(xì)胞的抗體是抗淋巴細(xì)胞球 蛋白、抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)、抗IL-2受體抗體、抗CD-3受體抗體(如0KT3)或其組合。在進一步的實施方案中，在個體接受了治療有效量的免疫清除劑后，對個體施用 治療有效量的至少一種免疫系統(tǒng)重建劑以重建個體被清除的免疫系統(tǒng)。在某些實施方案 中，這種免疫系統(tǒng)重建劑是集落刺激因子、造血干細(xì)胞或其組合。在某些實施方案中，集落 刺激因子是粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞CSF (GM-CSF)、粒細(xì)胞CSF (G-CSF)和巨噬細(xì)胞CSF (M-CSF)或 其組合。在某些實施方案中，在個體接受了(a)接受了治療有效量的免疫清除劑；和(b) 至少一種治療有效量的免疫系統(tǒng)重建劑之后，對個體施用至少一種治療有效量的免疫調(diào) 節(jié)劑。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是醋酸格拉默，5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷 (AICAR)、干擾素(如 IFN β -la、IFN β -lb)或其組合。術(shù)語定義除非另有所指，下面的術(shù)語在本申請和附帶的權(quán)利要求中使用時具有如下含義。術(shù)語“淋巴細(xì)胞”包括，非限制性舉例，B細(xì)胞、T細(xì)胞、NKT細(xì)胞、和NK細(xì)胞。在某 些實施方案中，淋巴細(xì)胞是指未成熟的、成熟的、未分化的、分化的白淋巴細(xì)胞群體，包括組 織特異的和專門的種類。在某些實施例中，淋巴細(xì)胞包括B淋巴細(xì)胞譜系，B淋巴細(xì)胞譜系 包括前B細(xì)胞、祖B細(xì)胞、早期祖B細(xì)胞、晚期祖B細(xì)胞、大前B細(xì)胞、小前B細(xì)胞、未成熟的 B細(xì)胞、成熟的B細(xì)胞、血漿B細(xì)胞、記憶B細(xì)胞、B-I細(xì)胞、B-2細(xì)胞和無能AN1/T3細(xì)胞群 體。術(shù)語B細(xì)胞是指，非限制性舉例，前B細(xì)胞、祖B細(xì)胞、早期祖B細(xì)胞、晚期祖B細(xì) 胞、大前B細(xì)胞、小前B細(xì)胞、未成熟的B細(xì)胞、成熟的B細(xì)胞、血漿B細(xì)胞、記憶B細(xì)胞、B-I 細(xì)胞、B-2細(xì)胞和無能AN1/T3細(xì)胞群體。在某些實施例中，術(shù)語B細(xì)胞包括在其細(xì)胞表面表 達免疫球蛋白重鏈和/或輕鏈的B細(xì)胞。在某些實施例中，術(shù)語B細(xì)胞包括表達和分泌免 疫球蛋白重鏈和/或輕鏈的B細(xì)胞。在某些實施例中，術(shù)語B細(xì)胞包括與抗原在其細(xì)胞表 面結(jié)合的細(xì)胞。在本文公開的在某些實施方案中，在所描述的過程中使用B細(xì)胞或ANT1/T3 細(xì)胞。在某些實施方案中，這樣的細(xì)胞任選地被適合表達、能夠表達(如，可誘導(dǎo)的表達) 或能夠分化成適合表達抗體的細(xì)胞的任意動物細(xì)胞替代，包括，例如造血干細(xì)胞、B細(xì)胞、前 B細(xì)胞、祖B細(xì)胞、早期祖B細(xì)胞、晚期祖B細(xì)胞、大前B細(xì)胞、小前B細(xì)胞、未成熟的B細(xì)胞、 成熟的B細(xì)胞、血漿B細(xì)胞、記憶B細(xì)胞、B-I細(xì)胞、B-2細(xì)胞、無能B細(xì)胞或無能AN1/T3細(xì) 胞。術(shù)語“抗原”是指能夠誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生的物質(zhì)。在某些實施例中，抗原是結(jié)合抗體可變區(qū)的物質(zhì)。術(shù)語“表達”是指一個或多個下列事件(1)在細(xì)胞內(nèi)從DNA序列生產(chǎn)RNA模板 (如，通過轉(zhuǎn)錄)；(2)在細(xì)胞內(nèi)加工RNA轉(zhuǎn)錄物(如，通過剪接、編輯、5’端帽形成和/或3’ 末端形成)；(3)在細(xì)胞內(nèi)，將RNA序列翻譯成多肽或蛋白；(4)細(xì)胞內(nèi)多肽或蛋白翻譯后的 修飾；(5)多肽或蛋白在細(xì)胞表面的呈遞；(6)從細(xì)胞中分泌或釋放蛋白或多肽。術(shù)語“抗體”是指單克隆抗體、多克隆抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、移植抗 體、人抗體、人源化抗體、合成抗體、嵌合抗體、駱駝化的抗體、單鏈Fvs (scFv)、單鏈抗體、 Fab片段、F(ab’)片段、二硫鍵連接Fvs (sdFv)、胞內(nèi)抗體和抗獨特型(抗-Id)抗體以及上 述任意抗體的抗原結(jié)合片段。特別是，包括免疫球蛋白分子或免疫球蛋白分子免疫活性片 段的抗體，即，包含抗原結(jié)合位點的分子。免疫球蛋白分子可以是任何類型(如IgG、IgE、 IgM、IgD、IgA 和 IgY)，任何種類(如 IgGp IgG2, IgG3、IgG4, IgA1 和 IgA2)或亞種類。術(shù)語 “抗體”和免疫球蛋白在最廣泛的意義上可以交換使用。不同種類免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和 三維構(gòu)造是本領(lǐng)域熟知的。在某些實施方案中抗體是更大的分子的一部分，由抗體與一個 或多個其他蛋白或肽共價或非共價連接組成。本文中的抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、嵌合抗體、人源化抗體、 雙特異性抗體、移植抗體、人抗體，以及其片段，包括以任何方式改造以減少在人中的免疫 原性的抗體。因此，例如，單克隆抗體和片段等，在本文包括“嵌合”抗體和“人源化”抗 體。通常，嵌合抗體包括與特定種類衍生出的或?qū)儆谔囟贵w種類或亞種類的抗體中的對 應(yīng)序列相同或同源的重鏈和/或輕鏈部分，而鏈的剩余部分與另一個特定種類衍生出的 抗體中的或?qū)儆诹硪粋€特定抗體種類或亞種類的對應(yīng)序列相同或同源，只要它們能表現(xiàn) 出需要的生物活性(U. S. Pat. No. 4，816，567) ；Morrison 等人，Proc. Natl Acad. Sci. 81 6851-6855(1984)。例如在某些實施方案中嵌合抗體包含源自鼠的可變區(qū)和源自人的恒定 區(qū)，其中恒定區(qū)包括與人IgG2和IgG4同源的序列。本領(lǐng)域中已知多種制備“嵌合”抗體 等的。非人(如鼠)抗體或片段的人源化形式是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片 段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab' ) 2或抗體的其它抗原結(jié)合序列)，其包含源自非人免疫球 蛋白的最小序列。人源化的抗體包括移植抗體或CDR移植抗體，其中一個或多個源自非人 抗體的互補決定區(qū)(CDRs)的部分或全部氨基酸序列被移植到人抗體的適當(dāng)位置，并保持 需要的原始非人抗體的結(jié)合特異性和/或親和力。在某些實施方案中，對應(yīng)的非人殘基取 代了人免疫球蛋白的Fv框架殘基。在某些實施方案中人源化的抗體包括在受體抗體中以 及植入的CDR或框架序列中均找不到的殘基。進行這些修飾以進一步完善抗體和優(yōu)化抗 體性能。在某些實施方案中，人源化抗體包括基本上全部，至少一個，通常兩個的可變區(qū)， 其中全部或基本上全部的CDR區(qū)與非人免疫球蛋白的CDR區(qū)對應(yīng)，而全部或基本上全部的 FR區(qū)是人免疫球蛋白共有序列的FR區(qū)。更多的細(xì)節(jié)，參見，如Jones等人，Nature 321 522-525(1986) ；Reichmann 等人，Nature 332 :323_329 (1988)和 Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2 593-596 (1992)。本領(lǐng)域中已知多種制備“人源化”抗體的方法。術(shù)語“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中可以互換使用，指氨基酸殘基的聚合物。 該術(shù)語適用于天然存在的氨基酸聚合物以及其中一個或多個氨基酸殘基是非天然存在的 氨基酸(如氨基酸類似物)的氨基酸聚合物。該術(shù)語涵蓋任意長度的氨基酸鏈，包括全長 蛋白質(zhì)，其中氨基酸殘基通過共價肽鍵相連。
術(shù)語“氨基酸”是指天然存在的或非天然存在的氨基酸，以及以與天然氨基酸類似 的方式作用的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。天然編碼氨基酸是20種常見氨基酸(丙氨 酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、 亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸)、吡 咯賴氨酸和硒代半胱氨酸。氨基酸類似物是指與天然存在的氨基酸具有相同的基本化學(xué)結(jié) 構(gòu)，即α碳與一個氫、一個羧基、一個氨基和一個R基相連的物質(zhì)，如高絲氨酸、正亮氨酸、 蛋氨酸亞砜、蛋氨酸甲基锍。這樣的類似物具有經(jīng)過修飾的R基(如正亮氨酸)或經(jīng)過修 飾的肽框架，但保留了與天然存在的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。 本文的氨基酸使用其被通常知曉的三字母符號或IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission推薦的單字母符號表示。同樣，核苷酸使用其被通常接受的單字 母代碼表示。術(shù)語“核酸”是指脫氧核糖核苷酸、脫氧核糖核苷、核糖核苷或核糖核苷酸以及其 單鏈或雙鏈形式的聚合物。除非特別限定，該術(shù)語涵蓋的核酸包括已知的，具有與提及到 的核酸類似的結(jié)合特性，并以與天然存在的核苷酸類似方式代謝的天然核苷酸類似物。除 非另有特別限定，該術(shù)語也指包括PNA(肽核酸)的寡核苷酸類似物，用于反義技術(shù)的DNA 類似物(硫代磷酸酯、氨基磷酸酯等)。除非另外說明，一個特定的核酸序列也暗含其保守 修飾的變體(包括但不限于，簡并密碼子替換)和互補序列以及明確表示出的序列。特別 是，簡并密碼子替換是通過使用混合堿基和/或脫氧肌苷殘基替換一個或多個選定的(或 全部)密碼子的第三位得到的序列(Batzer等人，Nucleic Acid Res. 19 =5081(1991)； Ohtsuka 等人，J. Biol. Chem. 260 2605-2608 (1985)；和 Cassol et al. (1992) ；Rossolini 等人 M01. Cell. Probes 8 :91_98 (1994))。術(shù)語“治療”、“療法”和“醫(yī)治”是指包括減輕、緩解或改善疾病或病癥(如MS、 Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力或橫貫性脊髓炎)以及 所述疾病或病癥的癥狀；防止另外的癥狀；緩解或防止癥狀潛在的代謝起因；抑制所述疾 病或病癥，如阻止所述疾病或病癥的發(fā)展；減輕所述疾病或病癥；引起所述疾病或病癥的 退行；減輕所述疾病或病癥導(dǎo)致的狀況；或預(yù)防性和/或治療性地終止所述疾病或病癥的 癥狀。術(shù)語“前藥”是指在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性形式的化合物或藥劑。在某些實施方案中，前 藥通過一個或多個步驟或過程在酶作用下代謝成為化合物生物上、醫(yī)藥上或治療上有活性 的形式。為生產(chǎn)前藥，將有藥學(xué)活性的化合物進行修飾，以使在體內(nèi)施用后，活性化合物再 次生成。在一個實施方案中，設(shè)計前藥以改變藥物的代謝穩(wěn)定性或傳輸特性來掩蔽副作用 或毒性，或改變藥物的其他性質(zhì)或特性。術(shù)語“個體”是用來指動物，優(yōu)選哺乳動物，包括人或非人的動物。術(shù)語個體、對象 和患者可以互換使用。這些術(shù)語均不要求個體正處于在專業(yè)醫(yī)療人員的護理下(如醫(yī)生、 護士、濟貧醫(yī)院護理工人、護理員或醫(yī)師助手)。術(shù)語“有效量”或“治療有效量”指所施用的本發(fā)明中所公開的藥劑的量是足夠的 量，可以預(yù)期所述量在一定程度上減輕一個或多個所治療疾病或病癥的癥狀。例如，施用環(huán) 磷酰胺的結(jié)果是減少和/或完全消除成熟的和/或未成熟的細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞、自然殺傷 細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞)。術(shù)語“治療有效量”包括，例如，預(yù)防有效量。本文公開的藥劑的“有效量”是可以在沒有過多的不良副作用的情況下有效獲得理想的藥理作用或 治療改善的量。應(yīng)當(dāng)理解，在某些實施方案中，由于施用的化合物代謝，個體的年齡、體重、 常規(guī)情況，所治療的疾病，所治療的疾病的嚴(yán)重程度以及處方醫(yī)師的判斷不同，“有效量”或 “治療有效量”會隨個體不同而變化。也應(yīng)當(dāng)理解，緩釋劑型中的“有效量”可以不同于基于 藥物動力學(xué)和藥效學(xué)的考慮的速釋劑型中的“有效量”。神經(jīng)件自身免疫疾病在某些實施方案中，因為自身免疫疾病治療個體(如個體已經(jīng)被診斷有自身免疫 疾病，個體被懷疑有自身免疫疾病，或個體有發(fā)展為自身免疫疾病的傾向)。在某些例子中， 自身免疫疾病以免疫系統(tǒng)攻擊自身(如，自身細(xì)胞)為特征。在某些實施方案中，自身免疫 疾病是神經(jīng)性自身免疫疾病(如，免疫系統(tǒng)攻擊大部分、基本上所有或部分的周圍神經(jīng)系 統(tǒng)，大部分、基本上所有或部分的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，神經(jīng)，神經(jīng)元和髓鞘)。在某些實施方案中， 神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜 合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、自 身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其組合。多發(fā)性硬化在某些實施方案中，神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化(也被稱為MS、播散性硬 化、播散性腦脊髓炎)。MS是一種自身免疫疾病，在某些情況下，以中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的脫髓 鞘和炎癥的反復(fù)發(fā)作為特征。在某些情況下，神經(jīng)元的脫髓鞘導(dǎo)致其傳導(dǎo)電信號能力的損害。MS的癥狀包括，但不限于，感覺的變化(如，感覺減退和感覺異常)、肌無力、肌肉 痙攣、行動困難、協(xié)調(diào)和/或平衡困難(如，共濟失調(diào))、說話困難(如，構(gòu)音障礙)、下咽困難 (如吞咽困難)、控制眼運動困難(如，眼球震顫)、視力障礙(如，復(fù)視)、疲勞、疼痛(如， 急性或慢性疼痛)、膀胱功能控制困難、腸功能控制困難和抑郁。MS通常表現(xiàn)為復(fù)發(fā)_緩解(RRMS)。復(fù)發(fā)-緩解MS由復(fù)發(fā)/加重期(如，無故和 意外的發(fā)生新癥狀，或舊癥狀復(fù)發(fā)，持續(xù)時間超過24小時)和隨后的緩解期(如，有有限的 MS癥狀或無MS癥狀的時期)組成。在約50%的診斷為RRMS的個體中，該病進展為繼發(fā)進 展MS。繼發(fā)進展MS(SPMS)的特點在于在復(fù)發(fā)-緩解MS的初始時期之后，在復(fù)發(fā)之間，神 經(jīng)系統(tǒng)的衰退仍然進展而沒有任何明確緩解期。在某些實施方案中，多發(fā)性硬化已經(jīng)復(fù)發(fā)。 在某些實施方案中，多發(fā)性硬化正在緩解。在某些實施方案中，多發(fā)性硬化處于進展期。MS通常使用McDonald標(biāo)準(zhǔn)診斷。表1中列出了基于個體的臨床表現(xiàn)診斷MS所需
的附加數(shù)據(jù)。
表 1殘疾進展和癥狀嚴(yán)重程度的主要臨床衡量標(biāo)準(zhǔn)是擴展殘疾狀態(tài)量表(Expanded Disability Status Scale)或EDSS?；诎藗€功能系統(tǒng)(視覺、腦干、感覺、小腦、括約肌、 大腦等)的神經(jīng)學(xué)檢查，作為被廣泛使用的臨床等級化標(biāo)度的EDSS的范圍是從0 (正常)到10(死于MS)。這是一種通過疾病嚴(yán)重程度分類MS個體的有用工具。它基于觀察者或神 經(jīng)學(xué)家通過結(jié)構(gòu)化的訪談得出的評分來衡量缺陷和殘疾程度。此外殘疾進展和癥狀嚴(yán)重程度的其它衡量標(biāo)準(zhǔn)是多發(fā)性硬化癥功能復(fù)合量表 (Multiple Sclerosis Functional Composite) (MSFC)。該表基于設(shè)計為測試步態(tài)、上肢靈 活度和認(rèn)知的三項個體測試的綜合評分。三項分測試為a) 25英尺限時步行(25TW) ；b)9 洞樁測試(9-HPT) ；c)同步聽覺系列加算測試(PASAT-3)。PASAT測驗要求個體將出現(xiàn)在聽 力磁帶中的連續(xù)數(shù)字相加并口頭反應(yīng)出其準(zhǔn)確的和。當(dāng)每個數(shù)字被放出時，個體必須將該 數(shù)字與其前面放出的數(shù)字相加而不是與個體前一個反應(yīng)相加。非限制性舉例，可以采用皮質(zhì)甾類(例如，靜脈注射500到IOOOmg甲潑尼龍，隨后 是遞減劑量的口服潑尼松，持續(xù)數(shù)周)，干擾素(如，IFNii-Ia和IFN β-Ib)，醋酸格拉默， 米托蒽醌和那他珠單抗治療MS癥狀。環(huán)磷酰胺本申請某些實施方案公開了通過使用環(huán)磷酰胺治療有此需要的個體的神經(jīng)性自 身免疫疾病的方法。本申請某些實施方案進一步公開了一種包含溶液中的環(huán)磷酰胺的組合 物，其中溶液中的環(huán)磷酰胺是由凍干的環(huán)磷酰胺重構(gòu)而得。環(huán)磷酰胺(N，N-雙(2-氯乙基)_1，3，2-氧氮磷雜環(huán)己烷-2-氨基2-氧化物)是 一種氮芥烷化劑。在某些情況下，其以前藥的形式(即，通過代謝轉(zhuǎn)化為活性形式的藥物 的無活性或低活性形式)施用給個體。在某些情況下，環(huán)磷酰胺在肝中被代謝成活性形式 (4-羥基環(huán)磷酰胺)以及活性形式的互變異構(gòu)體(醛磷酰胺)。在某些情況下，醛磷酰胺 被轉(zhuǎn)化成(a)羧基磷酰胺(一種無毒的代謝物)(通過醛脫氫酶(ALDH))；和(b)磷酰胺芥 (一種有毒的代謝物)。在某些情況下，ALDH在造血干細(xì)胞中高表達。在某些情況下，成熟 和未成熟的細(xì)胞(如，淋巴樣細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞)表達低水平 的ALDH。在某些情況下，磷酰胺芥只在具有低水平ALDH的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。在某些情況下，具 有高水平ALDH的細(xì)胞主要將醛磷酰胺代謝為羧基磷酰胺。在某些情況下，磷酰胺芥催化DNA交聯(lián)的形成。在某些情況下，在dG和另一 dG之 間，在5，-d(GAC)-3，交聯(lián)。在某些情況下，在DNA第一條鏈的dG和第一條鏈的另一個dG 之間交聯(lián)(鏈內(nèi)交聯(lián))。在某些情況下，在DNA第一條鏈的dG和第二條鏈的dG之間交聯(lián) (鏈間交聯(lián))。在某些情況下，鏈內(nèi)交聯(lián)和鏈間交聯(lián)的形成引起細(xì)胞死亡(如，凋亡)。在某些實施方案中，施用給有此需要的個體的環(huán)磷酰胺是脈沖式(或低劑量)的 環(huán)磷酰胺(如，最初400-1000mg/m2，逐漸增加至B和⑶4細(xì)胞減少到低于對照群體第五百 分位數(shù))。在某些實施方案中，施用給需要其的個體的環(huán)磷酰胺是高劑量的環(huán)磷酰胺。在某 些實施方案中，高劑量的環(huán)磷酰胺是“前期”高劑量用藥法(每天50mg/kgIV，連續(xù)4天)的 環(huán)磷酰胺，4天內(nèi)給藥總量為200mg/kg每人。在某些情況下，高劑量的環(huán)磷酰胺清除了大部 分或基本上全部的未成熟的和成熟的免疫系統(tǒng)成分。在某些情況下，高劑量的環(huán)磷酰胺清 除了無毒性量的造血干細(xì)胞。在某些情況下，高劑量的環(huán)磷酰胺沒有清除造血干細(xì)胞。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺被制成溶液。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺溶液包含 從凍干的環(huán)磷酰胺重構(gòu)的環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，凍干的環(huán)磷酰胺在磷酸鹽緩沖液 (PBS)、鹽溶液、水或其組合中被重構(gòu)。在某些實施方案中，高劑量環(huán)磷酰胺溶液的濃度為20mg/ml。在某些情況下，環(huán)磷酰胺在高濃度下(如，在超過15mg/ml的濃度下)緩慢重構(gòu)。 在某些情況下，凍干的環(huán)磷酰胺在高濃度下(如，在超過15mg/ml的濃度下)快速重構(gòu)。在 某些實施方案中，環(huán)磷酰胺通過靜脈內(nèi)施用給有此需要的個體。HiGa 治療本發(fā)明一些實施方案公開了一種治療有此需要的個體的神經(jīng)性自身免疫疾病的 方法，包括對個體施用(a)約10到約70mg/kg/日的環(huán)磷酰胺；(b)約1到約10 μ g/kg/日 的粒細(xì)胞集落刺激因子；和(c)約IOmg/日到約80mg/日的醋酸格拉默；如果與個體⑶4+T 細(xì)胞相關(guān)的醛脫氫酶水平超過預(yù)設(shè)的臨界值則停止對其治療。在某些實施方案中，對個體 施用約50mg/kg/日的環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，對個體施用約5 μ g/kg/日的粒細(xì)胞 集落刺激因子。在某些實施方案中，對個體施用約40mg/日的醋酸格拉默。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺是高劑量(每天50mg/kg IV，連續(xù)4天)的環(huán)磷酰 胺。在某些實施方案中，連續(xù)約4天每日施用環(huán)磷酰胺。在某些情況下，高劑量的環(huán)磷酰胺 清除了大部分或基本上全部的未成熟的和成熟的免疫系統(tǒng)成分。在某些情況下，高劑量的 環(huán)磷酰胺清除了無毒性量的造血干細(xì)胞。在某些情況下，高劑量的環(huán)磷酰胺沒有清除造血 干細(xì)胞。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺被制成溶液。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺溶液包 含從凍干環(huán)磷酰胺重構(gòu)的環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，凍干的環(huán)磷酰胺在磷酸鹽緩沖液 (PBS)、鹽溶液、水或其組合中被重構(gòu)。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺溶液濃度為20mg/ml。 在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺通過靜脈內(nèi)施用給有此需要的個體。在某些情況下，使用環(huán)磷酰胺免疫清除之后重建免疫系統(tǒng)。在某些情況下，使用初 始的，抗環(huán)磷酰胺的干細(xì)胞來重建免疫系統(tǒng)。在某些情況下，使用環(huán)磷酰胺治療的個體的MS 疾病活動完全終止。在某些情況下，某些個體的MS再次激活并開始顯示疾病進展。在某些 情況下，重建后的MS進程比治療前的慢。在某些實施方案中，在施用環(huán)磷酰胺完成后約6天開始施用粒細(xì)胞集落刺激因子 (GCSF或CSF3)。在某些實施方案中，對個體施用粒細(xì)胞集落刺激因子直至個體絕對嗜中性 粒細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過約1. OX IO9個細(xì)胞/L。在某些情況下，在施用環(huán)磷酰胺引起的可預(yù)見的短暫的減少后，GCSF幫助恢復(fù)嗜 中性粒細(xì)胞數(shù)量。GCSF是一種集落刺激因子激素。在某些情況下，可以在骨髓中的造血干 細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)GCSF受體。在某些情況下，GCSF與其受體的結(jié)合刺激骨髓產(chǎn)生和釋放粒細(xì)胞 和干細(xì)胞。它也刺激嗜中性粒細(xì)胞前體和成熟的嗜中性粒細(xì)胞的存活、增殖、分化和功能。在某些實施方案中，在施用環(huán)磷酰胺完成后約30天開始施用醋酸格拉默。在某些 實施方案中，每天施用雙倍劑量的GA。在某些實施方案中，皮下施用雙倍劑量的GA。醋酸格拉默(GA)是一種合成的氨基酸聚合物(4.7-llkDa)，由摩爾比為 4.2 3.4 1.4 1的L-丙氨酸，L-賴氨酸，L-谷氨酸和L-酪氨酸組成。它被用于治 療RRMS。在某些情況下，相比施用安慰劑的對照組，減少患RRMS的個體的病損和復(fù)發(fā)數(shù)目 大約需要3個月20mg的GA治療。在某些情況下，施用40mg每日劑量的GA，相比對照組，減 少患RRMS的個體的病損和復(fù)發(fā)數(shù)目需要的時間少于3個月。在某些情況下，GA與多種II類MHC分子以高親和性結(jié)合。在某些情況下，GA與 II類MHC分子的結(jié)合引起已與MHC溝結(jié)合的抗原的替換，導(dǎo)致T阻抑細(xì)胞的活化。在某些情況下，GA導(dǎo)致Th2調(diào)節(jié)T細(xì)胞的產(chǎn)生。進一步地，在某些情況下，GA是自身免疫疾病的一 種普遍抑制物(如，其可以抑制實驗性視網(wǎng)膜炎、移植物對宿主和宿主對移植物的免疫排 斥疾病，以及實驗性炎性腸病的發(fā)生)。本申請公開的方法中GA的使用時間和劑量平衡了兩種相競爭的考慮為了在 神經(jīng)性自身免疫疾病活動的任何可能的再次激活之前開始治療，要避免GA對免疫清除 (immunoablation)后的重建免疫系統(tǒng)的任何未知但可能的負(fù)面作用。在某些情況下，在免 疫清除后達到大于500個每ml嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)的中位時間約為2周。在某些實施方案 中，在免疫清除后1個月開始施用雙倍劑量的GA。在某些實施方案中，在免疫清除后1個月 開始施用GA以使免疫系統(tǒng)的重建避免受到GA的影響；但是，它為針對神經(jīng)性自身免疫疾病 的復(fù)發(fā)接種GA提供了足夠的時間。在某些實施方案中，3個月后醋酸格拉默劑量減少到約20mg/日。在某些實施方案中，對個體施用醋酸格拉默的時間不確定。在某些實施方案中，施 用醋酸格拉默直至個體不再有神經(jīng)性自身免疫疾病復(fù)發(fā)的危險。在某些實施方案中，施用 醋酸格拉默約6個月。在某些實施方案中，施用醋酸格拉默約1年。在某些實施方案中，施 用醋酸格拉默約2年。在某些實施方案中，施用醋酸格拉默約5年。在某些實施方案中，施 用醋酸格拉默約10年。在某些情況下，在使用高劑量環(huán)磷酰胺治療后加以醋酸格拉默治療顯示出協(xié)同作 用，即，僅使用高劑量環(huán)磷酰胺治療的個體的MS在約3個月到約1年后復(fù)發(fā)，而結(jié)合使用醋 酸格拉默的治療，MS至少1年沒有復(fù)發(fā)，在某些實施例中，超過1年沒有復(fù)發(fā)，參見，例如圖 1。HiCAT 治療本發(fā)明一些實施方案公開了一種治療有此需要的個體的多發(fā)性硬化癥的方法，該 方法包括對個體施用(a)約10到約70mg/kg/日的環(huán)磷酰胺；(b)約1到約10 μ g/kg/日的 粒細(xì)胞集落刺激因子；和(c)多至約5μ g/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白，其中如果個體不 符合治療標(biāo)準(zhǔn)；懷孕或?qū)⒁獞言?；如果與個體CD4+T細(xì)胞相關(guān)的醛脫氫酶水平超過某些對 一般人群CD4+T細(xì)胞ALDH平均活力預(yù)設(shè)的臨界值；沒有或不能提供治療的知情同意書；或 不能被匹配濃集紅細(xì)胞和血小板供應(yīng)源，則將其排除出治療。在某些實施方案中，向個體施 用約50mg/kg/日的環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，向個體施用約5 μ g/kg/日的粒細(xì)胞集 落刺激因子。在某些實施方案中，向個體施用約2. 5μ g/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺是高劑量的環(huán)磷酰胺(例如，每天50mg/kg IV，連續(xù) 4天)。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺連續(xù)約4天每日施用。在某些情況下，高劑量的環(huán)磷 酰胺清除了大部分或基本上全部的未成熟的和成熟的免疫系統(tǒng)成分。在某些情況下，高劑 量的環(huán)磷酰胺清除了無毒性量的造血干細(xì)胞。在某些情況下，高劑量的環(huán)磷酰胺沒有清除 造血干細(xì)胞。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺被制成溶液。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺溶液包含 從凍干的環(huán)磷酰胺重構(gòu)的環(huán)磷酰胺。在某些實施方案中，凍干的環(huán)磷酰胺在磷酸鹽緩沖液 (PBS)、鹽溶液、水或其組合中被重構(gòu)。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺溶液濃度為20mg/ml。 在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺通過靜脈內(nèi)施用給有此需要的個體。在某些情況下，使用環(huán)磷酰胺免疫清除之后重建免疫系統(tǒng)。在某些情況下，使用初始的，抗環(huán)磷酰胺的干細(xì)胞來重建免疫系統(tǒng)。在某些情況下，使用環(huán)磷酰胺治療的個體的MS 疾病活動完全終止。在某些情況下，某些個體的MS再次激活并開始顯示疾病進程。在某些情況下，MS 在施用環(huán)磷酰胺后再次激活是部分或完全由于環(huán)磷酰胺全部破壞自反應(yīng)T細(xì)胞的失敗。在 某些情況下，抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)清除血管內(nèi)存留的抗環(huán)磷酰胺性T細(xì)胞。在某些情 況下，在施用環(huán)磷酰胺治療之前、與其重疊、同時、或在其之后施用ATG，引起比單獨使用環(huán) 磷酰胺治療可得到的更高的免疫系統(tǒng)耐受性。在某些實施方案中，抗胸腺細(xì)胞球蛋白與環(huán)磷酰胺共同施用。在某些實施方案中， 抗胸腺細(xì)胞球蛋白在施用環(huán)磷酰胺之前、之后或與其同時施用。在某些實施方案中，施用粒 細(xì)胞集落刺激因子是在施用環(huán)磷酰胺完成后約6天開始。在某些實施方案中，施用粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF或CSF3)是在施用環(huán)磷酰胺 完成后約6天開始。在某些實施方案中，對個體施用粒細(xì)胞集落刺激因子直至個體絕對嗜 中性粒細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過1. OX IO9個細(xì)胞/L。在某些情況下，在施用環(huán)磷酰胺引起的可預(yù)見的短暫的減少后，GCSF幫助嗜中性 粒細(xì)胞恢復(fù)數(shù)量。GCSF是一種集落刺激因子激素。在某些情況下，可以在骨髓中的造血干 細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)GCSF受體。在某些情況下，GCSF與其受體的結(jié)合刺激了通過骨髓的粒細(xì)胞和 干細(xì)胞的產(chǎn)生和釋放。它也刺激嗜中性粒細(xì)胞前體和成熟的嗜中性粒細(xì)胞的存活、增殖、分 化和功能。在某些實施方案中，對個體施用粒細(xì)胞集落刺激因子直至個體絕對嗜中性粒細(xì)胞 計數(shù)連續(xù)兩天超過1. 0 X IO9個細(xì)胞/L。在某些實施方案中，該方法進一步包含在施用環(huán)磷酰胺完成后約30天施用雙倍 劑量的醋酸格拉默。在某些實施方案中，雙倍劑量的醋酸格拉默每日施用。在某些實施方 案中，雙倍劑量的醋酸格拉默皮下施用。在某些實施方案中，該方法進一步包含施用(a) CPA之外的其他磷酸噴唑；(b)不 同類型的抗胸腺細(xì)胞抗體，例如全部淋巴細(xì)胞和各種T細(xì)胞種類抗原的單克隆和多克隆抗 體；以及(c)在HiCy治療之前、與其同時或在其之后使用一系列抗胸腺細(xì)胞治療。個體控制和藥物分配方案在某些實施方案中，上述的方法進一步包括控制療法的使用，其中的控制包括第 一篩查、第二篩查和環(huán)磷酰胺限制分配。在某些實施方案中，第一篩查包括(a)確定個體是否符合治療標(biāo)準(zhǔn)；(b)如果個 體是女性，檢測個體懷孕情況并為個體提供懷孕咨詢；(c)確定與個體CD4+T細(xì)胞相關(guān)的醛 脫氫酶水平；和(d)為個體匹配濃集紅細(xì)胞和血小板供應(yīng)源。在某些實施方案中，治療標(biāo)準(zhǔn)包括納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)。在某些實施方案中，納入 標(biāo)準(zhǔn)包括a.個體年齡必須在18到70歲之間；b.個體必須有臨床上明確的神經(jīng)性自身免疫疾病的診斷(如根據(jù)McDonald標(biāo)準(zhǔn) 的復(fù)發(fā)_緩解型MS的明確診斷)；c.對于MS，在篩查時，個體腦部和/或脊髓MRI必須有兩個或更多的釓增強病損；d.對于MS，個體在過去一年中必須有至少一次臨床復(fù)發(fā)。
e.對于MS，對于MS，納入的個體EDSS必須介于0-6之間；f.在本方案的任何實驗之前，個體必須給出(并有權(quán)給出)書面知情同意書，包括 不被視為個體常規(guī)治療部分的篩選測試和評價；以及g.對于女性，加入研究之前懷孕測試結(jié)果為陰性；對于接受治療的個體，必須按順序符合所有的納入標(biāo)準(zhǔn)。在某些實施方案中，排除標(biāo)準(zhǔn)包括a.任何有懷孕風(fēng)險的個體；b.任何心臟射血分?jǐn)?shù)< 45%的個體；c.任何血清肌酐水平> 2. 0的個體；d.任何臨終或垂死的個體；e.任何膽紅素水平> 2. 0，和/或轉(zhuǎn)氨酶水平> 2x正常的個體；f.任何帶有起搏器或植入物而不能接受系列MRIs的個體；g.任何活動性感染的個體，直至感染消退；或h.任何WBC計數(shù)< 3000細(xì)胞/ μ L的個體；血小板< 100，000細(xì)胞/ μ L的個體； 和未輸血血紅蛋白< 10g/dl的個體。如果符合任何排除標(biāo)準(zhǔn)，個體則被排除出治療。在某些實施方案中，如果個體是女性，必須對個體進行懷孕測試并為其提供懷孕 咨詢。在某些實施方案中，懷孕咨詢包括建議個體不要懷孕。在某些實施方案中，懷孕咨詢 包括建議個體使用有效的節(jié)育手段(如禁欲；使用避孕套、避孕海綿、宮頸帽、殺精子劑、激 素避孕和宮內(nèi)避孕裝置；子宮切除術(shù)和輸卵管手術(shù))。在某些實施方案中，第一篩查包括確定與個體CD4+T細(xì)胞相關(guān)的醛脫氫酶水平。 在某些實施方案中，第一篩查包括確定與個體PBMC相關(guān)的細(xì)胞死亡水平。在某些實施方案中，第一篩查進一步包括對個體的基因分型，并從本申請描述的 基于環(huán)磷酰胺的治療中排除具有醛脫氫酶基因多態(tài)性的那些個體。在某些情況下，醛脫 氫酶基因這樣的多態(tài)性(如，ALDH1A1*2和ALDH1A1*3)會部分或全部導(dǎo)致醛脫氫酶基因 表達高于平均水平。在某些情況下，高于平均水平的基因表達部分或全部導(dǎo)致細(xì)胞(如， T細(xì)胞)具有超過平均水平的醛脫氫酶。在某些實施方案中，超過平均水平的醛脫氫酶部 分或全部導(dǎo)致了抗環(huán)磷酰胺治療的細(xì)胞。在某些情況下，這些個體對環(huán)磷酰胺治療不反應(yīng) 或反應(yīng)不佳。在某些情況下，非洲裔美國人具有醛脫氫酶基因多態(tài)性(如，ALDH1A1*2和 ALDH1A1*3)，其部分或全部導(dǎo)致醛脫氫酶基因表達高于平均水平。在某些情況下，非洲裔美 國人對環(huán)磷酰胺治療不反應(yīng)或反應(yīng)不佳。參見Scott，等人，Health-Related Effects of Genetic Variations of Alcohol-Metabolizing Enzymes in African Americans,Alcohol Research & Health, Vol. 30，No. 1，at 18 (2007)，為了這類公開內(nèi)容，通過引用將該文獻并 入本文。在某些實施方案中，第一篩查包括為個體匹配濃集紅細(xì)胞(RBC)供應(yīng)源。在某些 情況下，濃集RBC是從血漿中分離出的紅細(xì)胞、白細(xì)胞或其組合的制成品。在某些實施方案 中，對濃集RBC進行了輻照。在某些情況下，如果個體患有貧血癥則對其施用濃集RBC。在 某些情況下，免疫清除部分或全部導(dǎo)致貧血癥。在某些實施方案中，如果個體在接受本申請 描述的任何療法時發(fā)生了貧血癥則對其施用濃集RBC。
在某些實施方案中，第一篩查包括為個體匹配血小板供應(yīng)源。在某些情況下，如果 個體患有血小板減少癥(血小板減少)和血小板增多癥則對其施用血小板。在某些情況下， 免疫清除部分或全部導(dǎo)致血小板減少癥(血小板減少)和血小板增多癥。在某些實施方案 中，如果個體在接受本申請描述的任何療法時發(fā)生了血小板減少癥或血小板增多癥則對其 施用血小板。在某些實施方案中，第二篩查包括持續(xù)監(jiān)測個體的懷孕情況，和/或不良事件。對 經(jīng)歷不良事件的個體進行恰當(dāng)?shù)闹委?，并以適當(dāng)?shù)拈g隔進行觀察直至不良事件消退或穩(wěn) 定。不良事件要被報告。下面的信息涉及必須報告的每種不良事件。a.開始和消退(持續(xù))的日期和時間；b.嚴(yán)重程度(輕度、中度、重度)；i.輕度-個體癥狀僅僅是個體能覺察到或沒有使個體不適；沒有影響行為或功 能；通常不需要處方藥緩解癥狀，但也可能由于個體的特性而給予處方藥。ii.中度-癥狀嚴(yán)重到足以引起個體不適；影響日常活動表現(xiàn)；個體可以繼續(xù)進行 研究；可能需要對癥狀進行治療。iii.重度-癥狀引起嚴(yán)重不適；癥狀引起個體日常生活能力喪失或顯著影響日常 生活；嚴(yán)重程度可以使得被研究藥物的治療停止；可以對癥狀給予治療和/或讓個體住院。c.需要的治療或采取的措施；d.結(jié)果；以及e.與被研究的藥物的關(guān)系(無關(guān)、不太可能相關(guān)、可能相關(guān)、確定相關(guān))i.無關(guān)-反應(yīng)不符合被研究藥物施用的合理時間順序，而且這些反應(yīng)可能是個體 的臨床狀態(tài)或者對個體施用的其他治療模式產(chǎn)生的。ii.不太可能相關(guān)-反應(yīng)不符合被研究藥物施用的合理時間順序，或者這些反應(yīng) 可能是個體的臨床狀態(tài)或者對個體施用的其他治療模式產(chǎn)生的。iii.可能相關(guān)_反應(yīng)符合被研究藥物施用的合理時間順序，或該反應(yīng)符合被懷疑 的藥物已知的反應(yīng)方式，以及該反應(yīng)不能由個體的臨床狀態(tài)或?qū)€體施用的其他治療模式 的已知特點合理解釋。iv.確定_反應(yīng)符合被研究藥物施用的合理時間順序，而且該反應(yīng)符合被懷疑的 藥物已知的反應(yīng)方式，以及該反應(yīng)在再次施用藥物時復(fù)發(fā)，和/或隨停用藥物或減少劑量 而得到改善。嚴(yán)重不良事件(SAEs)按照WHO的指導(dǎo)被分類為IV和V級不良事件。這包括在接 受本發(fā)明公開的療法治療時嚴(yán)重性增加的跡象和癥狀。仔細(xì)監(jiān)測預(yù)期的不良事件如嗜中性 粒細(xì)胞減少和其他相關(guān)的毒性，但不將其定義為SAEs，除非盡管經(jīng)過適當(dāng)處理其仍威脅生 命。在某些實施方案中，如果個體懷孕，和/或經(jīng)歷足夠嚴(yán)重的不良事件則被排除出 治療。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺的限制分配包括(a)為每個個體分配一個識別號 碼；(b)每個識別號碼關(guān)聯(lián)一個環(huán)磷酰胺容器；和(c)對個體施用來自環(huán)磷酰胺容器的環(huán)磷 酰胺，該個體的識別號碼對應(yīng)于與所述容器關(guān)聯(lián)的識別號碼。在某些實施方案中，如果個體 通過了第一和第二篩查，則為其分配一個唯一的ID。在某些實施方案中，唯一的ID是數(shù)字的ID。在某些實施方案中，唯一的ID是字母的ID。在某些實施方案中，唯一的ID是字母 數(shù)字的ID。在某些實施方案中，唯一的ID是計算機生成的ID。在某些實施方案中，為唯一 的ID生成條碼。在某些實施方案中，防串改醫(yī)療腕帶貼有唯一的ID和/或條碼。在某些 實施方案中，醫(yī)療腕帶被置于個體上。在某些實施方案中，唯一的ID被傳送到制備待分配的環(huán)磷酰胺的場所。在某些實 施方案中，用于分配的制備包括制造環(huán)磷酰胺、凍干環(huán)磷酰胺、重構(gòu)環(huán)磷酰胺或其組合。在 某些實施方案中，唯一的ID被貼到環(huán)磷酰胺(如，凍干的或重構(gòu)的)的容器上。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺被送至施用場所，在此環(huán)磷酰胺被施用(輸液場所) 給其唯一的ID匹配容器上粘貼的唯一的ID和/或條碼的個體。在某些實施方案中，如果 環(huán)磷酰胺以凍干的形式被送至輸液場所，在輸液場所從凍干環(huán)磷酰胺重構(gòu)環(huán)磷酰胺。在某 些實施方案中，唯一的ID被粘貼在包含在輸液場所重構(gòu)的環(huán)磷酰胺的容器(如，IV包)上。在某些實施方案中，環(huán)磷酰胺被施用給其唯一的ID匹配容器上粘貼的唯一的ID 的個體。在某些實施方案中，粘貼至環(huán)磷酰胺上唯一的ID和/或條碼與個體醫(yī)療腕帶上的 唯一的ID和/或條碼相匹配。酵脫氫酶(ALDH)泖丨定本發(fā)明某些實施方案公開了測量個體生物樣品的醛脫氫酶水平的方法。在某些實 施方案中，如果多個成熟的和/或未成熟的細(xì)胞中的醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè)的臨界值，則 選擇該個體進行環(huán)磷酰胺治療。在某些實施方案中，如果多個造血干細(xì)胞中的醛脫氫酶水 平高于預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇該個體進行環(huán)磷酰胺治療。在某些實施方案中，如果多個成熟的和/或未成熟的細(xì)胞中的醛脫氫酶水平低于 預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇個體參加用于評價環(huán)磷酰胺治療神經(jīng)性自身免疫疾病(如，多發(fā)性 硬化、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、 紅斑狼瘡或其組合)有效性的臨床試驗。在某些實施方案中，如果多個造血干細(xì)胞中的醛 脫氫酶水平高于預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇該個體。在大多數(shù)或基本全部的情況下，如果個體沒有被選擇治療，則為個體選擇 替代治療。在某些實施方案中，替代治療是使用糖皮質(zhì)激素(如，靜脈注射500到 IOOOmg甲潑尼龍，隨后是遞減劑量的口服潑尼松，持續(xù)數(shù)周)、干擾素(如，IFNi3-Ia和 IFNi3 -Ib)、醋酸格拉默、米托蒽醌、那他珠單抗、阿倫單抗、BG00012(活菌制劑)、克拉屈 濱、dirucotide(MBP8298)、芬戈莫德、拉喹莫德、美羅華、特立氟胺、ATLl 102 (Teva and Antisense Therapeutics)、CDP323 (活菌制劑)、達克珠單抗，雌二醇，肌苷、neurovax、 tovaxin或其組合的治療。在某些實施方案中，使用大于一般人群中平均⑶4+T細(xì)胞ALDH活力的75百分位 數(shù)的臨界值來將個體排除出高劑量環(huán)磷酰胺的治療。在某些實施方案中，這些個體被使用 高劑量的環(huán)磷酰胺和相對更高水平的抗胸腺細(xì)胞球蛋白治療。治療前成熟禾Π /或未成熟細(xì)朐,中的脫顏j (ALDH)測丨定在某些實施方案中，生物樣品是成熟和/或未成熟細(xì)胞。在某些實施方案中，成熟 和/或未成熟細(xì)胞是白細(xì)胞。在某些實施方案中，白細(xì)胞是T細(xì)胞。在某些實施方案中，T 細(xì)胞是⑶4+T細(xì)胞。熒光測定
在某些實施方案中，多個成熟和/或未成熟細(xì)胞中的醛脫氫酶水平通過熒光醛脫 氫酶底物實驗測定。在某些實施方案中，使用覆蓋有磁珠的抗CD3和抗CD28活化多個成熟 和/或未成熟細(xì)胞中的多個T細(xì)胞24到48小時。在某些實施方案中，成熟和/或未成熟細(xì) 胞以亞致死劑量的環(huán)磷酰胺處理以誘導(dǎo)ALDH的表達。在某些實施方案中，所述多個成熟和 /或未成熟細(xì)胞使用熒光醛脫氫酶底物(如，ALDEFLU0R )和熒光抗CD4細(xì)胞表面標(biāo)記物 染色。在某些實施方案中，熒光水平可以使用任何適合的方法檢測和/或測量(如，通過使 用四色FACS流式細(xì)胞儀)。在某些實施方案中，通過任何適合的方法(如，使用CellQuest 軟件)從熒光水平推測醛脫氫酶底物水平。在某些實施方案中，測定所述多個成熟和/或 未成熟細(xì)胞中的CD4細(xì)胞的熒光醛脫氫酶底物的幾何平均熒光強度(MFI)。在某些實施方案中，在收集所述多個成熟和/或未成熟細(xì)胞后多于12小時測定醛 脫氫酶水平。在某些實施方案中，所述多個成熟和/或未成熟細(xì)胞是冷凍保存的。在某些實 施方案中，所述多個成熟和/或未成熟細(xì)胞是在，非限制性舉例，含5%人血清的Iscove' s Modified Dulbecco' s Medium(IMDM)中解凍的。在某些實施方案中，使用任何合適的方法(如，F(xiàn)icoll梯度密度離心)從所述多個 成熟和/或未成熟細(xì)胞中提取外周血單核細(xì)胞(PBMC)。在某些實施方案中，使用覆蓋有磁 珠的抗CD3和抗CD28活化所述多個PBMC中的多個T細(xì)胞24到48小時。在某些實施方案 中，PBMC以亞致死劑量的環(huán)磷酰胺處理以誘導(dǎo)ALDH的表達。在某些實施方案中，使用熒光 醛脫氫酶底物(如，ALDEFLU0R )和熒光抗⑶4細(xì)胞表面標(biāo)記物染色PBMC樣品。在某些 實施方案中，可以使用任何適合的方法(如，通過使用四色FACS流式細(xì)胞儀)檢測和/或 測量熒光水平。在某些實施方案中，通過任何適合的方法(如，使用CellQuest軟件)從熒 光水平推測醛脫氫酶底物水平。在某些實施方案中，測定PBMC中的CD4細(xì)胞的熒光醛脫氫 酶底物的幾何平均熒光強度(MFI)。在某些實施方案中，在收集所述多個PBMC后多于12小時測定醛脫氫酶水平。在 某些實施方案中，所述多個PBMC是冷凍保存的。在某些實施方案中，所述多個PBMC是在， 非限制性舉例，含5%人血清的Iscove' s Modified Dulbecco' s Medium(IMDM)中解凍 的。RNA 測定在某些實施方案中，通過測量編碼醛脫氫酶的RNA序列的水平來測定醛脫氫酶水 平。在某些實施方案中，測量醛脫氫酶的水平包括(a)使從所述多個成熟和/或未成熟細(xì) 胞中提取的RNA與探針接觸；(b)與探針接觸后，使用緩沖液(如FACS緩沖液)洗提取的 RNA(如，沖洗)；和(c)檢測和/或測量RNA/探針復(fù)合物的量。在某些實施方案中，使用任何適合的方式(如，溶解細(xì)胞隨后酚-氯仿提取)從成 熟和/或未成熟細(xì)胞中提取RNA。在某些實施方案中，提取的RNA與探針雜交。在某些實施 方案中，探針是與大部分、幾乎全部或部分編碼醛脫氫酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。 在某些實施方案中，探針是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的或熒光標(biāo)記的。在某些情況下，使 用任何適合的方法(如，HPLC、熒光顯微術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因組 反響、紅外光譜法或放射自顯影)檢測和/或測量RNA/探針復(fù)合物。在某些實施方案中， 探針從商業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些實施方案中，探針是自己合成的。在某些實施方案中，使用任何適合的方法(如，F(xiàn)icoll梯度密度離心)從所述多個成熟的和/或未成熟的細(xì)胞中提取多個外周血單核細(xì)胞(PBMC)。在某些實施方案中，使用 覆蓋有磁珠的抗⑶3和抗⑶28活化所述多個PBMC中的多個T細(xì)胞24到48小時。在某些 實施方案中，PBMC以亞致死劑量的環(huán)磷酰胺處理以誘導(dǎo)ALDH的表達。在某些實施方案中， 測量醛脫氫酶的水平包括(a)使從所述多個PBMC中提取的RNA與探針接觸；(b)與探針接 觸后，使用緩沖液(如FACS緩沖液)洗提取的RNA(如，沖洗)；(c)檢測和/或測量RNA/ 探針復(fù)合物的量。在某些實施方案中，探針從商業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些實施方案中，探針 是自己合成的。在某些實施方案中，使用任何適合的方式(如，溶解細(xì)胞隨后酚-氯仿提取)從所 述多個PBMC提取RNA。在某些實施方案中，提取的RNA與探針雜交。在某些實施方案中，探 針是與大部分、幾乎全部或部分編碼醛脫氫酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。在某些實 施方案中，探針是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的或熒光標(biāo)記的。在某些情況下，使用任何適 合的方法(如，HPLC、熒光顯微術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因組反響、紅 外光譜法或放射自顯影)檢測和/或測量RNA/探針復(fù)合物。在某些實施方案中，探針從商 業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些實施方案中，探針是自己合成的?？贵w檢測在某些實施方案中，通過使多個成熟和/或未成熟細(xì)胞與醛脫氫酶抗體接觸來測 定醛脫氫酶水平。在某些實施方案中，測量醛脫氫酶水平包括(a)溶解多個成熟和/或未 成熟細(xì)胞；(b)使多個成熟和/或未成熟細(xì)胞的溶解產(chǎn)物與醛脫氫酶抗體接觸；(C)與抗體 接觸后，使用緩沖液(如FACS緩沖液)洗抗體-溶解產(chǎn)物混合物(如，沖洗)；以及(d)檢 測和/或測量抗體/醛脫氫酶復(fù)合物的量。在某些實施方案中，抗體從商業(yè)供應(yīng)商處購買。 在某些實施方案中，抗體是自己制備的。制備抗體的方法，參見Kohler等人，Nature, 256 495(1975) ；U.S.Pat. No. 4, 816, 567 -M Goding, Monoclonal Antibodies =Principles and Practice (Academic Press, 1986) ；Ward ^A, Nature 341:544—546 (1989) ；Huse ^A, Science 246 1275-1281 (1989) ；McCafferty 等人，Nature 348:552-554(1990) ；Clackson 等人，Nature, 352 624-628 (1991)Marks 等人，J. Mol. Biol.，222 :581_597 (1991)，為了這 類公開內(nèi)容，通過引用將所有文獻并入本文。在某些實施方案中，溶解產(chǎn)物與抗體接觸時在 冰上溫育。在某些實施方案中，抗體是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生物 素化的。在某些實施方案中，熒光團是熒光素。在某些情況下，使用任何適合的方法(如， HPLC、熒光顯微術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因組反響、紅外光譜法或放射 自顯影)檢測和/或測量細(xì)胞表面標(biāo)記物/抗體復(fù)合物。在某些實施方案中，通過使所述多個PBMC與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫酶 水平。在某些實施方案中，測量醛脫氫酶水平包括(a)溶解多個PBMC;(b)使溶解產(chǎn)物與 醛脫氫酶抗體接觸；(c)與抗體接觸后，使用緩沖液(如FACS緩沖液)洗抗體-溶解產(chǎn) 物混合物(如，沖洗)；以及(d)檢測和/或測量抗體/醛脫氫酶復(fù)合物的量。在某些實 施方案中，抗體從商業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些實施方案中，抗體是自己制備的。制備抗體 的方法，參見 Kohler 等人，Nature, 256 495(1975) ；U. S. Pat. No. 4，816，567 ；或 Goding， Monoclonal Antibodies :Principles and Practice (Academic Press, 1986) ；Ward 等人， Nature 341:544-546(1989) ；Huse 等人，Science 246 1275-1281 (1989) ；McCafferty 等 人，Nature 348 :552_554 (1990) ；Clackson 等人，Nature, 352 :624_628 (1991)Marks 等人，J. Mol. Biol.，222 :581_597 (1991)，為了這類公開內(nèi)容，通過引用將所有文獻并入本文。在 某些實施方案中，所述多個PBMC與抗體接觸時在冰上溫育。在某些實施方案中，抗體是同 位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生物素化的。在某些實施方案中，熒光團是熒 光素。在某些情況下，使用任何適合的方法(如，HPLC、熒光顯微術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃 描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因組反響、紅外光譜法或放射自顯影)檢測和/或測量細(xì)胞表面標(biāo)記物 /抗體復(fù)合物。采用針對成熟和/未未成熟細(xì)胞的酵脫氫酶(ALDH)測定監(jiān)測接警環(huán)磷酰胺治療 的個體本申請在某些實施方案中進一步公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方 法，該方法包括測定至少第一批多個成熟和/或未成熟細(xì)胞中以及第二批多個成熟和/或 未成熟細(xì)胞中的醛脫氫酶的水平，其中所述第一批多個成熟的和/或未成熟的細(xì)胞以及所 述第二批多個成熟的和/或未成熟的細(xì)胞是在不同時間從個體中取得(如，在施用環(huán)磷酰 胺之前取樣品1，在施用環(huán)磷酰胺完成之后96小時取樣品2)。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果成熟和/或未成熟細(xì)胞中觀察到的醛 脫氫酶值超過預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果成熟 和/或未成熟細(xì)胞中觀察到的醛脫氫酶值超過預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代的治療。在某些實 施方案中，該方法進一步包括依據(jù)生物樣品中觀察到的醛脫氫酶水平調(diào)整治療。在某些實 施方案中，如果ALDH水平升高，則增加環(huán)磷酰胺劑量。在某些實施方案中，如果ALDH水平 降低，則減少環(huán)磷酰胺劑量。本申請某些實施例進一步公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，該方 法包括測定至少第一批多個PBMC中以及第二批多個PBMC中的醛脫氫酶的水平，其中所述 第一批多個PBMC以及所述第二批多個PBMC是在不同時間從個體中取得(如，在施用環(huán)磷 酰胺之前取樣品1，在施用環(huán)磷酰胺完成之后96小時取樣品2)。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果多個PBMC中觀察到的醛脫氫酶值超 過預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果多個PBMC中觀察 到的醛脫氫酶值超過預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代的治療。在某些實施方案中，該方法進一步 包括依據(jù)在多個PBMC中觀察到的醛脫氫酶水平調(diào)整治療。在某些實施方案中，如果ALDH 水平升高，則增加環(huán)磷酰胺劑量。在某些實施方案中，如果ALDH水平降低，則減少環(huán)磷酰胺 劑量。治療前骨髓中的酵脫氫酶(ALDH)泖丨定在某些實施方案中，生物樣品是骨髓(如，紅骨髓、黃骨髓、造血干細(xì)胞或其組 合)。在某些情況下，使用任何適合的方法(如骨髓活檢、骨髓抽吸)獲取骨髓。熒光檢測在某些實施方案中，骨髓中的醛脫氫酶水平通過熒光醛脫氫酶底物實驗測定。在 某些實施方案中，骨髓以亞致死劑量的環(huán)磷酰胺處理以誘導(dǎo)ALDH的表達。在某些實施方案 中，骨髓使用熒光醛脫氫酶底物(如，ALDEFLU0R)染色。在某些實施方案中，可以使用任何 適合的方法(如，通過使用四色FACS流式細(xì)胞儀)檢測和/或測量熒光水平。在某些實施 方案中，通過任何適合的方法(如，使用CellQuest軟件)從熒光水平推測醛脫氫酶底物水 平。
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在某些實施方案中，使用任何適合的方法從剩余骨髓分離造血干細(xì)胞。在某些實 施方案中，造血干細(xì)胞以亞致死劑量的環(huán)磷酰胺處理以誘導(dǎo)ALDH的表達。在某些實施方案 中，造血干細(xì)胞使用熒光醛脫氫酶底物(如，ALDEFLU0R)染色。在某些實施方案中，可以使 用任何適合的方法(如，通過使用四色FACS流式細(xì)胞儀)檢測和/或測量熒光水平。在某 些實施方案中，通過任何適合的方法(如，使用CellQuest軟件)測定的熒光水平推測醛脫 氫酶底物水平。RNA 檢測在某些實施方案中，通過測量編碼醛脫氫酶的RNA序列的水平來測定醛脫氫酶水 平。在某些實施方案中，測量醛脫氫酶的水平包括(a)使從骨髓中RNA與探針接觸；(b)與 探針接觸后，使用緩沖液(如FACS緩沖液)洗RNA (如，沖洗)；和(c)檢測和/或測量RNA/ 探針復(fù)合物的量。在某些實施方案中，探針從商業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些實施方案中，探針 是自己制備的。在某些實施方案中，使用任何適合的方式(如，溶解細(xì)胞，隨后酚-氯仿提取)從 骨髓中提取RNA。在某些實施方案中，提取的RNA與探針雜交。在某些實施方案中，探針是 與大部分、幾乎全部或部分編碼醛脫氫酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。在某些實施方 案中，探針是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的或熒光團標(biāo)記的。在某些情況下，使用任何適合 的方式(如，HPLC、熒光顯微術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因組反響、紅外 光譜法或放射自顯影)檢測和/或測量RNA/探針復(fù)合物。在某些實施方案中，使用任何適合的方法從剩余的骨髓中分離多個造血干細(xì)胞。 在某些實施方案中，測量醛脫氫酶的水平包括(a)使從多個造血干細(xì)胞中提取的RNA與探 針接觸；(b)與探針接觸后，使用緩沖液(如FACS緩沖液)洗RNA(如，沖洗)；和(c)檢測 和/或測量RNA/探針復(fù)合物的量。在某些實施方案中，探針從商業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些 實施方案中，探針是自己合成的。在某些實施方案中，使用任何適合的方法從剩余的骨髓中分離造血干細(xì)胞。使用 任何適合的方式(如，溶解細(xì)胞，隨后酚-氯仿提取)從造血干細(xì)胞中提取RNA。在某些實 施方案中，提取的RNA與探針雜交。在某些實施方案中，探針是與大部分、幾乎全部或部分 編碼醛脫氫酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。在某些實施方案中，探針是同位素標(biāo)記的、 放射性標(biāo)記的或熒光團標(biāo)記的。在某些情況下，使用任何適合的方法(如，HPLC、熒光顯微 術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因組反響、紅外光譜法或放射自顯影)檢測 和/或測量RNA/探針復(fù)合物?？贵w檢測在某些實施方案中，通過使骨髓與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫酶水平。在某 些實施方案中，測量醛脫氫酶水平包括(a)溶解骨髓樣品；(b)使骨髓的溶解產(chǎn)物與醛脫氫 酶抗體接觸；(c)與抗體接觸后，使用緩沖液(如FACS緩沖液)洗抗體-溶解產(chǎn)物混合物 (如，沖洗)；以及⑷檢測和/或測量抗體/醛脫氫酶復(fù)合物的量。在某些實施方案中， 抗體從商業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些實施方案中，抗體是自己制備的。制備抗體的方法，參 見 Kohler 等人，Nature, 256 495 (1975) ；U. S. Pat. No. 4，816，567 ；or Goding, Monoclonal Antibodies Principles and Practice (Academic Press, 1986) ；Ward 等人，Nature 341 544-546(1989) ；Huse 等人，Science 246 1275-1281(1989) ；McCafferty 等人，Nature348 552-554(1990) ；Clackson 等人，Nature, 352 624-628 (1991)Marks 等人，J. Mol. Biol.，222 :581-597(1991)，為了這類公開內(nèi)容將所有文獻通過引用并入本文。在某些實施 方案中，骨髓與抗體接觸時在冰上溫育。在某些實施方案中，抗體是同位素標(biāo)記的、放射性 標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生物素化的。在某些實施方案中，熒光團是熒光素。在某些情況下， 使用任何適合的方法(如，HPLC、熒光顯微術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因 組反響、紅外光譜法或放射自顯影)檢測和/或測量醛脫氫酶/抗體復(fù)合物。在某些實施方案中，通過使多個造血干細(xì)胞與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫 酶水平。在某些實施方案中，測量醛脫氫酶水平包括(a)溶解多個造血干細(xì)胞；(b)使造 血干細(xì)胞的溶解產(chǎn)物與醛脫氫酶抗體接觸；(c)與抗體接觸后，使用緩沖液(如FACS緩 沖液)洗抗體-溶解產(chǎn)物混合物(如，沖洗)；以及⑷檢測和/或測量抗體/醛脫氫 酶復(fù)合物的量。在某些實施方案中，抗體從商業(yè)供應(yīng)商處購買。在某些實施方案中，抗 體是自己制備的。制備抗體的方法，見Kohler等人，Nature, 256 =495(1975) ；U. S. Pat. No. 4, 816, 567 ；or Goding,Monoclonal Antibodies Principles and Practice(Academic Press,1986) ；Ward 等人，Nature 341 :544_546 (1989) ；Huse 等人，Science 246 1275-1281(1989) ；McCafferty 等人，Nature 348 552-554 (1990) ；Clackson 等人，Nature， 352 624-628 (1991)Marks 等人，J. Mol. Biol.，222 :581_597 (1991)，為了上述公開內(nèi)容將 所有文獻通過引用并入本文。在某些實施方案中，溶解產(chǎn)物與抗體接觸時在冰上溫育。在 某些實施方案中，抗體是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生物素化的。在某 些實施方案中，熒光團標(biāo)記是熒光素。在某些情況下，使用任何適合的方法(如，HPLC、熒 光顯微術(shù)、共焦顯微術(shù)、微陣列掃描儀、表面細(xì)胞質(zhì)基因組反響、紅外光譜法或放射自顯影) 檢測和/或測量醛脫氫酶/抗體復(fù)合物。采用針對骨髓的酵脫氫酶(ALDH)測定監(jiān)測接警環(huán)磷酰胺治療的個體本申請在某些實施方案中進一步公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方 法，該方法包括測定至少第一骨髓樣品中以及第二骨髓樣品中的醛脫氫酶的水平，其中第 一骨髓樣品以及第二骨髓樣品是在不同時間從個體中取得(如，在施用環(huán)磷酰胺之前取樣 品1，在施用環(huán)磷酰胺完成之后96小時取樣品2)。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果骨髓樣品中觀察到的醛脫氫酶水平低 于預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果骨髓樣品中觀察 到的醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代的治療。在某些實施方案中，該方法進一 步包括依據(jù)骨髓樣品中觀察到的醛脫氫酶水平調(diào)整治療。在某些實施方案中，如果ALDH水 平升高，則增加環(huán)磷酰胺劑量。在某些實施方案中，如果ALDH水平降低，則減少環(huán)磷酰胺劑 量。本申請在某些實施方案中進一步公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方 法，該方法包括測定至少第一批多個造血干細(xì)胞中以及第二批多個造血干細(xì)胞中的醛脫氫 酶的水平，其中所述第一批多個造血干細(xì)胞以及所述第二批多個造血干細(xì)胞是在不同時間 從個體中取得(如，在施用環(huán)磷酰胺之前取樣品1，在施用環(huán)磷酰胺完成之后96小時取樣品 2)。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果多個造血干細(xì)胞中觀察到的醛脫氫酶 水平低于預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果多個造血干細(xì)胞中觀察到的醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代的治療。在某些實施方案 中，該方法進一步包括依據(jù)造血干細(xì)胞中觀察到的醛脫氫酶水平調(diào)整治療方法。在某些實 施方案中，如果ALDH水平升高，則增加環(huán)磷酰胺劑量。在某些實施方案中，如果ALDH水平 降低，則減少環(huán)磷酰胺劑量。環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的細(xì)胞死亡測定成熟和/或未成熟治療前細(xì)胞死亡的測定本發(fā)明某些實施方案公開了測量多個來自個體的成熟和/或未成熟細(xì)胞的由環(huán) 磷酰胺導(dǎo)致的細(xì)胞死亡(如，程序性死亡或壞死)水平的方法。在某些實施方案中，如果多 個來自個體的成熟和/或未成熟細(xì)胞的死亡水平超過了預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇該個體進行 環(huán)磷酰胺治療。在某些實施方案中，如果個體中多個成熟和/或未成熟細(xì)胞的由環(huán)磷酰胺 導(dǎo)致的細(xì)胞死亡水平超過了預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇個體參加用于評價環(huán)磷酰胺治療神經(jīng)性 自身免疫疾病(如，多發(fā)性硬化、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重 癥肌無力、橫貫性脊髓炎、紅斑狼瘡或其組合)有效性的臨床試驗。在某些實施方案中，通過任何適合的方法從個體中采集多個成熟和/或未成熟細(xì) 胞。在某些實施方案中，所述多個成熟和/或未成熟細(xì)胞與環(huán)磷酰胺接觸。在某些實施方 案中，所述多個成熟和/或未成熟細(xì)胞與環(huán)磷酰胺接觸約24小時。在某些實施方案中，將 細(xì)胞死亡水平與對照組相比較。在某些實施方案中，對照組是在接觸環(huán)磷酰胺后顯示出已 知的細(xì)胞死亡水平的多個成熟和/或未成熟細(xì)胞。在某些實施方案中，對照組是在接觸環(huán) 磷酰胺后多個成熟和/或未成熟細(xì)胞中的平均細(xì)胞死亡水平。在某些實施方案中，如果個 體生物樣品中的細(xì)胞死亡水平低于對照，則為該個體選擇替代治療。本發(fā)明某些實施方案公開了測量個體中多個PBMC的由環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的細(xì)胞死亡 (如，程序性死亡或壞死)水平的方法。在某些實施方案中，如果個體PBMC的細(xì)胞死亡水平 超過了預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇該個體進行環(huán)磷酰胺治療。在某些實施方案中，如果個體PBMC 由環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的細(xì)胞死亡水平超過了預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇個體參加用于評價環(huán)磷酰胺 治療神經(jīng)性自身免疫疾病(如，多發(fā)性硬化、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無 力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、紅斑狼瘡或其組合)有效性的臨床試驗。在某些實施方案中，通過任何適合的方法(如，F(xiàn)icoll密度梯度離心)從多個成 熟和/或未成熟細(xì)胞中分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)。在某些實施方案中，所述PBMC與環(huán)磷 酰胺接觸。在某些實施方案中，PBMC與環(huán)磷酰胺接觸約24小時。在某些實施方案中，將細(xì) 胞死亡水平與對照組相比較。在某些實施方案中，對照組是在接觸環(huán)磷酰胺后顯示出已知 的細(xì)胞死亡水平的多個PBMC。在某些實施方案中，對照組是在接觸環(huán)磷酰胺后多個PBMC中 的平均細(xì)胞死亡水平。在某些實施方案中，如果個體中多個PBMC細(xì)胞死亡水平低于對照， 則為該個體選擇替代治療。采用針對成熟和/或未成熟細(xì)胞的細(xì)胞死亡測定監(jiān)測接受環(huán)磷酰胺治療的個體本發(fā)明某些實施方案進一步公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，該 方法包括測定至少第一批多個成熟和/或未成熟細(xì)胞樣品中以及第二批多個成熟和/或未 成熟細(xì)胞的細(xì)胞死亡水平，其中所述第一批多個成熟和/或未成熟細(xì)胞以及所述第二批多 個成熟和/或未成熟細(xì)胞是在不同時間從個體中取得(如，在施用環(huán)磷酰胺之前取樣品1， 在施用環(huán)磷酰胺完成之后96小時取樣品2)。
在某些實施方案中，該方法進一步包括如果多個成熟和/或未成熟細(xì)胞中觀察到 的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如 果多個成熟和/或未成熟細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代的 治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括依據(jù)多個成熟和/或未成熟細(xì)胞中觀察到的 細(xì)胞死亡水平調(diào)整治療方法。在某些實施方案中，如果細(xì)胞死亡水平升高，則減少環(huán)磷酰胺 劑量。在某些實施方案中，如果ALDH水平降低，則增加環(huán)磷酰胺劑量。本發(fā)明某些實施方案進一步公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，該 方法包括測定至少第一批多個PBMC以及第二批多個PBMC的細(xì)胞死亡水平，其中所述第一 批多個PBMC以及所述第二批多個PBMC是在不同時間從個體中取得(如，在施用環(huán)磷酰胺 之前取樣品1，在施用環(huán)磷酰胺完成之后96小時取樣品2)。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果多個PBMC中觀察到的細(xì)胞死亡水平 低于預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果多個PBMC中觀 察到的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代的治療。在某些實施方案中，對照是在 接觸環(huán)磷酰胺后顯示出已知的細(xì)胞死亡水平的多個PBMC。在某些實施方案中，該方法進一 步包括依據(jù)多個PBMC中觀察到的細(xì)胞死亡水平調(diào)整治療。在某些實施方案中，如果細(xì)胞死 亡水平升高，則減少環(huán)磷酰胺劑量。在某些實施方案中，如果ALDH水平降低，則增加環(huán)磷酰 胺劑量。針對骨髓的治療前細(xì)胞死亡測定本發(fā)明某些實施方案公開了測量個體骨髓中由環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的細(xì)胞死亡(如，程 序性死亡)水平的方法。在某些實施方案中，如果個體骨髓中的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè)的 臨界值，則選擇該個體進行環(huán)磷酰胺治療。在某些實施方案中，如果個體中骨髓中由環(huán)磷酰 胺導(dǎo)致的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè)的臨界值，則選擇個體參加用于評價環(huán)磷酰胺治療神經(jīng)性 自身免疫疾病(如，多發(fā)性硬化、Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重 癥肌無力、橫貫性脊髓炎、紅斑狼瘡，或其組合)有效性的臨床試驗。在某些實施方案中，骨髓與環(huán)磷酰胺接觸。在某些實施方案中，骨髓與環(huán)磷酰胺接 觸約24小時。在某些實施方案中，對照是在接觸環(huán)磷酰胺后顯示出已知的細(xì)胞死亡水平的 骨髓。在某些實施方案中，對照是在接觸環(huán)磷酰胺后骨髓中的平均細(xì)胞死亡水平。在某些 實施方案中，如果個體骨髓中的細(xì)胞死亡水平高于對照，則為該個體選擇替代治療。在某些實施方案中，使用任何適合的方法從骨髓中分離多個造血干細(xì)胞。在某些 實施方案中，所述多個造血干細(xì)胞與環(huán)磷酰胺接觸。在某些實施方案中，所述多個造血干細(xì) 胞與環(huán)磷酰胺接觸約24小時。在某些實施方案中，將細(xì)胞死亡水平與對照的細(xì)胞死亡水平 相比較。在某些實施方案中，對照是在接觸環(huán)磷酰胺后顯示出已知的細(xì)胞死亡水平的多個 造血干細(xì)胞。在某些實施方案中，對照是在接觸環(huán)磷酰胺后造血干細(xì)胞的平均細(xì)胞死亡水 平。在某些實施方案中，如果個體中多個造血干細(xì)胞中的細(xì)胞死亡水平高于對照，則為該個 體選擇替代治療。采用針對骨髓的細(xì)胞死亡測定監(jiān)測接受環(huán)磷酰胺治療的個體本發(fā)明某些實施方案進一步公開了一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，該 方法包括測定至少第一骨髓樣品以及第二骨髓樣品的細(xì)胞死亡水平，其中第一骨髓樣品以 及第二骨髓樣品是在不同時間從個體中取得(如，在施用環(huán)磷酰胺之前取樣品1，在施用環(huán)磷酰胺完成之后96小時取樣品2)。在某些實施方案中，第一骨髓樣品以及第二骨髓樣品與環(huán)磷酰胺相接觸(如，接 觸約24小時)。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果骨髓樣品中觀察到的細(xì)胞死亡 水平超過預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果骨髓樣品 中觀察到的細(xì)胞死亡水平超過預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代的治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括依據(jù)骨髓樣品中觀察到的細(xì)胞死亡水平調(diào) 整治療。在某些實施方案中，如果細(xì)胞死亡水平升高，則減少環(huán)磷酰胺劑量。在某些實施方 案中，如果ALDH水平降低，則增加環(huán)磷酰胺劑量。在某些實施方案中，使用任何適合的方法從第一骨髓樣品以及第二骨髓樣品中分 離多個造血干細(xì)胞。在某些實施方案中，來自第一骨髓樣品的所述多個造血干細(xì)胞以及來 自第二骨髓樣品的所述多個造血干細(xì)胞與環(huán)磷酰胺接觸(如，接觸約24小時)。在某些實 施方案中，該方法進一步包括如果所述第一批多個細(xì)胞或第二批多個細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞 死亡水平超過預(yù)設(shè)的臨界值則停止治療。在某些實施方案中，該方法進一步包括如果第一 批多個細(xì)胞或第二批多個細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞死亡水平超過預(yù)設(shè)的臨界值則選擇替代治 療。在某些實施方案中，該方法進一步包括依據(jù)第二批多個造血干細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞死 亡水平調(diào)整治療。在某些實施方案中，如果細(xì)胞死亡水平升高，則減少環(huán)磷酰胺劑量。在某 些實施方案中，如果ALDH水平降低，則增加環(huán)磷酰胺劑量。藥物組合物制劑在某些實施方案中，藥物組合物使用一種或多種生理上可接受的載體，按照慣用 的方法配制，所述載體包括，如，幫助將活性化合物制備成適合醫(yī)藥用途的制品的賦形劑 和助劑。在某些實施方案中，適合的制劑依選擇的施用途徑而定。本申請描述的藥物組 合物的概述在，例如 Remington :The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed(Easton, Pa. :Mack Publishing Company,1995) ；Hoover, John Ε. , Remington ' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. , Easton, Pennsylvania 1975 ； Liberman, H. A. and Lachman, L. , Eds. , Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N. Y.,1980 ；and Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkinsl999)中可見。本文中使用的藥物組合物，是指本申請描述的化合物(如，環(huán)磷酰胺、醋酸格拉 默、粒細(xì)胞集落刺激因子和抗胸腺細(xì)胞球蛋白)與其他化學(xué)成分，如載體、穩(wěn)定劑、稀釋劑、 分散劑、懸浮劑、增稠劑和/或賦形劑。在某些情況下，藥物組合物輔助將化合物施用至個 體或細(xì)胞。在某些使用本申請?zhí)峁┑闹委煼椒ɑ蛴猛镜膶嵤┓桨钢?，藥物組合物中的治療 有效量的本申請描述的化合物被施用給患有疾病、障礙、病癥的個體。在具體的實施方案 中，個體是人。如本文討論的，本申請描述的有治療作用的化合物單獨使用或與一種或多種 附加的治療劑聯(lián)合使用。在某些實施方案中，本申請描述的藥物制劑以任何方式施用給個體，所述方式包 括一種或多種復(fù)合給藥途徑，如，非限制性舉例，口服、腸胃外(如，靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi))、 鼻內(nèi)、頰黏膜、局部、直腸或透皮給藥途徑。本申請描述的藥物制劑包括，但不限于水分散 液、自乳化分散體、固溶體、脂質(zhì)體分散體、氣霧劑、固體劑型、粉劑、速釋制劑、控釋制劑、速 熔(fast melt)制劑、片劑、膠囊劑、丸劑、延遲釋放制劑、緩釋制劑、脈沖式釋放制劑、多顆
30粒制劑(multiparticulate formulation)、速釋和控釋混合制劑。本申請描述的化合物(如，環(huán)磷酰胺、醋酸格拉默、粒細(xì)胞集落刺激因子抗胸腺細(xì) 胞球蛋白)的藥物組合物任選地使用傳統(tǒng)方法制造，如，僅為舉例，通過傳統(tǒng)的混合、溶解、 重構(gòu)、制粒、包衣(dragee-making)、粉碎、乳化、封裝、包埋或壓片過程制備。在某些實施方案中，本申請描述的藥物組合物包括一種或多種本申請描述的藥劑 (如，環(huán)磷酰胺、醋酸格拉默、粒細(xì)胞集落刺激因子和抗胸腺細(xì)胞球蛋白)作為活性成分，所 述藥劑呈游離酸或游離堿形式、或藥學(xué)上可接受的鹽形式。在某些實施方案中，本申請描述 的化合物以N-氧化物或結(jié)晶或無定型形式(如，多晶型物)使用。在某些實施方案中，使 用本申請描述的化合物的活性代謝物或前藥。在某些情況下，本申請描述的化合物以互變 異構(gòu)體的形式存在。所有的互變異構(gòu)體都包括在本發(fā)明展示的化合物范圍內(nèi)。在某些實施 方案中，本申請描述的化合物以非溶劑化或溶劑化的形式存在，其中溶劑化形式包括任何 藥學(xué)上可接受的溶劑，如，水、乙醇等。本發(fā)明展示的化合物的溶劑化形式也被視為本發(fā)明 所公開。在某些實施方案中，“載體”包括藥學(xué)上可接受的賦形劑，并且基于與本發(fā)明公 開的化合物的兼容性選擇載體，如，任何式I-V的化合物，以及理想劑型的釋放曲線特 性。作為示范的載體材料包括，如，粘合劑、懸浮劑、崩解劑、充填劑、表面活性劑、增溶劑、 穩(wěn)定劑、潤滑劑、潤濕劑、稀釋劑等等。見，例如Remington :The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed(Easton, Pa. :Mack Publishing Company,1995) ；Hoover, John Ε. , Remington ' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. , Easton, Pennsylvania 1975 ；Liberman, H. Α.以及 Lachman, L. , Eds. , Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N. Y. , 1980 ；以及 Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkinsl999)。此外，在某些實施方案中，本申請描述的藥物組合物被制成劑型。如上，在某些實 施方案中，本發(fā)明提供的劑型包括本申請描述的，適于施用給個體的化合物(如，環(huán)磷酰 胺、醋酸格拉默、粒細(xì)胞集落刺激因子和抗胸腺細(xì)胞球蛋白)。在某些實施方案中，適合的劑 型包括，非限制性舉例，口服水分散體、液體、凝膠劑、糖漿劑、酏劑、漿液、混懸劑、口服固體 劑型、氣溶膠、控釋制劑，速熔制劑、泡騰劑、凍干制劑、片劑、粉劑、丸劑、糖衣藥丸、膠囊、延 遲釋放制劑、緩釋制劑、脈沖釋放制劑、多顆粒制劑、速釋和控釋混合制劑。本申請描述的藥物固體劑型任選地包括本申請描述的有額外治療作用的化合物 以及一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑，如兼容的載體、粘合劑、充填劑、懸浮劑、矯味劑、 甜味劑、崩解劑、分散劑、表面活性劑、潤滑劑、著色劑、稀釋劑、增溶劑、潤濕劑、增塑劑、穩(wěn) 定劑、促滲劑、濕潤劑、消泡劑、抗氧化劑、防腐劑，或其中一種或多種的組合。在某些方面， 使用標(biāo)準(zhǔn)的包衣工序，如 Remington' s Pharmaceutical Sciences, 20th Edition (2000) 描述的工序，提供包裹式ι-ν的任何化合物制劑的薄膜包衣。在一個實施方案中，本申請描 述的化合物是顆粒的形式，部分或全部化合物顆粒被包衣。在某些實施方案中，部分或全部 的本申請描述的化合物顆粒被包入微膠囊。在某些實施方案中，本申請描述的化合物顆粒 未被包入微膠囊并且未被包衣。在某些實施方案中，本申請描述的藥物組合物是適合單獨施用精確劑量的單位劑 型。在單位劑型中，制劑被分為包含適合量的一種或多種化合物的單位劑量。在某些實施方案中，單位劑量是包含特定量的制劑的包裝形式。非限制性實例為包裝的片劑或膠囊，和 小瓶或安瓿中的粉末。水懸浮液組合物任選地被包裝入單劑量的不能重新關(guān)閉的容器。在 某些實施方案中，使用多劑量的能重新關(guān)閉的容器。在某些情況下，多劑量的容器包含組合 物中的防腐劑。僅為舉例，腸胃外注射制劑存在于單位劑型(其包括，但不限于安瓿)中， 或存在于添加有防腐劑的多劑量容器中。M^I在某些實施方案中，可以將至少一種本發(fā)明公開的治療劑與另一種治療劑聯(lián)合施 用?；颍瑑H為舉例，通過將一種本發(fā)明公開的治療劑與另一種也有治療效果的治療劑(其也 包括治療方案)聯(lián)合施用，增加個體的受益。在各種情況下，不考慮所治療的疾病、障礙或 病癥，個體的總受益在某些實施方案中為兩種治療劑之和，或在其他的實施方案中，個體能 體驗到協(xié)同效應(yīng)的受益。在某些實施方案中，化合物的特定選擇依賴于主治醫(yī)生的診斷和他們對于個體狀 況以及適合的治療方案的判斷。依據(jù)疾病、障礙或病癥的性質(zhì)，個體的狀況，以及所使用的 化合物的實際選擇，任選地共同(如，同時、基本同時或在同一個治療方案中)或順序施用 化合物。在某些情況下，一個治療方案中每種治療劑施用順序以及重復(fù)施用的次數(shù)依據(jù)對 所治療的疾病和個體狀況的評價而定。在某些實施方案中，治療有效的劑量隨藥物在聯(lián)合治療中的使用而變化。實驗測 定藥物和在聯(lián)合治療方案中使用的其他藥劑的治療有效劑量的方法在文獻中描述。例如， 已經(jīng)在文獻中廣泛描述了節(jié)律給藥的使用，即更頻繁、低劑量給藥以最小化毒副作用。聯(lián)合 治療進一步包括在不同時間開始和停止以輔助個體臨床處置的周期治療。在本申請描述的某些聯(lián)合療法的實施方案中，共同施用的化合物的劑量依據(jù)聯(lián)合 使用的藥物類型、使用的特定藥物、治療的疾病或病癥等而變化。此外，當(dāng)與一種或多種生 物活性制劑共同施用時，本發(fā)明提供的化合物任選地與這些生物活性劑同時，或順序施用。 在某些情況下，如果順序施用，主治醫(yī)生可決定與其他治療劑組合的本申請描述的有治療 作用的化合物的合適使用順序。多種治療劑(其中至少一種治療是本申請描述的有治療作用的化合物)任選地以 任意順序或同時施用。如果同時施用，多種治療劑任選地以單獨、統(tǒng)一的形式、或多個形式 (僅為舉例，單獨的藥丸或兩種獨立的藥丸)提供。在某些情況下，治療劑中的一種任選地 以多劑量給予。在其他的情況下，全部任選地以多劑量給予。如果不是同時施用，多劑量之 間的時間可以是任意適合的時間，如，從大于0周到小于4周。在某些實施方案中，使用額 外的治療劑以實現(xiàn)神經(jīng)性自身免疫疾病的緩解(部分或全部)，而后順序施用本申請描述 的治療劑(如，環(huán)磷酰胺、醋酸格拉默、粒細(xì)胞集落刺激因子和抗胸腺細(xì)胞球蛋白)。此外， 聯(lián)合療法、組合物和制劑不局限于僅使用兩種制劑；也構(gòu)思了使用多種治療組合(包括兩 種或更多種本申請描述的有治療作用的化合物)。在某些實施方案中，依照多種因素來改進為尋求緩解而治療、預(yù)防或減輕病癥的 給藥方案。這些因素包括個體所患的疾病，和個體的年齡、體重、性別、飲食以及醫(yī)學(xué)狀況。 因此，在各種實施方案中，實際使用的給藥方案會相對于本發(fā)明列出的給藥方案發(fā)生變化 或偏離。在某些實施方案中，為了基本上同時給予，以組合劑型或分離的劑型的形式提供
32組成本申請描述的聯(lián)合療法的藥物制劑。在某些實施方案中，組成本申請描述的聯(lián)合療法 的藥物制劑按順序施用，通過需要兩步施用的給藥方案施用任一有治療作用的化合物。在 某些實施方案中，兩步施用方案要求活性藥劑的順序施用或分離的活性藥劑的間隔施用。 在某些實施方案中，多個施用步驟間的時間間隔依據(jù)每種藥劑的特性，如效力、溶解度、生 物利用度、血漿半衰期和藥劑的動力學(xué)曲線，非限制性舉例，從幾分鐘到數(shù)小時之間變化。在某些實施方案中，本申請描述的化合物和組合治療在疾病或病癥發(fā)生之前，之 中或之后施用。任選地改變施用含化合物的組合物的時間以適應(yīng)治療個體的需要。因此， 在某些實施方案中，化合物作為預(yù)防劑使用，連續(xù)施用給有發(fā)展病癥或疾病的傾向的個體 以防止疾病或病癥的發(fā)生。在某些實施方案中，化合物和組合物在發(fā)生癥狀時或在癥狀發(fā) 生后盡快施用給個體?；衔锏氖┯萌芜x地在癥狀發(fā)生后第一個48小時內(nèi)開始，或癥狀發(fā) 生后第一個6小時內(nèi)開始，或癥狀發(fā)生后3小時內(nèi)開始?？梢酝ㄟ^任何適用的途徑進行最 初的施用，例如，靜脈內(nèi)注射、推注注射、超過5分鐘到約5小時的輸液、藥丸、膠囊、透皮貼、 頰黏膜給藥等，或其組合。在某些實施方案中，檢測到或懷疑疾病或病癥發(fā)生后，只要可行 即應(yīng)當(dāng)立即施用化合物，并持續(xù)治療疾病所需的時間長度，例如，從大于1個月到約3個月。 治療時間長度任選地依據(jù)已知的標(biāo)準(zhǔn)針對每個個體做改變。在示范性的實施方案中，施用 化合物或含有化合物的制劑至少2周，從大于1個月到約5年，或從大于1個月到約3年。在某些實施方案中，治療劑與一種或多種下列治療劑以任何搭配來組合或聯(lián)合使 用皮質(zhì)類固醇(如，靜脈內(nèi)給予500到IOOOmg甲潑尼龍，隨后給予遞減劑量的口服潑尼 松，持續(xù)數(shù)周)、干擾素(如，IFNii-Ia和IFNi3-lb)、醋酸格拉默、米托蒽醌、那他珠單抗、 阿倫單抗、BG00012 (活菌制劑)、克拉屈濱、dirucotide (MBP8298)、芬戈莫德、拉喹莫德、利 妥昔單抗、特立氟胺、ATL1102(Teva and Antisense Therapeutics)、CDP323 (活菌制劑)、 達克珠單抗，雌二醇，肌苷、neurovahtovaxin、麥考酚酸酯、抗代謝藥(如甲氨蝶呤)、大環(huán) 內(nèi)酯物/IL-2抑制劑(如Π(-506)、沙利度胺、米托蒽醌，5-羥色胺選擇性再攝取抑制劑，神 經(jīng)保護劑(如鋰)，或其組合。
具體實施例方式實施例1 使用HiCy和醋酸格拉默(HiGA)治療的小鼠模型本研究的目的在于聯(lián)合使用免疫清除劑量環(huán)磷酰胺(CPA)和通過施用醋酸格拉 默的抗MS復(fù)發(fā)免疫法，來改善作為復(fù)發(fā)/緩解型多發(fā)性硬化癥(RRMS)模型的S幾/J小鼠 中的慢性復(fù)發(fā)實驗性自身免疫腦脊髓炎(R-EAE)。EAE是一種公認(rèn)的非靈長類動物MS模型。R-EAE通過使用修飾的髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋 白(PLP) 139-151肽(HSLGKWLGHPDKF)免疫易感小鼠品系(SJL/J)引起。R-EAE進展大約需 要2-3周。通過使用先前所述的近交小鼠品系，可以將實驗結(jié)果中的遺傳影響保持到最低。 這使我們可以證明得到的實驗結(jié)果歸因于指定的治療組所納入的，觀察到的個體間的不同 歸因于疾病和/或環(huán)境影響。治療組由10只小鼠組成。我們計劃實驗由3-5個治療組構(gòu)成，這些治療組將涵蓋 不同的藥物(方案中所概述的)和這些藥物的組合(以及溶媒對照)，藥物劑量的變化，和 藥物施用時間的變化。R-EAE誘導(dǎo)和分析
6-12周的雌性SJL/J小鼠接受一次含有100微克乳化在含結(jié)核分枝桿菌H37Ra的 弗氏不完全佐劑(CFA)中的經(jīng)修飾的髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP) 139-151肽(HSLGKWLGHPDKF) 的100微升皮下注射。CFA是由弗氏不完全佐劑混合熱滅活的結(jié)核分枝桿菌組成的油狀混 合物；其是已知的唯一能在這種小鼠品系中引起這種疾病的佐劑。在沒有麻醉劑的情況下 進行這些注射。皮下注射佐劑時，抓住動物頸后部松弛的皮膚并在大腿區(qū)域使用25號針注 射。稱量小鼠體重并觀察臨床征兆2個月。EAE的臨床征兆依據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)評價0 =沒 有臨床疾?。? =尾部力量缺失；2 =輕度后肢麻痹；3 =中度后肢體麻痹；4 =完全麻痹；和 5 =四肢癱瘓，垂死狀態(tài)或死亡。監(jiān)控其他的行為結(jié)果，包括動物在行走或被觸摸時豎起 尾巴的能力，其移動所有四肢和沿籠蓋協(xié)調(diào)行走的能力，和整體活動水平和試探的傾向。預(yù)期SJL/J小鼠品系中的EAE是一種麻痹逐漸加重的類型，其中到第10日，癥狀 之前有明顯的體重減輕和輕度尾部麻痹。在后面的時間點，疾病進展包括后肢麻痹，其構(gòu)成 效應(yīng)期，R-EAE疾病表型的第一次發(fā)作。到第20日，多數(shù)鼠進入緩解期，體重恢復(fù)并癱瘓減 輕。在PLP免疫后約3周，小鼠發(fā)展EAE第二輪(復(fù)發(fā))，小鼠持續(xù)經(jīng)歷另外的復(fù)發(fā)和恢復(fù) 階段。在某些實驗中也使用熱感覺實驗測試感覺功能。這包括通過將小鼠置于加熱的平 臺上來測定肢端是否有感覺；盡管熱沒有高至有傷害的程度，預(yù)期的反應(yīng)是小鼠應(yīng)抬起并 舔其爪子。組合治療的施用環(huán)磷酰胺(CPA)在磷酸鹽緩沖液(PBS) (20mg/ml)中通過腹腔內(nèi)注射施用，劑量為 100-300mg/kg。CPA在R-EAE效應(yīng)期前或后的特定時間點注射給每只實驗動物一次。醋酸格拉默由一定比例的L-丙氨酸、L-賴氨酸、L-谷氨酸和L-酪氨酸組成，從而 模擬包括在誘導(dǎo)EAE中的主要髓鞘自身抗原之一。從第11日，(+/_2，由EAE進展決定)， 醋酸格拉默在PBS/甘露醇中以50-500微克/每只小鼠的劑量皮下連續(xù)施用長達5天。為了靜脈注射，在籠中使用加熱燈(離籠底約18-25英寸)溫暖小鼠3_5分鐘以 擴張其血管；它們被分別固定到錐形體或Broome型固定設(shè)備(VWR目錄號10718-030)中以 使用28-30號針靜脈內(nèi)注射給藥入尾部側(cè)靜脈中。如果動物表現(xiàn)痛苦則使用輕度異氟醚麻 醉。將食物置于籠底以幫助受傷的動物易于得到食物。自動飲水系統(tǒng)比水瓶離籠底部 更低；盡管如此，如果生病的動物顯出沒有力量操作送水開關(guān)，水瓶(并且可以在每日稱重 每只動物時直接給動物喂水)和/或“水凝膠”將被置于那些相應(yīng)籠中以使動物可以得到。預(yù)計結(jié)果1.在使用PLP 139-151 (S)主動免疫過的或進行了 PLP 139-151 (S)特異性T細(xì)胞 的過繼轉(zhuǎn)移的SJL/J小鼠中誘導(dǎo)出復(fù)發(fā)-緩解型EAE(RR-EAE)。2.使用200mg/kg的CPA治療RR-EAE將使95 %動物中的EAE活動停止。3.我們預(yù)計CPA治療后RR-EAE有30 %的自發(fā)復(fù)發(fā)率，如果使用PLP再次免疫誘 導(dǎo)復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為70%。4.從CPA治療后30日開始，使用醋酸格拉默(高至2mg/小鼠/日)治療經(jīng)CPA 治療過RR-EAE的動物不會對CPA導(dǎo)致的EAE活動停止率(95% )有不利影響。
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5.從CPA治療后30日開始，使用醋酸格拉默(高至2mg/小鼠/日)治療經(jīng)CPA 治療過RR-EAE的動物將分別減少自發(fā)和誘導(dǎo)的復(fù)發(fā)率至2%和10%。實施例2 使用HiCx和ATG(HiCAT)治療的小鼠樽型本研究的目的在于聯(lián)合使用免疫清除劑量的環(huán)磷酰胺(CPA)和T細(xì)胞消耗治療， 來緩解作為復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化癥(RRMS)模型的S幾/J小鼠中的慢性復(fù)發(fā)實驗性自 身免疫腦脊髓炎(R-EAE)。EAE是一種公認(rèn)的非靈長類動物MS模型。R-EAE通過使用修飾的髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋 白(PLP) 139-151肽(HSLGKWLGHPDKF)免疫易感小鼠品系(SJL/J)引起。R-EAE進展大約 需要2-3周。通過使用先前所述的近交鼠品系，可以將實驗結(jié)果中的遺傳影響保持到最低。 這使我們可以證明得到的實驗結(jié)果歸因于指定的治療組所納入的，觀察到的個體間的不同 歸因于疾病和/或環(huán)境影響。治療組由10只小鼠組成。我們計劃實驗由3-5個治療組構(gòu)成，這些治療組將涉及 不同的藥物(方案中概述的)和這些藥物的組合(以及溶媒對照)，藥物劑量的變化，和藥 物施用時間的變化。R-EAE誘導(dǎo)和分析6-12周的雌性SJL/J小鼠接受一次含有100微克乳化在含結(jié)核分枝桿菌H37Ra的 弗氏不完全佐劑(CFA)中的，修飾的髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP) 139-151肽(HSLGKWLGHPDKF) 的100微升皮下注射。CFA是由弗氏不完全佐劑混合熱滅活的結(jié)核分枝桿菌組成的油狀混 合物；其是已知的唯一能在這種小鼠品系中引起這種疾病的佐劑。在沒有麻醉的情況下進 行這些注射。為了皮下注射佐劑，抓住動物頸后部松弛的皮膚并在其大腿區(qū)域使用25號針 注射。稱量小鼠體重并觀察臨床征兆2個月。EAE的臨床征兆依據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)評價0 =沒 有臨床疾??；1 =尾部力量缺失；2 =輕度后肢麻痹；3 =中度后腿麻痹；4 =完全麻痹；和5 =四肢癱瘓，垂死或死亡。監(jiān)控其他的行為結(jié)果，包括動物在行走或被觸摸時豎起尾巴的 能力，其移動四肢和沿籠蓋橫桿協(xié)調(diào)行走的能力，和整體活動水平和試探的傾向。預(yù)期SJL/J小鼠中的EAE是一種麻痹逐漸加重的類型，其中第10日癥狀前有明 顯的體重減輕和輕度尾部麻痹。在后面的時間點，疾病進展包括后肢麻痹，其構(gòu)成效應(yīng)期， R-EAE疾病表型的第一次發(fā)作。第20日，多數(shù)鼠進入緩解期，體重恢復(fù)并且癱瘓減輕。在 PLP免疫后約3周，小鼠發(fā)展第二輪EAE(復(fù)發(fā))，小鼠將繼續(xù)經(jīng)歷另外的復(fù)發(fā)和恢復(fù)階段。在某些實驗中也使用熱感覺實驗測試感覺功能。這涉及通過將小鼠置于加熱的平 臺上來測定肢端是否有感覺；盡管熱沒有高至有傷害的程度，預(yù)期的反應(yīng)是小鼠應(yīng)抬起并 舔其爪子。組合治療的施用以200mg/kg的劑量靜脈內(nèi)施用在磷酸鹽緩沖液(PBS)中的環(huán)磷酰胺(CPA) (20mg/ ml)。CPA在R-EAE效應(yīng)期前或后的特定時間點施用給每只實驗動物一次。針對全部T淋巴 細(xì)胞提供的抗胸腺細(xì)胞抗體與CPA共同靜脈施用，劑量為每只動物12. 5-25毫克。預(yù)期結(jié)果1.在使用PLP 139-151 (S)主動免疫過的或進行了 PLP 139-151 (S)特異性T細(xì)胞 的過繼轉(zhuǎn)移的SJL/J小鼠中誘導(dǎo)出復(fù)發(fā)-緩解型EAE(RR-EAE)。
2.使用200mg/kg的CPA加抗胸腺細(xì)胞抗體治療RR-EAE將使95%動物中的EAE
活動停止。3.隨時間推移，不到10%動物的免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的CNS炎癥和損傷會重新激活。實施例3 在被診斷患有多發(fā)性硬化的人中進行的HiGa臨床試驗首要目標(biāo)為確定使用高劑量的環(huán)磷酰胺(每日50mg/kg IV，連續(xù)四天)或高劑量的環(huán)磷酰 胺加雙倍劑量的醋酸格拉默(40mg)治療，相比低劑量的環(huán)磷酰胺(1000mg/m2)加雙倍劑量 的醋酸格拉默能否在12個月內(nèi)停止或逆轉(zhuǎn)MS的臨床進展，停止或逆轉(zhuǎn)MS被定義為EDSS 減小。次要目標(biāo)為確定使用高劑量的環(huán)磷酰胺或高劑量的環(huán)磷酰胺加雙倍劑量的醋酸格拉默 (40mg)治療，相比低劑量的環(huán)磷酰胺加雙倍劑量的醋酸格拉默能否在12個月內(nèi)引起持續(xù) 的MS疾病活動性的緩解(> 3個月)，持續(xù)的緩解被定義為沒有新的MRI增強的病損和沒 有新的復(fù)發(fā)(復(fù)發(fā)被定義為新的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀出現(xiàn)持續(xù)至少48小時并經(jīng)檢查確認(rèn))。為證明高劑量的環(huán)磷酰胺加雙倍劑量的醋酸格拉默相比單獨用高劑量的環(huán)磷酰 胺，在MS疾病活動性緩解期持續(xù)時間上以及24個月內(nèi)沒有復(fù)發(fā)的個體比例上的優(yōu)越性，復(fù) 發(fā)被定義為在24個月研究期內(nèi)有新的持續(xù)至少48小時并檢查確認(rèn)的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀出現(xiàn)或 24個月內(nèi)有新的MRI增強的病損。為了評價用于治療RRMS長達24個月的高劑量的環(huán)磷酰胺和雙倍劑量的醋酸格拉 默在個體中的安全性和耐受性。研究設(shè)計我們在約222例有活躍的復(fù)發(fā)_緩解型MS (RRMS)的個體中，提出一個12個月、隨 機、多中心、評估者盲法(之前和之后)并有12個月延長隨訪的試驗。約222例個體被隨 機分入以下三個治療組(74人每組)的一組a.低劑量環(huán)磷酰胺和雙倍劑量醋酸格拉默，b.高劑量環(huán)磷酰胺，以及c.高劑量環(huán)磷酰胺和雙倍劑量醋酸格拉默。納入標(biāo)準(zhǔn)符合以下標(biāo)準(zhǔn)的男性或女性個體可以被納入臨床試驗a.年齡在18到50歲之間；b.根據(jù)McDonald標(biāo)準(zhǔn)，有臨床上明確的復(fù)發(fā)-緩解型MS診斷；c.篩查時腦部和/或脊髓MRI共有兩個或更多個釓增強病損；d.過去一年至少一次臨床復(fù)發(fā)；e.納入個體EDSS評分從1. 5到6. 5 ；EDSS彡5. 5的個體持續(xù)殘疾應(yīng)彡3個月；f.在前一年中，介于1. 5到5. 5之間的EDSS(允許歷史評價)持續(xù)(彡3個月) 增加> 1. 0，或介于5. 5到6. 5之間的EDSS持續(xù)(彡3個月)增加> 0. 5 ；g.在本方案的任何實驗之前給出的書面知情同意書，包括不被視為個體常規(guī)治療 的一部分的篩選測試和評價；以及h.對于女性，加入研究之前懷孕測試結(jié)果為陰性。
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排除標(biāo)準(zhǔn)下列個體將被排除出試驗a.任何有懷孕風(fēng)險的個體；b.任何心臟射血分?jǐn)?shù)< 45%的個體；c.任何血清肌酐水平> 2. 0的個體；d.任何臨終或垂死的個體；e.任何膽紅素水平> 2. 0，和/或轉(zhuǎn)氨酶水平> 2x正常值的個體；f.任何帶有起搏器或植入物而不能接受系列MRI的個體；g.任何活動性感染的個體，直至感染消退；或h.任何WBC計數(shù)< 3000細(xì)胞/ μ L的個體；血小板< 100，000細(xì)胞/ μ L的個體； 和未輸血血紅蛋白< 10g/dl的個體。個體從研究中提出個體可以在任何時候因各種原因退出研究。研究者可以因下列原因停止個體的治療a.在醫(yī)院進行高劑量環(huán)磷酰胺治療期間，個體經(jīng)歷需要終止治療的醫(yī)療緊急情 況；b.在醫(yī)院期間，個體經(jīng)歷嚴(yán)重的不良事件，該不良事件被判斷為可能與高劑量環(huán) 磷酰胺有關(guān)和/或嚴(yán)重到有必要終止治療；和c.研究者自行判斷的各種醫(yī)學(xué)原因。高劑量環(huán)磷酰胺的施用高劑量環(huán)磷酰胺治療在腫瘤醫(yī)生和工作人員的監(jiān)督下進行。個體在第-3天至第0天靜脈內(nèi)接受高劑量環(huán)磷酰胺。高劑量環(huán)磷酰胺的劑量按 理想體重計算。理想體重按骨髓移植程序中使用的現(xiàn)有方法確定。如果個體的實際體重小 于理想體重，使用實際體重計算環(huán)磷酰胺劑量。預(yù)定個體僅接受一個療程的治療。在施用高劑量的環(huán)磷酰胺之前和之后應(yīng)保持足夠的利尿措施以防止出血性膀胱 炎。環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的出血性膀胱炎的預(yù)防(通常是美司鈉或強制利尿)按照SCT程序使用 的已有的臨床實踐指導(dǎo)進行。從第6日(高劑量環(huán)磷酰胺施用完成后6天)，個體接受粒細(xì)胞集落刺激因子 (5 μ g/kg/d)直至絕對嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過1. OX IO9個細(xì)胞/L。個體也被通 常給予抗生素(諾氟沙星，氟康唑和伐昔洛韋)直至嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)回歸正常。低劑量環(huán)磷酰胺的施用 1000mg/m2的低劑量環(huán)磷酰胺在IOOcc NSS中經(jīng)兩小時IV施用。預(yù)先水合 (prehydration)由 2L NSS 經(jīng)過 4 小時完成，后水合(post-hydration)由 2L NSS 經(jīng)過 4 小 時完成。劑量依照上述理想體重計算。醋酸格拉默的施用雙倍劑量的醋酸格拉默在最后一劑高劑量環(huán)磷酰胺(第0日)或單獨的較低劑量 環(huán)磷酰胺注射后30天開始每日皮下施用。治療后出院按照臨床要求個體至少住院4天。隨后允許其出院進行個人護理直至嗜中性粒細(xì)
37胞計數(shù)按照標(biāo)準(zhǔn)方案恢復(fù)(通常在最后一劑高劑量環(huán)磷酰胺后2-3周)。MRI 評價在治療后第-3、0、3、6、9、12、15、18、21和24月進行1 1評價。這便于了解治療后 疾病進展的過程。監(jiān)測釓增強病損平均數(shù)目以評估疾病活動的變化。評估從基線(第_3 和0月釓增強病損平均數(shù)目)到隨訪(第15和18月釓增強病損平均數(shù)目)的變化。進一 步，第3、6、9和12月的系列MRI便于了解2年中疾病活動的變化，同時也監(jiān)測了高劑量環(huán) 磷酰胺的安全性。在研究全過程中評估其他參數(shù)-T2病損負(fù)荷以及腦實質(zhì)分?jǐn)?shù)也是與殘疾 和病變的增長相關(guān)的疾病活動的度量。掃描在有回聲速度或雙速度梯度的1. 5特斯拉通用 電子掃描儀上(Milwaukee WI)進行。疾病進展的MRI標(biāo)準(zhǔn)a.釓增強病損的數(shù)目；b.T2病損負(fù)荷；和c.腦實質(zhì)分?jǐn)?shù)。MRI掃描分析a.采用冠狀圖像檢驗從軸向3mm連續(xù)切片計數(shù)對比增強病損。如果病損在一個序 列上可見而在其他序列上不可見，如果其在長TR脈沖序列上也可見則被計數(shù)為一個增強 斑?？偧膊∝?fù)荷基于增強斑的數(shù)目由從頸椎交界處到頂點的掃描確定。b.多發(fā)性硬化斑的體積由FLAIR掃描分析確定，F(xiàn)LAIR掃描提供在MS斑和底層腦 脊髓液(CSF)之間的與噪聲最大的對比，對應(yīng)正常白色和灰色物質(zhì)。然而，如果在FLAIR掃 描中顯示黑色信號的膀胱MS斑，我們使用質(zhì)子密度-T2-加權(quán)脈沖序列來確認(rèn)這些病損，并 用這些額外的MS斑來補充FLAIR體積評估。使用電腦輔助體積分析來進行闕值和三維體 積分析。c.進行總腦實質(zhì)體積分析時使用標(biāo)準(zhǔn)剝離算法以去除頭骨和底層軟組織體積。使 用闕值和人工修正，去除CSF來進行腦實質(zhì)體積分析。d.由兩名放射科醫(yī)生獨立判讀MRI掃描結(jié)果。如果解讀間有大于10%的差距，則 請第三位放射科醫(yī)生判讀MRI掃描結(jié)果。報告的解讀結(jié)果是三份判讀的平均值(T2斑體積 和腦實質(zhì)分?jǐn)?shù))或統(tǒng)一反映兩份判讀(關(guān)于增強病損的數(shù)目)。數(shù)據(jù)被記錄在CRFs上并錄 入數(shù)據(jù)庫。神經(jīng)學(xué)/臨床評價在基線和高劑量環(huán)磷酰胺治療后研究期間(24個月)每3個月進行神經(jīng)學(xué)檢查。 確認(rèn)疾病進展使用的臨床測量方法是多發(fā)性硬化癥功能組合表(MSFC)和擴展殘疾狀態(tài)量 表(EDSS)。研究型護士 /協(xié)調(diào)員可以被訓(xùn)練使用MSFC，研究神經(jīng)學(xué)家可以檢查個體以給出 EDSS評分。EDSS基于八個功能系統(tǒng)(視覺、腦干、感覺、小腦、括約肌、大腦等)的神經(jīng)學(xué)檢查， 評分范圍從0 (正常)到10 (死于MS)。MSFC被設(shè)計用于測試步態(tài)、上肢靈活度和認(rèn)知。三項分測試為a)25英尺限時步 行(25TW) ；b) 9洞樁測試(9-HPT)；和c)同步聽覺系列加算測試(PASAT-3)。PASAT測驗要 求個體將出現(xiàn)在聽力磁帶中的連續(xù)數(shù)字相加并口頭反應(yīng)出其準(zhǔn)確的和。當(dāng)每個數(shù)字被放出 時，個體必須將該數(shù)字與其前面放出的數(shù)字相加而不是與個體前一個反應(yīng)相加。
實施例4 在被診斷為患有多發(fā)性硬化的人中進行的HiCAT臨床試驗首要目標(biāo)為確定使用高劑量的環(huán)磷酰胺(每日50mg/kg IV，連續(xù)四天)加抗胸腺細(xì)胞球蛋 白(2. 5 μ g/kg/日)治療，相比單用高劑量的環(huán)磷酰胺能否在12個月內(nèi)停止或逆轉(zhuǎn)MS的 進展，通過EDSS減小進行衡量。次要目標(biāo)為確定使用高劑量的環(huán)磷酰胺加抗胸腺細(xì)胞球蛋白治療，相比高劑量的環(huán)磷酰胺 能否在12個月內(nèi)引起持續(xù)的MS疾病活動性的緩解3個月)，持續(xù)的緩解定義為沒有新 的MRI增強病損和沒有新的復(fù)發(fā)(復(fù)發(fā)被定義為新的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀表現(xiàn)持續(xù)至少48小時 并經(jīng)檢查確認(rèn))。為顯示高劑量的環(huán)磷酰胺加抗胸腺細(xì)胞球蛋白相比單獨用高劑量的環(huán)磷酰胺，在 MS疾病活力緩解期持續(xù)時間上以及24個月內(nèi)沒有復(fù)發(fā)的個體比例上的優(yōu)越性，復(fù)發(fā)被定 義為在24個月研究期內(nèi)有新的持續(xù)至少48小時并檢查確認(rèn)的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀表現(xiàn)或24個 月內(nèi)有新的MRI增強病損。為了評價用于治療RRMS長達24個月的高劑量的環(huán)磷酰胺加抗胸腺細(xì)胞球蛋白在 個體中的安全性和耐受性。研究設(shè)計我們在約222例有侵襲性復(fù)發(fā)-緩解型MS (RRMS)的個體中，提出一個12個月、隨 機、多中心、評估者盲法(之前和之后)并有12個月延長隨訪的試驗。約222例個體被隨 機分入以下2個治療組(111人每組)中的一組a.高劑量環(huán)磷酰胺；以及b.高劑量環(huán)磷酰胺和抗胸腺細(xì)胞球蛋白。納入標(biāo)準(zhǔn)符合以下標(biāo)準(zhǔn)的男性或女性個體可以被納入臨床試驗a.年齡在18到50歲之間；b.根據(jù)McDonald標(biāo)準(zhǔn)，臨床上明確的復(fù)發(fā)-緩解型MS診斷；c.篩查時腦部和/或脊髓MRI上共有兩個或更多個釓增強病損；d.過去一年至少一次臨床復(fù)發(fā)；e.納入個體EDSS評分從1. 5到6. 5 ；EDSS彡5. 5的個體持續(xù)殘疾應(yīng)彡3個月；f.在前一年中，介于1. 5到5. 5之間的EDSS(允許歷史評價)持續(xù)(彡3個月) 增加> 1. 0，或介于5. 5到6. 5之間的EDSS持續(xù)(彡3個月)增加> 0. 5 ；g.在本方案的任何實驗之前給出的書面知情同意書，包括不被視為個體常規(guī)治療 的一部分的篩選測試和評價；以及h.對于女性，加入研究之前懷孕測試結(jié)果為陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)下列個體將被排除出試驗a.任何有懷孕風(fēng)險的個體；b.任何心臟射血分?jǐn)?shù)< 45%的個體；c.任何血清肌酐水平> 2. 0的個體；
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d.任何臨終或垂死的個體；e.任何膽紅素水平> 2. 0，和/或轉(zhuǎn)氨酶水平> 2x正常值的個體；f.任何帶有起搏器或植入物而不能接受系列MRI的個體；g.任何活動性感染的個體，直至感染消退；或h.任何WBC計數(shù)< 3000細(xì)胞/ μ L的個體；血小板< 100，000細(xì)胞/ μ L的個體； 和未輸血血紅蛋白< 10g/dl的個體。個體從研究退出個體可以在任何時候因任何原因退出研究。任何研究者可以因任何下列原因停止個體的治療a.在醫(yī)院進行高劑量環(huán)磷酰胺治療期間，個體經(jīng)歷需要終止治療的醫(yī)療緊急情 況；b.在醫(yī)院期間，個體經(jīng)歷嚴(yán)重的不良事件，該不良事件被判斷為可能與高劑量環(huán) 磷酰胺有關(guān)和/或嚴(yán)重到有必要終止給予高劑量環(huán)磷酰胺；和c.研究者自行判斷的各種醫(yī)學(xué)原因。高劑量環(huán)磷酰胺的施用高劑量環(huán)磷酰胺治療在腫瘤醫(yī)生和工作人員的監(jiān)督下進行。個體在第-3天至第0天靜脈內(nèi)接受50mg/kg/日高劑量的環(huán)磷酰胺。高劑量環(huán)磷 酰胺的劑量按理想體重計算。理想體重按骨髓移植程序中使用的現(xiàn)有方法確定。如果個體 的實際體重小于理想體重，使用實際體重計算環(huán)磷酰胺劑量。預(yù)定個體僅接受一個療程的 治療。在施用高劑量的環(huán)磷酰胺之前和之后應(yīng)保持足夠的利尿措施以防止出血性膀胱 炎。環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的出血性膀胱炎的預(yù)防(通常是美司鈉或強制利尿)按照SCT程序使用 的已有的臨床實踐指導(dǎo)進行。從第6日(高劑量環(huán)磷酰胺施用完成后6天)，個體接受粒細(xì)胞集落刺激因子 (5 μ g/kg/d)直至絕對嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過1. OX IO9個細(xì)胞/L。個體也被通 常給予抗生素(諾氟沙星，氟康唑和伐昔洛韋)直至嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)回歸正常?？剐叵偌?xì)胞球蛋白的施用抗胸腺細(xì)胞球蛋白與高劑量環(huán)磷酰胺或單次更低劑量環(huán)磷酰胺注射同時IV施用。治療后出院按照臨床要求個體至少住院4天。隨后允許其出院進入個人護理場所直至嗜中性 粒細(xì)胞計數(shù)按照標(biāo)準(zhǔn)方案恢復(fù)(通常在最后一劑高劑量環(huán)磷酰胺后2-3周)。MRI 評價在治療后第-3、0、3、6、9、12、15、18、21和24月進行1 1評價。這便于了解治療后 疾病進展的過程。監(jiān)測釓增強病損平均數(shù)目以評估疾病活動的變化。評估從基線(第_3 和0月釓增強病損平均數(shù)目)到隨訪(第15和18月釓增強病損平均數(shù)目)的變化。進一 步，第3、6、9和12月的系列MRI便于了解2年中疾病活動的變化，同時也監(jiān)測了高劑量環(huán) 磷酰胺的安全性。在研究全過程中評估其他的參數(shù)-T2病損負(fù)荷以及腦實質(zhì)分?jǐn)?shù)也是與殘 疾和病變的增長相關(guān)的疾病活動的度量。掃描在有回聲速度或雙速度梯度的1. 5特斯拉通用電子掃描儀(Milwaukee WI)上進行。疾病進展的MRI標(biāo)準(zhǔn)a.釓增強病損的數(shù)目；b.T2病損負(fù)荷；和c.腦實質(zhì)分?jǐn)?shù)。MRI掃描分析a.使用對冠狀圖像的檢驗從軸向3mm連續(xù)切片計數(shù)對比增強病損。如果病損在一 個序列上可見而在其他序列上不可見，如果其在長TR脈沖序列上也可見則被計數(shù)為一個 增強斑?？偧膊∝?fù)荷基于增強斑的數(shù)目由從頸椎交界處到頂點的掃描確定。b.多發(fā)性硬化斑的體積由FLAIR掃描分析確定，F(xiàn)LAIR掃描提供在MS斑和底層腦 脊髓液(CSF)之間的與噪聲最大的對比，對應(yīng)正常白色和灰色物質(zhì)。然而，如果在FLAIR掃 描中顯示黑色的信號的膀胱MS斑，我們使用質(zhì)子密度-T2-加權(quán)脈沖序列來確認(rèn)這些病損， 并用這些額外的MS斑來補充FLAIR體積評估。使用電腦輔助體積分析來進行闕值和三維 體積分析。c.進行總腦實質(zhì)體積分析時使用標(biāo)準(zhǔn)剝離算法以去除頭骨和底層軟組織體積。使 用闕值和人工修正，去除CSF來進行腦實質(zhì)體積分析。d.由兩名放射科醫(yī)生獨立判讀MRI掃描結(jié)果。如果解讀間有大于10%的差距，則 請第三位放射科醫(yī)生判讀MRI掃描結(jié)果。報告的解讀結(jié)果是三份判讀的平均值(關(guān)于T2斑 體積和腦實質(zhì)分?jǐn)?shù))或統(tǒng)一反映兩份判讀的結(jié)果(增強病損的數(shù)目)。數(shù)據(jù)被記錄在CRFs 上并錄入數(shù)據(jù)庫。神經(jīng)學(xué)/臨床評價在基線和高劑量環(huán)磷酰胺治療后研究期間(24個月)每3個月進行神經(jīng)學(xué)檢查。 確認(rèn)疾病進展使用的臨床測量方法是多發(fā)性硬化癥功能組合表(MSFC)和擴展殘疾狀態(tài)量 表(EDSS)。研究型護士 /協(xié)調(diào)員可以被訓(xùn)練使用MSFC，研究神經(jīng)學(xué)家可以檢查個體以給出 EDSS評分。EDSS基于八個功能系統(tǒng)(視覺、腦干、感覺、小腦、括約肌、大腦等)的神經(jīng)學(xué)檢查， 評分范圍從0 (正常)到10 (死于MS)。MSFC被設(shè)計用于測試步態(tài)、上肢靈活度和認(rèn)知。三項分測試為a)25英尺限時步 行(25TW) ；b) 9洞樁測試(9-HPT)；和c)同步聽覺系列加算測試(PASAT-3)。PASAT測驗要 求個體將出現(xiàn)在聽力磁帶中的連續(xù)數(shù)字相加并口頭反應(yīng)出其準(zhǔn)確的和。當(dāng)每個數(shù)字被放出 時，個體必須將該數(shù)字與其前面放出的數(shù)字相加而不是與個體前一個反應(yīng)相加。實施例5 在被診斷為患有多發(fā)性硬化的人中進行的HiCAT加醋酸格拉默臨床試 驗首要目標(biāo)為確定使用高劑量的環(huán)磷酰胺(每日50mg/kg IV，連續(xù)四天)、抗胸腺細(xì)胞球蛋白 (2.5yg/kg/日)以及雙倍劑量的醋酸格拉默(40mg)治療，相比單用高劑量的環(huán)磷酰胺能 否在12個月內(nèi)停止或逆轉(zhuǎn)MS的進展，停止或逆轉(zhuǎn)MS被定義為EDSS減小。次要目標(biāo)為確定使用高劑量的環(huán)磷酰胺、抗胸腺細(xì)胞球蛋白以及雙倍劑量的醋酸格拉默治療，相比單用高劑量的環(huán)磷酰胺能否在12個月內(nèi)引起MS疾病活動的持續(xù)的緩解(> 3個 月)，持續(xù)的緩解定義為沒有新的MRI增強病損和沒有新的復(fù)發(fā)(復(fù)發(fā)被定義為新的神經(jīng)系 統(tǒng)癥狀表現(xiàn)持續(xù)至少48小時并經(jīng)檢查確認(rèn))。為證明高劑量的環(huán)磷酰胺、抗胸腺細(xì)胞球蛋白以及雙倍劑量的醋酸格拉默相比單 獨用高劑量的環(huán)磷酰胺，在MS疾病活力緩解期持續(xù)時間上以及24個月內(nèi)沒有復(fù)發(fā)的個體 比例上的優(yōu)越性，復(fù)發(fā)被定義為在24個月研究期內(nèi)有新的持續(xù)至少48小時并檢查確認(rèn)的 神經(jīng)系統(tǒng)癥狀表現(xiàn)或24個月內(nèi)有新的MRI增強病損。為了評價用于治療RRMS長達24個月的高劑量的環(huán)磷酰胺、抗胸腺細(xì)胞球蛋白以 及醋酸格拉默在個體中的安全性和耐受性。研究設(shè)計我們在約222例有積極復(fù)發(fā)_緩解型MS (RRMS)的個體中，提出一個12個月、隨機、 多中心、評估者盲法(之前和之后)并有12個月延長隨訪的試驗。約222例個體被隨機分 入以下2個治療組(111人每組)中的一組a.高劑量環(huán)磷酰胺；以及b.高劑量環(huán)磷酰胺、抗胸腺細(xì)胞球蛋白和醋酸格拉默。納入標(biāo)準(zhǔn)符合以下標(biāo)準(zhǔn)的男性或女性個體可以被納入臨床試驗a.年齡在18到50歲之間；b.根據(jù)McDonald標(biāo)準(zhǔn)，臨床上明確的復(fù)發(fā)-緩解型MS診斷；c.篩查時腦部和/或脊髓MRI上共有兩個或更多個釓增強病損；d.過去一年至少一次臨床復(fù)發(fā)；e.納入個體EDSS評分從1. 5到6. 5 ；EDSS彡5. 5的個體持續(xù)殘疾應(yīng)彡3個月；f.在前一年中，介于1. 5到5. 5之間的EDSS(允許歷史評價)持續(xù)(彡3個月) 增加> 1. 0，或介于5. 5到6. 5之間的EDSS持續(xù)(彡3個月)增加> 0. 5 ；g.在本方案的任何實驗之前給出的書面知情同意書，包括不被視為個體常規(guī)治療 的一部分的篩選測試和評價；以及h.對于女性，加入研究之前懷孕測試結(jié)果為陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)下列個體將被排除出試驗a.任何有懷孕風(fēng)險的個體；b.任何心臟射血分?jǐn)?shù)< 45%的個體；c.任何血清肌酐水平> 2. 0的個體；d.任何臨終或垂死的個體；e.任何膽紅素水平> 2. 0，和/或轉(zhuǎn)氨酶水平> 2x正常值的個體；f.任何帶有起搏器或植入物而不能接受系列MRI的個體；g.任何活動性感染的個體，直至感染消退；或h.任何WBC計數(shù)< 3000細(xì)胞/ μ L的個體；血小板< 100，000細(xì)胞/ μ L的個體； 和未輸血血紅蛋白< 10g/dl的個體。個體從研究退出
個體可以在任何時候因任何原因退出研究。任何研究者可以因任何下列原因停止個體的治療a.在醫(yī)院進行高劑量環(huán)磷酰胺治療期間，個體經(jīng)歷需要終止治療的醫(yī)療緊急情 況；b.在醫(yī)院期間，個體經(jīng)歷嚴(yán)重的不良事件，該不良事件被判斷為可能與高劑量環(huán) 磷酰胺有關(guān)和/或嚴(yán)重到有必要終止給予高劑量環(huán)磷酰胺；和c.研究者自行判斷的任何醫(yī)學(xué)原因。高劑量環(huán)磷酰胺的施用高劑量環(huán)磷酰胺治療在腫瘤醫(yī)生和工作人員的監(jiān)督下進行。個體在第-3天至第0天靜脈內(nèi)接受50mg/kg/日高劑量的環(huán)磷酰胺。高劑量環(huán)磷 酰胺的劑量按理想體重計算。理想體重按骨髓移植程序中使用的現(xiàn)有方法確定。如果個體 的實際體重小于理想體重，使用實際體重計算環(huán)磷酰胺劑量。預(yù)定個體僅接受一個療程的 治療。在施用高劑量的環(huán)磷酰胺之前和之后應(yīng)保持足夠的利尿措施以防止出血性膀胱 炎。環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的出血性膀胱炎的預(yù)防(通常是美司鈉或強制利尿)按照SCT程序使用 的已有的臨床實踐指導(dǎo)進行。從第6日(高劑量環(huán)磷酰胺施用完成后6天)，個體接受粒細(xì)胞集落刺激因子 (5 μ g/kg/d)直至絕對嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過1. OX IO9個細(xì)胞/L。個體也被通 常給予抗生素(諾氟沙星，氟康唑和伐昔洛韋)直至嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)回歸正常。抗胸腺細(xì)胞球蛋白的施用抗胸腺細(xì)胞球蛋白與高劑量環(huán)磷酰胺或單次更低劑量環(huán)磷酰胺注射同時IV施用。醋酸格拉默的施用雙倍劑量的醋酸格拉默在最后一劑高劑量環(huán)磷酰胺(第0日)或單次更低劑量環(huán) 磷酰胺注射后30天開始每日皮下注射施用。治療后出院按照臨床要求個體至少住院4天。隨后允許其出院進行個人護理直至嗜中性粒細(xì) 胞計數(shù)按照標(biāo)準(zhǔn)方案恢復(fù)(通常在最后一劑高劑量環(huán)磷酰胺后2-3周)。MRI 評價在治療后第-3、0、3、6、9、12、15、18、21和24月進行1 1評價。這便于了解治療后 疾病進展的過程。監(jiān)測釓增強病損平均數(shù)目以評估疾病活動的變化。評估從基線(第_3 和0月釓增強病損平均數(shù)目)到隨訪(第15和18月釓增強病損平均數(shù)目)的變化。進一 步，第3、6、9和12月的系列MRI便于了解2年中疾病活動的變化，同時也監(jiān)測了高劑量環(huán) 磷酰胺的安全性。在研究全過程中評估其他的參數(shù)-T2病損負(fù)荷以及腦實質(zhì)分?jǐn)?shù)也是與殘 疾和病變的增長相關(guān)的疾病活動的度量。掃描在有回聲速度或雙速度梯度的1. 5特斯拉通 用電子掃描儀(Milwaukee WI)上進行。疾病進展的MRI標(biāo)準(zhǔn)a.釓增強病損的數(shù)目；b.T2病損負(fù)荷；和
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C.腦實質(zhì)分?jǐn)?shù)。MRI掃描分析a.使用對冠狀圖像的檢驗從軸向3mm連續(xù)切片計數(shù)對比增強病損。如果病損在一 個序列上可見而在其他序列上不可見，如果其在長TR脈沖序列上也可見則被計數(shù)為一個 增強斑?？偧膊∝?fù)荷基于增強斑的數(shù)目由從頸椎交界處到頂點的掃描確定。b.多發(fā)性硬化斑的體積由FLAIR掃描分析確定，F(xiàn)LAIR掃描提供在MS斑和底層腦 脊髓液(CSF)之間的與噪聲最大的對比，對應(yīng)正常白色和灰色物質(zhì)。然而，如果在FLAIR掃 描中顯示黑色的信號的膀胱MS斑，我們使用質(zhì)子密度-T2-加權(quán)脈沖序列來確認(rèn)這些病損， 并用這些額外的MS斑來補充FLAIR體積評估。使用電腦輔助體積分析來進行闕值和三維 體積分析。c.進行總腦實質(zhì)體積分析時使用標(biāo)準(zhǔn)剝離算法以去除頭骨和底層軟組織體積。使 用闕值和人工修正，去除CSF來進行腦實質(zhì)體積分析。d.由兩名放射科醫(yī)生獨立判讀MRI掃描結(jié)果。如果解讀間有大于10%的差距，則 請第三位放射科醫(yī)生判讀MRI掃描結(jié)果。報告的解讀結(jié)果是三份判讀的平均值(關(guān)于T2 斑體積和腦實質(zhì)分?jǐn)?shù))或統(tǒng)一反映出兩份判讀的結(jié)果(增強病損的數(shù)目)。數(shù)據(jù)被記錄在 CRFs上并錄入數(shù)據(jù)庫。神經(jīng)學(xué)/臨床評價在基線和高劑量環(huán)磷酰胺治療后研究期間(24個月)每3個月進行神經(jīng)學(xué)檢查。 確認(rèn)疾病進展使用的臨床測量方法是多發(fā)性硬化癥功能組合表(MSFC)和擴展殘疾狀態(tài)量 表(EDSS)。研究型護士 /協(xié)調(diào)員可以被訓(xùn)練使用MSFC，神經(jīng)學(xué)家可以檢查個體以給出EDSS 評分。EDSS基于八個功能系統(tǒng)(視覺、腦干、感覺、小腦、括約肌、大腦等)的神經(jīng)學(xué)檢查， 評分范圍從0 (正常)到10 (死于MS)。MSFC被設(shè)計用于測試步態(tài)、上肢靈活度和認(rèn)知。三項分測試為a) 25英尺限時步 行(25TW) ；b) 9洞樁測試(9-HPT)；和c)同步聽覺系列加算測試(PASAT-3)。PASAT測驗要 求個體將出現(xiàn)在聽力磁帶中的連續(xù)數(shù)字相加并口頭反應(yīng)出其準(zhǔn)確的和。當(dāng)每個數(shù)字被放出 時，個體必須將該數(shù)字與其前面放出的數(shù)字相加而不是與個體前一個反應(yīng)相加。盡管本發(fā)明優(yōu)選的實施方案已經(jīng)被展示和描述在本申請中，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員 來說顯然這樣的實施方案僅是為了舉例。在不背離本發(fā)明的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員即可 進行多種改變、變化和替代。應(yīng)當(dāng)理解在實踐本發(fā)明時可使用對本申請描述的實施方案的 多種修改。下列的權(quán)利要求目的在于定義本發(fā)明的范圍，這些權(quán)利要求范圍內(nèi)的方法和結(jié) 構(gòu)及其等同形式都被覆蓋。通過引用將所有提及的文獻整體納入本文。
4權(quán)利要求
一種治療神經(jīng)性自身免疫疾病的方法，包括向CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè)的臨界值的有此需要的個體施用(a)約10到約70mg/kg/日的環(huán)磷酰胺；(b)約1到約10μg/kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子；和(c)約10mg/日到約80mg/日的醋酸格拉默。
2.權(quán)利要求1的方法，進一步包括確定個體CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平。
3.權(quán)利要求2的方法，進一步包括監(jiān)測個體CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平。
4.權(quán)利要求1的方法，其中向個體施用至少約50mg/kg/日的環(huán)磷酰胺。
5.權(quán)利要求1的方法，其中向個體施用至少約5μ g/kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子。
6.權(quán)利要求1的方法，其中向個體施用至少約40mg/日的醋酸格拉默。
7.權(quán)利要求1-6任意一項的方法，進一步包括使用包括第一篩查、第二篩查和環(huán)磷酰 胺限制分配的方法來控制該方法的使用。
8.權(quán)利要求7的方法，其中第一篩查包括(a)確定個體是否符合治療標(biāo)準(zhǔn)；(b)如果個體是女性，檢測個體懷孕情況并為個體提供懷孕咨詢；(c)確定與個體CD4+T細(xì)胞相關(guān)的醛脫氫酶水平；和(d)為個體匹配紅細(xì)胸和血小板供應(yīng)源。
9.權(quán)利要求7的方法，其中第二篩查包括在個體是女性的情況下，監(jiān)測其懷孕情況；和 /或監(jiān)測不良事件。
10.權(quán)利要求9的方法，其中的不良事件是中毒。
11.權(quán)利要求7-10任意一項的方法，其中如果個體懷孕，和/或經(jīng)歷不良事件，則停止 對其的治療。
12.權(quán)利要求7的方法，其中環(huán)磷酰胺的限制分配包括(a)為每個個體分配一個識別號碼；(b)每個識別號碼關(guān)聯(lián)一個環(huán)磷酰胺容器；和(c)對個體施用來自環(huán)磷酰胺容器的環(huán)磷酰胺，該個體的識別號碼對應(yīng)于與所述容器 關(guān)聯(lián)的識別號碼。
13.權(quán)利要求1的方法，其中環(huán)磷酰胺至少連續(xù)施用約4天。
14.權(quán)利要求1的方法，其中在施用環(huán)磷酰胺完成后5到7天內(nèi)開始施用粒細(xì)胞集落刺 激因子。
15.權(quán)利要求1的方法，其中對個體施用粒細(xì)胞集落刺激因子直至個體絕對嗜中性粒 細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過約1. OX IO9個細(xì)胞/L。
16.權(quán)利要求1的方法，其中施用環(huán)磷酰胺完成后28到35天內(nèi)開始施用醋酸格拉默。
17.權(quán)利要求1的方法，醋酸格拉默的劑量至少約40mg/日。
18.權(quán)利要求17的方法，其中在開始施用醋酸格拉默2.5到4個月內(nèi)，醋酸格拉默的劑 量被減至約20mg/日。
19.權(quán)利要求1-18任意一項的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥、 Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng) 性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其組合。
20.權(quán)利要求19的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。
21.權(quán)利要求20的方法，其中多發(fā)性硬化癥已復(fù)發(fā)。
22.權(quán)利要求20的方法，其中多發(fā)性硬化癥在緩解。
23.權(quán)利要求1-22任意一項的方法，其中環(huán)磷酰胺從重構(gòu)的凍干環(huán)磷酰胺制得。
24.權(quán)利要求1的方法，其中環(huán)磷酰胺通過靜脈內(nèi)施用。
25.一種治療神經(jīng)性自身免疫疾病的方法，包括向CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平低于預(yù) 設(shè)的臨界值的有此需要的個體施用(a)約10到約70mg/kg/日的環(huán)磷酰胺；(b)多至約5mg/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白；和(c)約1到約10μg/kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子。
26.權(quán)利要求25的方法，進一步包括確定個體CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平。
27.權(quán)利要求26的方法，進一步包括監(jiān)測個體CD4+T細(xì)胞中醛脫氫酶水平。
28.權(quán)利要求25的方法，其中向個體施用至少約50mg/kg/日的環(huán)磷酰胺。
29.權(quán)利要求25的方法，其中向個體施用至少約5μ g/kg/日的粒細(xì)胞集落刺激因子。
30.權(quán)利要求25的方法，其中向個體施用至少約2.5μ g/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白。
31.權(quán)利要求25的方法，進一步包括使用包括第一篩查、第二篩查和環(huán)磷酰胺限制分 配的方法來控制該方法的使用。
32.權(quán)利要求31的方法，其中第一篩查包括(a)確定個體是否符合治療標(biāo)準(zhǔn)；(b)如果個體是女性，檢測個體懷孕情況并為個體提供懷孕咨詢；(c)確定與個體CD4+T細(xì)胞相關(guān)的醛脫氫酶水平；和(d)為個體匹配紅細(xì)胞和血小板供應(yīng)源。
33.權(quán)利要求31的方法，其中第二篩查包括在個體是女性的情況下，監(jiān)測其懷孕情況; 和/或監(jiān)測不良事件。
34.權(quán)利要求33的方法，其中的不良事件是中毒。
35.權(quán)利要求32-34任意一項的方法，其中如果個體懷孕，和/或經(jīng)歷不良事件，則停止 對其的治療。
36.權(quán)利要求31的方法，其中環(huán)磷酰胺的限制分配包括(a)為每個個體分配一個識別號碼；(b)每個識別號碼關(guān)聯(lián)一個環(huán)磷酰胺容器；和(c)對個體施用來自環(huán)磷酰胺容器的環(huán)磷酰胺，該個體的識別號碼對應(yīng)于與所述容器 關(guān)聯(lián)的識別號碼。
37.權(quán)利要求25的方法，其中環(huán)磷酰胺至少連續(xù)施用約4天。
38.權(quán)利要求25的方法，其中抗胸腺細(xì)胞球蛋白在環(huán)磷酰胺之前、之后或與環(huán)磷酰胺 同時施用。
39.權(quán)利要求25的方法，其中在施用環(huán)磷酰胺完成后5到7天內(nèi)開始施用粒細(xì)胞集落 刺激因子。
40.權(quán)利要求25的方法，其中對個體施用粒細(xì)胞集落刺激因子直至個體絕對嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)連續(xù)兩天超過約1. OX IO9個細(xì)胞/L。
41.權(quán)利要求25-40任意一項的方法，其中環(huán)磷酰胺從重構(gòu)的凍干環(huán)磷酰胺制得。
42.權(quán)利要求25的方法，其中環(huán)磷酰胺通過靜脈內(nèi)施用。
43.權(quán)利要求25-42任意一項的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥、 Guillain-Barre綜合征、Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng) 性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng) 性肌強直、精神分裂癥或其組合。
44.權(quán)利要求43的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。
45.權(quán)利要求44的方法，其中多發(fā)性硬化癥已復(fù)發(fā)。
46.權(quán)利要求44的方法，其中多發(fā)性硬化癥在緩解。
47.權(quán)利要求1的方法，進一步包括對個體施用多至約5mg/kg/日的抗胸腺細(xì)胞球蛋白。
48.權(quán)利要求25的方法，進一步包括對個體施用約IOmg/日到約80mg/日的醋酸格拉默。
49.一種選擇使用環(huán)磷酰胺治療的個體的方法，包括，如果個體生物樣品的醛脫氫酶水 平超過預(yù)設(shè)的臨界值則選擇該個體進行治療；或在個體生物樣品的醛脫氫酶水平低于預(yù)設(shè) 的臨界值的情況下選擇替代的治療。
50.權(quán)利要求49的方法，其中生物樣品是血液和/或白細(xì)胞。
51.權(quán)利要求50的方法，其中白細(xì)胞是T細(xì)胞。
52.權(quán)利要求51的方法，其中T細(xì)胞是⑶4+T細(xì)胞。
53.權(quán)利要求49的方法，其中通過熒光醛脫氫酶底物實驗測定醛脫氫酶水平。
54.權(quán)利要求53的方法，其中熒光醛脫氫酶底物是ALDEFLU0R 。
55.權(quán)利要求49的方法，其中通過測量RNA水平測定醛脫氫酶水平。
56.權(quán)利要求49的方法，其中通過使生物樣品與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫酶水平。
57.權(quán)利要求56的方法，其中抗體是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生 物素化的。
58.權(quán)利要求49-57任意一項的方法，其中對選定的個體施用環(huán)磷酰胺。
59.權(quán)利要求49的方法，其中個體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、 急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其 組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。
60.權(quán)利要求59的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。
61.一種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，包括測定至少第一生物樣品和第二生 物樣品中的醛脫氫酶的水平，其中第一生物樣品和第二生物樣品是在不同時間從個體取 得。
62.權(quán)利要求61的方法，進一步包括如果生物樣品中觀察到的醛脫氫酶水平超過預(yù)設(shè) 的臨界值則中斷治療。
63.權(quán)利要求61的方法，進一步包括基于在第一生物樣品、第二生物樣品或其組合中觀察到的醛脫氫酶水平修改治療。
64.權(quán)利要求61的方法，進一步包括如果在第一生物樣品、第二生物樣品或其組合中 觀察到的醛脫氫酶水平超過預(yù)設(shè)臨界值則選擇替代的治療。
65.權(quán)利要求61的方法，其中生物樣品是血液和/或白細(xì)胞。
66.權(quán)利要求65的方法，其中白細(xì)胞是T細(xì)胞。
67.權(quán)利要求66的方法，其中T細(xì)胞是⑶4+T細(xì)胞。
68.權(quán)利要求61的方法，其中通過熒光醛脫氫酶底物實驗測定醛脫氫酶水平。
69.權(quán)利要求68的方法，其中熒光醛脫氫酶底物是ALDEFLU0R 。
70.權(quán)利要求61的方法，其中通過測量RNA水平測定醛脫氫酶水平。
71.權(quán)利要求61的方法，其中通過使生物樣品與醛脫氫酶抗體接觸來測定醛脫氫酶水平。
72.權(quán)利要求71的方法，其中抗體是同位素標(biāo)記的、放射性標(biāo)記的、熒光團標(biāo)記的或生 物素化的。
73.權(quán)利要求61的方法，其中個體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、 急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其 組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。
74.權(quán)利要求73的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。
75.一種選擇使用環(huán)磷酰胺治療的個體的方法，包括使個體的生物樣品與環(huán)磷酰胺接觸。
76.權(quán)利要求75的方法，進一步包括在個體的生物樣品與環(huán)磷酰胺接觸后測定樣本中 細(xì)胞死亡水平。
77.權(quán)利要求76的方法，其中生物樣品是血液和/或白細(xì)胞。
78.權(quán)利要求77的方法，其中白細(xì)胞是T細(xì)胞。
79.權(quán)利要求78的方法，其中T細(xì)胞是⑶4+T細(xì)胞。
80.權(quán)利要求75的方法，其中對選定的個體施用環(huán)磷酰胺。
81.權(quán)利要求75的方法，其中個體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、 急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其 組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。
82.權(quán)利要求81的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。
83.—種監(jiān)測被施用了環(huán)磷酰胺的個體的方法，包括使個體的生物樣品與環(huán)磷酰胺接觸。
84.權(quán)利要求83的方法，進一步包括在個體的生物樣品與環(huán)磷酰胺接觸后測定樣品中 細(xì)胞死亡水平。
85.權(quán)利要求84的方法，進一步包括如果生物樣品中觀察到的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè) 的臨界值則中斷治療。
86.權(quán)利要求84的方法，進一步包括基于生物樣品中觀察到的細(xì)胞死亡水平來修改治療。
87.權(quán)利要求84的方法，進一步包括如果生物樣品中觀察到的細(xì)胞死亡水平低于預(yù)設(shè) 的臨界值則選擇替代的治療。
88.權(quán)利要求83的方法，其中生物樣品是血液和/或白細(xì)胞。
89.權(quán)利要求88的方法，其中白細(xì)胞是T細(xì)胞。
90.權(quán)利要求89的方法，其中T細(xì)胞是⑶4+T細(xì)胞。
91.權(quán)利要求83的方法，其中個體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、 急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其 組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。
92.權(quán)利要求91的方法，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。
93.一種組合物，包括溶液中的環(huán)磷酰胺，其中溶液中的環(huán)磷酰胺是從凍干的環(huán)磷酰胺 中重構(gòu)的。
94.權(quán)利要求93的組合物，其中環(huán)磷酰胺在磷酸鹽緩沖液中重構(gòu)。
95.權(quán)利要求93的組合物，其中溶液中環(huán)磷酰胺的濃度至少約20mg/ml。
96.權(quán)利要求93的組合物，在患有神經(jīng)性自身免疫疾病的個體中被用作免疫清除劑。
97.權(quán)利要求93的組合物，其中個體患有選自多發(fā)性硬化癥、Guillain-Barre綜合征、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、重癥肌無力、橫貫性脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、 急性播散性腦脊髓炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強直、精神分裂癥或其 組合的神經(jīng)性自身免疫疾病。
98.權(quán)利要求97的組合物，其中神經(jīng)性自身免疫疾病是多發(fā)性硬化癥。
全文摘要
本發(fā)明描述了一種治療神經(jīng)性自身免疫疾病的方法，該治療方法包括施用免疫清除劑以清除染病個體中大部分或基本上全部未成熟的和成熟的免疫系統(tǒng)成分。這個步驟之后，對個體施用藥劑以重建被清除的免疫系統(tǒng)。
文檔編號A61K39/395GK101883586SQ200880117540
公開日2010年11月10日 申請日期2008年10月1日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月1日
發(fā)明者A·I·卡普林, D·A·克爾, P·A·卡拉比勒斯, S·R·奧利 申請人:約翰斯霍普金斯大學(xué)