專利名稱：：藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種藥物組合物，即包括丹參丹酚酸A和活血化瘀類中藥有效分；本申請中藥活血化瘀類有效成分是指下述中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；本申請中藥活血化瘀類有效成分是根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽涞玫健?br>背景技術(shù)：
：君藥是中藥方劑中重要組成部分，君藥的確立對研究中藥方劑、創(chuàng)新中藥具有重大意義。君藥，是針對主病或主癥(包括病機(jī))，起主要治療作用的成分，簡言之"主治藥為君"，一張方劑，無論藥味多少，都必須有君藥的存在，君藥是方劑的靈魂，君藥在，方劑在，君藥變，方劑則變，君藥亡，則方劑亦亡；總之，君藥是方劑的主體，有其方必有其君，沒有君藥的方劑是不存在的；傳統(tǒng)中藥的方劑的確定，是以中藥原藥材為基礎(chǔ)，這是宏觀意義的組方，中藥要進(jìn)行現(xiàn)代化、國際化，要進(jìn)行發(fā)展，方劑的組方應(yīng)在微觀上進(jìn)行研究，近年來隨著中藥血清藥理學(xué)、中藥血清藥動學(xué)、中藥胃腸藥動學(xué)等技術(shù)的發(fā)展，對方劑的研究確定應(yīng)放在中藥組分有效部位或有效成分上，特別是入血的中藥活血化瘀類有效成分，這是微觀意義的君臣佐使，從中發(fā)掘效應(yīng)物質(zhì)，建立量效關(guān)系，研究中藥中主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，探明中藥復(fù)方配伍規(guī)律，、藥效作用機(jī)制的基礎(chǔ)，只有這樣，才能不斷推出效應(yīng)物質(zhì)組方合理、工藝先進(jìn)、高效安全、體現(xiàn)中醫(yī)藥特色的中藥新藥，才能推動中藥走向世界。丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.根及根莖，性微寒，味苦，具有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩作用，用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、癥瘕積聚、胸腹刺痛、熱痹疼痛、瘡瘍腫痛、肝脾腫大、心絞痛等癥，是中藥活血化瘀的常用藥味；研究表明丹參中主要活性成分是丹參丹酚酸A(杜冠華基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2000，20(5):1014、胡義揚(yáng)中藥藥理學(xué)報(bào)，1997，18(5):478-480)，但因?yàn)楝F(xiàn)有技術(shù)的缺陷，無法得到批量級的丹酚酸A，主要是因?yàn)榈⒌し铀酇在丹參中含量很低，只有萬分之五左右，即使通過一系列的工藝將其提取出，只能得到微量級的丹酚酸A，因此，無法將丹參丹酚酸A與其它中藥組分有效部位或有效成分進(jìn)行方劑組方研究，雖然已經(jīng)有丹參與其它中藥進(jìn)行配伍的研究，但主要研究的重點(diǎn)還是在丹參丹酚酸B的組方，這種研究具有一定的效果，但沒有將中藥中最有效成分進(jìn)行研究，無法達(dá)到優(yōu)效的效果；査閱文獻(xiàn)和專利，未有丹參丹酚酸A進(jìn)行方劑組方研究的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容基于上述原因，我們通過對丹參藥材進(jìn)行一系列的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，即將丹參總酚酸通過一定的化學(xué)反應(yīng)得到了批量級的丹參丹酚酸A;藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)(1)丹參丹酚酸A對離體大鼠胸主動脈環(huán)具有舒血管作用；(2)丹酚酸A對KC1預(yù)收縮血管環(huán)具有舒張作用；(3)丹#丹酚酸A對PE所致離體胸預(yù)收縮的主動脈環(huán)大鼠具有舒張作用；(4)丹酚酸A對麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用；(5)丹酚酸A對結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍具有減小作用；(6)丹酚酸A對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷保護(hù)作用；從藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中我們可以確認(rèn)，丹參丹酚酸A完全具有丹參的祛瘀止痛、活血通經(jīng)的中醫(yī)理論，可以將丹參丹酚酸A作為中藥方劑的君藥使用，能夠按照中醫(yī)理論方劑配伍原則，將一部分中藥組分有效部位或有效成分與丹參丹酚酸A進(jìn)行配伍，得到具有君臣佐使關(guān)系的現(xiàn)代中藥方劑，再通過量效關(guān)系研究、藥效篩選研究、藥效論證研究、藥代動力學(xué)研究、毒理學(xué)研究，確定本發(fā)明方劑具有科學(xué)意義。本申請通過下述方案實(shí)現(xiàn)的s藥物組合物，包括丹參丹酚酸A與下述中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；其中丹參丹酚酸A1—10重量份，上述中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種為1—50重量份；藥物組合物，其中丹參丹酚酸A為1一5重量份，上述中藥活血化瘀類有效成分為20—50重量份。藥物組合物，其中丹參丹酚酸A為6—10重量份，上述中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種為1一19重量份；藥物組合物中丹參丹酚酸A的含量大于等于50%且小于100%;其中藥物組合物制備成的單位劑量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液、水針禍、輸液劑、粉針劑；其中片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液單位劑量為10mg—5000mg;單位劑量低于10mg在臨床使用中沒有效果，單位劑量大于5000mg在臨床使用會產(chǎn)生一定的毒副反庫；其中片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液優(yōu)選單位劑量為20mg—3000mg;其中水針劑、輸液劑、粉針劑的單位劑量為5mg—2000mg;單位劑量低于5mg在臨床使用中沒有效果，單位劑量大于2000mg在臨床使用會產(chǎn)生一定的毒副反應(yīng)；其中水針劑、輸液劑、粉針劑的優(yōu)選單位劑量為10mg—1000mg;本申請中藥活血化瘀類有效成分是指下述中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；本申請中藥活血化瘀類有效成分是根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽涞玫?；上述藥物組合物還可以加入人參皂苷、黃芪皂苷、山楂總黃酮、燈盞花素甘草酸和甘草次酸及其衍生物、紅花黃色素、冰片中的一種或幾種。一、制備方法丹參丹酚酸A提取純化丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5—9.0、30—8(TC溫度、加熱l一6小時或調(diào)PH值至3.5—6.0、110一13(TC溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1一6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，大孔樹脂柱為HPD-IOO、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8，先用水、10—30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30—70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A;或丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5—9.0、30—8(TC溫度、加熱1—6小時或i周PH值至3.5—6.0、110一13(TC溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1一6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，大孔樹脂柱為HPD-IOO、HPD-100HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8,先用水、10—30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30—70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺柱層析分離，先用水、20—50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50—95Q/^乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A;或丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5—9.0、30—8(TC溫度、加熱1—6小時或調(diào)PH值至3.5—6.0、110一13(TC溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1一6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，大孔樹脂柱為HPD-IOO、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-1、1400或AB國8，先用水、10_30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30—70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺柱層析分離，先用水、20—50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50—95%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2—5，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A;本申請中藥活血化瘀類有效成分是指下述中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；本申請中藥活血化瘀類有效成分是根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽涞玫?；現(xiàn)有技術(shù)是指現(xiàn)有文獻(xiàn)和專利中公開的的方法，同時也包括市場銷售。制劑制備取丹參丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分，按照藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液、水針劑、輸液劑、粉針劑。二、檢測分析方法l.丹參丹酚酸A檢測分析方法色譜柱Qs反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS;色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min;柱溫35。C;檢測波長286nm;以乙腈-0.2%醋酸水溶液為流動相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘；0-15分鐘時，乙腈的比例由10%升至20%，0.2%醋酸水溶液的比例由90%降至80%;15-55分鐘時，乙腈的比例由20%升至30%，0.2%醋酸水溶液的比例由80%降至70%;55-65分鐘時，乙腈的比例由30%升至50%，0.2%醋酸水溶液的比例由70%降至50%;65-72分鐘時，乙腈的比例由50%升至80%,0.2%醋酸水溶液的比例由50%降至20%;72-77分鐘時，乙腈的比例80%，0.2%醋酸水溶液的比例20%;77-80分鐘時，乙腈的比例由80%降至10%,0.2%醋酸水溶液的比例由20%升至90%;80-90分鐘時，保持乙腈-0.2%醋酸水溶液以10:90的比例進(jìn)行洗脫；對照品溶液的配制精密稱取丹酚酸A對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；樣品溶液的配制精密稱取丹酚酸A樣品，加入甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度;或精密量取或稱取制劑，進(jìn)行預(yù)處理，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；2.中藥活血化瘀類有效成分檢測分析按照現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠杏涊d的檢測分析方法進(jìn)行檢測分析;實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表l、表2:表1原料藥的檢測分析組別含量^丹參丹酚酸AX250,<100表2制劑的檢測分析組別丹酚酸A含量中藥活血化瘀類有效成分含量本申請片劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/片本申請膠囊劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/粒本申請顆粒劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/袋本申請軟膠囊劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/粒本申請微丸劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/10丸本中請滴丸劑劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/10丸本申請口服液劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/瓶本申請水針劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/瓶本申請輸液劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/瓶20—20020—20020—20020—20020—20020—20020—2005—505—5020—畫20—100020—100020—100020—100020—100020—10005—2505—250本申請水針劑(丹酚酸A、中藥活血化瘀類有效成分為原料)mg/瓶5—505—250實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本申請藥物組合具有實(shí)際意義。三、丹參丹酚酸A藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)l丹酚酸A對離體大鼠胸主動脈環(huán)的舒血管作用l.實(shí)驗(yàn)方法取體重為250-300gWistar大鼠，雌雄兼用，麻醉處死，剪開胸腔，迅逮取出胸主動脈條上段，置于4。C的Krebs-Henseleit(K-H)液中，去除血塊和血管周圍結(jié)締組織。血管被均勻切成3mm-4mm長的血管環(huán)，迅速懸掛至離體灌流裝置中，套入上下平行的兩個不銹鋼鉤，經(jīng)張力傳感器，由Pclab-UE生物信號采集系統(tǒng)記錄張力變化。整個血管環(huán)置于20ml恒溫(37。C)通氣(95%02+5%C02)的K-H液中，調(diào)節(jié)主動脈環(huán)張力至2g，實(shí)驗(yàn)中，每隔15min換一次新鮮的Krebs液，平衡2h后，加入KC140mmol/L收縮血管環(huán)2次，直到收縮穩(wěn)定。收縮張力小于lg的血管被拋棄。再用KC1(40mmol/L)或去氧腎上腺素(phenylephrine,PE)(0.8|imol/L)預(yù)收縮血管環(huán)。以4Ommol/LKC1預(yù)收縮血管環(huán)20min后，按照累計(jì)給藥法每6min1次加入不同濃度的丹酚酸A(丹酚酸A終濃度分別為0.16、0.31、0.62、1.25、2.50、5.00mg/ml)，觀察其對收縮血管環(huán)的張力作用；對照組以K-H代替藥物等容加入。以KC140mmol/L誘發(fā)最大收縮幅度為基準(zhǔn)，以加入不同濃度的藥物后的血管舒張幅度與KC1誘發(fā)最大收縮幅度之間的比率反映血管舒張程度(血管舒張百分率)，并作血管舒張反應(yīng)的量一效曲線。計(jì)算不同濃度的藥物致血管張力變化的百分率，并求出藥物的半效有效濃度EC50。以0.8pmol/LPE預(yù)收縮血管環(huán)20min后，按照累計(jì)給藥法每6min1次加入不同濃度的丹酚酸A(丹酚酸A終濃度分別為0.04、0.08、0.16、0.31、0.62、1.25mg/ml)、丹酚酸B(丹酚酸B的終濃度為0.31、0.62、1.25、2.50、5.00、10.00mg/ml)和注射用丹參多酚酸鹽(終濃度為0.16、0.31、0.62、1.25、2.50、5.00mg/ml)，分別觀察各藥對收縮血管環(huán)的張力作用；對照組以K-H代替藥物等容加入。以PE0.8Mmol/L誘發(fā)最大收縮幅度為基準(zhǔn)，以加入不同濃度的藥物后的血管舒張幅度與PE誘發(fā)最大收縮幅度之間的比率反映血管舒張程度(血管舒張百分率)，并作血管舒張反應(yīng)的量一效曲線。計(jì)算不同濃度的藥物致血管張力變化的百分率，并分別求出不同藥物的半效有效濃度EC50。2.試驗(yàn)結(jié)果2.1丹酚酸A對KC1預(yù)收縮血管環(huán)的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，丹酚酸A在濃度為0.165.00mg/ml時呈劑量依賴性舒張4Ommol/LKC1預(yù)收縮銜大鼠主動脈環(huán)，與模型對照組比較，有顯著性差異(P<0.05或P〈0.001)。丹酚酸A的半數(shù)有效濃度為1.59mg/ml。結(jié)果詳見表3。表3丹酚酸A對KC1預(yù)收縮血管環(huán)的舒張作用(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0012.2丹酚酸A、丹酚酸B和注射用丹參多酚酸鹽對PE所致離體胸主動脈環(huán)收縮功能的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，丹酚酸A、丹酚酸B和注射用丹參多酚酸鹽均呈濃度依賴性舒張0.8^imol/LPE預(yù)收縮的大鼠主動脈環(huán)。丹酚酸A濃度在0.081.25mg/ml、丹酚酸B濃度在0.6210.00mg/ml、丹參多酚酸鹽濃度0.315.00mg/ml時，各組與模型組比較均有顯著性差異(P<0.05，0.01或0.001)。丹酚酸A顯著性舒張大鼠胸主動脈環(huán)(P<0.001)，半數(shù)有效濃度為0.26mg/ml;丹酚酸B半數(shù)有效濃度為2.85mg/ml;丹參多酚酸鹽顯著性舒張大鼠胸主動脈環(huán)(PO.OOl)，半數(shù)有效濃度為1.44mg/ml。且在同等濃度下，丹酚酸A的舒張作用明顯強(qiáng)于注射用丹參多酚酸鹽和丹酚酸B，結(jié)果詳見表4。表4不同藥物對PE預(yù)收縮血管環(huán)的舒張作用(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注與模型組相比，*P<0.05,'"PO.Ol，***P<0.001;與注射用丹參多酚酸鹽組相比，AP0.05，▲▲PO.01,▲▲▲PO.001;與丹酚酸A相比，#P<0.05，##P<0.01，###PO.001。實(shí)驗(yàn)2.丹酚酸A對麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用l.試驗(yàn)方法取健康SD大鼠108只，體重240-260g，隨機(jī)分為9組空白對照組、假手術(shù)組、模型組、注射用丹參多酚酸鹽對照組、鹽酸地爾硫卓注射液對照組、丹酚酸A劑量1組(16mg/kg)、丹酚酸A劑量2組(8mg/kg)，丹酚酸A劑量3組(4mg/kg)及丹酚酸A劑量4組(2mg/kg)。置于相同環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)2天，自由飲食。預(yù)飼養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行試驗(yàn)，動物稱重，20。/。烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機(jī)，按1012ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼吸，吸呼比為i:i。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機(jī)，測正常心電圖。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，碘酒消毒，剪開皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜34cm，用18弁血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長，打開胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開3、4肋骨,用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動脈圓錐之間找到結(jié)扎標(biāo)志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進(jìn)針深度為l1.5mm，寬23mm，穿線后記錄心電圖，經(jīng)尾靜脈給予相應(yīng)藥液，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或II導(dǎo)聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于0.lmv并持續(xù)0.5h以上為結(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無改變者淘汰)。結(jié)扎后10min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開結(jié)扎線，實(shí)現(xiàn)再灌注，并記錄再灌注即刻心電圖，清除胸腔內(nèi)積血后逐層縫合胸壁，撤呼吸機(jī)，動物恢復(fù)自主呼吸，氣管切口不做處理。再灌即刻、10min、20min、40min、lh、2h、3h分別記錄心電圖。再灌3小時，經(jīng)腹主動脈取血，4000rpm離心10min取血清，采用全自動生化分析儀檢測LDH、CK及CK-MB活性，并采用相應(yīng)試劑盒檢測血清SOD、MDA(以上指標(biāo)具體檢測步驟詳見說明書)，解剖取心臟，冰生理鹽水洗去殘血，剪去心房及右心室，立即放入冰箱中冷凍。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1。^TTC染液中，37'C染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機(jī)拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱重，計(jì)算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。梗死范圍(％)=壞死區(qū)心臟重量xl00%壞死區(qū)+非壞死區(qū)心臟重量2.試驗(yàn)結(jié)果2.1丹酚酸A對結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍(％)的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，尾靜脈給予注射用丹酚酸A后，各劑量組大鼠心肌梗死范圍均有所減小，其中劑量1、2、3組與模型組間存在顯著性差異(P<0X)01)，劑量4組有減小心肌梗死范圍的趨勢，且各劑量組之間存在良好的量效關(guān)系。與陽性藥相比，注射用丹酚酸A抗心肌缺血作用較鹽酸地爾硫卓注射液差，有優(yōu)于注射用丹參多酚酸鹽的趨勢。結(jié)果詳見表5。表5注射用丹酚酸A對結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動脈前降支所致心肌缺血/再灌注損_傷心肌梗死范圍(％)的影響(x士s)_~組別劑量(mg/kg)心肌梗死范歐％)"~模型組^24.33±11.64丹酚酸A劑量1167.99±2.52***酚酸A劑量288.48±1.22***丹酚酸A劑量3410.50±8.75***丹酚酸A劑量4218.27±5.99AA丹參多酚酸鹽4014.28±7.34^鹽酸地爾硫卓注射液2_6.04±2.09***注與模型組相比，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;與注射用丹參多酚酸鹽組相比，AP0.05,AAP0.01,▲▲▲P<0.001;與鹽酸地爾硫卓注射液組相比，AP<0.05，AAPO.Ol，AAAP〈0.001實(shí)驗(yàn)3丹酚酸A對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究1試驗(yàn)方法動物隨機(jī)分為7組，每組12只分別為假手術(shù)組(葡萄糖注射液)、模型對照組(葡萄糖注射液)、注射用尼莫地平組(0.18mg/kg)、丹酚酸A(10mg/kg)低劑量組、丹酚酸A(20mg/kg)中劑量組、丹酚酸A(40mg/kg)高劑量、丹酚酸B(40mg/kg)對照組。各劑量組連續(xù)靜脈注射給藥3天，第4天藥后20分鐘用改良線栓法制成大腦中動脈阻塞(MCAO)模型。大鼠麻醉后，將其仰臥固定。分離右側(cè)頸總動脈(CCA)、頸內(nèi)動脈(ICA)及頸外動脈(ECA)，結(jié)扎ECA與CCA，用動脈夾夾閉ICA遠(yuǎn)心端后，迅速于ECA與ICA分叉處作一切口，插入一端加熱成光滑球形并涂了0.1%多聚賴氨酸的尼龍線(直徑為0.25mm，距球端18mm處作標(biāo)記，插入前沾肝素溶液)，插入深度為18mm，實(shí)現(xiàn)大腦中動脈阻塞導(dǎo)致腦缺血。結(jié)扎入口處，尼龍線外留約lcm，縫合皮膚。2小時后輕輕提拉所留線頭至略有阻力，實(shí)現(xiàn)大腦中動脈再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注lh內(nèi)用電熱毯維持大鼠的體溫，體溫維持在肛溫36.537.5°C。假手術(shù)只結(jié)扎CCA與ECA。動物入選標(biāo)準(zhǔn)，按Longa五級評分法，取神經(jīng)功能行為評分為1、2、3、4分的動物，(0分:無神經(jīng)缺損癥狀；1分對側(cè)前肢不能完全伸直；2分向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn);3分向?qū)?cè)傾倒；4分不能自己行走或昏迷)。腦梗塞范圍測定，模型大鼠再灌注24h，行為學(xué)評分后，斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在一2(TC冰箱冷凍10min，在冰盤上冠狀切成6片，迅速將腦片置于TTC染液中，37'C避光溫孵lh，取出后置于10%甲醛液中避光保存24h。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗塞組織重量占全腦重量百分比作為腦梗塞范圍。腦含水量測定TTC染色稱重后，將大腦置于12(TC真空干燥器內(nèi)烘干12h稱干重。腦含水量=(腦濕重-腦干重)/腦濕重><100%。2.試驗(yàn)結(jié)果2.1丹酚酸A對大鼠造模后缺血2h再灌注24h神經(jīng)功能行為學(xué)的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，假手術(shù)組大鼠沒有神經(jīng)功能行為學(xué)癥狀，而模型組及各給藥組大鼠則有不同程度的神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)。各給藥組均較模型組輕。且丹酚酸A各組優(yōu)于丹參酚酸B組，與陽性對照組尼莫地平相當(dāng)。結(jié)果詳見表6。表6各組大鼠造模后缺血2h再灌注24h神經(jīng)功能行為學(xué)評分結(jié)果動物數(shù)"~劑量(維g)癥狀評分(只)假手術(shù)組§r模型組9--7.26±1.81陽性組924.05±1.78**丹酚酸B組8405.21±1.24*丹酚酸A低劑量組815.08±1.59*丹酚酸A中劑量組943:94±1.87<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注與模型組相比*<0.05，**P<0.01,***P<0.0012.2丹酚酸A對缺血再灌大鼠腦梗死范圍及腦水含量的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠腦肌梗死范圍和腦水含暈與假手術(shù)組比較均有非常顯著性差異。丹酚酸A各劑量組、丹酚酸.B組及尼莫地平組均能顯著降低大鼠的腦肌梗死范圍和腦水含量，與模型組比較有顯著性差異。且丹酚酸A各組優(yōu)于丹參酚酸B組，與陽性對照組尼莫地平相當(dāng)。結(jié)果詳見表7。表7丹酚酸A對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷大鼠腦梗塞范圍及腦水含量的影<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>_^__注與模型組相比求P0.05,**P<0.01，***P<0.001結(jié)論丹酚酸A對大鼠腦缺血再灌注損傷有顯著保護(hù)作用，其作用效果與尼莫地平相當(dāng)。四、量效關(guān)系研究丹參丹酚酸A和本申請方劑中的中藥活血化瘀類有效成分同時中藥活性成分，二者是否存在一定的量效關(guān)系，通過下述實(shí)驗(yàn)，我們有了進(jìn)一步的認(rèn)識(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、剌五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這里以西洋參皂苷為例。)實(shí)驗(yàn)方案一方案l:丹參丹酚酸厶0.2重量份；方案2:丹參丹酚酸A0.4重量份；方案3:丹參丹酚酸A0.6重量份；方案4:丹參丹酚酸A0.8重量份；方案5:丹參丹酚酸A1重量份；方案6:丹參丹酚酸A2重量份；實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機(jī)分組空白對照組、實(shí)驗(yàn)方案組。置于相同環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)2天，自由飲食。預(yù)飼養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，動物稱重，20W烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機(jī)，按1012ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼吸，吸呼比為i:i。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機(jī)，測正常心電圖。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，碘酒消毒，剪開皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜34cm，用18弁血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長，打開胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動脈圓錐之間找到結(jié)扎標(biāo)志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進(jìn)針深度為11.5mm，寬23mm，穿線后記錄心電圖，尾靜脈給藥(給藥量為12.5mg/kg)，空白對照組給予相應(yīng)量的生理鹽水，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或n導(dǎo)聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于O.lmv并持續(xù)0.5h以上為結(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無改變者淘汰)。結(jié)扎后10min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開結(jié)扎線，實(shí)現(xiàn)再灌注，再灌3小時，解剖取心臟，冰生理鹽水洗去殘血，剪去心房及右心室，立即放入冰箱中冷凍。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1XTTC染液中，37"C染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機(jī)拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱重，計(jì)算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。"梗死范圍(％)=壞死區(qū)心臟重量xl。0%_壞死區(qū)+非壞死區(qū)心臟重量_檢測指標(biāo)分別為，心肌梗死范圍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8:實(shí)驗(yàn)方案二方案h西洋參皂苷l重量份；方案2:西洋參皂苷5重量份；方案3:西洋參皂苷10重量份；方案4:西洋參皂苷20重量份；方案5:西洋參皂苷30重量份；方案6:西洋參皂苷40重量份；方案7:西洋參皂苷50重量份；實(shí)驗(yàn)方法按照上述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表9:表8丹參丹酚酸A不同方案實(shí)驗(yàn)結(jié)果心肌梗死范圍(％)方案616.54±5.33*表9西洋參皂苷不同方案實(shí)驗(yàn)結(jié)果模&-且28.37±13.82123.85±7.01222.47±7.10321.09±6<61419.97±6.27517.20±5.88*案案案案案方方方方方組別心肌梗死范圍(％)_方案7_L&17±4.67*_注將上述實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行灌胃給藥，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近。實(shí)驗(yàn)小結(jié)實(shí)驗(yàn)方案一實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參丹酚酸A由0.2重量份至0.8重量份時，與模型組比較，心臟局灶缺血面積有降低的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；當(dāng)?shù)⒌し铀酇1重量份時，與模型組比較，心臟局灶缺血面積明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同樣，實(shí)驗(yàn)方案二實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明西洋參皂苷在l一小于30重量份與模型組比較，心臟局灶缺血面積有降低的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；當(dāng)西洋參皂苷30重量份，與模型組比較，心臟局灶缺血面積明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1重量份的丹參丹酚酸A與30重量份以上的西洋參皂苷的藥效基本相同，說明等量的丹參丹酚酸A比西洋參皂苷藥效更好，提示我們在進(jìn)行配伍篩選時，當(dāng)?shù)⒌し铀嶂亓糠萆贂r，需要更多重量份的西洋參皂苷進(jìn)行補(bǔ)充，以達(dá)到很好的藥理作用。將上述實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行心腦血管實(shí)驗(yàn)、腫瘤等體外實(shí)驗(yàn)，同樣得到上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。注將上述中藥活血化瘀類有效成分與西洋參皂苷替換，進(jìn)行量效關(guān)系研究，發(fā)現(xiàn)1重量份的丹參丹酚酸A與20重量份以上的上述中藥活血化瘀類有效成分藥效基本相同，提示我們在進(jìn)行配伍研究過程中，需要更多重量份的本申請中藥活血化瘀類有效成分進(jìn)行補(bǔ)充，以達(dá)到很好的藥理作用。五、藥效篩選實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M1、對狗心肌缺血保護(hù)作用(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以銀杏內(nèi)酯為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案h丹參丹酚酸A1重量份方案2:丹參丹酚酸A1重量份方案3:丹參丹酚酸A1重量份方案4:丹參丹酚酸A1重量份方案5:丹參丹酚酸A3重量份方案6:丹參丹酚酸A5重量份方案7:丹參丹酚酸A5重量份方案8:丹參丹酚酸A5重量份方案9:丹參丹酚酸A;方案10:銀杏內(nèi)酯；實(shí)驗(yàn)方法取實(shí)驗(yàn)狗，分為生理鹽水組、實(shí)驗(yàn)方案組，給藥組分別在狗前肢皮下頭靜脈給藥，給藥量每次17.5mg/kg，生理鹽水組等容不等量，每天給藥1次，連續(xù)給藥3天，給藥第3天后用戊巴比妥鈉25mg/kg靜脈麻醉，氣管插管，接人工呼吸機(jī)加以正壓呼吸，從左側(cè)第五肋開胸，剪開心包，暴露心臟，將心包切開緣縫于胸壁，在左冠狀動脈前降支分二期結(jié)扎，并緩慢iv利多卡因8mg/kg以防結(jié)扎前可能引起的心室顫動，隨后縫合心包及胸壁。心梗后24h，狗經(jīng)戊巴比妥鈉麻，銀杏內(nèi)酯20重量份;，銀杏內(nèi)酯30重量份;，銀杏內(nèi)酯40重量份;，銀杏內(nèi)酯50重量份;，銀杏內(nèi)酯30重量份;，銀杏內(nèi)酯20重量份;，銀杏內(nèi)酯40重量份;，銀杏內(nèi)酯50重量份;說明書第19/53頁醉后處死，迅速取出心臟，切除大血管和脂肪組織，核對前降支結(jié)扎點(diǎn)的位置，稱全心重，然后切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，稱得左心室重，從心尖和開始與前降支垂直方向?qū)⒆笮氖仪谐?-3mm厚的肌片，浸于硝基四唑藍(lán)溶液(NBT)中染色30min，剪下缺血區(qū)心肌組織稱重，計(jì)算心肌梗塞范圍，艮P:心梗范圍=缺血區(qū)重/左心室重乂100%，結(jié)果見表10:表10不同方案組對狗心肌缺血的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>注與對照組比較"PO.Ol，*P<0.05;與方案9、10比較井PO.05。2、對大鼠腦梗塞的影響(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以知母皂苷為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案l:丹參丹酚酸A6重量份，知母皂苷l重量份；方案2:丹參丹酚酸A6重量份，知母皂苷5重量份；方案3:丹參丹酚酸A6重量份，知母皂苷10重量份；方案4:丹參丹酚酸A6重量份，知母皂苷19重量份；方案5:丹參丹酚酸A8重量份，知母皂苷10重量份；方案6:丹參丹酚酸A10重量份，知母皂苷l重量份；方案7:丹參丹酚酸A10重量份，知母皂苷19重量份；方案8:丹參丹酚酸A11重量份，知母皂苷l重量份；方案9:丹參丹酚酸A;方案10:知母皂苷；實(shí)驗(yàn)方法取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機(jī)分組模型對照組、實(shí)驗(yàn)方案組，各實(shí)驗(yàn)組給藥量20mg/kg，尾靜脈給藥。給藥3天后，于末次給藥l小時，取大鼠，水合氯醛300mg/kgip麻醉,頸部切口，分離并結(jié)扎右側(cè)頸總動脈，縫合肌肉皮膚后，右側(cè)位固定,在右耳和右眼外眥連線中點(diǎn)切開皮膚,分離顳肌，暴露顴突及顳骨，在顴突的頭端12mm處開一約3x3mm的骨窗，暴露大腦中動脈(MCA)，將MCA灼斷，縫合切口。參考Bederson法，處死動物，取右大腦半球，切成5片，置于2g/LNPT中37"C溫育15min染色，仔細(xì)挖取并稱重未被染成蘭色的白色梗塞腦組織，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表lh表ll對大鼠腦梗塞保護(hù)情況Sij動物數(shù)■~腦梗塞組織重量只mg方案101088.7±6.4*10122.1±76.31072.9±4.2**#1068.1±4.0**#1064.5±4.1**#1062.3±3.7**#1063.2±3.9承承#1068.1±4.2"#1058.3±4.0**#1086.2±3.9*1081.9土5.0f且經(jīng)昭f12345678-沈案案案案案案案案案型方方方方方方方方方注與對照組比較"PO.Ol,*P<0.05;與方案9、10比較ffPO.05。3、對大鼠靜脈血栓形成的影響(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以川芎嗪為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案l:丹參丹酚酸A6重量份，川芎嗪l重量份；方案2:丹參丹酚酸A6重量份，川芎嗪5重量份；方案3:丹參丹酚酸A6重量份，川芎嗪10重量份；方案4:丹參丹酚酸A6重量份，川芎嗪19重量份；方案5:丹參丹酚酸A9重量份，川芎嗪l重量份；方案6:丹參丹酚酸A10重量份，川芎嗪l重量份；方案7:丹參丹酚酸A7重量份，川芎嗪15重量份；方案8:丹參丹酚酸A11重量份，川芎嗪l重量份；方案9:丹參丹酚酸A;方案10:川芎嗪；實(shí)驗(yàn)方法取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機(jī)分組模型對照組、實(shí)驗(yàn)方案組，各實(shí)驗(yàn)組給藥量40mg/kg，灌胃給藥。給藥7天后，于末次給藥1小時，水合氯醛C350mg/kg，ip)麻醉，開腹分離下腔靜脈，于左腎靜脈下方用粗絲線結(jié)扎下腔靜脈，縫合腹部。6h后重新開腹，在結(jié)扎處下方2cm處夾閉血管，剖開管腔，取出血栓，稱重。數(shù)據(jù)用xis表示，<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>注與對照組比較"PO.Ol，*P<0.05;與方案9、10比較弁PO.05。4、對四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的影響(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以降香揮發(fā)油為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案l:丹參丹酚酸A6重量份，降香揮發(fā)油l重量份；方案2:丹參丹酚酸A7重量份，降香揮發(fā)油l重量份；方案3:丹參丹酚酸A8重量份，降香揮發(fā)油l重量份；方案4:丹參丹酚酸A9重量份，降香揮發(fā)油l重量份；方案5:丹參丹酚酸A10重量份，降香揮發(fā)油1重量份；方案6:丹參丹酚酸A8重量份，降香揮發(fā)油5重量份；方案7:丹參丹酚酸A10重量份，降香揮發(fā)油9重量份；方案8:丹參丹酚酸A6重量份，降香揮發(fā)油9重量份；方案9:丹參丹酚酸A;方案10:降香揮發(fā)油；實(shí)驗(yàn)方法取Wistar大鼠，按體重隨機(jī)分組，正常對照組、肝損傷模型組、本申請方案組(尾靜脈注射給藥，給藥量為20mg/kg)。除正常對照組外，各組動物腹腔注射10MCCU植物油0.5ml/100g體重，每周兩次，共12周，正常對照組ip生理鹽水。造模同時每日ig給藥一次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，動物禁食12小時，取股動脈血，以3000轉(zhuǎn)/分離心IO分鐘，分離血清，測定GPT、GOT，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表13:表13不同方案組對肝損傷的影響結(jié)果方案10_101.85±13.25*_127.35通20515注與模型組比較"P0.01，*P<0.05;與方案9、方案10比較井P0.05。5、抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛fe素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以芍藥苷為例進(jìn)行闡述)方案l:丹參丹酚酸A10重量份，芍藥苷l重量份；20.03±2.32**126.71±20.3052.33±8.52**#47.61±9.10**#42.97±7.52**#40.51±7.30**#37.20±6.95**#43.26±8.76**#35.20±6.92**#46.31±7.93**#82.36ill.19*34.17±5.01**183.50±56.9279.13±26.31**#71.26±24.94**#65.43±19.82**#62.37±20.29**#59.72±18.46**#67.52±21.68**#56.91±17.35**#70.48±24.19**#119.27±34.21*照1案案案案案案案案案對模方方方方方方方方方方案2:丹參丹酚酸A9重量份，芍藥苷l重量份；方案3:丹參丹酚酸A9重量份，芍藥苷2重量份；方案4:丹參丹酚酸A8重量份，芍藥苷5重量份；方案5:丹參丹酚酸A7重量份，芍藥苷19重量份；方案6:丹參丹酚酸A6重量份，芍藥苷22重量份；方案7:丹參丹酚酸A5重量份，芍藥苷30重量份；方案8:丹參丹酚酸A;方案9:芍藥；實(shí)驗(yàn)方法用40%四氯化碳復(fù)合因素致大鼠肝纖維化模型。同時給與方案組治療，方案組灌胃給藥，給藥量為70mg/kg，應(yīng)用生理鹽水作為陰性對照組。試驗(yàn)結(jié)束時檢測肝功能、ni型前膠原(pcm)、透明質(zhì)酸(HA)，分離肝組織檢測肝羥脯氨酸含量及電鏡觀察肝組織病理變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果方案1一7組能明顯改善肝纖維化大鼠的肝功能，降低血清pClII、HA含量及使肝組織羥脯氨酸明顯下降；明顯減輕貯脂細(xì)胞增生及膠原的沉積。其它組效果不是太明顯，與陰性對照組沒有顯著性差異。6、微循環(huán)藥理實(shí)驗(yàn)(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以麝香酮為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案h丹參丹酚酸A10重量份，麝香酮l重量份；方案2:丹參丹酚酸A9重量份，麝香酮3重量份；方案3:丹參丹酚酸A8重量份，麝香酮19重量份；方案4:丹參丹酚酸A6重量份，麝香酮l重量份；方案5:丹參丹酚酸A5重量份，麝香酮20重量份；方案6:丹參丹酚酸A3重量份，麝香酮30重量份；方案7:丹參丹酚酸A2重量份，麝香酮49重量份；方案8:丹參丹酚酸A;方案9:麝香酮；實(shí)驗(yàn)方法顯微電視放大系統(tǒng)定量觀測方案組對正常及去甲腎上腺素(NA)所致耳廓微循環(huán)障礙小鼠耳廓微循環(huán)的影響；血漿復(fù)鈣試驗(yàn)測定抗凝作用，方案組尾靜脈給藥，給藥量為20mg/kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)果方案1—7組能顯著促進(jìn)或改善正常及NA所致耳廓微循環(huán)障礙小鼠耳廓的微循環(huán)；亦可延長血漿復(fù)鈣時間。7、抗腫瘤實(shí)驗(yàn)(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案l:丹參丹酚酸A1重方案2:丹參丹酚酸A1重方案3:丹參丹酚酸A1重量份，當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸23重量份;量份，當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸30重量份;量份，當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸49重量份;方案4:丹參丹酚酸A10重量份，當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸1重量份；方案5:丹參丹酚酸A10重量份，當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸19重量份；方案6:丹參丹酚酸A8重量份，當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸11重量份；方案7:丹參丹酚酸A7重量份，當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸3重量份；方案8:丹參丹酚酸A;方案9:當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸；實(shí)驗(yàn)方法以小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和睪丸染色體畸變實(shí)驗(yàn)觀察方案組的抗突變作用，以S-180和H-22移植性腫瘤觀察方案組的抗腫瘤效果，方案組灌胃給藥，給藥量為70mg/kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)果方案l一7組對環(huán)磷酰胺誘發(fā)的小鼠骨髓細(xì)胞微核發(fā)生和絲裂霉素誘發(fā)的小鼠睪丸細(xì)胞染色體畸變均有明顯的抑制效果；對S-180和H-22小鼠移植性腫瘤生長也有明顯的抑制作用。表明方案1—7組對體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的DNA損傷均有保護(hù)作用，對小鼠移植性腫瘤也有一定的抑瘤作用。8、抗老年性癡呆藥理實(shí)驗(yàn)(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、剌五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案l:丹參丹酚酸A1重量份，刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉21重量份;方案2:丹參丹酚酸A3重量份，刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉25重量份;方案3:丹參丹酚酸A5重量份，刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉30'重量份;方案4:丹參丹酚酸A6重量份，刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉19重量份;方案5:丹參丹酚酸A9重量份，刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉12重量份;方案6:丹參丹酚酸A10重量份，刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉8重量份;方案7:丹參丹酚酸A10重量份，刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉1重量份;方案8:丹參丹酚酸A;方案9:刺五加苷、葛根素和七葉皂苷鈉；實(shí)驗(yàn)方法取經(jīng)跳臺法和八臂迷宮法篩選的正常大鼠采用惻腦室注射P-AP25.35，制成阿爾茨海默病(AD)大鼠模型，應(yīng)用跳臺法和八臂電迷宮法判斷給藥前后大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力；采用化學(xué)比色法測定腦組織中乙酰膽堿酯酶(AchE)活性，應(yīng)用生理鹽水作為陰性對照組，方案組尾靜脈給藥量為10mg/kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與陰性對照組大鼠相比,模型大鼠八臂電迷宮錯誤次數(shù)明顯增加(P<0.05)，跳臺學(xué)習(xí)和記憶錯誤次數(shù)明顯增加(PO.01)。大鼠造模前后連續(xù)靜注給藥21天后，方案1—7組大鼠上述行為學(xué)指標(biāo)得到明顯改善(PO.Ol)，腦組織AchE活性降低(PO.01)。結(jié)果表明本申請制劑對P-AP25-35側(cè)腦室注射所致大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶障礙有顯著的預(yù)防和治療作用,該作用與降低腦組織中AchE活性呈相關(guān)性。其它組效果不是太明顯，與模型組沒有顯著性差異。藥理實(shí)驗(yàn)小結(jié)通過上述藥理實(shí)驗(yàn)表明，在本申請范圍內(nèi)藥物組合與對照組具有很好的藥理作用(P<0.01);與丹參丹酚酸A、人參皂苷比較具有顯著性差異(P<0.05)，充分說明丹參丹酚酸A與人參皂苷組合除具有很好的相加作用外，還具有互相影響提高藥理活性的作用。六、毒理學(xué)研究(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以淫羊藿苷為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案方案l:丹參丹酚酸A1重量份，淫羊藿苷l重量份；方案2:丹參丹酚酸Al重量份，淫羊藿苷6重量份；方案3:丹參丹酚酸A1重量份，淫羊藿苷ll重量份；方案4:丹參丹酚酸A1重量份，淫羊藿苷25重量份；方案5:丹參丹酚酸A1重量份，淫羊藿苷50重量份；方案6:丹參丹酚酸A7重量份，淫羊藿苷3重量份；方案7:丹參丹酚酸A9重量份，淫羊藿苷2重量份；方案8:丹參丹酚酸A10重量份，淫羊藿苷l重量份；方案9:丹參丹酚酸A11重量份，淫羊藿苷l重量份；方案10:丹參丹酚酸A;方案ll:淫羊藿苷；實(shí)驗(yàn)方法上述不同方案的藥物組合物，進(jìn)行毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，測定小鼠尾靜脈給藥急性毒性的LD5。，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7:表7不同方案的LDso值組別^"~"LDs。值33122231111-案案案案案案案案案方方方方方方方方方方案io14.4方案ll37.1七、藥代動力學(xué)研究(我們將丹參丹酚酸A分別與三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、剌五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷一種或幾種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以廣棗黃酮為例進(jìn)行闡述)實(shí)驗(yàn)方案-方案1:丹參丹酚酸Al重量份，廣棗黃酮5重量份；方案2:丹參丹酚酸A1重量份，廣棗黃酮10重量份；方案3:丹參丹酚酸A1重量份，廣棗黃酮20重量份；方案4:丹參丹酚酸A10重量份，廣棗黃酮15重量份；方案5:丹參丹酚酸A10重量份，廣棗黃酮9重量份；方案6:丹參丹酚酸A10重量份，廣棗黃酮l重量份；方案7:丹參丹酚酸All重量份，廣棗黃酮1重量份；方案8:丹參丹酚酸A5重量份，廣棗黃酮15重量份；方案9:丹參丹酚酸A;方案10:廣棗黃酮；實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠，雄性，8周齡，SPF級；測定方法選用LC-MS/MS方法檢測；血漿處理方法精密量取血漿標(biāo)本IOOW，加入100(110.1%磷酸、400^1甲醇，渦旋混勻后，10000r/min離心5min。經(jīng)0.2pm過濾器過濾后，上清液通過自動進(jìn)樣器進(jìn)樣；雄性SD大鼠，經(jīng)灌胃給藥，藥前取空白血，于服藥后l5min、30min、45min、lh、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h禾口12h取靜脈血0.3ml于抗凝管中，分離血漿，以丹參丹酚酸A與甘草有效成分為原料制備成的注射制劑為基準(zhǔn)，計(jì)算不同方案絕對生物利用度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表9:表9不同方案生物利用度的考察組別丹酚酸A廣棗黃酮%%方案10_20.1實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過量效實(shí)驗(yàn)、藥效學(xué)篩選實(shí)驗(yàn)、藥效學(xué)論證實(shí)驗(yàn)、藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，我們確定丹參丹酚酸A1—IO重量份，本申請中藥活血化瘀有效成分1一50重量份；優(yōu)選丹參丹酚酸A1—5重量份，中藥活血化瘀類有效成分20—30重量份；優(yōu)選丹參丹酚酸A6—IO重量份，中藥活血化瘀類有效成分1一19重量份。八、制備實(shí)施例實(shí)施例1丹參丹酚酸A的制備丹參用70%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、12CTC溫度、表壓O.lOMPa壓強(qiáng)，加熱4小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為53.8%。1"2-1i4*1,S622222222或丹參用60%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、125。C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)DIOI大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為79.7%?；虻⒂?5%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、13(TC溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為91.2%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A20克，上述中藥活血化瘀類有效成分20克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為10mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A5克，上述中藥活血化瘀類有效成分-5克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為5mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例2丹參丹酚酸A的制備丹參用70%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、12(TC溫度、表壓0.10MPa壓強(qiáng)，加熱4小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為55.1%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、125'C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)DIOI大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為80.1%?；虻⒂?5%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、13(TC溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用卯％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為90.3%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A200克，上述中藥活血化瘀類有效成分1000克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為5000mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A50克，中藥活血化瘀類有效成分250克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為2000mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例3丹參丹酚酸A的制備丹參用85%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至9.0、8(TC溫度、加熱6小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-400大孔樹脂柱層析分離，先用水、30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，丹參丹酚酸A含量59.3^?；虻⒂盟崛〉玫剿崛∫?，調(diào)PH值至3.5、ll(TC溫度、表壓0.05MPa壓強(qiáng)，加熱6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-400A大孔樹脂柱層析分離，先用水、30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用95。^乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，丹參丹酚酸A含量89.7X或丹參用80%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0、13(TC溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用95%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡;濃縮液調(diào)PH值至5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，丹參丹酚酸A含量99.4X。本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽洌ㄊ惺?；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A20克，中藥活血化瘀類有效成分400克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為420mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A5克，中藥活血化瘀類有效成分100克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為105mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例4丹參丹酚酸A的制備丹參35%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、115。C溫度、表壓0.07MPa壓強(qiáng)，加熱5小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用40%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為58.1%?；虻⒂盟崛〉玫剿崛∫?，調(diào)PH值至4.5、12(TC溫度、表壓0.10MPa壓強(qiáng)，加熱3.5小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹脂柱層析分離，〃先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用45%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、30%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用70%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為69.7%?；虻?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、125'C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、35%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡;濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量91.2%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A20克，中藥活血化瘀類有效成分1000克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成ioooo數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為1020mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A5克，中藥活血化瘀類有效成分250克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為255mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例5丹參丹酚酸A的制備丹參用70%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、12(TC溫度、表壓O.lOMPa壓強(qiáng)，加熱4小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為55.1%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、130。C溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)DIOI大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為80.1%。或丹參用65%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、115"C溫度、表壓0.08MPa壓強(qiáng)，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為卯.3%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽洌ㄊ惺?；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A100克，中藥活血化瘀類有效成分400克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為3000mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A25克，中藥活血化瘀類有效成分250克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為1000mg。藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例6丹參丹酚酸A的制備丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至7.5、3(TC溫度、加熱1小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，先用水、10%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A。丹參丹酚酸A含量50.1%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至9.0、80'C溫度、加熱6小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹脂柱層析分離，先用水、30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、20%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A。丹參丹酚酸A含量61.3X;或丹參用50%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至8.0、5(TC溫度、加熱4小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、35%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用75%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A;丹參丹酚酸A含量90.03X;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A60克，中藥活血化瘀類有效成分600克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為4620mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A15克，中藥活血化瘀類有效成分150克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為1650mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例7丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至8.5、5(TC溫度、加熱4小時，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用55%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹z參丹酚酸A，含量為52.9%。或丹參用50%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至8.0、75。C溫度、加熱2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1400大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為84.1%?；虻⒂盟崛〉玫剿崛∫?，調(diào)PH值至4.0、ll(TC溫度、表壓0.05MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)AB-8大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、30%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用80%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶^J正丁醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為94.7%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽洌ㄊ惺?；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A120克，中藥活血化瘀類有效成分20克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000.數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為20mg;注射制劑制備-藥物組合物為丹參丹酚酸A30克，中藥活血化瘀類有效成分5克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為10mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例8丹參丹酚酸A的制備-丹參35%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、12(TC溫度、表壓O.lOMPa壓強(qiáng)，加熱5小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用40%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為58.1%?；虻⒂盟崛〉玫剿崛∫海{(diào)PH值至4.5、125'C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱3.5小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用45%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、30%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用70%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為69.7%?；虻?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、ll(TC溫度、表壓0.05MPa壓強(qiáng)，加熱6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、35%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量91.2%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A120克，中藥活血化瘀類有效成分380克；取丹參丹酚酸A、具有通式的中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為1000mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A30克，中藥活血化瘀類有效成分95克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為125mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例9丹參丹酚酸A的制備-丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至8.5、50"C溫度、加熱4小時，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用55%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為52.9%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至8.0、75'C溫度、加熱2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1400大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為84.1%。或丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、125"C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)AB-8大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡;濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、30%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用80%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶劑正丁醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為94.7%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A200克，中藥活血化瘀類有效成分380克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為3480mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A50克，中藥活血化瘀類有效成分95克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為1450mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例10丹參丹酚酸A的制備-丹參用70%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、120。C溫度、表壓O.lOMPa壓強(qiáng)，加熱4小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為57.2%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、125。C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)DIOI大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為82.3%?；虻⒂?5%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、13(TC溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為91.0%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸薬本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；制劑制備口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A200克，中藥活血化瘀類有效成分20克；取丹參丹酚酸A、具有通式的中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為4400mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A50克，中藥活血化瘀類有效成分5克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為55mg。藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例11丹參丹酚酸A的制備丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至7.5、3(TC溫度、加熱1小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，先用水、10%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A。丹參丹酚酸A含量50.1%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至9.0、80。C溫度、加熱6小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹脂柱層析分離，先用水、30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、20%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A。丹參丹酚酸A含量61.3X;或丹參用50%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至8.0、5(TC溫度、加熱4小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、35%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用75%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A;丹參丹酚酸A含量90.03Q/^;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、剌五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；制劑制備口服制劑制?藥物組合為丹參丹酚酸A160克，中藥活血化瘀類有效成分200克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為360mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A40克，中藥活血化瘀類有效成分50克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為90mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例12丹參丹酚酸A的制備丹參用70%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、120'C溫度、表壓O.lOMPa壓強(qiáng)，加熱4小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為55.1%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、125。C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)DIOI大孔樹脂柱層析分離，先用7jC、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為80.1%?；虻⒂?5%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、13(TC溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為90.3%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A40克，上述中藥活血化瘀類有效成分200克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為240mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A10克，中藥活血化瘀類有效成分50克;.取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為60mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例13丹參丹酚酸A的制備丹參用70%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、12(TC溫度、表壓O.lOMPa壓強(qiáng)，加熱4小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為53.8%?；虻⒂?0%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、125。C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱—2小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)DIOI大孔樹脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、25乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A，含量為79.7%?；虻⒂?5%乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、130。C溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱3小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗鋭，收集洗脫液，回收乙醇至盡;濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡;濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為91.2%;本申請中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；上述中藥活血化瘀類有效成分為現(xiàn)有文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄖ苽?，包括市售；口服制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A160克，上述中藥活血化瘀類有效成分800克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液或分別制備成10000數(shù)量的微丸劑、滴丸劑；單位劑量為960mg;注射制劑制備藥物組合物為丹參丹酚酸A40克，上述中藥活血化瘀類有效成分200克；取丹參丹酚酸A、具有通式的藥物中藥活血化瘀類有效成分分別制備成1000數(shù)量的水針劑、輸液劑、粉針劑；單位劑量為240mg;藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防肝損傷、肝纖維化、心腦血管疾病、腫瘤藥物中的應(yīng)用。注:本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實(shí)施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。權(quán)利要求1、一種藥物組合物，其特征在于包括丹參丹酚酸A與下述中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種三七皂苷、川芎嗪、當(dāng)歸藁本內(nèi)酯或阿魏酸、芍藥苷、知母皂苷、絞股藍(lán)苷、麝香酮、刺五加苷、降香揮發(fā)油、葛根素、銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮、廣棗黃酮、酸棗仁苷、苦杏仁苷、丹皮酚、西洋參皂苷、七葉皂苷或七葉皂苷鈉、淫羊藿苷；其中丹參丹酚酸A1-10重量份，中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種為1-50重量份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藥物組合物，其中丹參丹酚酸A為l一5重量份，中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種為20—50重量份。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藥物組合物，其中丹參丹酚酸A為6—10重量份，中藥活血化瘀類有效成分中的一種或幾種為1一19重量份。4、根據(jù)權(quán)利要求l、2、3任一項(xiàng)所述的一種藥物組合物，其中丹參丹酚酸A的含量大于等于50%且小于100%。5、根據(jù)權(quán)利要求l、2、3任一項(xiàng)所述的一種藥物組合物，其中藥物組合物制備成的單位劑量的片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液、水針劑、輸液劑、粉針劑。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種藥物組合物，其中片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液單位劑量為10mg—5000mg。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種藥物組合物，其中片劑、膠囊劑、顆粒詢、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液單位劑量為20mg—3000mg。8、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種藥物組合物，其中水針劑、輸液劑、粉針劑的單位劑量為5mg—2000mg。9、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種藥物組合物，其中水針劑、輸液劑、粉針劑的單位劑量為10mg—1000mg。10、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種藥物組合物，其中片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液、水針劑、輸液劑、粉針劑的原料藥包括中藥活血化瘀類有效成分的一種或幾種，其特征在于丹參丹酚酸A的制備方法丹參丹酚酸A提取純化丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5—9.0、30—8(TC溫度、加熱1—6小時或調(diào)PH值至3.5—6.0、110一13(TC溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱l一6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，大孔樹脂柱為HPD-IOO、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD國400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8，先用水、10_30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30—70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A;或丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5—9.0、30—8(TC溫度、加熱l一6小時或調(diào)PH值至3.5—6.0、110—130。C溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱l一6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，大孔樹脂柱為HPD-IOO、HPD-100A、HPD國300、HPD-400、HPD誦400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8，先用水、10_30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30—70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺柱層析分離，先用水、20_50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50_95%乙醇溶液洗脫，濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸A;或丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5—9.0、30—80。C溫度、加熱1_6小時或調(diào)PH值至3.5—6.0、110一13(TC溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1一6小時；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，大孔樹脂柱為HPD-IOO、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD國400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8，先用水、10—30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30—70%濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺柱層析分離，先用水、20—50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50—95%乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2—5，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A。11、根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、10任一項(xiàng)所述的一種藥物組合物，包括中藥活血化瘀類有效成分的一種或幾種的檢測分析方法，其特征在于丹參丹酚酸A檢測分析方法色譜柱C18反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm,ODS;色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速l.Oml/min;柱溫35'C;檢測波長286nm;理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000;以乙腈-0.2%醋酸水溶液為流動相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘；0-15分鐘時，乙腈的比例由10%升至20%，0.2%醋酸水溶液的比例由90%降至80%;15-55分鐘時，乙腈的比例由20%升至30%，0.2%醋酸水溶液的比例由80%降至70%;55-65分鐘時，乙腈的比例由30%升至50%，0.2%醋酸水溶液的比例由70%降至50%;65-72分鐘時，乙腈的比例由50%升至80%，0.2%醋酸水溶液的比例由50%降至20%;72-77分鐘時，乙腈的比例80%，0.2%醋酸水溶液的比例20%;77-80分鐘時，乙腈的比例由80%降至10%，0.2%醋酸水溶液的比例由20%升至卯％;80-90分鐘時，保持乙腈-0.2%醋酸水溶液以10:90的比例進(jìn)行洗脫；對照品溶液的配制精密稱取丹酚酸A對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；樣品溶液的配制精密稱取丹酚酸A樣品，加入甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；或精密量取或稱取制劑，制劑進(jìn)行預(yù)處理，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。12、根據(jù)權(quán)利要求l、2、3任一項(xiàng)所述的一種藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、肝損傷、肝纖維化、腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本申請公開了一種藥物組合物，其特征在于通過量效關(guān)系實(shí)驗(yàn)、藥效學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)、藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)確定了藥物組合物丹參丹酚酸A1-10重量份，本申請中藥活血化瘀類有效成分1-50重量份；優(yōu)選丹參丹酚酸A1-5重量份，中藥活血化瘀類有效成分20-50重量份；優(yōu)選丹參丹酚酸A6-10重量份，中藥活血化瘀類有效成分1-19重量份；上述組合物藥理實(shí)驗(yàn)表明，具有很好的藥理作用。文檔編號A61K31/352GK101301300SQ200710097798公開日2008年11月12日申請日期2007年5月9日優(yōu)先權(quán)日2007年5月9日發(fā)明者李志剛,林治榮,栗艷彬,渠守峰,米長江,郭小鵬,金治剛,群顧申請人:北京本草天源藥物研究院