專利名稱：一種抗氧化藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明技術(shù)涉及一種醫(yī)用配制品，具體涉及一種有清除體內(nèi)自由基作用的用于抗氧化治療的藥物。
背景技術(shù)：
近十余年來的研究證明，在各種臨床和實(shí)驗(yàn)性腎臟病的病理生理過程中，反應(yīng)性的氧化代謝產(chǎn)物起著關(guān)鍵性的介質(zhì)作用。尤其是活性自由基在腎臟病的發(fā)生發(fā)展過程中起著十分重要的作用。近年來通過對人和實(shí)驗(yàn)性腎小球腎炎動物模型研究證明，除了多形核白細(xì)胞與單核細(xì)胞外，腎臟的固有細(xì)胞及浸潤細(xì)胞均可產(chǎn)生活性自由基，損傷的系膜細(xì)胞能產(chǎn)生超氧陰離子自由基、過氧化氫和炎癥介質(zhì)如前列腺素、補(bǔ)體膜攻擊復(fù)合體C56-9；腎小球內(nèi)皮細(xì)胞可受多種因素作用(包括補(bǔ)體、免疫復(fù)合物、各種細(xì)胞因子)，也是反應(yīng)性氧化代謝產(chǎn)物的來源之一；腎小球上皮細(xì)胞可產(chǎn)生溶解腎小球基膜的蛋白酶(包括組織蛋白酶、前纖維蛋白纖維酶激活劑)而導(dǎo)致產(chǎn)生蛋白尿?；钚宰杂苫裳趸该髻|(zhì)酸及膠原，使腎小球基膜受酶攻擊的敏感性增加，并可介導(dǎo)系膜細(xì)胞溶解，繼發(fā)系膜增生，系膜基質(zhì)合成增多，這也是進(jìn)行性腎損害的一個(gè)重要環(huán)節(jié)?；钚宰杂苫饔糜谥悾尚纬删哂汹吇约凹?xì)胞毒性物質(zhì)，使腎小球內(nèi)炎癥狀態(tài)持續(xù)存在，而導(dǎo)致終末期腎小球硬化。實(shí)驗(yàn)證明，小管間質(zhì)中浸潤的單核巨噬細(xì)胞數(shù)與腎功能下降程度明顯相關(guān)。而這些細(xì)胞又是活性自由基的來源之一。活性自由基可刺激間質(zhì)細(xì)胞增生并分泌細(xì)胞外基質(zhì)，形成間質(zhì)纖維化。有人在細(xì)菌間質(zhì)性腎炎模型中發(fā)現(xiàn)，使用抗氧化劑可減緩其疤痕的形成過程?；钚宰杂苫赏ㄟ^不同途徑控制微小血管血流量，結(jié)果是使血管擴(kuò)張。同時(shí)，活性自由基使血管通透性增加，增強(qiáng)炎癥細(xì)胞的粘附力，刺激血管平滑肌增殖，并使內(nèi)皮細(xì)胞水腫、擴(kuò)張、脫落、促使微血栓的形成。這就是導(dǎo)致腎小動脈硬化的病理基礎(chǔ)。腎臟病患者隨著其腎功能的減退可導(dǎo)致谷胱甘肽在腎內(nèi)代謝減慢和肝腎間循環(huán)次數(shù)的減少，可出現(xiàn)全身抗氧化能力顯著下降。再則，隨著患者食欲下降導(dǎo)致抗氧化物質(zhì)和含抗氧化物質(zhì)的營養(yǎng)攝入減少，另外，長期尿中丟失抗氧化物質(zhì)致機(jī)體抗氧化能力降低和一些抗氧化性藥物的服用均是影響其抗氧化能力的原因。況且，隨著患者自身抵抗力和免疫力的下降，極易發(fā)生細(xì)菌感染，而導(dǎo)致炎癥細(xì)胞發(fā)生呼吸爆發(fā)，產(chǎn)生大量的活性自由基，加劇組織損傷。
除腎臟病外，腫瘤、白血病與其它免疫性疾病均是自由基相關(guān)疾病，抗氧化治療有助于上述疾病的緩解，目前臨床上常用的抗氧化劑主要有維生素C和維生素E，維生素C主要以清除·OH為主，但需大劑量使用才能達(dá)到目的，但同時(shí)，大劑量維生素C使用容易導(dǎo)致酸中毒，維生素E主要通過抑制細(xì)胞膜上的脂質(zhì)過氧化來達(dá)到抗氧化的目的，但長期使用則有潛在的致突變風(fēng)險(xiǎn)。茶多酚是一種天然無毒的植物多酚。具有強(qiáng)大的抗氧化活性。其抗氧化活性是SOD酶的6倍，維生素E、維生素C的20倍左右。茶多酚的強(qiáng)抗氧化活性的另一方面則反映其穩(wěn)定性較差，易于氧化失活；在胃液pH環(huán)境下易形成難溶性多聚體；其化學(xué)結(jié)構(gòu)上存在多個(gè)酚羥基，說明其水溶性好而脂溶性差，進(jìn)入細(xì)胞膜的幾率降低而導(dǎo)致其生物利用度下降，因而難于達(dá)到理論上的抗氧化強(qiáng)度。另外，單純使用茶多酚也難以達(dá)到對各種活性自由基的清除目的。
因此，克服抗氧化劑茶多酚存在的以上缺陷和不足，則是研制抗氧化藥物亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種復(fù)方抗氧化劑，不僅抗氧化活性強(qiáng)，對每一類自由基均有較好的清除作用，而且穩(wěn)定性好。
實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術(shù)方案如下抗氧化藥物的組分與各組分的重量配比如下茶多酚50％～80％維生素C 5％～20％姜黃素10％～30％雙乙酸鈉 0.01％～3％。
本發(fā)明抗氧化劑以茶多酚為主，添加適量維生素C、姜黃素、雙乙酸鈉，將其配制成一種復(fù)方茶多酚，然后，利用微膠囊技術(shù)將此復(fù)方茶多酚微膠囊化。
茶多酚抗氧化作用主要通過以下幾種方式實(shí)現(xiàn)的。(1)茶多酚可直接作用于自由基而使其猝滅。(2)茶多酚與自由基反應(yīng)生成較為穩(wěn)定的酚氧自由基使其猝滅；(3)茶多酚可抑制與自由基產(chǎn)生有關(guān)的酶、保護(hù)抗氧化酶系SOD酶、GSH酶、CAT酶；(4)茶多酚可與誘導(dǎo)氧化的過渡金屬離子絡(luò)合，茶多酚屬多酚結(jié)構(gòu)，具有較強(qiáng)的絡(luò)合金屬離子的性能。而許多過渡金屬離子可誘導(dǎo)或直接產(chǎn)生自由基。茶多酚可有效絡(luò)合游離的過量的Fe而減輕自由基產(chǎn)生及其對機(jī)體損傷，且不結(jié)合鐵蛋白等絡(luò)合態(tài)Fe，故不會使生物體造成缺鐵性貧血。茶多酚是Ca2+的較強(qiáng)絡(luò)合劑，通過絡(luò)合細(xì)胞內(nèi)Ca2+，降低Ca2+濃度而抑制黃嘌呤氧化酶的生成，起到抗氧化作用。另外能提高超氧化物歧化酶活性16～30％；(5)研究表明茶多酚對三種抗氧化劑-VitC、VitE、和GSH，均有保護(hù)式再生作用，因而維護(hù)著細(xì)胞的正常功能；(6)茶多酚與其它抗氧化劑具協(xié)同增效功能；(7)茶多酚可提高機(jī)體免疫力。
姜黃素屬植物多酚類，也是一種植物提取物，具有較強(qiáng)的抗氧化活性，雖然其總體抗氧化能力不如茶多酚，但其對·OH具有較強(qiáng)的清除能力，維生素C則對超氧陰離子具有較強(qiáng)的清除能力，將其與茶多酚配合應(yīng)用對茶多酚具協(xié)同作用。雙乙酸鈉是一種防腐劑，添加0.01％-3.0％的雙乙酸鈉有助于保鮮防腐，延長產(chǎn)品的貯存期，再則，具酸性的雙乙酸鈉有利于茶多酚的穩(wěn)定性。
本發(fā)明將復(fù)方茶多酚制成以殼聚糖與海藻酸鈉為囊壁、以復(fù)方茶多酚為囊心的雙層微膠囊。
雙層微膠囊的制作方法為將復(fù)方茶多酚溶解在乙醇中作為囊心；然后配制3％殼聚糖乙酸溶液，將囊心緩緩加入殼聚糖乙酸溶液中，充分?jǐn)嚢琛Υ朔稚⒁哼M(jìn)行噴霧干燥，得以殼聚糖為基體的復(fù)方茶多酚微球。
配制3％的海藻酸鈉水溶液，加入殼聚糖微球，攪拌使之均勻分散在海藻酸鈉水溶液中，充分?jǐn)嚢瑁购Ｔ逅徕c沉淀在殼聚糖微球周圍。將所得到的沉淀過濾，室溫干燥即可。
本發(fā)明的有益效果是，茶多酚的穩(wěn)定性、抗氧化活性得以顯著提高，微膠囊技術(shù)使抗氧化劑能以緩釋形式經(jīng)小腸吸收，提高了茶多酚的生物利用度。急性毒性試驗(yàn)表明此微膠囊對雌雄SD大鼠的急性經(jīng)口LD50為雌鼠6810mg/kg·bw，雄鼠5840mg/kg·bw，根據(jù)GB15193.3-94中急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，此微膠囊屬實(shí)際無毒物。
具體實(shí)施例實(shí)施例1將70克茶多酚、7克維生素C、22克姜黃素、1克雙乙酸鈉溶解在500mL50％乙醇水溶液中作為囊心，然后配制500mL 3％殼聚糖乙酸溶液，將囊心緩緩加入殼聚糖乙酸溶液中，加入1％的硬脂酸，80攝氏度下800轉(zhuǎn)/min充分?jǐn)嚢?小時(shí)后。對此分散液進(jìn)行噴霧干燥，得以殼聚糖為基體的O/W型復(fù)方茶多酚微球。
配制500mL 3％的海藻酸鈉水溶液，加入殼聚糖微球，攪拌使之均勻分散在海藻酸鈉水溶液中，800轉(zhuǎn)/min充分?jǐn)嚢?0分鐘，使海藻酸鈉沉淀在殼聚糖微球周圍。將所得到的沉淀過濾，室溫干燥即可得以殼聚糖與海藻酸鈉為囊壁、以復(fù)方茶多酚為囊心的雙層微膠囊。
經(jīng)微弱化學(xué)發(fā)光法檢測，復(fù)方茶多酚比茶多酚在體外對O2的清除能力提高2倍左右，對·OH清除能力提高2倍左右，對H2O2的清除能力提高2倍左右(見表1)；而復(fù)方茶多酚微膠囊在體外對O2的清除能力提高3倍左右，對·OH清除能力提高5倍左右，對H2O2的清除能力提高5倍左右(見表1)。加速處理(光照、高溫、高濕)條件下對茶多酚與微膠囊處理一周后，發(fā)現(xiàn)微膠囊的穩(wěn)定性顯著提高(見表2)。阿霉素腎病大鼠模型實(shí)驗(yàn)表明復(fù)方茶多酚組總抗氧化能力在血清及肝腎組織中均顯著高于茶多酚組(P均＜0.05)，微膠囊對阿霉素腎病大鼠的肝、腎及血清的總抗氧化能力顯著強(qiáng)于茶多酚組(P均＜0.01)與復(fù)方茶多酚組(P均＜0.05)，(見表3)。
表1 茶多酚與茶多酚微膠囊清除氧自由基能力比較(n＝10)

注IC50是指抗氧化劑以各種自由基的半數(shù)清除率。
表2 加速處理?xiàng)l件下一周微膠囊中茶多酚含量的變化(n＝5，％)

表3 實(shí)驗(yàn)?zāi)┝M腎病大鼠肝組織、腎組織及血清中總抗氧化能力比較(x±s，U/mL)

注①P＜0.01，②P＜0.05與茶多酚組相比；③P＜0.05與復(fù)方茶多酚組相比。
實(shí)施例2將65克茶多酚、15克維生素C、19克姜黃素、1克雙乙酸鈉溶解在500mL50％乙醇水溶液中作為囊心，然后配制500mL 3％殼聚糖乙酸溶液，將囊心緩緩加入殼聚糖乙酸溶液中，加入1％的硬脂酸，80攝氏度下800轉(zhuǎn)/min充分?jǐn)嚢?小時(shí)后。對此分散液進(jìn)行噴霧干燥，得以殼聚糖為基體的O/W型復(fù)方茶多酚微球。
配制500mL 3％的海藻酸鈉水溶液，加入殼聚糖微球，攪拌使之均勻分散在海藻酸鈉水溶液中，800轉(zhuǎn)/min充分?jǐn)嚢?0分鐘，使海藻酸鈉沉淀在殼聚糖微球周圍。將所得到的沉淀過濾，室溫干燥即可得以殼聚糖與海藻酸鈉為囊壁、以復(fù)方茶多酚為囊心的雙層微膠囊。
經(jīng)微弱化學(xué)發(fā)光法檢測，復(fù)方茶多酚比茶多酚在體外對O2的清除能力提高1.6倍左右，對·OH清除能力提高1.5倍左右，對H2O2的清除能力提高1.5倍左右；復(fù)方茶多酚微膠囊在體外對O2的清除能力提高2倍左右，對·OH清除能力提高2倍左右，對H2O2的清除能力提高3倍左右(見表4)。加速處理?xiàng)l件下對茶多酚與微膠囊處理一周后，發(fā)現(xiàn)微膠囊的穩(wěn)定性顯著提高(見表5)。阿霉素腎病大鼠模型實(shí)驗(yàn)表明復(fù)方茶多酚組總抗氧化能力在血清及肝腎組織中均顯著高于茶多酚組(P均＜0.05)，微膠囊對阿霉素腎病大鼠的肝、腎及血清的總抗氧化能力顯著強(qiáng)于茶多酚組(P均＜0.01)與復(fù)方茶多酚組(P均＜0.05)，(見表3)。
表4 茶多酚與茶多酚微膠囊清除氧自由基能力比較

注IC50是指抗氧化劑以各種自由基的半數(shù)清除率。
表5 加速處理?xiàng)l件下一周微膠囊中茶多酚含量的變化(n＝5，％)

表6 實(shí)驗(yàn)?zāi)┝M腎病大鼠肝組織、腎組織及血清中總抗氧化能力比較(x±s，U/mL)

注①P＜0.01，②P＜0.05與茶多酚組相比；③P＜0.05與復(fù)方茶多酚組相比。
權(quán)利要求
1.一種抗氧化藥物，其特征在于該藥物的組分與各組分的重量配比如下茶多酚 50％～80％維生素C 5％～20％姜黃素 10％～30％雙乙酸鈉0.01％～3％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于抗氧化治療的藥物。它是以茶多酚為主體，添加了適量的維生素C、姜黃素、雙乙酸鈉，并以生物緩釋型成膜材料殼聚糖與海藻酸鈉為壁材，以復(fù)方茶多酚為囊心，制備腸溶性緩釋型微膠囊。復(fù)方茶多酚抗氧化活性顯著增強(qiáng)，經(jīng)微膠囊化后，其穩(wěn)定性與抗氧化活性顯著強(qiáng)于茶多酚與復(fù)方茶多酚、并能以緩釋形式經(jīng)小腸吸收，為自由基相關(guān)疾病的抗氧化治療提供了新的途徑與手段，用于腎臟病，可通過有效地清除活性自由基，改善腎功能，降低尿蛋白的排泄，減輕腎臟進(jìn)行性損害，延緩腎臟病理慢性進(jìn)展。也可用于腫瘤、白血病與其它免疫性疾病的抗氧化治療。
文檔編號A61K31/352GK1723890SQ20051003191
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月22日
發(fā)明者何小解, 易著文 申請人:中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院