專利名稱：：中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥玉屏風(fēng)散的用途
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及從玉屏風(fēng)散中提取的多糖類藥效成分作為防治肝損傷藥物的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
：據(jù)《方劑學(xué)》(人民衛(wèi)生出版社，2002年版，817頁)中記載，玉屏風(fēng)散出自《究原方》,錄自《醫(yī)方類聚》卷150，為治療表虛自汗的經(jīng)典名方，具益氣、固表、止汗之功用，方中黃芪甘溫，內(nèi)可大補(bǔ)脾肺之氣，外可固表止汗；白術(shù)可健脾益氣，助黃苠加強(qiáng)益氣固表之力，為臣藥；佐以防風(fēng)走表而散風(fēng)御邪。黃芪得防風(fēng)，則固表而不留邪，防風(fēng)得黃芪，則祛風(fēng)而不傷正。此外，《丹溪心法》、《醫(yī)宗金鑒》中也有玉屏風(fēng)散的記載?！蹲C治準(zhǔn)繩》、《中國醫(yī)學(xué)大辭典》等著作中轉(zhuǎn)述該方出自《世醫(yī)得效方》，但傳世《世醫(yī)得效方》中并無此方?！吨腥A人民共和國藥典》自1990年至2005年間各版本中均收錄有該古方成方制劑一—玉屏風(fēng)口服液，處方由黃芪600g,防風(fēng)200g，炒白術(shù)200g組成。古今文獻(xiàn)中所記載的玉屏風(fēng)散均以黃芪、白術(shù)、防風(fēng)三味組成，但比例各異。據(jù)"玉屏風(fēng)散組成考查及聯(lián)想"(《中成藥》1995年第4期)，已有記載的黃芪、白術(shù)、防風(fēng)質(zhì)量份數(shù)配比方式達(dá)十余種之多，最多見的方式為1:1:1、1:2:1、3:1:1和2:2:1,比例不同，功效側(cè)重點(diǎn)亦有區(qū)別。據(jù)"玉屏風(fēng)散合方運(yùn)用淺析"(《時(shí)珍國醫(yī)國藥》2006年第17卷第5期839-840頁)，玉屏風(fēng)散臨床上現(xiàn)常用于與免疫功能失調(diào)有關(guān)的多種疾病的治療，如治療自汗、感冒、咳喘,小兒反復(fù)發(fā)作上呼吸道感染、慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、腎小球腎炎因外感誘發(fā)而反復(fù)發(fā)作者、慢性蕁麻疹以及復(fù)發(fā)性口瘡等病，功效顯著。"玉屏風(fēng)散防治'非典'機(jī)理探討"(《中醫(yī)文獻(xiàn)雜志》2003年第3期35-37頁)一文中綜述了玉屏風(fēng)散在防治"非典"中的作用。目前未見有關(guān)玉屏風(fēng)散在防治肝損傷方面用途的報(bào)道。據(jù)"玉屏風(fēng)散的藥理學(xué)研究進(jìn)展"(《安徽醫(yī)藥》2003年第7巻第4期241-242頁)，玉屏風(fēng)散藥理方面主要有免疫雙向調(diào)節(jié)作用；對過敏原的綜合作用；減輕實(shí)驗(yàn)性腎炎病變，促進(jìn)腎炎病理修復(fù)；對流感病毒的抑制作用；抗疲勞，耐低溫，耐缺氧等。目前尚未見到有關(guān)玉屏風(fēng)散具有防治肝損傷活性的藥理研究方面的報(bào)道。目前針對玉屏風(fēng)散活性成分的研究不多，《中藥藥理與臨床》雜志上先后報(bào)道了"玉屏風(fēng)散多糖類成分對免疫功能的影響"(2006年第22卷第1期2-4頁)、"玉屏風(fēng)散總多糖不同給藥方式和時(shí)相影響小鼠免疫功能的對比研究"(2006年第22巻第2期5-7頁)、"玉屏風(fēng)散總多糖影響腸道黏膜損傷小鼠腸-呼吸道IgA分泌研究"(2007第23巻第5期43-45頁)，上述研究表明，玉屏風(fēng)散總提取物及其多糖類成分具有免疫增強(qiáng)作用，玉屏風(fēng)散總多糖可能通過激活腸道粘膜免疫發(fā)揮局部免疫作用?！逗{藥學(xué)》(2004年第16巻第2期38-40頁)中的"玉屏風(fēng)粗多糖的提取及藥理實(shí)驗(yàn)"一文介紹了采用常規(guī)方法提取粗多糖、觀察到玉屏風(fēng)粗多糖對腫瘤生長有一定的抑制作用。以上報(bào)道所用的都是玉屏風(fēng)散總多糖，未進(jìn)一步分離純化；《美洲中國醫(yī)學(xué)雜志》(《TheAmericanJournalofChineseMedicine》2006年第34巻第4期631641頁)中的"玉屏風(fēng)散部分多糖對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究"("Immu議odulatingEffectsofFractionedPolysaccharidesIsolatedfromYu-Ping-Feng—PowderinCyclophosphamide-TreatedMice")—文和安徽醫(yī)科大學(xué)2006年博士學(xué)位論文《復(fù)方中藥玉屏風(fēng)多糖的免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)理的研究》報(bào)道了所提取的玉屏風(fēng)散多糖部位對免疫抑制小鼠的非特異性免疫、特異性免疫功能的影響及機(jī)制，以及對大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎模型中巨噬細(xì)胞相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響及機(jī)制，但是其研究的是藥物對免疫抑制小鼠免疫功能和大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎模型的影響及機(jī)制，未見其進(jìn)行玉屏風(fēng)散及其藥效成分對于肝損傷防治作用的研究。肝損傷是諸多因素所致各種肝臟疾病的病變結(jié)果，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已從多方面較深入地探討了其發(fā)生機(jī)制，并研發(fā)出膜保護(hù)劑、抗脂質(zhì)過氧化劑、抗免疫反應(yīng)劑等保肝藥物，但療效尚難盡人意，且因毒副作用限制了其臨床應(yīng)用。中醫(yī)藥歷經(jīng)了幾千年的實(shí)踐與發(fā)展，在中醫(yī)理論指導(dǎo)下辨證組方，嚴(yán)格加工炮制，可發(fā)揮多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)的綜合作用，故中醫(yī)藥在治療肝損傷方面有著獨(dú)特優(yōu)勢，是一種既有效而又切實(shí)可行的治療思路。綜合"肝損傷動物模型及中藥治療研究概況"(《中國現(xiàn)代中藥》第8卷第11期25-28頁)、"中草藥抗肝纖維化的研究"(《中藥材》2001年第24巻第3期212-214頁)、"日本現(xiàn)代漢方藥對肝病的預(yù)防治療進(jìn)展"(《上海中醫(yī)藥雜志》2004年第38卷第1期58-60頁)等文獻(xiàn)中的介紹，目前已開展的用于防治肝損傷研究的中草藥主要有(l)單味中藥當(dāng)歸，丹參，莪術(shù)，胡蘆巴，苦參，龍膽草，水飛薊，藏紅花，枸杞，胡黃連，銀杏葉提取物，漢防己甲素，甘草，姜黃，桃仁，三七，黃芪，澤蘭，冬蟲夏草等。(2)復(fù)方中藥小柴胡湯，四逆散，柴胡疏肝散，復(fù)方861,漢丹樂，軟肝片，肝心康、抗纖復(fù)方，肝炎平、強(qiáng)肝膠囊、小柴胡湯，補(bǔ)中益氣湯，人參養(yǎng)榮湯，十全大補(bǔ)湯，柴薈湯，柴胡桂技湯，歸脾湯等。至今未見有關(guān)玉屏風(fēng)散及其藥效成分作為防治肝損傷藥物及其應(yīng)用方法方面的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的新用途。本發(fā)明中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，其特征在于按質(zhì)量份數(shù)將黃芪1-4:白術(shù)1-4:防風(fēng)1-3配制而成的玉屏風(fēng)散，按每克該玉屏風(fēng)散與10-30毫升的水相混和，浸泡O.5-10h,加熱至50-10(TC后在此溫度下保溫1-6h，進(jìn)行固液分離，將分離出的提取液濃縮至原體積的1/5-1/10;以低極性有機(jī)溶劑萃取濃縮后的提取液，保留下層萃取液；按體積比5:1將氯仿與正丁醇配制成混合有機(jī)溶劑，將此混合有機(jī)溶劑與該下層萃取液按體積比l:2-2:1混合，振蕩后靜置至分層，除去中間層；將上層萃取液與下層有機(jī)溶劑混合，再振蕩后靜置至分層，除去中間層；按上述過程反復(fù)操作3-15次,保留最后得到的上層萃取液；將該上層萃取液以乙醇調(diào)配至乙醇濃度為30%,靜置后棄去沉淀；將所得上清液再以乙醇調(diào)配至乙醇濃度為50%，靜置后分離出沉淀物，將該沉淀物干燥后碾成粉末，即為玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分，記作YPF-P;將該YPF-P干粉用作防治肝損傷藥物，臨床劑量以干粉量表示為0.9-L8g/日，療程至少一周。本發(fā)明中所述"按質(zhì)量份數(shù)將黃芪1-4:白術(shù)l-4:防風(fēng)1-3配制而成的玉屏風(fēng)散"包括1:1:1、1:2:1、1:1:3、3:1:1、2:2:1、1:3:1、1.5:2:1、2:1.5:1、2:1:1或4:4:1在內(nèi)的傳統(tǒng)配比方式。本發(fā)明中采取將提取液"加熱至50-10(TC后在此溫度下保溫l-6h"，所述"加熱"方法可包括提取罐蒸氣加熱或超聲波加熱在內(nèi)的加熱方式；若提取液加熱溫度低于5(TC或加熱時(shí)間太短，則提取效率太低造成浪費(fèi)；而若加熱溫度高于IO(TC或加熱時(shí)間太長，則會對藥物活性造成較大損傷，所以本發(fā)明釆取將提取液于50-IOO'C加熱l-6h。所述"固液分離"后得到的殘?jiān)€可進(jìn)行多次提取，合并各次得到的提取液，以充分利用玉屏風(fēng)散藥材中的有效成分。所述"以低極性有機(jī)溶劑萃取提取液"可釆取多次萃取后合并萃取液，以提高有效成分的純度；所述"低極性有機(jī)溶劑"可選用石油醚、正己垸或乙酸乙酯，用于萃取除去提取液中脂類雜質(zhì)。所述將混合有機(jī)溶劑與萃取液混合后進(jìn)行的"反復(fù)操作3-15次"是為了除去蛋白類雜質(zhì)，低于3次則提取液中蛋白質(zhì)留存較多，15次時(shí)大多數(shù)蛋白質(zhì)已除去，增加搡作次數(shù)的意義不大。所述"干燥"可選用包括減壓干燥、水浴干燥、冷凍干燥或噴霧干燥在內(nèi)的干燥方式。所述將該YPF-P干粉用作防治肝損傷藥物的臨床劑量"0.9-1.8g/日"是指YPF-P干粉的人用劑量，不包括制成各種劑型時(shí)添加的輔料重量。臨用前可將0.9-1.8g/日劑量的YPF-P干粉以適當(dāng)溶劑溶解后可分2次口服；所述"適當(dāng)溶劑"可為生理鹽水、葡萄糖氯化鈉溶液、去離子水或蒸餾水；所述"分2次口服"系根據(jù)藥物的代謝動力學(xué)特點(diǎn)而制定，該方案與每曰服藥l次的方案相比，藥物體內(nèi)濃度波動更小，療效更佳；也可將YPF-P在有效量0.9-1.8g/日的基礎(chǔ)上添加輔料制成各種口服劑型，包括口服液、顆粒劑、片劑或膠囊；所述"輔料"包括潤濕劑、潤滑劑、稀釋劑、粘合劑和/或著色劑在內(nèi)的添加劑。本發(fā)明的有益效果在于現(xiàn)有的玉屏風(fēng)散的用途中，尚未出現(xiàn)有關(guān)防治肝損傷方面的用途；在目前針對玉屏風(fēng)散中藥效成分不多的研究報(bào)道中，只是僅見到從玉屏風(fēng)散中提取出總多糖或總苷，未見再進(jìn)一步分離純化；而本發(fā)明是將玉屏風(fēng)散總多糖進(jìn)行分級分離后得到的特定多糖部位進(jìn)行藥理研究，這種去粗取精的做法使得對玉屏風(fēng)散中的藥效活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究又前進(jìn)了一步；"玉屏風(fēng)散部分多糖對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究"和學(xué)位論文"復(fù)方中藥玉屏風(fēng)多糖的免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)理的研究"中釆用了與本發(fā)明相類似的玉屏風(fēng)散多糖部位，但是其研究內(nèi)容是藥物對免疫抑制小鼠免疫功能和大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎模型的影響及機(jī)制，未進(jìn)行玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分對于肝損傷防治作用的研究。本發(fā)明為玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分的藥效研究開拓了又一新的領(lǐng)域，填補(bǔ)了這一空白。本發(fā)明通過提取分離得到了玉屏風(fēng)散中一種多糖類藥效成分，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該成分在防治肝損傷方面具有顯著的療效，初步探討了該成分防治肝損傷作用的機(jī)制，本發(fā)明有利于對該古方開展進(jìn)一步的深入研究，為拓展玉屏風(fēng)散的臨床應(yīng)用范圍、促進(jìn)玉屏風(fēng)散的開發(fā)利用打下了基礎(chǔ)，并在人類尋找防治肝損傷良藥的路途中找到了又一富有前景的物質(zhì)。圖1為CCl4誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝臟組織病理圖；圖2為CC1J秀導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷模型組小鼠肝臟組織病理圖3為YPF-P50mgkg—'劑量組對"14誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖4為YPF-P100mgkg—'劑量組對CCh誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖5為YPF-P200mgkg—劑量組對CCL誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖6為聯(lián)苯雙酯對照組對CCl4誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖。圖7為D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝臟組織病理圖；圖8為D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷模型組小鼠肝臟組織病理圖；圖9為YPF-P50mg-kg—'劑量組對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖10為YPF-P100mg'kg—'劑量組對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖11為YPF-P200mg-kg—'劑量組對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖12為聯(lián)苯雙酯對照組對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響圖。圖13為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝臟組織病理圖14為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷模型組小鼠肝臟組織病理圖15為YPF-P50mgkg—'劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響圖16為YPF-P100mgAg—'劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響圖17為YPF-P200mg'kg—'劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響圖18為聯(lián)苯雙酯對照組對急性免疫性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響圖。圖19為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝組織TNF-a表達(dá)圖20為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷模型組小鼠肝組織TNF-cc表達(dá)圖；圖21為YPF-P50mgkg—1劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-oc表達(dá)的影響圖；圖22為YPF-PlOOmgkg—'劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-oc表達(dá)的影響圖23為YPF-P200mgkg—1劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-a表達(dá)的影響圖24為聯(lián)苯雙酯對照組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-a表達(dá)的影響圖。圖25為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝組織iNOS表達(dá)圖；圖26為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷模型組小鼠肝組織iNOS表達(dá)圖；圖27為YPF-P50mgkg'劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織iNOS表達(dá)的影響圖；圖28為YPF-P100mg-kg—'劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織iNOS表達(dá)的影響圖；圖29為YPF-P200mg，kgM劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織iNOS表達(dá)的影響圖；圖30為聯(lián)苯雙酯對照組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織iNOS表達(dá)的影響圖。圖31為YPF-P影響急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-amRNA表達(dá)的凝膠電泳圖；圖32為YPF-P影響急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-amRNA表達(dá)的凝膠電泳半定量統(tǒng)計(jì)圖。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1:將黃芪、炒白術(shù)、防風(fēng)按質(zhì)量份數(shù)3:1:l配制而成的玉屏風(fēng)散，于50'C烘箱中干燥后粉碎，過20目篩，將5kg該玉屏風(fēng)散置于提取罐中，倒入50L蒸餾水浸泡30min后，加熱至95'C后在此溫度下保溫2h,進(jìn)行固液分離，在固液分離后得到的殘?jiān)性偌尤?0L蒸餾水，加熱至95'C后在此溫度下保溫2h,固液分離后合并兩次提取液并濃縮至20L;以1L石油醚超聲萃取提取液2次，每次30min，保留下層萃取液；按體積比5:l將氯仿與正丁醇配制成混合有機(jī)溶劑，將此混合有機(jī)溶劑與該下層萃取液按體積比1:1在分液漏斗中混合，振蕩20秒后靜置至分層，除去中間層；將上層萃取液與下層混合有機(jī)溶劑混合，再振蕩20秒后靜置至分層，除去中間層；按上述過程反復(fù)操作10次，保留最后得到的上層萃取液；將該上層萃取液在酒精計(jì)監(jiān)測下以乙醇調(diào)配至乙醇濃度為30%,靜置12h后棄去沉淀；將所得上清液再在酒精計(jì)監(jiān)測下以乙醇調(diào)配至乙醇濃度為50%,靜置12h后分離出沉淀物，將該沉淀物經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50'C減壓干燥后碾成粉末，即為玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分，記作YPF-P;釆用苯酚硫酸法測得該YPF-P中的多糖含量為88%。下面用YPF-P的藥理試驗(yàn)及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。YPF-P對肝損傷的防治作用試驗(yàn)如下(一)材料動物昆明種小鼠，雄性，體重20土2g,由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供(合格證號皖醫(yī)實(shí)動準(zhǔn)第02號)。主要藥物和試劑原藥材內(nèi)蒙黃芪、吉林防風(fēng)、安徽炒白術(shù)均購自合肥和義堂中藥飲片有限責(zé)任公司，YPF-P(自制，多糖含量為88%),聯(lián)苯雙酯滴丸(北京協(xié)和藥廠產(chǎn)品，批號06040202),四氯化碳(汕頭巿西隴化工廠，批號060707),D-氨基半乳糖、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶試劑盒(Sigma公司產(chǎn)品，批號085kl321、v-4651),卡介苗(上海生物制品研究所產(chǎn)品，批號(M049701),脂多糖試劑盒(Sigma公司產(chǎn)品，批號L2880),AST、ALT測定試劑盒(上海榮盛生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,批號20070304、20070401)，MDA、NO、SOD、GSH測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號A003-2、A012、A001-l、A006)，甲醛、無水乙醇(上?；瘜W(xué)試劑有限公司，批號200602152、200610206)，冰醋酸(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20050928),羊抗鼠TNF-a單克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗羊或兔羊抗兔二抗(SantaCruzBiotechnology產(chǎn)品，批號sc-3092、sc-2445),Trizol試劑(Invitrogen公司產(chǎn)品，批號1121068)，PCR試劑盒(深圳巿匹基生物工程股份有限公司生產(chǎn)，批號20050901),瓊脂糖(西班牙進(jìn)口分裝，批號BI00821),2000bpDNAmarker(TaKaRa公司產(chǎn)品，批號B4601A)、反轉(zhuǎn)錄酶SuperscriptIIRT(Promega公司產(chǎn)品，批號242806)、溴化乙錠(Sigma公司產(chǎn)品，批號E8751)、甘油(蚌埠化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號031026),氯仿、鹽酸(分析純)(上海建信化工有限公司試劑廠產(chǎn)，批號041205、041221)，異丙醇(分析純)(安徽淮南巿化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號041101)。主要儀器Tsl4-2型光學(xué)讀數(shù)天平(湘儀天平儀器廠產(chǎn)品)，BP211D電子天平(德國Saftarius生產(chǎn))，電子顯微鏡XDS-IB(重慶光電儀器總公司產(chǎn)品)，KQ-500DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器(昆山巿超聲儀器有限公司)，DL-5M低速冷凍離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司產(chǎn)品)，TGL-16H高速離心機(jī)(珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品)，722S分光光度儀(上海精密科學(xué)儀器公司產(chǎn)品)，GSY-8電熱恒溫水浴鍋(北京醫(yī)療設(shè)備廠意成公司產(chǎn)品)，MDF-38^三洋低溫冰箱(日本三洋集團(tuán)產(chǎn)品)，XW-80A旋渦振蕩器(上海精科實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn))，SZ-2自動雙重純水蒸餾器(上海滬西分析儀器廠有限公司)，基因擴(kuò)增儀(Hema8000珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司)，紫外透射儀(珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司)，紫外凝膠成像系統(tǒng)BioSensSC720型(上海生物技術(shù)有限公司)。(二)方法1.四氯化碳(CC14)誘導(dǎo)小鼠急性化學(xué)性肝損傷模型制備、分組及標(biāo)本采取昆明種小鼠，雄性，體重20土2g,隨機(jī)分為正常組，模型組，YPF-P50mg.kg—'劑量組、lOOmgkg—'劑量組、200mg.kg—'劑量組和聯(lián)苯雙酯(Bifendatepi11，BDP)對照組，BDP劑量為200mgkg—',每組10只。給藥前將YPF-P、BDP按相應(yīng)劑量以生理鹽水配成溶液，灌胃給藥，正常組和模型組予以生理鹽水，每日l次，連續(xù)7天。末次給藥后除正常組小鼠腹腔注射相應(yīng)量生理鹽水外，其余各組小鼠一次性腹腔注射0.ly。CCl4花生油溶液10ml.kg—'。禁食不禁飲16h后，摘除小鼠眼球收集血液，在轉(zhuǎn)速3000rpm下離心10min,分離出血清，檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、一氧化氮(NO)含量；取出肝臟稱重；取肝左葉約lcmxlcm大小的肝組織，置于10%甲醛溶液，留待病理組織學(xué)檢查，并在肝臟相同部位取O.5g組織，用冷生理鹽水常規(guī)制備ioy。肝勾漿用于測量超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量。2.D-氨基半乳糖(D-Gal)誘導(dǎo)小鼠急性化學(xué)性肝損傷模型制備、分組及標(biāo)本采取實(shí)驗(yàn)動物條件及分組同上。給藥方法同上，連續(xù)7天。末次給藥后，除正常組小鼠腹腔注射相應(yīng)量生理鹽水外，其余各組小鼠一次性腹腔注射D-Gal800mgkg—'。禁食不禁飲16h后，標(biāo)本釆取方法同上。3.卡介苗(BCG)聯(lián)合脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠免疫性肝損傷模型制備、分組及標(biāo)本采取實(shí)驗(yàn)動物條件及分組同上。給藥組用生理鹽水配成溶液，按體重灌胃給藥，模型組和正常組予以相應(yīng)體積的生理鹽水，灌胃給藥，每曰l次，連續(xù)10天。在給藥第一天，除正常組外，其余各組尾靜脈注射BCG2.5tng/0.2mg/只，在第10天灌胃給藥后，尾靜脈注射LPS7.5pg/0.2ml/只，之后禁食不禁飲16h,摘除小鼠眼球收集血液，在轉(zhuǎn)速3000rpm下離心10min,分離出血清，檢測血清中ALT、AST含量；取出肝、脾分別稱重；取肝左葉約lcmxlcm肝組織，置于10/。甲醛溶液，留待病理組織學(xué)檢査；另在肝臟相同部位稱取0.5g肝組織，在冰洛中加入4.5ml生理鹽水用勻漿機(jī)制備成10°/肝勻漿，轉(zhuǎn)速2500rpm下離心10min后，取上清液置-75'C冰箱保存待檢。4.測定方法肝脾指數(shù)小鼠稱重后處死，取出肝脾，用濾紙吸干表面水分和血跡，稱重，計(jì)算公式如下臟器指數(shù)-臟器的重量/體重x100。/。血清生化指標(biāo)測定按試劑盒所述方法測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)。肝臟生化指標(biāo)及細(xì)胞因子的測定按試劑盒所述方法測定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)含量，免疫組化法測定勻漿中腫瘤壞死因子-oc(TNF-oc)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)含量，RT-PCR方法測定TNF-amRNA。肝臟組織病理學(xué)檢查肝臟組織以10y。甲醛溶液固定，石蠟包埋切片進(jìn)行常規(guī)HE染色，觀察各組小鼠肝組織病理學(xué)改變。(三)結(jié)果1.YPF-P對CCh誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠的影響1.1YPF-P對CCh誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝指數(shù)、ALT、AST的影響表1給出了YPF-P對CCL誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)的影響。如表1所示，與模型組比較，YPF-P200mgkg—'劑量組和BDP組可顯著降低小鼠肝臟指數(shù)。表1.YPF-P對CC1,誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)的影響(；±s,n=10)組別劑量(mg■kg—1)肝指數(shù)(W正常組—4.10±0.12模型組—4.95±0.63*YPF-P504.66±0.401004.56±0.262004.46±0.30'BDP2004.43±0.35'P<0.01，與正常組比較；'P<0.05,與模型組比較表2給出了YPF-P對CC1J秀導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠血清ALT、AST影響。如表2所示，與模型組比較，YPF-P各劑量組均可降低急性化學(xué)性肝損傷小鼠血清ALT、AST水平，200mgkg'劑量組差異有顯著性，表明其具有穩(wěn)定肝細(xì)胞膜和線粒體膜的作用。表2.<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>P<0.01,與正常組比較;.P<0.05，'.P<0.01,與模型組比較1.3YPF-P對CCh誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟組織病理學(xué)變化的影響(HE染色，x200)圖1為CC1J秀導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝臟組織病理圖，圖中可見肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索、肝血竇以中央靜脈為中心呈放射狀排列；圖2為cci4誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷模型組小鼠肝臟組織病理圖，圖中可見肝小葉正常結(jié)構(gòu)消失，匯管區(qū)周圍肝細(xì)胞呈大片狀壞死，伴大量炎性細(xì)胞浸潤；圖3、圖4、圖5分別為YPF-P50mgAg—'、100mg'kg—'、200mg'kg-'劑量組對CCh誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟組織病理學(xué)變化的影響圖，圖中表現(xiàn)為隨YPF-P劑量增大，肝細(xì)胞變性、壞死程度逐漸減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少；圖6為BDP對照組對CC1J秀導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟組織病理學(xué)變化的影響圖，圖中病理表現(xiàn)與YPF-P200mgkg—'劑量組相似。2.YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠的影響2.1YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝指數(shù)、ALT、AST的影響表4給出了YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝指數(shù)的影響。如表4所示，與模型組相比，YPF-P各劑量組隨劑量增大，小鼠肝指數(shù)逐漸降低，YPF-P200mg4g4劑量組和BDP對照組具顯著性差異。表4.YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝指數(shù)的影響(S±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*P<0.Ol,與正常組比較；'P<0.05,與模型組比較表5給出了\TF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠血清ALT、AST影響。如表5所示，與模型組相比，YPF-P200rag.kg—'劑量組和BDP對照組小鼠血清ALT、AST水平顯著降低。表5.YPF—P對D—Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠血清ALT、AST影響(;±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>#P<0.01，與正常組比較;'P<0.05，'P<0.01，與模型組比較2.2YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠MDA、SOD、GSH的影響表6給出了YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝勻漿MDA、SOD、GSH影響。如表6所示，與模型組比較，YPF-P各治療組隨劑量的增加，肝勻漿中MDA濃度逐漸降低，SOD和GSH的活性逐漸增高。其中，YPF-PIOO、200mg.kg—'劑量組和BDP對照組差異有顯著性。表6.YPF-P對D—Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝勻漿MDA、SOD、GSH影響(;±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>BDP20014.33士7.09'51.03土6.81一36.83±3.17'''P<0.01,與正常組比較；'P<0.05,<().01,與模型組比較2.3YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝組織病理組織學(xué)變化的影響(HE染色，x200)圖7為D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝臟組織病理圖，圖中表現(xiàn)為肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝細(xì)胞索、肝血竇排列規(guī)則，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，未見肝細(xì)胞變性、壞死等病理變化；圖8為模型組，表現(xiàn)為肝細(xì)胞混濁腫脹，細(xì)胞質(zhì)疏松，肝小葉間界限不清，肝細(xì)胞有點(diǎn)狀壞死和灶性壞死，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤明顯；圖9為YPF-P50mgkg—'劑量組，表現(xiàn)為肝細(xì)胞變性、壞死和炎性細(xì)胞浸潤顯著；圖10、圖11、圖12分別為YPF-PlOOmg.kg'、200mg.kg—'劑量組和BDP對照組對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝組織病理組織學(xué)變化的影響圖，圖中表現(xiàn)為肝細(xì)胞變性、壞死程度顯著減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少，肝組織損傷病理改變明顯減輕。表7.YPF-P對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝組織病理分級(n=5)劑量肝組織病理分級組別，，、-(mgkg)0iumIV正常組-1010000模型組"—00262YPF-P500035210001441200'0320BDP200'01531P<0.01，與正常組比較；'P<0.05，與模型組比較3.YPF-P對BLG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷小鼠的影響3.1YPF-P對BLG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷小鼠肝脾指數(shù)、ALT、AST的影響表8給出了YPF-P對BLG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)免疫性肝損傷小鼠肝脾指數(shù)的影響。如表8所示，YPF-P各治療組均能降低免疫性肝損傷小鼠的肝、脾指數(shù)，與模型組相比，中、高劑量組差異有顯著性。表8YPF-P對BLG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)免疫性肝損傷小鼠肝脾指數(shù)的影響G±s，n=10)H劑量(mg'kg—1)~~脾指數(shù)(W肝指數(shù)(W正常組—0.46±0.125.45±0.76模型組—1.08±0.27*7.15±0.78*YPF-P500.91±0.246.74±0.681000.81±0.14'6.41±0.65'2000.69±0.13''6.21±0.65"BDP2000.63±0.24"5.97±0.72''*P<0.01，與正常組比較；'P<0.05,**P<0.01，與模型組比較表9給出了YPF-P對BLG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)免疫性肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響。如表9所示，在8〔0+LPS誘導(dǎo)小鼠發(fā)生免疫性損傷中，模型組血漿水平明顯升高；各治療組在造模期間預(yù)防給藥，YPF-P50、100、200mg'kg-劑量組'和BDP對照組均能降低血漿中升高的ALT、AST水平，以YPF-PIOO、200mg'kg—'劑量組和BDP組作用最顯著。表9YPF-P對BLG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)免疫性肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響G±s，n=10)組別劑量(mg.kg—')ALTAST正常組-復(fù)28±8.3650.00±12.67模型組一81.68±6.72**118.37±32.30"YPF-P5077.35±4.4698.05±18.7410073.21±9.68'91.10±20.66'20060.04±6.84"80.16±13.58"BDP20054.14±10.01"78.24±11.61"P<0.01，與正常組比較；.P<0.05，**P<0.01,與模型組比較3.2YPF-P對急性免疫性肝損傷小鼠肝勻漿SOD、MDA、NO水平的影響表10給出了\TF-P對免疫性肝損傷小鼠肝勻漿SOD、MM、NO水平的影響。如表10所示，模型組肝勻漿SOD水平降低，同時(shí)MDA、NO水平升高，YPF-P各劑量組及BDP對照組均能升高降低的SOD水平，并降低升高的MDA、NO水平,以YPF-PIOO、200mg'kg—'劑量組效果明顯。表IOYPF-P對免疫性肝損傷小鼠肝勻漿SOD、MDA、NO水平的影響G±s,n=10)組別劑量(mgkg')SOD(Umg—'pro)MDA(nmol'mg-'pro)NO((a咖lg—'pro)正常組—51.07±3.502.76±1.081.77±0.35模型組一21.05±7.95*8,55±3.06#3.96±0.95YPF-P5027.83±7.097.15±1.413.75±0.7010035.53±8.02'6.27±0.72'3.11±0.36.20039.49±8.40''4.30±0.73''2.76±0.54''BDP20041.33±8.19''3.95±0.67''2.81±0.68.'#P<0.01,與正常組比較；'P<0.05,**P<0.01,與模型組比較3.3YPF-P對急性免疫性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響(服染色，x200)圖13為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝臟組織病理圖，圖中表現(xiàn)為肝組織結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索圍繞中央靜脈呈放射狀整齊排列，匯管區(qū)無炎細(xì)胞浸潤；圖14為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷模型組小鼠肝臟組織病理圖，圖中表現(xiàn)為肝組織細(xì)胞腫脹明顯，并見大量點(diǎn)狀壞死灶，肝實(shí)質(zhì)及匯管區(qū)周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤；圖15、圖16、圖17分別為YPF-P50mg-kg—'、IOO郵.kg一'、200mg'kg—'劑量組對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝組織病理組織學(xué)變化的影響圖，圖中表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹及壞死程度較模型組輕，且隨給藥劑量的增加，組織損傷恢復(fù)程度愈明顯；圖18為BDP對照組對D-Gal誘導(dǎo)急性化學(xué)性肝損傷小鼠肝組織病理組織學(xué)變化的影響圖，圖中顯示病理變化及程度與YPF-P200mgkg—'劑量組相似。3.4YPF-P對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-ot、iNOS表達(dá)的影響(SP染色x200)圖19-圖24、圖25-圖30分別為TNF-ct、iNOS表達(dá)的免疫組化染色結(jié)果圖。圖19、困25分別為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷實(shí)驗(yàn)正常組小鼠肝組織TNF-a、iNOS表達(dá)圖，圖中表現(xiàn)為小鼠肝組織TNF-a、iNOS均呈輕度表達(dá)；圖20、圖26分別為卡介苗聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷模型組小鼠肝組織TNF-a、iNOS表達(dá)圖，圖中表現(xiàn)為小鼠肝組織TNF-a、iNOS表達(dá)顯著增強(qiáng)，表現(xiàn)在細(xì)胞胞質(zhì)、細(xì)胞核中出現(xiàn)明顯的黃色或棕黃色顆粒；圖21、22、23和圖27、28、29分別依次為YPF-P50mg'kg_'、100mg'kg_'、200mg'kg—'劑量組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-a、iNOS表達(dá)的影響圖，圖中表現(xiàn)為隨給藥量增加，TNF-a、iNOS表達(dá)逐漸減弱；圖24、圖30為為聯(lián)苯雙酯對照組對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-a、iNOS表達(dá)的影響圖，圖中表現(xiàn)與YPF-P200mgkg—'劑量組相似。表11為YPF-P對小鼠免疫性肝損傷模型iNOS、TNF-cc表達(dá)的影響免疫組化圖像分析結(jié)果。表11數(shù)YPF-P(YPF-P)對小鼠免疫性肝損傷模型iNOS、<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>'P<0.01，與正常組比較；'P<0.05，**P<0.01，與模型組比較3.5對急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-amRNA表達(dá)的影響RT-PCR檢測肝組織中TNF-amRNA表達(dá)水平的變化，結(jié)果見圖31和圖32。圖31為YPF-P影響急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-ocmRNA表達(dá)的凝膠電泳圖，與正常組相比，模型組表達(dá)明顯增強(qiáng)，YPF-P各治療組與模型組相比表達(dá)有減弱趨勢，且呈劑量依賴性。BDP對照組表達(dá)與YPF-P200mg'kg—'劑量組相似。圖32為YPF-P影響急性免疫性肝損傷小鼠肝組織TNF-ccmRNA表達(dá)的凝膠電泳半定量統(tǒng)計(jì)圖。4.結(jié)果有上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，YPF-P200mgkg—'劑量組能顯著降低急性化學(xué)性肝損傷小鼠的肝指數(shù)，降低血清中升高的丙ALT、AST水平;YPF-PIOO、200mgkg—'劑量組可顯著降低小鼠肝勻漿中升高的MDA含量，提高肝勻漿中SOD、GSH的活性，由此證明YPF-P對化學(xué)性肝損傷具有防治作用。YPF-PIOO、200mgkg—'劑量組能顯著降低急性免疫性肝損傷小鼠的肝臟、脾臟指數(shù)，降低升高的血清ALT、AST水平及肝勻漿中MDA、NO含量，提高肝勻漿中SOD的活性，顯著降低iNOS、TNF-a及其mRM在肝組織中的表達(dá)，由此證明YPF-P對免疫性肝損傷具有顯著防治作用。下面在其他條件不變的情況下，將黃芪、炒白術(shù)和防風(fēng)的質(zhì)量份數(shù)比例調(diào)整為1:1:1、1:2:1、1:1:3、2:2:1、1:3:1、1.5:2:1、2:1.5:1、2:1:1和4:4:1，分別制取得到Y(jié)PF-P。然后采用如上述同樣的藥理實(shí)驗(yàn)方法對分別制取得到的各YPF-P進(jìn)行小鼠肝損傷防治作用的試驗(yàn)，得到的結(jié)果證明:.上述將黃芪、炒白術(shù)和防風(fēng)質(zhì)量份數(shù)比例調(diào)整后分別制取得到的各YPF-P對小鼠肝損傷都具有類似的防治作用。由此證胡，按質(zhì)量份數(shù)將黃芪l-4:白術(shù)1-4:防風(fēng)1-3配制而成的玉屏風(fēng)散都可采用上述試驗(yàn)方法提取出玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分YPF-P干粉用作防治肝損傷的藥物。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，將每克玉屏風(fēng)散于15毫升、30毫升水中加熱，制得的YPF-P在多糖得率和含量方面與按實(shí)施例搡作所得的YPF-P大致相同；但是經(jīng)防治小鼠肝損傷藥理實(shí)驗(yàn)證明，該YPF-P同樣具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)浸泡時(shí)間為O.5h、10h時(shí)，制得的YPF-P與按實(shí)施例操作所得的YPF-P大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，該YPF-P同樣具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)加熱方式為超聲波加熱時(shí)，制得的YPF-P比按實(shí)施例搡作所得的YPF-P得率要低；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，該YPF-P同樣具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)加熱溫度為50'C時(shí)，制得的YPF-P得率較低，IO(TC時(shí)得率與95'C時(shí)大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，該YPF-P同樣具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)加熱時(shí)間為lh時(shí)，制得的YPF-P得率較低，6h時(shí)得率較高；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，加熱時(shí)間為lh制得的YPF-P具有相似的防治肝損傷作用；加熱時(shí)間為6h制得的YPF-P亦具有防治肝損傷作用，但是療效略差些。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)提取次數(shù)為l次、3次時(shí)，制得的YPF-P在多糖得率和含量方面與按實(shí)施例操作所得的YPF-P大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)提取液濃縮至原體積的1/7、1/10時(shí)，制得的YPF-P在多糖得率和含量方面與按實(shí)施例搡作所得的YPF-P大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)以正己烷、乙酸乙酯作萃取劑時(shí)，制得的YPF-P在多糖得率和含量方面與按實(shí)施例操作所得的YPF-P大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)萃取次數(shù)為l次、3次時(shí)，制得的YPF-P在多糖得率和含量方面與按實(shí)施例操作所得的YPF-P大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)混合有機(jī)溶液與萃取液的體積比為1:2、2:1時(shí)，制得的YPF-P在多糖得率和含量方面與按實(shí)施例操作所得的YPF-P大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)振蕩時(shí)間為10秒時(shí)，靜置的時(shí)間要短，而當(dāng)振蕩時(shí)間為30秒時(shí)，靜置的時(shí)間要長，制得的YPF-P在多糖得率和含量方面與按實(shí)施例操作所得的YPF-P大致相同；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)反復(fù)操作次數(shù)為3次時(shí)，制得的YPF-P含量較低，15次時(shí)制得的YPF-P含量較高；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。在實(shí)施例中其他條件不變的情況下，當(dāng)干燥方式為水浴干燥時(shí)，制得的YPF-P較難再溶解，冷凍干燥和噴霧干燥制得的YPF-P很易再溶解，且外觀及性狀更好；經(jīng)上述同樣藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有相似的防治肝損傷作用。將YPF-P干粉在臨床上作為防治肝損傷藥使用時(shí)，臨用前將YPF-P干粉以生理鹽水、葡萄糖氯化鈉溶液、去離子水或蒸餾水溶解后口服，臨床劑量以干粉量表示為0.9-1.8g/曰，分2次口服，療程至少一周，具有顯著地防治肝損傷作用。.將YPF-P干粉入潤濕劑、潤滑劑、稀釋劑、粘合劑和/或著色劑等各種輔料制成口服液、顆粒劑、片劑、膠囊劑，劑量以YPF-P干粉量表示為0.9-1.8g/日，分2次口服，療程至少一周，同樣具有防治肝損傷作用。權(quán)利要求1、一種中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，其特征在于按質(zhì)量份數(shù)將黃芪1-4白術(shù)1-4防風(fēng)1-3配制而成的玉屏風(fēng)散，按每克該玉屏風(fēng)散與10-30毫升的水相混和，浸泡0.5-10h，加熱至50-100℃后在此溫度下保溫1-6h，進(jìn)行固液分離，將分離出的提取液濃縮至原體積的1/5-1/10；以低極性有機(jī)溶劑萃取濃縮后的提取液，保留下層萃取液；按體積比5:1將氯仿與正丁醇配制成混合有機(jī)溶劑，將此混合有機(jī)溶劑與該下層萃取液按體積比1:2-2:1混合，振蕩后靜置至分層，除去中間層；將上層萃取液與下層有機(jī)溶劑混合，再振蕩后靜置至分層，除去中間層；按上述過程反復(fù)操作3-15次，保留最后得到的上層萃取液；將該上層萃取液以乙醇調(diào)配至乙醇濃度為30％，靜置后棄去沉淀；將所得上清液再以乙醇調(diào)配至乙醇濃度為50％，靜置后分離出沉淀物，干燥后碾成粉末，即為玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分；將其用作防治肝損傷藥物，臨床劑量以干粉量表示為0.9-1.8g/日，療程至少一周。2、如權(quán)利要求1所述中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，特征在于將所述固液分離后得到的殘?jiān)M(jìn)行多次提取，合并各次得到的提取液，再將合并后的提取液濃縮至原體積的1/5-1/10。3、如權(quán)利要求1所述中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，特征在于所述以低極性有機(jī)溶劑萃取濃縮后的提取液，再以低極性有機(jī)溶劑進(jìn)行多次萃取后，保留最后得到的下層萃取液。4、如權(quán)利要求1所述中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，特征在于所述低極性有機(jī)溶劑選用石油醚、正己烷或乙酸乙酯。5、如權(quán)利要求1所述中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，特征在于所述干燥選用減壓干燥、水洛干燥、冷凍干燥或噴霧干燥。6、如權(quán)利要求1所述中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，特征在于臨用前將0.9-1.8g/日劑量的玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分干粉以適當(dāng)溶劑溶解后分2次口服；所述適當(dāng)溶劑為生理鹽水、葡萄糖氯化鈉溶液、去離子水或蒸餾水。7、如權(quán)利要求1所述中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的使用方法，特征在于臨用前將玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分在有效量0.9-1.8g/日的基礎(chǔ)上添加輔料制成的口服劑型，包括口服液、顆粒劑、片劑或膠囊；所述輔料包括潤濕劑、潤滑劑、稀釋劑、粘合劑和/或著色劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種中藥玉屏風(fēng)散作為防治肝損傷藥物的用途，特征是按質(zhì)量份數(shù)將黃芪1-4∶白術(shù)1-4∶防風(fēng)1-3配成的玉屏風(fēng)散，在50-100℃用水浸泡，濃縮提取液，萃取除去脂類雜質(zhì)后的下層萃取液，與體積比5∶1的氯仿和正丁醇混合，振蕩靜置分層除去中間層，再將上層萃取液與下層溶劑混合，振蕩靜置分層除去中間層，反復(fù)操作后得到的上層萃取液調(diào)配至乙醇濃度30％，靜置后棄去沉淀；所得上清液調(diào)配至乙醇濃度50％，靜置分離出的沉淀物即為玉屏風(fēng)散多糖類藥效成分，可用作防治肝損傷藥物，臨床劑量以干粉量表示為0.9-1.8g/日，療程至少一周。本發(fā)明為玉屏風(fēng)散及其多糖類藥效成分的進(jìn)一步深入研究奠定了基礎(chǔ)。文檔編號A61K36/481GK101411743SQ20081018220公開日2009年4月22日申請日期2008年11月15日優(yōu)先權(quán)日2007年11月16日發(fā)明者呂雄文,俊李,王佳佳,石靜波,程文明,涌金,陳飛虎申請人:安徽醫(yī)科大學(xué)