專利名稱：三環(huán)癸-9-基-黃原酸酯的立體異構(gòu)體的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考
本申請(qǐng)要求2007年7月3日遞交的美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/958,370的優(yōu)先權(quán)，將其全部內(nèi)容作為參考并入本發(fā)明中。
發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明提供了三環(huán)癸-9-基黃原酸酯的光學(xué)活性立體異構(gòu)體、及其制備方法和藥物組合物。也提供了將其用于治療、預(yù)防或改善病毒感染和這樣的感染引起的疾病的方法。

背景技術(shù)：
三環(huán)癸-9-基黃原酸酯是包含五個(gè)手性中心的復(fù)雜分子，其在理論上可以產(chǎn)生32個(gè)立體異構(gòu)體。然而，由于其環(huán)狀結(jié)構(gòu)的限制，該分子存在的立體異構(gòu)體比理論可能性少得多。一些立體異構(gòu)體顯示在方案1中，包括四個(gè)對(duì)映體對(duì)O-外/C-外，(9R)-1A和(9S)-1A、O-外/C-內(nèi)，(9R)-1B和(9S)-1B、O-內(nèi)/C-外，(9R)-1C和(9S)-1C、和O-內(nèi)/C-內(nèi)，(9R)-1D和(9S)-1D。
英國專利GB 2,091,244以及美國專利號(hào)4,602,037和4,981,869描述了三環(huán)癸-9-基-黃原酸酯的立體異構(gòu)體混合物，其被稱為D609。如在美國申請(qǐng)公開號(hào)2005/0085448中表征的，D609包含83％的外消旋的O-外/C-外立體異構(gòu)體1A和17％的外消旋的O-外/C-內(nèi)1B、O-內(nèi)/C-外1C和O-內(nèi)/C-內(nèi)1D。
已經(jīng)報(bào)道D609顯示出多種生物活性，包括抗腫瘤活性(美國專利號(hào)4,602,037；Amtmann和Sauer，Cancer Lett.1987，35，237-244；Furstenberger等人，Int.J.Cancer 1989，43，508-512；Schick et al.Cancer Lett.1989，46.143-147；Schick等人，Cancer Lett.1989，46，149-152；Sauer等人，Cancer Lett.1990，53，97-102；PorN-Ares等人，Exp.Cell.Res.1997，235，48-54)、抗病毒活性(Sauer等人，Pro.Natl.Acad.ScL USA 1984，81，3263-3267；Amtmann等人，Biochem.Pharmacol.1987，36，1545-1549；Villanueva等人，Virology1991，181，101-108；Walro和Rosenthal，Antiviral Res.1997，36，63-72)和抗炎活性(Machleidt等人，J.Exp.Med.1996，184，725-733；Tschaikowsky等人，J.Pharmacol.1998，285，800-804)。
方案1

還報(bào)道D609是一種磷脂酰膽堿-特異性磷脂酶C(PC-PLC)的特異性抑制劑(Amtmann，Drugs Exp.Clin.Res.1996，22，287-294；Muller-Decker，Biochem.Biophys.Res.Commun.1989，162，198-205)。PC-PLC水解磷脂酰膽堿產(chǎn)生第二信使二酰甘油，其激活蛋白激酶C(PKC)和/或酸性神經(jīng)磷脂酶(aSMase)。已經(jīng)提出通過D609抑制PC-PLC可用于抑制PKC和aSMase的活性(Schutze等人，Cell 1992，71，765-776；Wiegmann等人，Cell 1994，78，1005-1015；Cifone等人，EMBO J.1995，14，5859-5868；Amtmann，DrugsExp.Clin.Res.1996，22，287-294；Machleidt等人，J.Exp.Med.1996，184，725-733；Yamamoto等人，Biochem.J.1997，325，223-228)。PKC的抑制可以部分地解釋D609的抗增殖和抗腫瘤活性(Muller-Decker等人，Exp.CellRes.1988，777，295-302；Muller-Decker等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.1989，162，198-205；Amtmann，Drugs Exp.Clin.Res.1996，22，287-294)。D609抑制aSMase可以導(dǎo)致神經(jīng)酰胺生成減少，從而抑制神經(jīng)酰胺-介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(Schutze等人，Cell 1992，71，765-776；Wiegmann等人，Cell 1994，78，1005-1015；Machleidt等人，J.Exp.Med.1996，184，725-733)，例如PKC-z(Simarro等人，J.Immunol.1999，162，5149-5155)、細(xì)胞分裂素(絲裂原)活化蛋白激酶(Buscher等人，MoI Cell.Biol.1995，15，466-475；Monick等人，J.Immunol.1999，162，3005-3012)和核因子-kB(NF-kB)

(Cell 1992，71，765-776；Wiegmann等人，Cell 1994，78，1005-1015)的活化。
另外，美國專利號(hào)4,851,435、WO 96/14841、和美國申請(qǐng)公開號(hào)2004/0122086和2005/0085448描述了應(yīng)用助劑，例如離子型去垢劑、脂質(zhì)和類固醇來增強(qiáng)D609作為抗病毒劑或抗腫瘤劑的治療效果。
Gonzalez-Roura等人(Lipid 2002，37，401-406)和美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2005/0085448描述了外消旋的O-外/C-外1A、O-外/C-內(nèi)1B、O-內(nèi)/C-外1C和O-內(nèi)/C-內(nèi)1D立體異構(gòu)體的合成。然而，Gonzalez-Roura等人報(bào)道這些非對(duì)映異構(gòu)體在其抗PC-特異性磷脂酶C的抑制活性方面沒有顯著性差異。
上述生物學(xué)研究是使用D609進(jìn)行的，D609是一種三環(huán)癸-9-基黃原酸酯的復(fù)合二立體異構(gòu)混合物或外消旋混合物。特別地需要找到三環(huán)癸-9-基黃原酸酯的一種光學(xué)純立體異構(gòu)體化合物，其具有D609的治療優(yōu)點(diǎn)，但是避免或減少了D609或其它抗病毒劑的非故意的、不期望的、不需要的、不利的或副的作用。
在本發(fā)明中對(duì)各參考文獻(xiàn)的引證并不意味著這樣的參考文獻(xiàn)是本申請(qǐng)的現(xiàn)有技術(shù)。
發(fā)明簡述 本發(fā)明提供光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸的藥學(xué)上可接受的鹽，其包括但不限于鋰鹽、鎂鹽、鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽和鋅鹽。
所述光學(xué)活性的單一立體異構(gòu)體可用于治療病毒感染的藥物組合物和方法。據(jù)本發(fā)明人所知，還不存在合成三環(huán)癸-9-基黃原酸酯的單一對(duì)映異構(gòu)體或從三環(huán)癸-9-基黃原酸酯或外消旋的O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其衍生物中分離單一對(duì)映異構(gòu)體的報(bào)道。本發(fā)明提供三種用于制備這樣的光學(xué)活性的對(duì)映異構(gòu)體的方法。
在一實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥在與手性單齒膦復(fù)合的過渡金屬催化劑存在下，通過不對(duì)稱氫化硅烷化烯5合成的
在另一實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥是通過酶拆分不飽和的酯11的外消旋混合物來制備的
在另一實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥是通過酶拆分飽和的酯13的外消旋混合物制備的
本發(fā)明還提供藥物組合物，其包含光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體的組合。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸的藥學(xué)上可接受的鹽，例如鋰鹽、鎂鹽、鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽或鋅鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物以表面給藥的劑型提供。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于治療、預(yù)防或改善由病毒引起的疾病的一種或多種癥狀的方法，其包括向個(gè)體施用治療有效量的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。在一實(shí)施方案中，所述疾病為性傳播疾病。在另一實(shí)施方案中，所述病毒為致癌病毒。在另一實(shí)施方案中，所述病毒為乳頭瘤(pallipoma)病毒。在另一實(shí)施方案中，所述病毒為單純皰疹病毒。
本發(fā)明提供一種用于抑制病毒復(fù)制的方法，其包括用有效量的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥來接觸所述病毒。在一實(shí)施方案中，所述病毒為性傳播的。在另一實(shí)施方案中，所述疾病為致癌病毒。在另一實(shí)施方案中，所述病毒為乳頭瘤病毒。在另一實(shí)施方案中，所述病毒為單純皰疹病毒。
本發(fā)明提供一種用于抑制磷脂酰膽堿-特異性磷脂酶C活性的方法，其包括用有效量的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥來接觸所述磷脂酶C。



圖1顯示與INF-γ的作用相比，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)一代的(single passage)HPV-31-感染的CIN612 9E角質(zhì)形成細(xì)胞生長的影響。
圖2顯示光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)HPV-31-特異性RNA和DNA水平的影響，和對(duì)HPV-31-感染的CIN612 9E角質(zhì)形成細(xì)胞中細(xì)胞增殖的影響。
圖3顯示與INF-γ相比，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)多代的HPV-31-感染的CIN6129E角質(zhì)形成細(xì)胞生長的影響。
圖4顯示與INF-γ相比，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)多代的A431細(xì)胞生長的影響。
圖5顯示(A)用光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽(A)處理的HPV-31-感染的CIN6129E角質(zhì)形成細(xì)胞和(B)未處理的CIN6129E細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)。
圖6顯示與INF-γ相比，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)多代的HPV-31-感染的CIN6129E角質(zhì)形成細(xì)胞中的HPV-31-特異性DNA水平的影響。
圖7顯示與INF-γ相比，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)多代的HPV-31-感染的CIN612 9E角質(zhì)形成細(xì)胞中的HPV-31-特異性RNA水平的影響。
發(fā)明詳述 為了幫助理解本發(fā)明公開的內(nèi)容，如下定義多個(gè)術(shù)語。
除非另外特別地說明，本發(fā)明使用的單數(shù)形式“一個(gè)(種)”和“所述”可以指復(fù)數(shù)冠詞。通常，本發(fā)明使用的命名法和本發(fā)明描述的有機(jī)化學(xué)、藥物化學(xué)和藥理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法是眾所周知的和本領(lǐng)域通常應(yīng)用的。除非另有定義，本發(fā)明所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語通常具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。
術(shù)語“個(gè)體”指動(dòng)物，包括但不限于靈長類動(dòng)物(例如人類)、母牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠或小鼠。術(shù)語“個(gè)體”和“患者”在本發(fā)明中可互換地使用，例如，提及的哺乳動(dòng)物個(gè)體，如人類個(gè)體。
術(shù)語“治療”意味著包括減緩或消除障礙、疾病或病癥；或一種或多種與所述障礙、疾病或病癥相關(guān)的癥狀；或減緩或根除所述障礙、疾病或病癥本身的病因。
術(shù)語“預(yù)防”指延遲或消除障礙、疾病或病癥；和/或一種或多種與所述障礙、疾病或病癥相關(guān)的癥狀；使個(gè)體免于獲得疾病或減少個(gè)體獲得障礙、疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法。
術(shù)語“治療有效量”指當(dāng)施用時(shí)，在某種程度上足夠預(yù)防一種或多種待治療的障礙、疾病或病癥的癥狀的發(fā)展或減緩其的化合物的量。術(shù)語“治療有效量”也指研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或臨床醫(yī)師尋求的足夠引發(fā)細(xì)胞、組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人類生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)得化合物的量。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”、“藥學(xué)上可接受的賦形劑”、“生理學(xué)可接受的載體”或“生理學(xué)可接受的賦形劑”指藥學(xué)上可接受的物質(zhì)、組合物或賦形劑，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包囊物質(zhì)。在一實(shí)施方案中，每種組分為在與藥物制劑的其它成分相容含義上的“藥學(xué)上可接受的”，并且適于與人類和動(dòng)物的組織或器官接觸，而沒有過度的毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)、免疫原性或其它問題或并發(fā)癥，與合理的益處/危險(xiǎn)比例相稱。參見，RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，第21版，Lippincott Williams&WilkinsPhiladelphia，PA，2005；Handbook of Pharmaceutical Excipients，第5版，Rowe等人編輯，ThePharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association2005；和Handbook of Pharmaceutical Additives，第3版，Ash和Ash Eds.，GowerPublishing Company2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation，Gibson編輯，CRC Press LLCBoca Raton，F(xiàn)L，2004。
術(shù)語“活性成分”和“活性物質(zhì)”指單獨(dú)或與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑組合施用于個(gè)體用于治療、預(yù)防或改善病癥或疾病的一種或多種癥狀的化合物。如本發(fā)明使用的“活性成分”和“活性物質(zhì)”具體指本發(fā)明描述的化合物光學(xué)活性異構(gòu)體。
術(shù)語“藥物”、“治療劑”和“化療劑”指施用于個(gè)體以治療、預(yù)防或改善病癥或疾病的一種或多種癥狀的化合物或其藥物組合物。
術(shù)語“釋放控制賦形劑”指與常規(guī)立即釋放劑型中的賦形劑相比，其主要功能是改變從劑型中釋放活性物質(zhì)的持續(xù)時(shí)間或位置的賦形劑。
術(shù)語“非釋放控制賦形劑”指與常規(guī)立即釋放劑型中的賦形劑相比，其主要功能不包括改變從劑型中釋放活性物質(zhì)的持續(xù)時(shí)間或位置的賦形劑。
術(shù)語“烷基”指直鏈飽和一價(jià)烴基或支鏈飽和一價(jià)烴基。除非另有說明，術(shù)語“烷基”也同時(shí)包括直鏈和支鏈烷基。在某些實(shí)施方案中，烷基為具有1至20(C1-20)、1至15(C1-15)、1至10(C1-10)或1至6(C1-6)個(gè)碳原子的直鏈飽和一價(jià)烴基，或3至20(C3-20)、3至15(C3-15)、3至10(C3-10)或3至6(C3-6)個(gè)碳原子的支鏈飽和一價(jià)烴基。如本發(fā)明使用的直鏈C1-6和支鏈C3-6烷基也稱為“低級(jí)烷基”。烷基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、丙基(包括所有的異構(gòu)形式)、正丙基、異丙基、丁基(包括所有異構(gòu)形式)、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基(包括所有異構(gòu)形式)和己基(包括所有異構(gòu)形式)。例如，C1-6烷基指1至6個(gè)碳原子的直鏈飽和一價(jià)烴基或3至6個(gè)碳原子的支鏈飽和一價(jià)烴基。在某些實(shí)施方案中，烷基可以被一個(gè)或多個(gè)如本發(fā)明描述的取代基Q取代。
術(shù)語“環(huán)烷基”指環(huán)狀飽和的橋連或非橋連一價(jià)烴基，其可任選地被一個(gè)或多個(gè)如本發(fā)明描述的取代基Q取代。在某些實(shí)施方案中，所述環(huán)烷基具有3至20(C3-20)、3至15(C3-15)、3至10(C3-10)或3至7(C3-7)個(gè)碳原子。環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、十氫萘基和金剛烷基。
術(shù)語“芳基”指包含至少一個(gè)芳香烴環(huán)的單環(huán)芳香基和/或多環(huán)一價(jià)芳香基。在某些實(shí)施方案中，所述芳基具有6至20(C6-20)、6至15(C6-15)或6至10(C6-10)個(gè)環(huán)原子。芳基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于苯基、萘基、芴基、薁基(azulenyl)、蒽基、菲基、芘基、聯(lián)苯基和三聯(lián)苯基。芳基也指二環(huán)或三環(huán)碳環(huán)，其中一個(gè)環(huán)是芳香的，而其它環(huán)可以是飽和的、部分不飽和的或芳香的，例如二氫萘基、茚基、茚滿基或四羥基萘基(四氫萘基)。在某些實(shí)施方案中，芳基也可以任選地被一個(gè)或多個(gè)如本發(fā)明描述的取代基Q取代。
術(shù)語“雜芳基”指包含至少一個(gè)芳香環(huán)的單環(huán)芳香基和/或多環(huán)芳香基，其中至少一個(gè)芳香環(huán)含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S和N的雜原子。雜芳基基團(tuán)的每個(gè)環(huán)可以包含一個(gè)或兩個(gè)O原子、一個(gè)或兩個(gè)S原子和/或一個(gè)至四個(gè)N原子，條件是每個(gè)環(huán)中雜原子的總量為四個(gè)或更少，并且每個(gè)環(huán)包含至少一個(gè)碳原子。所述雜芳基可以在其引起形成穩(wěn)定化合物的任何雜原子或碳原子位點(diǎn)連接到主結(jié)構(gòu)。在某些實(shí)施方案中，所述雜芳基具有5至20、5至15或5至10個(gè)環(huán)原子。單環(huán)雜芳基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、異噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基和三嗪基。二環(huán)雜芳基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氫異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、嘌呤基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、噻吩并吡啶基、二氫異吲哚基和四氫喹啉基。三環(huán)雜芳基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于卡唑基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基和呫噸基。在某些實(shí)施方案中，雜芳基也可以任選地被一個(gè)或多個(gè)如本發(fā)明描述的取代基Q取代。
術(shù)語“雜環(huán)基”或“雜環(huán)”指包含至少一個(gè)非芳香環(huán)的單環(huán)非芳香環(huán)系統(tǒng)和/或多環(huán)環(huán)系統(tǒng)，其中一個(gè)或多個(gè)非芳香環(huán)原子為獨(dú)立地選自O(shè)、S或N的雜原子；并且其余環(huán)原子為碳原子。在某些實(shí)施方案中，所述雜環(huán)基或雜環(huán)基團(tuán)具有3至20、3至15、3至10、3至8、4至7或5至6個(gè)環(huán)原子。在某些實(shí)施方案中，所述雜環(huán)為單環(huán)、二環(huán)、三環(huán)或四環(huán)環(huán)系統(tǒng)，其可以包括稠合的或橋連的環(huán)系統(tǒng)，其中氮原子或硫原子可以任選地被氧化，氮原子可以任選地季銨化，一些環(huán)可以被部分地或完全地飽和或者芳香化。所述雜環(huán)可以在任何雜原子或碳原子處連接到主結(jié)構(gòu)，形成穩(wěn)定的化合物。這樣的雜環(huán)基的實(shí)例包括但不限于吖啶基、氮雜卓基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、苯并異噁唑基、苯并異噁嗪基、苯并[4，6]咪唑并[1，2a]吡啶基、苯并二噁烷基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并呋喃酮基、苯并呋喃基、苯并萘并呋喃基、苯并吡喃酮基、苯并吡喃基、苯并四氫呋喃基、苯并四氫噻吩基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并苯硫基、苯并三唑基、苯并噻喃基、苯丙噁嗪基、苯并噁唑基、β咔啉基、卡唑基、苯并二氫吡喃基、色酮基、噌啉基、香豆素基、十氫異喹啉基、二苯并呋喃基、二氫苯并異噻嗪基、二氫苯并異噁嗪基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、二氧戊環(huán)基、二氫吡嗪基、二氫吡啶基、二氫吡唑基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氧戊環(huán)基、1，4-二噻吩基(dithianyl)、呋喃酮基、呋喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、吲唑基、二氫吲哚基、吲嗪基、吲哚基、異苯并四氫呋喃基、異苯并四氫噻吩基、異苯并噻吩基、異色滿基、異香豆素基、異二氫氮茚基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑烷基、異噻唑基、異噁唑烷基、異噁唑基、嗎啉基、萘啶基、八氫吲哚基、噁二唑基、噁唑烷酮基、噁唑烷基、噁唑并吡啶基、噁唑基、環(huán)氧乙烷基、萘嵌間二氮雜苯基、菲啶基、phenathrolinyl、吩砒嗪基(phenarsazinyl)、吩嗪基、吩噻嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、4-哌啶酮基、蝶啶基、嘌呤基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、噠嗪基、吡啶基、吡啶并吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、奎寧環(huán)基、四氫呋喃基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫吡喃基、四氫噻吩基、四唑基、噻二唑并嘧啶基、噻二唑基、硫代嗎啉基、噻唑烷基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和1，3，5-三噻烷基(trithianyl)。在某些實(shí)施方案中，雜環(huán)也可以任選地被一個(gè)或多個(gè)如本發(fā)明描述的取代基Q取代。
術(shù)語“?；敝?C(O)R基團(tuán)，其中R為烷基、環(huán)烷基、烯基、雜環(huán)、芳基或雜芳基，各自如本發(fā)明定義的。酰基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于乙?；?、丙酰基、丁酰基、并丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬?；?、癸?；?、十二烷?；?、十四烷?；?、十六烷?；?、十八烷酰基、二十烷酰基、二十二烷?；?、肉豆蔻腦?；⒆貦坝王；?、油酰基、亞油酰基、花生四烯?；⒈郊柞；?、吡啶并羰基和糠?；?。
術(shù)語“鹵素”、“鹵化物”或“鹵代”指氟、氯、溴或碘。
術(shù)語“任選取代的”是指基團(tuán)例如烷基、亞烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基可以被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立地選自例如鹵素、氰基、(-CN)、硝基(-NO2)、-SRa、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、-Ra、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRbRc、-C(NRa)NRbRc、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)ORa、-OC(O)NRbRc、-OC(＝NRa)NRbRc、-OS(O)Ra、-OS(O)2R8、-OS(0)NRaRb、-OS(O)2NRaRb、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)ORb、-NRaC(O)NRbRc、-NRaC(NRb)NRcRd、-NRaS(O)Rb、-NRaS(O)2Rb、-NRaS(O)RbRc或-NRaS(O)2RbRc；其中Ra、Rb、Rc和Rd各自獨(dú)立地為例如烷基、烯基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基。
術(shù)語“任選取代的”是指基團(tuán)例如烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基或酰基可以被一個(gè)或多個(gè)取代基Q取代，在一實(shí)施方案中，其被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)取代基Q取代，其中各個(gè)Q獨(dú)立地選自氰基、鹵素和硝基；C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環(huán)烷基、C6-14芳基、雜芳基和雜環(huán)基；和-C(O)Re、-C(O)ORe、-C(O)NRfRg、-C(NRe)NRfRg、-ORe、-OC(O)Re、-OC(O)ORe、-OC(O)NRfR8、-OC(＝NRe)NRfRg、-OS(O)Re、-OS(O)2Re、-OS(O)NRfRg、-OS(O)2NRfRg、-NRfRg、-NReC(O)Rf、-NReC(O)ORf、-NReC(O)NRfRg、-NReC(＝NRh)NRfRg、-NReS(O)Rf、-NReS(O)2Rf、-NReS(O)NRfRg、-NReS(O)2NRfRe、-SRe、-S(O)Re或-S(O)2Re；其中Re、Rf、Rg和Rh各自獨(dú)立地為氫；C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環(huán)烷基、C6-14芳基、雜芳基或雜環(huán)基；或Rf和Rg與它們連接的N原子一起形成雜環(huán)。
術(shù)語“光學(xué)活性的”和“對(duì)映異構(gòu)活性的”在本發(fā)明中可互換地使用，指化合物包含至少足夠過量的一種對(duì)映異構(gòu)體多于其它對(duì)映異構(gòu)體，從而該化合物混合物旋轉(zhuǎn)平面偏振光。對(duì)映異構(gòu)體的光學(xué)活性典型地表示為對(duì)映體過量(e.e.)。在某些實(shí)施方案中，“光學(xué)活性的”和“對(duì)映異構(gòu)體活性的”指下述分子集合，所述分子具有的對(duì)映體過量為不少于約50％、不少于約70％、不少于約80％、不少于約90％、不少于約91％、不少于約92％、不少于約93％、不少于約94％、不少于約95％、不少于約96％、不少于約98％、不少于約99％或不少于約99.5％、不少于約99.8％。在某些實(shí)施方案中，所述化合物包含基于所述消旋體總重量的約95％或更多的(-)對(duì)映異構(gòu)體和約5％或更少的(+)對(duì)映異構(gòu)體。
在描述光學(xué)活性化合物中，前綴R和S用于表示所述分子圍繞手性中心的絕對(duì)構(gòu)型。(+)和(-)用于表示化合物的旋光性，即，其中光學(xué)活性化合物旋轉(zhuǎn)平面偏振光的方向。(-)前綴指示化合物為左旋的，即，該化合物向左或逆時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)平面偏振光。(+)前綴指示化合物為右旋的，即，該化合物向右或順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)平面偏振光。然而，旋光性的符號(hào)(+)和(-)不涉及分子的絕對(duì)構(gòu)型R和S。
術(shù)語“溶劑化物”指本發(fā)明提供的化合物或其鹽，其進(jìn)一步包含通過非共價(jià)分子間作用力結(jié)合的化學(xué)當(dāng)量或非化學(xué)當(dāng)量的溶劑。當(dāng)溶劑為水時(shí)，所述溶劑化物為水合物。
術(shù)語“IC50”指在測(cè)量反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)中最大反應(yīng)抑制50％所需要的化合物的量、濃度或劑量。
術(shù)語“三環(huán)癸-9-基黃原酸酯”指式1的三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸，或藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。

三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸 三環(huán)5.2.1.02.6-癸-9-基-黃原酸是包含五個(gè)手性中心的復(fù)雜分子，理論上其可以產(chǎn)生32個(gè)立體異構(gòu)體。然而，由于其環(huán)狀結(jié)構(gòu)的限制，該分子存在比理論可能性少得多的立體異構(gòu)體。一些立體異構(gòu)體在方案1中顯示，包括四個(gè)對(duì)映體對(duì)，O-外/C-外、(9R)-1A和(9S)-1A；O-外/C-內(nèi)，(9R)-1B和(9S)-1B；O-內(nèi)/C-外，(9R)-1C和(9S)-1C；和O-內(nèi)/C-內(nèi)，(9R)-1D和(9S)-1D。
本發(fā)明預(yù)期采用光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A作為治療劑具有優(yōu)于外消旋或非對(duì)映體的混合物的一些優(yōu)點(diǎn)。首先，光學(xué)純的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A是顯著有效的，因而允許使用較低劑量或濃度以獲得與外消旋的或非對(duì)映體的混合物相同的益處。第二，本發(fā)明預(yù)期減少或避免與使用非對(duì)映體的或外消旋的混合物相關(guān)的不需要的、不期望的、不利的或副的作用。事實(shí)上，與外消旋的或非對(duì)映體的混合物相比，光學(xué)純的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A具有增強(qiáng)的治療指數(shù)(參見，如本發(fā)明公開的實(shí)施例)。使用本發(fā)明描述的光學(xué)純的異構(gòu)體或其組合物的其它預(yù)期益處可以包括使藥代動(dòng)力學(xué)特征簡單化、減少不期望的藥物-藥物相互作用和減少患者-患者間變化。
因此，本發(fā)明提供光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在某些實(shí)施方案中，所述光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥具有的對(duì)映體過量不少于約50％、不少于約60％、不少于約70％、不少于約80％、不少于約85％、不少于約90％、不少于約91％、不少于約92％、不少于約93％、不少于約94％、不少于約95％、不少于約96％、不少于約97％、不少于約98％、不少于約99％、不少于約99.5％、不少于約99.9％、不少于約99.95％、不少于約99.99％或約100％。
在某些實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的對(duì)映體過量不少于約50％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約60％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約70％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約80％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約85％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約90％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約91％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約92％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約93％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約94％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約95％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約96％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約97％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約98％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約99％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約99.5％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約99.9％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約99.95％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量不少于約99.99％。在某些實(shí)施方案中，所述對(duì)映體過量為約100％。
在某些實(shí)施方案中，所述光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥包含不少于約60％、不少于約70％、不少于約80％、不少于約90％、不少于約95％、不少于約96％、不少于約97％、不少于約98％、不少于約99％、不少于約99.5％、不少于約99.8％、不少于約99.9％或約100％重量的(-)-對(duì)映異構(gòu)體。
在某些實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥中(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約60％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約70％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約80％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約90％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約95％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約96％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約97％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約98％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約99％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約99.5％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約99.8％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量不少于約99.9％重量。在某些實(shí)施方案中，(-)-對(duì)映異構(gòu)體的含量為約100％重量。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的藥學(xué)上可接受的鹽。用于制備所述藥學(xué)上可接受的鹽的合適的堿包括但不限于無機(jī)堿，所述無機(jī)堿包括但不限于氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋅和氫氧化銨；和有機(jī)堿，例如伯胺、仲胺、叔胺或季胺、脂肪族胺和芳香族胺，包括但不限于L-精氨酸、苯乙芐胺、芐星青霉素(benzathine)、N，N′-二芐基乙二胺、N-芐基苯乙胺、膽堿、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、二甲胺、二丙胺、二異丙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、乙醇胺、乙胺、乙二胺、異丙胺、N-甲基-葡糖胺、海巴明青霉素(hydrabamine)、1H-咪唑、L-賴氨酸、嗎啉、4-(2-羥乙基)-嗎啉、甲胺、哌啶、哌嗪、丙胺、吡咯烷、1-(2-羥乙基)-吡咯烷、吡啶、喹核堿、喹啉、異喹啉、三乙醇胺、三甲胺、三乙胺、氯普魯卡因、普魯卡因、N-甲基-D-葡糖胺、2-氨基-2-(羥甲基)-1，3-丙二醇、1-對(duì)-氯芐基-2-吡咯烷-1-基甲基-苯并咪唑、三(羥甲基)氨基甲烷和氨基丁三醇。對(duì)于另外的藥學(xué)上可接受的堿的評(píng)論，參見Berge等人，J.Pharm.Sci.1977，66，1-19；和“Handbook of Pharmaceutical Salts，Properties，and Use，”Stah和Wermuth編輯；Wiley-VCH and VHCA，Zurich，2002。
在某些實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的藥學(xué)上可接受的鹽為無機(jī)鹽，包括但不限于堿金屬鹽，例如鋰鹽、鈉鹽和鉀鹽；堿土金屬鹽，例如鈣鹽和鎂鹽；鋅鹽；和銨鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為堿金屬鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為堿土金屬鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為鋰鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為鎂鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為鈣鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為鈉鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為鉀鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為鋅鹽。在某些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為銨鹽。
在另一實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的藥學(xué)上可接受的鹽為有機(jī)鹽。用于制備所述藥學(xué)上可接受的鹽的合適的有機(jī)堿為如本發(fā)明描述的那些。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的前藥，其包括但不限于在WO 2005/032492中公開的那些，將其全部內(nèi)容作為參考并入本發(fā)明中。
化合物的前藥是在體內(nèi)容易轉(zhuǎn)變?yōu)槟阁w化合物的母體化合物的功能衍生物。前藥通常是有用的，因?yàn)樵谀承┣闆r下，它們可能比母體化合物更容易施用。例如，它們可以通過口服施用來生物利用，而母體化合物不可以。所述前藥在藥物組合物也可以具有比母體化合物高的溶解度。前藥可以通過多種機(jī)制轉(zhuǎn)變成母體藥物，所述機(jī)制包括酶處理和代謝性水解。參見，Harper，Progress in Drug Research 1962，4，221-294；Morozowich等人的“Design of Biopharmaceutical Properties through Prodrugs and Analogs，”Roche編輯，APHA Acad.Pharm.Sci.1977；“Bioreversible Carriers in Drug inDrug Design，Theory and Application，”Roche編輯，APHA Acad.Pharm.Sci.1987；“Design of Prodrugs，”Bundgaard，Elsevier，1985；Wang等人，Curr.Pharm.Design 1999，5，265-287；Pauletti等人，Adv.Drug.Delivery Rev.1997，27，235-256；Mizen等人，Pharm.Biotech.1998，11，345-365；Gaignault等人，Pract.Med.Chem.1996，671-696；Asgharnejad in“Transport Processes inPharmaceutical Systems，”Amidon等人，Ed.，Marcell Dekker，185-218，2000；Balant等人，Eur.J.Drug Metab.Pharmacokinet.1990，15，143-53；Balimaneand Sinko.adv.Drug Delivery Rev.1999，39，183-209；Browne，Clin.Neuropharmacol.1997，20，1-12；Bundgaard，Arch.Pharm.Chem.1979，86，1-39；Bundgaard，Controlled Drug Delivery 1987，17，179-96；Bundgaard，Adv.Drug Delivery Rev.1992，5，1-38；Fleisher等人，Adv.Drug Delivery Rev.1996，19，115-130；Fleisher等人，Methods Enzymol 1985，112，360-381；Farquhar等人，J.Pharm.Sci.1983，72，324-325；Freeman等人，J.Chem.Soc，Chem.Commun.1991，875-877；Friis和Bundgaard，Eur.J.Pharm.Sci.1996，4，49-59；Gangwar等人，Des.Biopharm.Prop.Prodrugs Analogs，1977，409-421；Nathwani和Wood，Drugs 1993，45，866-94；Sinhababu和Thakker，Adv.DrugDelivery Rev.1996，19，241-273；Stella等人，Drugs 1985，29，455-73；Tan等人，Adv.Drug Delivery Rev.1999，39，117-151；Taylor，Adv.Drug DeliveryRev.1996，19，131-148；Valentino and Borchardt，Drug Discovery Today 1997，2，148-155；Wiebe and Knaus，Adv.Drug Delivery Rev.1999，39，63-80；Waller等人，Br.J.Clin.Pharmac.1989，28，497-507。
在一實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的前藥是式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物
其中Ra為用一個(gè)或多個(gè)選自S、O、N和P的雜原子取代的烷基。
在另一實(shí)施方案中，所述前藥為式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物
其中Rb、Rc和Rd各自獨(dú)立地為H或烷基。
式(II)的前藥的合成在方案2中舉例說明(Krise等人，J.Pharm.ScL1999，88，922-927；和Krise等人，J.Pharm.Sci.1999，88，928-932)?；衔?與光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽發(fā)生取代反應(yīng)生成式(II)的相應(yīng)光學(xué)活性前藥。在某些實(shí)施方案中，Rb為H。在某些實(shí)施方案中，Rc和Rd各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。在某些實(shí)施方案中，Rc和Rd各自獨(dú)立地為甲基、正丙基或叔丁基。在某些實(shí)施方案中，Rc和Rd都是甲基。在某些實(shí)施方案中，Rc和Rd都是正丙基。在某些實(shí)施方案中，Rc和Rd都是叔丁基。在某些實(shí)施方案中，Rb為H，Rc和Rd各自獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。
方案2
在另一實(shí)施方案中，所述前藥為式(III)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物
其中Rb和Rc各自獨(dú)立地為H或烷基。在某些實(shí)施方案中，Rb為H。在某些實(shí)施方案中，Rc為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。Rc為甲基、正丙基或正丁基。在某些實(shí)施方案中，Rb為H，且Rc為甲基、正丙基或叔丁基。
式(III)的前藥的合成在方案3中舉例說明。使乙酸氯甲酯3(其根據(jù)Bodor等人(J.Org.Chem.1983，48，5280-5284)合成的)與光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽反應(yīng)，得到式(III)的相應(yīng)光學(xué)活性的前藥4，其中Rb為H. 方案3
光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸的制備 1.不對(duì)稱氫化硅烷化 本發(fā)明提供一種用于合成光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的不對(duì)稱氫化硅烷化方法(方案4)。如本發(fā)明使用的結(jié)構(gòu)中的星號(hào)“*”指示基團(tuán)可能的連接位點(diǎn)，從而，當(dāng)所述基團(tuán)連接至期望的位點(diǎn)時(shí)，得到的光學(xué)活性化合物將如所期望的在相同方向上具有(+)或(-)的光學(xué)活性。
在本發(fā)明中通過合成光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥來闡述該方法。如果需要，所述方法同樣適用于合成光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
方案4
在一實(shí)施方案中，所述方法包括在與手性單齒膦復(fù)合的過渡金屬催化劑存在下，使非手性的C-外烯5與硅烷反應(yīng)，得到光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6。
在另一實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括用氧化劑氧化所述光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6，得到保留立體化學(xué)的光學(xué)活性的烷醇7。
在另一實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括將所述光學(xué)活性的烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在另一實(shí)施方案中，所述方法包括步驟a)在與手性單齒膦復(fù)合的過渡金屬催化劑存在下，使非手性的C-外烯5與硅烷反應(yīng)，得到光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6；b)用氧化劑氧化該光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6，得到保留立體化學(xué)的光學(xué)活性的烷醇7；和c)將所述光學(xué)活性的烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
用于不對(duì)稱氫化硅烷化反應(yīng)的合適的硅烷包括但不限于式(IV)的化合物
其中 R1、R2和R3各自獨(dú)立地為H；鹵素；C1-6烷基，任選地被下述基團(tuán)取代一個(gè)或多個(gè)取代基Q，在一實(shí)施方案中，一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)取代基Q；或-OR4，其中R4為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基或C6-10芳基，各自任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基Q取代，在一實(shí)施方案中，各自任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)取代基Q取代。
合適的硅烷的實(shí)例包括但不限于三氯硅烷、甲基二氯硅烷、二甲基氯硅烷、甲氧基二氯硅烷、三乙基硅烷、五甲基二硅氧烷(HSiMe2OTMS)和1，1-二甲基-3，3-二苯基-3-叔-丁基二硅氧烷(HSiMe2OTBDPS)。在某些實(shí)施方案中，所述硅烷為三氯硅烷。在某些實(shí)施方案中，所述硅烷為甲基二氯硅烷。在某些實(shí)施方案中，所述硅烷為二甲基氯硅烷。在某些實(shí)施方案中，所述硅烷為甲氧基二氯硅烷。在某些實(shí)施方案中，所述硅烷為三乙基硅烷。在某些實(shí)施方案中，所述硅烷為五甲基二硅氧烷(HSiMe2OTMS)。在某些實(shí)施方案中，所述硅烷為1，1-二甲基3，3-二苯基-3-叔丁基二硅氧烷(HSiMe2OTBDPS)。
在不對(duì)稱氫化硅烷化反應(yīng)中用作催化劑的合適的過渡金屬包括但不限于鉑、銦、鈀、銠和釕。所述過渡金屬催化劑可以是非均質(zhì)的或均質(zhì)的。在某些實(shí)施方案中，所述過渡金屬催化劑為鉑。在某些實(shí)施方案中，所述過渡金屬催化劑為銥。在某些實(shí)施方案中，所述過渡金屬催化劑為鈀。在某些實(shí)施方案中，所述過渡金屬催化劑銠。在某些實(shí)施方案中，所述過渡金屬催化劑為釕。
合適的手性單齒膦配體包括但不限于式(V)的化合物
其中 R5為H；C1-6烷基，任選地被下述基團(tuán)取代一個(gè)或多個(gè)取代基Q，在一實(shí)施方案中，一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)取代基Q；或-OR8，其中R8為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基，或C6-10芳基，各自任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基Q取代，在一實(shí)施方案中，各自任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)取代基Q取代；和 R6和R7各自獨(dú)立地為C6-10芳基，任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基Q取代，在一實(shí)施方案中，任選地被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)取代基Q取代。
在某些實(shí)施方案中，R5為烷基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基和己基。在某些實(shí)施方案中，R5為甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。在某些實(shí)施方案中，R5為OR8，其中R8為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基或C6-10芳基。在某些實(shí)施方案中，R8為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基。在某些實(shí)施方案中，R5為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。在某些實(shí)施方案中，R6和R7各自獨(dú)立地為苯基；或單-、二-、三-、四-或五鹵代苯基。在某些實(shí)施方案中，R6和R7為苯基。在某些實(shí)施方案中，R5為-OR8，其中R8為甲基。在某些實(shí)施方案中，R5為-OR8，其中R8為甲基；和R6和R7為苯基。
O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的手性主要由使用的手性單齒膦的手性決定。例如，與式II的(R)-(+)-單齒膦配體復(fù)合的鈀，其中R5為甲氧基，R6和R7為苯基，導(dǎo)致形成光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-醇(7)，其導(dǎo)致形成保留立體化學(xué)的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
用于氧化所述光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6的合適的氧化劑包括但不限于過氧化氫；和過酸，例如過乙酸(AcOOH)和間-氯過苯甲酸。在某些實(shí)施方案中，所述氧化劑為過氧化氫。在某些實(shí)施方案中，所述氧化劑為過酸。在某些實(shí)施方案中，所述氧化劑為過乙酸或間-氯過苯甲酸。
使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，可以容易地將光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-醇轉(zhuǎn)變?yōu)楣鈱W(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥，所述方法參見“Xanthates and Related Compounds，”Rao Ed.，Marcel Dekker，Inc.，NewYork，1971，第7-31頁；美國專利號(hào)4,602,037；和Gonzalez-Roura等人，Lipids 2002，37，401-40。
起始原料非手性的C-外烯5是由雙環(huán)戊二烯8制備的，如方案5所示。首先，用氫溴酸處理雙環(huán)戊二烯8，經(jīng)由華-米二氏重排得到C-外-溴代烯9(Brunson等人，J.Am.Chem.Soc.1945，67，1178-1180)。氫化C-外-溴代烯9，得到C-外溴代烷10，然后，將其脫溴化，形成非手性的C-外烯5(Youngblood等人，J.Org.Chem.1956，27，1436-1438；Osawa等人，J.Org.Chem.1982，47，1923-1932)。
方案5
2.酶拆分方法I 本發(fā)明還提供一種通過酶拆分不飽和的酯11來合成光學(xué)合成的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的方法
其中R9C(O)-為C1-24?；?。
式11的結(jié)構(gòu)代表兩對(duì)對(duì)映異構(gòu)體(R)-11A和(S)-11A，和(R)-11B和(S)-11B。在某些實(shí)施方案中，在酶拆分中使用的酯11為所有四種立體異構(gòu)體(R)-11A、(S)-11A、(R)-11B和(S)-11B的混合物。在某些實(shí)施方案中，在酶拆分中使用的酯11為(R)-11A和(S)-11A的混合物，例如其外消旋混合物。在某些實(shí)施方案中，在酶拆分中使用的酯11為(R)-11B和(R)-11B的混合物，例如其外消旋混合物。

在某些實(shí)施方案中，?；鶠橐阴；?、丙?；?、丁?；?、異丁酰基、戊?；?、己酰基、庚?；⑿刘；⑷甚；?、癸?；⑹轷；?、十四烷酰基、十六烷酰基、十八烷酰基、二十烷酰基、二十二烷?；⑷舛罐⒛X酰基、棕櫚油?；?、油?；営王；蚧ㄉ南；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述?；鶠橐阴；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠楸；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠槎□；?。在某些實(shí)施方案中，所述酰基為異丁?；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠槲祯；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述酰基為己酰基。在某些實(shí)施方案中，所述酰基為庚酰基。在某些實(shí)施方案中，所述酰基為辛?；?。在某些實(shí)施方案中，所述酰基為壬?；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述酰基為癸?；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠槭轷；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述?；鶠槭耐轷；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述?；鶠槭轷；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述酰基為十八烷?；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠槎轷；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠槎轷；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述?；鶠槿舛罐⒛X?；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠樽貦坝王；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述?；鶠橛王；Ｔ谀承?shí)施方案中，所述?；鶠閬営王；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠榛ㄉ南；?。在某些實(shí)施方案中，所述?；鶠樘烊恢觉；?，包括但不限于丁?；⒓乎；?、辛酰基、癸酰基、十二烷酰基、十四烷?；⑹轷；?、十八烷酰基、二十烷酰基、二十二烷酰基、肉豆蔻腦酰基、棕櫚油?；⒂王；営王；突ㄉ南；?br> 在一實(shí)施方案中，所述方法包括步驟用水解酶選擇性地水解不飽和的酯11，取決于酶的特異性，得到光學(xué)活性的(+)或(-)-烯醇12，并且保留另一種對(duì)映異構(gòu)體作為光學(xué)活性的未反應(yīng)的酯11，其具有相反光學(xué)活性(方案6)。如果期望的對(duì)映異構(gòu)體是酯形式，所述方法也可包括在酶催化水解之后，使用常規(guī)方法例如層析法從光學(xué)活性的未反應(yīng)的酯11中分離出光學(xué)活性的烯醇12的步驟。當(dāng)期望的對(duì)映異構(gòu)體是光學(xué)活性的未反應(yīng)的酯11時(shí)，所述方法進(jìn)一步包括將光學(xué)活性的酯11轉(zhuǎn)化成相應(yīng)光學(xué)活性的醇12的步驟，其可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法完成，例如，用堿例如氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀處理光學(xué)活性的酯11。
如本發(fā)明使用的術(shù)語“水解酶”指水解酶或包含水解酶的微生物。所述水解酶可以從任何來源獲得，包括但不限于動(dòng)物、植物和微生物。所述酶可以以任何常規(guī)形式應(yīng)用，例如以純化形式、粗制形式、微生物發(fā)酵液、發(fā)酵液或發(fā)酵液的濾液。另外，所述酶或微生物可以是固定化的。
在酶拆分中使用的合適的水解酶包括但不限于脂肪酶、酯酶、肽酶、酰胺酶和?；D(zhuǎn)移酶。
合適的脂肪酶包括但不限于Amano PS-30(洋蔥假單胞菌)、AmanoGC-20(念珠地絲菌)、Amano APF(Aspergillus niger)、Amano AK(Pseudomonas sp.)、熒光假單胞菌脂酶、Amano Lipase P30(Pseudomonassp.)、Amano P(Pseudomonas fluorescens)、Amano AY-30(Candidacylindracea)、Amano N(Rhizopus niveus)、Amano R(Penicillium sp.)、Amano FAP(Rhizopus oryzae)、Amano AP-12(Aspergillus nlger)、AmanoMAP(Mucor melhei)、Amano GC-4(念珠地絲菌)、Sigma L-0382和L-3126(porcine pancrease)、Lipase OF、Lipase R(Rhizopus sp.)、Sigma L-3001(Wheat germ)、Sigma L-1754(Candida cytindracea)、Sigma L-0763(Chromobacterlum vlscosum)、Amano K-30(Aspergillus nlger)和南極假絲酵母(Candida antactica)脂酶A或熒光假單胞菌脂肪酶。合適的肽酶包括但不限于稻根霉菌肽酶。
方案6
在某些實(shí)施方案中，所述酶拆分在緩沖溶液中進(jìn)行，所述緩沖溶液包括無機(jī)酸鹽緩沖液，例如磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉；和有機(jī)酸鹽緩沖液，例如檸檬酸鈉。取決于使用的特異性酶或微生物，所述緩沖液的濃度可以在約0.005至約2M或約0.005至約0.5M的范圍內(nèi)變化。
根據(jù)酯11的溶解度，可以向反應(yīng)混合物中加入表面活性劑以使酶解物增溶。合適的表面活性劑包括但不限于非離子表面活性劑，例如烷基芳基聚醚醇、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇和Triton X-100。
也可以加入有機(jī)溶劑作為共溶劑以促進(jìn)所述酶拆分。合適的溶劑包括但不限于乙腈、叔丁基甲醚、THF、DMSO、DMF和醇。
在另一實(shí)施方案中，所述方法用于制備(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥，如方案6所示，其包括步驟a)用水解酶選擇性地水解酯11，得到光學(xué)活性的(-)-酯11和光學(xué)活性的(+)-烯醇12；b)水解該光學(xué)活性的(-)-酯11，得到光學(xué)活性的(-)-烯醇12；c)還原該光學(xué)活性的(-)-烯醇12，得到保留立體化學(xué)的光學(xué)活性的(-)烷醇7；和d)將該光學(xué)活性的(-)-烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在本發(fā)明提供的方法中，水解反應(yīng)(步驟b)和還原反應(yīng)(步驟c)不限于任何特定順序。如果需要，還原反應(yīng)可以在水解反應(yīng)之前進(jìn)行。
如果需要，也可以類似地制備(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。用于合成(+)對(duì)映異構(gòu)體的方法包括步驟a)用水解酶選擇性地水解酯11，得到光學(xué)活性的(-)-酯11和光學(xué)活性的(+)-烯醇12；b)還原該光學(xué)活性的(+)-烯醇12，得到保留立體化學(xué)的光學(xué)活性的(+)-烷醇7；和c)將光學(xué)活性的(+)-烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為脂酶、酯酶、肽酶、酰胺酶或?；D(zhuǎn)移酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為脂酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為肽酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為酯酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為酰胺酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為?；D(zhuǎn)移酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為各自任選固定的稻根霉菌肽酶、南極假絲酵母脂酶A或熒光假單胞菌脂酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為稻根霉菌肽酶、南極假絲酵母脂酶A或固定的南極假絲酵母脂酶A。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為稻根霉菌肽酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為南極假絲酵母脂酶A。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為固定的南極假絲酵母脂酶A。
在某些實(shí)施方案中，在所述酶拆分中使用的酶為催化量的，即，在所述酶拆分反應(yīng)中酶的含量不大于酯11的約50％、不大于約25％、不大于約20％、不大于約15％或不大于約10％重量。在某些實(shí)施方案中，在所述酶拆分中使用的酶不大于酯11的約50％重量。在某些實(shí)施方案中，在所述酶拆分中使用的酶不大于酯11的約25％重量。在某些實(shí)施方案中，在所述酶拆分中使用的酶為不大于酯11的約20％重量。在某些實(shí)施方案中，在所述酶拆分中使用的酶不大于酯11的約15％重量。在某些實(shí)施方案中，在所述酶拆分中使用的酶不大于酯11的約10％重量。
在某些實(shí)施方案中，所述酶拆分是在約5至約100℃、約10至約75℃、約15至60℃、約20至約50℃、約25至約40℃、約30至約40℃的溫度下進(jìn)行的。在某些實(shí)施方案中，所述溫度為約5至約100℃。在某些實(shí)施方案中，所述溫度為約10至約75℃。在某些實(shí)施方案中，所述溫度為約15至約60℃。在某些實(shí)施方案中，所述溫度為約20至約50℃。在某些實(shí)施方案中，所述溫度為約25至約40℃。在某些實(shí)施方案中，所述溫度為約30至約40℃。
在某些實(shí)施方案中，所述拆分進(jìn)行的持續(xù)時(shí)間不超過約48小時(shí)、不超過約36小時(shí)或不超過約24小時(shí)。
起始原料O-外/C-外-酯11是由雙環(huán)戊二烯8制備的，如方案7所示。首先，用硫酸處理雙環(huán)戊二烯8，形成O-外/C-外烯醇12(Brunson和Riener，J.Am.Chem.Soc.1945，67，723-728)，接著，進(jìn)行酰化，得到起始原料O-外/C-外-酯11。
方案7
3.酶拆分方法II 在另一實(shí)施方案中，光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥是通過酶拆分酯13制備的
其中R9C(O)-如本發(fā)明描述的。式13的結(jié)構(gòu)代表兩種對(duì)映異構(gòu)體(R)-13和(S)-13。

在一實(shí)施方案中，所述方法包括步驟用水解酶選擇性地水解酯13，取決于酶的特異性，得到光學(xué)活性的(+)或(-)-烷醇7，并且保留另一種對(duì)映異構(gòu)體作為光學(xué)活性的未反應(yīng)的酯13，其具有相反光學(xué)活性。所述方法也可包括在酶催化水解之后，使用常規(guī)方法，例如層析法從光學(xué)活性的未反應(yīng)的酯13中分離出光學(xué)活性的烷醇7的步驟。當(dāng)期望的對(duì)映異構(gòu)體是光學(xué)活性的未反應(yīng)的酯13時(shí)，所述方法進(jìn)一步包括將光學(xué)活性的酯13轉(zhuǎn)化成相應(yīng)光學(xué)活性的醇7的步驟，其可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法完成，例如，用堿例如氫氧化鋰、氫氧化鈉和氫氧化鉀處理光學(xué)活性的酯13。合適的反應(yīng)條件和參數(shù)，例如水解酶、溶劑和緩沖液都是如本發(fā)明描述的那些。
在另一實(shí)施方案中，用于制備(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的方法，包括步驟a)用水解酶選擇性地水解酯13，得到光學(xué)活性的(-)-酯13和光學(xué)活性的(+)-烷醇7；b)水解該光學(xué)活性的(-)-酯13，得到光學(xué)活性的(-)-烷醇7；和c)將光學(xué)活性的(-)-烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
如果需要，也可以類似地制備(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。用于合成(+)對(duì)映異構(gòu)體的方法包括步驟a)用水解酶選擇性地水解酯13，得到光學(xué)活性的(-)-酯13和光學(xué)活性的(+)-烷醇7；b)將該光學(xué)活性的(+)-烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為各自任選固定的稻根霉菌肽酶、南極假絲酵母脂酶A或熒光假單胞菌脂酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為稻根霉菌肽酶、南極假絲酵母脂酶A或熒光假單胞菌脂酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為稻根霉菌肽酶。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為南極假絲酵母脂酶A。在某些實(shí)施方案中，所述水解酶為熒光假單胞菌脂酶。
起始原料酯13是由O-外/C-外烯醇12制備的，如方案7所示。將O-外/C-外烯醇12氫化成O-外/C-外烯醇7，接著?；?，得到起始原料O-外/C-外酯13。
方案8
所述光學(xué)活性的O-外/C-外三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥也可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它常規(guī)方法和技術(shù)制備。例如，外消旋的O-外/C-外三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A可以通過如下方法拆分與光學(xué)活性的堿反應(yīng)，形成非對(duì)映異構(gòu)體，接著層析或分級(jí)結(jié)晶，并用游離再生，或轉(zhuǎn)化成其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
或者，外消旋的O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥可以使用手性柱或TLC來色譜拆分。用于分離所述對(duì)映異構(gòu)體的各種手性柱和洗脫液都是可獲得的，并且用于分離的適宜條件可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)已知的方法憑經(jīng)驗(yàn)確定。可獲得用于分離本發(fā)明提供的對(duì)映異構(gòu)體的示例性手性柱包括但不限于

OB、

OB-H、

OD、

OD-H、

OF、

OG、

OJ和

OK。
另外的方法和技術(shù)可以在例如Enantiomers，Racemates and Resolutions，Jacques等人，Wiley-Interscience，New York，1981；Wilen，Collet和Jacques，Tetrahedron 1977，2725-2736；Stereochemistry of Carbon Compounds，Eliel，McGraw-Hill，New York，1962；Wilen in Tables of Resolving Agents andOptical Resolutions，Eliel，Ed.，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，Indianapolis，1972，第268-298頁；Stereochemistry of Organic Compounds，Eliel，Wilen和Manda，John Wiley&Sons，Inc.，1994；和StereoselectiveSynthesis A Practical Approach，Nogradi，VCH Publishers，Inc.，New York，1995中找到。
O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的光學(xué)活性的立體異構(gòu)體；和手性中間體，例如化合物6、7和11至13的同一性和光學(xué)純度可以通過旋光分析、NMR或本領(lǐng)域已知的其它分析方法確定。
藥物組合物 本發(fā)明提供藥物組合物，其包含作為活性成分的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥，與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體的組合。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含至少一種釋放控制賦形劑或載體。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含至少一種非釋放控制賦形劑或載體。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含至少一種釋放控制和至少一種非釋放控制賦形劑或載體。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以單位劑型或多劑型(multiple-dosageform)提供。如本發(fā)明使用的單位劑型指適于施用至人類或動(dòng)物個(gè)體，且如本領(lǐng)域已知的分別進(jìn)行包裝的物理分散單位。每個(gè)單位劑量包含足夠產(chǎn)生期望治療效果的預(yù)定量的活性成分與需要的藥物載體或賦形劑。單位劑型的實(shí)例包括安瓿、注射器和分別包裝的片劑和膠囊。單位劑型可以以其部分或多倍給藥。多劑型為多個(gè)相同的單位劑型，其被包裝在單一容器中，需要按分離的單位劑型施用。多劑型的實(shí)例包括小瓶、片劑或膠囊瓶、或品脫或加侖瓶。
所述光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A，和其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物及前藥可以單獨(dú)施用，或者與一種或多種其它活性成分組合施用。本發(fā)明提供的藥物組合物可以配制成用于口服、腸胃外和表面施用的多種劑型。所述藥物組合物也可以配制成改性釋放劑型，包括延遲-、延緩-、延長-、緩釋-、脈沖-、控制-、促進(jìn)-和快速-、靶向-、程序化-釋放劑型和胃滯留劑型。這些劑型都可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法和技術(shù)制備(參見RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，supra；Modified-Release Drug Deliver Technology，Rathbone等人編輯，Eds.，Drugs and the Pharmaceutical Science，Marcel Dekker，Inc.NewYork，NY，2002；Vol.126)。
在一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以用于口服施用至個(gè)體的劑型提供，其包含光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥，和一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。所述藥物組合物也可以包括一種或多種進(jìn)一步增強(qiáng)其藥理學(xué)性質(zhì)的助劑。合適的助劑包括但不限于離子洗滌劑、脂質(zhì)和類固醇。離子洗滌劑的實(shí)例包括C6-19脂肪酸及其鹽，例如癸酸、十一烷酸、月桂酸、癸酸鉀、十一烷酸鉀、月桂酸鉀、癸酸鈉、十一烷酸鈉和月桂酸鈉；和C8-18烷基硫酸鹽，包括十二烷基硫酸鈉和十二烷基硫酸鉀。脂質(zhì)的實(shí)施例包括磷脂類，例如磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇；糖脂例如神經(jīng)節(jié)苷脂(ganglisoide)；和神經(jīng)鞘脂類，例如鞘磷脂。類固醇類的實(shí)例包括硬脂酰胺、膽固醇；膽甾烷醇、膽烷酸、菠菜甾醇和α，β，γ-sisterol。
在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以腸胃外施用至個(gè)體的劑型提供，其包含光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥，和一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。所述藥物組合物也可以包含一種或多種如本發(fā)明描述的進(jìn)一步增強(qiáng)其藥理學(xué)特性的助劑。
在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以表面施用至個(gè)體的劑型提供，其包含光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥，和一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。所述藥物組合物也可以包含一種或多種如本發(fā)明描述的進(jìn)一步增強(qiáng)其藥理學(xué)特性的助劑。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以一次性施用，或者按時(shí)間間隔多次給藥，應(yīng)當(dāng)理解，精確劑量和治療的持續(xù)時(shí)間可以隨待治療患者的年齡、體重和病癥而變化，并可以使用已知的試驗(yàn)設(shè)計(jì)或根據(jù)體內(nèi)或體外試驗(yàn)或診斷數(shù)據(jù)外推確定。應(yīng)進(jìn)一步理解，對(duì)于任何具體的個(gè)體，特定劑量方案應(yīng)當(dāng)根據(jù)個(gè)體需要和施用或監(jiān)督施用所述制劑的人員的專業(yè)判斷隨時(shí)調(diào)整。
A.口服施用 本發(fā)明提供的藥物組合物可以以口服施用的固體、半固體或液體劑型提供。如本發(fā)明使用的，口服施用還包括含服、舌面和舌下施用。合適的口服劑型包括但不限于片劑、膠囊、丸劑、糖錠劑、錠劑、軟錠劑、扁囊劑、小球、加藥口香糖、顆粒劑、散裝粉末劑、泡騰或非泡騰粉劑或顆粒劑、溶液劑、乳劑、混懸劑、溶液劑、糯米紙囊劑、撒劑、酏劑和糖漿劑。除了活性成分之外，藥物組合物可以包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，其包括但不限于粘合劑、填充劑、稀釋劑、崩解劑、潤濕劑、潤滑劑、助流劑、著色劑、染料遷移抑制劑、甜味劑和調(diào)味劑。
粘合劑或造粒劑賦予片劑粘性，以保護(hù)片劑在壓制后保持完整。合適的粘合劑或造粒劑包括但不限于淀粉例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉和預(yù)膠化淀粉(例如STARCH 1500)；明膠；糖類，例如蔗糖、葡萄糖、葡萄糖、糖蜜和乳糖；天然樹膠和合成樹膠，例如阿拉伯膠、海藻酸、海藻酸鹽、鹿角菜的提取物、Panwar gum、印度樹膠、mucilage of isabgol husks、羧甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、硅酸鋁鎂鹽(Veegum)、落葉松阿拉伯半乳聚糖、粉狀西黃蓍膠和瓜爾膠；纖維素，例如乙基纖維素、醋酸纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)；微晶纖維素，例如AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105(FMC Corp.，Marcus Hook，PA)；及其混合物。合適的填充劑包括但不限于滑石、碳酸鈣、微晶纖維素、粉末狀纖維素、葡聚糖結(jié)合劑、高嶺土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、預(yù)膠化淀粉及其混合物。所述粘合劑或填充劑在本發(fā)明提供的藥物組合物中的存在量可以為約50至約99％重量。
合適的稀釋劑包括但不限于磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、山梨醇、蔗糖、肌醇、纖維素、高嶺土、甘露醇、氯化鈉、無水淀粉和粉末狀糖。某些稀釋劑例如甘露醇、乳糖、山梨醇、蔗糖和肌醇，當(dāng)以足量存在時(shí)，可以賦予某些壓制片以通過咀嚼從而在口腔中發(fā)生崩解的性質(zhì)。這樣的壓制片可以用作咀嚼片。
合適的崩解劑包括但不限于瓊脂；膨潤土；纖維素，例如甲基纖維素和羧甲基纖維素；木制品；天然海綿；陽離子交換樹脂；海藻酸；樹膠，例如瓜爾膠和Veegum HV；桔漿；交聯(lián)纖維素，例如交聯(lián)羧甲纖維素；交聯(lián)聚合物，例如交聚維酮；交聯(lián)淀粉；碳酸鈣；微晶纖維素，例如淀粉羥乙酸鈉；聚克立林鉀；淀粉，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、木薯淀粉和預(yù)膠化淀粉；粘土；aligns；及其混合物。崩解劑在本發(fā)明提供的藥物組合物中的含量根據(jù)制劑的類型變化，并且其是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易判斷的。本發(fā)明提供的藥物組合物可以包含約0.5至約15％，或約1至約5％重量的崩解劑。
合適的潤滑劑包括但不限于硬脂酸鈣；硬脂酸鎂；礦物油；輕質(zhì)礦物油；甘油；山梨醇；甘露醇；二醇，例如山萮酸甘油酯和聚乙二醇(PEG)；硬脂酸；十二烷基硫酸鈉；滑石；氫化植物油，包括花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和豆油；硬脂酸鋅；油酸乙酯；月桂酸乙酯；瓊脂；淀粉；石松子；二氧化硅或二氧化硅凝膠劑，例如

200(W.R.Grace Co.，Baltimore，MD)和CAB-O-S

(Cabot Co.of Boston，MA)；及其混合物。本發(fā)明提供的藥物組合物可以包含約0.1至約5％重量的潤滑劑。
合適的助流劑包括膠態(tài)二氧化硅、CAB-O-

(Cabot Co.of Boston，MA)和不含石棉的滑石。著色劑包括任何批準(zhǔn)的、證實(shí)的、混懸在氧化鋁水合物上的水溶性的FD&C染料，和水不溶性的FD&C染料，和色淀及其混合物。色淀為水溶性染料吸附至重金屬水合氧化物上，得到不溶性形式的染料的組合。調(diào)味劑包括從植物，例如果實(shí)提取的天然調(diào)味劑，和得到令人愉快的味覺的化合物例如薄荷和水楊酸甲酯的合成性混合物。甜味劑包括蔗糖、乳糖、甘露醇、果汁、甘油和人工甜味料，糖精和阿司帕坦。合適的乳化劑包括明膠、阿拉伯膠、西黃蓍膠、膨潤土和表面活性劑，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯(

20)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯80(

80)和油酸三乙醇胺酯。懸浮劑和分散劑包括羧甲基纖維素鈉、果膠、西黃蓍膠、硅酸鋁鎂、阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。防腐劑包括甘油、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯、苯甲酸、苯甲酸鈉和醇。潤濕劑包括單硬脂酸丙二醇酯、脫水山梨糖醇單油酸酯、單月桂酸二甘醇酯和聚氧乙烯月桂醚。溶劑包括甘油、山梨醇、乙醇和果汁。在乳劑中使用的非水液體的實(shí)例包括礦物油和棉籽油。有機(jī)酸包括檸檬酸和酒石酸。二氧化碳的來源包括碳酸氫鈉和碳酸鈉。
應(yīng)當(dāng)理解許多載體和賦形劑可以起多種功能作用，甚至在相同的制劑中。
[本發(fā)明提供的藥物組合物可以以壓制片、研磨片、可咀嚼錠劑、速溶片、多層壓制片或腸包衣片、糖包衣或膜包衣片提供。腸包衣片為用物質(zhì)包衣的壓制片，所述物質(zhì)能抗胃酸作用但在腸中溶解或崩解，從而保護(hù)活性成分免于胃酸環(huán)境的破壞。腸包衣包括但不限于脂肪酸、脂質(zhì)、水楊酸苯酯、蠟、紫膠、含氨紫膠和醋酸纖維素對(duì)苯二甲酸酯。糖衣片為被糖衣包裹的壓制片，所述糖衣在掩蔽令人不愉快的味道或氣味方面和在保護(hù)片劑免于氧化方面有利。膜包衣片為用水溶性物質(zhì)的薄層層覆蓋的壓制片。膜包衣包括但不限于羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙二醇4000和醋酞纖維素對(duì)苯二甲酸酯。膜包衣賦予與糖衣相同的一般特性。多層壓制片為通過超過一次壓制循環(huán)制備的壓制片，包括層壓片和壓制包衣或干包衣片。
所述片劑劑型可以由單獨(dú)的粉末、結(jié)晶或顆粒形式的活性成分或者與一種或多種本發(fā)明描述的載體或賦形劑的組合來制備，所述載體或賦形劑包括粘合劑、崩解劑、控制釋放聚合物、潤滑劑、稀釋劑和/或著色劑。調(diào)味劑和甜味劑特別地用于形成咀嚼片和錠劑。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以軟膠囊或硬膠囊提供，所述膠囊可以由明膠、甲基纖維素、淀粉或海藻酸鈣制備。硬明膠膠囊也稱為干填充的膠囊(DFC)，其由兩部分組成，一部分套在另一部分上，從而完全包圍了活性成分。軟彈性膠囊(SEC)是一種軟的、小球狀殼，例如明膠殼，其中通過加入甘油、山梨醇或類似多元醇來增塑。所述軟明膠殼可以包含防腐劑來防止微生物生長。合適的防腐劑為如本發(fā)明描述的那些，包括對(duì)羥基苯甲酸甲酯和丙酯，及山梨酸。本發(fā)明提供的液體、半固體和固體劑型可以包囊在膠囊中。合適的液體和半固體劑型包括在碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液劑和混懸劑。包含這樣的溶液的膠囊可以如在美國專利號(hào)4,328,245；4,409,239；和4,410,545中描述的制備。所述膠囊也可以如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的進(jìn)行包衣，以改善或延緩活性成分的溶出。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以液體和半固體劑型提供，所述劑型包括乳劑、溶液劑、混懸劑、酏劑和糖漿劑。乳劑為其中一種液體以小球形式分散在另一種液體中的二相系統(tǒng)，其可以是水包油型或油包水型。乳劑可以包括藥學(xué)上可接受的非水液體或溶劑、乳化劑和防腐劑?；鞈覄┛梢园ㄋ帉W(xué)上可接受的懸浮劑和防腐劑。含水醇溶液可以包括藥學(xué)上可接受的縮醛，例如低級(jí)烷基醛的二(低級(jí)烷基)縮醛(術(shù)語“低級(jí)”指具有1至6個(gè)碳原子的烷基)，例如乙醛二乙基縮醛；和具有一個(gè)或多個(gè)羥基的水可混溶溶劑，例如丙二醇和乙醇。酏劑是澄清的、甜味的含水醇溶液。糖漿劑為糖例如蔗糖的濃的水溶液，并且可以包含防腐劑。對(duì)于液體劑型，例如。在聚乙二醇中的溶液劑可以用足量的藥學(xué)上可接受的液體載體例如水稀釋，以方便地測(cè)量用于給藥。
其它有用的液體和半固體劑型包括但不限于包含本發(fā)明提供的活性成分和二烴基化單-或聚-烷撐二醇的那些劑型，所述單-或聚-烷撐二醇包括1，2-二甲氧基甲烷、二甘醇二甲醚、三甘醇二甲醚、四乙醇二甘醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550和750指聚乙二醇的近似平均分子量。這些制劑可以進(jìn)一步包含一種或多種抗氧劑，例如丁基化羥基甲苯(BHT)、丁羥茴醚(BHA)、沒食子酸丙酯、維生素E、氫醌、羥基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、腦磷脂、抗壞血酸、蘋果酸、山梨醇、磷酸、亞硫酸氫鹽、焦亞硫酸鈉、硫代二丙酸及其酯、和二硫代氨基甲酸鹽。
本發(fā)明提供的用于口服施用的藥物組合物還可以以脂質(zhì)體、膠束、微球或納米系統(tǒng)的形式提供。Miccellar劑型可以如在美國專利號(hào)6,350,458中描述的制備。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以非泡騰的或泡騰的顆粒劑和粉劑提供，其可重構(gòu)形成液體劑型。在非泡騰顆粒劑或粉劑中使用的藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑可以包括稀釋劑、甜味劑和潤濕劑。在泡騰顆粒劑或粉劑中使用的藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑可以包括有機(jī)酸和二氧化碳源。
在所有上述劑型中可以使用著色劑和調(diào)味劑。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以配制成立即釋放或改性釋放劑型，包括延遲-、緩釋-、脈沖-、控制-、靶向-和程序化-釋放形式。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以與不會(huì)損害期望的治療作用的其它活性成分共同配制，或者與補(bǔ)充期望作用的物質(zhì)，例如抗酸劑、質(zhì)子泵抑制劑和H2-受體拮抗劑共同配制。
B.腸胃外給藥 本發(fā)明提供的藥物組合物可以通過注射、輸注或植入腸胃外施用，用于局部或全身施用。如本發(fā)明使用的腸胃外施用包括靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、肌內(nèi)、滑膜內(nèi)和皮下施用。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以配制成適于腸胃外施用的任何劑型，包括溶液劑、混懸劑、乳劑、膠束、脂質(zhì)體、微球、納米系統(tǒng)和適于在注射劑前在液體中制成溶液或懸浮液的固體形式。這樣的劑型可以以藥物科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的常規(guī)方法制備(參見RemingtonThe Science andPractice of Pharmacy，同上)。
預(yù)期用于腸胃外施用的藥物組合物可以包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑，包括但不限于水性賦形劑、水可溶混賦形劑、非水性賦形劑、抗微生物劑或抗微生物生長的防腐劑、穩(wěn)定劑、溶解增強(qiáng)劑、等滲劑、緩沖劑、抗氧劑、局部麻醉劑、助懸劑和分散劑、濕潤劑或乳化劑、絡(luò)合劑、多價(jià)螯合劑(sequestering agent)或螯合劑、防凍劑、冷凍保護(hù)劑、增稠劑、pH調(diào)節(jié)劑和惰性氣體。
合適的水性賦形劑包括但不限于水、鹽水、生理鹽水或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、氯化鈉注射液、Ringers注射液、等滲葡萄糖注射液、無菌水注射液、葡萄糖和乳酸化的Ringers注射液。非水性賦形劑包括但不限于植物來源的非揮發(fā)油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、橄欖油、花生油、薄荷油、紅花油、芝麻油、豆油、氫化植物油、氫化豆油和椰子油的中鏈甘油三酯、及棕櫚種子油。水可溶混賦形劑包括但不限于乙醇、1，3-丁二醇、液體聚乙二醇(例如聚乙二醇300和聚乙二醇400)、丙二醇、甘油、N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺和二甲亞砜。
合適的抗微生物劑或防腐劑包括但不限于苯酚、甲酚、汞劑、苯甲醇、氯代丁醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯銨、芐索氯銨、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯及山梨酸。合適的等滲劑包括但不限于氯化鈉、甘油和葡萄糖。合適的緩沖劑包括但不限于磷酸鹽和檸檬酸鹽。合適的抗氧劑為如本發(fā)明描述的那些，包括亞硫酸氫鹽和焦亞硫酸鈉。合適的局部麻醉劑包括但不限于鹽酸普魯卡因。合適的助懸劑和分散劑為如本發(fā)明描述的那些，包括羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。合適的乳化劑包括本發(fā)明描述的那些，包括聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯80和油酸三乙醇胺酯。合適的多價(jià)螯合劑或螯合劑包括但不限于EDTA。合適的pH調(diào)節(jié)劑包括但不限于氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸和乳酸。合適的絡(luò)合劑包括但不限于環(huán)糊精，包括α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺基丁基醚-β-環(huán)糊精和磺基丁基醚7-β-環(huán)糊精(

CyDex，Lenexa，KS)。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以配制用于單劑量或多劑量施用。所述單劑量制劑包裝在安瓿、小瓶或注射器中。所述多劑量腸胃外制劑必須包含抑菌或抑真菌濃度的抗微生物劑。如本領(lǐng)域已知和實(shí)踐的，所有的腸胃外制劑都必須是無菌的。
在一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以即用無菌溶液提供。在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以無菌無水可溶性產(chǎn)品提供，包括冷凍干燥粉末和皮下注射片劑，在使用前用賦形劑重構(gòu)。在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以即用無菌混懸劑提供。在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以無菌無水不溶性產(chǎn)品提供，在使用前用賦形劑重構(gòu)。在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物以即用無菌乳劑提供。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以配制成立即釋放或改性釋放劑型，包括延遲-、緩釋-、脈沖-、控制-、靶向-和程序化-釋放形式。
所述藥物組合物可以配制成混懸劑、固體、半固體或觸變液體，用于作為植入的貯庫施用。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的藥物組合物分散在固體內(nèi)部基質(zhì)中，其被外部聚合膜所包圍，所述外部聚合膜不溶于體液中，但是允許藥物組合物中的活性成分?jǐn)U散通過。
合適的內(nèi)部基質(zhì)包括聚甲基丙烯酸甲酯、聚丁基丙烯酸甲酯、增塑的或未增塑的聚氯乙烯、增塑的尼龍、增塑的聚對(duì)苯二甲酸乙酯、天然橡膠、聚異戊二烯、聚異丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、硅酮橡膠、聚二甲硅氧烷、硅酮碳酸酯共聚物、親水性聚合物例如丙烯酸和甲基丙烯酸的酯的水凝膠、膠原、交聯(lián)聚乙烯醇及交聯(lián)的部分水解的聚乙酸乙烯酯。
合適的外部聚合膜包括聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙烯基乙酸酯共聚物、硅酮橡膠、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡膠、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯化乙烯與乙酸乙烯酯的共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、離子交聯(lián)聚合物聚對(duì)苯二甲酸乙二酯、丁基橡膠氯醇橡膠、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三聚物和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物。
C.表面施用 本發(fā)明提供的藥物組合物可以表面施用于皮膚、腔或粘膜。如本發(fā)明使用的表面施用包括皮膚(皮內(nèi))、結(jié)膜、角膜內(nèi)、眼內(nèi)、眼眶、耳、透皮、鼻腔、陰道、尿道、呼吸道和直腸施用。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以配制成適于表面施用以獲得作用或全身作用的任何劑型，包括乳劑、溶液劑、混懸劑、乳膏劑、凝膠劑、水凝膠、軟膏劑、撲粉、敷料、酏劑、洗劑、混懸劑、酊劑、糊劑、泡沫劑、膜劑、氣霧劑、沖洗劑、噴霧劑、栓劑、綁帶、皮膚貼劑。本發(fā)明提供的藥物組合物的表面制劑還可以包括脂質(zhì)體、膠束、微球、納米系統(tǒng)及其混合物。
適用于本發(fā)明提供的表面制劑的藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑包括但不限于水性賦形劑、水可溶混賦形劑、非水性賦形劑、抗微生物劑或抗微生物生長的防腐劑、穩(wěn)定劑、溶解增強(qiáng)劑、等滲劑、緩沖劑、抗氧劑、局部麻醉劑、助懸劑和分散劑、濕潤劑或乳化劑、絡(luò)合劑、多價(jià)螯合劑或螯合劑、滲透促進(jìn)劑、低溫保護(hù)劑(cryopretectants)、冷凍保護(hù)劑、增稠劑和惰性氣體。
所述藥物組合物也可以通過電穿孔、離子電滲療法、超聲透入療法、超聲促滲和顯微針或無針注射表面施用，例如POWDERJECTTM(ChironCorp.，Emeryville，CA)，and BIOJECTTM(Bioject Medical Technologies Inc.，Tualatin，OR)。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以軟膏劑、乳膏劑和凝膠劑的形式提供。合適的軟膏劑賦形劑包括油脂性基質(zhì)或烴基基質(zhì)，包括豬脂、安息香豚脂、橄欖油、棉籽油、白凡士林及液體石臘和聚乙烯的復(fù)合軟膏基質(zhì)(plastibase)；可乳化基質(zhì)或可吸收基質(zhì)，例如親水性凡士林、硫酸羥基硬脂精和無水羊毛脂；水可除去性基質(zhì)，例如親水性軟膏；水溶性軟膏基質(zhì)，包括不同分子量的聚乙二醇；乳劑基質(zhì)，油包水(W/O)型乳劑或水包油型(O/W)乳劑，包括鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯、羊毛脂和硬脂酸(參見RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，同上)。這些賦形劑為軟化劑，但通常需要加入抗氧劑和防腐劑。
合適的乳膏劑基質(zhì)可以為水包油型或油包水型。乳膏劑賦形劑可以是水可洗除型，并且包含油相、乳化劑和水相。油相也稱為“內(nèi)”相，其通常由凡士林和脂肪醇例如鯨蠟醇或硬脂醇組成。盡管不一定，但水相的體積通常高于油相，并且通常包含濕潤劑。在乳膏劑中的乳化劑可以是非離子的、陰離子的、陽離子的或兩性的表面活性劑。
膠劑為半固體、懸浮類型的系統(tǒng)。單相凝膠劑包含基本上均勻分布在液體載體中的有機(jī)高分子。合適的膠凝劑包括交聯(lián)丙烯酸聚合物，例如卡波姆、羧基聚亞烷基、Carbopol(R)；親水性聚合物，例如聚氧化乙烯、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物和聚乙烯醇；纖維素聚合物，例如羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯和甲基纖維素；樹膠，例如西黃蓍膠和黃原膠；海藻酸鈉；和明膠。為了制備均勻的凝膠劑，可以加入分散劑例如醇或甘油，或者可以通過研磨、機(jī)械攪拌和/或攪拌將膠凝劑分散在其中。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以栓劑、陰道栓、桿劑(bougies)、泥敷劑或泥罨劑、糊劑、粉劑、敷料、乳膏劑、硬膏劑、避孕劑、軟膏劑、溶液劑、乳劑、混懸劑、衛(wèi)生棉條、凝膠劑、泡沫劑、噴霧劑或灌腸劑提供，經(jīng)直腸、尿道、陰道或陰道周圍給藥。這些劑型可以使用常規(guī)方法制備，所述方法如在RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy(同上)中描述的。
直腸、尿道和陰道栓劑為用于插入人體腔孔(body orifices)中的固體，其在常溫下是固體，但是在體溫下熔融或軟化將活性成分釋放到腔孔內(nèi)。在直腸和陰道栓劑中使用的藥學(xué)上可接受的載體包括賦形劑，例如硬化劑，當(dāng)與本發(fā)明提供的藥物組合物配制時(shí)，其產(chǎn)生接近體溫的熔點(diǎn)；和如本發(fā)明描述的抗氧劑，包括亞硫酸氫鹽和焦亞硫酸鈉。合適的賦形劑包括但不限于可可脂(可可油)、甘油-明膠、聚乙二醇(聚氧乙二醇)、鯨蠟、石蠟、白蠟和黃蠟，和合適的脂肪酸的甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯的混合物、水凝膠例如聚乙烯醇、甲基丙烯酸羥乙酯、聚丙烯酸；甘油膠?？梢允褂枚喾N賦形劑的組合。直腸和陰道栓劑可以通過壓制方法或模壓法制備。直腸和陰道栓劑的典型的重量為約2至3g。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以溶液劑、混懸劑、軟膏劑、乳劑、形成凝膠的溶液劑、形成溶液的粉劑、凝膠劑、眼用嵌入劑和植入物的形式眼內(nèi)給藥。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以經(jīng)鼻內(nèi)或吸入至呼吸道給藥。所述藥物組合物可以以單獨(dú)的氣霧劑或溶液劑或者與合適的推進(jìn)劑的組合的形式提供，其使用加壓容器、泵、噴霧器、霧化器例如使用電水動(dòng)力產(chǎn)生微小煙霧的霧化器或噴灑器遞送，所述推進(jìn)劑例如1，1，1，2-四氟代乙烷或1，1，1，2，3，3，3-七氟代丙烷。所述藥物組合物還可以以用于吹入的單獨(dú)干粉劑或與惰性載體例如乳糖或磷脂的組合及滴鼻劑提供。對(duì)于鼻內(nèi)使用，所述粉劑可以包含生物粘附劑，包括殼聚糖或環(huán)糊精。
在加壓容器、泵、噴霧劑、霧化器或噴酒器中使用的溶液劑或混懸劑可以配制為包含乙醇、含水乙醇或用于分散、增溶或延長本發(fā)明提供的活性成分釋放的合適的可代替試劑、推進(jìn)劑如溶劑；和/或表面活性劑，例如脫水山梨糖醇三油酸酯、油酸或低聚乳酸(oligolactic acid)。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以微粉化至適于吸入遞送的粒徑，例如50微米或更小，或10微米或更小。這樣粒徑的顆?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的粉末化方法制備，所述方法例如螺旋噴射研磨、流化床噴射研磨、形成納米顆粒的超臨界流體處理、高壓勻漿化或噴霧干燥。
用于吸入器或吹入器的膠囊、泡罩和藥筒可以配制成包含本發(fā)明提供的藥物組合物的粉末混合物；合適的粉末狀基質(zhì)，例如乳糖或淀粉；和功能調(diào)節(jié)劑，例如1-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸鎂。乳糖可以是無水的或一水合物的形式。其它合適的賦形劑包括葡聚糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。本發(fā)明提供的用于吸入/鼻內(nèi)給藥的藥物組合物可以進(jìn)一步包括合適的調(diào)味劑，例如薄荷醇和左薄荷腦，或甜味劑，例如糖精或糖精鈉。
本發(fā)明提供的用于表面施用的藥物組合物可以配制成立即釋放或改性釋放形式，包括延遲-、緩釋-、脈沖-、控制-、靶向-和程序化-釋放形式。
D.改性釋放 本發(fā)明提供的藥物組合物可以配制成改性釋放劑型。如本發(fā)明使用的術(shù)語“改性釋放”指當(dāng)通過相同的途徑施用時(shí)，活性成分的釋放速率和位點(diǎn)與立即釋放劑型不同的劑型。改性釋放劑型包括延遲-、延緩-、延長-緩釋-、脈動(dòng)-或脈沖-、控制-、促進(jìn)-和快速-、靶向-、程序化-釋放和胃滯留劑型。改性釋放劑型中的藥物組合物可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員多種改性釋放裝置和方法制備，所述裝置和方法包括但不限于基質(zhì)控釋裝置、滲透控釋裝置、多顆粒控釋裝置、離子交換樹脂、腸包衣、多層包衣、微球、脂質(zhì)體及其組合?；钚猿煞值尼尫潘俾室部梢酝ㄟ^改變顆粒粒徑和活性成分的多形性(polymorphorism)來調(diào)整。
改性釋放的實(shí)例包括但不限于，描述在美國專利號(hào)3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556、5,639,480、5,733,566、5,739,108、5,891,474、5,922,356、5,972,891、5,980,945、5,993,855、6,045,830、6,087,324、6,113,943、6,197,350、6,248,363、6,264,970、6,267,981、6,376,461、6,419,961、6,589,548、6,613,358；和6,699,500中的那些。
1.基質(zhì)控釋裝置 本發(fā)明提供的改性釋放劑型中的藥物組合物可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的基質(zhì)控釋裝置制備(參見，Takada等人的“Encyclopedia of ControlledDrug Delivery，”第2卷，Mathiowitz編輯，Wiley，1999)。
在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的改性釋放劑型的藥物組合物是使用可侵蝕性基質(zhì)裝置配制的，其為水可膨脹性、可侵蝕性或可溶性聚合物，包括天然存在的聚合物和衍生物，例如多糖和蛋白質(zhì)。
用于形成可侵蝕性基質(zhì)的物質(zhì)包括但不限于殼多糖、殼聚糖、葡聚糖和支鏈淀粉；瓊脂膠(gum agar)、阿拉伯膠、梧桐膠、豆角膠、黃蓍樹膠、角叉菜膠、印度膠、瓜爾膠、黃原膠和硬葡聚糖；淀粉，例如糊精和麥芽糖糊精；親水膠體，例如果膠；磷脂，例如卵磷脂；海藻酸鹽；藻酸丙二醇酯；明膠；膠原；和纖維素，例如乙基纖維素(EC)、甲基乙基纖維素(MEC)、羧甲基纖維素(CMC)、CMEC、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、醋酸纖維素(CA)、丙酸纖維素(CP)、丁酸纖維素(CB)、乙酸丁酸纖維素(CAB)、CAP、CAT、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、HPMCP、HPMCAS、羥丙基甲基纖維素乙酸偏苯三酸酯(HPMCAT)和乙基羥基乙基纖維素(EHEC)；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯醇；聚乙酸乙烯酯；脂肪酸甘油酯；聚丙烯酰胺；聚丙烯酸；乙基丙烯酸或甲基丙烯酸的共聚物(

Rohm America，Inc.，Piscataway，NJ)；聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)；聚交酯；L-谷氨酸和乙基-L-谷氨酸酯的共聚物；可降解的乳酸-乙醇酸共聚物；聚-D-(-)-3-羥基丁酸；及其它丙烯酸衍生物，例如甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、丙烯酸乙酯、(2-二甲基氨基乙基)甲基丙烯酸酯和(三甲基氨乙基)甲基丙烯酸酯氯化物的均聚物和共聚物。
在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物用非可侵蝕性基質(zhì)裝置配制?；钚猿煞秩芙饣蚍稚⒃诙栊缘幕|(zhì)中，一旦施用，其主要通過擴(kuò)散穿過惰性基質(zhì)來釋放。適于作為非可侵蝕性基質(zhì)裝置的物質(zhì)包括但不限于不溶性塑料，例如聚乙烯、聚丙烯、聚異戊二烯、聚異丁烯、聚丁二烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丁基丙烯酸甲酯、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、氯化乙烯與乙酸乙烯酯的共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、離子交聯(lián)聚合物聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯、丁基橡膠氯醇橡膠、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物、聚氯乙烯、增塑的尼龍、增塑的聚對(duì)苯二甲酸乙酯、天然橡膠、硅酮橡膠、聚二甲硅氧烷、硅氧烷碳酸酯共聚物，和；親水性聚合物，例如乙基纖維素、醋酸纖維素、交聚維酮和交聯(lián)的部分水解的聚乙酸乙烯酯；和脂肪族化合物，例如棕櫚蠟(camauba wax)、微晶蠟和甘油三酯。
在基質(zhì)控釋系統(tǒng)中，例如，所期望的釋放動(dòng)力學(xué)可以通過以下因素來控制所采用的聚合物類型、聚合物粘度、聚合物和/或活性成分的顆粒粒徑、活性成分與聚合物的比例以及組合物中的其它賦形劑。
本發(fā)明提供的改性釋放劑型的藥物組合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，所述方法包括直接壓片、干法制粒或濕法粒法之后壓制、熔融制粒之后壓制。
2.滲透控釋裝置 本發(fā)明提供的改性釋放劑型的藥物組合物可以使用滲透控釋裝置制備，所述滲透控釋裝置包括一室系統(tǒng)、兩室系統(tǒng)、非對(duì)稱膜技術(shù)(AMT)和擠壓核芯系統(tǒng)(extruding core system)(ECS)。通常，這樣的裝置具有至少兩個(gè)部分(a)核芯，其包含活性成分；和(b)具有至少一個(gè)遞送口(port)的半透薄膜，其包裹所述核芯。所述半透薄膜控制水從所用的水相環(huán)境中流入所述核芯，使得藥物經(jīng)擠壓穿過遞送口釋放。
除了活性成分之外，所述滲透裝置的核芯任選地包含滲透劑，其產(chǎn)生用于將水從應(yīng)用環(huán)境中轉(zhuǎn)運(yùn)到裝置核芯的驅(qū)動(dòng)力。一種類型的滲透劑為水可膨脹的親水性聚合物，其為稱為“滲透性聚合物”和“水凝膠”，包括但不限于親水性乙烯和丙烯聚合物、多糖例如海藻酸鈣、聚氧化乙烯(PEO)、聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、聚(2-甲基丙烯酸羥乙酯)、聚(丙烯)酸、聚(甲基丙烯)酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、交聯(lián)PVP、聚乙烯醇(PVA)、PVA/PVP共聚物、PVA/PVP與疏水性單體例如甲基丙烯酸甲酯和乙酸乙烯酯的共聚物、包含大的PEO嵌段的親水性聚氨酯、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、角叉菜膠、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素(CMC)和羧乙基纖維素(CEC)、海藻酸鈉、聚卡波非、明膠、黃原膠和淀粉羥乙酸鈉。
另一種類型的滲透劑為osmogen，其能夠吸收水而影響穿過周圍包衣屏障的滲透壓梯度。合適的osmogen包括但不限于無機(jī)鹽，例如硫酸鎂、氯化鎂、氯化鈣、氯化鈉、氯化鋰、硫酸鉀、磷酸鉀、碳酸鈉、亞硫酸鈉、硫酸鋰、氯化鉀和硫酸鈉；糖類，例如葡萄糖、果糖、葡萄糖、肌醇、乳糖、麥芽糖、甘露醇、棉子糖、山梨醇、蔗糖、海藻糖和木糖醇；有機(jī)酸，例如抗壞血酸、苯甲酸、富馬酸、檸檬酸、馬來酸、癸二酸、山梨酸、己二酸、乙二胺四乙酸、谷氨酸、對(duì)甲苯磺酸、琥珀酸和酒石酸；脲；及其混合物。
可以采用不同溶出速率的滲透劑以影響活性成分最初以什么速度從劑型中釋放。例如非晶形糖，例如Mannogeme EZ(SPI Pharma，Lewes，DE)可用于提供在第一個(gè)小時(shí)期間更快地遞送，以迅速地產(chǎn)生期望的治療效果，和經(jīng)長期的時(shí)間，逐漸連續(xù)地釋放剩余量，以保持治療或預(yù)防作用的期望水平。在這種情況下，活性成分按代替代謝和排泄的活性成分的量的速率釋放。
所述核芯也可包括多種如本發(fā)明描述的其它賦形劑和載體，以增強(qiáng)所述劑型的性能或提高穩(wěn)定性或易加工性。
用于形成半透膜的物質(zhì)包括各種等級(jí)的丙烯、乙烯、醚、聚酰胺、聚酯和纖維素衍生物，所述纖維素衍生物在生理學(xué)相應(yīng)pH下為水可滲透的和水不溶性的，或者可以通過化學(xué)改變例如交聯(lián)成為水不溶性。用于形成所述包衣的合適的聚合物的實(shí)例包括增塑的、未增塑的和強(qiáng)化的醋酸纖維素(CA)、纖維素二醋酸酯、三醋酸纖維素、CA丙酸酯、硝酸纖維素、醋酸纖維素丁酸酯(CAB)、CA氨基甲酸乙酯、CAP、CA氨基甲酸甲酯、CA琥珀酸酯、醋酸纖維素偏苯三酸酯(CAT)、CA二甲基氨基醋酸酯、CA碳酸乙酯、CA氯乙酸酯、CA草酸乙酯、CA磺酸甲酯、CA磺酸丁酯、CA對(duì)-甲苯磺酸酯、瓊脂乙酸酯、直鏈淀粉三醋酸酯、β葡聚糖乙酸酯、β葡聚糖三乙酸酯、乙醛二甲基乙酸酯、豆角膠的三乙酸酯、羥基化乙烯-乙烯基乙酸酯、EC、PEG、PPG、PEG/PPG共聚物、PVP、HEC、HPC、CMC、CMEC、HPMC、HPMCP、HPMCAS、HPMCAT、聚(丙烯)酸與聚(甲基丙烯)酸和酯的酯及其共聚物、淀粉、葡聚糖、糊精、殼聚糖、膠原、明膠、聚烯烴、聚醚、聚砜、聚醚砜、聚苯乙烯、聚乙烯鹵化物、聚乙烯酯和醚、天然蠟和合成蠟。
半透膜也可以是疏水性微孔膜，其中孔基本上被氣體充滿，并且沒有被水介質(zhì)潤濕，但是其是水蒸汽可滲透的，如在美國專利號(hào)5,798,119中公開的。這樣的疏水但水蒸汽可滲透的膜典型地由疏水性聚合物組合，所述疏水性聚合物例如聚烯烴、聚乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯酸衍生物、聚醚、聚砜、聚醚砜、聚苯乙烯、聚乙烯鹵化物、聚偏二氟乙烯、聚乙烯酯和醚、天然蠟和合成蠟。
半透膜上的遞送口可以在完成包衣后通過機(jī)械打孔或激光打孔形成。遞送口也可以通過水溶性物質(zhì)填料的腐蝕，或者通過核芯凹陷較薄的膜部分裂開而原位形成。另外，遞送口可以是在進(jìn)行包衣過程中形成，如在美國專利號(hào)5,612,059和5,698,220中公開類型的不對(duì)稱膜包衣的情況下形成。
釋放的活性成分的總量和釋放速率基本上可以經(jīng)由半透膜的厚度和孔隙率、核芯的組分以及遞送口的數(shù)量、尺寸和位置調(diào)節(jié)。
在滲透控釋劑型中的藥物組合物可以進(jìn)一步包含另外的如本發(fā)明描述的常規(guī)賦形劑，以提高制劑的性能或加工性。
所述滲透控釋劑型可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法和技術(shù)制備(參見，RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，同上；Santus和Baker，J.Controlled Release 1995，35，1-21；Verma等人，Drug Developmentand Industrial Pharmacy 2000，26，695-708；Verma等人，J.Controlled Release2002，79，7-27)。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的藥物組合物被配制成AMT控釋劑型，其包括包裹核芯的非對(duì)稱滲透膜，所述核芯包含活性成分及其它藥學(xué)上可接受的賦形劑。參見，美國專利號(hào)5,612,059和WO 2002/17918。所述AMT控釋劑型可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法和技術(shù)制備，所述常規(guī)方法和技術(shù)包括直接壓片、干法制粒、濕法制粒和浸漬包衣方法。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的藥物組合物被配制成ESC控釋劑型，其包括包衣核芯的滲透膜，所述核芯包含活性成分、羥乙基纖維素及其它藥學(xué)上可接受的賦形劑。
3.多顆粒控釋裝置 本發(fā)明提供的改性釋放劑型中的藥物組合物可以被制備成多顆?？蒯屟b置，其包括大量微粒、顆粒或丸劑，直徑為約10μm至約3mm、約50μm至約2.5mm或約100μm至1mm。這樣的多顆?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的加工方法制備，所述加工方法包括濕法制粒和干法制粒、擠壓/滾圓成丸法、滾筒壓縮、熔融凝固和噴霧包衣種子核芯(seed cores)。參見，例如Multiparticulate Oral Drug Delivery；Marcel Dekker1994；和Pharmaceutical Pelletization Technology；Marcel Dekker1989。
可以將如本發(fā)明描述的其它賦形劑與所述藥物組合物混合，以幫助加工和形成所述多顆粒。得到的顆粒自身可以構(gòu)成所述多顆粒狀指，或者可以用多種成膜物質(zhì)包衣，所述成膜物質(zhì)是例如腸道聚合物、水可膨脹的和水溶性聚合物。所述多顆?？梢员贿M(jìn)一步加工成膠囊或片劑。
4.靶向遞送 本發(fā)明提供的藥物組合物也可以被配制成靶至待治療個(gè)體的特定組織、受體或身體其它區(qū)域的系統(tǒng)，包括脂質(zhì)體-遞送系統(tǒng)、再密封的紅細(xì)胞-遞送系統(tǒng)和抗體-基遞送系統(tǒng)。實(shí)例包括但不限于美國專利號(hào)6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542、和5,709,874。
使用方法 本發(fā)明提供一種用于治療、預(yù)防或改善由病毒引起的疾病的方法，其包括向個(gè)體施用治療有效量的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。由病毒引起的疾病的實(shí)例包括但不限于傳染性軟疣感染、HTLV感染、HTLV-1感染、HIV感染(AIDS)、人乳頭瘤病毒感染、皰疹病毒感染、生殖器皰疹感染、病毒性痢疾、流行性感冒、麻疹、風(fēng)疹、水痘、流行性腮腺炎、骨髓灰質(zhì)炎、狂犬病、單核細(xì)胞增多癥、埃博拉病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、登革熱、黃熱病、拉沙熱、沙粒體病毒感染、布尼亞病毒感染、纖絲病毒感染、黃病毒感染、漢坦病毒感染、輪狀病毒感染、病毒性腦膜炎、西尼羅河熱、蟲媒病毒感染、副流行性感冒、天花、EB病毒感染、登革出血熱、巨細(xì)胞病毒感染、嬰兒巨細(xì)胞病毒感染、進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病、病毒性胃腸炎、肝炎、感冒瘡、眼部皰疹、腦膜炎、腦炎、帶狀皰疹、腦炎、加州血清群病毒感染、圣路易斯腦炎、裂谷熱、手足口病、亨德拉病毒感染、腸道病毒感染、星狀病毒、腺病毒感染、日本腦炎、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎、幼兒急疹、白蛉熱、SARS、疣、貓抓病、傳染性紅斑綜合征、羊痘、玫瑰糠疹、狂犬病毒感染、H5N1病毒感染(禽類流感)和人乳頭瘤病毒感染。
本發(fā)明提供的治療方法能夠治療的病毒的實(shí)例包括但不限于腺病毒、蟲媒病毒、沙粒病毒、星狀病毒、布亞病毒、冠狀病毒、柯薩奇病毒、巨細(xì)胞病毒、登革熱病毒、埃博拉病毒、腸道病毒、EB病毒、黃病毒、線狀病毒、H5N1病毒、亨德拉病毒、人T淋巴細(xì)胞病毒、人類免疫缺陷性病毒、人乳頭瘤病毒、漢坦病毒、肝炎病毒、肝DNA病毒、皰疹病毒、單純皰疹病毒-1、單純皰疹病毒-2、嬰兒巨細(xì)胞癥病毒、流感病毒、日本腦炎病毒、JC病毒、拉沙病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、狂犬病毒(lyssavirus)、接觸傳染性軟疣病毒、腮腺炎病毒、口瘡病毒、副流感病毒、副粘病毒、副痘病毒、細(xì)小病毒、微小RNA病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、多瘤病毒、狂犬病毒(rabies virus)、裂谷熱病毒、玫瑰疹病毒、輪狀病毒、風(fēng)疹病毒、天花病毒、圣路易斯腦炎病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、西尼羅病毒和黃熱病毒。
在一實(shí)施方案中，所述病毒為性傳播的。在另一實(shí)施方案中，所述病毒為致癌病毒。在某些實(shí)施方案中，所述病毒為乳多空瘤病毒或單純皰疹病毒。在某些實(shí)施方案中，所述乳多空瘤病毒為多形瘤病毒或乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述乳多空病毒為多形瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述乳多空瘤病毒為乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述病毒為人乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述病毒為單純皰疹病毒。
本發(fā)明還提供一種用于治療、預(yù)防或改善由致癌病毒引起的疾病的一種或多種癥狀的方法，其包括向患有或懷疑患有這樣的疾病的個(gè)體施用治療有效量的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在某些實(shí)施方案中，所述致癌病毒為性傳播的。在某些實(shí)施方案中，所述致癌病毒為乳多空病毒。在某些實(shí)施方案中，所述致癌病毒為多形瘤病毒或乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述致癌病毒為多形瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述致癌病毒為乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述致癌病毒為人或牛乳頭瘤病毒。
在某些實(shí)施方案中，由致癌病毒引起的疾病為疣，包括但不限于足底疣和生殖器疣；子宮頸非典型增生；復(fù)發(fā)性呼吸性乳頭瘤病，包括但不限于喉部乳頭瘤；或與乳頭瘤病毒感染相關(guān)的癌癥，包括肛門生殖器癌，例如子宮頸癌、肛門癌和肛周癌、外陰癌、陰道癌和陰莖癌；頭頸部癌，例如口腔咽部區(qū)域癌癥和食道癌；和皮膚癌，例如基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法給藥后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，例如測(cè)定病毒滴度，相對(duì)于沒有施用所述化合物的個(gè)體，施用治療有效量光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物，使得病毒的復(fù)制減少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或更多。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法給藥后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，相對(duì)于沒有施用所述化合物的個(gè)體，施用治療有效量光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物，使得病毒的復(fù)制減少1、2、3、4、5、10、15、20、25、50、75、100倍或更多。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法給藥后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，相對(duì)于沒有施用所述化合物的個(gè)體，施用治療有效量光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物，使得病毒滴度降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或更多。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法給藥后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，相對(duì)于沒有施用所述化合物的個(gè)體，施用治療有效量光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物，使得病毒滴度降低1、2、3、4、5、10、15、20、25、50、75、100倍或更多倍。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于抑制病毒復(fù)制的方法，其包括用有效量的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥接觸所述病毒。
在一實(shí)施方案中，所述病毒為性傳播的。在另一實(shí)施方案中，所述病毒為致癌病毒。在某些實(shí)施方案中，所述病毒為乳多空瘤病毒或單純皰疹病毒。在某些實(shí)施方案中，所述乳多空瘤病毒為多形瘤病毒或乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述乳多空瘤病毒為多形瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述乳多空瘤病毒為乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述病毒為人乳頭瘤病毒。在某些實(shí)施方案中，所述病毒為單純皰疹病毒。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法初次接觸后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，相對(duì)與沒有這樣接觸的病毒，用治療有效量的光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物接觸病毒，使得病毒滴度降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或更多。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法初次接觸后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，相對(duì)與沒有這樣接觸的病毒，用治療有效量的光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物接觸病毒，使得病毒滴度降低1、2、3、4、5、10、15、20、25、50、75、100倍或更多。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法初次接觸后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，相對(duì)與沒有這樣接觸的病毒，用治療有效量的光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物接觸病毒，使得病毒滴度降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或更多。
在某些實(shí)施方案中，在通過本領(lǐng)域已知的方法初次接觸后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第10天、第15天或第30天測(cè)定時(shí)，相對(duì)與沒有這樣接觸的病毒，用治療有效量光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥；或其藥物組合物接觸病毒，使得病毒滴度降低1、2、3、4、5、10、15、20、25、50、75、100倍或更多。
本發(fā)明還提供一種用于治療、預(yù)防或改善個(gè)體中疾病的一種或多種癥狀方法，其包括向患有或懷疑患有這樣疾病的個(gè)體施用治療有效量光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在一實(shí)施方案中，所述疾病為癌癥，包括但不限于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、腦癌、肝癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、腎癌、皮膚癌、頭頸部癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宮癌、淋巴癌、白血病、胃癌、胰腺癌、睪丸淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤。
本發(fā)明提供一種抑制磷脂酶C活性的方法，其包括用光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥接觸磷脂酶C。
根據(jù)待治療的疾病和個(gè)體的狀況，本發(fā)明提供的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥可以經(jīng)由口服、腸胃外(例如肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、ICV、腦池內(nèi)注射或輸注、皮下注射或植入)、吸入、鼻腔、陰道、直腸、舌下或表面(例如透皮或局部)施用途徑給藥，并且可以單獨(dú)配制成合適的劑量單元，或者與適于每種施用途徑的藥學(xué)上可接受的載體、助劑和賦形劑一起配制。
所述劑量可以是一次、兩次、三次、四次、五次、六次或更多的亞劑量，每天按合適的間隔給藥。所述劑量或亞劑量可以以包含0.1至10毫克、0.1至5毫克或0.1至2毫克活性成分/劑量單元的劑量單元形式施用，或者，如果患者的病癥需要，可以連續(xù)輸注施用。
在某些實(shí)施方案中，合適的劑量水平為約0.001至約10mg/kg患者體重/天(mg/kg/天)、約0.01至約10mg/kg/天、約0.01至約1mg/kg/天或約0.05至約1mg/kg/天，其可以以單劑量或多劑量給藥。合適的劑量水平可以為約0.001至25mg/kg/天、約0.001至10mg/kg/天、或約0.001至5mg/kg/天。在該范圍內(nèi)，所述劑量可以為0.001至0.005、0.005至0.05、0.05至0.5或0.5至5.0mg/kg/天。
在某些實(shí)施方案中，合適的劑量水平為約0.1、約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10mg/kg/天。
試劑盒/制品 [所述光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥也可以使用本領(lǐng)域那些技術(shù)人員熟知的包裝材料提供。參見，例如美國專利號(hào)5,323,907、5,052,558、和5,033,252。藥用包裝材料的實(shí)例包括但不限于泡罩包裝、瓶子、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器和適于選擇制劑和預(yù)期給藥和治療方式的任何包裝材料。
本發(fā)明還提供試劑盒，當(dāng)醫(yī)師使用時(shí)，其可以簡化向個(gè)體施用合適量的活性成分。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的試劑盒包括容器和光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的劑型。
在某些實(shí)施方案中，所述光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥與如本發(fā)明描述的其它治療劑組合給藥。其它治療劑可以或者不可以同時(shí)或按相同的施用途徑給藥至患者。
在某些實(shí)施方案中，所述試劑盒包括一個(gè)容器，該容器包含光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的劑型，該容器中還包含一種或多種本發(fā)明描述的其它治療劑。
本發(fā)明提供的試劑盒可以進(jìn)一步包括用于施用活性成分的裝置。這樣的裝置的實(shí)例包括但不限于注射器、無針注射器滴注袋、貼劑和吸入器。本發(fā)明提供的試劑盒也可以包括給藥所述活性成分的避孕套。
本發(fā)明提供的試劑盒可以進(jìn)一步包括可用于施用一種或多種活性成分的藥學(xué)上可接受的賦形劑。例如，如果活性成分以必須重構(gòu)用于腸胃外施用的固體形式提供，則所述試劑盒可以包括合適賦形劑的密封容器，其中活性成分可以溶解形成適于腸胃外施用的無顆粒無菌溶液。藥學(xué)上可接受的賦形劑的實(shí)例包括但不限于含水賦形劑，包括但不限于注射用水USP、氯化鈉注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化鈉注射液、和乳酸化林格氏注射液；水可溶混賦形劑，包括但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非含水賦形劑，包括但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸芐酯。
實(shí)施例 如本發(fā)明使用的，無論特定的縮寫是否有特別的定義，在這些制備方法、方案和實(shí)施例中使用的符號(hào)和規(guī)則與在同期科學(xué)文獻(xiàn)例如，Journal ofthe American Chemical Society或Journal of Biological Chemistry中使用的那些一致。特別地，但不限于，在實(shí)施例和整個(gè)說明書中可以使用下述縮寫g(克)；mg(毫克)；L(升)；mL(毫升)；μL(微升)；psi(磅/平方英寸)；M(摩爾濃度)；mM(毫克分子)；μM(微摩爾)；Hz(赫茲)；MHz(兆赫)；mol(摩爾)；mmol(毫摩爾)；RT(室溫)；hr(小時(shí))；min(分鐘)；TLC(薄層色譜法)；mp(熔點(diǎn))；RP(逆相)；T1-(保留時(shí)間)；TFA(三氟乙酸)；TEA(三乙胺)；THF(四氫呋喃)；TFAA(三氟醋酐)；CD3OD(氘代甲醇)；CDCl3(氘代氯仿)；DMSO(二甲亞砜)；SiO2(二氧化硅)；atm(大氣壓)；EtOAc(乙酸乙酯)；CHCl3(氯仿)；HCl(鹽酸)；Ac(乙?；?；DMF(N，N-二甲基甲酰胺)；Me(甲基)；Cs2CO3(碳酸銫)；EtOH(乙醇)；Et(乙基)；tBu(叔丁基)；MeOH(甲醇)。
對(duì)于所有下述實(shí)施例，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)和純化方法。除非另有說明，所有的溫度都以℃(攝氏度)表示。除非另有說明，所有的反應(yīng)都在在室溫下進(jìn)行。在方案2至6中闡述的合成方法是通過具體實(shí)施例來舉例說明可適用的化學(xué)方法，而并不表示本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1 光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的合成 光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽的合成在方案4和5中闡述。
步驟1.在70℃下，攪拌雙環(huán)戊二烯8(132.2g，1mol)和48％的氫溴酸(227mL)的混合物3小時(shí)。過濾沉淀物，并用己烷洗滌。分離有機(jī)層與水層，并用己烷進(jìn)一步萃取水層。用水洗滌混合的有機(jī)層，經(jīng)無水MgSO4干燥，并濃縮。在真空(12mmHg)下，于105-113℃蒸餾殘余的油狀物，得到呈無色油狀的C-外溴代烯烴9(199.3g，93.5％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.30-1.65(2H，m)，1.75-2.15(5H，m)，2.25-2.35(1H，m)，2.40-2.70(2H，m)，3.95-4.05(1H，m)，5.60-5.75(1H，m)。
步驟2.向C-外-溴代烯烴9在乙酸乙酯(200mL)中的溶液中加入10％的Pd/C(2g)。在50psi氫化該混合物過夜。過濾除去催化劑，并濃縮反應(yīng)溶液。在真空(12mmHg)下，于112-118℃蒸餾殘余油狀物，得到呈無色油狀的C-外溴代烷10(196.53g，98％)。
1H NMR(CDCl3)δ0.85-0.21(14H，m)，3.85-3.95(1H，m)。
步驟3.在室溫下，向tBuOK(75.74g，0.675mol)在無水tBuOH(400mL)中的懸浮液中滴加C-外溴代烷10(96.81g，0.45mol)在無水THF(100mL)中的溶液，同時(shí)攪拌。在氬氣下回流該混合物過夜。在冷卻后，用水(800mL)稀釋該反應(yīng)混合物，并用己烷萃取。經(jīng)無水MgSO4干燥混合的有機(jī)層，過濾并濃縮。在真空(15mmHg)下，于58-63℃蒸餾殘余油狀物，得到呈無色油狀的C-外烯5(38.62，64％)。IR(純)cm-12949，1471，1456，1325，693；MS(APCI)m/z135(M+1)；1H NMR(CDCl3)δ0.90-1.05(2H，m)，1.30-2.00(8H，m)，2.40-2.50(2H，m)，6.05-6.15(2H，m)。
步驟4.超聲處理三-(雙苯亞甲基丙酮)-二鈀(0)(Pd2dba3)和CHCl3加合物(41mg，0.04mmol)、R-(+)-MOP(74mg，0.16mmol)和C-外烯5的混合物5分鐘，接著在0℃的水浴溫度，在氬氣下，滴加三氯硅烷(1mL，9.6mmol)，同時(shí)攪拌。在該反應(yīng)中使用的特定手性單齒膦配體具有R構(gòu)型，R5為-OCH3，R6和R7為苯基。然后，在相同的溫度下，攪拌該混合物過夜。通過滴加己烷稀釋該反應(yīng)混合物，過濾，并用己烷洗滌。濃縮混合的有機(jī)物，得到呈無色油狀的粗光學(xué)活性的Si-外/C-外有機(jī)硅烷6，將其直接用于下一步中，無需進(jìn)一步純化。
步驟5.向用冰浴冷卻的粗Si-外/C-外有機(jī)硅烷6、KHCO3(5.82g)和KF(2.25g)在THF(10mL)和MeOH(10mL)的混合物中滴加30％的含水H2O2(5.1mL)，同時(shí)攪拌。在攪拌過夜之后，用CHCl3萃取反應(yīng)混合物。用水洗滌混合的有機(jī)層，經(jīng)無水Mg2SO4干燥，過濾并濃縮。用二氧化硅層析純化粗產(chǎn)物，得到呈無色油狀的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外烷醇7(954mg，79％)。
IR(純)cm-13347，2941，2861；MS(APCI)m/z135(M+1-H2O)；HNMR(CDCl3)δ0.85-1.05(2H，m)，1.15-1.40(5H，m)，1.50-2.00(8H，m)，3.70-3.75(1H，m)。
如下所述，通過將所述分子轉(zhuǎn)化成氨基甲酸酯來測(cè)定光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外烷醇7的對(duì)映體過量(e.e.)和外/內(nèi)比例。向光學(xué)活性的(-)-O-外烷醇7(91mg，0.6mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入3，5-二硝基苯基異氰酸酯(150mg，0.72mmol)。在室溫下，攪拌該反應(yīng)混合物3小時(shí)。在除去溶劑之后，用二氧化硅層析純化殘余物，得到呈淺黃色非晶形的相應(yīng)氨基甲酸酯(84mg)。
HPLC(化學(xué)純度)99.2％；HPLC(化學(xué)純度)83％e.e.；MS(ESI)m/z360(M-1)；外/內(nèi)比例大于99％。
也通過改變催化劑和其它反應(yīng)條件來使非對(duì)稱的氫化硅烷化反應(yīng)最佳化。結(jié)果概括在表1中。
表1.非對(duì)稱氫化硅烷化的最佳化 a.在加入三氯硅烷之前，超聲處理Pd2dba3·CHCl3加合物、(R)-MOP和化合物5的混合物5分鐘。
b.在加入化合物5之前，超聲處理Pd2dba3·CHCl3加合物、(R)-MOP和三氯硅烷的混合物5分鐘。
c.在加入化合物5和三氯硅烷之前，超聲處理Pd2dba3·CHCl3加合物和(R)-MOP的混合物5分鐘，并除去溶劑。
d.在加入三氯硅烷之后，內(nèi)部溫度上升至超過三氯硅烷的沸點(diǎn)。
步驟6.向冰浴冷卻的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外烷醇7(79.5mg，0.52mmol，78％e.e.)在無水THF(2mL)中的溶液中加入tBuOK(53mg，0.47mmol)，同時(shí)攪拌，接著滴加CS2(40mg，0.53mmol)在無水THF(3mL)中的溶液。在室溫下，攪拌該混合物過夜。在除去溶劑之后，將殘余物與Et2O研磨，并干燥至得到呈淺黃色固體的光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽(99mg，71％)。
MS(ESI)m/s227(M-K)；1H NMR(CD3OD)δ0.80-1.10(2H，m)，1.10-2.10(HH，m)，2.15-2.20(IH，m)，5.05-5.10(1H，m)；[α]D20-12.5°(c1.04，H2O)。
實(shí)施例2 光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的合成 光學(xué)活性的(+)-和(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽的合成在方案6至8中闡述。
步驟1.在107℃，于氮?dú)庀?，機(jī)械攪拌H2SO4(25％重量，150ml)中的環(huán)戊二烯8(50g)5小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將該反應(yīng)混合物分離成水層和有機(jī)層。將有機(jī)層與水層分離，用水洗滌，用叔丁基甲醚(250mL)稀釋，真空濃縮，得到呈無色油狀的烯醇12(55g，100％)。
步驟2.將烯醇12(200g)和Pd/C(3.75％重量，7.5g)在乙醇(600mL)中的混合物加入高壓滅菌器中。在室溫下，在氫氣(5bar)下，攪拌該混合物過夜。用1H NMR監(jiān)測(cè)該反應(yīng)。在反應(yīng)完成之后，過濾該反應(yīng)混合物穿過Celite(400g)，并真空濃縮，得到呈無色油狀的烷醇7(200g，100％)。
步驟3.在氮?dú)庀?，向烷?(2g)在吡啶(8mL)中的溶液中加入乙酸酐(1.35mL)和二甲基氨基吡啶(290mg)。在50℃下，攪拌該混合物3.5小時(shí)。在用鹽酸(2M，30mL)中和之后，用CH2Cl2萃取該反應(yīng)混合物。經(jīng)無水Na2SO4干燥混合的有機(jī)層，并真空濃縮，得到呈淺黃色油狀的酯13(2g)。
步驟4.在表2中所列的三種酶之一(2mg)存在下，在攪拌器上攪拌在叔丁基甲醚(0.2mL)和pH 7的0.1M KH2PO4緩沖溶液(1mL)混合物中的酯13(20mg)過夜。所有三種酶都得自Mann Associates(London，UK)。這些酶選擇性地水解(+)酯13，從而得到光學(xué)活性的(+)烷醇7和(-)酯13。如Holscher等人描述的(HeIv.Chim.Acta 2004，87，1666-1680)，通過手性GC分析它們的光學(xué)純度，并將結(jié)果概括在表2中。
表2.酯13的酶拆分 步驟5.將(-)-酯13(25g)溶于甲醇(150mL)中。加入NaOH水溶液(4M，65mL)，并在22℃攪拌該混合物60分鐘。在減壓下，濃縮該反應(yīng)混合物，并將殘余物分配在水(100mL)和甲基叔丁基醚(100mL)中。用甲基叔丁基醚(100mL)萃取水層，并經(jīng)Na2SO4干燥混合的有機(jī)萃取物。在減壓下除去溶劑，得到(-)烷醇7(19.9g)。
步驟6.向叔丁醇鈉(1.6g)在THF(10mL)的溶液中加入光學(xué)活性的(-)-烷醇7，接著滴加二硫化碳(1.5g)。然后，在室溫下，靜置該反應(yīng)混合物過夜。過濾該反應(yīng)混合物，并用乙醚洗滌，得到光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽。
使用相同的方法，將光學(xué)活性的(+)-烷醇7轉(zhuǎn)變成光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽。
實(shí)施例3 光學(xué)活性的O-外/C-外三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的合成 光學(xué)活性的(+)-和(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽的合成闡述在方案6和7中。
步驟1.在氮?dú)庀?，向烯?2(2g)在吡啶(8mL)的溶液中加入乙酸酐(1.35mL)和二甲基氨基吡啶(290mg)。在50℃下，攪拌該混合物3.5小時(shí)。在用鹽酸(2M，30mL)中和之后，用CH2Cl2萃取該反應(yīng)混合物。經(jīng)無水Na2SO4干燥混合的有機(jī)層，并真空濃縮，得到呈淺黃色油狀的不飽和的酯11(2g)。
步驟2.在表2中列出的水解酶之一(2mg)的存在下，在攪拌器上攪拌叔丁基甲醚(0.2mL)和pH 7的0.1M KH2PO4緩沖溶液(1mL)的混合物中的酯11(20mg)過夜。所有的三種酶都得自Mann Associates(London，UK)。這些酶選擇性地水解(+)-酯11，從而得到光學(xué)活性的(+)烯醇12和光學(xué)活性的(-)酯11。通過如Holscher等人描述的手性GC(HeIv.Chim.Acta2004，87，1666-1680)分析它們的光學(xué)純度，并將結(jié)果概括在表3中。
步驟3.在氮?dú)庀?，將碳酸?21.6g)加入(-)酯11(10g))的甲醇(50mL)溶液中。室溫下，攪拌該混合物過夜，并通過TLC(CH2Cl2，PMA染色劑)監(jiān)測(cè)，直到乙酸酯消失。加入水(30mL)和甲基叔丁基醚(30mL)。用甲基叔丁基醚(3×20mL)萃取水層，并經(jīng)Na2SO4干燥混合有機(jī)層，蒸干，得到(-)烯醇12(7.6g，98％)。
步驟4.將(-)12(7.6g)在乙醇(40mL)中的溶液裝入到高壓滅菌器中。加入Pd/C(3.75％w/w，285mg)，并在H2(5bars)下，在室溫下攪拌該混合物過夜。通過1H NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)直到完成，然后過濾通過Celite(5g)，并濃縮，得到呈深色油狀的(-)7(7.8g)。
步驟5.使用本發(fā)明描述的方法，將光學(xué)活性的(+)-烷醇7和(-)-烷醇7轉(zhuǎn)變成光學(xué)活性的(+)-和(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽。
表3.不飽和的酯11的酶拆分 實(shí)施例4 光學(xué)活性的O-外/C-外三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的合成 步驟1.醇+/-12的合成。在氮?dú)庀?，?07℃加熱25％w/w H2SO4(150mL)中的環(huán)戊二烯8(50g)5小時(shí)。冷卻該反應(yīng)，并分離各層。用水洗滌有機(jī)層，用叔丁基甲醚(250mL)稀釋。然后，在真空中除去所述叔丁基甲醚，得到醇+/-12(55g，100％)。
步驟2.乙酸酯+/-11(R9＝Me)的合成。向烯醇+/-12(537g)中加入乙酸酐(340mL)、三乙胺(490mL)和N-甲基咪唑(2.5mL)。在50℃下，攪拌該混合物2.5小時(shí)，然后，加入叔丁基甲醚(540mL)和2M HCl(490mL)。分離各層，并進(jìn)一步用叔丁基甲醚(540mL)萃取水層兩次。用5％的NaHCO3(270mL)、鹽水(540mL)洗滌混合的有機(jī)相，并濃縮，得到乙酸酯+/-11(R9＝Me)(590g，96％)。
步驟3.乙酸酯+/-13(R9＝Me)的合成。在25℃下，在3bar下，使用Pd/C(20g)氫化乙醇(1500mL)中的乙酸酯+/-11(R9＝Me)(600g)2小時(shí)。當(dāng)完成(如通過GC判斷)時(shí)，將反應(yīng)介質(zhì)過濾通過Celite，并濃縮，得到乙酸酯+/-13(R9＝Me)(606g)。
步驟4.乙酸酯+/-13(R9＝Me)的生物拆分(Bioresolution)。將磷酸氫二鉀(82.5g)加入到水(6L)中，攪拌30分鐘，然后用2M NaOH調(diào)節(jié)pH至pH 7。將該溶液加熱至35℃，并一次性加入+/-13(R9＝Me)(500g)，接著加入酶AE015(300g)和0.1M的磷酸氫二鉀緩沖液(1L)。當(dāng)根據(jù)GC判斷反應(yīng)完成時(shí)，加入氯化鈉(50g)和甲苯(2.5L)。攪拌該混合物5分鐘，使其分離，將含水物萃取到甲苯(2×2.5L)中。用鹽水(2.5L)洗滌混合的有機(jī)層，然后過濾通過Celite(400g)。濃縮有機(jī)層，得到包含乙酸酯-13(R9＝Me)(96g)和烷醇+7(197g)的粗物質(zhì)(480g)。

步驟5.鄰苯二甲酸酯+14的形成和乙酸酯-13(R9＝Me)的分離。向吡啶(107mL)中加入不需要的醇+7和來自生物拆分步驟的期望的乙酸酯-13(R9＝Me)的混合物(107)。然后，加入鄰苯二甲酸酐(65g)和N，N-二甲基氨基吡啶(4.3g)，并在60℃加熱該反應(yīng)5小時(shí)。當(dāng)冷卻至10℃時(shí)，滴加2M HCl(214mL)以保持內(nèi)部溫度低于20℃。加入叔丁基甲醚(214mL)，并攪拌5分鐘。分離有機(jī)層，并用2M HCl(214mL)洗滌。將混合的含水成分萃取到叔丁基甲醚(214mL)中。用1M NaOH(2×214mL)、鹽水(214mL)洗滌有機(jī)部分，并濃縮至干，得到乙酸酯-13(R9＝Me)(49.1g)。
步驟6.包含同分異構(gòu)雜質(zhì)的烷醇-7的合成。在氮?dú)夥障拢瑢溲趸c(11.8g)加入甲醇(260mL)中的乙酸酯-13(R9＝Me)(52g)中。在25℃下，攪拌該反應(yīng)2小時(shí)，從該反應(yīng)中蒸餾出甲醇，然后加入叔丁基甲醚(75mL)和水(75mL)。攪拌該混合物5分鐘。分離各層，并進(jìn)一步加入水(2×75mL)。加入鹽水(75mL)，并攪拌該混合物5分鐘，然后加入氯化銨(75mL)，攪拌5分鐘。分離各層，并濃縮有機(jī)層，得到烷醇-7(37.1g)。

步驟7.對(duì)硝基苯甲酸酯-15的合成。將烷醇-7(39.8g，被副產(chǎn)物和異構(gòu)體污染)溶于130mL的吡啶(130mL)中。滴加二氯甲烷中的對(duì)硝基苯甲酰氯(231g)25％w/w溶液，同時(shí)在冰浴中冷卻該混合物。在22℃下，繼續(xù)攪拌18小時(shí)。在加入水(130mL)之后，攪拌該混合物60分鐘。加入甲基叔丁基醚(1L)，并用2M HCl水溶液(1L)洗滌該混合物。用NaHCO3(aq.)和鹽水洗滌有機(jī)相，并干燥(Na2SO4)。減壓蒸發(fā)溶劑，得到呈褐色固體的粗對(duì)-硝基苯甲酸酯-15(84.4g)。在異丙醇(400mL)中加熱回流粗的對(duì)硝基苯甲酸酯-15(84.4g)。在5小時(shí)內(nèi)，將該混合物冷卻到22℃，并在45℃接種(seeded)。置于22℃下另外2小時(shí)之后，過濾該混合物。先用異丙醇(50mL)洗滌濕濾餅，接著用己烷(50mL)洗滌。在風(fēng)干之后，獲得化學(xué)非對(duì)映體-和對(duì)映體-純的-15(43.4g)。按照相同的方法，從異丙醇(190mL)中再次再結(jié)晶母液殘余物，得到第二次收獲的純-15(13.1g)。
步驟8.純-7的合成。將純化的對(duì)-硝基苯甲酸酯-15(142g)在甲醇(1.4L)中加熱至60℃。加入4M NaOH水溶液(360mL)，并在22℃攪拌該混合物60分鐘。然后，減壓蒸餾出大部分甲醇。將殘余物在水(250mL)和甲基叔丁基醚(250mL)中分配。再次用甲基叔丁基醚(150mL)萃取水層。經(jīng)Na2SO4干燥混合的有機(jī)萃取物。在減壓下除去溶劑，得到呈無色油狀的烷醇-7(57.4g)。
步驟9.使用本發(fā)明描述的方法，將光學(xué)活性的(+)-和(-)-烷醇7轉(zhuǎn)變成光學(xué)活性的(+)-和(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A的鉀鹽。
實(shí)施例5 磷脂酰膽堿-特異性磷脂酶C的抑制 使用Amplex Red磷脂酰膽堿-特異性磷脂酶C(PC-PLC)檢測(cè)試劑盒，其從Invitrogen(Calsbad，CA)獲得，評(píng)價(jià)光學(xué)活性的(+)-和(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A((+)-和(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A)的鉀鹽、以及D609和外消旋的O-外/C-外黃原酸1A(外消旋的1A)抗磷脂酰膽堿-特異性磷脂酶C的抑制活性。D609是從Sigma Aldrich獲得。
根據(jù)檢測(cè)試劑盒的說明，制備Amplex Red儲(chǔ)備溶液(-20mM)、工作反應(yīng)緩沖液和辣根過氧化酶儲(chǔ)備溶液(200U/mL)、H2O2工作溶液(20mM)、膽堿氧化儲(chǔ)備溶液(20U/mL)、堿性磷酸酶儲(chǔ)備溶液(400U/mL)和B.cereusPC-PLC儲(chǔ)備溶液(10U/mL)。在試驗(yàn)開始之前2小時(shí)，將每種試驗(yàn)化合物溶于水中制備其儲(chǔ)備溶液(100mg/mL)。
Amplex Red/HRP/卵磷脂工作溶液通過將200μL的Amplex Red試劑儲(chǔ)備溶液、100μl的HRP儲(chǔ)備溶液、200μl的堿性磷酸酶儲(chǔ)備溶液、100μl的膽堿氧化酶儲(chǔ)備溶液和78μl的卵磷脂溶液加入到9.32μL的工作反應(yīng)緩沖液中制備的。PC-PLC溶液(0.2LVmL)通過用工作反應(yīng)緩沖液稀釋PC-PLC儲(chǔ)備溶液至期望的濃度制備的。
將系列濃度的試驗(yàn)化合物(25μL)移液到96孔板中。對(duì)于未抑制的PC-PLC對(duì)照和非PC-PLC對(duì)照，加入25μl的水。加入50μL的AmplexRed/HRP/卵磷脂工作溶液之后，向各個(gè)孔中加入25μL的PC-PLC溶液引發(fā)反應(yīng)。向非-PC-PLC對(duì)照中，加入25μL的水代替PC-PLC溶液。進(jìn)行試驗(yàn)，一式三份。保護(hù)該反應(yīng)使其避光。在37℃下培養(yǎng)30分鐘之后，用熒光全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀，使用550nm的檢測(cè)激發(fā)波長和590nm的檢測(cè)發(fā)射波長來測(cè)定反應(yīng)。通過從本底熒光減去從非-PC-PLC對(duì)照獲得的值來校正獲得的熒光數(shù)據(jù)。然后，計(jì)算各個(gè)試驗(yàn)化合物的IC50值，并將結(jié)果概括在表4中。
表4PC-磷脂酶C的抑制 實(shí)施例6 牛乳頭瘤病毒(BPV)的抑制 使用如描述的(Amtmann等人，Exp.Cell.Res.1985，161，541-550)體外BPV-感染的倉鼠胚胎成纖維細(xì)胞(HEF)細(xì)胞增殖測(cè)定，來評(píng)價(jià)光學(xué)活性的(+)-和(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A以及D609和外消旋的1A的鉀鹽抗牛類乳頭瘤病毒的抑制活性。將結(jié)果概括在表5中。
簡而言之，在伊格爾基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長倉鼠胚胎成纖維細(xì)胞和1型牛乳頭瘤病毒(BPV-1)-轉(zhuǎn)變的HEF(HEF-BPV)。將BPB-HEP和HEF細(xì)胞以pH 6.8的包含10％胎牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)中0.5×106細(xì)胞/板接種在96-孔板中。然后，在37℃和100％濕度下，在5％的CO2存在下，培養(yǎng)所述板。在6小時(shí)之后，用包含一系列濃度試驗(yàn)化合物的新制DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基交換在所述板中的細(xì)胞培養(yǎng)基。在37℃下，再培養(yǎng)所述板72小時(shí)。然后，用PBS洗滌所述板中的細(xì)胞，用包含0.9％NaCl的3％甲醛溶液固定1分鐘，用水洗滌10秒，并干燥過夜。對(duì)于測(cè)定，在室溫下，用結(jié)晶紫溶液染色所述板5分鐘，用水洗滌5次，并在室溫下干燥過夜。在向各孔加入乙醇/乙酸(99∶1，v/v，100mL)之后，使用ELISA讀數(shù)器在595nm測(cè)量所述板。
表5.牛乳頭瘤病毒的抑制 實(shí)施例7 人乳頭瘤病毒(BPV)的抑制 使用HPV-31感染的CIN6129E角質(zhì)形成細(xì)胞評(píng)價(jià)光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A抗人乳頭瘤病毒的抑制活性(Meyers等人，Science 1992，257，971-973)。
a.短期研究 對(duì)細(xì)胞增殖的作用。將感染了HPV-31的細(xì)胞在E培養(yǎng)基中以0.5×106細(xì)胞/板(0.5×104細(xì)胞/孔)的密度接種在含1×106絲裂霉素C處理的3T3細(xì)胞(1×104細(xì)胞/孔)的96孔板中。在CO2恒溫箱中，在100％濕度中，5％的CO2和37℃下，培養(yǎng)所述板6小時(shí)之后，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，加入含0.85g/LNaHCO3和一系列濃度(0、0.5、1、2、4、8、16、32、64和128μg/mL)的試驗(yàn)化合物的新制E培養(yǎng)基或陽性對(duì)照(200IU/mL的干擾素γ)。在測(cè)定之前不早于1小時(shí)，制備100mg/mL的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A在重蒸餾H2O中的儲(chǔ)備溶液，并在使用之前保存在冰上。試驗(yàn)每種濃度的所有樣品，一式四份。在與試驗(yàn)化合物或?qū)φ仗幚砑?xì)胞的同時(shí)時(shí)間點(diǎn)，固定含有未處理細(xì)胞的一個(gè)96孔板。在CO2恒溫箱中，在37℃下，再培養(yǎng)所述板72小時(shí)。通過傾倒除去細(xì)胞培養(yǎng)基之后，用PBS中的0.5mM EDTA溶液(100μL/孔)和PBS(100μL/孔)洗滌兩次。向所述板中加入甲醛(3％，100μL/孔)。在5分鐘之后，傾倒出甲醛，在室溫下，將所述板倒置在吸水紙上干燥。通過向每孔中加入0.1mL的結(jié)晶紫溶液染色所述細(xì)胞。在室溫下培養(yǎng)5分鐘之后，傾倒出結(jié)晶紫溶液，并通過將所述板浸在3L新鮮水中洗滌5次。所使用的結(jié)晶紫溶液是通過如下步驟制備的首先，將結(jié)晶紫溶解在乙醇中至10％的濃度，然后用重蒸餾的H2O稀釋該乙醇溶液(1∶20)。在將所述板倒置在吸水紙上過夜干燥之后，向各孔中加入0.1mL的乙醇/乙酸(99∶1)，并在ELISA讀數(shù)器中測(cè)定在595nm的光密度。
通過繪制生長對(duì)試驗(yàn)化合物的濃度圖或?qū)φ涨€圖建立劑量響應(yīng)曲線。結(jié)果顯示在圖1和2中。根據(jù)該劑量響應(yīng)曲線，從該劑量響應(yīng)曲線與平行于X軸且對(duì)應(yīng)于50％未抑制生長的線的交叉點(diǎn)處確定IC50值。光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A顯示出的EC50為16μg/mL，而陽性對(duì)照(INF-γ)顯示出在200UI/mL抑制約50％的HPV-31感染的CIN6129E角質(zhì)形成細(xì)胞的生長。
對(duì)HPV-31特異性DNA和RNA的作用。將感染了HPV-31的細(xì)胞(3×106)分配到14.5cm的平皿中，所述平皿包含新制E培養(yǎng)介質(zhì)和1×106絲裂霉素C-處理的J23T3成纖維喂養(yǎng)細(xì)胞。在6小時(shí)之后，加入包含0.85g/l NaHCO3和一系列濃度(0、0.5、1、2、4、8、16和32μg/mL)的試驗(yàn)化合物的新制培養(yǎng)基。試驗(yàn)每種濃度的所有樣品，一式兩份。在37℃培養(yǎng)72小時(shí)之后，用4mM EDTA除去喂養(yǎng)細(xì)胞，然后分離DNA和RNA。在Southern和Northern Blot凝膠中分析分離的DNA和RNA的HPV-31特異性序列。使用人A431上皮癌細(xì)胞作為HPV-未感染的陰性對(duì)照。掃描X射線底片，并對(duì)HPV-31特異性DNA和主要mRNA種類的光密度進(jìn)行累積。
通過繪制累積值對(duì)試驗(yàn)化合物的濃度的曲線圖建立劑量響應(yīng)曲線。將結(jié)果顯示在圖2中。根據(jù)該劑量響應(yīng)曲線，從該劑量響應(yīng)曲線與平行于X軸的對(duì)應(yīng)于50％未抑制的累積的線的交叉點(diǎn)來確定IC50值。光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A顯示出抑制HPV-31特異性RNA表達(dá)的IC50為10.7μg/mL。對(duì)照RNA(肌動(dòng)蛋白特異性RNA)的表達(dá)僅僅在光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A的最高濃度32μg/mL時(shí)受影響。在抑制HPV-31特異性DNA方面，光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A在32μg/mL顯示出37.5％抑制。
b.長期研究 將感染了HPV-31的細(xì)胞(3×106)鋪在14.5cm平皿中，該平皿包含新鮮的E培養(yǎng)基和1×106細(xì)胞的絲裂霉素C-處理的3T3成纖維喂養(yǎng)細(xì)胞。在CO2恒溫箱中，37℃和5％CO2中，在100％的濕度中培養(yǎng)所述平皿。使用人A431上皮癌細(xì)胞作為HPV-未感染的陰性對(duì)照。在培養(yǎng)6小時(shí)之后，除去細(xì)胞培養(yǎng)基，并加入包含0.85g/L NaHCO3和濃度為10μg/mL和3.3μg/mL的化合物、或?qū)φ?200ILVmL的干擾素γ)的新鮮E培養(yǎng)基。對(duì)于每個(gè)濃度，制備4個(gè)平皿。在CO2恒溫箱中，在37℃培養(yǎng)所述平皿。每72小時(shí)，將所述培養(yǎng)介質(zhì)替換為包含各種濃度的試驗(yàn)化合物或?qū)φ盏男迈rE培養(yǎng)基。在七天之后，或者當(dāng)未處理的細(xì)胞開始融合時(shí)，收獲每組的一個(gè)平皿用于DNA/RNA萃取，接著進(jìn)行Southern/Northern Blot分析；用胰蛋白酶處理一個(gè)平皿，測(cè)定細(xì)胞數(shù)量，將細(xì)胞接種在三個(gè)新的平皿中，如上所述處理和培養(yǎng)。重復(fù)該方法傳代9次。在這些傳代期間，監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞密度。
對(duì)細(xì)胞增殖的作用。在Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中測(cè)定收獲的平皿中的細(xì)胞數(shù)量。測(cè)定每個(gè)傳代步驟的倍增因數(shù)。用傳代結(jié)束時(shí)每個(gè)培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量除以在每次傳代開始時(shí)接種細(xì)胞的數(shù)量。當(dāng)用試驗(yàn)化合物處理的角質(zhì)形成細(xì)胞停止生長時(shí)，達(dá)到終點(diǎn)。將細(xì)胞生長停止定義為倍增因數(shù)不大于1。
在整個(gè)9次傳代期間，未處理的CIN612 9E細(xì)胞生長保持恒定。倍增因子的變化為2.7至3.9。在觀察期間，生存力沒有明顯損失。相反，用所有試驗(yàn)化合物處理都影響細(xì)胞生長(圖3)。
在第一次細(xì)胞傳代期間，用INF-γ處理導(dǎo)致細(xì)胞快速死亡，導(dǎo)致倍增因數(shù)低于1(0.8)。然而，在第二次傳代中，倍增因數(shù)激增(2.4)，之后的3次傳代保持該水平，在最后的四次傳代期間，倍增因數(shù)有些降低至1.9至1.5之間。然而，減少不是累積的。
用3.3μg/mL濃度的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理CIN612 9E細(xì)胞導(dǎo)致生長率降低。倍增因數(shù)從2.9(1代)降至1.1(9代)，即，在9次傳代后，所述細(xì)胞幾乎停止生長。
用10μg/mL濃度的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理CIN612 9E細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞增殖明顯減少。倍增因數(shù)從未處理細(xì)胞的3降低至第一個(gè)5次傳代期間的值2-2.5。在5次傳代之后，觀察到倍增因數(shù)的急劇和累積降低(5代2.4，6代1.3，9代0.1)。從7代開始，倍增因數(shù)＜1，表明細(xì)胞正在死亡。
與整個(gè)9次傳代過程中CIN 9E細(xì)胞的相比，對(duì)照A431細(xì)胞(上皮癌細(xì)胞)的生長恒定或小幅度減少(圖4)。既沒有用光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理，也沒有用IFN-γ處理的對(duì)照A431的倍增因數(shù)為3.5至4.7。用200IU/mL的INF-γ處理A431細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生長沒有顯著影響。在整個(gè)9次傳代過程中，倍增因數(shù)為3.7至4.6。用光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生長僅僅有很小的影響。用3.3μg/mL濃度的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理引起細(xì)胞生長的輕微抑制。倍增因數(shù)的變化為3.1至4.2。不存在累積效應(yīng)。用10μg/mL濃度的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理也引起細(xì)胞生長的輕微抑制。倍增因數(shù)的變化為2.8至3.5。不存在累積效應(yīng)。
在5次傳代之后，觀察到用10μg/mL的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理的CIN 612 9E細(xì)胞的形態(tài)有顯著變化(圖5A和5B)。細(xì)胞生長的更有像未轉(zhuǎn)變的角質(zhì)形成細(xì)胞，而不是未處理的CIN 612 9E細(xì)胞的十字形模式。當(dāng)培養(yǎng)物生長融合時(shí)，用光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理的CIN 6129E細(xì)胞開始被抑制，而未處理的CIN 612 9E細(xì)胞堆積(piling up)并且在達(dá)到融合之后不會(huì)停止其生長。另外，用光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A處理的CIN 612 9E細(xì)胞獲得扁球形，而未處理的CIN 612 9E細(xì)胞保持紡錘形。
對(duì)HPV-31特異性DNA和RNA的作用在SouthernBlot和Northern Blot凝膠中分析DNA和RNA的HPV-31特異性序列。掃描X射線底片，并累積HPV-31特異性DNA和主要mRNA種類的光密度。通過繪制累積值對(duì)每次處理劑量的傳代次數(shù)的曲線圖建立時(shí)間曲線。根據(jù)該時(shí)間曲線，從該時(shí)間曲線與平行于X軸且對(duì)應(yīng)于未處理的對(duì)照樣品的50％累積的線的交叉點(diǎn)確定T50(減低至對(duì)照水平的50所需的時(shí)間)。
將結(jié)果顯示在圖6和7中，并概括在表6中。所有用3.3μg/mL或10μg/mL的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A或200IU/mL的INF-γ處理的細(xì)胞都顯示出HPV-31特異性DNA和RNA含量的連續(xù)降低(表6)。最有效的處理是用10μg/mL的光學(xué)活性的(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A。在單次傳代之后，病毒基因組/細(xì)胞的數(shù)量降低超過50％(T50DNA＜1和T50RNA＜1)，在6次傳代之后為＜5％。在9次傳代之后，幾乎檢測(cè)不到病毒DNA和RNA(低于1％)。
表6.HPV-31特異性DNA和RNA表達(dá)的抑制 1HPV-31特異性RNA的含量減少50％所需要的傳代次數(shù) 2HPV-31特異性DNA的含量減少50％所需要的傳代次數(shù) 實(shí)施例8 2型單純皰疹病毒(HS V-2)的抑制 用D609、外消旋的1A的鉀鹽和阿昔洛韋一起評(píng)價(jià)光學(xué)活性的(+)-和(-)-對(duì)映異構(gòu)體1A的鉀鹽對(duì)2型單純皰疹病毒的抑制活性和細(xì)胞毒性。將結(jié)果概括在表6中。
在100％濕度的CO2恒溫箱中，在5％CO2和37℃下，在DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)Calu-6細(xì)胞和RITA細(xì)胞。
對(duì)于細(xì)胞毒性測(cè)定，將Calu-6細(xì)胞在DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中以3×106細(xì)胞/板的密度接種在96孔板中。在37℃下，在5％的CO2存在下，培養(yǎng)所述板24小時(shí)。用包含一系列濃度試驗(yàn)化合物的新鮮DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基交換所述板中的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基。在37℃下，在5％的CO2存在下，培養(yǎng)所述板48小時(shí)。然后，用PBS洗滌所述板，用包含0.9％NaCl的3％甲醛溶液固定1分鐘，用水洗滌10秒并干燥過夜。對(duì)于測(cè)定，在室溫下，用結(jié)晶紫溶液染色所述板5分鐘，用水洗滌5次，并在室溫下干燥過夜。在向各孔加入乙醇/乙酸(99∶1，v/v，100mL)之后，使用ELISA讀數(shù)器在595nm測(cè)量所述板。通過繪制光密度平均值對(duì)化合物濃度的曲線圖獲得每種化合物的劑量響應(yīng)曲線。將根據(jù)劑量響應(yīng)曲線獲得的LD50值概括在表5中。
對(duì)于HSV-2抑制，將Calu-6細(xì)胞以在DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中3×106細(xì)胞/板的密度接種在96孔板中。在5％的CO2存在下，在37℃下，培養(yǎng)該板24小時(shí)。除去所述板中的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，并用2型單純皰疹病毒以50個(gè)噬斑形成單位/孔感染細(xì)胞。在37℃培養(yǎng)60分鐘之后，加入DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中的一系列濃度的試驗(yàn)化合物。在5％的CO2存在下，在37℃培養(yǎng)該板48小時(shí)。將該板冷凍在-20℃，之后進(jìn)一步分析。在室溫下解凍之后，在4℃以18,000g從各孔中離心上清液5分鐘以制備包含有傳染性的病毒顆粒的上清液。在試驗(yàn)期前，進(jìn)一步稀釋所述上清液。
將RITA細(xì)胞在2mL的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中以4×106細(xì)胞/板的密度接種在24孔Linbra板中。在5％的CO2存在下，在37℃培養(yǎng)所述板24小時(shí)。在除去細(xì)胞培養(yǎng)基之后，加入0.1mL的稀釋的上清液，并在37℃培養(yǎng)所述板1小時(shí)。加入包含10％胎牛血清和0.5％甲基纖維素的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，并在37℃培養(yǎng)所述板48小時(shí)。然后，用PBS洗滌所述板，用包含0.9％NaCl的3％甲醛溶液固定1分鐘，用水洗滌10秒，并干燥過夜。為了檢測(cè)，接著在室溫下，用結(jié)晶紫溶液染色所述板5分鐘，用水洗滌5次，并在室溫下干燥過夜。目測(cè)確定噬斑數(shù)量。然后，用每孔噬斑的數(shù)量乘以稀釋系數(shù)。通過繪制噬斑數(shù)目/0.1mL對(duì)化合物濃度的曲線圖獲得劑量響應(yīng)曲線。通過LD50除以IC50計(jì)算每種化合物的治療指數(shù)。
表7.HSV-2的抑制 實(shí)施例9 表面制劑 軟膏劑
將活性成分(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物和凡士林混合，直到混合均勻。
實(shí)施例10 表面制劑 軟膏劑
將活性成分(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物和凡士林以及膽固醇混合，直到混合均勻。
實(shí)施例11 表面制劑 軟膏劑
將活性成分(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A和阿昔洛韋、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物和凡士林混合，直到混合均勻。
***** 提供的上述實(shí)施例是為了給予本領(lǐng)域普通技術(shù)人員如何制造和使用所述實(shí)施方案的完整公開和說明，并不意味著限制本發(fā)明的范圍。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的實(shí)施本發(fā)明公開內(nèi)容的上述方式的改變包含在下述權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。本說明書中引用的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)都被引入本發(fā)明作為參考，如同將這樣的出版物、專利或?qū)＠暾?qǐng)?zhí)貏e地和分別地指出引入本發(fā)明作為參考一樣。
權(quán)利要求
1.光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為鹽。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為鉀鹽、鈉鹽或鋰鹽。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為鉀鹽。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物，其中所述化合物具有不低于約80％的對(duì)映體過量。
6.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
7.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述組合物被配制用于口服、表面或腸胃外施用。
8.權(quán)利要求6或7的藥物組合物，其中所述組合物配制成膠囊或片劑。
9.權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述組合物以單元?jiǎng)┝刻峁?br> 10.一種用于治療個(gè)體中病毒引起的疾病的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病選自傳染性軟疣感染、HTLV感染、HTLV-1感染、AIDS、人乳頭瘤病毒感染、皰疹病毒感染、生殖器皰疹感染、病毒性痢疾、流行性感冒、麻疹、風(fēng)疹、水痘、流行性腮腺炎、骨髓灰質(zhì)炎、狂犬病、單核細(xì)胞增多癥、埃博拉、呼吸道合胞病毒感染、登革熱、黃熱病、拉沙熱、沙粒病毒感染、布尼亞病毒感染、纖絲病毒感染、黃病毒感染、漢坦病毒感染、輪狀病毒感染、病毒性腦膜炎、西尼羅河熱、蟲媒病毒感染、副流行性感冒、天花、EB病毒感染、登革出血熱、巨細(xì)胞病毒感染、嬰兒巨細(xì)胞病毒感染、進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病、病毒性胃腸炎、肝炎、感冒瘡、眼部皰疹、腦膜炎、腦炎、帶狀皰疹、腦炎、加州血清群病毒感染、圣路易斯腦炎、裂谷熱、手足口腔疾病、亨德拉病毒感染、腸道病毒感染、星狀病毒、腺病毒感染、日本腦炎、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎、幼兒急疹、白蛉熱、SARS、疣、貓抓病、傳染性紅斑綜合征、羊痘、玫瑰糠疹、狂犬病毒感染、H5N1病毒感染和人乳頭瘤病毒感染。
12.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病為疣、子宮頸非典型增生；復(fù)發(fā)性呼吸性乳頭瘤病或與乳頭瘤病毒感染相關(guān)的癌癥。
13.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病為子宮頸癌、肛門癌和肛周癌、外陰癌、陰道癌或陰莖癌。
14.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病為肛門生殖器癌、頭頸部癌或皮膚癌。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述頭頸部癌是口腔咽部區(qū)域癌癥或食道癌。
16.一種用于抑制個(gè)體中病毒感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物。
17.一種用于抑制病毒復(fù)制的方法，其包括用有效量的權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物來接觸所述病毒。
18.權(quán)利要求10至17的方法，其中所述病毒選自腺病毒、蟲媒病毒、沙粒病毒、星狀病毒、布尼亞病毒、冠狀病毒、柯薩奇病毒、巨細(xì)胞病毒、登革熱病毒、埃博拉病毒、腸道病毒、EB病毒、黃病毒、纖絲病毒、H5N1病毒、亨德拉病毒、人T淋巴細(xì)胞病毒、人類免疫缺陷性病毒、人乳頭瘤病毒、漢坦病毒、肝炎病毒、肝DNA病毒、皰疹病毒、單純皰疹病毒-1、單純皰疹病毒-2、嬰兒巨細(xì)胞病毒、流感病毒、日本腦炎病毒、JC病毒、拉沙病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、狂犬病毒、接觸傳染性軟疣病毒、腮腺炎病毒、羊痘病毒、副流感病毒、副粘病毒、副痘病毒、細(xì)小病毒、微小RNA病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、多瘤病毒、狂犬病病毒、裂谷熱病毒、玫瑰疹病毒、輪狀病毒、風(fēng)疹病毒、天花病毒、圣路易腦炎病毒、水痘帶狀皰疹病毒、西尼羅病毒和黃熱病毒。
19.權(quán)利要求10和16至18中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒為性傳播病毒。
20.權(quán)利要求10和16至19中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒為致癌病毒。
21.權(quán)利要求10和16至20中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒為乳多空病毒。
22.權(quán)利要求10和16至20中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒為多瘤病毒或乳頭瘤病毒。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述病毒為乳頭瘤病毒。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述乳頭瘤病毒為人乳頭瘤病毒。
25.權(quán)利要求10和16至20中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒為單純皰疹病毒。
26.一種用于抑制磷脂酶C活性的方法，其包括用權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物來接觸磷脂酶C。
27.一種用于制備權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物的方法，其包括步驟
a)在與手性單齒膦復(fù)合的過渡金屬催化劑存在下，使非手性的C-外烯5與硅烷反應(yīng)，得到光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6；
b)用氧化劑氧化所述光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6，得到保留立體化學(xué)的光學(xué)活性的烷醇7；和
c)將該光學(xué)活性的烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
28.一種用于制備光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的方法，其包括步驟
a)在與手性單齒膦復(fù)合的過渡金屬催化劑存在下，使非手性的C-外烯5與硅烷反應(yīng)，得到光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6；
b)用氧化劑氧化所述光學(xué)活性的有機(jī)硅烷6，得到光學(xué)活性的烷醇7；和
c)將所述光學(xué)活性的烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
29.權(quán)利要求27或28的方法，其中所述手性單齒膦為式(V)的化合物
其中
R5為H；C1-6烷基；或-OR8，其中R8為C1-6烷基，C3-7環(huán)烷基或C6-10芳基；和
R6和R7各自獨(dú)立地為C6-10芳基；
其中烷基、環(huán)烷基和芳基各自獨(dú)立地、任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基Q取代，取代基Q各自獨(dú)立地選自氰基、鹵素或硝基；C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環(huán)烷基、C6-14芳基、雜芳基或雜環(huán)；或-C(O)Re、-C(O)ORe、-C(O)NRfRg、-C(NRe)NRfRg、-ORe、-OC(O)Re、-OC(O)ORe、-OC(O)NRfR8、-OC(＝NRe)NRfRg、-OS(O)Re、-OS(O)2Re、-OS(O)NRfRg、-OS(O)2NRfRg、-NRfRg、-NReC(O)Rf、-NReC(O)ORf、-NReC(O)NRfRg、-NReC(＝NRh)NRfRg、-NReS(O)Rf、-NReS(O)2Rf、-NReS(O)NRfRg、-NReS(O)2NRfRe、-SRe、-S(O)Re或-S(O)2Re；其中Re、Rf、Rg和Rh各自獨(dú)立地為氫；C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環(huán)烷基、C6-14芳基、雜芳基或雜環(huán)；或者Rf和Rg與它們連接的N原子一起形成雜環(huán)。
30.權(quán)利要求27至29中任一項(xiàng)的方法，其中手性單齒膦為R-構(gòu)型。
31.權(quán)利要求27至29中任一項(xiàng)的方法，其中手性單齒膦為S-構(gòu)型。
32.權(quán)利要求29至31中任一項(xiàng)的方法，其中R5為-OR8，R8為C1-6烷基。
33.權(quán)利要求29至32中任一項(xiàng)的方法，其中R8為甲基。
34.權(quán)利要求29至33中任一項(xiàng)的方法，其中R6和R7各自獨(dú)立地為任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素基團(tuán)取代的苯基。
35.權(quán)利要求27至34中任一項(xiàng)的方法，其中所述硅烷為式(IV)的化合物
其中R1、R2和R3各自獨(dú)立地為H；鹵素；C1-6烷基；或-OR4，其中R4為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基或C6-14芳基；
其中烷基、環(huán)烷基和芳基各自獨(dú)立地、任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基Q取代，取代基Q各自獨(dú)立地選自氰基、鹵素或硝基；C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環(huán)烷基、C6-14芳基、雜芳基或雜環(huán)；或-C(O)Re、-C(O)ORe、-C(O)NRfRg、-C(NRe)NRfRg、-ORe、-OC(O)Re、-OC(O)ORe、-OC(O)NRfR8、-OC(＝NRe)NRfRg、-OS(O)Re、-OS(O)2Re、-OS(O)NRfRg、-OS(O)2NRfRg、-NRfRg、-NReC(O)Rf、-NReC(O)ORf、-NReC(O)NRfRg、-NReC(＝NRh)NRfRg、-NReS(O)Rf、-NReS(O)2Rf、-NReS(O)NRfRg、-NReS(O)2NRfRe、-SRe、-S(O)Re或-S(O)2Re；其中Re、Rf、Rg和Rh各自獨(dú)立地為氫；C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環(huán)烷基、C6-14芳基、雜芳基或雜環(huán)；或者Rf和Rg與它們連結(jié)的N原子一起形成雜環(huán)。
36.權(quán)利要求27至35中任一項(xiàng)的方法，其中所述硅烷為三氯硅烷、甲基二氯硅烷、二甲基氯硅烷、甲氧基二氯硅烷、三乙基硅烷、五甲基二硅氧烷(HSiMe2OTMS)或1，1-二甲基-3，3-二苯基-3-叔-丁基二硅氧烷(HSiMe2OTBDPS)。
37.權(quán)利要求27至36中任一項(xiàng)的方法，其中所述硅烷為三氯硅烷。
38.權(quán)利要求27至37中任一項(xiàng)的方法，其中所述過渡金屬為鉑、銥、鈀、銠或釕。
39.一種用于制備權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物的方法，其包括步驟
a)用水解酶選擇性水解酯11，得到光學(xué)活性的(-)-酯11和光學(xué)活性的(+)-烯醇9；
b)水解所述光學(xué)活性的(-)-酯11，得到光學(xué)活性的(-)-烯醇9；
c)還原所述光學(xué)活性的(-)-烯醇12，得到光學(xué)活性的(-)-烷醇7；和
d)將所述光學(xué)活性(-)-烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
40.一種用于制備光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的方法，其包括步驟
a)用水解酶選擇性水解酯11，得到光學(xué)活性的(-)-酯11和光學(xué)活性的(+)-烯醇9；
b)還原所述光學(xué)活性的(+)-烯醇12，得到光學(xué)活性的(+)-烷醇7；和
c)將所述光學(xué)活性(+)-烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
41.權(quán)利要求39或40的方法，其中所述水解酶為稻根霉菌肽酶、南極假絲酵母脂酶A或熒光假單胞菌脂酶。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所述水解酶為稻根霉菌肽酶。
43.權(quán)利要求41的方法，其中所述水解酶為南極假絲酵母脂酶A。
44.權(quán)利要求41的方法，其中所述水解酶為熒光假單胞菌脂酶。
45.一種用于制備權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物的方法，其包括步驟
a)用水解酶選擇性水解酯13，得到光學(xué)活性的(-)-酯13和光學(xué)活性的(+)-烷醇7；
b)水解光學(xué)活性的(-)-酯13，得到光學(xué)活性的(-)-烷醇7；和
c)將所述光學(xué)活性(-)-烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性(-)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
46.一種用于制備光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的方法，其包括步驟
a)用水解酶選擇性水解酯13，得到光學(xué)活性的(-)-酯13和光學(xué)活性的(+)-烷醇7；和
b)將所述光學(xué)活性的烷醇7轉(zhuǎn)化成光學(xué)活性的(+)-O-外/C-外-三環(huán)[5.2.1.02.6]-癸-9-基-黃原酸1A、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
47.權(quán)利要求45或46的方法，其中所述水解酶為稻根霉菌肽酶、南極假絲酵母脂酶A或熒光假單胞菌脂酶。
48.權(quán)利要求47的方法，其中所述水解酶為稻根霉菌肽酶。
49.權(quán)利要求39至48中任一項(xiàng)的方法，其中所述水解酶為催化量。
50.一種用于治療、預(yù)防或改善選自下述疾病的方法癌癥、自身免疫性疾病、炎癥疾病、神經(jīng)變性疾病和與局部缺血、再灌注損傷、創(chuàng)傷、動(dòng)脈粥樣硬化和/或衰老相關(guān)的疾??；其包括向個(gè)體施用治療有效量的權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物。
51.權(quán)利要求50的方法，其中所述癌癥為乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、腦癌、肝癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、腎癌、皮膚癌、頭頸部癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宮癌、淋巴癌、白血病、胃癌、胰腺癌、睪丸淋巴瘤或多發(fā)性骨髓瘤。
全文摘要
本發(fā)明提供了三環(huán)癸-9-基-黃原酸酯的光學(xué)活性立體異構(gòu)體、及其制備方法和藥物組合物。還提供了將其用于治療、預(yù)防或改善病毒引起的疾病的一種或多種癥狀的方法。
文檔編號(hào)A61K31/265GK101796024SQ200880105498
公開日2010年8月4日 申請(qǐng)日期2008年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月3日
發(fā)明者富岡美雪, 長谷川柯 申請(qǐng)人:露馬維塔股份公司