專利名稱：2-吲唑-4-氮雜吲哚-5-氨基衍生物及制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬有機(jī)化合物的合成，涉及2-吲唑-4-氮雜吲哚-5-氨基衍生物，尤 其涉及在^5取代的2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-氨基衍生物和制備 方法，以及在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
CDK7作為CDKs家族的重要成員，在細(xì)胞周期過程中發(fā)揮重要的作用， 是一個(gè)新型的抗腫瘤靶點(diǎn)。CDK7主要通過2種方式調(diào)節(jié)細(xì)胞周期a、 CDK7-CyclinH或CDK7-CyclinH-MATl復(fù)合物被磷酸化后，可使CDK1、 2、 4和6活性區(qū)域的蘇氨酸殘基被磷酸化，從而激活它們的活性，主導(dǎo)細(xì)胞周期 的啟動(dòng)、進(jìn)行和結(jié)朿；b、磷酸化的CDK7-CyclinH-MATl復(fù)合物能磷酸化RNA 聚合酶II的C端區(qū)域的大亞基，從而促使啟動(dòng)子的清除，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的開始。 因此，抑制CDK7活性區(qū)域的磷酸化，就能抑制其在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中的雙重作 用，從而阻斷CDK1、 2、 4和6在細(xì)胞周期中的主導(dǎo)作用，影響轉(zhuǎn)錄過程，達(dá) 到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。
2006年Mark等人首先發(fā)現(xiàn)吲哚-吲唑類衍生物具有CDK7的抑制作用， 其中3-(5-(嗎啉基甲基)-1//-吲哚-2-基)-1//-吲唑-6-腈基的活性較高，其ICso值 僅為llnM。該文所提供的吲哚-吲唑衍生物的結(jié)構(gòu)主要是在吲哚環(huán)的7VM立引 入不同的取代基，并且在吲唑環(huán)的6-位引入不同的雜環(huán)以及酰胺結(jié)構(gòu)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類結(jié)構(gòu)新穎未見文獻(xiàn)報(bào)道的2-吲唑-4-氮雜B引哚-5-氨基衍生物，具體是A^取代的2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3，2七]吡啶-5-氨基衍 生物，在其V位引入不同的取代基，合成了一系列的^5取代的2-(1//-吲唑-3-基)-l/Z-吡咯[3,2-b]吡啶-5-氨基衍生物。
本發(fā)明提供的iV5取代的2-(l/7-吲唑-3-基)-li7-吡咯[3,2-b]吡啶-5-氨基衍生 物結(jié)構(gòu)通式如下
4<formula>formula see original document page 5</formula>
其中
X為氫原子、羰基、砜基、亞砜基； L為氮原子、氧原子、Q) C3的垸基鏈；
W為d C3的直鏈或支鏈烷基、C4 C7的環(huán)烷烴、苯環(huán)、芳雜環(huán)，其中 苯環(huán)可為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán)，芳雜環(huán)為噻吩、吡啶、呋
喃、吡咯；
單取代苯環(huán)上的取代基為氟原子、氯原子、溴原子、甲氧基、甲基、硝基、
羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、Q Q的烷基直鏈或支鏈、d C3的直鏈或支
鏈烷氧基；
二取代苯環(huán)上的取代基為3， 4-二甲氧基、2， 4-二甲氧基、2， 5-二甲氧 基、3-硝基-4-甲氧基、3-氨基-4-甲氧基、3， 4-二氟； 三取代苯環(huán)上的取代基為3， 4， 5-三甲氧基；
W為氫、鹵素、腈基、含Q C3的?；?、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、 二甲胺基；
R3為d C3的垸基鏈。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供W5取代的2-(1//-卩引唑-3-基)-liZ-吡咯[3,2-b]吡
啶-5-氨基衍生物的制備方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn):<formula>formula see original document page 5</formula>
(1)化合物2可以由2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-5-硝基吡啶(化合物l)在堿性條件下與鹵代烴經(jīng)烷基化反應(yīng)得到，反應(yīng)一般在極性溶劑如二甲基甲酰 胺、二甲基乙酰胺、二甲基亞砜中進(jìn)行，常用的堿性物質(zhì)有氫氧化鈉、氫氧化
鉀、氫化鈉、氫化鉀，反應(yīng)溫度為-10 5'C，反應(yīng)時(shí)間為5~6小時(shí)，得到的 產(chǎn)品可以通過重結(jié)晶純化。
(2) 化合物3由化合物2通過縮合反應(yīng)得到，反應(yīng)一般在極性溶劑如二甲 基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亞砜中進(jìn)行，反應(yīng)溫度一般為60 120°C， 反應(yīng)時(shí)間為12~14小時(shí)，得到的產(chǎn)品可以直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
(3) 化合物4可由化合物3在還原劑存在下通過還原環(huán)合反應(yīng)得到，反應(yīng) 一般在質(zhì)子性溶劑如甲醇、乙醇、甲醇/水、乙醇/水中進(jìn)行，所用還原劑可為 氯化亞錫、還原鐵粉、鈀/碳，通常在室溫下反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為8 10小時(shí)，得 到的產(chǎn)品可以通過重結(jié)晶純化。
(4) 化合物5可由化合物4通過叔丁氧羰基保護(hù)得到，反應(yīng)一般以四氫呋 喃、二氯甲垸為溶劑，通常在室溫下反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為1 3小時(shí)，得到的產(chǎn)品 可以通過重結(jié)晶純化。
(5) 化合物6 (5-位取代的2-碘代4-氮雜吲哚)可由化合物5通過碘代反 應(yīng)得到，該反應(yīng)一般以四氫呋喃為溶劑，并需要強(qiáng)堿作用，常用的強(qiáng)堿有二異 丙胺鋰、叔丁基鋰、丁基鋰，反應(yīng)在-75 -8(TC條件下進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為12~14 小時(shí)，得到的化合物通過柱層析純化。
(6) 化合物8可由化合物6與化合物7在催化劑存在的條件下，通過Stille 偶聯(lián)得到，該反應(yīng)一般在甲苯、苯、二氧六環(huán)中進(jìn)行，催化劑為鈀試劑，反應(yīng) 溫度為95 10(TC，反應(yīng)時(shí)間為18 24h，得到的化合物可通過柱層析純化。
C7)化合物9可由化合物8在酸性條件脫掉叔丁氧羰基保護(hù)基團(tuán)得到，該 反應(yīng)一般在質(zhì)子性混合溶劑中進(jìn)行，如甲醇/水、乙醇/水等，常用的酸有濃鹽 酸、三氟乙酸等，反應(yīng)一般在室溫進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為1 5h，得到的化合物可 通過柱層析純化。
(8)目的化合物10可由化合物9在堿性條件下通過取代反應(yīng)可以得到，堿 性條件可以由氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、氫化鉀、三乙胺、二乙胺、吡 啶提供，反應(yīng)溫度為55 60'C，反應(yīng)時(shí)間為12 14h，得到的化合物可通過柱 層析純化。
化合物1和化合物7可參照文獻(xiàn)方法(Kelly， T. A. T^ra/z^/raw Le仗1994, 35, 9003-9006)合成得到。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是^5取代的2-(1/^-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-氨基衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。初步的藥理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)它們對(duì)HL60， KB, 7721， HCT-116, A549等多種腫瘤細(xì)胞株均有較好的體外抑制增殖作用， 對(duì)HL60作用尤為突出，IC5o值在0.80 6.80 pM之間，這些數(shù)據(jù)說明該類化 合物具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。
本發(fā)明的有益之處在于以具有活性的吲哚-吲唑類衍生物為先導(dǎo)化合物， 采用生物電子等排原理，以氮原子替代碳原子，得到2-(1//-吲唑-3-基)-17/-吡 咯[3,2-b]吡啶-5-氨基衍生物，再通過母核5-位的氨基引入不同的取代基，合成 了一類A^位取代的2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2-1)]吡啶-5-氨基衍生物。這是 一類結(jié)構(gòu)全新的化合物，初步的藥理活性篩選試驗(yàn)表明這些化合物均具有較好 的抗腫瘤活性，且部分化合物的選擇性較好。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。以下的實(shí)施例是說明本發(fā)明的，而不 是以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1、 2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-6-甲基-5-硝基吡啶2a (R3=-CH3):
將化合物l (14.3 g， 56.5mmol)溶于二甲基甲酰胺(170 ml)中，降溫 至-5。C左右，依次加入氫化鈉(3.1 g， 130.0 mmol)和碘甲烷(4.2 ml)， TLC 跟蹤反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減 壓回收溶劑，重結(jié)晶得到淡黃色固體9.5g，收率58%;熔點(diǎn)89-91°C。
& NMR( S ， DMSO-d6): 8.39(d, 1H， / = 9.2Hz), 7.84(d, 1H, / = 9.2Hz), 3.39(s, 3H), 2.73(s， 3H), 1.50(s, 9H)
實(shí)施例2、 (￡)-叔丁基-6-(2-(二甲氨基)乙烯基)-5-硝基吡啶-2-基(甲基)氨 基甲酸酯3a (R3=-CH3):
化合物2a (21.9 g， 81.8 mmol)溶于二甲基甲酰胺(278.0ml)，加入A^V-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(20.4 g， 171.4 mmol)， TLC跟蹤反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束， 減壓回收二甲基甲酰胺，得到紅色液體29.0g，收率95%。
!H NMR( S ， DMSO-d6): 8.6l(d， 1H, / = 1.6 Hz)， 8-12(d, 1H, / = 1.6 Hz), 7.02(d, 1H， J= 2.0 Hz), 5.58(d, 1H, /= 2.0 Hz)， 2.74(s， 3H), 2.47(s, 6H), 1.40(s, 9H)
實(shí)施例3、 5-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-l/Z-吡咯[3，2-b]吡啶4a (R3=-CH3): 將化合物3a (29 g, 87.3 mmol)溶于甲醇(150.0ml)中，加入鈀碳(13.0
g)，氫氣環(huán)境下反應(yīng)，TLC跟蹤反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，抽濾，濾液減壓回收溶劑，
重結(jié)晶得白色固體21.9g，收率40%;熔點(diǎn)151-153°C。力NMR( S , DMSO-d6): 11.30(s, 1H), 7.73(d， 1H, / = 8.8 Hz), 7.60(t, 1H， 《/ = 3.2 Hz, /= 5.6 Hz), 7.17(d, 1H，《7= 8.8 Hz), 3,27(s, 3H), 1.42(s，9H)
實(shí)施例4、 ^1-叔丁氧羰基-5-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-1//-吡咯[3，24)]吡啶 5a (R3=-CH3):
化合物4a (21.91 g, 88.7 mmol)溶于THF (427.2 ml)，加入4-二甲氨基 吡啶(1.08g,9.6mmo1)和叔丁氧羰基碳酸酐(23.88 g, 109 mmol),室溫反應(yīng) 30分鐘。減壓回收THF，重結(jié)晶得到白色固體22.19 g，收率77%;熔點(diǎn) 256-258 。C
'HNMR( S , CDC13): 8.26(s, IH), 7.77(s, IH)， 7.44(d， 1H， J= 8.8Hz), 6.67(d， IH, /= 3.6Hz), 3.41(s, 3H)， 1.65(s， 9H), 1.48(s, 9H)
實(shí)施例5、 A^叔丁氧羰基-5-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-2-碘-l仏吡咯[3，2-b] 吡啶6a (R3=-CH3):
化合物5a (6.6 g， 19.0 mmol)溶于四氫呋喃(60.0 ml)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，-78 。C反應(yīng)，緩緩滴加丁基鋰(9.2ml， 2.5mol/L)，反應(yīng)1 2小時(shí)，滴加碘的四氫 呋喃溶液(碘5.3g， 20.9 mmol溶于四氫呋喃40.0 ml)反應(yīng)1 2小時(shí)，TLC 跟蹤反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，加飽和亞硫酸鈉溶液，乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉洗滌， 無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，用洗脫劑(石油醚丙酮=15:1)進(jìn)行柱層 析，得到淡黃色液體5.42g，收率61%。
!H畫R( S , DMSO-d6): 8.19(d， IH, / = 8.8 Hz), 7.42(d， 1H， 《/ = 8,8 Hz), 3.28(s， 3H)， 1.66(s, 9H)， L43(s, 9H)
實(shí)施例6、 A^叔丁氧羰基-5-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-2-(l-(叔丁氧羰 基)-l/7-卩引唑-3-基)-l/f-卩比咯[3,2-b]吡啶8a (R2=H; R3=-CH3):
化合物6a (3.1 g， 6.2mmol)，化合物7a (R2=H) (2.8 g， 5.8 mmol),鈀 試劑(0.7 g， 0.5mmol)，甲苯(118.0 ml)加入反應(yīng)器，氮?dú)獗Ｗo(hù)，85。C反應(yīng)， TLC跟蹤反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥， 減壓回收溶劑，用洗脫劑(石油醚丙酮=15:1)進(jìn)行柱層析，得到淡黃色液 體3.35g，收率62%。
& NMR( S , DMSO-d6): 8.42(d, 1H, / = 7.2 Hz), 8.18(d, 1H， J = 6.4 Hz), 7.78(d, IH, / = 6.4 Hz), 7.67 (t， IH, J = 6.4 Hz， 《/ = 12.4 Hz), 7.64(d， 1H， / = 7,2 Hz), 7.43(t， IH, / = 6.4 Hz, / = 12.4 Hz), 7.20(s, IH), 3.35(s, IH), 1.66(s, 9H)， 1.47(s， 9H), L14(s, 9H)
實(shí)施例7、 2-(l/7-吲唑-3-基)-iV-甲基-l/f-吡咯[3，2-b]吡啶-5-氨基9a(R2=H;
8R3=-CH3):
化合物8a (1.6g,2.8mmo1)溶于乙醇(37.0 ml)，加入濃鹽酸(37.0 ml)， 室溫反應(yīng)，TLC跟蹤反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)譜H至中性，乙酸 乙酯萃取，飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，用洗脫劑(石 油醚乙醇=4:1)進(jìn)行柱層析，得到黃綠色固體0.3g，收率42%;熔點(diǎn)270 。C (dec)。
!H NMR( S ， DMSO-d6): 13.27(s， 1H), 11.25(s, 1H), 8.18(d， 1H, / = 8.4 Hz), 7.59(d, 1H， 《/ = 8.0 Hz), 7.46(d， 1H, / = 8.0 Hz), 7.42(t, IH, / = 7.2 Hz, / = 15.2 Hz), 7.23(t， 1H， J = 7.2 Hz, / = 15.2 Hz), 6.92(s, IH)， 6.35(d, IH, / = 8.4 Hz), 6.04(d, IH, 4.8 Hz), 2.81(s， 3H)
實(shí)施例8、 AH2-(l/f-吲唑-3-基)-l仏吡咯[3，2-b]吡啶-5-基)-7V-甲基苯甲酰胺
10a:
化合物9a (26.3m g， 0.1 mmol)，苯甲酰氯(13.5pl， 0.1 mmol)，吡啶(2.0 ml)加入反應(yīng)器，55 60'C反應(yīng)，TLC跟蹤反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，減壓回收吡啶，IN 氫氧化鈉調(diào)PH值至堿性，二氯甲烷萃取，飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥， 減壓回收溶劑，用洗脫劑(石油醚乙醇=8:1)進(jìn)行柱層析，得到淡黃色固體 36.0 mg，收率67%;熔點(diǎn)177畫180。C。
& NMR( S , DMSO-d6): D.51(s, IH), H.90(s， IH), 8.22(d, IH, / = 8,0 Hz)， 7.62(d, IH, J = 8.4 Hz)， 7.57(d, 1H， / = 8.8 Hz), 7.44(t, IH, / = 7.2 Hz), 7.23 7.29(m， 4H)， 7.17~7.21(m, 3H), 6.75(d， IH, /= 8.4 Hz), 3.48(s, 3H)
實(shí)施例9、 ^-(2-(1//』引唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-4-溴-^-甲基苯甲 酰胺10b:
操作過程同實(shí)例8，只是用對(duì)溴苯甲酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色固體， 收率38%;熔點(diǎn)272°C (dec)。
!H NMR( S , DMSO-d6): 13.61(s， 1H)， U.94(s, IH), 8.22(d, IH, / = 8.0 Hz), 7.63(d, 2H, / = 8.5 Hz), 7.46(t, 1H， 《/ = 7.0 Hz), 7.41(dd， 2H, / = 1.5 Hz, / = 6.5 Hz), 7.26(t, 1H， J = 7.0 Hz), 7.21(dd， 2H， / = 2.0 Hz, / = 7.0 Hz), 7.19(s, IH), 6.80(d, lH,h 10.5 Hz)， 3.47(s， IH)
實(shí)施例10、 ^-(2-(1//-卩引唑-3-基)-1界吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-叢甲基乙酰胺
10c
操作過程同實(shí)例8，只是用乙酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色固體，收率: 43%;熔點(diǎn)275°C (dec)。& NMR( S , DMSO-d6): 13.66(s， 1H), 12.02(s, 1H), 8.23(d, 1H, / = 8.4 Hz)， 7.84(d, 1H， 《/ = 8.4 Hz), 7.63(d, 1H， / = 8.4 Hz), 7.44(t， 1H， 《/ = 7.2 Hz), 7.26(t, 1H， J= 7.2 Hz), 7.24(s, 1H)， 7.13(d， lH,h 8.0 Hz), 3.25(s， 3H), 1.89(s, 3H)
實(shí)施例11、^-(2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3，2七]吡啶-5-基)-^-甲基特戊酰胺
10d
操作過程同實(shí)例8，只是用特戊酰氯代替苯甲酰氯，得到黃綠色固體，收 率77%;熔點(diǎn)260°C (dec)。
& NMR( S ， DMSO-d6): 13.67(s, IH)， 12.03(s， 1H), 8.23(d, 1H， / = 8.4 Hz)， 7.84(d, 1H, / = 8.0 Hz), 7.63(d, 1H， 《/ = 8.4 Hz), 7.44(t, 1H， 《/ = 7.6 Hz)， 7.25(t, 1H， /= 7.6 Hz)， 7.23(s, 1H), 7.11(d, IH,J二 8.0 Hz)， 3.16(s, 3H)， 0.96(s, 3H)
實(shí)施例12、 ^-(2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-4-甲氧基-叢甲 基苯甲酰胺10e
操作過程同實(shí)例8，只是用4-甲氧基苯甲酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色 固體，收率44%;熔點(diǎn)265°C (dec)。
& NMR( S ， DMSO-d6): 13.60(s, 1H), U.92(s， 1H), 8.22(d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.63(d, 1H， / = 8.4 Hz)， 7.60(d， 1H， 《/ = 8.8 Hz), 7.43(t， 1H， 《/ = 7.2 Hz)， 7.25(t, 1H， / = 7.2 Hz)， 7.24(s， IH)， 7.21(d, 2H, / = 2.8 Hz)， 6.71~6.75(m， 3H), 3.66(s, 3H)， 3.45(s, 3H)
實(shí)施例13、 ^-(2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3，2七]吡啶-5-基)-^-甲基-4-硝基 苯甲酰胺10f
操作過程同實(shí)例8，只是用4-硝基苯甲酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色固 體，收率26%;熔點(diǎn)231°C (dec)。
& NMR( S , DMSO-d6): 13.59(s, 1H)， H,94(s, IH)， 8.20(d, 1H， 《/ = 8.5 Hz)， 8.05(d， 1H, / = 8.5 Hz), 7.63(t, 2H， / = 8.0 Hz), 7.52(d, 2H， / = 9.0 Hz), 7.44(t, 1H: /= 7.0 Hz), 7.16(s， 1H), 6.91(d, 1H， J = 8.0 Hz)， 3.51(s， 3H)
實(shí)施例14、叢(2-(1界吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-4-氯-^甲基苯 甲酰胺10g
操作過程同實(shí)例8，只是用4-氯苯甲酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色固體， 收率27°/。；熔點(diǎn)260-262°C。
& NMR( S ， DMSO-d6): 13.60(s, IH)， U.94(s, 1H), 8.22(d, 1H, / = 7.6 Hz)， 7.62(dd, 2H, / = 2.8 Hz, / = 8.0 Hz), 7.43(t， 1H， / = 7.2 Hz), 7,25~7.28(m, 5H), 7.19(s， IH)， 6.79(d, 1H, /= 8.4 Hz)， 3.47(s， 3H)實(shí)施例15、^-(2-(1//-吲唑-3-基)-1界吡咯[3，2七]吡啶-5-基)-2,5-二甲氧基-^-甲基苯磺酰胺10h
操作過程同實(shí)例8，只是用2,5-二甲氧基苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到黃
綠色固體，收率30%;熔點(diǎn)90-92°C 。
&畫R( S , DMSO-d6): 13.47(s, 1H), 11.86(s, 1H)， 8.22(d, 1H， 《/= 8.0Hz), 7.73(d, 1H, /= 8.4)， 7.61(d, 1H, /= 8.0Hz), 7.42(t， 1H， 《/=7.2 Hz)， 7.32(d, 1H, = 2.8 Hz), 7.23(t, 1H， / = 7,2 Hz)， 7.22(d， 1H, / = 8.8 Hz), 7.17(s， 1H), 7.15(d， 1H, / =2.8 Hz), 7.07(d， 1H, /= 9.2 Hz), 3.74(s， 3H)， 3.48(s, 3H), 3.37(s, 3H)
實(shí)施例16、 ^-(2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-2，4-二甲氧基-TV-甲基苯磺酰胺10i
操作過程同實(shí)例8，只是用2,4-二甲氧基苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到黃
綠色固體，收率60%;熔點(diǎn)81-83°C。
& NMR( S ， DMSO-d6): 13.46(s, 1H), 11.82(s, 1H), 8.22(d, 1H, / = 8.4 Hz), 7.69(t， 2H， 《/ = 8.4 Hz), 7.6l(d， 1H， 《/ = 8.4 Hz), 7.42(t, 1H， / = 7.2 Hz), 7.23 7.26(m, 2H)， 7.17(d, 1H, / = 1.2 Hz), 6.58~6.63(m, 2H), 3.80(s, 3H), 3.47(s, 3H), 3.32(s, 3H)
實(shí)施例17、 AK2-(l/Z-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2-b]吡啶-5-基)-4-溴-iV-甲基苯 磺酰胺10j
操作過程同實(shí)例8，只是用4-溴苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到黃綠色固體，
收率42%;熔點(diǎn)80-82。C。
iH NMR( S ， DMSO-d6): 13.58(s, 1H), 12.03(s, 1H), 8.22(d, 1H,= 8.0 Hz), 7.84(d， 1H, / = 8.8 Hz)， 7.76 (d, 2H, / = 8.8 Hz), 7.62(d, 1H， 《/ = 8.4 Hz), 7.48(d, 2H, / = 8.8 Hz)， 7.43(t, 1H， / = 8.0 Hz), 7.28(d， 1H， 《/ = 8.4 Hz), 7.23(t， 1H， / = 8.0Hz), 7.19(s， 1H)
實(shí)施例18、 ^-(2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-3-甲氧基-^-甲 基苯甲酰胺10k
操作過程同實(shí)例8，只是用3-甲氧基苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色 固體，收率45%;熔點(diǎn)152-154°C。
丄H NMR( S ， DMSO-d6): 13.57(s， 1H), 11.90(s, 1H)， 7.23(d, 1H, / = 8.0 Hz), 7.63(d, 1H, / = 8.5 Hz)， 7.60 (d， 1H, / = 8.5 Hz), 7,45(t, 1H, / = 7.5 Hz)， 7.26(t， 1H, / = 7.5 Hz)， 7.21(s, 1H)， 7.09(t, 1H, / = 8.0 Hz), 6.85(t， 1H, J = 2.0 Hz), 6.81~6.84(m, 2H), 6.79(d, 1H, /= 8.5 Hz), 3.58(s, 3H), 3.47(s, 3H)
ii實(shí)施例19、 #-(2-(1仏吲唑-3-基)-17/-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-4-甲氧基^-甲 基苯磺酰胺101
操作過程同實(shí)例8，只是用4-甲氧基苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到黃綠色 固體，收率43%;熔點(diǎn)125-127°C。
^NMR( S ， DMSO-d6): 13.49(s， 1H), 11.94(s， 1H), 8.21(d, 1H, /= 8.8 Hz), 7.81(d， 1H， / = 8.0 Hz)， 7.61 (d, 1H, / = 8.4 Hz), 7.46(d， 2H, / = 8.4 Hz), 7.42(t, 1H， / = 8.0 Hz)， 7.32(d， 1H,= 8.4 Hz)， 7,22(t, 1H, / = 8.0 Hz), 7.17 (d, 1H， J = 1.2 Hz), 7.03(d, 1H, / = 9.2)， 3.80(s， 3H), 3.20(s, 3H)
實(shí)施例20、 AK2-(liZ-吲唑-3-基)-lif-吡咯[3，2-b]吡啶-5-基)-4-氯-7V"甲基苯 磺酰胺10m
操作過程同實(shí)例8，只是用4-氯苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到黃色固體，
收率40%;熔點(diǎn)90-92°C。
!H NMR( S ， DMSO-d6): 13.50(s, 1H), H.98(s, 1H), 8.22(d， 1H, J = 8.4 Hz), 7.83(d, 1H， / = 8.8 Hz)， 7.61~7.64(m, 3H), 7.58(s, 1H), 7.56(d, 1H， / = 8.4 Hz), 7.43(t, lH, /=8.0 Hz)， 7.29(d， 1H, /= 8.8 Hz), 7.23(t, 1H，J^8.0 Hz)， 7.18(d, 1H, /= 1.2 Hz)，3.23(s, 3H)
實(shí)施例21、^-(2-(1&吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-3,4-二甲氧基-^-甲基苯磺酰胺10n
操作過程同實(shí)例8，只是用3，4-二甲氧基苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到淡
黃色固體，收率40%;熔點(diǎn)88-90°C。
& NMR( S , DMSO-d6): 13.50(s, 1H)， U.96(s, IH)， 8.21(d, 1H， J = 8.0 Hz), 7.83 (d， 1H, J = 8.4 Hz), 7.61(d, 1H, / = 8.4 Hz), 7.43(t, 1H, / = 7.6 Hz), 7.33(d, 1H， 《/ = 8.0 Hz), 7.23(t， 1H， J = 7.6 Hz), 7.19(dd， 1H, / = 2.4 Hz, / = 8.8)， 7.18(d, 1H, / = 1.2 Hz), 7.07(d, 1H, / = 8.8 Hz), 6.85 (d， 1H, / = 1.2 Hz), 3.81(s, 3H), 3.55(s, 3H),3.19(s, 3H)
實(shí)施例22、叢(2-(1//-卩引唑-3-基)-1//-吡咯[3,2-1)]吡啶-5-基)-2-甲氧基-^-甲 基萘-l-磺酰胺10o
操作過程同實(shí)例8，只是用2-甲氧-l-萘磺酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色 固體，收率35%;熔點(diǎn)259-261°C。
^NMR(S,DMSO國d6): 13.48(s, 1H), U.95(s, 1H), 8.29(s, 1H), 8.17(d， 1H，J =8.0 Hz)， 8.03(d， 1H, / = 9.6 Hz)， 7.86 (d, 1H, / = 8.8 Hz), 7.83(d， 1H, / = 8.4 Hz), 7.60(d, 1H， J = 8.4 Hz)， 7.41~7.45(m， 2H), 7.33~7.37(m， 2H), 7.26 (dd， 1H, J=2.0 Hz, J = 9.2 Hz), 7.19(t, 1H, / = 7.6 Hz)， 7.11(s， 1H), 3.89(s, 3H), 3.26(s, 3H) 實(shí)施例23、 ^-(2-(1仏吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-叢甲基-3-硝基 苯磺酰胺10p
操作過程同實(shí)例8，只是用3-硝基苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到黃褐色固 體，收率37%;熔點(diǎn)92-94°C。
NMR( S , DMSO-d6): 13.52(s, 1H), 12.03(s, IH)， 8.51(dd, 1H, / = 2.4 Hz, / = 8.4 Hz)， 8.34(s， 1H), 8.18(d, 1H, / = 8,0 Hz), 8.01(d, 1H, / = 7.2 Hz), 7.86(t, 2H, / = 8.0 Hz), 7.62(d， 1H， / = 8.4 Hz), 7.43 (t, 1H， J = 8.4 Hz), 7.28 (d, 1H, J = 8,8 Hz)， 7.24(t, 1H, /= 8.4 Hz), 7.13(s, 1H), 3.26(s， 3H)
實(shí)施例24、AK2-(l/f-吲唑-3-基)-l/7-吡咯[3,2-b]吡啶-5-基)-7V-甲基苯磺酰胺
10q
操作過程同實(shí)例8，只是用苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到黃綠色固體，收
率40%;熔點(diǎn)78-80°C。
& NMR( S , DMSO-d6): 13.46(s, 1H), U.93(s， 1H), 8.18(d, 1H, / = 8.4 Hz), 7.79(d， 1H， / = 8.4 Hz), 7.61~7.63(m, 1H), 7.58(d, 1H， 《/ = 8.4 Hz), 7.49 7.54(m, 4H), 7.39(t, 1H， / = 8.0 Hz)， 7.29(d， 1H, / = 8.8 Hz), 7.19(t, 1H， / = 8.0 Hz), 7.13(d， 1H，《7= 1.6Hz)，3.20(s， 3H)
實(shí)施例25、 ^-(2-(1樂吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-^，4-二甲基苯磺 酰胺10r
操作過程同實(shí)例8，只是用4-甲基苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色固 體，收率25%;熔點(diǎn)91-93°C。
& NMR( S , DMSO-d6): 13.46(s， 1H), U.92(s, 1H), 8.18(d, 1H, / = 8.0 Hz), 7.78(d, 1H, / = 8.4 Hz)， 7.58(d, 1H， / = 8.4 Hz), 7,39 7.43(m, 3H), 7.29(d, 3H, / = 8.0 Hz), 7.19(t, 1H, / = 7.6 Hz)， 7.14(d, 1H， 《/ = 0.8 Hz), 3.18(s, 3H)
實(shí)施例26、 AH2-(l/^吲唑-3-基)-l/7-吡咯[3,2-b]吡啶-5-基H^甲基-4-(三氟 甲氧基)苯磺酰胺10s
操作過程同實(shí)例8,只是用4-(三氟甲氧基)苯磺酰氯代替苯甲酰氯，得到
淡黃色固體，收率45%;熔點(diǎn)107-109°C。
& NMR( S ， DMSO-d6): 10.73(s, 1H), 9.54(s， IH)， 8.05(d, 1H, / = 8.5 Hz), 7.67~7.72(m, 3H), 7.53(d, 1H, / = 8.5 Hz), 7.46 (t， 1H, J = 7.0 Hz), 7.44(d， 1H, / = 8.5 Hz), 7.29(t， 1H， / = 7.0 Hz), 7.25(d, 2H， J = 8.5 Hz), 7.16(d, 1H, / = 1.0 Hz), 3.36(s, 3H)實(shí)施例27、叢(2-(6-氯-1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-7^甲基苯 甲酰胺10t
操作過程同實(shí)例8，只是用2-(6-氯-lH』引唑-3-基)-N-甲基-lH-吡咯[3，2-b] 吡啶-5-氨基代替2-(lH-吲唑-3-基)-N-甲基-lH-吡咯[3,2-b]吡啶-5-氨基得到淡黃 色固體，收率27%;熔點(diǎn)275°C (dec)。
!H NMR( S ， DMSO-d6): 9.24(s, IH)， 8.62(d, 1H, / = 4.0 Hz), 7.99(d, 1H, / = 8.5 Hz), 7.53(d, 1H, / = 1.0 Hz)， 7.42(d, 1H, / = 8.5 Hz), 7.83(d, 2H, / = 7.5 Hz), 7.29(dd， 2H, / = 1.5 Hz， / = 9.0 Hz), 7.22(d, 2H， 《/ = 7.5 Hz), 7.14(t, 2H, / = 8.0 Hz)， 6.64(d， 1H， /= 8.5 Hz), 3.67(s, 3H)
實(shí)施例28、 7^(2-(1//-咪唑-3-基)-17/-吡咯[3,2七]吡啶-5-基)-7^甲基呋喃-2-甲酰胺lOu
操作過程同實(shí)例8，只是用呋喃-2酰氯代替苯甲酰氯，得到淡黃色固體，
收率45%;熔點(diǎn)110-113°C。
& NMR( S , DMSO-d6): 13.59(s, 1H), 12,00(s, 1H), 8.22(d, 1H， /= 8.0 Hz), 7.79(d, 1H， 8.5 Hz), 7.63(d, 1H, /= 8.5 Hz)， 7.57(d， 1H, /= 1.0 Hz), 7.44(t, 1H, /= 7.5 Hz), 7.25(t， 1H, /= 7.5 Hz), 7.23(s, IH)， 7.00(d, 1H， 《/= 8.0 Hz), 6.33(dd, IH, Hz ， J= 3.5 Hz), 6.01(d， 1H, /= 3.5 Hz), 3.39(s， 3H)
實(shí)施例29、抗腫瘤生物活性測試方法
腫瘤細(xì)胞離體培養(yǎng)
選取腫瘤細(xì)胞HL60、 KB、 7721、 HCT-116、 A549，于37。C、 5% C02細(xì) 胞培養(yǎng)箱中孵育，待細(xì)胞密度長到70 90%時(shí)傳代(貼壁細(xì)胞用Puck's EDTA 消化后傳代)，用于以后實(shí)驗(yàn)所需。
MTT法測定A^取代的2-(lF-吲唑-3-基)-l/Z-吡咯[3,2-b]吡啶-5-氨基衍生物 對(duì)不同瘤株的體外抑制作用
將化合物用二甲基亞砜(DMSO)溶解，稀釋，腫瘤細(xì)胞HL60、 KB、 7721、 HCT-116、 A549在96孔板上種入4000個(gè)/200pl/孔，每孔加入化合物2^1，終 濃度為12.0pM， 6.0 pM， 3.0 ^M， 1.5 |oM，共同于37。C、 5% C02細(xì)胞培養(yǎng) 箱中孵育72小時(shí)，以DMSO (1%)為空白對(duì)照。72小時(shí)后，加入終濃度為 0.25 mg/ml的MTT,置于37"C、 5% C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中4小時(shí)，之后吸干溶 齊U，每孔加入100plDMSO，用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測定吸光度(OD值)， 所得數(shù)據(jù)用于計(jì)算IC50。部分化合物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表l:表1 部分化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞株的IC5o值OtM)NO.
Structure
R
IC50(,
HCT-
HL60 KB 7721 A549
116
10a
10b
10c 10d
10e 10f 10g
Br
CH3-
O
O,N
CI
4.85 8.58 12.53 10.60 15.75
1.08 1.78 3.46 6.11 4.25
5.11 10.33 23.38 14.79 61.64
4.09 8.39 22.16 17.98 24.35
3.32 12.90 23.68 29.47 14.56
6.80 20.15 18.42 19.90 34.47
0.80 1.52 2.42 4.69 2.22
從上表可以看出，1)所有的10個(gè)化合物對(duì)5種不同的腫瘤細(xì)胞株均有一
定的抑制活性。2)R基團(tuán)與5-iV-2-(l/Z-吲唑-3-基)-m-吡咯[3,2-b]吡啶之間為酰 胺鍵連接的化合物10f和10g對(duì)5種腫瘤細(xì)胞株均有較高的抑制率。3)R基團(tuán)
、^i^。/ 0.84 4.38 4.28 8.40 19.40
.1810.17 10.77 21.83 25.88
Br
6.24 7.1511.539.85 19.70
h與5-7V-2-(l/f-吲唑-3-基)-l/f-吡咯[3,2-b]吡啶之間為磺酰胺鍵連接的化合物的 活性一般比10f和10g要低，但其中的一個(gè)化合物10h對(duì)HL60的抑制率僅次 于化合物10g，其ICso值達(dá)到0.84^iM?？偠灾擃惢衔镉休^好的抗腫 瘤應(yīng)用前景，因而具良好的商業(yè)價(jià)值。
權(quán)利要求
1. 一種2-吲唑-4-氮雜吲哚-5-氨基衍生物，具體是N5取代的2-(1H-吲唑-3-基)-1H-吡咯[3，2-b]吡啶-5-氨基衍生物，其特征是有以下結(jié)構(gòu)通式其中X為氫原子、羰基、砜基或亞砜基；L為氮原子、氧原子或C0～C3的烷基鏈；R1為C1～C3的直鏈或支鏈烷基、C4～C7的環(huán)烷烴、芳環(huán)、芳雜環(huán)，其中芳環(huán)為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán)，芳雜環(huán)為噻吩、吡啶、呋喃或吡咯；單取代苯環(huán)上的取代基為氟原子、氯原子、溴原子、甲氧基、甲基、硝基、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1～C3的直鏈或支鏈烷基、C1～C3的直鏈或支鏈烷氧基；二取代苯環(huán)上的取代基為3，4-二甲氧基、2，4-二甲氧基、2，5-二甲氧基、3-硝基-4-甲氧基、3-氨基-4-甲氧基、3，4-二氟；三取代苯環(huán)上的取代基為3，4，5-三甲氧基；R2為氫、鹵素、腈基、含C1～C3的酰基、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、二甲胺基；R3為C1～C3的烷基鏈。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的A^取代的2-(1界吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2七]吡啶 -5-氨基衍生物的制備方法，其特征是以化合物1:2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-5-硝基吡啶為原料，通過烷基化得到化合物2，通過縮合反應(yīng)得到化合物3，通 過還原環(huán)合反應(yīng)得到化合物4，通過叔丁氧羰基保護(hù)得到化合物5，通過2-位 碘代反應(yīng)得到中間體化合物6: 5-位取代的2-碘代4-氮雜B引哚；以5-溴-2-甲基 苯胺為原料，通過重氮化環(huán)合，碘代反應(yīng)，氧化還原得到中間體吲唑的錫化物 7，將中間體化合物6和化合物7通過Stille偶聯(lián)得到化合物8，再經(jīng)酸性條件 脫保護(hù)基得到化合物9，在堿性條件下在A^位引入取代基得到目的化合物10，
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的#5取代的2-(1//-吲唑-3-基)-1//-吡咯[3,2-13]吡啶 -5-氨基衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一類2-吲唑-4-氮雜吲哚-5-氨基衍生物，是在N⁵位引入不同的取代基，以2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-5-硝基吡啶為原料，通過烷基化，縮合反應(yīng)，還原環(huán)合，叔丁氧羰基保護(hù)，2-位碘代反應(yīng)得到中間化合物5-位取代的2-碘代4-氮雜吲哚，與吲唑的錫化物通過Stille偶聯(lián)，再經(jīng)酸性條件脫保護(hù)基，在堿性條件下在N⁵位引入取代基得到目的化合物。本發(fā)明提供的化合物經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株均有較好的體外抑制增殖作用，具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用，可在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的結(jié)構(gòu)通式如圖。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101440092SQ20081016410
公開日2009年5月27日 申請(qǐng)日期2008年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月25日
發(fā)明者何俏軍, 滔 劉, 孫茂堂, 波 楊, 胡永洲 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)