專(zhuān)利名稱(chēng)：多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的制備方法，用于修復(fù)骨缺損和骨裂，屬于生物工程及材料科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
骨骼移植是僅次于輸血的需求量最大的移植物，由于事故或疾病造成骨缺損是臨床常見(jiàn)病例。目前常用的修復(fù)材料有自體骨、異體骨及人工合成材料，這些材料均在不同程度上存在不足，不能滿足臨床需要。如自體骨移植雖無(wú)免疫排斥反應(yīng)，修復(fù)效果良好，但取材十分有限，且造成供區(qū)的骨缺損；同種異體骨移植容易引起免疫排斥反應(yīng)，修復(fù)效果差，并有傳染病毒性疾病的危險(xiǎn)，而且取樣、處理、存儲(chǔ)的成本高，其應(yīng)用收到很大限制；人工合成材料如聚甲丙烯酸甲酯、硫化硅橡膠等都是非降解材料，不能修復(fù)缺損區(qū)。目前研究的重點(diǎn)致力于找出具有良好的理化性質(zhì)、生物學(xué)特性的生物材料作為骨移植物。利用磷酸鈣類(lèi)物質(zhì)作為骨移植材料經(jīng)過(guò)近百年的歷史，目前仍有廣泛的應(yīng)用前景，但傳統(tǒng)的磷酸鈣類(lèi)物質(zhì)如羥基磷灰石(HA)、磷酸三鈣(TCP)等無(wú)孔或孔徑小，孔隙交通達(dá)不到骨單位內(nèi)向生長(zhǎng)的結(jié)構(gòu)要求，臨床應(yīng)用受到一定限制。生物活性磷酸鈣陶瓷具有良好的生物相容性、骨傳導(dǎo)性、骨誘導(dǎo)性，因而廣泛用于骨科和牙科骨修復(fù)。但由于羥基磷灰石具有陶瓷材料固有的脆性大、韌性低等缺點(diǎn)，不能用于負(fù)重部位骨缺損的修復(fù)。目前臨床上常用的珊瑚羥基磷灰石雖然有較好的孔隙交通和足夠的機(jī)械強(qiáng)度，但仍存在脆性大、韌性低、可降解性差、修復(fù)能力弱等缺點(diǎn)，只能作為骨科的填充材料。
骨組織中的有機(jī)成份主要為羥基磷灰石(HA)和膠原。生物羥基磷灰石屬于生物活性陶瓷，其組成中含有能夠通過(guò)人體正常的新陳代謝途徑進(jìn)行置換的鈣、磷等元素，還含有能與人體組織發(fā)生鍵合的羥基(-OH)基團(tuán)。HA具有與骨組織相似的化學(xué)成份、晶體結(jié)構(gòu)、摩擦系數(shù)、比重、導(dǎo)熱性及絕對(duì)強(qiáng)度。膠原具有良好的生物相容性、低免疫原性、促進(jìn)細(xì)胞粘附、生長(zhǎng)、繁殖的功能，因而作為一種臨床生物材料有許多生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。為了模仿天然骨的組成和結(jié)構(gòu)，已開(kāi)發(fā)出許多用于骨修復(fù)的磷酸鈣陶瓷/膠原復(fù)合材料。然而，復(fù)合材料中燒結(jié)的高結(jié)晶度磷酸鈣陶瓷顆粒在體內(nèi)幾乎不被降解吸收和重建，因而，影響了復(fù)合材料的骨修復(fù)能力。天然骨是由低結(jié)晶度的納米羥基磷灰石和膠原組成的，因此為了模仿天然骨的成分、結(jié)構(gòu)和特性，制備納米羥基磷灰石/膠原復(fù)合支架材料是生物材料研究的熱點(diǎn)之一。據(jù)報(bào)道，清華大學(xué)研制的納米相鈣磷鹽膠原高分子骨復(fù)合材料具有較好的骨修復(fù)效果，但從其生產(chǎn)工藝及產(chǎn)品來(lái)看，仍存在機(jī)械強(qiáng)度不夠、脆性大、韌性低、孔隙率低、無(wú)內(nèi)連孔結(jié)構(gòu)(孔隙交通差)等缺陷。內(nèi)連孔結(jié)構(gòu)有利于長(zhǎng)入材料深部的血管彼此相通，以保證長(zhǎng)入材料深部組織的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)。除材料與受植床的結(jié)合外，多孔結(jié)構(gòu)為機(jī)體骨組織的長(zhǎng)入、形成機(jī)械性?xún)?nèi)鎖、增強(qiáng)植入材料的結(jié)合，為固位創(chuàng)造了條件。多孔表面利于血管和軟組織長(zhǎng)入，而孔徑互相連通又是骨內(nèi)向生長(zhǎng)的先決條件，互相連通有利于細(xì)胞和體液在體內(nèi)流動(dòng)、組織代謝，骨質(zhì)長(zhǎng)入微孔和大量外骨痂共同構(gòu)成牢固的“生物性固定”，微孔構(gòu)成巨大表面積，為骨沉積提供良好的基質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的制備方法，將動(dòng)物膠原與納米粒徑的羥基磷灰石結(jié)合，冷凍干燥制成高孔隙率、具有良好孔隙交通的復(fù)合人工骨，以更好地滿足臨床需要。
本發(fā)明提出的多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的制備方法，包括以下步驟(1)制備納米徑粒羥基磷灰石將含Ca2+的化合物溶于去離子水中，配制Ca2+濃度為0.2～0.8mol/L的溶液，邊攪拌邊加入含PO43-的化合物，使Ca與P的摩爾比為1～1.67，然后邊攪拌邊加入NaOH溶液至PH值為7～8，抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中90～150℃下干燥48～96小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體；(2)制備膠原溶液取豬腿、牛腿或馬腿的肌腱，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱浸泡于0.1％的磷酸溶液中，并加入胃蛋白酶，使每毫升磷酸溶液中的胃蛋白酶為10～15國(guó)際活性單位，充分混勻，在室溫下浸泡50～100小時(shí)，將浸泡液過(guò)濾除渣，得到膠原溶液，濃度為1～1.2×10-2g/ml；(3)在上述制備的羥基磷灰石粉體中加入膠原溶液，每毫升膠原溶液中加入0.25～0.3g羥基磷灰石粉體，充分?jǐn)嚢杌靹?，用NaOH溶液調(diào)至PH值為7～8；(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物冷凍干燥成為多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨。
用本發(fā)明所述的方法制備的多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨，具有類(lèi)似天然骨的成分；其中低結(jié)晶度的納米羥基磷灰石，有利于人工骨的降解吸收和自體骨的重建；傳導(dǎo)作用強(qiáng)；人工骨的孔隙率高，孔隙交通好，有利于骨細(xì)胞生長(zhǎng)；該人工骨的生物相容性好，PH值為中性，降解過(guò)程中沒(méi)有酸性反應(yīng)，因此不會(huì)引起手術(shù)后的非感染性炎癥或排斥反應(yīng)，而且其中的膠原在被機(jī)體降解吸收的過(guò)程中，為骨細(xì)胞的長(zhǎng)入不斷騰出空間。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提出的多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的制備方法，納米徑粒羥基磷灰石的制備中，將含Ca2+的化合物溶于去離子水中，配成0.2～0.8mol/L的Ca2+溶液，邊攪拌邊加入含磷離子(PO43-)的化合物，使Ca/P的摩爾比為1～1.67。然后邊攪拌邊加入NaOH溶液至PH值為7～8，當(dāng)PH值為6時(shí)即開(kāi)始出現(xiàn)沉淀，隨著PH值的升高，沉淀越來(lái)越多，溶液越來(lái)越渾濁，待PH值升至7～8即停止NaOH的滴入。抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中90～150℃下干燥，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體。上述含Ca2+的化合物包括氯化鈣(CaCl2)、硝酸鈣(Ca(NO3)2·4H2O)等；上述含磷離子(PO43-)的化合物包括磷酸氫二氨((NH4)2HPO4)、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、磷酸(H3PO4)等。膠原溶液的制備過(guò)程為，取豬腿、牛腿或馬腿的肌腱，仔細(xì)剔除脂肪和肌肉組織后用洗潔精洗滌去除肌腱表面的油脂，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱浸泡于0.1％的磷酸(分析純)溶液中，并加入胃蛋白酶(10～15U/ml)，充分混勻，在室溫下浸泡50～100小時(shí)，將浸泡液過(guò)濾除渣，濾液的濃度要求達(dá)到1～1.2×10-2g/ml。然后在羥基磷灰石粉體中加入膠原溶液(每ml膠原溶液中加入0.25～0.3g羥基磷灰石千粉)，充分?jǐn)嚢杌靹?，用NaOH溶液調(diào)至PH值為7～8。將羥基磷灰石和膠原的混合膏狀沉淀物凍干成為多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨。冷凍干燥的溫度控制流程為經(jīng)3小時(shí)從室溫降至-40℃，保溫2小時(shí)，凍實(shí)后抽真空升華10小時(shí)，經(jīng)4小時(shí)升溫至0℃，每小時(shí)升溫10℃，0℃保溫4小時(shí)，經(jīng)1小時(shí)升溫至15℃，15℃保溫1小時(shí)，經(jīng)1小時(shí)升溫至25℃，緊接著經(jīng)1小時(shí)升溫至35℃，保溫5小時(shí)，去真空。
下面介紹
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一(1)納米徑粒羥基磷灰石的制備稱(chēng)取44g CaCl2.2H2O溶于1000ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，邊攪拌邊加入17血H3PO4，然后邊攪拌邊加入1mol/L的NaOH溶液至PH值為7.5。抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中100℃下干燥48小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體。
(2)膠原溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的豬腿的肌腱，仔細(xì)剔除脂肪和肌肉組織后用洗潔精洗滌去除肌腱表面的油脂，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱25g浸泡于1000ml 0.1％的磷酸(分析純)溶液中，并加入1200U(國(guó)際單位)的胃蛋白酶，充分混勻，在室溫下浸泡70～80小時(shí)，過(guò)濾除渣，使濾液的濃度達(dá)到1.08×10-2g/ml。
(3)稱(chēng)取250g羥基磷灰石干粉加入1000ml膠原溶液，充分?jǐn)嚢杌靹?，?mol/L的NaOH溶液調(diào)至PH值為7.3。
(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物倒入20×10×3cm3的不銹鋼托盤(pán)中，抹平，凍干成為多孔的固體即為羥基磷灰石/膠原復(fù)合人工骨。
(5)將上述人工骨裁切成2×1×3cm3的塊狀物，密封包裝，鈷源輻照消毒。
實(shí)施例二(1)納米徑粒羥基磷灰石的制備稱(chēng)取50g CaCl2.2H2O溶于1000ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，邊攪拌邊加入26g磷酸氫二氨((NH4)2HPO4)，然后邊攪拌邊加入1mol/L的NaOH溶液至PH值為8.0。抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中98℃下干燥48小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體。
(2)膠原溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的牛腿的肌腱，仔細(xì)剔除脂肪和肌肉組織后用洗潔精洗滌去除肌腱表面的油脂，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱25g浸泡于1000ml 0.1％的磷酸(分析純)溶液中，并加入1000U(國(guó)際單位)的胃蛋白酶，充分混勻，在室溫下浸泡70～80小時(shí)，過(guò)濾除渣，使濾液的濃度達(dá)到1.18×10-2g/ml。
(3)稱(chēng)取280g羥基磷灰石干粉加入1000ml膠原溶液，充分?jǐn)嚢杌靹?，?mol/L的NaOH溶液調(diào)至PH值為7.5。
(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物倒入20×10×3cm3的不銹鋼托盤(pán)中，抹平，凍干成為多孔的固體即為羥基磷灰石/膠原復(fù)合人工骨。
(5)將上述人工骨裁切成2×1×3.5cm3的塊狀物，密封包裝，鈷源輻照消毒。
實(shí)施例三(1)納米徑粒羥基磷灰石的制備稱(chēng)取189g硝酸鈣(Ca(NO3)2·4H2O)溶于1000ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，邊攪拌邊加入68g磷酸氫二鈉(Na2HPO4)，然后邊攪拌邊加入1mol/L的NaOH溶液至PH值為7.4。抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中95℃下干燥48小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體。
(2)膠原溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的馬腿肌腱，仔細(xì)剔除脂肪和肌肉組織后用洗潔精洗滌去除肌腱表面的油脂，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱25g浸泡于1000ml 0.1％的磷酸(分析純)溶液中，并加入1500U(國(guó)際單位)的胃蛋白酶，充分混勻，在室溫下浸泡70～80小時(shí)，過(guò)濾除渣，使濾液的濃度達(dá)到1.2×10-2g/ml。
(3)稱(chēng)取260g羥基磷灰石干粉加入1000ml膠原溶液，充分?jǐn)嚢杌靹?，?mol/L的NaOH溶液調(diào)至PH值為7.0。
(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物倒入20×10×3cm3的不銹鋼托盤(pán)中，抹平，凍干成為多孔的固體即為羥基磷灰石/膠原復(fù)合人工骨。
(5)將上述人工骨裁切成2×1×3cm3的塊狀物，密封包裝，鈷源輻照消毒。
實(shí)施例四(1)納米徑粒羥基磷灰石的制備稱(chēng)取189g硝酸鈣(Ca(NO3)2·4H2O)溶于1000ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，邊攪拌邊加入63g磷酸氫二氨((NH4)2HPO4)，然后邊攪拌邊加入1mol/L的NaOH溶液至PH值為7.2。抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中98℃下干燥48小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體。
(2)膠原溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的豬腿肌腱，仔細(xì)剔除脂肪和肌肉組織后用洗潔精洗滌去除肌腱表面的油脂，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱25g浸泡于1000ml 0.1％的磷酸(分析純)溶液中，并加入1100U(國(guó)際單位)的胃蛋白酶，充分混勻，在室溫下浸泡70～80小時(shí)，過(guò)濾除渣，使濾液的濃度達(dá)到1.18×10-2g/ml。
(3)稱(chēng)取300g羥基磷灰石干粉加入1000ml膠原溶液，充分?jǐn)嚢杌靹?，?mol/L的NaOH溶液調(diào)至PH值為8.0。
(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物倒入20×10×3cm3的不銹鋼托盤(pán)中，抹平，凍干成為多孔的固體即為羥基磷灰石/膠原復(fù)合人工骨。
(5)將上述人工骨裁切成2×1×2.5cm3的塊狀物，密封包裝，鈷源輻照消毒。
實(shí)施例五(1)納米徑粒羥基磷灰石的制備稱(chēng)取29.4g CaCl2.2H2O溶于1000ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，邊攪拌邊加入16g磷酸氫二氨((NH4)2HPO4)，然后邊攪拌邊加入1mol/L的NaOH溶液至PH值為7.9。抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中100℃下干燥48小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體。
(2)膠原溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的牛腿肌腱，仔細(xì)剔除脂肪和肌肉組織后用洗潔精洗滌去除肌腱表面的油脂，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱25g浸泡于1000ml 0.1％的磷酸(分析純)溶液中，并加入1200U(國(guó)際單位)的胃蛋白酶，充分混勻，在室溫下浸泡70～80小時(shí)，過(guò)濾除渣，使濾液的濃度達(dá)到1.08×10-2g/ml。
(3)稱(chēng)取270g羥基磷灰石干粉加入1000ml膠原溶液，充分?jǐn)嚢杌靹颍?mol/L的NaOH溶液調(diào)至PH值為7.2。
(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物倒入20×10×3cm3的不銹鋼托盤(pán)中，抹平，凍干成為多孔的固體即為羥基磷灰石/膠原復(fù)合人工骨。
(5)將上述人工骨裁切成2×1×3cm3的塊狀物，密封包裝，鈷源輻照消毒。
實(shí)施例六(1)納米徑粒羥基磷灰石的制備稱(chēng)取118g硝酸鈣(Ca(NO3)2·4H2O)溶于1000ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，邊攪拌邊加入29ml H3PO4，然后邊攪拌邊加入1mol/L的NaOH溶液至PH值為7.2。抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中98℃下干燥48小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體。
(2)膠原溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的馬腿肌腱，仔細(xì)剔除脂肪和肌肉組織后用洗潔精洗滌去除肌腱表面的油脂，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱25g浸泡于1000ml 0.1％的磷酸(分析純)溶液中，并加入1100U(國(guó)際單位)的胃蛋白酶，充分混勻，在室溫下浸泡70～80小時(shí)，過(guò)濾除渣，使濾液的濃度達(dá)到1.18×10-2g/ml。
(3)稱(chēng)取275g羥基磷灰石干粉加入1000ml膠原溶液，充分?jǐn)嚢杌靹颍?mol/L的NaOH溶液調(diào)至PH值為8.0。
(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物倒入20×10×3cm3的不銹鋼托盤(pán)中，抹平，凍干成為多孔的固體即為羥基磷灰石/膠原復(fù)合人工骨。
(5)將上述人工骨裁切成2×1×2.5cm3的塊狀物，密封包裝，鈷源輻照消毒。
權(quán)利要求
1.一種多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)制備納米徑粒羥基磷灰石將含Ca2+的化合物溶于去離子水中，配制Ca2+濃度為0.2～0.8mol/L的溶液，邊攪拌邊加入含PO43-的化合物，使Ca與P的摩爾比為1～1.67，然后邊攪拌邊加入NaOH溶液至PH值為7～8，抽濾收集沉淀，用去離子水洗滌3次，抽濾，濾餅置于干燥箱中90～150℃下干燥48～96小時(shí)，研磨后得到粒徑為納米量級(jí)的羥基磷灰石粉體；(2)制備膠原溶液取豬腿、牛腿或馬腿的肌腱，用去離子水漂洗后將肌腱粉碎至顆粒度為3～6毫米，將粉碎后的肌腱浸泡于0.1％的磷酸溶液中，并加入胃蛋白酶，使每毫升磷酸溶液中的胃蛋白酶為10～15國(guó)際活性單位，充分混勻，在室溫下浸泡50～100小時(shí)，將浸泡液過(guò)濾除渣，得到膠原溶液，濃度為1～1.2×10-2g/ml；(3)在上述制備的羥基磷灰石粉體中加入膠原溶液，每毫升膠原溶液中加入0.25～0.3g羥基磷灰石粉體，充分?jǐn)嚢杌靹?，用NaOH溶液調(diào)至PH值為7～8；(4)將上述羥基磷灰石和膠原的混合膏狀物冷凍干燥成為多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的含Ca2+的化合物為CaCl2或硝酸鈣。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的為(NH4)2HPO4、Na2HPO4或H3PO4中的任何一種
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的冷凍干燥的溫度控制流程為經(jīng)3小時(shí)從室溫降至-40℃，保溫2小時(shí)，凍實(shí)后抽真空升華10小時(shí)，經(jīng)4小時(shí)升溫至0℃，每小時(shí)升溫10℃，0℃保溫4小時(shí)，經(jīng)1小時(shí)升溫至15℃，15℃保溫1小時(shí)，經(jīng)1小時(shí)升溫至25℃，緊接著經(jīng)1小時(shí)升溫至35℃，保溫5小時(shí)，去真空。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨的制備方法，屬于生物工程及材料科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。首先制備納米徑粒羥基磷灰石，然后制備膠原溶液，在羥基磷灰石粉體中加入膠原溶液，最后將灰石和膠原的混合膏狀物冷凍干燥成為多孔膠原復(fù)合納米羥基磷灰石人工骨。用本法制備的人工骨，其成分類(lèi)似天然骨，具有傳導(dǎo)作用強(qiáng)、孔隙率高、孔隙交通好等優(yōu)點(diǎn)，有利于骨細(xì)胞生長(zhǎng)；低結(jié)晶度的納米羥基磷灰石，有利于人工骨的降解吸收和自體骨的重建；生物相容性好，pH值中性，降解過(guò)程沒(méi)有酸性反應(yīng)，不會(huì)引起非感染性炎癥或排斥反應(yīng)，其中的膠原在被機(jī)體降解吸收的過(guò)程中可為骨細(xì)胞的長(zhǎng)入不斷騰出空間，為臨床骨科手術(shù)提供了一種優(yōu)質(zhì)的全新骨科植入材料。
文檔編號(hào)A61L27/00GK1775306SQ20051010794
公開(kāi)日2006年5月24日 申請(qǐng)日期2005年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月10日
發(fā)明者胡慶柳, 張居適, 李志龍, 沈建成 申請(qǐng)人:胡慶柳