專利名稱：一種脈絡(luò)寧注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以中藥復(fù)方提取物為活性成分的注射制劑，具體而言，是一種脈絡(luò)寧注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
脈絡(luò)寧注射液是在著名醫(yī)方“四妙勇安湯”的基礎(chǔ)上研制而成的中藥復(fù)方注射劑，由牛膝、玄參、石斛、金銀花四味中藥組成，廣泛應(yīng)用于血栓閉塞性脈管炎、動脈硬化性閉塞癥、腦血栓形成及后遺癥、多發(fā)性大動脈炎、四肢急性動脈栓塞癥、糖尿病壞疽、靜脈血栓形成及血栓性靜脈炎等。但近年來不良反應(yīng)的報道日益增多(羅治華，蔣三員.中國藥物與臨床.2002，2(6)412-413；陳愛群等.70例脈絡(luò)寧注射液不良反應(yīng)文獻(xiàn)分析.藥物不良反應(yīng)雜志.2003，2162-165.)，集中在皮膚損害、急性呼吸窘、咽喉痙攣、過敏性休克、頭痛、微循環(huán)障礙、心絞痛、四肢震顫、腰痛、水腫、腎功能衰竭等多個方面。
中國專利CN1078148A公開了脈絡(luò)寧注射液的生產(chǎn)方法，該方法采用水提醇沉法將四種藥材同時提取，然后再用乙酸乙酯萃取得有效成分。上述方法存在以下幾方面缺陷1.采用水提法提取組方中各味藥材有效成分的同時水溶性雜質(zhì)溶出較多，之后的醇沉工藝雖可去除部分雜質(zhì)，但不夠徹底；2.四味中藥混合水提后僅采用乙酸乙酯進(jìn)行純化，純化效果不徹底；3.乙酸乙酯純化后溶液直接進(jìn)行制劑工藝，沒有進(jìn)一步除去樹脂、蛋白、鞣質(zhì)等大分子物質(zhì)。
以上分析可以看出，現(xiàn)有的脈絡(luò)寧注射制劑制備工藝較落后、粗放，一方面使得有效成分含量不高，一方面使異源性雜質(zhì)得不到有效控制，所以不良反應(yīng)的發(fā)生頻率越來越高。而且，水針劑在運(yùn)輸、儲藏過程中還存在不穩(wěn)定的問題。
因此，開發(fā)出更加安全、有效、穩(wěn)定的脈絡(luò)寧制劑在臨床中具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，根據(jù)組方中各味藥不同的理化性質(zhì)，采用不同的方法提取，分離，精制，提供一種安全、有效、穩(wěn)定的脈絡(luò)寧注射制劑。
本發(fā)明的另一目的是提供該脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法。
本發(fā)明是通過下面的技術(shù)方案實現(xiàn)的
本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑包括由牛膝、玄參、石斛、金銀花為原料制得的提取物和注射制劑中可接受的載體。優(yōu)選地，所述的提取物由牛膝、玄參、石斛和金銀花藥材按照1∶1∶1∶1的重量份配比提取制得；所述的載體選自甘露醇、乳糖、蔗糖和PVP中的一種或兩種。更優(yōu)選地，所述的原料藥和載體具有以下重量份配比牛膝900玄參900石斛900金銀花900甘露醇53PVP 1。
本發(fā)明的脈絡(luò)寧制劑可以制成注射液、凍干粉針劑和輸液劑；優(yōu)選注射液和凍干粉針劑；最佳為凍干粉針劑。
本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法包括以下步驟(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用乙醇滲漉提取，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮成浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮成浸膏，過濾，去除沉淀，鹽酸調(diào)節(jié)pH值，乙酸乙酯萃取，合并萃取液，回收乙酸乙酯后真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用乙醇浸泡后回流提取，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮成浸膏，加入水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上大孔吸附樹脂，分別用水、25％乙醇、75％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并真空干燥得提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水加熱，溶解，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液，冷藏過夜后過濾，濾液中加入甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至處方量，調(diào)pH值5.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
優(yōu)選地，本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法包括以下步驟(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用8～16倍量的50～95％乙醇滲漉提取，10～40h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.05～1.30(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加4～8倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.25(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，10％～30％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～6，乙酸乙酯萃取2～6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用50％～90％乙醇浸泡1～3h后回流提取2～3次，每次1～3h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.20(50℃)的浸膏，加入4～6倍量的水充分?jǐn)嚢瑁o置過夜，過濾，濾液上中極性或強(qiáng)極性大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水、2倍床體積25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；
(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水加熱煮沸8～15分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液，冷藏過夜后過濾，濾液中加入處方量的甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至處方量，調(diào)pH值6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法包括以下步驟(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的80％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8或SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液，冷藏過夜后過濾，濾液中加入處方量的甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至處方量，調(diào)pH值6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
其中，步驟(2)中所述的大孔吸附樹脂優(yōu)選SA-1型大孔吸附樹脂。
最佳地，本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑為粉針劑，其處方及制備方法為處方牛膝4500g 玄參4500g 石斛4500g 金銀花4500g 甘露醇265g PVP 5g制備方法(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的80％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8或SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml，加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液3000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入處方量的甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至3500ml，調(diào)pH值至6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑是大量科學(xué)實驗的結(jié)果，每種藥材的提取方法和制劑工藝都經(jīng)過反復(fù)地實驗和驗證。下面通過具體試驗說明本發(fā)明制備方法的科學(xué)性。
金銀花提取物制備工藝的研究1.實驗方法將金銀花過粉碎機(jī)打成粗粉，準(zhǔn)確稱取兩份，每份100g。樣品1用12倍量水回流提取兩次，第一次用7倍量攪拌下回流提取3h，傾出上清夜；藥渣第二次加入5倍量攪拌下回流提取2h，傾出上清夜；合并二次水提取液，確定體積后HPLC測定綠原酸的濃度。樣品2用12倍量75％乙醇滲漉，滲漉液確定體積，HPLC測定綠原酸的濃度。
2.結(jié)果兩組實驗提取液測定體積和綠原酸的濃度，計算綠原酸的量，并計算提取率。取提取液20ml置揮發(fā)皿中蒸干，真空干燥稱重，計算每種提取方法總的所得固形物的量。結(jié)果見表1。
表1兩種提取方法有效成分綠原酸的提取率

由表1可以看出，乙醇滲漉提取的提取率高于水提取總提取率，并且所得固形物的量也低于水提取，所以，用乙醇提取金銀花的方法優(yōu)于水提取。
牛膝、玄參和石斛提取物制備工藝的研究1.實驗方法分別將牛膝和石斛粉碎成粗粉，玄參切片，各取100g均勻混合，稱取2份。樣品1用14倍量的水回流提取兩次，第一次用8倍量的水浸泡2h，然后攪拌下回流提取3h，傾出上清夜；藥渣第二次加6倍量的水?dāng)嚢柘禄亓魈崛?h，傾出上清夜；合并兩次水提取液，確定體積后HPLC測定肉桂酸、齊墩果酸型皂苷、濱蒿內(nèi)酯的濃度。樣品2同法操作，改用80％乙醇提取，合并兩次提取液后確定體積，HPLC測定肉桂酸、齊墩果酸型皂苷、濱蒿內(nèi)酯的濃度。
2.結(jié)果兩組實驗提取液測定體積和肉桂酸、齊墩果酸型皂苷、濱蒿內(nèi)酯的濃度，計算指標(biāo)成分的量，并計算提取率。取提取液20ml置揮發(fā)皿中蒸干，真空干燥稱重，計算每種提取方法總的所得固形物的量。結(jié)果見表2。
表2兩種提取方法指標(biāo)成分的提取率

由表2可以看出，三個指標(biāo)成分乙醇提取的提取率均高于水提取總提取率，并且所得固形物的量也低于水提取，所以，用乙醇提取牛膝、玄參和石斛的方法優(yōu)于水提取。
超濾工藝合理性的研究1.實驗方法取粉碎后牛膝玄參石斛提取物4g，金銀花提取物15g，均勻混合記為樣品1。同樣的操作再取兩份，分別記為樣品2樣品3。分別加注射水200ml，分別加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h后過濾，濾過液分別過截留分子量為3000的超濾膜超濾，分別收集超濾液300ml。HPLC法測定超濾液中肉桂酸，齊墩果酸型皂苷、濱蒿內(nèi)酯的濃度。分別精密量取超濾液20ml至蒸發(fā)皿中水浴上烘干，105℃烘箱里烘3h，取出后放置干燥器里半小時，稱重。
2、結(jié)果計算超濾前后肉桂酸、齊墩果酸型皂苷、濱蒿內(nèi)酯的轉(zhuǎn)移率和固形物收率，結(jié)果見表3。
表3超濾前后指標(biāo)成分的轉(zhuǎn)移率和固形物收率

超濾前后的溶液分別按照藥典方法檢測樹脂、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)項，結(jié)果見表4。
表4超濾前后檢測項目結(jié)果的對比

由試驗結(jié)果可以看出，超濾后色澤明顯變好，并且超濾可以出去絕大部分樹脂、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)雜質(zhì)。由表4可以看出指標(biāo)成分的轉(zhuǎn)移率均較高，因此可以確定超濾是必要的。
凍干曲線的確定1.實驗方法取粉碎后牛膝玄參石斛提取物4g，金銀花提取物15g，均勻混合加注射用水200ml，加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h后過濾，濾過液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液300ml。超濾液中加入甘露醇26.5g，PVP0.5g濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至350ml。調(diào)PH至6.5-7.0，除菌濾過，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，樣品移入冷凍干燥箱中，將樣品測溫探頭和測定電極分插入3個樣品瓶內(nèi)，使冷凍機(jī)以20℃/小時的速度降溫，待樣品完全解凍后〔從視窗觀察，樣品為色澤、質(zhì)地均勻的晶柱〕，停止壓縮機(jī)，并開始降溫，使隔板的溫度以10℃/小時的速度上升，記錄樣品的溫度和隔板溫度以及相對應(yīng)的電阻，得共熔點為-21℃。
2、結(jié)果經(jīng)多次冷凍干燥試驗確定凍干曲線，具體參數(shù)見下表。

本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑具有以下有益效果1.根據(jù)組方中各單味藥的理化性質(zhì)，采用醇提水沉的方法分別提取，提高了有效成分的含量；2.根據(jù)組方中各單味藥的理化性質(zhì)，采用乙酸乙酯和大孔樹脂的方法分別精制，進(jìn)一步純化有效成分；3.制劑過程中的超濾步驟最大程度上去除雜質(zhì)，從而保證了最終產(chǎn)品的安全、有效、穩(wěn)定。


圖1為本發(fā)明藥物脈絡(luò)寧凍干粉的凍干曲線圖為了更好的理解本發(fā)明，以下通過實驗例來進(jìn)一步闡述發(fā)明藥物的有益效果，實驗例包括本發(fā)明藥物的藥效學(xué)動物試驗和穩(wěn)定性研究。下面試驗旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明藥物的作用，而非對本發(fā)明的限制。本實驗例采用的發(fā)明藥物是按實施例4制備而成。
實驗例一對大鼠大腦中動脈栓線法局灶性腦缺血再灌注損傷模型的治療作用經(jīng)過腦梗塞的大鼠麻醉清醒出現(xiàn)對側(cè)面前肢內(nèi)收，肩內(nèi)旋，肌張力下降，推右肩向?qū)?cè)移動，抵抗阻力降低，甚至有些動物還出現(xiàn)不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈現(xiàn)象等偏癱樣癥狀。將24小時存活的大鼠進(jìn)行神經(jīng)病學(xué)評分，脈絡(luò)寧組大鼠與模型組比較，大鼠的行為障礙明顯改善(p＜0.01)脈絡(luò)寧高、中劑量組的腦含水量明顯低于模型組(p＜0.01)；TTC染色結(jié)果顯示用藥組腦缺血再灌注24h后腦組織梗塞程度明顯減小，在光鏡下觀察腦組織主要呈缺血性改變，出現(xiàn)明顯的軟化灶，經(jīng)脈絡(luò)寧組大鼠腦組織缺血程度減輕，減小軟化灶。
實驗例二對沙土鼠全腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用全腦缺血模型組鼠腦組織含水量明顯于假手術(shù)組，脈絡(luò)寧用藥高，中劑量組與模型組對比均有差異性顯著(p＜0.01)；模型組腦組織SOD活動明顯降低，MDA含量明顯提高，脈絡(luò)寧各劑量組與模型對照組比較則SOD活性明顯提高，MDA含量顯著下降(p＜0.05)；病理結(jié)果表明，模型組6例見小灶性梗死區(qū)，可見細(xì)胞核固縮，染色加深，核仁不清，海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞明顯減少，排列紊亂，細(xì)胞體積變小，形態(tài)不規(guī)則，部分胞核固縮深染，核仁消失，胞質(zhì)不均，部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，細(xì)胞間分離。脈絡(luò)寧用藥組神經(jīng)元及腦實質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常，未見梗死灶，部分樣本可見細(xì)胞核固縮，染色加深，核仁不清，變化數(shù)量與程度明顯較模型組輕。
實驗例三對局灶性腦缺血(MCAO)大鼠腦血流量的影響模型對照組大鼠腦栓塞后腦血流量明顯減少，MCAO10min后下降為原來的51.3％，之后繼續(xù)下降，但各時點下降幅度與10min無明顯差異，各給藥量組顯示，MACO后其腦血流值比模型組明顯增加(p＜0.05)，以脈絡(luò)寧高劑量最為明顯，表明脈絡(luò)寧能明顯增加MCAO后大鼠的腦血流量。
實驗例四活血化淤作用脈絡(luò)寧對ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集有明顯的抑制作用，在0.1ml～0.4g/ml劑量間隨著劑量的增大抑制作用逐漸增強(qiáng)，即其對ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集的抑制作用有明顯的劑量依賴性；體內(nèi)抗血栓形成實驗中脈絡(luò)寧三個劑量均能明顯抑制大鼠血栓形成；脈絡(luò)寧三個劑量均有明顯的延長凝血時間的作用。大鼠給予脈絡(luò)寧3d后，各劑量組與復(fù)方丹參注射液的作用相似，使凝血酶時間明顯延長，凝血酶原時間和部分凝血活酶時間也顯著延長，降低血纖維蛋白原濃度。
實驗例五急性毒性試驗脈絡(luò)寧按338g/kg原生藥體重小鼠灌胃給藥后，一日兩次，第二次給藥30min后活動量、采食量減少，第2天后恢復(fù)正常，未見其他異常反應(yīng)，在以后的連續(xù)7天觀察期中未見其它明顯毒性反應(yīng)，無一只動物死亡，平均體重增長1.21g，解剖觀察，各動物主要臟器無肉眼可見病變。累計劑量676g/kg，最大給藥量相當(dāng)于臨床用量的1127倍以上。
實驗例六大鼠長期毒性試驗脈絡(luò)寧，大鼠連續(xù)90天灌胃給藥120.0 60.0 12.0g/kg生藥三個劑量，對照組給蒸餾水，以及停藥后觀察恢復(fù)期15天。
連續(xù)給藥90天，三個劑量組動物的外觀體征、行為活動無明顯異常，飼料日耗量隨體重增長而增加，各組動物對飼料消耗量無明顯差別。給藥90天與給藥前(0天)比，體重平均增長大劑量151.93g、中劑量117.36g、小劑量152.13g，對照組157.9g。給藥90天，大、中、小劑量組外周血象檢查指標(biāo)與對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異，血液生化檢查10項指標(biāo)，大劑量組T-bil與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)，其他血液生化檢查，數(shù)據(jù)均在正常范圍內(nèi)波動，停藥觀察15天，未見異常。解剖觀察各組動物除有個別動物肺組織有肉眼可見異常外，其它組織均無肉眼可見病變；給藥90天大、中劑量組肝臟系數(shù)與小劑量組和對照組比較p＜0.05，其它各肝臟系數(shù)組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異；停藥15天也無統(tǒng)計學(xué)差異。組織病理學(xué)檢查，大劑量組和對照組心、肝、脾、肺、腎、腦(小腦)、性腺(睪丸、前列腺、子宮、卵巢)、甲狀腺、胸腺、胰腺、腎上腺、胃、上指腸、回、結(jié)腸、淋巴結(jié)等。給藥90天，停藥15天以上各臟器均無形態(tài)、結(jié)構(gòu)改變。
實驗例六穩(wěn)定性試驗1.方法三批脈絡(luò)寧凍干粉樣品(批號分別為030515、030521、030526)以臨床試驗用包裝(在包裝材料質(zhì)地與結(jié)構(gòu)上相當(dāng)于上市藥品的包裝)室溫放置，連續(xù)考察12個月，觀察其變異情況，取其平均值。
2.結(jié)果結(jié)果見表5。
表5三批樣品穩(wěn)定性研究結(jié)果

本發(fā)明藥物是通過以下實施例制備而成，以下具體實施例是對本發(fā)明的解釋，并不能限制本發(fā)明。
具體實施例方式
實施例1脈絡(luò)寧凍干粉的制備(1)取金銀花1500g粉碎成粗粉，過2號篩，用8倍量的50乙醇滲漉提取，15h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.05(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加4倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，10％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.5，等體積乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各1500g粉碎后用60％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次2h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(≤70℃)至相對密度為1.05(50℃)的浸膏，加入4倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水、2倍床體積25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水600ml，加熱煮沸8分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液1000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入100g的甘露醇和2gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至1050ml，調(diào)pH值6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑。
實施例2脈絡(luò)寧凍干粉的制備(1)取2000g金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的75％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，30％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3，等體積乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各2000g粉碎后用70％乙醇浸泡3h后回流提取3次，每次1h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，加入6倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水、2倍床體積25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水1200ml加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液1500ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入100g甘露醇和3gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至1575ml，調(diào)pH值6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑。
實施例3脈絡(luò)寧凍干粉的制備(1)取5000g金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用14倍量的90％乙醇滲漉提取，30h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.25(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加5倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4，等體積乙酸乙酯萃取5次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各4500g粉碎后用80％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次3h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.05(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水、2倍床體積25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液3000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入275g甘露醇和5gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至3500，調(diào)pH值6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑。
實施例4脈絡(luò)寧凍干粉的制備(1)取4500g金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的80％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各4500g粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8或SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml，加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液3000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入265g甘露醇和5gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至3500ml，調(diào)pH值至6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑。
實施例5脈絡(luò)寧凍干粉的制備(1)取6000g金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的80％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.05(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.05(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各6000g粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入6倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水2500ml加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液3500ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入350g甘露醇和6gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至4550ml，調(diào)pH值6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑。
實施例6脈絡(luò)寧凍干粉的制備(1)取3000g金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用10倍量的80％乙醇滲漉提取，25h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.5，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各3000g粉碎后用70％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水1500ml加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液2000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入180g甘露醇和2gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至2500ml，調(diào)pH值6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑。
實施例7脈絡(luò)寧注射液的制備(1)取4500g金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用10倍量的75％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，30％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各5000g粉碎后用70％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入4倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水2500ml加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液3000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入270g甘露醇和5gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至3500ml，調(diào)pH值6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
實施例8脈絡(luò)寧注射液的制備(1)取4500g金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的80％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取牛膝、石斛、玄參各4500g粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8或SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml，加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液3000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入265g甘露醇和5gPVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至3500ml，調(diào)pH值至6.5～7.0，0.22μm微孔濾膜除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
權(quán)利要求
1.一種脈絡(luò)寧注射制劑，其特征在于，包括由牛膝、玄參、石斛、金銀花為原料制得的提取物和注射制劑中可接受的載體。
2.如權(quán)利要求1所述的脈絡(luò)寧注射制劑，其特征在于，所述的提取物由牛膝、玄參、石斛和金銀花藥材按照1∶1∶1∶1的重量份配比提取制得。
3.如權(quán)利要求1所述的脈絡(luò)寧注射制劑，其特征在于，所述的載體選自甘露醇、乳糖、蔗糖和PVP中的一種或兩種。
4.如權(quán)利要求1～3任一權(quán)利要求所述的脈絡(luò)寧注射制劑，其特征在于，原料藥和載體具有以下重量份配比牛膝900 玄參900 石斛900 金銀花900 甘露醇53 PVP 1。
5.如權(quán)利要求1所述的脈絡(luò)寧注射制劑，其特征在于，是凍干粉針劑、注射劑和輸液劑。
6.權(quán)利要求1所述的脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用乙醇滲漉提取，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮成浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮成浸膏，過濾，去除沉淀，鹽酸調(diào)節(jié)pH值，乙酸乙酯萃取，合并萃取液，回收乙酸乙酯后真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用乙醇浸泡后回流提取，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮成浸膏，加入水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上大孔吸附樹脂，分別用水、25％乙醇、75％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并真空干燥得提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水加熱，溶解，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液，冷藏過夜后過濾，濾液中加入甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至處方量，調(diào)pH值5.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
7.如權(quán)利要求6所述的的脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用8～16倍量的50～95％乙醇滲漉提取，10～40h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.05～1.30(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加4～8倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.25(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，10％～30％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～6，乙酸乙酯萃取2～6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用50％～90％乙醇浸泡1～3h后回流提取2～3次，每次1～3h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.20(50℃)的浸膏，加入4～6倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上中極性或強(qiáng)極性大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水、2倍床體積25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水加熱煮沸8～15分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液，冷藏過夜后過濾，濾液中加入處方量的甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至處方量，調(diào)pH值6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
8.如權(quán)利要求6所述的脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的80％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液上AB-8或SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液，冷藏過夜后過濾，濾液中加入處方量的甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至處方量，調(diào)pH值6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
9.如權(quán)利要求8所述的脈絡(luò)寧注射制劑的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的大孔吸附樹脂為SA-1型大孔吸附樹脂。
10.如權(quán)利要求1所述的脈絡(luò)寧注射制劑，其特征在于，為粉針劑，處方及制備方法為處方牛膝4500g 玄參4500g 石斛4500g 金銀花4500g 甘露醇265g PVP 5g制備方法(1)取處方量的金銀花粉碎成粗粉，過2號篩，用12倍量的80％乙醇滲漉提取，20h滲漉完畢，滲漉液濾過，續(xù)濾液回收乙醇，減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.20(50℃)的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，過濾，去除沉淀，濾液確定體積，20％鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；(2)取處方量的牛膝、石斛、玄參粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮(溫度≤70℃)至相對密度為1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分?jǐn)嚢瑁o置過夜，過濾，濾液上AB-8或SA-1大孔吸附樹脂，分別用2倍床體積水沖洗樹脂、2倍床體積25％乙醇沖洗雜質(zhì)、2倍床75％乙醇洗脫，收集75％乙醇洗脫液，回收乙醇減壓濃縮并60℃真空干燥提取物II；(3)將提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml，加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏24h，過濾，濾液過截留分子量為3000的超濾膜超濾，收集超濾液3000ml，冷藏過夜后過濾，濾液中加入處方量的甘露醇和PVP，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水至3500ml，調(diào)pH值至6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，包裝，得注射液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脈絡(luò)寧注射制劑及其制備方法。本發(fā)明由石斛、牛膝、玄參、金銀花四種藥材按重量比等量份配比提取有效成分后加入甘露醇和PVP，經(jīng)超濾、調(diào)pH值，除菌過濾，加塞，冷凍干燥得凍干粉針劑；或滅菌后封蓋，得注射液。有效成分制備過程為金銀花加入乙醇滲漉提取后以乙酸乙酯純化；牛膝、玄參和石斛乙醇浸泡、回流提取后上大孔吸附樹脂純化。本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑制備過程最大限度地去除了雜質(zhì)，從而保證了其安全、有效、穩(wěn)定。
文檔編號A61P9/14GK1927346SQ20051001500
公開日2007年3月14日 申請日期2005年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月7日
發(fā)明者張正生 申請人:天津天士力制藥股份有限公司