專利名稱：含有環(huán)糊精紫杉醇包合物的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，具體涉及一種含有紫杉醇、羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精或磺丁基-β-環(huán)糊精的包合物及其與常用藥用輔料的藥物組合物，以及該組合物的制備方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇(Paclitaxel，商品名Taxol)是由植物短葉紫杉(Taxus brevifolia)樹皮分離提取的二萜類化合物，分子式C47H51NO24，分子量853.92，化學名(2S，5R，7S，10R，13S)-10，20-雙(乙酰氧基)-2-苯甲酰氧基-1，7-二羥基-9-氧代-5，20-環(huán)氧紫杉烷-11-烯-13-基(3S)-3-苯甲酰氨基-3-苯基-D-乳酸酯。紫杉醇為白色或類白色結(jié)晶粉末，在pH4～8條件下化學性質(zhì)相對穩(wěn)定，本品脂溶性高(logPO/W＝3.5)幾乎不溶于水，不同文獻報道的水中溶解度在0.25μg/ml～0.60μg/ml范圍，也難溶于多種常用藥用溶媒。大量藥理藥效實驗證明，紫杉醇對晚期卵巢癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、黑色素瘤都有顯著療效，對難治性卵巢癌和轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治愈率高，對治療前列腺癌、胃腸癌、小細胞性和非小細胞性肺癌前景良好，是目前發(fā)現(xiàn)的最具抗癌效果的天然抗癌藥物之一。
由于口服難以吸收(口服吸收率2％～4％)，紫杉醇的臨床應(yīng)用為注射給藥，現(xiàn)有的紫杉醇注射液由1∶1(V/V)的聚氧乙烯蓖麻油/無水乙醇配制成無色粘稠狀濃溶液(5ml溶液含紫杉醇30mg)。使用時先將本品濃溶液稀釋于500mL的0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液或5％右旋糖酐注射液中，稀釋成紫杉醇含量約0.06mg/ml溶液后(溶媒含量0.5％～1.0％)，用一次性非聚氯乙烯材料的輸液瓶和輸液管，并通過0.22μm孔徑過濾器過濾后，靜脈滴注3～24h，輸注劑量為135～175mg/m-2，最大耐受劑量為3h內(nèi)輸注225～240mg/m-2。
紫杉醇注射劑采用聚氧乙烯蓖麻油/無水乙醇作溶媒，臨床過敏反應(yīng)發(fā)生率高，使用時需要作防過敏反應(yīng)處理，分別于給藥前12h、6h口服地塞米松10mg，用藥前30～60min肌注給予20mg苯海拉明，靜脈注射西咪替丁300mg或雷尼替丁50mg加以預(yù)防，對已發(fā)生過敏反應(yīng)的病人給予注射腎上腺素對癥治療。另外，紫杉醇注射液不能用聚氯乙烯塑料容器或注射容器配制、盛裝和注射，以避免溶媒與容器反應(yīng)生成其他致敏物。稀釋液放置在玻璃或聚丙烯塑料容器中保存，也可用專門配備的聚乙酯類注射裝置。雖然注射紫杉醇致敏的機制至今仍不完全清楚，但是由于已知另外還有2個使用該種溶媒的藥物(環(huán)孢菌素和鬼臼噻吩甙)也發(fā)生相同的過敏反應(yīng)，并且試驗也證實蓖麻油本身就能引起狗組織胺釋放和低血壓(Clinical Oncology，1994；6:40)，因此，溶媒蓖麻油的致敏性亦引起人們關(guān)注。近年來，研究高效低毒性的不含有蓖麻油成分的藥物載體和紫杉醇新型給藥技術(shù)成為研究的熱點。
目前有關(guān)紫杉醇給藥技術(shù)的研究主要集中于脂質(zhì)體、組合溶劑、環(huán)糊精、乳劑、納米粒、螯合、微球等技術(shù)，環(huán)糊精由于具有特殊的分子包合功能加上近年注射用環(huán)糊精衍生物的臨床應(yīng)用，使得環(huán)糊精-紫杉醇包合技術(shù)研究有了較快的發(fā)展。目前已經(jīng)報道用于紫杉醇制劑改進的環(huán)糊精品種主要有乙酰-γ-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、羥丙基-γ-環(huán)糊精、橋聯(lián)雙環(huán)糊精、α-環(huán)糊精、甲基-β-環(huán)糊精、γ-環(huán)糊精、琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精、陰離子-β-環(huán)糊精聚合物等，其中α-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精是已經(jīng)臨床用于多種藥物注射劑型的環(huán)糊精類材料，而上述其他環(huán)糊精目前還沒有臨床注射應(yīng)用的報道。
由于環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)性能特殊性及紫杉醇應(yīng)用的特殊要求，其有價值的環(huán)糊精-紫杉醇體系應(yīng)主要體現(xiàn)于包合作用強度、增溶幅度、藥劑學穩(wěn)定性、化學穩(wěn)定性、包合后紫杉醇活性及副作用改變等方面的研究。盡管紫杉醇具有較大的分子體積，但是研究發(fā)現(xiàn)環(huán)糊精仍然可以與紫杉醇發(fā)生不同程度的包合作用，其包合作用強度與具體作用條件如溶劑、溫度、物料種類尤其是環(huán)糊精結(jié)構(gòu)類型、物料比例等直接相關(guān)，因此，不同的研究方法會得出不同的結(jié)論。采用薄層色譜方法測定23種抗腫瘤藥物加入羥丙基-β-環(huán)糊精(包合藥物)前后薄層比移值(Rf)的變化(International Journal of Pharmaceutics，1994，10869-75)，由此計算遷移保留值RmRm＝log(l/Rf-1)其中，Rm為藥物、流動相及環(huán)糊精濃度的函數(shù)，將其關(guān)系曲線外推至零點(無流動相和環(huán)糊精)，得包合物的絕對遷移保留值Rmo(流動相甲醇濃度＝0、環(huán)糊精濃度＝0時，Rm＝Rmo，Rmo越小包合物遷移性質(zhì)變化越大，包合作用越強)，結(jié)果表明，23種藥物中紫杉醇包合作用最弱(Rmo最大)，進一步采用分子空腔較小的α-環(huán)糊精實驗，得相同的結(jié)論，紫杉醇也顯示出最弱的包合能力(Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis，1995，13533-541)；而采用紫外光譜研究(Chem.Res.Chinese U.2005，21749-752)卻發(fā)現(xiàn)水溶液中羥丙基-β-環(huán)糊精/紫杉醇顯示出較強的包合作用，包合常數(shù)達3030M-1，其作用以二元包合為主；相溶解度研究顯示(International Journal of Pharmaceutics，1996，133191-201)，水溶液中紫杉醇與環(huán)糊精存在以二元包合為主的多級包合，其γ-環(huán)糊精、羥丙基-γ-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精的二級包合常數(shù)分別為785M-1、1886M-1和7965M-1，顯示羥丙基-β-環(huán)糊精/紫杉醇具有強的包合能力，同時還發(fā)現(xiàn)，加入醇類有機溶劑各級包合常數(shù)都有大幅提高，也能夠顯著提高紫杉醇溶解度。純水中環(huán)糊精對紫杉醇增溶也有較好效果，約50％濃度羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液中紫杉醇可達3.4mg/ml溶解度(J Pharm Sci，1995，841223-1229)，是目前報道的最好結(jié)果。采用四乙烯五胺橋聯(lián)雙環(huán)糊精則可增溶紫杉醇到2.0mg/ml(CN1440748)，環(huán)糊精增溶除與環(huán)糊精種類有關(guān)外，也與紫杉醇-環(huán)糊精比例相關(guān)。紫杉醇包合后穩(wěn)定性得到提高、活性也有不同程度改善，熒光光譜研究顯示，環(huán)糊精間距16.1的橋聯(lián)雙環(huán)糊精相對于β-環(huán)糊精與紫杉醇具有高達107M-1的包合常數(shù)，制備的1∶1分子比包合物穩(wěn)定性強，紫杉醇成分無變化，包合后能顯著延長藥物-腫瘤細胞作用時程(Journal of InclusionPhenomena and Macrocyclic Chemistry，2001，3913-18)；研究表明由于紫杉醇溶解度的提高能夠增加細胞外紫杉醇濃度，有利于藥物透過細胞膜，環(huán)糊精的增溶作用對紫杉醇具有保持或增強活性效果(Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，2002，121637-1641)；紫杉醇加入環(huán)糊精后，可制備含有少量有機溶劑或添加劑的穩(wěn)定制劑溶液(HU P9701945；CN1281373/ZL98811010.5.)，1∶50環(huán)糊精比例的溶液紫杉醇溶解度達到1.5mg/ml，采用乙酰-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精制備的包合制劑可顯著降低現(xiàn)有紫杉醇制劑(聚氧乙烯蓖麻油/無水乙醇溶媒)的心血管和呼吸系統(tǒng)毒副作用。研究還發(fā)現(xiàn)，包合作用也可有效降低紫杉醇藥物自身的副作用，(USP 6218374；USP 5804568)動物實驗顯示，使用羥丙基-β-環(huán)糊精制備的紫杉醇包合物注射劑相對乙醇溶解的紫杉醇制劑對注射部位的組織損傷降低了2/3。
采用環(huán)糊精進行紫杉醇注射劑的改進研究已有多項技術(shù)發(fā)明，CN1589157(US2005009783)公開了紫衫醇/羥丙基-β-環(huán)糊精組合物及其制備方法，該發(fā)明采用45g羥丙基-β-環(huán)糊精、30mg紫衫醇、100ml水的比例，將紫衫醇溶解在乙醇中，然后加入到羥丙基-β-環(huán)糊精的水溶液中制備包合物，但是，高達1∶1500的紫杉醇/環(huán)糊精質(zhì)量比使該技術(shù)難以用于臨床；HUP9701945使用較低比例的環(huán)糊精，但是報道的增溶效果不顯著；USP6284746公開的實施例以紫衫醇11.6mg與2，6-二甲基-β-環(huán)糊精4g制備的包合物，紫衫醇增溶達到0.9-1.0mg/ml；USP5684169使用高比例的多種環(huán)糊精加入大量不適合藥物用途的如甲醇、乙腈、乙酸乙酯等有機溶劑。HU71251以多種環(huán)糊精1-20倍摩爾比僅使紫衫醇增溶至0.05mg/ml；HU65835采用20倍摩爾比(約31倍質(zhì)量比)的支鏈環(huán)糊精獲得紫衫醇增溶到約0.32mg/ml的效果。
盡管環(huán)糊精包合紫杉醇的研究十分活躍，但是現(xiàn)在還沒有環(huán)糊精包合的紫杉醇制劑上市使用，其中環(huán)糊精的安全性問題是主要原因之一，目前已被證明能夠注射用的環(huán)糊精及環(huán)糊精衍生物僅有α-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精和磺丁基-β-環(huán)糊精3種(Expert Opin Drug Deliv，2005Mar；2(2)335-51)，紫杉醇劑型改進研究中，羥丙基-β-環(huán)糊精研究較多，而磺丁基-β-環(huán)糊精還沒有研究報道，其他環(huán)糊精由于還沒有充分的安全性證據(jù)，所以技術(shù)實際應(yīng)用難度較大。目前已有技術(shù)的主要缺陷是制劑中紫杉醇溶解度低(環(huán)糊精增溶效果不顯著)、藥劑學穩(wěn)定性較差稀釋后即析出沉淀、紫杉醇/環(huán)糊精比例過高、殘留高比例的有機溶劑、使用環(huán)糊精濃度過大不能達到紫杉醇制劑的基本要求等。選用性能優(yōu)良的環(huán)糊精新品種并且開展包合技術(shù)的系統(tǒng)研究是改變這種現(xiàn)狀的希望所在。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中環(huán)糊精包合紫杉醇研究的種種困難，包括制劑中紫杉醇溶解度低；藥劑學穩(wěn)定性較差；紫杉醇/環(huán)糊精比例過高；殘留高比例的有機溶劑等，實現(xiàn)該領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)突破，提供一種紫杉醇溶解度和藥劑學穩(wěn)定性都較高、環(huán)糊精比例較低、有機溶劑殘留低的環(huán)糊精紫杉醇穩(wěn)定包合物，以實現(xiàn)臨床使用。本發(fā)明還將提供這種包合物的制備方法。
完成本發(fā)明的技術(shù)方案是含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，由紫杉醇、環(huán)糊精與藥用輔料組成，其中紫杉醇與環(huán)糊精的質(zhì)量比為1∶10～150，所述的環(huán)糊精是羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精任意比例的混合物；環(huán)糊精包合紫杉醇的穩(wěn)定常數(shù)Ka＝5396M-1～14121M-1。
對該包合態(tài)藥物組合物的進一步限定，所述的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，是指用以下制備方法得到的組合物在羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精的混合物的純水溶液中，攪拌下滴加紫杉醇的乙醇溶液(或先將環(huán)糊精、紫杉醇與純水混合，攪拌下緩慢滴加乙醇至體系完全溶解，是效果完全相同的等同步驟)；
體系溶解后以0.2～0.4μm微孔濾膜過濾；濾液減壓除乙醇，得到的液體包合物；或減壓除乙醇后再減壓除水，干燥，得到的固體包合物。
通過以上方法制備得到的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，其殘留的乙醇含量小于2％。
本發(fā)明采用磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精在水溶液條件下與加有適量乙醇的紫杉醇原料溶液混合，加入的乙醇可促進包合作用，生成包合物后除去乙醇(乙醇殘留量小于2％)，制得穩(wěn)定的紫杉醇/環(huán)糊精包合物，其包合物與常用藥用輔料復(fù)合，制備成為可臨床使用的包合態(tài)藥物組合物，從而提高紫杉醇的溶解度、增加穩(wěn)定性、降低副作用，獲得具有臨床應(yīng)用價值的紫杉醇產(chǎn)品。制備包合物是本發(fā)明的技術(shù)關(guān)鍵。
目前已經(jīng)上市且可用于注射用途的環(huán)糊精衍生物中，羥丙基-β-環(huán)糊精是非離子化的中性衍生物，磺丁基-β-環(huán)糊精是離子化的衍生物，其中藥用的磺丁基-β-環(huán)糊精是6～7取代的產(chǎn)物(SBE7-β-CD，商品名Captisol)。大量研究表明(《藥學前沿》，中國醫(yī)藥科技出版社，200146-59)，磺丁基-β-環(huán)糊精在安全性，穩(wěn)定化，藥物增溶作用及生產(chǎn)制備技術(shù)等方面都具有更為顯著的提高，其優(yōu)點可以概括為高的水溶性(＞50g/100g H2O)；強的包合性能；無藥理活性；對腎功能無影響；可用于口服及非口服制劑；低的GMP生產(chǎn)成本和更廣的用途。我們研制開發(fā)的羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精(HP-SBE-β-CD)是以羥丙基和磺丁基混合取代的新型環(huán)糊精衍生物(CN1800221A)，該產(chǎn)品具有優(yōu)良的性能，初步實驗證明具有很高的安全性。本發(fā)明采用(質(zhì)量比1∶10～150)的磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精改進紫杉醇制劑，其中制得的低配比1∶25(質(zhì)量比)包合物即可使紫杉醇溶解度達9～10mg/ml，固體包合物稀釋500倍以上皆能夠穩(wěn)定保存12小時以上，且化學性質(zhì)穩(wěn)定、藥劑學穩(wěn)定性高，刺激性小，具有重要應(yīng)用價值。
上述方案實現(xiàn)的關(guān)鍵、也是本發(fā)明的第二發(fā)明任務(wù)的技術(shù)方案是含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物的制備方法，步驟如下，在羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精的混合物的純水溶液中，攪拌下滴加紫杉醇的乙醇溶液(或先將環(huán)糊精、紫杉醇與純水混合，攪拌下緩慢滴加乙醇至體系完全溶解，是效果完全相同的等同步驟)；體系溶解后以0.2～0.4μm微孔濾膜過濾；濾液減壓除乙醇，得到液體紫杉醇包合物；或減壓除乙醇后再減壓除水，干燥，得到固體紫杉醇包合物。
所述的紫杉醇包合物中乙醇含量小于2％。
更優(yōu)化和更具體地說，本發(fā)明的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物的制備方法的具體步驟是用1∶25質(zhì)量比的紫杉醇∶環(huán)糊精比例配制環(huán)糊精的純水溶液，該溶液是指羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精的混合物與2～10倍質(zhì)量的純水混合制成的溶液，攪拌下緩慢加入比例紫杉醇與乙醇配制的溶液，乙醇用量可以是紫杉醇等量至10倍質(zhì)量以紫杉醇能夠溶解為度，加入紫杉醇時可室溫也可在25～65℃間加熱攪拌，攪拌加熱生成包合物后，以0.2～0.4μm微孔濾膜過濾，然后減壓盡量除去乙醇，得到液體包合物，或再繼續(xù)減壓除水至盡，減壓真空干燥后得固體包合物。
本發(fā)明制備的固體包合物水溶性高，易于溶解而不需加入其他助溶劑，配制的水溶液溶血副作用小，適宜臨床使用。含有臨床給藥劑量30mg紫杉醇的固體包合物加注射用生理鹽水稀釋10～500倍配制成溶液后數(shù)天內(nèi)皆能夠保持穩(wěn)定。
該固體包合物與常用的含有可注射的藥用輔料溶液稀釋到適當濃度經(jīng)滅菌處理后，所得的組合物溶液可供注射使用。
包合作用的驗證D2O為溶劑的磺丁基-β-環(huán)糊精原料與包合物H，C-COSY(13C，1H相關(guān)譜)對照結(jié)果，包合物中環(huán)糊精葡糖環(huán)內(nèi)的H-3和H-5質(zhì)子(δ4.1～3.4)明顯移向高場(附圖1)，表明紫杉醇分子的苯甲?；鶄?cè)鏈基團被包合進入環(huán)糊精。
紫外光譜實驗發(fā)現(xiàn)，水溶液中，紫杉醇的紫外吸收隨環(huán)糊精(環(huán)糊精自身無吸收)濃度的變化而發(fā)生改變(附圖2)。
環(huán)糊精結(jié)構(gòu)特征是具有高電子密度的疏水空腔(《環(huán)糊精化學》，科學出版社2001，P135)，進入疏水空腔(包合)的藥物分子發(fā)色團(如苯基)的π電子躍遷受環(huán)糊精疏水空腔高電子密度的誘導發(fā)生改變而引起紫外光譜的變化，測定體系紫外吸收是判斷包合作用的有效方法。紫杉醇紫外吸收隨環(huán)糊精濃度的增大而明顯增強，說明紫杉醇與本發(fā)明使用的環(huán)糊精存在明顯而強的包合作用。
包合穩(wěn)定常數(shù)的測定
包合穩(wěn)定常數(shù)Ka是包合作用程度的量度，紫外分光光度法是測定Ka的常用方法。改變環(huán)糊精濃度(環(huán)糊精自身無吸收)濃度恒定的紫杉醇溶液紫外吸收呈現(xiàn)規(guī)律性變化，從而獲得環(huán)糊精濃度(C)與紫外吸光度(A)的關(guān)系，由1/C與1/A關(guān)系曲線可定量計算出環(huán)糊精/紫杉醇的表觀一級包合穩(wěn)定常數(shù)Ka，同時實驗測定了加入乙醇對Ka的影響變化，各種環(huán)糊精的Ka見表1，表1紫杉醇/環(huán)糊精的表觀一級包合穩(wěn)定常數(shù)Ka(M-1；234nm)

結(jié)果顯示，本發(fā)明使用的環(huán)糊精具有較大的包合常數(shù)Ka，而且乙醇的存在顯著提高了Ka值(增強環(huán)糊精的包合能力)因而具有促進包合的作用，而不僅僅是助溶劑。一般情況下，有機溶劑與藥物競爭包合，乙醇通常表現(xiàn)為降低藥物Ka的效應(yīng)。與羥丙基-β-環(huán)糊精不同，由于純水條件下本發(fā)明使用的環(huán)糊精包合紫杉醇仍然具有較大的Ka，足以生成穩(wěn)定的包合物，因而本發(fā)明在包合物形成后將乙醇盡量去除，以獲得較純凈的藥物包合物，盡可能降低乙醇對藥物產(chǎn)生的影響。利用乙醇對紫杉醇包合作用的影響制備包合物是本發(fā)明成功的技術(shù)基礎(chǔ)。
包合物制備及驗證采用加入適量乙醇使包合充分以后，再減壓除去經(jīng)干燥制備了多種比例的磺丁基-β-環(huán)糊精/紫杉醇，羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精/紫杉醇，磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精的混合物/紫杉醇的固體包合物，DTA實驗證實固體物為包合物而非簡單的物理混合物。以磺丁基-β-環(huán)糊精/紫杉醇(質(zhì)量比25∶1)為例分析說明稱取紫杉醇、磺丁基-β-環(huán)糊精、紫杉醇與磺丁基-β-環(huán)糊精物理混合物、包合物共四種樣品各約5.0mg，進行差示掃描熱分析Al2O3參比，量程±50μV，升溫范圍30℃～400℃，升溫速率10℃/min，得DTA圖譜。結(jié)果表明紫杉醇在240℃有一熔融峰(分解)；環(huán)糊精在70-90℃和250-270℃處也各分別為脫水吸熱峰和相變峰，約360℃為熔融分解峰。物理混合物保持了環(huán)糊精和紫杉醇的吸熱峰特征，而包合物圖譜上，脫水吸熱峰顯著減弱，相變峰基本消失，其他各峰的位置(溫度)和形狀(熱效應(yīng))都發(fā)生了明顯變化，因此說明包合物已形成。
包合物中的殘留乙醇包合物1HNMR顯示微弱的乙醇甲基峰，由乙醇甲基峰(t，δ＝1.10941)與環(huán)糊精特征峰(H-1峰，d，δ＝5.18258～5.05405)的積分面積比計算出多批制備包合物中的乙醇殘留量(％)，結(jié)果見表2，表2紫杉醇/環(huán)糊精固體包合物中乙醇殘留量


*a＝磺丁基-β-環(huán)糊精；b＝羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精實驗證明，本發(fā)明技術(shù)制備過程中雖然使用較多乙醇，但經(jīng)純化處理后乙醇殘留很少，低比例環(huán)糊精(1∶50以下)制備的包合物中乙醇殘留一般低于1.0％；較大比例環(huán)糊精制備包合物也僅有不足2.0％的乙醇殘留。揮發(fā)性、刺激性強的乙醇殘留量的大幅降低，為提高紫杉醇制劑穩(wěn)定性、降低刺激等副作用提供了有利保障。
包合增溶試驗標準曲線以乙醇溶液配制0.225mg/ml的紫杉醇母液，純凈水稀釋成0.25μg/ml～2.25μg/ml系列溶液，234nm下測定紫外吸收A，以A對濃度C(mg/ml)作圖得標準曲線(A＝393.2C-0.0123；r＝0.9998)。
用純凈水配制不同％濃度的環(huán)糊精溶液，加入紫杉醇原料藥，于25℃±1℃振蕩72h，過濾，靜置，定量移取適量的濾液，純凈水稀釋，于234nm處測定紫外吸收，由標準曲線得紫杉醇溶解度，見表3表3紫杉醇在環(huán)糊精溶液中的溶解度

*a＝磺丁基-β-環(huán)糊精；b＝羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精由于高濃度環(huán)糊精溶液(＞50％)增溶作用雖強，但基本無實際使用價值，因此，進行了31％以下濃度環(huán)糊精水溶液的增溶試驗，結(jié)果顯示，本發(fā)明使用的環(huán)糊精對紫杉醇有極強的增溶作用。
樣品穩(wěn)定性藥物組合物的穩(wěn)定性包括藥物的化學穩(wěn)定性及組合物的藥劑學穩(wěn)定性質(zhì)，是藥物組合物得以應(yīng)用的基本要素。
固體包合物穩(wěn)定性HPLC法色譜條件色譜柱ODS C18(250mm×4.6mm)；流動相，甲醇∶水∶乙腈(20∶30∶50)；流速1.0ml/min；檢測波長228nm；測定時間30.00分鐘；檢測靈敏度1.0000AUFS。
樣品紫杉醇原料；紫杉醇/磺丁基-β-環(huán)糊精包合物(a，質(zhì)量比1∶25)；紫杉醇/羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精包合物(b，質(zhì)量比1∶25)取紫杉醇原料和包合物若干，均分3份為試驗樣品，分別進行光照、高溫和高濕度加速試驗1)光照試驗 樣品置于透明密封容器中，放在裝有日光燈的光照箱內(nèi)，在4500±500LX光照度的條件下放置5天，取樣檢查分析，結(jié)果與0天樣品比較。
2)高溫試驗 樣品分別置于密封潔凈容器中，在60℃的溫度下放置5天，取樣檢查分析，結(jié)果與0天樣品比較。
3)高濕度試驗 樣品分別置于恒濕密閉器皿中于25℃、相對濕度90±5％條件下放置5天，取樣檢查分析，結(jié)果與0天樣品比較。
HPLC測定圖例見附圖3，附圖4，各試驗結(jié)果見表4，
表4 5天加速試驗的樣品含量測定結(jié)果

加速試驗條件下，紫杉醇原料顏色略變深，含量下降較明顯；包合物外觀顏色無改變，含量降低很少，雜質(zhì)基本無變化。結(jié)果顯示，固體包合物中紫杉醇化學性質(zhì)穩(wěn)定，包合技術(shù)對提高紫杉醇穩(wěn)定性效果明顯。
包合物溶液及藥物穩(wěn)定性(1)溶液穩(wěn)定性 質(zhì)量比1∶25固體包合物分別用生理鹽水、等滲葡糖液配制成含紫杉醇10mg/ml的溶液，再稀釋1～1000倍，滅菌處理制成不同濃度注射液、連續(xù)觀察5小時～10天，其中對紫杉醇/羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精包合物的生理鹽水稀釋體系的穩(wěn)定性觀察試驗結(jié)果見表5，表5環(huán)糊精包合紫杉醇注射液的溶液狀態(tài)

*+澄清無沉淀；-產(chǎn)生沉淀或渾濁
(2)溶液中的紫杉醇穩(wěn)定性試驗(含量測定)采用上述相同的樣品和HPLC色譜條件，取紫杉醇原料和包合物若干，用流動相(pH＝6.50)溶解，超聲30分鐘后稀釋100倍，靜置，分別于0、2、4、6、8小時取樣測定HPLC譜，表6含水溶液中樣品含量隨時間的變化

各樣品在含水溶液中，化學性質(zhì)穩(wěn)定，含量基本不變。
溶血作用試驗(參考文獻國家食品藥品監(jiān)督管理局《化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導原則》，2005，3，18；國家藥品監(jiān)督管理局《中藥注射劑研究的技術(shù)要求》，1999，11，12)包合物生理鹽水配制的溶液的溶血性與現(xiàn)有紫杉醇制劑對比具顯著差異。固體包合物稀釋的溶液溶血作用輕微；現(xiàn)有紫杉醇制劑稀釋至臨床給藥0.06mg/ml的稀濃度條件下溶血作用仍然達15％，結(jié)果見附圖5。
體內(nèi)抑瘤作用20±2g雄性昆明小鼠右腋窩皮下接種1×107/ml S180細胞0.2ml(2×106個細胞)實體瘤模型，紫杉醇及紫杉醇/環(huán)糊精包合物樣品溶液腹腔給藥7天，實驗條件下，紫杉醇/環(huán)糊精包合物5mg/kg劑量抑瘤率94.69％明顯高于未包合的紫杉醇(抑瘤率82.77％)；紫杉醇及紫杉醇/環(huán)糊精包合物對動物體重均有降低，但紫杉醇組體重降低大于包合物組，結(jié)果提示，紫杉醇包合后抑瘤活性增強而毒副作用得到降低。
本發(fā)明的優(yōu)點包合物顯著提高了紫杉醇溶解度(達10mg/ml以上)，溶液稀釋后能夠長時間保持清澈穩(wěn)定，且溶血作用低、毒副作用小，藥物活性好。
紫杉醇與環(huán)糊精包合后，固態(tài)、液態(tài)樣品含量穩(wěn)定，藥物/環(huán)糊精比例小、制劑中環(huán)糊精用量低，適宜用于臨床。
本發(fā)明的包合物有機溶劑殘留少，有利于提高用藥安全性。
制備方法簡單、操作簡便、成本低且無環(huán)境污染。包合物性質(zhì)穩(wěn)定、與其他藥用輔料相容性好，便于制劑的制備。
包合物制備的注射液無腐蝕性成分、無毒害，臨床使用方便、實用性強。


圖1摩爾比1∶9紫杉醇/磺丁基-β-環(huán)糊精包合物H，C-COSY(溶劑D2O，δ4.1～3.4部分)；圖2水溶液中不同羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精濃度下的紫杉醇紫外吸收掃描圖(210nm～296nm)；圖3紫杉醇/羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精包合物高溫試驗(5天)的HPLC色譜圖；圖4紫杉醇原料高溫試驗(5天)的HPLC色譜圖；圖5市售紫杉醇制劑、紫杉醇/羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精(HP-SBE-β-CD)包合物、紫杉醇/磺丁基-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)包合物生理鹽水稀釋的溶液，紫杉醇濃度-溶血作用曲線圖。
具體實施例方式
實施例1將3g羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精與6ml純水混合，攪拌下緩慢滴加120mg紫杉醇與3ml乙醇配制的溶液，充分混合攪拌至體系完全溶解，以0.2～0.4μm微孔濾膜過濾，濾液65℃下減壓蒸除乙醇，滅菌處理后減壓蒸除水分至干，固體物繼續(xù)減壓干燥48小時，即得白色固體包合物。其各種參數(shù)請參照圖1～圖5。
上述粉狀包合物780mg(含紫杉醇30mg)與250ml注射用生理鹽水混合即溶解成為液態(tài)包合組合物，該溶液可方便用于注射。
實施例2與實施例1基本相同，但其中的羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精為4.5g與15ml純水混合，紫杉醇為30mg。
實施例3與實施例1基本相同，但其中的紫杉醇為300mg。
實施例4與實施例1基本相同，但其中的環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精。
實施例5與實施例2基本相同，但其中的環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精。
實施例6與實施例3基本相同，但其中的環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精。
實施例7與實施例1基本相同，但其中的環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精質(zhì)量比1∶1的混合物。
實施例8與實施例2基本相同，但其中的環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精質(zhì)量比1∶50的混合物。
實施例9與實施例3基本相同，但其中的環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精質(zhì)量比50∶1的混合物。
實施例10與實施例1基本相同，但先將環(huán)糊精、紫杉醇與6ml純水混合，攪拌下緩慢滴加乙醇至體系完全溶解。
實施例11與實施例1基本相同，但得到的粉狀包合物用等滲濃度的葡萄糖注射液稀釋。
實施例12與實施例1基本相同，但得到的粉狀包合物用等滲濃度的果糖注射液稀釋。
權(quán)利要求
1.一種含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，由紫杉醇、環(huán)糊精與藥用輔料組成，其中紫杉醇與環(huán)糊精的質(zhì)量比為1∶10～150，所述的環(huán)糊精是羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精任意比例的混合物；環(huán)糊精包合紫杉醇的穩(wěn)定常數(shù)Ka＝5396M-1～14121M-1。
2.按照權(quán)利要求1所述的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，其特征在于，所述的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，是指用以下制備方法得到的組合物在羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精的混合物的純水溶液中，攪拌下滴加紫杉醇的乙醇溶液，體系溶解后以0.2～0.4μm微孔濾膜過濾，濾液減壓除乙醇，然后再減壓除水，干燥，得到的固體包合物，或減壓除乙醇后得到的液體包合物。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，其特征在于，所述的包合物中乙醇含量小于2％。
4.一種權(quán)利要求1所述的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物的制備方法，步驟如下，在羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精的混合物的純水溶液中，攪拌下滴加紫杉醇的乙醇溶液；體系溶解后以0.2～0.4μm微孔濾膜過濾，濾液減壓除乙醇，得到液體包合物，或減壓除乙醇后再減壓除水，干燥，得到的固體包合物；所得的包合物中乙醇含量不高于2％。
5.按照權(quán)利要求4所述的含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物的制備方法，其特征在于，具體步驟是用1∶25質(zhì)量比的紫杉醇∶環(huán)糊精配制環(huán)糊精的純水溶液，該溶液是指羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-磺丁基-β-環(huán)糊精的混合物與2～10倍質(zhì)量的純水混合制成的溶液，攪拌下緩慢加入比例紫杉醇與可溶解紫杉醇的適量乙醇配制的溶液，加入紫杉醇時在室溫或在25～65℃間加熱攪拌，攪拌加熱生成包合物后，以0.2～0.4μm微孔濾膜過濾，然后減壓盡量除去乙醇，得到液體包合物，或再繼續(xù)減壓除水至盡，減壓真空干燥后得固體包合物。
全文摘要
含有環(huán)糊精/紫杉醇包合物的藥物組合物，由紫杉醇、環(huán)糊精與藥用輔料組成，其中紫杉醇與環(huán)糊精的質(zhì)量比為1∶10～150，所述的環(huán)糊精是羥丙基－磺丁基－β－環(huán)糊精，或磺丁基－β－環(huán)糊精，或磺丁基－β－環(huán)糊精與羥丙基－磺丁基－β－環(huán)糊精任意比例的混合物；環(huán)糊精包合紫杉醇的穩(wěn)定常數(shù)Ka＝5396M
文檔編號A61K31/337GK1931368SQ200610041530
公開日2007年3月21日 申請日期2006年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月12日
發(fā)明者任勇, 高劍鋒, 余書勤, 吳玲 申請人:南京師范大學, 南京巨環(huán)醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司