專利名稱：：一種供注射用的抗腫瘤長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種供注射用的抗腫瘤長(zhǎng)循環(huán)耙向脂質(zhì)體藥物組合物，采用具有腫瘤部位靶向功能的多肽和親水性聚乙二醇(PEG)同時(shí)修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行裝載，將二種藥物抗血管藥物與抗腫瘤藥物聯(lián)合輸送到腫瘤部位，通過(guò)兩種藥物不同的釋放速率和作用機(jī)理，增強(qiáng)腫瘤治療效果。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤一直是困擾人類的重要疾病，目前尚無(wú)治愈癌癥的方法。原發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的生成(angiogenesis)。腫瘤既可通過(guò)腫瘤血管從宿主獲取營(yíng)養(yǎng)和氧氣，又可通過(guò)腫瘤血管源源不斷地向宿主輸送轉(zhuǎn)移細(xì)胞，并在機(jī)體的其他部位繼續(xù)生長(zhǎng)和誘導(dǎo)血管形成，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移。因此，腫瘤的血管系統(tǒng)已成為一個(gè)嶄新的、有希望的抗腫瘤治療耙點(diǎn)。人們已致力于開(kāi)發(fā)和研究破壞或抑制血管生成，有效地阻止腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的藥物，這類藥物稱為腫瘤血管生成抑制劑(tumorangiogenesiinhibitor,TAI)。TAI通過(guò)切斷腫瘤賴以生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源和遷移通道，具有許多優(yōu)勢(shì)(l)治療發(fā)生時(shí)，血管形成已被啟動(dòng)，故TAI治療具有良好的特異性。(2)血管內(nèi)皮細(xì)胞暴露于血流中，藥物能直接發(fā)揮作用，故劑量小、療效高。(3)內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，不易產(chǎn)生耐藥性。(4)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖速度較正常血管內(nèi)皮細(xì)胞快許多倍，故TAI對(duì)正常組織毒性小。對(duì)于惡性實(shí)體瘤的傳統(tǒng)療法為手術(shù)切除腫瘤后再用抗腫瘤藥物進(jìn)行化療。大部分的化療藥物沒(méi)有選擇性，這些藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)對(duì)正常的細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用，因此會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，如阿霉素的心臟毒性作用等。將抗腫瘤藥物用脂質(zhì)體進(jìn)行包載后可以明顯延長(zhǎng)其在體內(nèi)循環(huán)的時(shí)間，有利于抗腫瘤藥物向腫瘤區(qū)蓄積，從而增加了抗癌藥物的治療指數(shù)，即增加療效，減少了毒副作用。目前已有阿霉素脂質(zhì)體、柔紅霉素脂質(zhì)體、紫杉醇脂質(zhì)體等產(chǎn)品上市。親水性的聚乙二醇(PEG)修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能夠逃避血漿中的調(diào)理素的調(diào)理從而避免了被巨噬細(xì)胞攝取(故也稱為隱性脂質(zhì)體)，顯著延長(zhǎng)了其在循環(huán)系統(tǒng)中的滯留時(shí)間，血藥濃度也明顯提高。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體經(jīng)增強(qiáng)滯留和滲透作用(EPR)可增加被包載藥物向腫瘤組織內(nèi)的蓄積，從而提高了抗癌藥物傳遞的靶向性。目前已有阿霉素隱性脂質(zhì)體上市(DOXIL⑧，CAELYX⑧)。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能夠延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，增強(qiáng)抗腫瘤藥物向腫瘤組織內(nèi)的蓄積，但并不意味著一定能夠提高抗腫瘤藥物的療效。其原因之一在于大部分抗腫瘤藥物的靶點(diǎn)中位于細(xì)胞內(nèi)，如細(xì)胞核內(nèi)的DNA，藥物必須克服細(xì)胞膜這一屏障進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)才能發(fā)揮作用。脂質(zhì)體包封的藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)主要有三種途徑，即擴(kuò)散，膜融合以及被腫瘤細(xì)胞吞噬。已有研究表明，PEG修飾可穩(wěn)定脂質(zhì)體，減少藥物的釋放(進(jìn)而減少藥物擴(kuò)散)，并在一定程度上阻礙脂質(zhì)體的融合和吞噬，因此長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體盡管能夠增加腫瘤組織中的濃度，但療效卻不一定有所增加。因此提高脂質(zhì)體與腫瘤相關(guān)細(xì)胞的作用就很重要了。目前用配體修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體巳成為提高抗癌藥物靶向性的重要手段。國(guó)內(nèi)外有學(xué)者用葉酸、轉(zhuǎn)鐵蛋白和單克隆抗體等來(lái)修飾隱性脂質(zhì)體，以增加藥物傳遞的靶向性，動(dòng)物試驗(yàn)證明能夠顯著提高抗癌藥物的療效，相關(guān)產(chǎn)品有的已進(jìn)入臨床研究。腫瘤組織能迅速生長(zhǎng)，與腫瘤血管源源不斷的供應(yīng)養(yǎng)分是分不開(kāi)的。如果能阻斷腫瘤血供，也就可達(dá)到間接殺死腫瘤細(xì)胞的目的。在實(shí)體瘤內(nèi)血管生成作用產(chǎn)生的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)幾種正常血管內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)的蛋白，包括整合素integrin和特定的血管生成因子受體，因而利用能與這些蛋白有選擇性親和作用的分子就可使細(xì)胞毒藥物定向殺傷新生血管內(nèi)皮細(xì)胞。Arap等人借助噬菌體顯示文庫(kù)的選擇作用，分離到幾種能特異的結(jié)合于腫瘤血管的肽，一種是包含Arg-Gly-Asp(RGD)序列的能選擇性結(jié)合于和ovi35integrin的肽，另一種是含有Asn-Gly-Arg(NGR)序列的能特異結(jié)合細(xì)胞粘著分子的肽。有研究表明將阿霉素doxorubicin于這兩種肽相連，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)這兩種連接物在減少化療藥物毒性的同時(shí)，殺傷人乳癌細(xì)胞裸鼠移植物細(xì)胞的作用卻比單純的化療藥物加強(qiáng)了。由于新生血管與腫瘤密切相關(guān)，近年來(lái)新生血管己成為腫瘤治療的重要靶標(biāo)。在腫瘤新生血管和很多腫瘤細(xì)胞表面，都有稱為整合素的特異性受體的高表達(dá)，整合素分子有各種各樣的配體，其中含RGD序列的多肽因其分子量小(無(wú)抗原性)和特異性高而備受關(guān)注。已有報(bào)道用RGD修飾長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體作為抗癌藥物的載體，其原理在于RGD肽能夠特異性地與整合素ov/33結(jié)合，提高載體的靶向性，并通過(guò)破壞腫瘤的新生血管來(lái)切斷腫瘤的營(yíng)養(yǎng)和氧氣的供應(yīng)。我們?cè)暾?qǐng)一項(xiàng)中國(guó)發(fā)明專利(200510063388.0)，涉及一種供注射用的載抗癌藥物的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于脂質(zhì)體同時(shí)用PEG鏈和含RGD序列的線性多肽或含RGD類似物的線性片段修飾，但只裝載單一的抗腫瘤藥物。研究表明，這種新型載體的確可以在一定程度上增加腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物的濃度，提高抗腫瘤效果。同樣，利用NGR肽修飾脂質(zhì)體來(lái)裝載抗腫瘤藥物也已有相關(guān)報(bào)道，并且研究結(jié)果證實(shí)該載體同樣可以5增強(qiáng)腫瘤靶向治療效果。但是，與此相關(guān)的研究文獻(xiàn)資料均顯示僅包載單一的抗腫瘤藥物，與本發(fā)明中所述同時(shí)裝載抗血管藥物與抗腫瘤藥物的藥物組合有顯著不同。另一方面，直接破壞腫瘤血管，也能夠高效殺滅惡性腫瘤細(xì)胞。如DMXAA、CA4、ZD6126等小分子能使血管破壞，血流減少，大范圍缺氧，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞壞死。而且，小分子抗血管藥物與抗腫瘤藥物的相加或協(xié)同作用已在研究中已得到證實(shí)。如CA4與順鉑和環(huán)磷酰胺合用，腫瘤的抑瘤率是單獨(dú)使用化療時(shí)的10~500倍；與紫杉醇合用的抗腫瘤效果也增強(qiáng)；CA4P與5-FU和阿霉素合用也有良好的效果，還能夠增強(qiáng)腫瘤對(duì)熱療和放療的敏感性；ZD6126具有獨(dú)特的抗腫瘤血管生成的作用，可直接引起腫瘤中血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。ZD6126可明顯增強(qiáng)順鉑和紫杉醇的放療活性，有效的減弱合用藥物的神經(jīng)毒性等；DMXAA(AS1404)是一種小分子血管破壞藥物。DMXAA可以增強(qiáng)順鉑、環(huán)孢素和紫杉醇的放療、熱療以及免疫療法的抗腫瘤效應(yīng)；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體(如DC101)與阿霉素合用也可以有效地抑制平滑肌肉瘤等的生長(zhǎng)。角鯊胺(squalamine)是一種氨基甾醇類的血管生成抑制劑，在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞無(wú)毒性，但可增加順鉑的抗腫瘤作用，明顯抑制腫瘤新生血管生成。然而，目前抗血管藥物與抗腫瘤藥物的聯(lián)合應(yīng)用還存在一些問(wèn)題。目前的聯(lián)合用藥方案通常是抗血管藥物頻繁給藥，同時(shí)抗腫瘤藥物單次大劑量給藥?？梢灶A(yù)期的結(jié)果是抗血管藥物封閉腫瘤血管而使血液中的化療藥難以進(jìn)入局部；由于血管封閉缺氧還會(huì)直接導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥，因?yàn)槟[瘤缺氧區(qū)域的細(xì)胞增殖速度降低，而且缺氧誘導(dǎo)因子-a上調(diào)，后者與抗凋亡蛋白Bcl-2和多藥耐藥的產(chǎn)生有關(guān)。事實(shí)上，已有報(bào)導(dǎo)兩種藥物在某些腫瘤模型中出現(xiàn)了拮抗效應(yīng)。關(guān)于腫瘤缺氧對(duì)聯(lián)合用藥抗癌效果的影響已引起了人們的關(guān)注?；谏鲜霰尘埃覀?cè)O(shè)計(jì)了一種全新的藥物輸送系統(tǒng)，同時(shí)裝載兩類不同作用機(jī)理的藥物(抗血管藥物與抗腫瘤藥物)，以EPR效應(yīng)增加被動(dòng)耙向作用，以受體介導(dǎo)增加主動(dòng)靶向作用和藥物在腫瘤細(xì)胞的蓄積，兩藥物可同步到達(dá)腫瘤部位，抗血管藥物先釋放或兩藥物同時(shí)釋放，抗腫瘤藥物可以在腫瘤血管枬塌封閉之前進(jìn)入腫瘤組織中，局部血管的關(guān)閉可使抗腫瘤藥物蓄積在腫瘤中而減少或不再向體循環(huán)中重新分布，抗血管藥物破壞腫瘤血管，發(fā)揮饑餓效應(yīng)，而抗腫瘤藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺滅作用可減少缺氧區(qū)域，阻礙了缺氧誘導(dǎo)因子的產(chǎn)生，使得兩種藥物在靶部位發(fā)揮積極的協(xié)同作用。綜上所述，本發(fā)明通過(guò)被動(dòng)蓄積和主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤組織的靶向給藥，通過(guò)兩種完全不同作用機(jī)理的藥物的聯(lián)合應(yīng)用，明顯提高腫瘤治療的效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種供注射用的抗腫瘤長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體的藥物組合物，其組成為具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質(zhì)體，以及至少一種抗血管藥物和至少一種抗腫瘤藥物。其中具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質(zhì)體，以及藥物的比例為0.01%-10%:0.01%-20%:40%-99.88%:0.1%-30%。本發(fā)明將抗血管藥物和抗腫瘤藥物聯(lián)合包載在脂質(zhì)體內(nèi)，同時(shí)在脂質(zhì)體表面用親水性的聚乙二醇(PEG)和具有腫瘤部位靶向功能的多肽進(jìn)行修飾。所述具有腫瘤部位靶向功能的多肽為RGD肽及其類似物和NGR肽及其類似物。其中RGD肽是指，含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)連續(xù)序列的所有線性肽和環(huán)肽，包括含RGD序列的直鏈多肽片段，即三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含RGD序列的環(huán)狀多肽，即RGD-4C，c[RGDYK];RGD類似物片段包括含精氨酸-6-氨基已酸序列的線性或環(huán)狀片段。其中優(yōu)選的為RGD-4C，c[RGDYK]和RGD線性三肽。其中NGR肽是指，含有天冬酰胺酸-甘氨酸-精氨酸(Asn-Gly-Arg，NGR)連續(xù)序列的線性肽和環(huán)肽，包括含NGR序列的直鏈多肽片段，如三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含NGR序列的環(huán)狀多肽。其中優(yōu)選的為NGR線性三肽、CNGRC環(huán)肽、GGCNGRC環(huán)肽。本發(fā)明使用的聚乙二醇(PEG)其分子量為200-5000，優(yōu)選的為2000-3000。本發(fā)明的組合物中多肽的連接方法，包括將含RGD或NGR序列的多肽末端氨基或羧基通過(guò)化學(xué)鍵合反應(yīng)連接到PEG的末端。本發(fā)明的組合物中所述的脂質(zhì)體是指，主要以磷脂和膽固醇為材料所制成的脂質(zhì)雙分子層囊泡。磷脂包括大豆磷脂(SPC)，二月桂酰卵磷脂(DLPC)、二肉豆蔻酰卵磷脂(DMPC)、二棕櫚酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)、l-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰卵磷脂(MPPC)、l-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂(PMPC)、1-棕櫚酰-2-硬脂酰卵磷脂(PSPC)、l-硬脂酰-2-棕櫚酰卵磷脂(SPPC)、蛋黃卵磷脂(EPC)、氫化豆磷脂(HSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二棕櫚脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸(DMPS)、二棕櫚酰磷脂酰二絲氨酸(DPPS)、腦磷脂酰絲氨酸(PS)、腦神經(jīng)鞘磷脂(BSP)、二棕櫚酰神經(jīng)鞘磷脂(DPSP)、二硬脂酰神經(jīng)鞘磷脂(DSSP)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)之一種或一種以上者。其中優(yōu)選的為HSPC，EPC禾卩SPC。本發(fā)明的組合物中所述的脂質(zhì)體主要以磷脂和膽固醇組成，其中磷脂與膽固醇的比例為0-1000:1，或1-1000:1，優(yōu)選的為1-10:1。本發(fā)明的組合物中所述的脂質(zhì)體同時(shí)裝載的藥物為抗血管藥物和抗腫瘤藥物?？寡芩幬锇ㄐ律芤种苿?angio-genesisinhibitors/AIs)和血管破壞藥物(vasculardisruptingagents/VDAs)。其中包括康貝司汀、ZD6126、范得它尼(ZD6474)、Iressa(ZD1839)、舒尼替尼(SU11248)、SU5416、a-2a干擾素(IFNa-2a)、白介素-12(IL-12)、煙曲霉素類似物(TNP-470)、阿曲生坦(ABT-627)、抗血管生成肽anginex、索拉非尼(BAY439006)、PTK787/ZK222584(vatalanib)、AG-013736、AG3340、沙利度胺(反應(yīng)停Thalidomide)及其衍生物(雷尼度胺(CC-5013)和Actimid(CC-4047))、血管抑素(angiostatin)、內(nèi)皮抑素(endostatin)、阿曲生坦(ABT-627)、Neovastat(AE941)、DMXAA，角鳘胺以及抗血管生成單抗(VEGFR-2單抗DCIOI，貝伐單抗(Bevacizumab)，EGFR單抗Erbitux)。其中優(yōu)選的為康貝司汀(combretastatin,CA-4和CA-1)?？鼓[瘤藥物包括鹽酸阿霉素、環(huán)磷酰胺、放線菌素、博來(lái)霉素、正定霉素，阿霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨喋呤、紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹(shù)堿、羥基喜樹(shù)堿、柔紅霉素、5-氟脲嘧啶、卡鉑、卡氮芥(BCNU)、順鉑、龜臼乙叉甙、干擾素、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、三本氧胺等。其中優(yōu)選的為阿霉素、紫杉醇和多烯紫杉醇。本發(fā)明的組合物所述的脂質(zhì)體中裝載的抗血管藥物和抗腫瘤藥物的比例為h1-100，優(yōu)選的為1:1-10。本發(fā)明的藥物組合物可采用如下方法制備首先將磷脂(如DSPE)與PEG相連，形成PEG修飾的磷脂(DSPE-PEG)，再將PEG末端活化形成活化酯DSPE-PEG-BTC(或DSPE-PEG-NHS)，含RGD或NGR序列的多肽(以氺RGD承或承NGI^表示)或RGD類似物片段(以承RGDm承表示)與DSPE-PEG-BTC反應(yīng)，形成DSPE-PEG-*RGD*、DSPE-PEG^NGR承等導(dǎo)向化合物，或DSPE-PEG-*RGDm*等導(dǎo)向化合物。例如取磷脂、膽固醇、DSPE-PEG、DSPE-PEG-*RGD*、DSPE-PEG-*NGR*，或DSPE-PEG^RGDmM乍為制備脂質(zhì)體的原料，置圓底燒瓶中，加入有機(jī)溶劑溶解后，按脂質(zhì)體制備方法，制備含RGD或NGR序列多肽或RGD類似物片段修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體；也可先制備長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，將導(dǎo)向化合物插入到制備好的脂質(zhì)體中形成長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體。用擠壓過(guò)聚碳酯膜或者超聲等方法將脂質(zhì)體的粒徑控制在lOOnm左右?？寡芩幬?如CA-4，DMXAA，ZD6126)與抗腫瘤藥物(如阿霉素，紫杉醇，多西紫杉醇)可在制備前直接加入或者通過(guò)其他方法裝載到已制備好的脂質(zhì)體中。本發(fā)明的藥物組合物最優(yōu)選的制備方法在實(shí)施例中。本發(fā)明的組合物優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的組合物用含RGD或NGR序列的多肽與PEG同時(shí)修飾的脂質(zhì)體作為載體，聯(lián)合包載抗血管藥物與抗腫瘤藥物，以便進(jìn)一步提高抗腫瘤藥物的治療效果。本發(fā)明的組合物含RGD或NGR序列的多肽或RGD類似物片段，由于分子量小，因而抗原性較小，不易被免疫細(xì)胞所識(shí)別而導(dǎo)致消除加快；同時(shí)，含RGD或NGR序列的多肽與整合素受體的特異性結(jié)合作用較強(qiáng)，其靶向輸送作用已得到廣泛證實(shí)。本發(fā)明的PEG的長(zhǎng)循環(huán)作用也己被證明切實(shí)有效的。本發(fā)明利用上述長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體同時(shí)包載抗血管藥物與抗腫瘤藥物，其中PEG修飾可增加EPR效應(yīng)，含RGD或NGR序列多肽或RGD類似物修飾可增加主動(dòng)耙向效果并增加藥物在腫瘤組織的蓄積,而脂質(zhì)體中同時(shí)裝載的兩種藥物可在腫瘤部位先后或同時(shí)釋放，抗血管藥物封閉血管，使抗腫瘤藥物在腫瘤部位滯留蓄積并發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。脂溶性的抗血管藥物以分子狀態(tài)分散在脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層中，可以釋放較快，而蒽環(huán)類抗腫瘤藥物由于在脂質(zhì)體中產(chǎn)生不溶性沉降而釋放較慢，因此物理裝載的兩種藥物就可以方便地實(shí)現(xiàn)不同的釋放速度，先釋放的抗血管藥物可封閉血管，使抗腫瘤藥物多數(shù)還沒(méi)有釋放出來(lái)就被關(guān)在腫瘤組織中，避免了抗腫瘤藥物再分布進(jìn)入體循環(huán)，因此特別有利于高效地殺傷腫瘤細(xì)胞?？偠灾?，本發(fā)明充分發(fā)揮了長(zhǎng)循環(huán)靶向載體的特點(diǎn)，以及兩種不同作用機(jī)理的藥物特點(diǎn)，合理整合了載體和藥物的優(yōu)勢(shì)，為這兩種藥物的聯(lián)合應(yīng)用提供了新的思路，不同于現(xiàn)有抗血管藥物與抗腫瘤藥物治療方案(二種普通注射劑的應(yīng)用)，或已有的關(guān)于含RGD多肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體作為單一抗腫瘤藥物的研究報(bào)導(dǎo)。本發(fā)明的藥物組合物制備方法生產(chǎn)簡(jiǎn)單。只需要合成導(dǎo)向化合物，然后按常規(guī)方法制備脂質(zhì)體，抗血管藥物與抗腫瘤藥物可按性質(zhì)不同采用不同的加入方法，獲得的包封率都可以達(dá)到治療需要。特別是本發(fā)明不需要采用化學(xué)連接的方法來(lái)控制釋放，通過(guò)物理包載兩種不同類型的藥物，就可以方便地實(shí)現(xiàn)兩種藥物的順序釋放，簡(jiǎn)單易行，有利于技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化。通過(guò)研究已證實(shí)，本發(fā)明的藥物組合物可以在體外先后釋放抗血管藥物和抗腫瘤藥物，而且體內(nèi)的抗腫瘤效果明顯提高。圖1、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體L[CD]中兩種藥物的釋放行為比較。圖2、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體RGD-L[CD]中兩種藥物的釋放行為比較。圖3、各種制劑給藥開(kāi)始后10天內(nèi)瘤體大小變化情況(近交系雄性C57BL/6小鼠，黑色素瘤B16F10)。圖4、瘤體大小實(shí)物照片(近交系雄性C57BL/6小鼠，黑色素瘤B16F10)。具體的實(shí)施方式通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不作為本發(fā)明的限制。實(shí)施例l、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體RGD-L[CD]脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入123mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例2、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體RGD-L[CD]脂質(zhì)體的處方分別為HSPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的HSPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37t減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入123mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例3、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體RGD-L[CD]脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入50mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例4、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD類似物修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體RGDm-L[CD]脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGDm(RGDm為RGD類似物)及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入50mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例5、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體L[CD〗脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入50mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例6、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體RGD-L[CD]基本理化性質(zhì)本發(fā)明制備的同時(shí)包載CA-4和阿霉素的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體L[CD]和RGD-L[CD]基本理化性質(zhì)比較見(jiàn)表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>本發(fā)明制備的同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體L[CD]和RGD-L[CD]體外釋放行為見(jiàn)圖1和圖2:在生理鹽水中，兩種脂質(zhì)體L[CD]和RGD-L[CD]釋藥情況如下CA-4在5小時(shí)內(nèi)釋放50%左右，12小時(shí)釋放70%以上。而阿霉素48小時(shí)內(nèi)釋放不超過(guò)20%。結(jié)果顯示在脂質(zhì)體表面進(jìn)行的RGD的修飾并未顯著影響脂質(zhì)體中阿霉素的釋放行為。CA-4的釋放速率均顯著大于阿霉素的釋放速率，即兩種藥物的釋放具有時(shí)間上的先后順序。實(shí)施例7、同時(shí)包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體RGD-L[CD]腫瘤治療藥效學(xué)腫瘤細(xì)胞黑色素瘤B16F10細(xì)胞株購(gòu)自協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)細(xì)胞所，用RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)。動(dòng)物近交系雄性C57BL/6小鼠在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究之前在無(wú)菌恒溫條件下飼養(yǎng)一周(室溫保持22'C)。腫瘤移植黑色素瘤B16F10細(xì)胞在含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。臨用前，用胰酶將細(xì)胞消化，用RPMI1640培養(yǎng)液洗滌，800rpm離心5分鐘，去除上清液，重新將細(xì)胞混勻懸浮在RPMI1640(不含血清)中，將細(xì)胞濃度調(diào)整到lxl06cells/200Ml，然后用lml注射器將細(xì)胞懸液按每只鼠200/xl液體體積在小鼠右側(cè)腋皮下注射，完成腫瘤細(xì)胞接種。給藥方案腫瘤接種后每天觀察腫瘤生長(zhǎng)情況。接種后第8天平均腫瘤體積達(dá)到50mm3，將小鼠分組標(biāo)號(hào)(n=6rats/group)，開(kāi)始使用各種載藥脂質(zhì)體進(jìn)行腫瘤治療。采用尾靜脈注射給藥。每48h給藥一次，共給藥5次。每次給藥劑量CA-4為25mg/kg，阿霉素為0.8mg/kg。對(duì)照組尾靜脈注射等體積的生理鹽水。數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)處理使用游標(biāo)卡尺測(cè)量各組小鼠腫瘤大小的長(zhǎng)寬徑，并根據(jù)公式計(jì)算腫瘤體積。V=[lengthx(width)2]/2[123]。并稱量小鼠體重。于最后一次給藥后2天處死小鼠，稱取瘤重和體重，計(jì)算去瘤體重。各組制劑給藥開(kāi)始后10天內(nèi)瘤體大小變化情況見(jiàn)圖3，瘤體實(shí)物照片見(jiàn)圖4。實(shí)施例8、同時(shí)包載DMXAA(—種血管破壞劑)和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為HSPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(20:1.5:5:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。4(TC減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置40。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例9、同時(shí)包載ZD6126(—種新生血管抑制劑)和阿霉素的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:2:5:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入100mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例10、同時(shí)包載CA-4和紫杉醇(PTX)的RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例11、同時(shí)包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的RGD線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37t減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5CTC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例12、同時(shí)包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE陽(yáng)PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4。C室冷藏備用。上述制得多烯紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例13、同時(shí)包載CA-4和阿霉素(DOX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA陽(yáng)4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例14、同時(shí)包載CA-4和紫杉醇(PTX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。上述制得紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例15、同時(shí)包載CA-4和DOX的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例16、同時(shí)包載CA-4和紫杉醇(PTX)PTX的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例17、同時(shí)包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4X:室冷藏備用。實(shí)施例18、同時(shí)包載DMXAA和DOX的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例19、同時(shí)包載DMXAA和紫杉醇(PTX)PTX的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4i:室冷藏備用。實(shí)施例20、同時(shí)包載DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25.:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例21、同時(shí)包載ZD6126和阿霉素(DOX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例22、同時(shí)包載ZD6126和紫杉醇(PTX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例23、同時(shí)包載ZD6126和多烯紫杉醇的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例24、同時(shí)包載CA-4和阿霉素(DOX)的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG,DSPE-PEG-NGR及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例25、同時(shí)包載CA-4和紫杉醇(PTX)的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例26、同時(shí)包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:DTX(25:1,5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50。C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4"C室冷藏備用。實(shí)施例27、同時(shí)包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE陽(yáng)PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。上述制得多烯紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例28、同時(shí)包載CA-4和阿霉素(DOX)的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例29、同時(shí)包載CA-4和紫杉醇(PTX)的環(huán)狀RGD修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4。C室冷藏備用。上述制得紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)控制在100nm左右。實(shí)施例30、同時(shí)包載DMXAA和DOX的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37t:減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例31、同時(shí)包載DMXAA和DOX的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例32、同時(shí)包載DMXAA和紫杉醇(PTX)的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例33、同時(shí)包載DMXAA和紫杉醇(PTX)的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc,紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4。C室冷藏備用。實(shí)施例34、同時(shí)包載DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4D室冷藏備用。實(shí)施例35、同時(shí)包載DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。實(shí)施例36、同時(shí)包載ZD6126和阿霉素(DOX)的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例37、同時(shí)包載ZD6126和阿霉素(DOX)的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現(xiàn)藍(lán)色乳光。再擠壓過(guò)200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質(zhì)體過(guò)SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，將收集到的脂質(zhì)體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，即得本品。實(shí)施例38、同時(shí)包載ZD6126和紫杉醇(PTX)的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50。C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4t:室冷藏備用。實(shí)施例39、同時(shí)包載ZD6126和紫杉醇(PTX)的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4。C室冷藏備用。實(shí)施例40、同時(shí)包載ZD6126和多烯紫杉醇的NGR線性三肽修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4。C室冷藏備用。實(shí)施例41、同時(shí)包載ZD6126和多烯紫杉醇的環(huán)狀NGR修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc,多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現(xiàn)淡藍(lán)色乳光，并于4'C室冷藏備用。權(quán)利要求1.一種供注射用的抗腫瘤長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體的藥物組合物，其組成為具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質(zhì)體，以及至少一種抗血管藥物和至少一種抗腫瘤藥物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，其中具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質(zhì)體，以及藥物的比例為0.01%-10%:0.01%-20%:40%-99.88%:0.1%-30%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，腫瘤部位靶向功能的多肽選自RGD肽及其類似物或NGR肽及其類似物。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述RGD肽及其類似物選自含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸連續(xù)序列的所有線性肽和環(huán)肽，包括含RGD序列的直鏈多肽片段，即三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含RGD序列的環(huán)狀多肽，S卩RGD-4C，c[RGDYK];RGD類似物選自含精氨酸-6-氨基已酸序列的線性或環(huán)狀片段；所述NGR肽及其類似物選自含有天冬酰胺酸-甘氨酸-精氨酸連續(xù)序列的線性肽和環(huán)肽，包括含NGR序列的直鏈多肽片段，如三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含NGR序列的環(huán)狀多肽。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述RGD肽及其類似物選自RGD-4C、c[RGDYK]或RGD線性三肽；所述NGR肽及其類似物選自NGR線性三肽、CNGRC環(huán)肽或GGCNGRC環(huán)肽。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述聚乙二醇的分子量為200-5000。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述脂質(zhì)體是以磷脂和膽固醇為材料制成的脂質(zhì)雙分子層囊泡，其中磷脂與膽固醇的比例1-1000:1;所述磷脂選自大豆磷脂、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕櫚酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、l-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰卵磷脂、1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂、l-棕櫚酰-2-硬脂酰卵磷脂、l-硬脂酰-2-棕櫚酰卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化豆磷脂、二油?；蚜字?、二月桂酰磷脂酰甘油、脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰二絲氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、腦神經(jīng)鞘磷脂、二棕櫚酰神經(jīng)鞘磷脂、二硬脂酰神經(jīng)鞘磷脂或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺之一種或一種以上者。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述抗血管藥物選自新生血管抑制劑和血管破壞藥物，其中新生血管抑制劑選自康貝司汀、ZD6126、范得它尼(ZD6474)、Iressa(ZD1839)、舒尼替尼(SU11248)、SU5416、a-2a干擾素(IFNa-2a)、白介素-12(IL-12)、煙曲霉素類似物(TNP-470)、阿曲生坦(ABT-627)、抗血管生成肽anginex、索拉非尼(BAY439006)、PTK787/ZK222584(vatalanib)、AG-013736、AG3340、沙利度胺(反應(yīng)停Thalidomide)及其衍生物(雷尼度胺(CC-5013)和Actimid(CC-4047))、血管抑素(angiostatin)、內(nèi)皮抑素(endostatin)、阿曲生坦(ABT-627)、Neovastat(AE941)、DMXAA，角鯊胺以及抗血管生成單抗(VEGFR-2單抗DCIOI，貝伐單抗(Bevacizumab)，EGFR單抗Erbitux);所述抗腫瘤藥物選自鹽酸阿霉素、環(huán)磷酰胺、放線菌素、博來(lái)霉素、正定霉素，阿霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨喋呤、紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹(shù)堿、羥基喜樹(shù)堿、柔紅霉素、5-氟脲嘧啶、卡鉑、卡氮芥、順鉑、龜臼乙叉甙、干擾素、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿或三苯氧胺。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，脂質(zhì)體中裝載的抗血管藥物和抗腫瘤藥物的比例為1:1-100。10.權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征在于，取制備脂質(zhì)體的原料，置圓底燒瓶中，加入有機(jī)溶劑溶解后，按脂質(zhì)體制備方法，制備含RGD或NGR序列多肽或RGD類似物片段修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體；或先制備長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，將導(dǎo)向化合物插入到制備好的脂質(zhì)體中形成長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體；用擠壓過(guò)聚碳酯膜或者超聲等方法將脂質(zhì)體的粒徑控制在100nm左右；抗血管藥物與抗腫瘤藥物在制備前直接加入或者通過(guò)其他方法裝載到已制備好的脂質(zhì)體中。全文摘要本發(fā)明涉及一種供注射用的抗腫瘤長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體，其特征在于將抗血管藥物與抗腫瘤藥物聯(lián)合，采用具有腫瘤部位靶向功能的多肽和親水性聚乙二醇(PEG)同時(shí)修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行裝載，將二種藥物輸送到腫瘤部位，通過(guò)兩種藥物不同的釋放速率和作用機(jī)理，增強(qiáng)腫瘤治療效果。文檔編號(hào)A61K47/42GK101327190SQ20081013458公開(kāi)日2008年12月24日申請(qǐng)日期2008年7月29日優(yōu)先權(quán)日2008年7月29日發(fā)明者強(qiáng)張,烜張,張翼飛,汪貽廣,王堅(jiān)成申請(qǐng)人:北京大學(xué)