專利名稱：：治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物及其制備方法，尤其涉及一種以中藥為原料制備的用于治療特發(fā)性血小板減少性紫癜藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：特發(fā)性血小板減少性紫癜(Idiopathicthrombocytopeniapurpura,ITP)是因免疫機(jī)制導(dǎo)致血小板破壞增多的綜合征，臨床以皮膚、粘膜及內(nèi)臟出血為主要表現(xiàn)。本病是血液系統(tǒng)常見病，約占出血性疾病的70%，常反復(fù)發(fā)作，纏綿難愈，可因并發(fā)顱內(nèi)出血、嚴(yán)重內(nèi)臟出血而危及生命。糖皮質(zhì)激素是治療本病的首選藥物，近期有效率為6080%，長(zhǎng)期緩解率僅為1015%，而且大量或長(zhǎng)期應(yīng)用激素所帶來的毒副作用令患者難以忍受。脾臟切除術(shù)約三分之二患者有效，但仍可復(fù)發(fā)，相當(dāng)一部分患者不愿接受。約四分之一的ITP患者最終對(duì)糖皮質(zhì)激素及脾臟切除術(shù)失去反應(yīng)，而無法維持血小板計(jì)數(shù)在2030xl09/L以上，同時(shí)伴有出血傾向者需要接受免疫抑制劑如硫唑嘌呤、環(huán)孢菌素、麥考酚酸酯、環(huán)磷酰胺，或雄性激素如達(dá)那唑治療。這些藥物的療效尚不確定，同時(shí)帶有相當(dāng)?shù)拇x或致癌等不良后果。最新的美羅華(Rituximab，抗CD20單克隆抗體)可達(dá)到44%55.1%的療效，但'仍易復(fù)發(fā)，而且價(jià)格昂貴。中醫(yī)藥治療ITP的報(bào)道較多，但療效確切的不多，多為小樣本臨床觀察，尤其對(duì)難治性ITP(RITP)缺乏有效地防治藥物，更沒有規(guī)范的治療方案，缺乏隨機(jī)、對(duì)照、大樣本研究，未能嚴(yán)格遵循循證醫(yī)學(xué)(EBM)要求，使結(jié)論缺乏科學(xué)性及可靠性，也不利于推廣應(yīng)用，不符合現(xiàn)代中醫(yī)的發(fā)展要求。因此尋找有效、穩(wěn)定、安全、經(jīng)濟(jì)又適合我國(guó)國(guó)情的治療藥物，建立ITP的規(guī)范治療方案，成為當(dāng)前HP研究領(lǐng)域中亟待解決的課題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之一是提供一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)的藥物組合物。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之二是提供上述治療特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)的藥物組合物的制備方法。ITP屬于中醫(yī)"血證"、"紫斑"、"發(fā)斑"、"虛勞"等范疇，歷代醫(yī)家和現(xiàn)代學(xué)者對(duì)本病多有論述和研究，但其基本病機(jī)歸納起來不外火熱熏灼及氣虛不攝兩大類，治療則以治氣、治血和治火為基本原則。《血證論》提出有氣血水火理論，認(rèn)為氣血水火之間心生火，腎生水，水火失調(diào)，其樞在脾，我們稱之為"脾腎氣火相關(guān)理論"。根據(jù)這一理論，結(jié)合長(zhǎng)期臨床實(shí)踐，率先在國(guó)內(nèi)提出ITP的發(fā)病以"脾腎虧虛為本，火傷血絡(luò)為標(biāo)"的觀點(diǎn)。脾虛可因統(tǒng)血無權(quán)而易致出血，又因陰火內(nèi)生，傷及血絡(luò)而易致出血；腎虛則精血衰少，陰虛火旺，灼傷脈絡(luò)而擾血妄行，久則陰損及陽(yáng)，命門火衰，火不歸元，陰寒凝聚于下，無根之火浮炎于上，陰陽(yáng)不相內(nèi)守而血行障礙，錯(cuò)行脈外。ITP脾腎虧虛很重要的另一層含義是，患者的脾虛腎虛雖然在不同患者側(cè)重點(diǎn)不同，但大多為脾腎互為虧虛，從而導(dǎo)致脾腎兩臟間的功能協(xié)調(diào)出現(xiàn)紊亂，這符合臟腑相關(guān)理論。因而提出ITP的發(fā)病以"脾腎虧虛為本，火傷血絡(luò)為標(biāo)"，治療當(dāng)以健脾補(bǔ)腎、瀉火寧絡(luò)為主，據(jù)此研制出本發(fā)明藥物，主要用于治療急慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜，包括難治性ITP，該藥物安全、有效、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)又適合我國(guó)國(guó)情并可以推廣應(yīng)用。作為本發(fā)明第一方面的一種治療ITP的藥物組合物，由以下重量份的原料藥劑制備而成生黃芪1050份、女貞子1050份、生白術(shù)550份、炒白芍550份、制首烏10~50份、菟絲子550份、炒丹皮550份、炒枳殼2~25份、仙鶴草1060份、景天三七550份、連翹550份、炙甘草2~25份。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述藥物組合物的重量份為生黃芪15~30份、女貞子15~30份、生白術(shù)10~30份、炒白芍10~30份、制首烏15~30份、菟絲子1030份、炒丹皮1030份、炒枳殼515份、仙鶴草20-40份、景天三七1030份、連翹1030份、炙甘草515份。在本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選實(shí)施例中，所述藥物組合物的重量份為生黃芪24份、女貞子20份、生白術(shù)12份、炒白芍12份、制首烏20份、菟絲子15份、炒丹皮12份、炒枳殼6份、仙鶴草30份、景天三七15份、連翹15份、炙甘草6份。所述組合物還包括藥學(xué)上可用輔料。所述藥物組合物可制成任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型，優(yōu)選為顆粒劑、口服液。本發(fā)明的技術(shù)方案之二是提供一種治療ITP藥物組合物的制備方法，包括顆粒劑制備工藝和口服液制備工藝。所述顆粒劑制備工藝為上述中藥按重量份組分配方，取飲片用水浸泡，加水煎煮二次，第一次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎2h,第二次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎lh，棄渣過濾合并兩次濾液，沉淀12h，取上清液濃縮成稠膏，加稠膏重量50wt。/。的白糊精、甜菊糖適量，6(TC低溫，濃縮成干膏粉，制成棕色細(xì)顆粒劑后分裝成12g/包；所述口服液制備工藝為上述中藥按重量份組分配方，取飲片用水浸泡，加水煎煮二次，第一次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎lh，第二次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎0.5h，棄渣過濾合并兩次濾液，放置沉淀12h，取上清液濃縮至適量，趁熱加入蔗糖、防腐劑適量，攪勻使成全量，分裝于200ml瓶。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)經(jīng)長(zhǎng)期、大量臨床觀察，先后總結(jié)病例200余例并多次驗(yàn)證以及實(shí)驗(yàn)研究表明本發(fā)明藥物治療ITP具有良好療效，總有效率為91.94%95.97%，明顯高于強(qiáng)的松對(duì)照組；治療RITP35例，總有效率為88.6%。臨床未見明顯毒副反應(yīng)，并能調(diào)整機(jī)體的免疫功能，抑制血小板抗體，減少血小板的破壞；促進(jìn)骨髓巨核細(xì)胞的分化成熟，使血小板生成及釋放增加；降低毛細(xì)血管脆性，防治出血傾向。藥理與毒理的實(shí)驗(yàn)研究也表明本發(fā)明藥物在升高正常小鼠血小板的同時(shí)，縮短了小鼠的出、凝血時(shí)間，延長(zhǎng)了小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，促進(jìn)了未成年小鼠的生長(zhǎng)；小鼠急性毒性試驗(yàn)以成人口服量的200倍灌胃，未見1例死亡及異常表現(xiàn)；大鼠慢性毒性試驗(yàn)分別以成年人口服劑量的50倍和100倍灌胃6月，其體重、食欲、血常規(guī)、肝腎功能以及臟器的病理檢查均未見異常變化。為進(jìn)一步證實(shí)本發(fā)明藥物的療效及安全性，現(xiàn)提供相應(yīng)的藥理毒理學(xué)、實(shí)驗(yàn)研究及臨床研究資料一、本發(fā)明藥物的止血作用和藥理研究1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物昆明種小鼠，體重1722g;昆明種未成年小鼠，體重1012g;SD大鼠，體重200250g;新西蘭家兔2.02.5kg。上述動(dòng)物均健康，雌雄兼用，由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。1.2藥物本發(fā)明藥物組成中藥由岳陽(yáng)醫(yī)院中藥制劑室煎煮濃縮分別制成含生藥量2g/ml、4g/ml的水煎劑；對(duì)照藥為安絡(luò)血注射液，上海信誼藥廠生產(chǎn)，批號(hào)為920203;止血敏注射液，上海第一制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)92124;強(qiáng)的松片，上海信誼藥廠生產(chǎn)，批號(hào)9207090。2方法與結(jié)果2.1本發(fā)明藥物對(duì)小鼠出血時(shí)間(BT)的影響采用田島改良法，取小鼠60只，隨機(jī)均分5組，按表l灌胃給藥，l次/d，連續(xù)5d，末次給藥后30min，將小鼠固定，露鼠尾于外，用手術(shù)刀切割1/2處左尾靜脈(嚴(yán)格控制切割深度)，待血流溢出開始用秒表計(jì)時(shí)，每隔30s用濾紙吸去血滴，但不能擠壓斷面，直至血流自然停止，觀察并記錄BT，結(jié)果見表l。中、高劑量本發(fā)明藥物均能縮短BT，各劑量組與安絡(luò)血組比較無顯著差異(P>0.05)。表l生血靈對(duì)小鼠BT的影響(X±s，下同)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注:與生理鹽水組比較P<0.05，PO.01(下同)。2.2本發(fā)明藥物對(duì)小鼠凝血時(shí)間(CT)的影響采用毛細(xì)玻管法，取小鼠60只，隨機(jī)均分5組，按表2灌胃給藥，l次/d，連續(xù)5d,末次給藥30min后，以毛細(xì)玻管作眼眶內(nèi)眥穿剌，取血達(dá)5cm血柱，秒表計(jì)時(shí)，每隔30s折斷毛細(xì)玻管一小截，檢查有無血凝絲，記錄從毛細(xì)玻管采血至出現(xiàn)血凝絲時(shí)間，結(jié)果本發(fā)明藥物各劑量組均能縮短CT，與止血敏比較無顯著差異(P>0.05)，見表2。表2本發(fā)明藥物對(duì)小鼠CT的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.3本發(fā)明藥物對(duì)小鼠血小板計(jì)數(shù)(BPC)的影響取小鼠60只，隨機(jī)均分5組，按表3灌胃給藥，l次/d，連續(xù)5d，末次給藥后30min，摘眼球取血，用微吸管吸取20nl于1%草酸銨溶液0.4ml內(nèi)，充分搖勻，吸l小滴置于計(jì)數(shù)板，靜止1015min后在顯微鏡下用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)格計(jì)數(shù)，觀察各組的BPC，結(jié)果見表3。表明本發(fā)明藥物各組均能升高小鼠的BPC，與強(qiáng)的松組比較均無顯著差異(P>0.05)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.4本發(fā)明藥物對(duì)家兔骨髓產(chǎn)板型巨核細(xì)胞的影響取家兔40只，隨機(jī)均分5組，按表4灌胃給藥，l次/d，連續(xù)21d，末次給藥后2h，骨穿取血，涂片鏡檢，計(jì)數(shù)巨核細(xì)胞總數(shù)及產(chǎn)板型巨核細(xì)胞百分比，結(jié)果見表4。表明巨核細(xì)胞總數(shù)各組間無明顯差異(P>0.05)，但產(chǎn)板型巨核細(xì)胞百分比中、高劑量本發(fā)明藥物二組明顯高于生理鹽水對(duì)照組，高劑量本發(fā)明藥物組又顯著高于強(qiáng)的松對(duì)照組(P<0.05)。表4本發(fā)明藥物對(duì)家兔骨髓巨核細(xì)胞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2.5本發(fā)明藥物對(duì)大鼠血漿皮質(zhì)醇含量的影響取大鼠24只，隨機(jī)均分2組，給藥組灌胃本發(fā)明藥物5g/kg，對(duì)照組給以等體積生理鹽水，連續(xù)40d后斷頭處死，收集抗凝全血2ml，離心取血漿，用放射免疫法(由上海市放射醫(yī)學(xué)免疫中心檢測(cè))測(cè)定皮質(zhì)醇含量(ng/ml)，結(jié)果皮質(zhì)醇含量:本發(fā)明藥物纟i為8.32士2.84，生理鹽水組為5.81±2.36，P<0.05;表明本發(fā)明藥物能顯著增加大鼠血衆(zhòng)皮質(zhì)醇含量。2.6本發(fā)明藥物對(duì)小鼠抗疲勞試驗(yàn)的影響小鼠負(fù)重游泳法取小鼠24只，隨機(jī)分成2組，給藥組灌胃本發(fā)明藥物10g/kg，對(duì)照組給予等體積生理鹽水，連續(xù)7d，末次給藥后lh，給小鼠尾部掛上1/10體重量的負(fù)重物，放入27'C水中，以小鼠沉于水底為指標(biāo)，記錄各鼠負(fù)重游泳時(shí)間(min)。記錄結(jié)果為本發(fā)明藥物組4.85士1.88，生理鹽水組2.64±1.16，PO.Ol，表明本發(fā)明藥物能明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。2.7本發(fā)明藥物對(duì)未成年小鼠生長(zhǎng)的影響取未成年小鼠24只，隨機(jī)分成2組，分別灌胃本發(fā)明藥物10g/kg和等體積生理鹽水，l次/d，連續(xù)15d，末次給藥后24h稱體重，處死動(dòng)物，剖取心、肝、肺、脾、腎臟器稱重，結(jié)果見表5，其中各臟器重量以mg/10g體重表示。從表中可以看出本發(fā)明藥物對(duì)未成年小鼠生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，且本發(fā)明藥物組肝、腎重高于生理鹽水組，其余各臟器二組間無顯著差異。表5本發(fā)明藥物對(duì)未成年小鼠體重及臟器重量的影響組n體重增心重肝重脾重肺重腎重別長(zhǎng)(g)(mg/10g)(mg/10g)(mg/10g)(mg/10g)(mg/10g)本發(fā)明1211.89±52.67±546.92±50.91±62.21±119.55±藥物0.98**4.4038.51*4.483.234.93*生理1210.67±50.11±510.50±50.67±60.31±115.25±鹽水0.823.6626.793.834.224.702.8急性毒性試驗(yàn)取小鼠15只，每只灌胃本發(fā)明藥物80g/kg(相當(dāng)于成人口服量的200倍)，給藥1次，觀察3d，未見小鼠死亡，亦無異常表現(xiàn)，毛色光潤(rùn)，活潑如常，表明小鼠最大耐受量〉80g/kg。2.9慢性毒性試驗(yàn)取SD大鼠30只，隨機(jī)均分3組，2個(gè)藥物組分別按成人口服量的50倍(20g/kg)和100倍(40g/kg)的本發(fā)明藥物灌胃，對(duì)照組給等體積生理鹽水，l次/d，連續(xù)6月。結(jié)果本發(fā)明藥物對(duì)各組動(dòng)物的體重、食欲無影響，肝腎功能和血常規(guī)均無異常，與對(duì)照組比較未見明顯差異(PX).05)，動(dòng)物的心、肝、脾、肺、腎臟器的病理檢查各組均未見異常。二、本發(fā)明藥物對(duì)ITP患者骨髓巨核系祖細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)作用具有健脾補(bǔ)腎瀉火作用的本發(fā)明藥物治療特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)取得了良好療效，且無明顯副反應(yīng)。為了進(jìn)一步探索本發(fā)明藥物的作用機(jī)理，我們采用了甲基纖維素法體外培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)20例ITP患者的骨髓進(jìn)行了巨核系祖細(xì)胞(CFU-Meg)培養(yǎng)，與紅細(xì)胞生成素(EPO)和白細(xì)胞介素-3(IL-3)比較，觀察了本發(fā)明藥物對(duì)ITP患者骨髓CFU-Meg生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)作用。1材料與方法1.1培養(yǎng)對(duì)象ITP患者20例，男7例、女13例，年齡2162歲，平均33.2歲；病程0.516年，平均9.2年。均符合首屆全國(guó)血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。1.2培養(yǎng)材料1.2.1骨髓細(xì)胞懸液制備取患者骨髓液2~3ml，以含有肝素10u/ml的RPMI1640培養(yǎng)液稀釋，經(jīng)7號(hào)針頭沖打骨髓小粒，用細(xì)胞分離液(比重為1.077)密度梯度離心，收集界面層單個(gè)核細(xì)胞，洗滌3次，最后用IMDM培養(yǎng)液(pH:7.27.4)制成2xl06/ml的細(xì)胞懸液，以臺(tái)盼蘭試驗(yàn)鑒別細(xì)胞活力，單個(gè)核細(xì)胞存活率在90%以上。1.2.2植物血凝素一單個(gè)核細(xì)胞條件培養(yǎng)液(PHA—MNCCM)參照Prival等的方法，取健康人肝素抗凝全血，密度梯度離心，分離出單個(gè)核細(xì)胞，洗滌3次后，用IMDM制成lx106/1111的細(xì)胞懸液，加入1XPHA-P(植物血球凝集素P，V/V)和5XAB型血槳，分裝于培養(yǎng)瓶中，置于37'C、5%C02、飽和濕度的培養(yǎng)箱，第6天收集上清液，過濾分裝、低溫保存?zhèn)溆谩?.2.3本發(fā)明藥物滅菌制劑本發(fā)明藥物由本院中藥制劑室制備成每毫升含生藥5g的水煎劑。1.2.4促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素EPO(Erythropoietin)美國(guó)AMGEN公司。1.2.5重組人白細(xì)胞介素-3(rhlL-3)北京醫(yī)科大學(xué)免疫教研室提供，蛋白含量1.5mg/ml(0.5xl06u/mg)、純度90%，使用前用0.45um微孔濾器過濾除菌。1.3實(shí)驗(yàn)分組及培養(yǎng)方法1.3.1對(duì)照組參照Messner甲基纖維素法，將"105個(gè)單個(gè)核細(xì)胞接種于直徑35mm的培養(yǎng)皿中，每ml培養(yǎng)體系中含0.9X甲基纖維素、5%PHA-MNCCM、30%去血小板AB型血漿、5xl(rSM2-巰基乙醇，用IMDM培養(yǎng)液補(bǔ)足至lml。1.3.2本發(fā)明藥物組在對(duì)照組培養(yǎng)體系基礎(chǔ)上加入本發(fā)明藥物300mg。1.3.3EPO組在對(duì)照組培養(yǎng)體系基礎(chǔ)上加入EPO2IU。1.3.4IL-3組對(duì)照組加入rhlL-3500U。1.3.5EPO+本發(fā)明藥物組對(duì)照組加入EPO1IU和本發(fā)明藥物150mg。1.3.6IL-3+本發(fā)明藥物組對(duì)照組加入rhIL-3250U和本發(fā)明藥物150mg。上述各組培養(yǎng)體系分別加入培養(yǎng)皿后，將培養(yǎng)皿置于37'C、5%C02、飽和濕度的C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14天，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取其均值。1.4觀察計(jì)數(shù)于培養(yǎng)第7天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，第14天觀察并進(jìn)行集落計(jì)數(shù)，3個(gè)或3個(gè)以上細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)作為一個(gè)集落，并用毛細(xì)玻管將單個(gè)集落取出涂片，瑞氏一姬姆薩染色、細(xì)胞組化染色進(jìn)一步確定細(xì)胞成分。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果培養(yǎng)第7天可見細(xì)胞團(tuán)出現(xiàn)，14天集落數(shù)達(dá)高峰，本發(fā)明藥物組和IL-3組CFU-Meg平均產(chǎn)率均顯著高于對(duì)照組，本發(fā)明藥物組又高于IL-3組，但無顯著差異(P>0.05);EPO組平均產(chǎn)率無明顯增加，而半劑量EPO與半劑量本發(fā)明藥物合用后，其產(chǎn)率明顯增加，且高于單用EPO組(PO.01);半劑量IL-3與半劑量本發(fā)明藥物共培養(yǎng)后，其產(chǎn)率也較單用IL-3明顯增加(P〈0.01)，參見表6。表6本發(fā)明藥物、EPO、IL-3對(duì)ITP患者骨髓CFU-Meg作用的培養(yǎng)產(chǎn)率<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>三、本發(fā)明藥物治療ITP的臨床研究ITP是一種自身免疫所致的常見出血性疾病，腎上腺皮質(zhì)激素一直是治療本病的首選藥物，然其應(yīng)用因副反應(yīng)多，長(zhǎng)期緩解率低而受到了限制。我們根據(jù)中醫(yī)理論，結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)，采用本發(fā)明藥物治療ITP患者56例，取得了良好的療效。1資料與方法1.1臨床資料86例患者均為2000年1月2003年2月岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院血液科門診和住院的ITP患者，全部符合全國(guó)血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的有關(guān)ITP的診斷標(biāo)準(zhǔn)。按照隨機(jī)數(shù)字表分為2組1)治療組56例，其中男18例，女38例；年齡1.264歲，平均37.2歲；病程0.530年，平均7.4年；血小板計(jì)數(shù)(BPC)10xl0968xl09/L，平均39.28xl()9/L;中醫(yī)辯證為血熱絡(luò)傷型8例，脾虛失統(tǒng)型12例，脾腎陰虧型36例。2)對(duì)照組30例，其中男9例，女21例；年齡15-64歲，平均36.0歲；病程0.5-29年，平均6.4年；BPC12x10964xl09/L，平均38.87x109/1^中醫(yī)辯證為血熱絡(luò)傷型4例，脾虛失統(tǒng)型9例，脾腎陰虧型17例。兩組一般情況比較均無顯著差異，具有可比性。3)正常組20名健康人為健康獻(xiàn)血員和健康實(shí)習(xí)生，其中男6例，女14例；年齡20~48歲，平均34.0歲，其性別、年齡與上述ITP患者比較無顯著性差異(P>0.05)。1.2治療方法治療組用本發(fā)明藥物(由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥制劑中心制成口服顆粒沖劑)治療，每次l包(含生藥量12g)，3次/d，開水沖服；對(duì)照組用強(qiáng)的松(上海信誼藥廠生產(chǎn)，5mg/片)治療，每日4060mg(lmg'kg^d-1),分3次口服。兩組病例均治療觀察3個(gè)月以上統(tǒng)計(jì)療效。1.3觀察項(xiàng)目及方法BPC采用東亞K1000細(xì)胞分析儀測(cè)定，血小板相關(guān)抗體(PAIg)采用ELISA法檢測(cè)，配套試劑盒購(gòu)自太陽(yáng)生物技術(shù)公司；自然殺傷細(xì)胞活性(NKCA)采用乳酸脫氫酶(LDH)釋放改良法測(cè)定，試劑盒購(gòu)自晶美生物工程有限公司；白細(xì)胞介素-4(IL-4)采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫法測(cè)定，試劑盒購(gòu)自上海森雄科技實(shí)用有限公司；淋巴細(xì)胞亞群使用美國(guó)BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀檢測(cè)；此外，觀察骨髓象及全身癥狀、副反應(yīng)。'1.4療效標(biāo)準(zhǔn)出血程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照全國(guó)中醫(yī)內(nèi)科學(xué)會(huì)制定的ITP出血程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。I級(jí)無出血或在損傷后有輕度的出血；II級(jí)輕度皮膚黏膜出血，或月經(jīng)增多，但有局限性；m級(jí)皮膚黏膜明顯出血，月經(jīng)顯著增多，或有其它內(nèi)臟出血，有時(shí)尚需采取局部止血措施(如鼻腔填塞)，Hb>100g/L;IV級(jí)出血嚴(yán)重或有內(nèi)臟明顯出血，Hb<100g/L，常需采取積極的止血措施。療效標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)第二屆全國(guó)血液學(xué)術(shù)會(huì)議制定的ITP療效標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定。顯效血小板恢復(fù)正常，無出血癥狀持續(xù)3個(gè)月以上，維持2年以上無復(fù)發(fā)者為基本治愈；良效血小板升至50xl(f/L或較原水平上升30xl(f/L以上，無或基本無出血癥狀，持續(xù)2個(gè)月以上；進(jìn)步血小板有所上升，出血癥狀改善持續(xù)2周以上；無效血小板及出血癥狀無改善或惡化。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料數(shù)據(jù)以Y土S表示，治療前后均數(shù)比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)用^檢驗(yàn)；等級(jí)資料用Ridit分析。2結(jié)果2.1出血癥狀變化經(jīng)本發(fā)明藥物和強(qiáng)的松治療后，兩組患者的出血癥狀均有減輕，以肌衄、鼻衄和月經(jīng)量多的改善尤為明顯。兩組治療前后出血分級(jí)變化，經(jīng)Ridit分析，差異顯著(PO.05),但兩組間比較無顯著差異(P>0.05)。見表7。表7兩組治療前后出血分級(jí)比較<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.2兩組療效比較治療3個(gè)月后本發(fā)明藥物治療組總有效率為85.71%，對(duì)照組為83.33%，本發(fā)明藥物治療組強(qiáng)的松治療組治療前566治療后3019治療前303治療后138兩組比較無明顯差異；治療6個(gè)月后本發(fā)明藥物治療組總有效率為91.07%，對(duì)照組為53.33%，治療組明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。見表8。表8兩組療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注"P頓，與強(qiáng)的松治療組比較2.3BPC的變化治療組治療前BPC平均為(39.28土12.77)xl09/L，治療2個(gè)月時(shí)明顯上升，隨后穩(wěn)定上升；治療3個(gè)月后為(66.76±16.28>109丄，增值(27.48±15.96)xl09/L;治療6個(gè)月時(shí)為(78.卯±26.55)xi。9/L，增值(39.72±24.98)xl。9/L。對(duì)照組治療前BPC平均為(38.87士13.63)xl09/L，在治療l個(gè)月時(shí)明顯上升，2個(gè)月時(shí)到高峰，隨后有所下降；治療3個(gè)月后為(68.57±22.97)xl09/L，增值(29.70±19.24)xl09/L;治療6個(gè)月時(shí)為(58.30±17.17)xl09/L，增值(19.43±12.28)xl09/L。治療3個(gè)月時(shí)，兩組治療前后比較均有顯著性差異(PO.Ol)，但增值間相比無差異；而治療6個(gè)月時(shí)，治療組顯著高于對(duì)照組(PO.Ol)。2.4血小板相關(guān)抗體的變化治療前兩組患者PAIg均明顯高于正常值(PAIgG:034ng/107pl;PAIgA:0~9.3ng/107pl;PAIgM:0~9.6ng/107pl)，治療后3~6個(gè)月(平均4.6個(gè)月)顯著下降，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但兩組間比較無顯著差異，結(jié)果見表9。表9兩組治療前后PAIg的變化(X±s，ng/107PL)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>治療組36例患者治療前后均測(cè)定了NKCA和IL-4，并與正常人進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，ITP患者的NKCA明顯低于正常組，用本發(fā)明藥物治療3~6個(gè)月(平均5.3個(gè)月)后明顯增高；IL-4治療前明顯高于正常人，治療后顯著下降，與正常人比較無顯著差異(P>0.05)，結(jié)果見表IO。表10本發(fā)明藥物治療前后NKCA、IL-4比較<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注AAP0.01,與治療前比較。2.6本發(fā)明藥物對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響治療組30例患者治療前CD3+、CD4+百分值及CD4VCD8+比值均顯著低于正常組，CD8+則明顯高于正常組，治療后CD3+、CD4+顯著上升，CD8+明顯下降，004+/008+比值顯著上升，且接近正常。見表ll。表11本發(fā)明藥物治療前后T細(xì)胞亞群的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注AAP0.01，與治療前比較；"<0.05,^<0.01,與正常對(duì)照組比較2.7本發(fā)明藥物對(duì)骨髓象的影響治療組36例患者治療前后均作了骨髓涂片鏡檢對(duì)照。每張涂片治療前巨核細(xì)胞數(shù)11-262個(gè)，治療后898個(gè)。用本發(fā)明藥物治療后，顆粒巨核細(xì)胞顯著減少，產(chǎn)板型巨核細(xì)胞明顯增加。見表12。表12本發(fā)明藥物治療前后骨髓巨核細(xì)胞的變化(X±s，％)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注AP0.05，AAP0.01,與治療前比較。2.8全身癥狀及副反應(yīng)治療組治療后，在出血癥狀改善的同時(shí)，一般癥狀也有好轉(zhuǎn)。頭暈乏力由治療前的38例減至8例，腰酸由31例減至9例，易于感冒由12例減至3例，束臂試驗(yàn)33例陽(yáng)性轉(zhuǎn)陰18例。服藥過程中無明顯不良反應(yīng)。對(duì)照組對(duì)頭暈乏力、腰酸等癥狀無明顯改善，半數(shù)病人出現(xiàn)體重增加、胃脘不適、不寐、月經(jīng)紊亂、易于感冒等副反應(yīng)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例1本發(fā)明顆粒劑的制備稱取下述原料(g):生黃芪240、女貞子200、生白術(shù)120、炒白芍120、制首烏200、菟絲子150、炒丹皮120、炒枳殼60、仙鶴草300、景天三七150、連翹150、炎甘草60。制備方法為上述中藥按重量份組分配方，取飲片用水浸泡，加水煎煮二次。第一次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎2h，第二次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎lh，棄渣過濾合并兩次濾液，沉淀12h，取上清液濃縮成稠膏，加白糊精50%、甜菊糖適量，6(TC低溫，濃縮成干膏粉，制成棕色細(xì)顆粒劑后分裝成12g/包。實(shí)施例2本發(fā)明口服液的制備稱取下述原料(g):生黃芪240、女貞子200、生白術(shù)120、炒白芍120、制首烏200、菟絲子150、炒丹皮120、炒枳殼60、仙鶴草300、景天三七150、連翹150、炙甘草60。制備方法為上述中藥按重量份組分配方，取飲片用水浸泡，加水煎煮二次。第一次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎lh，第二次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎0.5h，棄渣過濾合并兩次濾液，放置沉淀12h，取上清液濃縮至適量，趁熱加入蔗糖、防腐劑適量，攪勻使成全量，分裝于200ml瓶。權(quán)利要求1.一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物，其特征在于由以下重量份的原料藥劑制備而成生黃芪10～50份、女貞子10～50份、生白術(shù)5～50份、炒白芍5～50份、制首烏10～50份、菟絲子5～50份、炒丹皮5～50份、炒枳殼2～25份、仙鶴草10～60份、景天三七5～50份、連翹5～50份、炙甘草2～25份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的重量份的原料藥劑為生黃芪1530份、女貞子1530份、生白術(shù)10~30份、炒白芍1030份、制首烏1530份、菟絲子1030份、炒丹皮1030份、炒枳殼515份、仙鶴草20-40份、景天三七1030份、連翹1030份、炙甘草515份。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的重量份為生黃芪24份、女貞子20份、生白術(shù)12份、炒白芍12份、制首烏20份、菟絲子15份、炒丹皮12份、炒枳殼6份、仙鶴草30份、景天三七15份、連翹15份、炙甘草6份。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物還包括藥學(xué)上可甩輔料。5.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物可制成任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物，其特征在于所述劑型為顆粒劑或口服液。7.—種制備權(quán)利要求1治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物的方法，包括顆粒劑制備工藝和口服液制備工藝。8.根楣權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述顆粒劑制備工藝為步驟為將各組分中藥按重量份組分配方，取飲片用水浸泡，加水煎煮二次，棄渣過濾合并兩次濾液，沉淀，取上清液濃縮成稠膏，加稠膏重量50wt。/o的白糊精、甜菊糖適量，6(TC低溫，濃縮成干膏粉，制成棕色細(xì)顆粒劑后分裝成12g/包。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述加水煎煮二次為第一次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎2h，第二次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎lh。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述口服液制備工藝步驟為將各組分中藥按重量份組分配方，取飲片用水浸泡，加水煎煮二次，第一次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎lh，第二次達(dá)到沸點(diǎn)后再煎0.5h，棄渣過濾合并兩次濾液，放置沉淀12h，取上清液濃縮至適量，趁熱加入蔗糖、防腐劑適量，攪勻使成全量，分裝于200ml瓶。全文摘要本發(fā)明涉及一種治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的藥物組合物及其制備方法，所述藥物組合物包括以下組分原料藥劑生黃芪、女貞子、生白術(shù)、炒白芍、制首烏、菟絲子、炒丹皮、炒枳殼、仙鶴草、景天三七、連翹、炙甘草。根據(jù)本發(fā)明方法可以制備成顆粒劑或口服液。所制備的藥物組合物安全、有效、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)又適合我國(guó)國(guó)情并可以推廣應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K9/10GK101313953SQ20081004083公開日2008年12月3日申請(qǐng)日期2008年7月22日優(yōu)先權(quán)日2008年7月22日發(fā)明者周永明,峻李,黃振翹申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院