專利名稱：：抗原劑量降低的加強(qiáng)免疫疫苗的制造技術(shù)
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請(qǐng)屬于組合疫苗，即含有來自一種以上病原體的混合免疫原的疫苗的制造領(lǐng)域，使得疫苗的給予可使對(duì)象同時(shí)免疫對(duì)抗一種以上的病原體。
背景技術(shù)：
：在2005年，兩種青少年加強(qiáng)免疫疫苗在美國(guó)注冊(cè)為BOOSTRIXtm和ADACELtm[i]。兩種疫苗含有白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素和無細(xì)胞百日咳抗原。這兩種疫苗的共同特征是，相對(duì)于嬰幼兒疫苗，它們的抗原劑量較低，例如BOOSTRIXtm白喉突毒素含量比INFANRIXTM產(chǎn)品低10倍，ADACEL比DAPTACELJM低7.5倍。而且，抗原組分的比例也不同。具體說，INFANRIXTM產(chǎn)品中白喉類毒素與破傷風(fēng)類毒素的比例為2.5:1，而BOOSTRIXTM產(chǎn)品中為1:2，DAPTACEIJM中為3:1而ADACEIJM產(chǎn)品中為1:2.5。因此，這些加強(qiáng)免疫疫苗中白喉類毒素劑量顯著降低，包括絕對(duì)量和相對(duì)于破傷風(fēng)類毒素含量的相對(duì)量。本發(fā)明的目的是提供制造這種類型的疫苗組合物的改良方法。發(fā)明詳述不是將單獨(dú)部分的白喉和破傷風(fēng)抗原混合的方法來制造加強(qiáng)免疫疫苗組合物，本發(fā)明采用(i)包含白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素的第一部分，和(ii)包含破傷風(fēng)類毒素而沒有白喉類毒素的第二部分。這種安排有利于由相同部分制造嬰幼兒和青少年疫苗第一部分可具有適合嬰幼兒疫苗的白喉:破傷風(fēng)比率，第二部分用于降低白喉類毒素的相對(duì)量，如青少年疫苗中那樣。因此，單一部分將滿足疫苗制造商的兩種功能，從而簡(jiǎn)化了制造過程。例如，可制備混合的白喉/破傷風(fēng)部分并檢測(cè)其臨床釋放參數(shù)(無菌度、效能、抗原含量等)，然后保存?zhèn)溆?。如果需要嬰幼兒疫苗，則該部分無需進(jìn)一步調(diào)節(jié)白喉/破傷風(fēng)比率即可使用，但是如果需要青少年疫苗則不再需要制備白喉材料。不需要制備或測(cè)試或儲(chǔ)存單價(jià)白喉類毒素部分，從而簡(jiǎn)化了制造過程。儲(chǔ)存混合的白喉/破傷風(fēng)部分，制造商不難制備嬰幼兒疫苗；通過額外儲(chǔ)存單價(jià)破傷風(fēng)類毒素部分以補(bǔ)充白喉/類毒素部分，制造商不難在嬰幼兒和青少年制劑間進(jìn)行交換而無需單獨(dú)的單價(jià)白喉類毒素部分，例如取決于健康護(hù)理提供者的要求的改變。因此，本發(fā)明提供了制造疫苗的方法，其中所述疫苗包含白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素，所述方法包括以下步驟將(i)含有白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素的第一部分與(ii)含有破傷風(fēng)類毒素而沒有白喉類毒素的第二部分混合。疫苗還可包含抗原，例如無細(xì)胞百日咳抗原、滅活的脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原等。這些抗原可以在制造過程中以獨(dú)立部分的形式使用，和/或它們可以在制造過程開始時(shí)摻入第一和/或第二部分中。疫苗可包含佐劑，例如包含一種或多種鋁鹽(例如氫氧化鋁)的佐劑。佐劑可以在制造過程中以獨(dú)立部分的形式使用，和/或它們可以在制造過程開始之前摻入第一和/或第二部分中。第一水性教分本發(fā)明方法中使用的第一部分包含白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素。第一部分中的白喉和破傷風(fēng)類毒素優(yōu)選吸附(更優(yōu)選完全吸附)在氫氧化鋁佐劑上。吸附可通過單獨(dú)制備類毒素，使它們分別吸附到氫氧化鋁佐劑上來實(shí)現(xiàn)，然后將這兩種吸附的類毒素(任選地與另外的佐劑和任何其他所需組分)進(jìn)行混合以得到第一部分。第一部分可包含防腐劑，例如l-羥基-2-苯氧乙垸(也稱為"2-羥乙基苯基醚"、"2-苯氧乙醇"、"乙二醇苯基醚"等)。然而，優(yōu)選該部分不含防腐劑，尤其不含l-羥基-2-苯氧乙烷。然而，如果第一部分包含l-羥基-2-苯氧乙垸，其濃度優(yōu)選為(a)每100Lf-白喉類毒素2.5-3.5mg(例如約3mg)，禾卩/或(b)每100Lf破傷風(fēng)類毒素7-8mg(例如約7.5mg)。第一部分中可采用l-羥基-2-苯氧6乙烷濃度3-8g/l(例如4-6g/1,或約5g/l)。第一部分不含汞防腐劑(例如柳硫汞)。第一組分中白喉類毒素與破傷風(fēng)類毒素的比率(以Lf單位表示)宜在2:1到3:1之間，優(yōu)選約為2.5:1。第一部分中白喉類毒素與破傷風(fēng)類毒素的濃度如下，以每毫升表示(±10%):167Lf白喉類毒素，和67Lf破傷風(fēng)類毒素。作為一種替代方式，類毒素的濃度可以是這些值的分?jǐn)?shù)，前提是相對(duì)比例(比率)保持一致，例如簡(jiǎn)單稀釋所得結(jié)果。第一部分可包含除類毒素、佐劑和任選的防腐劑之外的其他化合物。具體說，第一部分可包含氯化鈉和/或殘留的甲醛。氯化鈉濃度為每100Lf白喉類毒素5-6mg氯化鈉，優(yōu)選8-9mg/ml(例如約8.5mg/ml)。第一部分優(yōu)選不含聚山梨酯80。第二水絲齡本發(fā)明方法中使用的第二部分包含破傷風(fēng)類毒素，但沒有白喉類毒素。第二部分中的破傷風(fēng)類毒素吸附在氫氧化鋁佐劑上。然而，優(yōu)選地，破傷風(fēng)類毒素不含佐劑，尤其是不含鋁鹽。如果第二部分中的破傷風(fēng)類毒素吸附在氫氧化鋁佐劑上，則本發(fā)明方法可包括以下初始步驟將不含鋁的破傷風(fēng)制劑與氫氧化鋁佐劑混合的步驟。在本發(fā)明方法中使用之前，混合的佐劑和類毒素靜置一段時(shí)間以實(shí)現(xiàn)吸附。第二部分可包含防腐劑，例如1-羥基-苯氧乙烷。然而，優(yōu)選該部分不含防腐劑，尤其不含l-羥基-2-苯氧乙烷。第二部分不含汞防腐劑(例如柳硫汞)o第二部分優(yōu)選不含聚山梨酯80。,類素白喉是由白喉棒狀桿菌(Cw7wek/cfen'wwa^/^er/ae)，一種或多革蘭氏陽性無孢子需氧菌產(chǎn)生的。該生物體表達(dá)原噬菌體編碼的ADP核糖基化外毒素("白喉毒素")，(例如用甲醛)處理后得到無毒但保留抗原性的類毒素，能夠在注射后刺激特異性抗毒素抗體的產(chǎn)生。參考文獻(xiàn)2的第13章更詳細(xì)地公開了白喉類毒素。優(yōu)選的白喉類毒素是經(jīng)過甲醛處理的毒素。用可以補(bǔ)充牛提取物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基(如Fenton培養(yǎng)基，或Linggoud和Fenton培養(yǎng)基)培養(yǎng)白喉棒桿菌(C.diphtheriae)，接著進(jìn)行甲醛處理、超濾和沉淀，從而獲得白喉類毒素。通過包括無菌過濾和/或透析的方法處理此類毒素化物質(zhì)?？捎脟?guó)際單位(IU)表示白喉類毒素的量。例如，NIBSC提供了"吸附的白喉類毒素的第三國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)1999，，[4，5]，其含有160IU/安瓿。作為IU系統(tǒng)的替代形式，"Lr單位("絮凝單位"、"邊界絮凝劑量"或"絮凝限值")定義為與一個(gè)國(guó)際單位的抗毒素混合時(shí)，產(chǎn)生最優(yōu)絮凝混合物的類毒素量[5]。例如，NIBSC提供了"白喉類毒素，Plain"[6]，其含有300LF/安瓿，也提供了"用于絮凝試驗(yàn)的白喉類毒素的第一國(guó)際參比試劑"[7]，其含有900Lf/安瓿。IU與Lf系統(tǒng)間的轉(zhuǎn)換取決于特定的類毒素制劑。白喉棒狀桿菌的培養(yǎng)過程中采用牛材料時(shí)，它們應(yīng)獲自未患牛海綿狀腦病(BSE)或其他傳染性海綿狀腦病(TSE)的來源。破傷風(fēng)是由破傷風(fēng)梭菌(C7oWnVZ/wmfe^m;j，一種革蘭氏陽性有芽孢桿菌產(chǎn)生的。該生物體表達(dá)內(nèi)肽酶("破傷風(fēng)毒素")，經(jīng)處理后得到無毒但保留抗原性的類毒素，能夠在注射后刺激特異性抗毒素抗體的產(chǎn)生。參考文獻(xiàn)2的第27章更詳細(xì)地公開了破傷風(fēng)類毒素。優(yōu)選的破傷風(fēng)類毒素是經(jīng)過甲醛處理的毒素。用生長(zhǎng)培養(yǎng)基(如衍生自牛酪蛋白的Latham培養(yǎng)基)培養(yǎng)破傷風(fēng)梭菌(C.tetani)，然后進(jìn)行甲醛處理、超濾和沉淀，從而獲得破傷風(fēng)類毒素。然后通過包括無菌過濾和/或透析的方法處理此物質(zhì)?？捎脟?guó)際單位(IU)表示破傷風(fēng)類毒素的量。例如，NIBSC提供了"吸附的破傷風(fēng)類毒素的第三國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)2000"[9,10]，其含有469IU/安瓿。作為IU系統(tǒng)的替代形式，"Lf，單位定義為與一個(gè)國(guó)際單位的抗毒素混合時(shí)，產(chǎn)生最優(yōu)絮凝混合物的類毒素量[U]。例如，NIBSC提供了"用于絮凝試驗(yàn)的破傷風(fēng)類毒素的第一國(guó)際參比試劑"[12]，其含有1000Lf/安瓿。IU與Lf系統(tǒng)間的轉(zhuǎn)換取決于特定的類毒素制劑。破傷風(fēng)梭菌的培養(yǎng)過程中采用牛材料時(shí)，它們應(yīng)獲自未患牛海綿狀腦病(BSE)或其他傳染性海綿狀腦病(TSE)的來源。無鍾廳膽綠百日咳博德特菌(^^&&//0戸WM肌》是一種可引起哮咳的革蘭氏陰性無孢子需氧菌。如參考文獻(xiàn)2的第21章中詳細(xì)記錄的那樣，抗百日咳博德特菌的疫苗已存在許多年，分為細(xì)胞和無細(xì)胞兩類。細(xì)胞疫苗包含完整百日咳博德特菌細(xì)胞，經(jīng)殺死和滅活(例如通過用福爾馬林和/或加熱處理)，而無細(xì)胞疫苗包含特異性純化的百日咳博德特菌，從天然桿菌純化或在重組宿主中表達(dá)后純化。本發(fā)明的方法可涉及利用無細(xì)胞百日咳抗原來提供包含白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素和無細(xì)胞百日咳抗原的疫苗。通常本發(fā)明在單一疫苗中利用一種以上的無細(xì)胞百日咳(aP)抗原，例如兩種或三種以下公知且很好表征的百日咳博德特菌抗原(l)解毒的百日咳毒對(duì)百日咳類毒素或"PT");(2)絲狀血細(xì)胞凝集素("FHA");(3)百日咳桿菌粘附素(pertactin)(也稱為"69千道爾頓外膜蛋白")。最優(yōu)選使用所有三種抗原。優(yōu)選從改良的StainerScholte液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的百日咳博德特菌培養(yǎng)物中分離制備這三種抗原?？蓮陌l(fā)酵肉湯中(如通過吸附于羥基磷灰石凝膠)分離PT和FHA，但可通過加熱處理和絮凝(如采用氯化鋇)從細(xì)胞中提取百日咳桿菌粘附素?？捎眠B續(xù)的色譜和/或沉淀步驟純化抗原。可通過疏水性層析、親和層析和大小排阻層析純化PT和FHA?？赏ㄟ^離子交換層析、疏水性層析和大小排阻層析純化百日咳桿菌粘附素。^T賴f^"發(fā)剪之^;^^伊^^邀FHA和百日咳桿菌粘附素。優(yōu)選通過甲醛和/或戊二醛處理使pt脫毒。作為這神眾學(xué)厲毒方法游夢(mèng)/e形式，pt可以是通過誘變降低了酶活性的突變PT[14]，但優(yōu)選用化學(xué)處理脫毒。可使用的其他無細(xì)胞百日咳抗原可包含菌毛(如凝集原2和3)。aP抗原可以未吸附狀態(tài)使用，但優(yōu)選它們?cè)谑褂弥拔皆谝环N或多種鋁鹽佐劑。aP抗原優(yōu)選吸附在氫氧化鋁佐劑上?？蓪P抗原加入第一和/或第二部分中，或者它們可以是獨(dú)立的部分添加。如果使用一種以上的aP抗原，可將每種aP抗原以其單獨(dú)部分添加，或者可以在使用之前將aP抗原可組合成同一部分。優(yōu)選地，aP組分基本上不含l-羥基-2-苯氧乙烷。優(yōu)選地，aP組分基本上不含汞防腐劑(例如柳硫汞)。aP組分可包括聚山梨酯80。百日咳組分中聚山梨酯80的含量使得該組分任意稀釋后能夠確保百日咳抗原在最終疫苗產(chǎn)品中處于所需的濃度，聚山梨酯80濃度小于200微克/毫升，優(yōu)選小于100微克/毫升。通常最終疫苗產(chǎn)品中聚山梨酯濃度約為70-90微克/毫升，例如約80微克/毫升。在本發(fā)明方法中使用之前aP組分中聚山梨酯80的含量上限優(yōu)選小于40微克/10微克FHA。無細(xì)胞百日咳抗原的量一般用微克表示。對(duì)于PT、FHA和百日咳桿菌粘附的組合，優(yōu)選選擇每種抗原的含量使得最終疫苗中PT:FHA:百日咳桿菌粘附的比率為8:8:2.5。鄉(xiāng)腳微應(yīng)，毒拔嚴(yán)脊髓灰質(zhì)炎可能由三種類型的脊髓灰質(zhì)炎病毒之一引起。這三種類型相似，并且引起相同的癥狀，但它們的抗原性差異很大，被一種類型感染后并不能保護(hù)其免受其它類型的感染。如參考文獻(xiàn)2第24章所述，本發(fā)明方法優(yōu)選采用三種脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原1型脊髓灰質(zhì)炎病毒(如Mahoney毒株)、2型脊髓灰質(zhì)炎病毒(如MEF-1毒株)和3型脊髓灰質(zhì)炎病毒(如Saukett毒株)。本發(fā)明的方法可涉及利用滅活的脊髓灰質(zhì)炎病毒(IPV)抗原來提供包含白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素和滅活的脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原的疫苗。脊髓灰質(zhì)炎病毒可以在細(xì)胞培養(yǎng)物中培養(yǎng)。優(yōu)選的培養(yǎng)物是Vero細(xì)胞系，它是從猴腎分離得到的連續(xù)細(xì)胞系。Vero細(xì)胞可方便地培養(yǎng)成小載體。病毒感染之前和感染期間的Vero細(xì)胞的培養(yǎng)可涉及使用來自牛的材料，例如小牛血清，使用乳球蛋白水解產(chǎn)物(例如由乳球蛋白酶降解得到的產(chǎn)物)。這些來自牛的材料應(yīng)從不患有BSE或其他TSE的來源獲取。培養(yǎng)后，可用諸如超濾、滲濾和層析純化病毒顆粒。給予患者之前，脊髓灰質(zhì)炎病毒必須被滅活，這可通過在本發(fā)明方法中使用該病毒之前用甲醛處理來實(shí)現(xiàn)。三種脊髓灰質(zhì)炎病毒優(yōu)選單獨(dú)培養(yǎng)、純化和滅活，然后合并形成本發(fā)明方法中使用的整體混合物。合并的脊髓灰質(zhì)炎病毒優(yōu)選在本發(fā)明方法中使用之前不吸附在任何佐劑上，但在添加后它們可吸附到疫苗組合物中已經(jīng)存在的鋁佐劑上。可將IPV抗原加入第一和/或第二部分中，或者它們可以是獨(dú)立的部分添加。優(yōu)選地，IPV組分基本上不含l-羥基-2-苯氧乙烷。優(yōu)選地，IPV組分基本上不含汞防腐劑(例如柳硫汞)。優(yōu)選地，IPV抗原基本上不含聚山梨酯80，例如聚山梨酯80的含量小于0.1微克/毫升，優(yōu)選不含可檢測(cè)含量的聚山梨酯80。然而，在IPV組分的制備過程中已經(jīng)使用了聚山梨酯80。IPV抗原可包含痕量的新霉素和/或多粘菌素。一般用"DU"單位("D-抗原單位"[15])表示IPV抗原的量。優(yōu)選選擇每種單獨(dú)毒株中的抗原含量，使得最終疫苗中1型:2型:3型DU比率為5:1:4。真雜逸微嚴(yán)優(yōu)選利用本發(fā)明來制備三價(jià)白喉-破傷風(fēng)-百日咳疫苗或制備四價(jià)白喉-破傷風(fēng)-百日咳-脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗。然而，除了白喉、破傷風(fēng)、百日咳和IPV抗原之外，本發(fā)明疫苗還可包含一種或多種其他抗原，例如來自乙型肝炎病毒、來自乙型流感嗜血桿菌、來自肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏菌、甲型肝炎病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、風(fēng)疹病毒、輪狀病毒、流感病毒等的抗原。乾浙如本文所述，在本發(fā)明方法中使用之前，抗原可吸附到鋁佐劑上(它們是"預(yù)先吸附"的)。目前使用的鋁佐劑通常稱為"氫氧化鋁"或"磷酸鋁"佐劑。這些名稱方便使用，但它們都不是所代表的實(shí)際化合物的準(zhǔn)確描述[例如參見參考文獻(xiàn)15的第9章]。本發(fā)明可采用通常用作佐劑的任何"氫氧化物"或"磷酸鹽"佐劑。稱為"氫氧化鋁"的佐劑一般是羥基氧化鋁鹽(通常至少部分為晶體)。羥基氧化鋁以分子式A10(0H)表示，其與其它鋁化合物，例如氫氧化鋁A1(0H)3的區(qū)別在于紅外(IR)光譜，特別是在1070cm'1處存在吸收帶和在3090-3100cm"處存在強(qiáng)烈的肩峰[參考文獻(xiàn)15的第9章]。半峰高處衍射帶的寬度(WHH)反映了氫氧化鋁佐劑的結(jié)晶程度，結(jié)晶不佳的顆粒因晶體尺寸較小而顯示更強(qiáng)的譜線增寬。表面積隨WHH的增加而增加，WHH值較大的佐劑顯示吸附抗原的能力較強(qiáng)。氫氧化鋁佐劑呈典型的纖維形態(tài)(例如，電子透射顯微照片所見的)。氫氧化鋁佐劑的pl通常約11，即在生理pH下佐劑本身具有表面正11電荷。據(jù)報(bào)道，pH7.4時(shí)，氫氧化鋁佐劑的吸附能力在每mgAl+++1.8-2.6mg蛋白質(zhì)之間。稱為"磷酸鋁"的佐劑一般是羥基磷酸鋁，這些佐劑也常含有少量硫酸根?？赏ㄟ^沉淀獲得這些佐劑，沉淀期間的反應(yīng)條件和濃度影響磷酸根取代該鹽中羥基的程度。羥基磷酸鹽中P04/A1摩爾比通常在0.3-1.2之間。羥基磷酸鹽因存在羥基而有別于嚴(yán)格的A1P04。例如，3164cm—1的IR光譜帶(例如，當(dāng)加熱至200'C時(shí))表明存在結(jié)構(gòu)性羥基[參考文獻(xiàn)16的第9章]。磷酸鋁佐劑的PCVA產(chǎn)摩爾比通常在0.3-1.2之間，優(yōu)選在0.8-1.2之間，更優(yōu)選0.95±0.1。磷酸鋁通常是無定形的，特別是羥基磷酸鹽。典型的佐劑是P(VA產(chǎn)摩爾比在0.84-0.92之間，含0.6mgAl3+/ml的無定形羥基磷酸鋁。磷酸鋁通常是顆粒狀的(例如，電子透射顯微照片中所見的平板樣顆粒)。這些顆粒在吸附任何抗原后的典型直徑是0.5-20nm(例如，約5-10pm)。據(jù)報(bào)道，pH7.4時(shí)，磷酸鋁佐劑的吸附能力在每mgAl+++0.7-1.5mg蛋白質(zhì)之間。磷酸鋁的零電荷點(diǎn)(PZC)與磷酸根取代羥基的程度成反比，而該取代程度依據(jù)沉淀制備該鹽所用的反應(yīng)條件和反應(yīng)物濃度而不同。也可通過改變?nèi)芤褐杏坞x磷酸根離子的濃度(磷酸根越多-PZC酸性越高)或通過添加例如組氨酸緩沖液(使得PZC更具堿性)等緩沖液來改變PZC。本發(fā)明所用磷酸鋁的PZC通常在4.0-7.0之間，更優(yōu)選在5.0-6.5之間，例如約5.7。本發(fā)明疫苗可具有氫氧化鋁佐劑，或者它們可具有組合的氫氧化鋁/磷酸鋁佐劑。如果同時(shí)存在氫氧化鋁和磷酸鋁，兩種鋁鹽中A產(chǎn)的含量?jī)?yōu)選為3:2(例如0.6mg/mlAl3+來自氫氧化鋁，0.4mg/mlAl3+來自磷酸鋁)。青少年加強(qiáng)免疫疫苗的A產(chǎn)含量可能是最佳免疫的關(guān)鍵[17]。本發(fā)明產(chǎn)生的疫苗中總的鋁含量(由A產(chǎn)表示)優(yōu)選大于0.25mg/ml，但優(yōu)選小于1.5mg/ml，例如約0.6mg/ml。為了得到所需的最終A產(chǎn)含量，可以在合并之前在各部分中加入合適的A產(chǎn)含量和/或以單獨(dú)部分的形式加入額外的鋁鹽，例如組合第一部分、第二部分和第三部分，其中所述第三部分含有鋁佐劑。本發(fā)努旅激備艦勞在典型的應(yīng)用中，本發(fā)明的方法將用于提供適合包裝、然后適合分配和給藥的散裝組合疫苗。上述濃度通常是最終包裝疫苗中的濃度，因此散裝疫苗中的濃度可能較高(例如，需要通過稀釋以降至最終濃度)。因此，本發(fā)明的方法可包括將疫苗包裝在容器中以供使用的額外步驟。容器可裝有單劑量疫苗，或者它們可裝有一劑以上疫苗("多劑量"容器)，例如，10齊U。當(dāng)采用多劑量藥瓶時(shí)，各劑量應(yīng)在嚴(yán)格無菌條件下用無菌針頭和針筒取出，同時(shí)要小心避免污染藥瓶的內(nèi)容物。優(yōu)選單劑量容器。多個(gè)單劑量容器可包裝在一起，例如io個(gè)單劑量藥瓶包裝在一起。合適的容器包括藥瓶和一次性針筒。它們優(yōu)選是無菌的。尤其優(yōu)選包裝到針筒內(nèi)，使得疫苗準(zhǔn)備好給予最終使用者。針筒可配有附連的針頭，但也可以沒有針頭?？稍卺樛采咸峁┛蓜冸x的印有內(nèi)容物批號(hào)和有效期的標(biāo)簽(例如，條形碼)以方便記錄保存。針筒可包括彩色(例如綠色)條帶以便識(shí)別其內(nèi)容物。針筒內(nèi)的柱塞優(yōu)選有制動(dòng)器以防止柱塞在抽吸過程中意外被拉出。針筒可具有乳膠橡皮帽和/或柱塞。針筒通常會(huì)具有針帽以在附加針頭之前密封針尖，且該針帽優(yōu)選由丁基橡膠制成。如果針筒和針頭是獨(dú)立包裝的，則優(yōu)選為針頭配備丁基橡膠護(hù)罩。優(yōu)選灰色丁基橡膠。針筒可具有包括閉鎖機(jī)構(gòu)的針尖以固定針頭，例如Tip-Lok。合適的針筒是以商品名Tip-LokTM或HypakPRTC銷售的那些。如果將疫苗包裝在藥瓶中，藥瓶由塑料材料構(gòu)成，或者優(yōu)選由玻璃構(gòu)成。藥瓶在疫苗加入之前優(yōu)選無菌。為避免乳膠敏感患者的問題，優(yōu)選用不含乳膠的密封藥瓶。將組合物包裝到容器中后，可將容器密封到用于分銷的箱子，如紙板箱中。箱子標(biāo)上該疫苗的詳細(xì)情況，例如商品名、疫苗所含抗原的列表(例如"破傷風(fēng)類毒素、減毒的白喉類毒素和無細(xì)胞百日咳疫苗，吸附的"和/或"Tdap")、呈遞的容器(例如"一次性預(yù)填充的Tip-Lok注射器"或"10x0.5毫升的單劑量藥瓶")、劑量(如"各包含單劑量0.5毫升")、"僅用于青少年")、保質(zhì)期、生產(chǎn)商名稱等。每個(gè)箱子含有一個(gè)以上的包裝疫苗，例如5-10個(gè)包裝疫苗，例如5個(gè)針筒或IO個(gè)藥瓶。對(duì)于視覺效果，箱子一角的背景顏色可以便于箱子的其余部分，例如綠色箱子上的紫色角?？蓪⒁呙缗c單頁宣傳品包裝在一起(在同一個(gè)箱子中)，所述單頁宣傳品包括疫苗的詳細(xì)情況如給藥說明書、疫苗內(nèi)所含抗原的詳情等。說敏"^^^包#,浮，r夠j勸準(zhǔn)備好腎上腺素溶液以應(yīng)對(duì)疫苗接種后發(fā)生過敏反應(yīng)的情況本發(fā)明的方法尤其適用于制備具有以下組分的疫苗，以每毫升表示:抗原每毫升的濃度*白喉類毒素5Lf破傷風(fēng)類毒素10Lf滅活的百日咳毒素16pg絲狀血細(xì)胞凝集素16pg百日咳桿菌粘附素5Kg1型脊髓灰質(zhì)炎病毒"80DU2型脊髓灰質(zhì)炎病毒**16DU3型脊髓灰質(zhì)炎病毒**64DU*這些劑量以±10%表示**在4價(jià)D-T-aP-IPV疫苗中因而可計(jì)算散裝疫苗中各種抗原的濃度，散裝疫苗中加入抗原之前所需的稀釋，以及散裝到最終疫苗任何所需的稀釋，因此可執(zhí)行本發(fā)明方法以制備每劑量含有這些濃度的抗原的最終組合疫苗。最終的疫苗優(yōu)選無菌。最終的疫苗優(yōu)選無熱原，例如每劑量含有〈1EU(內(nèi)毒素單位，1EU等于0.2納克FDA參比標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素EC-2"RSE")，優(yōu)選每劑量O.lEU。最終的疫苗優(yōu)選不含谷蛋白。最終疫苗的pH優(yōu)選為6-8，例如6.5-7.5。因此，本發(fā)明方法可包括在包裝前調(diào)整混合疫苗pH的步驟。包裝疫苗優(yōu)選是混濁的白色懸浮液。包裝疫苗優(yōu)選保存于2'C-8'C。不應(yīng)被冷凍。為了控制最終疫苗產(chǎn)品的張力，優(yōu)選包含生理性鹽如鈉鹽。優(yōu)選地氯化鈉(NaCl)，例如等張氯化鈉。NaCl最終濃度為9mg/ml通常是合適的。本發(fā)明的方法過程中優(yōu)選不使用防腐劑，尤其是汞防腐劑(例如柳硫14本發(fā)明方法制備的組合疫苗優(yōu)選通過注射給予患者。優(yōu)選肌內(nèi)注射(例如裝入上臂三角肌內(nèi))。理想地應(yīng)在注射之前清潔注射部位的皮膚并用合適的殺菌劑進(jìn)行制備。通常注射體積為0.5毫升，因此本發(fā)明的方法可包括將0.5毫升散裝組合疫苗中的樣品提取和包裝到容器中的步驟。給予疫苗BOOSTRIX的針頭大小通常是22-25號(hào)針頭，長(zhǎng)度在1-1.25英寸之間(2.5-3.2厘米)。如果疫苗包含鋁鹽佐劑，則應(yīng)在給藥之前劇烈震搖以獲得均勻、混濁的白色懸浮液。疫苗優(yōu)選以加強(qiáng)疫苗的形式給予過去已經(jīng)接種過白喉和破傷風(fēng)疫苗的患者，優(yōu)選也能對(duì)抗百日咳?？筛鶕?jù)對(duì)上述疫苗的免疫學(xué)記憶應(yīng)答來分辨這些患者與普通人群。優(yōu)選患者在接受本發(fā)明疫苗之前，最近的接受白喉和/或破傷風(fēng)疫苗已經(jīng)經(jīng)歷至少5年。因此，優(yōu)選的接受疫苗的患者年齡在4-65歲，例如11-64歲，10-18歲等。本發(fā)明制備的疫苗可以與其他疫苗基本上同一時(shí)間給予患者(例如，在同一次對(duì)醫(yī)療保健專業(yè)機(jī)構(gòu)或疫苗接種中心的醫(yī)療咨詢或就診期間)，例如與腦膜炎球菌偶聯(lián)疫苗(例如四價(jià)血清群A-C-W135-Y疫苗)和/或多價(jià)肺炎球菌偶聯(lián)疫苗等基本上同時(shí)給予。這些其他疫苗應(yīng)用單獨(dú)的針筒給予，并且在不同于本發(fā)明疫苗的注射部位給予。類似地疫苗可與破傷風(fēng)免疫球蛋白基本上同一時(shí)間給予。對(duì)于任意特定的抗原，疫苗接種規(guī)定(例如WHO規(guī)定)推薦或建議最終疫苗中應(yīng)存在一定量的抗原。該信息(例如10微克/劑量)可與疫苗劑量體積(例如0.5毫升劑量)組合以計(jì)算該抗原在散裝疫苗中所需的濃度。本發(fā)明的方法尤其適用于制備每0.5毫升劑量具有以下組分的疫苗<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*這些劑量以±10%表示**在4-價(jià)D-T-aP-IPV疫苗中縦術(shù)語"含有"包掛'包含"以及"由...組成"，例如"含有"X的組合物可僅由X組成或可包含其它物質(zhì)，例如X+Y。詞語"基本上"不排除"完全"，例如"基本上無"Y的組合物可完全無Y。該詞語"基本上"可視需要從本發(fā)明定義中省去。與數(shù)值x有關(guān)的術(shù)語"約"表示，例如x±10%。如果使用玻璃容器，相比鈉鈣玻璃更優(yōu)選硼硅玻璃。如果組分描述為"吸附"在佐劑上，優(yōu)選至少50%(重量％)的抗原被吸附，例如50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或更多。如果組分被完全吸附，則離心后組合物上清液中應(yīng)不存在可檢測(cè)的含量。附圖簡(jiǎn)要說明圖1顯示了吸附的白喉和破傷風(fēng)類毒素的混合疫苗的制備。實(shí)施例實(shí)細(xì)//舒蒙少物艦編"-7^尸鄉(xiāng)第一部分抗原組分的制備如圖l所示。它具有以下組成:組分每毫升的濃度*白喉類毒素167Lf破傷風(fēng)類毒素67Lf氫氧化鋁佐劑6.91mgl-羥基-2-苯氧乙垸5mg氯化鈉8.5mgPH6.0-6.3*這些劑量以土10%表示白喉和破傷風(fēng)類毒素都完全吸附在佐劑上，該部分樣品離心后上清液中不存在可檢測(cè)的含量。該部分可用于制備嬰幼兒D-T-aP疫苗，例如每劑量含有25Lf白喉類毒素和10Lf破傷風(fēng)類毒素。對(duì)于與白喉類似地相比，需要更多破傷風(fēng)類毒素(以Lf單位衡量)的青少年加強(qiáng)免疫劑量，則不能使用該部分。如果該部分稀釋至白喉類毒素所需的最終劑量2.5Lf，則稀釋的破傷風(fēng)類毒素劑量?jī)H為1Lf，比所需劑量低5倍。稀釋的A^+劑量(0.1mg)也將低于參考文獻(xiàn)17所述的最低有效劑量。因此必須調(diào)節(jié)白喉:破傷風(fēng)比率和A產(chǎn)劑量。為了調(diào)節(jié)白喉:破傷風(fēng)比率，制備包含濃縮的破傷風(fēng)類毒素(在3000Lf/ml到3000Lf/ml之間；氯化鈉在8mg/ml到9mg/ml之間；pH為7.0-7.8)的第二部分。第二部分不含其他抗原，無佐劑也沒有防腐劑。將這兩部分抗原與包含額外的鋁佐劑(氫氧化鋁和磷酸鋁)、吸附在氫氧化鋁佐劑上的無細(xì)胞百日咳抗原和氯化鈉合并并稀釋，得到具有所需最終濃度和組分比率的散裝組合疫苗。該方法可用于制備具有以下組成的疫苗，以每毫升表示組分每毫升的量*白喉類毒素5Lf破傷風(fēng)類毒素10Lf滅活的百日咳毒素16jLlg絲狀血細(xì)胞凝集素16百曰咳桿菌粘附素1mg0.6mg來自氫氧化鋁0.4mg來自磷酸鋁將該部分以0.5毫升的劑量包裝到Tip-LokTM針筒中。疫苗可用于過去已經(jīng)接受D-T-P疫苗的青少年的加強(qiáng)免疫。因此，第一部分可用作嬰幼兒和青少年D-T-P疫苗的基礎(chǔ)。,應(yīng)伊"/不診銀腐浙游減毒效^/)-r-^茇欺為了消除實(shí)施例i制備的疫苗中的防腐劑，采用另一種第一部分?；旌喜襟E期間不加入l-羥基-2-苯氧乙烷。為了降低鋁含量，不加入磷酸鋁佐劑。包裝后，每個(gè)不含防腐劑的0.5毫升劑量具有以下組成組分每劑量的量*白喉類毒素2.5Lf破傷風(fēng)類毒素5Lf滅活的百日咳毒素8pg絲狀血細(xì)胞凝集素Mg百曰咳桿菌粘附素2.5pg<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*這些劑量以±10%表示實(shí)盧,/D-:r-fl尸-w度勞為制備4-價(jià)D-T-aP-IPV疫苗，將散裝混合的IPV加入實(shí)施例1的方法中，得到具有以下內(nèi)容物的最終疫苗，以每0.5毫升劑量表示<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*這些劑量以±10%表示應(yīng)理解，僅以舉例的方式描述了本發(fā)明，可在本發(fā)明的范圍和構(gòu)思內(nèi)進(jìn)行修改。參考文獻(xiàn)(其內(nèi)容被納入本文作為參考)Broder等，(2006)MM^77ecommi印55(RR3):1-34。[2〗《疫苗》(Vaccines),(Plotkin和Orenstein編)，第4版，2004，ISBN:0-7216-9688-0.國(guó)立生物標(biāo)準(zhǔn)與控制研究院(7Va"o"a//"幼'fwfe/orS/am/arafeflf"t/Cow^o";PottersBar,UK.www."/Zwc.ac.wA:Sesardic等，(2001)所o/og/ca/j29:107-22。[5]NIBSC代碼98/560。WHO的免疫系列的免疫學(xué)基礎(chǔ)模塊1(Module1ofWHO'S77ze/mmwwo/og/ca/6腦'sybr,mm,'加"owsm'es)(Galazka)。[7]NIBSC代碼69/017。[8]NIBSC代碼DIFT。國(guó)立生物標(biāo)準(zhǔn)與控制研究院(7Va/o"a//"W"w^/wStom/ara^fl"c/Co"&o/);PottersBar,UK.www.m'foc.ac.w*Sesardic等，(2002)說.o/og/ca/s30:49-68。[11]NIBSC代碼98/552。WHO的免疫系列的免疫學(xué)基礎(chǔ)模塊(lModule1ofWHO'S77^/mwwwo/og/ca/6咖'51ybr/w羅m'z加'owsen'e力(Galazka)。[13]NIBSC代碼TEFT。[14]Rappuoli等，(1991)9:232-238。WHO的免疫系列的免疫學(xué)基礎(chǔ)模塊6(Module6ofWHO'S77ze/mwwwo/og/ca//Anm廳'za^/owse〃'es)(Robertson)《疫苗設(shè)計(jì)亞單位和佐劑方法》(&cc/"eZ)^/gw:7TzeSw6柳"am/爿《ww"ZJ;;TOac/0(Powell&Newman編)PlenumPress1995(ISBN0-306-44867-X)。Theeten箏'(2005)Facc/"e23:1515-21。19權(quán)利要求1.一種制造疫苗的方法，其中所述疫苗包含白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素，所述方法包括以下步驟將(i)含有白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素的第一部分與(ii)含有破傷風(fēng)類毒素而沒有白喉類毒素的第二部分混合。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述疫苗還包含一種或多種無細(xì)胞百日咳抗原。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述疫苗包括滅活的百日咳毒素、絲狀血細(xì)胞凝集素和百日咳桿菌粘附素。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述滅活的百日咳毒素、絲狀血細(xì)胞凝集素和百日咳桿菌粘附素的重量比為8:8:3。5.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述疫苗還包含滅活的脊髓灰質(zhì)炎病毒(IPV)抗原。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含分別來自l型脊髓灰質(zhì)炎病毒株、2型脊髓灰質(zhì)炎病毒株和3型脊髓灰質(zhì)炎病毒株的IPV抗原。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述IPV抗原中1型:2型:3型的DU比為5:1:4。8.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含一種或多種鋁鹽佐劑。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含氫氧化鋁佐劑。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述疫苗還包含磷酸鋁佐劑。11.如權(quán)利要求O所述的方法，其特征在于，所述疫苗不含磷酸鋁佐劑。12.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第一部分中的白喉和破傷風(fēng)類毒素被吸附在氫氧化鋁佐劑上。13.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第一部分不含汞防腐劑。14.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第一部分包含防腐劑。15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述第一部分包含l-羥基-2-苯氧乙烷。16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述第一部分包含約5g/1的l-羥基-2-苯氧乙垸。17.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第一部分不含防腐劑。18.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素以白喉:破傷風(fēng)Lf單位之比約2.5:1存在。19.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第一部分中每100Lf的白喉類毒素包含5-6mg的氯化鈉。20.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第一部分不含聚山梨酯80。21.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第二部分不含鋁鹽。22.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第二部分不含汞防腐劑。23.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第二部分不含防腐劑。24.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第二部分不含聚山梨酯80。25.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述疫苗A產(chǎn)含量約為0.25-1.5mg/ml。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，所述疫苗A產(chǎn)含量約為0.6mg/ml。27.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將疫苗包裝到容器中的步驟。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，所述容器是藥瓶。29.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，所述容器是針筒。30.如權(quán)利要求2-29中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，每毫升所述疫苗包含以下成分5Lf白喉類毒素，10Lf破傷風(fēng)類毒素，16ng滅活的百日咳毒素，16pg絲狀血細(xì)胞凝集素，5pg百日咳桿菌粘附素。31.如權(quán)利要求5-29中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，每毫升所述疫苗包含以下成分5Lf白喉類毒素，10Lf破傷風(fēng)類毒素，16pg滅活的百日咳毒素，16pg絲狀血細(xì)胞凝集素，5fig百日咳桿菌粘附素，80DUMahoney脊髓灰質(zhì)炎病毒株，16DUMEF1脊髓灰質(zhì)炎病毒株和64DUSaukett脊髓灰質(zhì)炎病毒株。32.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，每毫升所述疫苗中內(nèi)毒素含量小于l個(gè)單位。33.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述疫苗不含防腐劑。全文摘要一種制造疫苗的方法，其中所述疫苗包含白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素，所述方法包括以下步驟將(i)含有白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素的第一部分與(ii)含有破傷風(fēng)類毒素而沒有包含類毒素的第二部分混合。這種安排有利于由相同部分制造嬰幼兒和青少年疫苗第一部分可具有適合嬰幼兒疫苗的白喉∶破傷風(fēng)比率，第二部分用于降低白喉類毒素的相對(duì)量，如青少年疫苗中那樣。文檔編號(hào)A61K39/295GK101522217SQ200780037461公開日2009年9月2日申請(qǐng)日期2007年8月15日優(yōu)先權(quán)日2006年8月16日發(fā)明者E·弗林斯申請(qǐng)人:諾華有限公司